Dijagnoza HIV infekcije uključuje dvije faze: utvrđivanje stvarne činjenice HIV infekcije i utvrđivanje stadijuma bolesti. Određivanje stadijuma neraskidivo prati pojašnjenje prirode toka bolesti, a zatim formiranje prognoze za datog pacijenta, kao i izbor taktike lečenja.
Kao što je poznato, dijagnoza svake zarazne bolesti zasniva se na poređenju epidemioloških, kliničkih i laboratorijskih podataka, a preuveličavanje značaja jedne od grupa ovih podataka može dovesti do dijagnostičkih grešaka.
Epidemiološki kriterijumi za HIV infekciju .
Prvi korak u dijagnosticiranju HIV infekcije je prikupljanje epidemiološke anamneze i drugih epidemioloških podataka o pacijentu koji se pregleda. Nedostatak epidemioloških podataka može značajno otežati dijagnostiku HIV infekcije i otežati provođenje protuepidemijskih mjera.
Epidemiološki kriteriji ponekad mogu biti odlučujući u postavljanju dijagnoze HIV infekcije, ali mogu imati i pomoćnu vrijednost. Kriterijum za visoku vjerovatnoću zaraze je otkrivanje kod osobe koja se ispituje faktora rizika za infekciju kao što su transfuzija donorske krvi primljene od osobe zaražene HIV-om, rođenje djeteta zaraženog HIV-om od strane žene koja se pregleda. Postoji velika vjerovatnoća infekcije ako je osoba rođena od majke zaražene HIV-om, ima seksualni kontakt sa HIV-om zaraženom osobom ili dijeli parenteralnu upotrebu droga sa HIV-om inficiranom osobom. Određeni rizik od infekcije otkriva se tokom pouzdanih parenteralnih intervencija, koje se sprovode instrumentima koji su vjerovatno kontaminirani HIV-om (odnosno u bolničkim i sličnim žarištima HIV infekcije sa parenteralnim prijenosom HIV-a).
O primjetnom riziku od infekcije može se govoriti u slučajevima kada ispitanik prijavi seksualni odnos ili parenteralnu upotrebu droga u područjima gdje je HIV značajno rasprostranjen među populacijom kojoj ispitanik pripada.
Istovremeno, seksualni odnosi i upotreba droga u područjima sa niskom prevalencom HIV infekcije ne isključuju mogućnost infekcije HIV-om.
Odsustvo pouzdanih faktora rizika za HIV infekciju može dovesti u sumnju laboratorijske podatke. U takvim slučajevima preporučuje se ponavljanje laboratorijskih pretraga.
Klinički kriterijumi za HIV infekciju.
Rana dijagnoza HIV infekcije osigurava pravovremeno liječenje pacijenta i primjenu preventivnih mjera u izbijanju, sprječavajući nenamjeran prijenos virusa sa zaražene osobe na zdravu osobu. konačno, rana dijagnoza omogućava pravovremeni medicinski pregled, psihološku pomoć i socijalnu rehabilitaciju. Prvi uspjesi u liječenju pacijenata omogućavaju ranom dijagnozom da se značajno produži život pacijenata, pa čak i nada izlječenju.
Teškoća rane dijagnoze na osnovu kliničke slike leži u nespecifičnosti i polimorfizmu simptoma u stadijumu II, a da ne govorimo o odsustvu kliničkih znakova u stadijumu I. Međutim, u svim slučajevima postoji nemotivisani umor, prisustvo noćnog znojenja, glavobolje, posebno na pozadini kratkotrajne groznice (3-10 dana) sa temperaturom od 38-38,50 C, praćene upalom krajnika, sindromom produžene dijareje, gubitkom težine u kratkom vremenu, potrebno je prije svega isključiti HIV infekcija. Dijagnozi u ovom periodu pomaže identifikacija različitih kožnih osipa (pege, papule, rozeole, pustule) ili furunkuloze tokom objektivnog pregleda. Prisustvo limfadenopatije, čak iu slučajevima povećanja jedne grupe limfni čvorovi a još više, ako je generaliziran, veća je vjerovatnoća da će se klinički posumnjati na HIV infekciju. Bolest je posebno karakterizirana povećanjem stražnjih cervikalnih, submandibularnih, supra- i subklavijskih, aksilarnih i ulnarnih limfnih čvorova. U pravilu se povećavaju na 2-5 cm u promjeru, bezbolni su, imaju gustu elastičnu konzistenciju i povremeno se spajaju u konglomerat. Vrlo je tipično za HIV infekciju povećanje više od jednog čvora, više od jedne grupe (sa izuzetkom ingvinalnih), što traje preko 3 mjeseca.
Često u ranoj fazi bolesti, prisustvo psiho-neuroloških simptoma: anksioznost, depresija, nestabilnost hoda, smanjena vidna oštrina, napadi sa znacima oštećenja psiho-emocionalne sfere (oštećenje pamćenja, zaboravnost, neprikladno ponašanje, otupljenje emocija). Na najkarakterističnije osobine rani stadijumi HIV infekcije uključuju:
1. Smanjenje tjelesne težine za manje od 10%;
2. Promjene na koži i sluznicama (seboreični dermatitis, folikulitis, prurigo, psorijaza, gljivične infekcije nokti, rekurentni oralni ulkusi, nekrotizirajući gingivitis);
3 . Herpes zoster kod osoba mlađih od 50 godina;
4. Ponavljajuće infekcije gornjih disajnih puteva;
IN međufaza Bolest koju karakterizira klinička slika pune superinfekcije nastale kao posljedica imunodeficijencije je najkarakterističnija za:
1 . Progresivni gubitak tjelesne težine preko 10%;
2 . Proljev nepoznatog porijekla, koji traje više od 1 mjeseca;
3 . Oralna kandidijaza;
4 . Leukoplakija;
5. plućna tuberkuloza;
6. Periferna neuropatija;
7. Lokalizirani oblici Kaposijevog sarkoma;
8. Diseminirajući herpes zoster;
9. Teška, ponavljajuća bakterijska infekcija (pneumonija, sinusitis, piomiozitis).
Za kasna faza, što omogućava dijagnosticiranje HIV infekcije, ili, u svakom slučaju, provođenje diferencijalna dijagnoza, odnosi se:
1. Pneumocystis pneumonia;
2 . Toksoplazmoza;
3. Cryptococcosis;
4. CMV infekcija;
5. Herpes simplex;
6. Progresivna multifokalna leukoencefalopatija;
7. Histoplazmoza;
8. Candidal esophagitis;
9. MAC infekcija;
10. Salmonella septicemia;
11. Ekstrapulmonalna tuberkuloza;
12. Limfom, Kaposijev sarkom;
13. kaheksija;
14. HIV encefalopatija.
1988. SZO je predložila da se izvrši u kliničke dijagnostičke svrhe rezultat simptoma dostupno kod pacijenata za koje se sumnja na HIV infekciju:
Perzistentna generalizirana limfadenopatija 0
Promjene na koži i mukoznim membranama 1
Gubitak težine 1
Teški umor 1
Herpes simplex 2
Dijareja koja traje duže od 1 mjeseca. 4
Groznica koja traje duže od 1 mjeseca. 4
Gubitak tjelesne težine preko 10% 4
Tuberkuloza pluća 5
Ponavljajuća bakterijska infekcija 5
Oralna leukoplakija 5
Stomatitis, oralni drozd 5
Lokalizovani Kaposijev sarkom 8
Kaheksija 12
U ovom slučaju, zbir bodova od 0 do 3 procjenjuje se kao vjerovatnoća infekcije HIV-om vrlo niska, 4 -11 bodova - bolest je vjerovatna, a 12 i više - vrlo vjerovatno.
Generalno klinička dijagnoza HIV infekcija je, prije svega, dijagnoza spektra patologije povezane sa AIDS-om kod bolesnika sa sekundarnom imunodeficijencijom. Budući da HIV-indikativne bolesti obuhvataju 23 nozološka oblika, najprikladniji je sindromski pristup dijagnozi. Pacijent gotovo uvijek ima sindrom opće intoksikacije (nemotivisana slabost, letargija, umor) koji se razvija na pozadini dugotrajne niske temperature ili groznice nepoznatog porijekla, često noću i ujutro, praćeno obilnim znojem. Sindrom nemotivirane generalizirane periferne limfadenopatije je konstantan, u 20% praćen hepatosplenomegalijom različite težine. Jedan od vodećih sindroma bolesti je sindrom bronhopulmonalne patologije, iako se u uznapredovalim slučajevima razvijaju duboke lezije plućnog tkiva u obliku Pneumocystis pneumonije, jer se pneumocistis razvija u pozadini duboke imunodeficijencije. Ali s trajanjem duže od 1 mjeseca, sindrom nemotivisanog proljeva klasificira se kao rani početak i karakterizira ga otpornost na terapiju lijekovima. Jedan od sindroma HIV infekcije je talasasta artralgija nepoznate etiologije. Najkarakterističnije manifestacije bolesti su sindrom lezija kože i sluzokože, koji se manifestuje nespecifičnim makulopapuloznim osipom, ekcemom otpornim na steroide i stafilokoknim impetigom. Dermatološke manifestacije uključuju i rekurentne gljivične (mikoze, kandidijaze, bakterijske (folikulitis, furunkuloza, hidradenitis), virusne (herpes) lezije kože i sluzokože. Konačno, HIV infekciju karakterišu i neoplazme, uglavnom u obliku Kaposijevog sarkoma i limfom, kao i neke druge vrste tumora.
Prisustvo najmanje dva klinička i dva klinička laboratorija (leukolifonutropenija, hipogamaglobulinemija) navedenih simptoma kod pacijenta omogućava da se sa visokim stepenom pouzdanosti dijagnostikuje HIV infekcija. Ali u isto vrijeme, ako dva vrlo česta sindroma koja se nalaze kod pacijenata, kao što su groznica i limfadenopatija, traju mjesec dana ili više, uporni nemotivisani proljev, smanjenje tjelesne težine za više od 10% ili obilno noćno znojenje daju postavljanje dijagnoze i detaljan laboratorijski pregled.
IN faza 2a na bolest se može posumnjati samo simptom perzistentne generalizirane limfadenopatije kod rizičnih pacijenata ili uz prisutnost epidemiološke anamneze.
IN faza 2b(rano ili blago) somatsko blagostanje i normalna aktivnost su i dalje očuvani. Lezije kože i sluzokože nisu teške, rekurentne infekcije respiratornog trakta nisu generalizirane, gubitak težine ne prelazi 10%.
Prema preporukama SZO, pouzdana klinička dijagnoza HIV infekcije kod odraslih i dece moguća je uz prisustvo jedne od 12 bolesti indikatora AIDS-a: 1) kandidijaza jednjaka, dušnika, bronha i pluća; 2) ekstrapulmonalna kriptokokoza; 3) kriptosporidioza sa dijarejom dužem od mesec dana; 4) citomegalovirusna infekcija bilo kog organa (osim i pored jetre, slezine i limfnih čvorova kod pacijenata starijeg od 1 meseca); 5) infekcija uzrokovana virusom herpes simpleksa, koja traje duže od 1 mjeseca kod bolesnika starijeg od 1 mjeseca; 6) Kaposijev sarkom kod pacijenta mlađeg od 60 godina; 7) limfom mozga kod pacijenta mlađeg od 60 godina; 8) limfocitna intersticijska pneumonija kod deteta mlađeg od 13 godina, 9) diseminovana infekcija uzrokovana bakterijama Micobacterium avium intracellulare ili grupe M. Kansassii; 10) Pneumocistična pneumonija; 11) progresivna multifokalna leukoencefalopatija; 12) centralna toksoplazmoza nervni sistem kod pacijenata starijih od 1 mjeseca. Prisutnost jedne od ovih bolesti omogućava dijagnosticiranje HIV infekcije u odsustvu serološkog enzimskog imunosorbentnog testa (ELISA) krvi ili čak u prisustvu seronegativnog rezultata.
Ništa manje teško nije diferencijacija faza bolesti, tj. diferencijacija stadija prema kliničkim kriterijumima. Prema mišljenju stručnjaka iz CDC-a (SAD), najobjektivniji kriterijum je broj T-pomoćnih ćelija, a ne kliničke manifestacije, jer se mnoga od ovih stanja često javljaju kod osoba koje nisu zaražene HIV-om. Centar je 1991. godine utvrdio da se dijagnoza AIDS-a može postaviti ako: a) zaražena osoba ima jedno od 23 stanja povezana sa AIDS-om ili b) je zaražena HIV-om i ima manje od 200 CD4+ ćelija/mm.
Laboratorijski kriterijumi za HIV infekciju.
Na HIV infekciju treba testirati sljedeće:
2 . Osobe sa kliničkom slikom kandidoznog ezofagitisa, bronhijalne i plućne kandidijaze, diseminirane ili ekstrapulmonalne kokcidioidomikoze, Pneumocistisne pneumonije, vanplućne kriptokokoze, kriptosporidioze sa proljevom dužem od 1 mjesec, oštećenje unutrašnjeg organa bez virusa lipoga, bez oštećenja unutrašnjeg organa er od 6 mjeseci, citomegalovirusni retinitis sa gubitkom vida, herpetična infekcija sa multifokalnim ulkusima koji traju više od 1 mjeseca, bronhitis, pneumonija ili ezofagitis, rekurentni herpes zoster, diseminirana ili ekstrapulmonalna histoplazmoza, plućna ili ekstrapulmonalna tuberkuloza, koja traje preko mjesec dana ili ekstrapulmonalne MAC infekcije, progresivna multifokalna leukoencefalopatija, cerebralna toksoplazmoza, salmonela septikemija, Kaposijev sarkom, limfom, limfoidna intersticijska pneumonija (kod djece)
Trenutno se za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije koriste različite metode za otkrivanje HIV-a, HIV antigena i genetskog materijala, kao i metode za otkrivanje antitijela na HIV. Sve ove metode imaju različitu efikasnost, zahtevaju različitu opremu i različitim nivoima obuka osoblja. Rezultati ovih studija zahtijevaju kompetentno tumačenje.
... dijagnoza bilo koje zarazne bolesti zasniva se na poređenju epidemioloških, kliničkih i laboratorijskih podataka, a preuveličavanje značaja jedne od grupa ovih podataka može dovesti do dijagnostičkih grešaka.
Dijagnoza HIV infekcije uključuje dvije faze:
I pozornica - utvrđivanje stvarne činjenice HIV infekcije
;
II pozornica - određivanje stadijuma bolesti
.
UTVRĐIVANJE ČINJENICE INFEKCIJE HIV-om
Utvrđivanje stvarne činjenice infekcije HIV-om (odnosno identifikacija osoba zaraženih HIV-om), zauzvrat, također uključuje dvije faze:
Faza I- vezani imunosorbentni test(ELISA): ELISA metoda je skrining (selekciona) metoda - selekcija zaraženih osoba, odnosno njen cilj je da se identifikuju sumnjive osobe i eliminišu zdrave osobe; Antitijela na HIV se otkrivaju korištenjem drugih antitijela na željena antitijela (antitijela protiv drugih antitijela). Ova "pomoćna" antitijela su označena enzimom. Svi skrining testovi moraju biti visoko osjetljivi kako ne bi propustili pacijenta. Zbog toga njihova specifičnost nije jako visoka, odnosno ELISA može dati pozitivan odgovor („vjerovatno bolestan“) kod neinficiranih osoba (na primjer, kod bolesnih autoimune bolesti: reumatizam, sistemski eritematozni lupus itd.). Učestalost lažno pozitivnih rezultata pri korištenju različitih test sistema kreće se od 0,02 do 0,5%. Ako nečiji ELISA test daje pozitivan rezultat, potrebno je dodatno ispitivanje kako bi se potvrdila činjenica infekcije HIV-om. Prilikom izvođenja ELISA-e, lažno negativni rezultati mogući su u 3-5% slučajeva - ako je infekcija nastala relativno nedavno i nivo antitijela je još uvijek vrlo nizak, ili u terminalni stepen bolest koju karakteriziraju teška oštećenja imunološki sistem sa dubokim poremećajem procesa stvaranja antitijela. Stoga, ako postoje dokazi o kontaktu sa osobama zaraženim HIV-om, ponovljene studije se obično sprovode nakon 2 - 3 mjeseca.
Faza II - imunobloting(modificirani Western blot, western blot): je složenija metoda i služi za potvrdu činjenice infekcije. Ova metoda ne otkriva kompleksna antitijela na HIV, već antitijela na njegove individualne strukturne proteine (p24, gp120, gp41, itd.). Rezultati imunoblotinga se smatraju pozitivnim ako se otkriju antitijela na najmanje tri proteina, od kojih je jedan kodiran env geni, drugi gag geni, a treći pol geni. Ako se otkriju antitijela na jedan ili dva proteina, rezultat se smatra upitnim i zahtijeva potvrdu. U većini laboratorija dijagnoza HIV infekcije se postavlja ako se istovremeno otkriju antitijela na proteine p24, p31, gp4l i gpl20/gp160. Suština metode: virus se uništava u komponente (antigene), koje se sastoje od joniziranih aminokiselinskih ostataka, te stoga sve komponente imaju različito porijeklo jedna od druge; zatim se pomoću elektroforeze (električne struje) antigeni raspoređuju po površini trake - ako test serum sadrži antitijela na HIV, tada će stupiti u interakciju sa svim grupama antigena, i to se može otkriti.
Treba zapamtiti da se antitela na HIV pojavljuju kod 90-95% inficiranih osoba u roku od 3 meseca nakon infekcije, kod 5-9% inficiranih osoba antitela na HIV se pojavljuju nakon 6 meseci, a kod 0,5-1% inficiranih osoba antitela na HIV se pojavljuju više od kasni datumi. Tokom stadijuma AIDS-a, broj antitela može da se smanji sve dok potpuno ne nestanu.
U imunologiji postoji koncept kao "serološki prozor" - period od infekcije do pojave tolike količine antitijela koja se može otkriti. Kod HIV-a ovaj period obično traje od 2 do 12 sedmica, u rijetkim slučajevima i duže. Tokom „serološkog prozora“, prema testovima, osoba je zdrava, a u stvari je zaražena HIV-om. Utvrđeno je da HIV DNK može ostati u ljudskom genomu najmanje tri godine bez znakova aktivnosti i da se antitijela na HIV (markeri HIV infekcije) ne pojavljuju.
Tokom ovog perioda („serološki prozor“) moguće je identifikovati osobu zaraženu HIV-om, pa čak i 1-2 nedelje nakon infekcije upotrebom polimeraza lančana reakcija (PCR). Ovo je izuzetno osjetljiva metoda - teoretski se može otkriti 1 DNK na 10 ml medija. Suština metode je sljedeća: lančanom reakcijom polimeraze dobije se mnogo kopija nukleinske kiseline (virus je nukleinska kiselina - DNK ili RNA - u proteinskoj ljusci), koje se zatim identificiraju pomoću obilježenih enzima ili izotopa , kao i po njihovoj karakterističnoj strukturi. PCR je skupa dijagnostička metoda, pa se ne koristi za skrining niti rutinski.
UTVRĐIVANJE STADIJA BOLESTI
Razvoj AIDS-a se zasniva na, prije svega, uništavanje T-limfocita-pomoćnika, obilježenih monoklonskim antitijelima - diferencijacijskim klasterima - poput CD4. S tim u vezi, dijagnosticiranje i praćenje progresije bolesti nemoguće je bez praćenja subpopulacije T pomoćnih ćelija, što se najpogodnije provodi pomoću laserskog sortera ćelija.
Za blagu HIV infekciju Broj T-limfocita je izuzetno varijabilan pokazatelj. Općenito, smanjenje broja CD4 ćelija (apsolutno i relativno) nalazi se kod osoba čija se infekcija HIV-om dogodila prije najmanje godinu dana. S druge strane, u ranim fazama infekcije često postoji naglo povećan broj supresorskih T ćelija (CD8) kako u perifernoj krvi tako i u povećanim limfnim čvorovima.
Sa teškom AIDS-om velika većina pacijenata je smanjena ukupan broj T-limfociti (manje od 1000 u 1 μl krvi, uključujući CD4 limfocite - manje od 22 u 1 μl, dok apsolutna vrijednost sadržaja CD8 ostaje u granicama normale). Shodno tome, omjer CD4/CD8 naglo opada. Odgovori T ćelija in vitro na standardne antigene i mitogene su smanjeni u strogom skladu sa relativno smanjenim brojem CD4.
Za kasne faze AIDS Karakterizira ga opća limfopenija, neutropenija, trombocitopenija (odnosno, smanjenje broja limfocita, neutrofila i trombocita), anemija. Ove promjene mogu biti posljedica centralne inhibicije hematopoeze zbog oštećenja hematopoetskih organa virusom, kao i autoimune destrukcije staničnih subpopulacija na periferiji. Osim toga, AIDS karakterizira umjereno povećanje količine gama globulina uz dominantno povećanje sadržaja IgG. Pacijenti sa teškim simptomima AIDS-a često imaju povećan nivo IgA. U nekim stadijumima bolesti, nivo markera AIDS-a kao što su 1-mikroglobulin, kiselinski stabilni interferon, 1-timozin značajno raste. Isto se dešava i sa lučenjem slobodnog neopterina, metabolita makrofaga. Još uvijek nije moguće ocijeniti relativnu važnost svakog od navedenih testova, čiji se broj stalno povećava. Stoga ih treba razmotriti u interakciji sa markerima HIV infekcije, kako imunovirološkim tako i citološkim. Za klinička analiza krv karakterizira leukopenija, limfopenija (odnosno, smanjenje broja leukocita i limfocita).
Faza 1 - " faza inkubacije»
- antitijela na HIV još nisu otkrivena; dijagnoza HIV infekcije u ovoj fazi postavlja se na osnovu epidemioloških podataka i mora biti potvrđena u laboratoriji detekcijom virusa humane imunodeficijencije i njegovih antigena u krvnom serumu pacijenta, nukleinske kiseline HIV;
Faza 2 - " pozornici primarne manifestacije
»
- V ovog perioda već postoji proizvodnja antitela:;
Faza 2A - “ asimptomatski»
- HIV infekcija se manifestuje samo stvaranjem antitela;
Faza 2B - “ akutna HIV infekcija bez sekundarnih bolesti»
- limfociti široke plazme - "mononuklearne ćelije" mogu se otkriti u krvi pacijenata, a često se uočava prolazno smanjenje nivoa CD4 limfocita (akutna klinička infekcija se uočava kod 50-90% inficiranih osoba u prva 3 mjeseci nakon infekcije; početak menstruacije akutna infekcija, po pravilu, prethodi serokonverziji, tj. pojava antitela na HIV);
Faza 2B - “ akutna HIV infekcija sa sekundarnim oboljenjima»
- na pozadini smanjenja razine CD4 limfocita i rezultirajuće imunodeficijencije, pojavljuju se sekundarne bolesti različite etiologije (angina, bakterijska i pneumocistična pneumonija, kandidijaza, herpetična infekcija itd.);
Faza 3 - " latentno»
- kao odgovor na progresiju imunodeficijencije dolazi do modifikacije imunološkog odgovora u vidu prekomjerne reprodukcije CD4 ćelija, praćenog postepenim smanjenjem nivoa CD4 limfocita, u prosjeku brzinom od 0,05-0,07x109/l godišnje; antitijela na HIV su otkrivena u krvi;
Faza 4 - " stadijum sekundarnih bolesti»
- iscrpljivanje limfocita CD4 populacije, koncentracija antitijela na virus značajno opada (u zavisnosti od težine sekundarnih bolesti razlikuju se stadijumi 4A, 4B, 4B);
Faza 5 - " terminalni stepen»
- tipično smanjenje broja CD4 ćelija ispod 0,05x109/l; koncentracija antitijela na virus značajno se smanjuje ili se antitijela možda neće otkriti.
Dijagnostikovanje HIV-a jedan je od primarnih zadataka sa kojima se suočavaju radnici dermatovenerološke klinike, ali i osoblje klinike.
Bolest lekari okarakterišu kao veoma podmuklu. Karakterizira ga hronični tok i ne može se u potpunosti liječiti. Važno je otkriti ga na vrijeme kako bi se preuzela kontrola i spriječilo nekontrolirano širenje. Koje su karakteristike virusa ljudske imunodeficijencije i kako se njime može zaraziti, pacijenti često zanimaju.
Koje su metode za dijagnosticiranje bolesti i koji znaci upućuju na infekciju?
Danas se svuda može čuti koliko je opasna infekcija HIV-om. Međutim, malo ljudi objašnjava koja je to opasnost. Kao rezultat toga, pacijenti imaju nepotpun skup informacija i, kao rezultat, ne shvaćaju prijetnju ozbiljno. Ali HIV je izuzetno opasan. Klasificira se kao sporo progresivna virusna bolest, sklona hronični tok. Imuni sistem je prvenstveno pogođen ovom patologijom.
Doktori skreću pažnju pacijenata na činjenicu da smrt ne nastaje od samog virusa imunodeficijencije, kao takvog.
Osoba umire od pratećih infekcija, od kojih tijelo više nije u mogućnosti pružiti punu zaštitu. Takođe, uzrok smrti su kancerogeni tumori protiv kojih smanjeni imuni sistem nije u stanju da se izbori.
Zapravo, mehanizam kojim HIV infekcija utiče na imuni sistem je prilično složen. Kako napominju ljekari, pacijenti ne moraju to temeljito razumjeti. Dovoljno je znati da bolest može smanjiti nivo imuniteta na kritične vrijednosti. Kao rezultat toga, tijelo neće moći da se zaštiti od raznih vanjskih utjecaja, što će prije ili kasnije dovesti do smrti.
Kako nastaje infekcija?
Važno je shvatiti da je HIV infekcija danas okružena veliki iznosširok spektar mitova.
Pacijenti su vrlo slabo informisani o tome kada se mogu zaraziti, a kada njihovo zdravlje nije ugroženo.
Prva stvar koju treba zapamtiti je da je HIV vrlo nestabilan okruženje. To znači da je patogeni mikroorganizam sposoban u potpunosti i dugo živjeti samo u ljudskom tijelu. Ne podnosi toplotu iznad 50 stepeni (trenutno umire). Takođe nije u stanju da izdrži procese sušenja. Ne sadrže sve tjelesne tekućine dovoljno virusa za infekciju.
Najveću opasnost predstavljaju:
- krv;
- pre-cum;
- sperma;
- iscjedak iz ženske vagine;
- limfa;
- majčino mleko.
Ako bilo koja od ovih tečnosti dođe u kontakt sa sluzokožom koja ima mikrotraume, ili sa kožom zahvaćenom traumom, dolazi do infekcije.
Moguće je i ako strana tečnost uđe direktno u krvotok. Pljuvačka i suze, suprotno uvriježenom mišljenju, ne predstavljaju prijetnju. Zbog karakteristika virusa i niske stope preživljavanja, prenosi se na nekoliko načina:
- seksualni trakt tj. tokom nezaštićenog seksualnog odnosa, koji neizbježno podrazumijeva kontakt bioloških tekućina i sluznice tijela osjetljive na patogen;
- parenteralni put tj. prijenos virusa transfuzijom krvi ili upotrebom nesterilne opreme u medicinske svrhe;
- vertikalna putanja tj. od majke do djeteta (danas, ako žena uzima antiretrovirusnu terapiju i odbija dojenje, vjerovatnoća infekcije djeteta tokom porođaja je svedena na minimum).
Važno je razumjeti da ako za infekciju putem mikrotraume kože ili otvorene rane obavezno, onda to nije neophodan uslov za infekciju kroz sluznicu. Razlika se objašnjava činjenicom da su sluznice i kože ljudsko tijelo imaju potpuno različite strukture. Ova razlika se mora uzeti u obzir.
Koji su znaci sumnje na HIV?
Mnogi pacijenti su zainteresirani za pitanje koji se znakovi obično mogu koristiti za sumnju na infekciju virusom ljudske imunodeficijencije.
- neopravdano povećanje sistemske temperature, koje se ne može objasniti nijednom drugom infekcijom, i koje traje dugo vremena, uprkos mjerama koje se poduzimaju za liječenje;
- snažno povećanje veličine limfnih čvorova (prvenstveno su zahvaćeni čvorovi u području prepona, ali je moguće njihovo zahvaćanje po cijelom tijelu);
- jak gubitak težine koji se ne može objasniti dijetama, stresom, hormonske neravnoteže i drugi razlozi;
- pritužbe na poremećaje stolice koje dugo progone pacijenta, a nije moguće pronaći razlog zašto su se pojavile;
- izražena tendencija da se bilo koje zarazne bolesti transformiraju u kronične oblike, a priroda patogena nije osobito važna; i bakterijske i virusne patologije postaju kronične;
- Razvijaju se bolesti koje su izazvane oportunističkom mikroflorom, koje ne predstavljaju prijetnju osobi čiji imunitet u potpunosti funkcionira (na primjer, mikoplazmoza, ureaplazmoza, kandidijaza itd.).
Klinika za HIV je veoma nespecifična, kako doktori napominju. Zbog toga se često javljaju poteškoće u postavljanju dijagnoze. Mnogi pacijenti potpuno ignoriraju alarmantnih simptoma, radije ne traže medicinsku pomoć. Čak i ako bolest uvelike utječe na njihovo cjelokupno stanje.
Važno je shvatiti da se infekcija HIV-om možda neće osjećati dugo vremena. A kada se pojave prvi znakovi, osoba ih možda neće ni povezati s mogućnošću infekcije i pokušati se liječiti kod kuće.
Dijagnostičke metode
Laboratorijska dijagnostika HIV-a se razvija već duže vrijeme i uspješno se koristi za dijagnosticiranje ove opasne bolesti.
Bolest se ne može prepoznati samo po simptomima. Stoga potvrda dijagnoze na temelju laboratorijskih tehnika često igra odlučujuću ulogu.
Postoje različite metode za dijagnosticiranje HIV-a. U Rusiji se, prije svega, daje prednost imunoblotingu, kao i ELISA reakcijama. Ove metode se često koriste kao metode skrininga, na primjer, prilikom provjere medicinskog osoblja.
ELISA sistemi
Pacijenti često pitaju svoje doktore kojom metodom da započnu dijagnostičku pretragu ako sumnjaju na infekciju virusom ljudske imunodeficijencije.
Svaki kompetentan ljekar će reći da prednost treba dati enzimskom imunotesti. Upravo je ova tehnika prva dijagnostička faza u Rusiji.
Princip rada ELISA testa je jednostavan. U laboratoriji, doktori su kreirali posebne proteine. Oni su u stanju da otkriju i stupe u interakciju s antitijelima koje proizvodi tijelo kao odgovor na kontakt s HIV-om. Zatim se u sistem dodaje poseban indikatorski enzim koji mijenja svoju boju. U završnoj fazi, materijal se obrađuje posebnim aparatom, a liječnik dobiva konačni rezultat.
ELISA je veoma popularna.
Prije svega, zbog činjenice da se rezultati mogu dobiti čak i ako nije prošlo više od nekoliko sedmica od unošenja patogena u tijelo.
Važno je shvatiti da enzimski imunotest ne otkriva sam virus u krvi, već antitijela na njega.
Mnogi ljudi ih mogu početi proizvoditi kasnije od dvije sedmice, što može dovesti do pogrešnih rezultata. Postoji nekoliko generacija ELISA testova.
Najsavremenije i najpreciznije su one koje pripadaju 3. i 4. generaciji. Liječnici napominju da je najbolje, ako postoji izbor, dati prednost evropskim reagensima, jer njihova točnost doseže 99%. Vrijeme potrebno za dobijanje rezultata ELISA u prosjeku je od 2 do 10 dana.
Zašto ELISA može biti lažna
Važno je razumjeti da enzimski imunološki testovi mogu dati i lažno pozitivne i lažno negativne rezultate. Iako je rizik od takvog razvoja izuzetno mali.
Pacijent može dobiti lažno negativne rezultate ako je test napravljen prerano, a antitijela još nisu stigla da se formiraju u tijelu.
Kako bi se isključila takva reakcija, pacijentima se preporučuje da se testiraju nekoliko puta u različitim intervalima.
Kod nekih bolesti javlja se lažno pozitivan test. Na primjer, pacijenti sa:
- alkoholni hepatitis;
- mijelomi u velikom broju;
- neke autoimune bolesti;
- žene tokom trudnoće itd.
S takvim bolestima, krv osobe se puni antitijelima. Po strukturi mogu ličiti na antitijela na HIV, što zbunjuje reagense i izaziva reakciju. Naravno, u poslednjih godina sistemi za testiranje postaju sve osjetljiviji. Međutim, problem lažnih rezultata još uvijek nije u potpunosti riješen.
Imunobloting
IN savremenim uslovima Nemoguće je postaviti pozitivnu dijagnozu HIV-a samo na osnovu ELISA testa. Potrebna je potvrda dobijenih rezultata, koja se izvodi imunobloting reakcijom (immunoblotting, IB).
Za izvođenje IS-a, posebne test trake moraju biti dostupne u laboratoriji. Na njih se primjenjuju virusni proteini. Prije analize pacijentova krv uzeta iz vene priprema se na poseban način.
Dobiveni biološki materijal se dodaje u gel, u kojem su proteini razdvojeni prema njihovoj težini. Zatim se prethodno pripremljena traka uroni u nastalu masu.
Traka postaje vlažna (dolazi do upijanja), a na njoj se otkrivaju trake ako materijal sadrži HIV proteine. Ako nema proteina, vlaženje se ne mijenja izgled pruge.
Postoji nekoliko tumačenja imunoblotinga. Međutim, bez obzira na to kako određena bolnica ili laboratorija izvodi dekodiranje, vjerovatnoća tačne dijagnoze je 99,9%.
Može li imunobloting dati netačne rezultate, često se pitaju pacijenti? Da, to je moguće, na primjer, ako pacijent ima tuberkulozu, trudna je ili boluje od raka.
PCR u pomoć
PCR je još jedna metoda kojom se može dijagnosticirati virus humane imunodeficijencije u krvi i drugim biološkim tekućinama, gdje je njegova koncentracija prilično visoka.
Kako liječnici primjećuju, lančana reakcija polimeraze može dati pozitivan rezultat 10 dana nakon prvog kontakta tijela s infekcijom.
Važno je razumjeti da PCR u nekim slučajevima daje lažno pozitivne rezultate. To se objašnjava činjenicom da metoda ima vrlo visoku osjetljivost.
Kao rezultat toga, često reagira na slična antitijela, što ukazuje na potpuno drugačije patoloških procesa u telu pacijenta.
Uprkos visokoj osjetljivosti i maloj vjerovatnoći dobivanja lažnih rezultata, PCR se ne koristi široko. Ovo se objašnjava s nekoliko faktora. Prvo, za izvođenje lančane reakcije polimeraze potrebna je posebna oprema, čija je cijena prilično visoka. Drugo, osoblje koje radi sa opremom mora biti visoko kvalifikovano, što takođe može izazvati poteškoće. Ove karakteristike zajedno čine PCR skupom dijagnostičkom metodom i, kao rezultat, nije dostupna svima.
Unatoč činjenici da PCR nije metoda skrininga, koristi se, na primjer, za testiranje novorođenčeta na infekciju virusom ljudske imunodeficijencije.
Ekspresni dijagnostički sistemi
Doktori i naučnici uložili su mnogo truda u razvoj brzih testova za procenu HIV infekcije. Kako napominju ljekari, korištenjem ovih sistema moguće je dobiti rezultate u roku od 15 minuta nakon obavljenog testa.
Brzi testovi na HIV zasnovani su na principu imunohromatografije. Sistem obično uključuje traku impregniranu posebnim reagensima.
Zadatak pacijenta je nanošenje krvi, sjemena ili bilo kojeg drugog biološka tečnost, koji može sadržavati antitijela na virus.
Ako se otkriju, na traci će se pojaviti dvije trake u boji, od kojih je jedna kontrolna, a druga dijagnostička. Ako nisu otkriveni, tada će biti otkriven samo kontrolni opseg.
Važno je shvatiti da brzi testovi ne daju 100% garanciju da osoba nije zaražena ili, naprotiv, da je zaražena HIV infekcijom. U svakom slučaju, rezultati dobiveni uz njihovu pomoć moraju se potvrditi u laboratoriji pomoću imunoblotinga.
Ekspresni testni sistemi su pogodni za pacijente koji žele da se umire kod kuće. Međutim, kako napominju liječnici, čak i ako je uz njihovu pomoć osoba dobila negativan rezultat, ako postoji sumnja na negativne promjene u organizmu, ipak treba da se obratite lekaru.
Kome lekaru da se obratim ako sumnjam na infekciju?
Mnogi pacijenti se pitaju kome lekaru da se obrate ako sumnjaju na HIV infekciju. Prije svega, preporučljivo je posjetiti venerologa. Ovaj medicinski radnik specijalizirani za bolesti koje se mogu prenijeti s osobe na osobu seksualnim kontaktom.
Venereolog će moći obaviti kompetentan pregled, prikupiti anamnezu i odlučiti koji pregledi su potrebni pacijentu za postavljanje tačne dijagnoze. Po svom nahođenju, može pacijenta uputiti i na infektivnu bolnicu. Pogotovo ako i dalje sumnja da ima HIV.
Virus ljudske imunodeficijencije je česta bolest. Svaka osoba koja je seksualno aktivna može se susresti s tim.
Poznavanje rasprostranjenosti i dijagnostike ove bolesti u moderne realnosti je od vitalnog značaja ako pacijent želi održati svoje zdravlje i dugovječnost. Samo pravovremena poseta lekaru će Vam omogućiti da preuzmete kontrolu nad infekcijom i zaštitite se od nje!
Dijagnoza HIV infekcije provodi se kako bi se postavila konačna dijagnoza. Ako je pacijent siguran u infekciju, ne treba se samoliječiti: mora se posavjetovati sa specijalistom.
Pod maskom AIDS-a mogu se sakriti mnoge bolesti koje se mogu izliječiti konsultacijom sa ljekarom. Testovi na infekciju su najčešći i rana metoda dijagnostika
Određivanje stupnja infekcije nastavlja se u laboratoriji prilikom uzimanja krvnog testa pomoću ELISA ili PCR.
Zbog pogoršanja epidemioloških pokazatelja za HIV infekciju, veliki značaj stečeno rano prepoznavanje bolesti. Doktor provodi diferencijalnu dijagnozu HIV infekcije i prikuplja epidemiološke podatke o bolesti.
U procesu proučavanja metoda infekcije, specijalist provodi istraživanja kao što su:
- proučavanje mehanizma razvoja HIV infekcije;
- dijagnoza pridruženih bolesti.
Metode za dijagnosticiranje HIV infekcije usmjerene su na identifikaciju antitijela u ELISA-i, a kada se dijagnoza potvrdi, specijalist s pacijentom provodi objašnjavajući rad o njegovoj usklađenosti s pravilima kako bi se izbjeglo širenje bolesti.
Testiranje na AIDS propisano je za djecu rođenu od zaraženih majki nakon antiretrovirusne terapije. Skrining testovi otkrivaju antitijela na HIV 1 i 2.
Imunoblot je potvrdne prirode i otkriva antitijela na proteine HIV infekcije.
Rana dijagnoza imunodeficijencije omogućava pacijentu da kratko vrijeme promijenite način života, započnite liječenje i primite psihološka pomoć. Karakteristične tegobe pacijenata uvijek pomažu doktoru da posumnja na SIDU i pošalje krv pacijenta na analizu u laboratoriju.
4. generacija brzih testova za AIDS
Laboratorijska dijagnoza HIV infekcije, provedena testovima 4. generacije, omogućava vam da odredite bolest u akutna faza bolesti. Test Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo vrlo je osjetljiv na antigene i antitijela u krvnom serumu pacijenta. Specifičnost studije je 99,19% za Ab liniju, i 99,64% za Ag liniju, a pozitivna prediktivna vrijednost određena je unutar 55%.
Osetljivost testa se određuje određivanjem prethodno poznatih rezultata. Prilikom primanja pozitivnih podataka, vjerovatnoća netačnih brojeva dostiže 45%.
Test oralnog brisa se radi kod kuće. Pregled je udoban, jednostavan i bezbolan za pacijenta. ImmunoChrome-½-Express test traka se koristi za vršenje analize, i daje stabilan rezultat ako pacijent slijedi upute koje su priložene uz lijek. Ako se otkriju dvije identične ljubičaste pruge u području testiranja i kontrolnom području, test se smatra pozitivnim. Prisustvo jedne trake tumači se kao negativan rezultat testa.
Vrijeme provedeno na studiju kreće se od 15 do 30 minuta.
Dijagnoza bolesti u periodu inkubacije
Oštećenje imunološkog sistema nastaje kada virus uđe u tijelo pacijenta. Termin period inkubacije fluktuira u roku od 3 mjeseca.
Nakon neželjenog i opasnog kontakta sa partnerom, potrebno je uraditi PCR test i na osnovu dobijenih rezultata donijeti zaključak o prisutnosti HIV infekcije u organizmu. Maksimalni rok za početak dijagnoze imunodeficijencije je 8-9 mjeseci, au izuzetnim slučajevima se produžava na 2 godine.
Za konačnu dijagnozu bolesti, studija se provodi u roku od godinu dana; svaka 3 mjeseca pacijent daje krv za HIV. Neposredni kontakt sa specijalistom nakon opasnog kontakta smanjuje vjerovatnoću infekcije za 90%.
Za laboratorijsku dijagnostiku ranog perioda bolesti koristi se metoda polimerazna reakcija, koji detektuje nukleinske kiseline. Rezultati analize se dešifruju u roku od nekoliko sati, uz potpunu anonimnost.
Kreativni MP-HIV ½ test na HIV/AIDS provodi se kod kuće, 4 sedmice nakon opasnog kontakta. Test kasete otkrivaju antitijela na HIV virus br. 1 i 2.
Metode za brzu dijagnostiku AIDS-a kod djece
Bebe rođene od zaraženih majki testiraju se na virus AIDS-a. Serološke metode dijagnoza bolesti nije uvijek potvrđena kod djece uzrasta 5-18 mjeseci, ali rezultat ima naknadnu pozitivnu vrijednost u imunoblotu.
Visoko osjetljiva PCR metoda omogućava vam da utvrdite prisutnost virusa AIDS-a u tijelu djeteta.
DNK patogena se otkriva kod djeteta u prvom mjesecu života. Sistem za detekciju provirusa imunodeficijencije dizajniran je da odredi koncentraciju RNK patogena.
Za analizu su prikladne pune krvi ili mrlje osušene krvi. Uzorak se stavlja u epruvetu sa EDTA konzervansom u omjeru 1:20. Čuvati materijal na temperaturi od 2-8 °C dva dana, izbjegavajući smrzavanje krvi.
Uzorci osušene krvi se dobijaju nanošenjem cele tečnosti na poseban papir. Dijagnostički materijal se čuva na temperaturi ne višoj od 8 °C. Period korištenja kartica ne prelazi 8 mjeseci.
Pregled novorođenčeta i uzimanje analiza obavljaju se u sljedećim terminima: 2 dana nakon rođenja, u dobi od dva mjeseca, nakon 3-6 mjeseci. Detekcija gena za HIV provirus nekoliko sati nakon rođenja ukazuje na infekciju fetusa tokom prenatalnog perioda. Infekcija se može javiti tokom porođaja ili tokom dojenje baby.
Podaci koji potvrđuju prisustvo virusne DNK u dva kontrolna uzorka ukazuju na razvoj HIV infekcije kod bebe.
Dispanzerski nadzor se otkazuje nakon prijema negativni testovi PCR metodom 4 mjeseca nakon rođenja djeteta.
Greške tokom istraživanja
Lažno pozitivan test na prisutnost virusa imunodeficijencije u krvi pacijenta iz mnogo razloga iskrivljuje točnost određivanja bolesti. Greške čekaju pacijenta prilikom obavljanja testa kod kuće.
Lažni rezultat se javlja kada pacijent ima stanja kao što su unakrsna reakcija, trudnoća, davaoci krvi, infekcija virusom gripe, bolesti respiratornog trakta, autoimune bolesti, rak, skleroza.
Alergije potiču proizvodnju antigena, strano telu pacijent. Test sistem ih prepoznaje i daju lažni rezultat. gljivične, virusna infekcija doprinijeti pogrešna identifikacija prisustvo virusa AIDS-a.
Infekciju treba liječiti, a zatim testirati na AIDS. Da bi se dobio kvalitetan rezultat istraživanja, pacijent je dužan obavijestiti liječnika o popratnim tegobama i liječenju koje se provodi.
Dijagnoza pomoću ELISA
Opći spektar antitijela otkrivenih enzimskim imunološkim testom pojavljuje se kod 95% osoba zaraženih virusom AIDS-a. Pozitivan dvostruki rezultat ELISA-e zahtijeva prisustvo drugog potvrdnog koraka - imunoblot testa. Sastoji se od proučavanja antitijela i njihovog odnosa s pojedinačnim proteinskim strukturama patogena. ELISA test ima dvije reakcije: enzimsku i imunološku. Analiza se zasniva na interakciji antitela i antigena.
Antitijela, imunološki kompleks i aktivnost enzima se sekvencijalno određuju. Specijalista dešifruje podatke analize. Negativni pokazatelji ukazuju na odsustvo HIV infekcije kod pacijenta.
U nedostatku antitijela i nedavne infekcije, liječnik utvrđuje lažno negativan rezultat.
Ako se uzorci materijala za proučavanje virusa nepažljivo čuvaju, dobijeni pokazatelji mogu biti lažni.
Test obavljen nakon što je pacijent vakcinisan daje pozitivan rezultat i ne može biti pouzdan.
Trebali biste pravilno pripremiti razrjeđivanje seruma, očistiti korištene ploče i kupiti visokokvalitetnu boju.
Pozitivan rezultat imunoboltinga se manifestuje kombinacijom GP 41 i GP 120 traka i antigena. Negativan rezultat ukazuje na odsustvo traka.
Prilikom formiranja dijagnostičkog zaključka uzimaju se u obzir rezultati testova, pokazatelji pregleda pacijenta u bolnici i epidemiološki pregled pacijenta.
Klinička i laboratorijska dijagnoza HIV infekcije ima tri pravca:
- Utvrđivanje činjenice HIV infekcije, dijagnoza HIV infekcije.
- Određivanje faze klinički tok bolesti i identifikacija sekundarnih bolesti.
- Predviđanje progresije kliničkog toka bolesti, laboratorijsko praćenje efikasnosti liječenja i nuspojava antiretrovirusnih lijekova.
1. Utvrđivanje HIV infekcije, dijagnoza HIV infekcije
Za utvrđivanje HIV infekcije koriste se sljedeći specifični indikatori: antitijela na HIV, HIV antigeni, HIV RNK i DNK provirusa. Antitijela na HIV se određuju enzimskim imunosorbentnim testom (ELISA) ili imunoblotingom, što je u suštini vrsta ELISA-e. HIV antigeni (proteini) određuju se ELISA testom. Koristeći molekularne genetičke metode lančane reakcije polimeraze (PNR) i bDNA, može se odrediti HIV RNK i DNK provirusa. Dodatna upotreba metode hibridizacije nukleinskih kiselina sa specifičnim DNK sondama omogućava provjeru specifičnosti sekvenci DNK dobijenih PCR-om. Osetljivost PCR-a je detekcija virusnih gena u jednoj od pet hiljada ćelija.
Tokom primarne infekcije uočava se sljedeća dinamika HIV markera u krvi zaraženih osoba. U prvom mjesecu, kao rezultat aktivacije replikacijskog procesa, dolazi do naglog povećanja virusnog opterećenja (sadržaj HIV RNK u plazmi), zatim zbog širenja virusa i masovne infekcije ciljnih stanica u krvi. i limfnih čvorova, postaje moguća definicija provirusna DNK. Od primarne dijagnostičke vrijednosti je činjenica identifikacije provirusne DNK integrirane u genom ciljne stanice.
Virusno opterećenje odražava intenzitet procesa replikacije u inficiranim stanicama. U periodu primarne infekcije, nivo virusnog opterećenja je različit kada se inficira različitim podtipovima HIV-a, ali je dinamika njegovih promjena približno ista. Dakle, kada se zarazi podtipom B, na primjer, ako je u prvom mjesecu nakon infekcije virusno opterećenje 700 kopija/ml, onda u 2. mjesecu dolazi do smanjenja na 600, u 3. - na 100, u 4. - do 50 kopija/ml. Ova dinamika se opaža u pozadini povećanja nivoa specifičnih antitijela na HIV u krvi. Sadržaj provirusne DNK u mononuklearnim ćelijama krvi pacijenata zaraženih HIV-om karakteriše relativna konstantnost tokom prvih 6 meseci sa manjim fluktuacijama u nekim podtipovima. Dakle, opterećenje RNK i DNK nije identično.
Tokom faze inkubacije, neko vrijeme, ne dolazi do stvaranja specifičnih antitijela na HIV u količinama dovoljnim da ih postojeći laboratorijske metode. Prije registracije antitijela, u vrlo kratkom vremenu, uočava se pojava u krvi proteina Nef, koji potiskuje replikativni proces, i strukturnog proteina p24. Antigen p24 se može detektovati u krvi enzimskim imunotestom već 1-2 nedelje nakon infekcije i može se otkriti do 8. nedelje, a zatim njegov sadržaj naglo opada. Dalje u kliničkom toku HIV infekcije uočava se drugo povećanje nivoa p24 proteina u krvi. Pada tokom formiranja AIDS-a. Nestanak slobodnih (nevezanih antitelima) proteina jezgre p24 u krvi i pojava specifičnih antitela na HIV proteine označavaju početak serokonverzije (slika 9.6).
Viremija i antigenemija izazivaju stvaranje specifičnih antitela IgM klase (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Slobodna antitijela klase IgM i IgG na protein p24 mogu se pojaviti već od 2. sedmice, njihov sadržaj se povećava unutar 2-4 sedmice, dostižući određeni nivo na kojem se zadržava mjesecima (IgM) i godinama (IgG) (Sl. 9.7).
Pojava potpune serokonverzije, kada se u perifernoj krvi bilježi visok nivo specifičnih IgG antitijela na strukturne proteine HIV-a p24, gp41, gp120, gp160, značajno olakšava dijagnozu HIV infekcije. Antitela na HIV se javljaju kod 90-95% inficiranih osoba u roku od 3 meseca nakon infekcije, u 5-9% - u periodu od 3 do 6 meseci od trenutka infekcije, a kod 0,5-1% - kasnije.
Unatoč činjenici da se antitijela na HIV pojavljuju posljednja, glavni laboratorijski dijagnostički indikator do danas je otkrivanje specifičnih antitijela pomoću ELISA i imunoblotinga.
Podaci prikazani u tabeli 9.2 [prikaži] i 9.3 [prikaži] , jasno demonstriraju visoku osjetljivost modernih enzimski vezanih imunosorbentnih test sistema za otkrivanje antitijela na HIV, koja premašuje osjetljivost imunoblotinga. U nekim slučajevima, kada se dobije početni pozitivan rezultat ELISA-e, može se potvrditi imunoblotingom tek nakon 2-3 sedmice.
| Tabela 9.3. Primjer praćenja serokonverzije (prema N. Fleury, 2000) | |||||
| Trenutak odlučnosti | Antigen p24, pg/ml | Antitela na HIV proteine | |||
| ELISA, OP arr/OP cr** | Imunobloting | ||||
| HIV DUO | Gen-screen | Uniforma | |||
| Pacijent 1 | |||||
| Primarni | 17 | 1,24 | manje od 1 | manje od 1 | * |
| Za 4 dana | 67 | 1,36 | 1,85 | manje od 1 | - |
| Za 7 dana | * | 2,33 | 6,84 | manje od 1 | - |
| Za 2 dana | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Pacijent 2 | |||||
| Primarni | 400 | 13 | manje od 1 | manje od 1 | - |
| Za 5 dana | 450 | 18 | 2,11 | manje od 1 | - |
| Nakon 10 dana | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Napomena: * - određivanje nije izvršeno ** - omjer optičke gustoće uzorka test seruma i kritične (granične) vrijednosti optičke gustoće |
|||||
Prilikom pregleda pacijenata sa HIV infekcijom (HIV-inficiranim) korišćenjem imunoblot test sistema vodećih svetskih kompanija, u svim slučajevima se detektuju antitela na gp160 i p24/25, a antitela na druge proteine u 38,8-93,3% slučajeva (tabela 9.4 [prikaži] ).
Poteškoće u identifikaciji antitela kod pacijenata sa HIV infekcijom mogu nastati tokom perioda masovne viremije i antigenemije, kada su postojeća specifična antitela u krvi povezana sa virusnim česticama, a proces replikacije je ispred proizvodnje novih antivirusnih antitela. Ova situacija može doći i proći tokom infektivnog procesa.
Kod pacijenata sa inicijalno oslabljenim imunološkim sistemom viremija i antigenemija se javljaju ranije i ostaju na visokom nivou do ishoda bolesti. Takvi pacijenti imaju nizak nivo slobodnih antitela na HIV, zbog dva razloga - nedovoljne proizvodnje antitela od strane B limfocita i vezivanja antitela za virione i rastvorljive proteine HIV-a, pa se test sistemi sa preosjetljivost ili modifikacije metoda ispitivanja koje uključuju korak oslobađanja antitijela iz imunoloških kompleksa.
Najčešće se smanjenje sadržaja antitijela na HIV iz ovih razloga događa u terminalnoj fazi, kada se antitijela na HIV u serumu ne mogu otkriti primjenom metoda enzimskog imunosorbentnog testa ili imunoblot metode (Western blot). Pored pojave specifičnih antitijela na HIV, imuni odgovor u prva 4 mjeseca karakteriše smanjenje sadržaja CD4+ ćelija u krvi zaražene osobe i povećanje CD8+ ćelija. Nadalje, sadržaj ćelija koje nose CD4 i CD8 receptore se stabilizuje i ostaje nepromijenjen neko vrijeme. Povećanje sadržaja CD8 limfocita je odbrambena reakcija, jer Ćelijski zavisnu citotoksičnost provode CD8+ limfociti, koji imaju za cilj uništavanje ćelija inficiranih HPV-om. U početku, citotoksični limfociti (CTL) reagiraju na regulatorni protein Nef virusa, koji igra ulogu u važnu ulogu u smanjenju virusnog (RNA) opterećenja u plazmi HIV inficirane osobe u prvim mjesecima. Tada se formira CTL odgovor na druge, uklj. strukturnih proteina HIV-a, zbog čega se 12 mjeseci nakon infekcije značajno povećava citotoksični učinak.
Laboratorijske dijagnostičke šeme za HIV infekciju
Uzimajući u obzir gornju dinamiku specifičnih markera HIV infekcije, u praksi je preporučljivo pridržavati se sljedećih laboratorijskih dijagnostičkih šema kod odraslih (sl. 9.8-9.10).
Dijagrami odražavaju tri glavne faze primarne laboratorijske dijagnoze HIV infekcije:
- Screening.
- Referentni.
- Ekspert.
Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike je prvenstveno zbog ekonomskih razloga. Tako, na primjer, trošak provođenja jedne stručne studije korištenjem imunoblotinga pomoću domaćih testnih sistema iznosi do 40 američkih dolara, skrining (ELISA) je oko 0,2, odnosno omjer je 1:200.
U prvoj fazi (slika 9.8), antitela na HIV se određuju kod ispitanika pomoću jednog enzimsko-vezanog imunosorbentnog test sistema dizajniranog da detektuje antitela na obe vrste virusa - HIV-1 i HIV-2.
Proizvođači u predloženim sistemima za testiranje koriste virusni lizat, rekombinantne proteine i sintetičke peptide kao antigensku osnovu. Svaki od navedenih nosilaca HIV antigenskih determinanti ima svoje prednosti i nedostatke. Stoga, pri odabiru testnih sistema približno jednake cijene, treba dati prednost kompletima s najvećom osjetljivošću (po mogućnosti 100%). Među test sistemima iste cijene i osjetljivosti, preporučljivo je fokusirati se na one s maksimalnom specifičnošću.
Prvi test sistemi za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije kreirani su na osnovu lizata virusa. U 80-im godinama, takvi test sistemi su se odlikovali osjetljivošću manjom od 100% i niskom specifičnošću, koja se manifestirala velikim brojem (do 60%) lažno pozitivnih rezultata.
Kada se virion formira u kulturi limfocita, njegova ovojnica se stvara od vanjske membrane i stoga sadrži antigene glavnog kompleksa histokompatibilnosti klasa I i II. Ova okolnost uzrokuje lažno pozitivne reakcije ako su u krvi bolesnika prisutna antitijela na aloantigene histokompatibilnosti.
Kasnije, za dobivanje virusa, predloženo je korištenje kulture makrofaga, u kojoj se virusne čestice formiraju pretežno intracelularno pupanjem ne s vanjske membrane stanice, već iz membrana endoplazmatskog retikuluma. Ova tehnologija je smanjila broj lažno pozitivnih rezultata.
Enzimski vezani imunosorbentni test sistemi koji koriste kombinaciju pročišćenog virusnog lizata sa sintetičkim peptidima, koji su antigen najznačajniji dijelovi proteina virusa, odnosno rekombinantnih proteina, prepoznati su kao jedan od najboljih po najvažnijim karakteristikama - osjetljivost i specifičnost.
Osetljivost test sistema zavisi i od karakteristika ostalih komponenti kompleta. Dakle, test sistemi koji koriste konjugate koji prepoznaju antitijela ne samo klase IgG, već i IgM i IgA, omogućavaju otkrivanje ranije faze serokonverzije. Čini se obećavajućim korištenje sistema za testiranje koji mogu istovremeno otkriti i antivirusna antitijela i p24 antigen, što laboratorijsku dijagnozu HIV infekcije čini još ranije.
Početni pozitivan rezultat mora se ponovo provjeriti ponovnim testiranjem uzorka u istom test sistemu, ali po mogućnosti u drugoj seriji i od strane drugog laboratorijskog asistenta. Ako ponovljeni test rezultira negativnim rezultatom, test se izvodi treći put.
Nakon potvrde pozitivnog rezultata, preporučljivo je ponovo uzeti krv i testirati je na antitijela na HIV kao primarnu. Ponovljeno uzimanje krvi pomaže u sprječavanju grešaka uzrokovanih netačnim označavanjem epruveta i obrascima za upućivanje.
Krvni serum koji je seropozitivan u fazi skrininga šalje se na referentne studije, koje se izvode pomoću dva ili tri visoko specifična ELISA test sistema. U slučaju dva pozitivna rezultata, provodi se stručna studija pomoću imunoblotinga.
Upotreba enzimsko-vezanih imunosorbentnih test sistema u referentnoj dijagnostici, koji se mogu koristiti za razlikovanje specifičnih antitijela na HIV-1 i HIV-2, olakšava daljnji rad i omogućava vam da odmah pregledate pozitivan uzorak u stručnoj fazi koristeći odgovarajući imunoblot (HIV-1 ili HIV-2) .
Laboratorijsko stručno mišljenje o HIV infekciji donosi se samo na osnovu pozitivnog rezultata imunoblotinga (Western blot). Prilikom provođenja stručne dijagnostike potrebno je koristiti nomenklaturu gena i genskih proizvoda HIV-a koju je 1990. godine predložila grupa stručnjaka SZO (tabela 9.5. [prikaži] ).
Specifičnost traka na imunoblotu treba vrlo pažljivo i temeljito procijeniti, koristeći rezultate studija kontrolnih seruma (pozitivnih i negativnih), koje se provode paralelno sa proučavanjem eksperimentalnih uzoraka, te uzorka imunoblota sa oznaka HIV proteina (koju je proizvođač priložio testnom sistemu). Interpretaciju dobijenih rezultata treba izvršiti u skladu sa uputstvima priloženim uz test sistem. U pravilu, kriterij za pozitivnost je obavezno prisustvo antitijela na dva proteina (prekursorski, vanjski ili transmembranski) kodirana env genom, te moguće prisustvo antitijela na produkte dva druga strukturna gena HIV-a - gag i pol. (Tabela 9.6 [prikaži] ).
| Tabela 9.6. Kriterijumi za tumačenje rezultata imunoblotinga za HIV-1 i HIV-2 (WHO, 1990.) | |||
| Rezultat | HIV-1 | HIV-2 | |
| Pozitivno | +/- pruge pol +/- geg pruge | 2 env trake (prekursor, vanjski gp ili transmembranski gp) +/- pruge pol +/- geg pruge |
|
| Negativno | Odsustvo HIV-1 specifičnih traka | Nema HIV-2 specifičnih traka | |
| Nesiguran | Ostali profili koji se ne smatraju pozitivnim ili negativnim | ||
Ako se dobije sumnjiv rezultat, potrebno je koristiti listu preporuka za konačno pojašnjenje rezultata imunoblotinga (tabela 9.7. [prikaži] ).
| Tabela 9.7. Preporuke za definitivno pojašnjenje neodređenih rezultata imunoblotinga (WHO, 1990.) | |
| Prisustvo traka koje odgovaraju HIV proteinima | Tumačenje rezultata, daljnje radnje |
| HIV-1 | |
| Samo p17 | |
| Samo p24 i gp160 | Ovaj neobičan obrazac može se javiti rano u serokonverziji. Uzorak treba odmah ponovo testirati. Ako se dobije isti profil, potrebno je uzeti drugi uzorak 2 sedmice nakon uzimanja 1. uzorka za imunoblot testiranje |
| Ostali profili | Ovi profili (gag i/ili pol bez env) mogu ukazivati na serokonverziju ili nespecifične reakcije |
| HIV-2 | |
| Samo p16 | Može se klasificirati kao negativan, ne zahtijeva dodatne definicije |
| Ja env bend sa ili bez gag/pol | Isti uzorak treba ponovo testirati upotrebom druge serije reagensa. |
| Samo p24 ili gp140 | Ovaj neobičan profil može se pojaviti u ranoj fazi serokonverzije. Uzorak treba odmah ponovo testirati. Ako se dobije isti profil, 2 sedmice nakon uzimanja 1. uzorka potrebno je uzeti drugi uzorak za imunoblot testiranje |
| Ostali profili | Ovi profili (gag i/ili pol bez env) mogu ukazivati na serokonverziju ili nespecifične reakcije. |
Prema preporukama Ruskog naučno-metodološkog centra za prevenciju i kontrolu AIDS-a, pozitivnim rezultatom smatra se prisustvo antitijela na barem jedan od proteina gp41, gp120, gp160 u kombinaciji sa antitijelima na druge specifične HIV-e. -1 protein ili bez njih. Ove preporuke su date na osnovu iskustva sa serumima djece iz bolničkih epidemija, kod kojih su često otkrivena antitijela samo na jedan od proteina omotača virusa.
Većina inicijalno pregledanih pacijenata koji su bili seropozitivni na ELISA testu pripadali su fazi perzistentne generalizirane limfadenopatije (PGL) ili asimptomatskoj fazi. Stoga se na imunoblotu (nitrocelulozna traka na kojoj su imobilizirani HIV proteini) u pravilu određuje sljedeća kombinacija antitijela na HIV-1: antitijela na proteine ovojnice gp160, gp120 i gp41, kodirana env genom, u kombinaciji sa antitijelima na core proteine p24 (protein nukleokapsid, kodiran gag genom) i p31/34 (endonukleaza, kodiran genom pol).
Pozitivne reakcije sa samim gag i/ili pol proteinima mogu se javiti tokom rane serokonverzije i također mogu ukazivati na HIV-2 infekciju ili nespecifičnu reakciju.
Ako se dobije sumnjiv rezultat, moguće je koristiti različite metodološke tehnike za razjašnjavanje činjenice o HIV infekciji.
U zavisnosti od tehničkih mogućnosti (dostupnost dijagnostičkih kompleta i reagensa, dostupnost posebne opreme i obuka osoblja) stručne laboratorije, izvode se dodatne dijagnostičke studije (slika 9.10).
U nekim slučajevima, preporučljivo je koristiti molekularne genetičke metode za određivanje genetskih sekvenci HIV-a u serumu, krvnim limfocitima ili aspiracijama limfnih čvorova. Specifičnost DNK sekvenci dobijenih kao rezultat PCR može se proveriti hibridizacijom nukleinskih kiselina sa specifičnim DNK sondama.
Radioimunoprecipitacija (RIP) i indirektna imunofluorescencija(IFl) se takođe može koristiti za konačnu verifikaciju seruma sa upitnim rezultatima u imunoblotingu.
Detekcija HIV RNK u krvnoj plazmi kvalitativnim ili kvantitativna metoda nije značajno za dijagnosticiranje HIV infekcije. Ovaj rezultat treba potvrditi standardnim metodama, kao što je imunobloting, 2-4 mjeseca nakon dobijanja početnog upitnog ili negativnog odgovora.
Izolacija HIV-a u ćelijskoj kulturi je konačna istina. Međutim, metoda je složena, skupa i izvodi se samo u posebno opremljenim istraživačkim laboratorijama.
Sadržaj CD4+ ćelija u krvi je nespecifičan pokazatelj, međutim, u kontroverznim slučajevima (ELISA “+”, imunoblot “-”, prisustvo kliničkih znakova HIV infekcije/AIDS-a) može se koristiti kao smjernica za izradu stručna odluka. Ako laboratorij ima mogućnost obavljanja samo imunoblotinga, tada se trebate pridržavati preporuka navedenih u tabeli. 9.7 i na sl. 9.9.
Osobe čije je stručno ispitivanje seruma dalo upitne (neodređene) rezultate, izuzev slučajeva otkrivanja antitela samo na p17 (HIV-1) ili p16 (HIV-2), treba da se ponovo testiraju u roku od 6 meseci (nakon 3 meseca) . U slučaju prave HIV infekcije, nakon 3-6 mjeseci, uočava se "pozitivna" dinamika u spektru antitijela - dodatno stvaranje antitijela na druge virusne proteine. Lažnu reakciju karakterizira postojanost sumnjivog imunoblotiranja dugo vremena ili nestanak sumnjivih traka. Ako su nakon navedenog perioda rezultati ponovljenog imunoblotinga negativni ili ostaju dvojbeni, tada se u odsustvu faktora rizika, kliničkih simptoma ili drugih faktora povezanih s HIV infekcijom, osoba može smatrati seronegativnom na antitijela na HIV-1 i HIV -2.
Lažno pozitivni rezultati zbog prisustva u krvi pacijenata antitijela na aloantigene histokompatibilnosti koji su dio omotača HIV-a pojavljuju se na imunoblotovima u obliku traka na nivou gp41 i gp31. Razlozi drugih nespecifičnih reakcija (na primjer, na p24, koji se često nalazi kod osoba s autoimunim procesima) još nisu razjašnjeni.
Poboljšanja u tehnologiji proizvodnje enzimski vezanih imunosorbentnih test sistema omogućila su postizanje visoke osjetljivosti - do 99,99%, dok je osjetljivost metode imunoblotinga 97%. Stoga, negativan rezultat imunoblotinga s pozitivnim rezultatima ELISA može ukazivati početni period serokonverzija, koju karakterizira nizak nivo specifičnih antitijela. Stoga je potrebno ponoviti studiju nakon 1,5-2 mjeseca, odnosno vremenskog perioda potrebnog da se završi serokonverzija i postigne koncentracija specifičnih antitijela u krvi dovoljna za detekciju imunoblotingom.
Pozitivan rezultat (rezultati) studije u referentnoj ili samo skrining fazi laboratorijske dijagnoze HIV infekcije, odnosno pozitivan rezultat bilo kojeg enzimskog imunosorbentnog test sistema, koji u konačnici nije potvrđen stručnim metodama, tumači se kao prisustvo unakrsne reakcije u krvi osobe koja se ispituje. Unakrsna reakcija se odnosi na vezivanje antitela za nespecifična mesta na HIV proteinima ili peptidima koji se koriste kao antigenska osnova u test sistemu u kojem je dobijen pozitivan rezultat.
U nedostatku imunodeficijencije i kliničkih znakova HIV infekcije, takve osobe se smatraju seronegativnima na HIV antitijela i treba ih ukloniti iz registra.
Konačna dijagnoza HIV infekcije postavlja se samo na osnovu svih kliničkih, epidemioloških i laboratorijskih podataka. Samo ljekar ima pravo obavijestiti pacijenta o dijagnozi HIV infekcije.
Glavna metoda potvrdne (stručne) laboratorijske dijagnoze HIV infekcije je imunoblotiranje. Međutim, s obzirom na njegovu nižu osjetljivost u poređenju sa ELISA-om, određeni broj istraživača je predložio korištenje kombinacije nekoliko sistema za testiranje kako bi se definitivno utvrdilo prisustvo specifičnih antitijela na HIV. Na primjer, G. van der Groen et al. predložio alternativnu metodu imunoblotingu za provjeru pozitivnih rezultata faze skrininga laboratorijske dijagnoze HIV infekcije. Podrazumijeva paralelno proučavanje materijala u tri test sistema, na kojima se zasnivaju razne metode otkrivanje specifičnih antitela na HIV (nekoliko ELISA opcija, aglutinacioni test) korišćenjem antigena različite prirode. Autori su uspeli da odaberu takve kombinacije test sistema, čija upotreba obezbeđuje 100% osetljivost i specifičnost u poređenju sa rezultatima dobijenim u imunoblotingu.
Jeftina ove stručne dijagnostičke metode je nesumnjiva prednost, međutim nedostatak informacija o tome na koje specifične virusne proteine postoje antitijela u krvi pacijenta ne omogućava procjenu specifičnosti reakcije u svakom pojedinačnom slučaju, kao ni praćenje promjena. u spektru antitela na rana faza serokonverzija.
Laboratorijska dijagnostika HIV infekcije kod djece rođene od majki zaraženih HIV-om ima svoje karakteristike. Od trenutka rođenja, majčina antitijela na HIV mogu dugo (do 15 mjeseci) cirkulirati u krvi takve djece. Samo imunoglobulini IgG klase prodiru kroz placentnu barijeru, tako da identifikacija HPV-specifičnih imunoglobulina klase IgM i IgA kod djeteta omogućava potvrdu infekcije, ali negativan rezultat ne može ukazivati na odsustvo HIV-a.
Kod djece mlađe od 1 mjeseca još uvijek nema replikacije HPV-a, a jedina metoda provjere je PCR. Određivanje p24 antigena kod djece starije od 1 mjeseca također je potvrdna metoda.
Odsustvo antitijela na HIV kod novorođenčadi ne znači da virus nije prodro kroz placentnu barijeru. U svakom slučaju, djeca majki zaraženih HIV-om podliježu laboratorijskom dijagnostičkom pregledu i opservaciji 36 mjeseci od rođenja.
Rezultati laboratorijskih testova za markere HIV infekcije zahtijevaju pažljivo tumačenje i treba ih uzeti u obzir samo u kombinaciji s epidemiološkim i klinički pregledi. S druge strane, treba napomenuti da i pored visoke osjetljivosti savremenih metoda, negativni rezultati istraživanja ne mogu u potpunosti isključiti prisustvo HIV infekcije. Stoga se negativan rezultat studije, na primjer, imunoblotingom, može formulirati samo kao odsustvo specifičnih antitijela na HIV-1 i HIV-2.
Dijagnoza HIV infekcije kod seronegativnih pacijenata
Kvalitet test sistema koji se koriste u laboratorijskoj dijagnostici HIV infekcije svake se godine poboljšava, a njihova osjetljivost raste. Međutim, velika varijabilnost HIV-a može dovesti do pojave novih tipova, antitijela na koja možda neće prepoznati postojeći testni sistemi. Osim toga, poznati su slučajevi atipičnog humoralnog odgovora imunog sistema domaćina na virus. Tako je L. Montagnier 1996. godine izvijestio o dva oboljela od AIDS-a kod kojih u krvi u prethodnih nekoliko godina nisu otkrivena specifična antitijela, a dijagnoza je postavljena na osnovu kliničkih podataka i potvrđena u laboratoriji samo izolacijom HPV-1. u ćelijskoj kulturi. U takvim slučajevima potrebno je koristiti preporuke SZO prema kojima je klinička dijagnoza HIV infekcije kod odraslih i djece moguća uz prisustvo jedne od 12 bolesti koje definišu AIDS:
- kandidijaza jednjaka, dušnika, bronha, pluća;
- ekstrapulmonalna kriptokokoza;
- kriptosporidioza s proljevom duže od mjesec dana;
- citomegalovirusna infekcija bilo kojeg organa (osim i pored jetre, slezene i limfnih čvorova kod pacijenata starijih od 1 mjeseca):
- infekcija uzrokovana virusom herpes simpleksa, perzistentna duže od 1 mjeseca kod pacijenata starijih od 1 mjeseca;
- limfom mozga kod pacijenata mlađih od 60 godina;
- limfocitna intersticijska pneumonija kod djeteta mlađeg od 13 godina;
- diseminirana infekcija uzrokovana bakterijama grupe Micobacterium avium intracellulare ili M. Kansassii;
- Pneumocystis pneumonia;
- progresivna multifokalna leukoencefalopatija;
- toksoplazmoze centralnog nervnog sistema kod pacijenata starijih od 1 meseca.
Prisutnost jedne od ovih bolesti omogućava dijagnosticiranje HIV infekcije u odsustvu laboratorijskog testa krvi na prisustvo antitijela na HIV, ili čak i ako se dobije seronegativan rezultat.
Izvor: Medicinska laboratorijska dijagnostika, programi i algoritmi. Ed. prof. Karpishchenko A.I., Sankt Peterburg, Intermedica, 2001