Ο καρκίνος του μαστού (BC) είναι ένας κοινός τύπος ογκολογίας και, δυστυχώς, δεν έχει αναπτυχθεί ακόμη μέθοδος θεραπείας που να παρέχει πλήρη εγγύηση ίασης. Επομένως, η καλύτερη διέξοδος για τον ασθενή είναι η πρόληψη και έγκαιρη διάγνωσηκαρκίνος του μαστού. Η ανάλυση ψαριών για τον καρκίνο του μαστού είναι η πιο σύγχρονη μέθοδος έρευνας που σας επιτρέπει να κατευθύνετε τη θεραπεία του ασθενούς στον πιο σωστό δρόμο.
Παρά την τεράστια εμπειρία που έχει συσσωρευτεί στη μελέτη και τη θεραπεία αυτής της ασθένειας, η ιατρική εξακολουθεί να μην είναι σε θέση να υποδείξει εξωτερικοί παράγοντες, προκαλώντας κακοήθης όγκοςμαστικός αδένας. Κανένα από τα γνωστά καρκινογόνα δεν μπορεί να συσχετιστεί αξιόπιστα με την εμφάνιση αυτής της ασθένειας. Σύγχρονοι τρόποιΤα διαγνωστικά γενικά δίνουν καλά αποτελέσματα και επιτρέπουν τον προσδιορισμό με υψηλή ακρίβεια της παρουσίας ή απουσίας της νόσου και του σταδίου ανάπτυξης. Ωστόσο, δεν παρέχουν όλες ολοκληρωμένες πληροφορίες που σας επιτρέπουν να συνταγογραφήσετε με ακρίβεια τη θεραπεία.
- Πλήρης εξέταση αίματος - ελέγχει το επίπεδο των λευκοκυττάρων, τον ρυθμό καθίζησης των ερυθροκυττάρων και την αιμοσφαιρίνη. Οι δύο πρώτοι δείκτες στην ογκολογία αυξάνονται, ο τελευταίος, αντίθετα, μειώνεται. Ωστόσο, αυτή η ανάλυση μας επιτρέπει να κρίνουμε μόνο την παρουσία ορισμένων προβλημάτων στο σώμα. Κάντε μια ακριβή διάγνωση του καρκίνου μαστικός αδένας» με τη βοήθειά του είναι αδύνατο, ειδικά στις πρώιμο στάδιοανάπτυξη όγκου.
- Βιοχημεία - καθορίζει το επίπεδο των ενζύμων και των ηλεκτρολυτών, γεγονός που καθιστά δυνατή την εκτίμηση της παρουσίας μεταστάσεων. Ωστόσο, αυτά τα δεδομένα δεν είναι πάντα αντικειμενικά. Αυτή η μελέτη δείχνει επίσης την παρουσία στο αίμα ορισμένων ογκοδεικτών που βοηθούν στην παρακολούθηση της παρουσίας καρκινικός όγκοςκαι την ανάπτυξή του.
- Η φασματική ανάλυση σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία καρκίνου με πιθανότητα μεγαλύτερη από 90%, ακόμη και σε πρώιμο στάδιο.Η μέθοδος βασίζεται στη μελέτη του αίματος υπό υπέρυθρη ακτινοβολία, η οποία σας επιτρέπει να προσδιορίσετε τη μοριακή του σύνθεση.
- Βιοψία - πραγματοποιείται με λήψη δείγματος ιστού από το μαστό και περαιτέρω κυτταρολογική ανάλυση, η οποία προσδιορίζει την παρουσία καρκινικά κύτταρακαι τον αριθμό τους, που εξαρτάται από τον βαθμό ανάπτυξης της νόσου.
- Η γενετική ανάλυση καθορίζει την προδιάθεση του ασθενούς για τη δημιουργία καρκίνου του μαστού, η οποία πραγματοποιείται με την ανίχνευση ορισμένων γονιδίων στο αίμα που ευθύνονται για τη μετάδοση του καρκίνου από γενιά σε γενιά.
Ωστόσο, το πιο πρόσφατο και αποτελεσματική μέθοδοςη έρευνα σήμερα είναι το λεγόμενο τεστ FISH (ψάρι). Η συντομογραφία στη μετάφραση από τα αγγλικά ακούγεται σαν "ενδοκυτταρικός υβριδισμός φθορισμού".
Η μέθοδος δοκιμής ψαριών είναι σχετικά νέα - χρησιμοποιείται από το 1980. Ωστόσο, παρά την πολυπλοκότητα και την υψηλή τιμή, κατάφερε να κερδίσει θετικές κριτικέςτόσο γιατρούς όσο και ασθενείς που χάρη σε αυτόν απαλλάχτηκαν με επιτυχία από τον καρκίνο.
Για την ανάπτυξη των κυττάρων του μαστού σε ανθρώπινο σώμαυπεύθυνο για ένα γονίδιο που ονομάζεται HER2. Το όνομα που μεταφράζεται από τα αγγλικά σημαίνει ανθρώπινος υποδοχέας οιστρογόνου - 2. Κανονικά, οι υποδοχείς αυτού του γονιδίου παράγουν HER2, μια πρωτεΐνη που ρυθμίζει τη διαίρεση των κυττάρων του αδένα. Ένας καρκινικός όγκος (συνήθως καρκίνωμα) κατά την έναρξή του «απατάει» αυτό το γονίδιο, αναγκάζοντάς το να αναπτύξει επιπλέον ιστό που θα χρησιμοποιηθεί από τον όγκο για την ανάπτυξή του. Αυτή η ανωμαλία εμφανίζεται στο 30% περίπου των περιπτώσεων και χαρακτηρίζεται από τον όρο «ενίσχυση».
Έτσι, το ίδιο το σώμα του ασθενούς βοηθά στην ανάπτυξη της ογκολογίας. Εάν αυτή η διαδικασία δεν σταματήσει, τότε ακόμη και οι πιο σύγχρονες και ισχυρές μέθοδοι θεραπείας μπορεί να μην βοηθήσουν τον ασθενή.
Η μελέτη της ενίσχυσης του γονιδίου HER2 πραγματοποιείται συνήθως σε δύο στάδια:
- IHC (ανοσοϊστοχημική δοκιμή);
- απευθείας FISH - ανάλυση (fluorescent hybridization).
Κάτω από τοπική αναισθησίαΟ ασθενής υποβάλλεται σε βιοψία – λήψη δειγμάτων ιστού που αποστέλλονται σε εξειδικευμένο εργαστήριο.
Πρώτον, συνήθως εκτελείται ανοσοϊστοχημεία - μια μικροσκοπική ανάλυση ενός δείγματος ιστού ενός καρκινικού όγκου. Καθορίζει τη θεμελιώδη παρουσία του γονιδίου HER2 στον ιστό του όγκου. Αυτή η μελέτη είναι πολύ φθηνότερη από τη δοκιμή ψαριών, και είναι επίσης ευκολότερη και ταχύτερη στην εκτέλεση. Ωστόσο, δεν παρέχει τόσο ακριβείς πληροφορίες.Το αποτέλεσμα καθορίζεται σε αριθμούς από το μηδέν έως τις τρεις μονάδες. Εάν το αποτέλεσμα είναι μικρότερο ή ίσο με ένα, τότε το γονίδιο HER2 απουσιάζει στον όγκο και δεν χρειάζεται περαιτέρω έρευνα. Δύο με τρεις βαθμούς συνοριακό κράτος, περισσότεροι από τρεις - κακοήθης σχηματισμός βρίσκεται σε διαδικασία ανάπτυξης και είναι απαραίτητο να προχωρήσουμε στο δεύτερο στάδιο της διάγνωσης.
Μια μελέτη ψαριών για τον καρκίνο του μαστού πραγματοποιείται ως εξής: στοιχεία μορίων DNA (δεοξυριβονουκλεϊκό οξύ) επισημασμένα με ειδική βαφή. Αυτοί οι δείκτες εισάγονται στα μόρια DNA του ασθενούς και καθορίζουν εάν πραγματοποιείται ενίσχυση HER2 και σε ποιο επίπεδο. Η ανάλυση πραγματοποιείται σε πραγματικό χρόνο, ο γιατρός συγκρίνει τον ρυθμό διαίρεσης του γονιδίου στη θέση του υποτιθέμενου όγκου με τον ρυθμό διαίρεσης της συνήθους περιοχής του μαστού.
Στον καρκίνο του μαστού, μια μελέτη FISH μπορεί να δώσει τα ακόλουθα αποτελέσματα:
- η αντίδραση είναι θετική - ο ρυθμός διαίρεσης του γονιδίου HER2 στον ιστό του όγκου υπερβαίνει το κανονικό δύο φορές ή περισσότερο, οπότε απαιτείται πρόσθετη θεραπεία.
- η αντίδραση είναι αρνητική - το HER2 δεν εμπλέκεται στη διαδικασία της διαίρεσης των καρκινικών κυττάρων και, εάν ένας όγκος εξακολουθεί να υπάρχει, αυτό το γονίδιο δεν θα καταλύσει την ανάπτυξή του.
Έτσι, η ανάλυση καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό της εσφαλμένης συμπεριφοράς του γονιδίου HER2 και τη διόρθωση της θεραπείας με την εφαρμογή παράλληλης θεραπείας με στόχο την καταστολή αυτού του γονιδίου. Επί του παρόντος, το φάρμακο Herceptin χρησιμοποιείται για αυτό.
Εάν το τεστ ψαριών δεν γίνει έγκαιρα ή εάν δεν δοθεί προσοχή στα αποτελέσματα, ο γιατρός δεν θα έχει δεδομένα για τη συμπεριφορά του HER2. Σε αυτή την περίπτωση, η θεραπεία θα συνταγογραφηθεί χωρίς να ληφθεί υπόψη η πιθανή επιθετική δραστηριότητα αυτού του γονιδίου. Πιθανότατα, μια τέτοια θεραπεία δεν θα φέρει αποτελέσματα - ο όγκος θα συνεχίσει να αναπτύσσεται επιθετικά.
Εκτός από τα παραπάνω, η παρακολούθηση της συμπεριφοράς του γονιδίου HER2 δίνει στους ογκολόγους κατανόηση του βαθμού επιθετικότητας του όγκου και την ικανότητα να προβλέψουν τον ρυθμό ανάπτυξης και εξάπλωσής του. Παίζει πολύ σημαντικός ρόλοςστο σχεδιασμό περίθαλψης ασθενών. Προσδιορίστε εάν υπάρχει ανάγκη για ραντεβού βαριά θεραπεία(για παράδειγμα, ακτινοβολία ή χημεία), ή θα είναι αρκετό ορμονοθεραπεία, βγαζει νοημα χειρουργική επέμβασηή είναι προαιρετικό.
Πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα της ανάλυσης ψαριών
Όπως κάθε άλλη διαγνωστική μέθοδος, η έρευνα FISH έχει τα θετικά και τα αρνητικά της.
Ωστόσο, παρά τον κάποιο σκεπτικισμό, που πιθανώς συνδέεται με την καινοτομία αυτής της τεχνικής, έχει αναμφισβήτητα πλεονεκτήματα:- Η μελέτη πραγματοποιείται γρήγορα - το αποτέλεσμα είναι έτοιμο σε λίγες ημέρες, ενώ άλλες διαγνωστικές μέθοδοι χρειάζονται έως και αρκετές εβδομάδες. Αυτή η στιγμή είναι εξαιρετικά σημαντική στον αγώνα κατά της ογκολογίας.
- Εκτός από τη μελέτη του καρκίνου του μαστού, η ανάλυση σάς επιτρέπει να ανακαλύψετε την προδιάθεση ενός ασθενούς στην ογκολογία οποιουδήποτε οργάνου κοιλιακή κοιλότητα. Στον ασθενή παρέχεται λεπτομερής αναφορά, καθοδηγούμενη από την οποία μπορεί να υποβληθεί σε περαιτέρω εξετάσεις για πρόληψη. πιθανή ανάπτυξηΚαρκίνος.
- Λόγω των ιδιαιτεροτήτων της ανάλυσης ψαριών, μπορεί να ανιχνεύσει τις πιο ασήμαντες γενετικές ανωμαλίες που δεν μπορούν να διαγνωστούν με άλλες μεθόδους.
- Σε αντίθεση με ορισμένους άλλους τύπους έρευνας, το τεστ ψαριών είναι ασφαλές για τον ασθενή. Εκτός από βιοψία, δεν απαιτεί πρόσθετα τραυματικά αποτελέσματα.
Ορισμένοι ογκολόγοι θεωρούν την αποτελεσματικότητα του τεστ ψαριών αμφιλεγόμενη. Βασίζονται σε μελέτες που δεν έχουν δείξει σημαντικό πλεονέκτημα αυτής της μεθόδου έναντι της φθηνότερης μελέτης IHC.
Επίσης, τα μειονεκτήματα της δοκιμής ψαριών περιλαμβάνουν τους ακόλουθους παράγοντες:
- υψηλό κόστος έρευνας·
- Λόγω του γεγονότος ότι οι δείκτες που εισάγονται στο DNA είναι κάπως συγκεκριμένοι, δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν σε ορισμένα μέρη των χρωμοσωμάτων.
- η ανάλυση δεν αποκαλύπτει όλη τη γενετική βλάβη, η οποία μπορεί να οδηγήσει σε διαγνωστικά σφάλματα.
Γενικά, παρά την κριτική, η ανάλυση ψαριών είναι η ταχύτερη και ακριβέστερη από τις μεθόδους διάγνωσης του καρκινώματος του μαστού. Είναι επίσης σημαντικό να επιτρέπει την πρόβλεψη της εξέλιξης ορισμένων άλλων τύπων ογκολογίας.
Οποιοσδήποτε καρκίνος αντιμετωπίζεται πιο εύκολα πρώιμα στάδιαανάπτυξη. Δυστυχώς, ειρωνικά, τα περισσότερα από γνωστά είδηΟι κακοήθεις όγκοι είναι εξαιρετικά δύσκολο να διαγνωστούν στα αρχικά στάδια. Επιπλέον, πολλές από τις διαγνωστικές μεθόδους που χρησιμοποιούνται είναι χρονοβόρες και δεν παρέχουν μια απολύτως αντικειμενική εικόνα. Η ανάλυση ψαριών όχι μόνο παρέχει την πιο ακριβή εικόνα της κατάστασης του όγκου, αλλά σας επιτρέπει επίσης να σώσετε τον ασθενή από καταστροφικές μορφές θεραπείας για το σώμα (για παράδειγμα, χημειοθεραπεία), καθώς ο βαθμός επιθετικότητας του όγκου και, κατά συνέπεια, ο προσδιορίζεται η πιθανότητα μεταστάσεων.
μέθοδος υβριδισμού επί τόπου* (στη θέση, λατ.) βασίζεται στην ικανότητα του DNA ή του RNA να σχηματίζει σταθερά υβριδικά μόρια με ανιχνευτές DNA / RNA απευθείας σε παρασκευάσματα σταθερών χρωμοσωμάτων και πυρήνων μεσοφάσεως. Χρησιμοποιώντας αυτή τη μέθοδο, μπορείτε να προσδιορίσετε την ακριβή θέση σχεδόν οποιασδήποτε αλληλουχίας DNA ή RNA απευθείας στο κύτταρο, πυρήνα του κυττάρουή στα χρωμοσώματα.
Για υβριδισμό. επί τόπουκατάλληλα κυτταρολογικά ή ιστολογικά παρασκευάσματα κυττάρων οποιουδήποτε ιστού ή οργάνου, παρασκευασμένα σύμφωνα με τυπικές μεθόδους. Σε κλινικό κυτταρογενετικό εργαστήριο χρησιμοποιούνται σκευάσματα καλλιεργημένων λεμφοκυττάρων. περιφερικό αίμα, κύτταρα του κυτταροτροφοβλάστη του χοριακού επιθηλίου, καλλιεργημένα και ακαλλιέργητα κύτταρα του αμνιακού υγρού, διάφοροι ιστοί από υλικό αποβολής, καθώς και επιχρίσματα παρειακών επιθηλιακών κυττάρων και αίματος.
μέθοδος υβριδισμού επί τόπου έχει ιδιαίτερη σημασία για την πρακτική κυτταρογενετική λόγω της ανάπτυξης μιας μη ισοτοπικής παραλλαγής που βασίζεται στη χρήση ανιχνευτών σημασμένων με μη ραδιενεργά τροποποιημένα νουκλεοτίδια. Οι μη ισοτοπικές παραλλαγές υβριδισμού σε παρασκευάσματα (ειδικά τα φθορίζοντα) έχουν πολλά πλεονεκτήματα σε σύγκριση με τα ισοτοπικά: υψηλή ανάλυση, η οποία ισούται με την ανάλυση μικροσκοπίου (0,1 - 0,2 μm), δεν χρειάζεται στατιστική επεξεργασία των αποτελεσμάτων, ταχύτητα και ασφάλεια για τους ερευνητές υγείας
Επιπλέον, ο συνδυασμός διαφορετικών τροποποιημένων δειγμάτων ανιχνεύθηκε χρησιμοποιώντας διαφορετικά συστήματαανίχνευσης, σας επιτρέπει να προσδιορίσετε ταυτόχρονα τη θέση δύο ή περισσότερων αλληλουχιών DNA σε ένα κύτταρο ή σε μία πλάκα μετάφασης. Και η χρήση επαναλαμβανόμενων αλληλουχιών επισημασμένων με φθοριόχρωμα ως ανιχνευτές DNA μειώνει τον χρόνο της διαδικασίας σε 7-9 ώρες (ο κλασικός μη ισοτοπικός υβριδισμός διαρκεί δύο ημέρες, οι παραλλαγές ισοτόπων από μια εβδομάδα έως έναν μήνα), κάτι που είναι ιδιαίτερα σημαντικό για την προγεννητική διάγνωση. Χρήση Μέθοδος FISHστην κυτταρογενετική διάγνωση επιτρέπει την αναγνώριση δομικών χρωμοσωμικές ανακατατάξεις, καθορίστε τη φύση των χρωμοσωμάτων δείκτη, αναλύστε αριθμητικές παραβιάσεις του συνόλου χρωμοσωμάτων, όπως στο χρωμοσώματα μεταφάσεως, και σε πυρήνες μεσοφάσεως.
Αρχή της μεθόδου FISH
Στον πυρήνα Μέθοδος FISHβρίσκεται η αντίδραση υβριδισμού μεταξύ ενός τεχνητά δημιουργημένου ανιχνευτή DNA και της συμπληρωματικής αλληλουχίας νουκλεοτιδίων του πυρηνικό DNA. Το μόριο DNA αποτελείται από δύο ελικοειδείς αλυσίδες νουκλεοτιδίων και ο υβριδισμός είναι δυνατός μόνο εάν οι αλυσίδες διαχωριστούν. Για την αποσύνδεση των αλυσίδων νουκλεοτιδίων του DNA, χρησιμοποιείται μετουσίωση (για τον επακόλουθο υβριδισμό, τόσο το DNA στους πυρήνες του υπό μελέτη δείγματος όσο και ο ίδιος ο ανιχνευτής DNA πρέπει να μετουσιωθούν). Μετά τη μετουσίωση, ο ανιχνευτής DNA υβριδοποιείται με τη συμπληρωματική νουκλεοτιδική του αλληλουχία και μπορεί να ανιχνευθεί χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού.
Ετσι, γενική μορφήπρωτόκολλο για τη ρύθμιση ΨΑΡΙμπορεί να παρουσιαστεί στην ακόλουθη μορφή:
1. Παρασκευή ιστολογικού ή κυτταρολογικού σκευάσματος.
Η παρασκευή ενός ιστολογικού παρασκευάσματος πραγματοποιείται σύμφωνα με πρότυπο σχήμα: κοπή, σήμανση, καλωδίωση, έκχυση, μικροτομία, τοποθέτηση της φέτας σε γυάλινη πλάκα και αποπαραφίνη. Κατά την παρασκευή ενός κυτταρολογικού παρασκευάσματος, χρησιμοποιούνται ειδικά διαλύματα καθίζησης και φυγοκέντρηση, γεγονός που καθιστά δυνατή τη λήψη ενός συμπυκνωμένου κυτταρικού εναιωρήματος.
2. Προεπεξεργασία (αν χρειάζεται).
Το παρασκεύασμα υποβάλλεται σε επεξεργασία από πρωτεάσες για να εξαλειφθεί η παρουσία πρωτεϊνών που εμποδίζουν τον υβριδισμό.
3. Εφαρμογή ανιχνευτή DNA στο παρασκεύασμα και επακόλουθη μετουσίωση.
Προκειμένου να μετουσιωθεί ο ανιχνευτής και το δείγμα DNA, υποβάλλονται σε επεξεργασία με φορμαμίδιο και θερμαίνονται σε θερμοκρασία περίπου 85-90°C.
4. Υβριδισμός.
Μετά τη μετουσίωση, το φάρμακο ψύχεται σε μια ορισμένη θερμοκρασία (37°C στη θήκη κλινική έρευνα) και επωάζεται σε υγρό θάλαμο για αρκετές ώρες (η διάρκεια της επώασης αναφέρεται σε κάθε συγκεκριμένο πρωτόκολλο). Επί του παρόντος, οι αυτόματοι υβριδοποιητές χρησιμοποιούνται για μετουσίωση και υβριδισμό.
5. Πλύσιμο.
Μόλις ολοκληρωθεί ο υβριδισμός, οι μη δεσμευμένοι ανιχνευτές πρέπει να ξεπλυθούν, κάτι που διαφορετικά θα δημιουργούσε ένα υπόβαθρο που θα καθιστούσε δύσκολη την αξιολόγηση των αποτελεσμάτων FISH. Για την έκπλυση, χρησιμοποιείται συνήθως ένα διάλυμα που περιέχει κιτρικό και χλωριούχο νάτριο (SSC).
6. Αντιχρώση.
Με τη βοήθεια φθορίζουσες βαφές (DAPI - 4,6-διαμιδιν-2-φαινυλινδόλη, ιωδιούχο προπίδιο), χρωματίζεται όλο το πυρηνικό DNA.
7. Ανάλυση των αποτελεσμάτων με τη χρήση μικροσκοπίου φθορισμού. Εκτέλεση εργασιών ρουτίνας (αποπαραφίνη, Προκαταρκτική επεξεργασία, πλύσιμο) μπορεί να αυτοματοποιηθεί.
* - Το υλικό ετοιμάστηκε με βάση πληροφορίες από ανοιχτές πηγές.
Δεδομένου ότι το τεστ FISH μπορεί να ανιχνεύσει γενετικές ανωμαλίες, που προκαλούν καρκίνο, είναι μια αποτελεσματική μέθοδος για τη διάγνωση ορισμένων τύπων καρκίνου. Το τεστ χρησιμοποιείται επίσης για να επιβεβαιώσει τη διάγνωση και σας επιτρέπει να λάβετε Επιπλέον πληροφορίεςΟ πιθανό αποτέλεσμαασθένεια και τη σκοπιμότητα χρήσης χημειοθεραπείας.
Για παράδειγμα, σε ασθενείς με καρκίνο του μαστού, ένα τεστ ιστού FISH που λαμβάνεται κατά τη διάρκεια μιας βιοψίας βοηθά στον προσδιορισμό της παρουσίας αντιγράφων του γονιδίου HER2 στα κύτταρα.
Τα κύτταρα με αντίγραφα του γονιδίου HER2 έχουν μεγάλη ποσότηταΥποδοχείς HER2, οι οποίοι λαμβάνουν σήματα που διεγείρουν την ανάπτυξη καρκινικών κυττάρων στο μαστό. Επομένως, για ασθενείς με αντίγραφα του γονιδίου HER2, συνιστάται η χρήση του Herceptin (trastuzumab), ενός φαρμάκου που αναστέλλει την ικανότητα των υποδοχέων HER2 να λαμβάνουν σήματα.
Λόγω του υψηλού κόστους και της σχετικής μη προσβασιμότητας του τεστ FISH, χρησιμοποιείται πιο συχνά μια άλλη εξέταση για την ανίχνευση του καρκίνου του μαστού, η ανοσοϊστοχημεία (IHC).
Υπάρχει διαμάχη στους ιατρικούς κύκλους σχετικά με την υψηλή απόδοση του τεστ FISH σε σύγκριση με τα τυπικά τεστ. Ωστόσο, χάρη σε τεχνική πρόοδοΤο τεστ FISH γίνεται φθηνότερο και πιο προσιτό σε ποικίλα κλινικά περιβάλλοντα.
Πώς λειτουργεί το τεστ FISH
Κατά τη διεξαγωγή μιας δοκιμής FISH σε δείγμα ιστού ασθενούς, χρησιμοποιούνται φθορίζουσες ετικέτες που συνδέονται μόνο σε ορισμένες περιοχές των χρωμοσωμάτων. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας ένα μικροσκόπιο φθορισμού, προσδιορίζονται οι περιοχές των χρωμοσωμάτων στις οποίες έχουν δεσμευτεί οι φθορίζοντες ανιχνευτές και η παρουσία πιθανές αποκλίσειςπροκαλώντας την ανάπτυξη καρκίνου.
Τα καρκινικά κύτταρα μπορεί να εμφανίσουν τις ακόλουθες ανωμαλίες:
- μετατόπιση - η μεταφορά ενός τμήματος ενός χρωμοσώματος σε μια νέα θέση στο ίδιο ή άλλο χρωμόσωμα.
- αναστροφή - μια στροφή ενός τμήματος ενός χρωμοσώματος κατά 180 μοίρες ενώ διατηρείται μια σύνδεση με το ίδιο το χρωμόσωμα.
- διαγραφή - απώλεια μέρους ενός χρωμοσώματος.
- διπλασιασμός - διπλασιασμός ενός τμήματος ενός χρωμοσώματος, που οδηγεί σε υπερβολικό περιεχόμενο αντιγράφων ενός γονιδίου σε ένα κύτταρο.
Οι μετατοπίσεις βοηθούν στη διάγνωση ορισμένων τύπων λευχαιμίας, λεμφώματος και σαρκώματος. Η παρουσία διπλασιασμού στα καρκινικά κύτταρα του μαστού βοηθά τον γιατρό να επιλέξει την καλύτερη θεραπεία.
Το πλεονέκτημα του τεστ FISH έναντι των τυπικών κυτταρογενετικών δοκιμών (που εξετάζουν τη γενετική σύνθεση των κυττάρων) είναι ότι μπορεί να ανιχνεύσει ακόμη και τις μικρότερες γενετικές αλλαγές που δεν μπορούν να φανούν με ένα συμβατικό μικροσκόπιο.
Αλλα σημαντική διαφοράΤο τεστ FISH είναι η δυνατότητα διεξαγωγής του σε κύτταρα που δεν έχουν ακόμη αρχίσει να αναπτύσσονται ενεργά. Άλλες δοκιμές πραγματοποιούνται σε κύτταρα μόνο αφού έχουν αναπτυχθεί στο εργαστήριο για δύο εβδομάδες, επομένως η όλη διαδικασία μπορεί να διαρκέσει έως και τρεις εβδομάδες, με τα αποτελέσματα των δοκιμών FISH να είναι διαθέσιμα εντός λίγων ημερών.
Παραδείγματα τεστ FISH για διάγνωση καρκίνου
Αν και το τεστ FISH χρησιμοποιείται συχνότερα για την ανάλυση γενετικών ανωμαλιών στον καρκίνο του μαστού, βοηθά επίσης στην απόκτηση σημαντικές πληροφορίεςγια άλλους τύπους καρκίνου.
Για παράδειγμα, κατά τη διάγνωση του καρκίνου ΚύστηΗ δοκιμή FISH για κύτταρα ούρων είναι πιο ακριβής από τις άτυπες κυτταρικές εξετάσεις. Επιπλέον, σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την υποτροπή του καρκίνου της ουροδόχου κύστης 3-6 μήνες νωρίτερα.
Το τεστ FISH βοηθά επίσης στην ανίχνευση χρωμοσωμικών ανωμαλιών στη λευχαιμία, συμπεριλαμβανομένων των κυττάρων που είναι ενδεικτικά μιας επιθετικής μορφής χρόνιας λεμφοκυτταρικής λευχαιμίας (ΧΛΛ). Οι ασθενείς με επιθετική μορφή ΧΛΛ μπορεί να χρειαστούν επείγουσα θεραπεία, ενώ για λιγότερο επιθετικές μορφές, η παρατήρηση μπορεί να είναι επαρκής.
Διαμάχη για το τεστ FISH
Δεν συμφωνούν όλοι οι ειδικοί ότι το τεστ FISH είναι το περισσότερο ακριβής ανάλυσηγια τη διάγνωση καρκίνων ευαίσθητων στο Herceptin.
Το 2010, επιστήμονες από το Ινστιτούτο Mayo (Ιρλανδία) δήλωσαν ότι το λιγότερο ακριβό τεστ IHC είναι σχεδόν εξίσου αποτελεσματικό στον προσδιορισμό της ευαισθησίας στο Herceptin με το τεστ FISH.
Άλλοι ειδικοί επέκριναν το τεστ FISH επειδή απέτυχε να ανιχνεύσει μικρές μεταλλάξεις, όπως μικρές διαγραφές, εισαγωγές και σημειακές μεταλλάξεις, και επειδή αγνοούσε ορισμένες αναστροφές.
Βελτίωση του τεστ FISH
Παρά το γεγονός ότι η τεχνολογία δοκιμής FISH δεν επιτρέπει ακόμη την ανάλυση όλων των τμημάτων των χρωμοσωμάτων, αναπτύσσεται συνεχώς προς αυτή την κατεύθυνση.
Για παράδειγμα, το 2007, Καναδοί επιστήμονες ανακοίνωσαν την ανάπτυξη ενός μικροσκοπίου μικροσκοπίου μεγέθους slide που θα επέτρεπε τη διεξαγωγή μιας δοκιμής FISH χρησιμοποιώντας μια συσκευή που χωράει στην παλάμη του χεριού σας.
Ονομάζεται FISH Test on a Chip, αυτό το βελτιωμένο τεστ θα δώσει αποτελέσματα σε μια μέρα και θα κοστίσει λιγότερο από άλλες δοκιμές.
Καρκίνος του μαστού - επικίνδυνη ασθένεια, η οποία, σύμφωνα με στατιστικά στοιχεία, κατέχει την πρώτη θέση μεταξύ των καρκινικών ασθενειών στις γυναίκες. Ο κίνδυνος εμφάνισης αυτής της νόσου αυξάνεται σε όλες τις γυναίκες άνω των 40 ετών και μπορεί να οφείλεται σε αρκετούς άλλους παράγοντες. Από τα περισσότερα πιθανές αιτίεςΟι αιτίες του καρκίνου του μαστού περιλαμβάνουν παχυσαρκία, γενετικές ή κληρονομική προδιάθεση, πρώιμη έναρξη της εμμήνου ρύσεως και καθυστερημένη ολοκλήρωση, ορμονική ή ακτινοθεραπεία.
Επιπλέον, ο κίνδυνος νοσηρότητας είναι αυξημένος σε άτοκες γυναίκεςκαι γυναίκες που είχαν καρκίνο. Οι άνδρες μπορούν επίσης να αναπτύξουν καρκίνο του μαστού.
Τύποι και μέθοδοι διάγνωσης
Το πρώτο βήμα για τη διάγνωση του καρκίνου του μαστού είναι μια εξέταση ρουτίνας από μαστολόγο. Οι γυναίκες άνω των 40 ετών θα πρέπει να κάνουν αυτές τις εξετάσεις τουλάχιστον μία φορά κάθε δύο χρόνια. Ο γιατρός πραγματοποιεί οπτική εξέταση, ψηλάφηση και μαστογραφία των μαστικών αδένων. Τα οπτικά σημάδια της ανάπτυξης της νόσου μπορεί να είναι:
γενικές πληροφορίες
Η ακτινογραφία του μαστού (μαστογραφία) σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία, το μέγεθος και τη θέση του όγκου. Για τη βελτίωση της ακρίβειας των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται, η τεχνολογία εισαγωγής παράγοντα αντίθεσης. Εάν ο όγκος έχει ήδη ανιχνευθεί, τότε χρησιμοποιείται η μέθοδος της πνευμοκυστογραφίας - η αφαίρεση του υγρού του όγκου και η εισαγωγή αέρα στην κοιλότητα. Εάν δεν προσδιορίζεται η παρουσία όγκου, τότε χρησιμοποιείται αγωγός - η εισαγωγή ενός παράγοντα αντίθεσης στους γαλακτοφόρους πόρους.
Αυτές οι μέθοδοι σας επιτρέπουν να οπτικοποιήσετε την παρουσία σχηματισμών στους ιστούς του μαστικού αδένα.
Εάν η παρουσία όγκου γίνει επίσης εμφανής στη μαστογραφία, ο ασθενής παραπέμπεται σε ένα σύνολο διαγνωστικών μέτρων:
Στο υπερηχογράφημα, ο γιατρός μπορεί να διακρίνει έναν όγκο από μια κύστη και να διευκρινίσει τον εντοπισμό του σχηματισμού. Μετά από αυτό, λαμβάνεται δείγμα ιστού από αυτό για βιοψία. Η βιοψία σάς επιτρέπει να ανακαλύψετε τον τύπο σχηματισμού: καλοήθη ή κακοήθη, καθώς και να προσδιορίσετε εάν ο όγκος είναι ορμονοεξαρτώμενος. Αυτές οι πληροφορίες επιτρέπουν στον γιατρό να αποφασίσει για μια στρατηγική θεραπείας, αλλά δεν καθιστά πάντα δυνατό τον προσδιορισμό του σταδίου. Συχνά, ακόμη και με όλα τα απαραίτητα διαγνωστικά μέτραμπορεί να προσδιοριστεί μόνο μετά την επέμβαση.
Ο μηχανισμός των ιστολογικών μελετών
Γίνεται βιοψία ιστού τόσο πριν όσο και μετά την επέμβαση. Η διαδικασία πραγματοποιείται μετά από διευκρίνιση του εντοπισμού της εκπαίδευσης.
Η βιοψία είναι η διαδικασία αφαίρεσης ενός κομματιού ιστού και η μελέτη της ονομάζεται " ιστολογική εξέτασηή απλά «ιστολογία».
Ένας ιατρός, χρησιμοποιώντας μια ειδική βελόνα, παίρνει μια μικρή ποσότητα ιστού από το νεόπλασμα ή ο όγκος που έχει ήδη αφαιρεθεί από το σώμα του ασθενούς στέλνεται για ιστολογική εξέταση. Στη συνέχεια, το θραύσμα ιστού χρωματίζεται και επεξεργάζεται με ειδικό τρόπο ώστε να αυξηθεί η αντίθεση και να διευκολυνθεί η μελέτη. Η φέτα εξετάζεται με μικροσκόπιο από ειδικό και δίνει συμπέρασμα για την ποιότητα του σχηματισμού του όγκου. Πολλά σε αυτή τη μελέτη εξαρτώνται από την προσοχή και τα προσόντα του βοηθού εργαστηρίου που δίνει το συμπέρασμα.
Μια σχετική μελέτη είναι η ανοσοϊστοχημεία. Γενικά μπορεί να ονομαστεί και «ιστολογία», γιατί. η μέθοδος βασίζεται στη μελέτη των ιστών, αλλά η ανοσοϊστοχημεία είναι μια πιο προηγμένη μέθοδος ανάλυσης. Ο ιστός σε αυτή τη μελέτη χρωματίζεται επίσης με ειδικά αντιδραστήρια, τα οποία όχι μόνο ενισχύουν την οπτική αντίθεση, αλλά συνδυάζονται («ετικέτα») με αντισώματα με ειδικό τρόπο, γεγονός που καθιστά δυνατό τον προσδιορισμό περισσότερων χαρακτηριστικών του νεοπλάσματος. Η αντίδραση σε αυτή την περίπτωση συμβαίνει πολύ πιο γρήγορα, γεγονός που σας επιτρέπει να λαμβάνετε γρήγορα τα αποτελέσματα της ανάλυσης.
Η ανοσοϊστοχημεία επιτρέπει όχι μόνο την αποσαφήνιση του τύπου του νεοπλάσματος, αλλά και τον σχεδιασμό μιας στρατηγικής θεραπείας του ασθενούς με βάση την ανίχνευση της ευαισθησίας του ιστού όγκου σε διάφοροι τύποιθεραπευτική επίδραση. Επιπλέον, η διεξαγωγή αυτής της μελέτης είναι όσο το δυνατόν αυτοματοποιημένη, γεγονός που ελαχιστοποιεί την πιθανότητα διαγνωστικού σφάλματος λόγω του ανθρώπινου παράγοντα.
Υπάρχουν επίσης σύγχρονα μέτραδιαγνωστικά για την ανίχνευση της παρουσίας όγκου στο σώμα: πρόκειται για φασματική ανάλυση αίματος, ανοσολογική (βιοχημική) ανάλυση, FISH-δοκιμή ιστού όγκου. Μια γενετική εξέταση αίματος επιτρέπει σε κάθε γυναίκα να επαληθεύσει την ύπαρξη ή την απουσία προϋποθέσεων για την εμφάνιση καρκίνου του μαστού. Η αξονική τομογραφία και η μαγνητική τομογραφία σάς επιτρέπουν να προσδιορίσετε με ακρίβεια τον εντοπισμό του όγκου και να εντοπίσετε τη δυναμική της ανάπτυξής του, να αξιολογήσετε τη δομή του νεοπλάσματος.
Πώς να εντοπίσετε τον καρκίνο με εξέταση αίματος;
Μια εξέταση αίματος συνταγογραφείται κυρίως από γιατρό μετά από υπερηχογραφική εξέταση. Υπάρχουν περιπτώσεις όπου ένας ασθενής, με δική του πρωτοβουλία, δίνει αίμα σε δείκτες παραθύρων ή γενετική ανάλυσηγια να προσδιορίσετε εάν διατρέχετε κίνδυνο για καρκίνο του μαστού. Σε ορισμένες περιπτώσεις γενική ανάλυσηΤο αίμα μπορεί να χρησιμεύσει ως λόγος επικοινωνίας με ένα ογκολογικό ιατρείο (μαζί με ψηλάφηση μιας φώκιας ή οπτικά σημάδια καρκίνου).
Βιοχημική ανάλυση
Το αίμα ως υλικό για έρευνα επιτρέπει τα ακόλουθα διαγνωστικά μέτρα:
Ταυτόχρονα, μόνο οι δύο πρώτες αναλύσεις μπορούν να ονομαστούν εξειδικευμένες μέθοδοι για τον προσδιορισμό του καρκίνου, η δεύτερη από τις οποίες είναι περισσότερο προληπτικό παρά λειτουργικό. Δύο άλλες εξετάσεις αίματος πραγματοποιούνται κυρίως πριν από την επέμβαση για να προσδιοριστεί η κατάσταση του σώματος και η έκταση της διαδικασίας. Ωστόσο, όπως ήδη αναφέρθηκε, εάν γίνει αισθητή μια σφράγιση στο στήθος και ταυτόχρονα μια γενική εξέταση αίματος δείχνει περισσότερους από δύο αρνητικούς διαγνωστικούς συντελεστές, αυτός είναι ένας λόγος να επικοινωνήσετε με έναν ειδικό. Οι αρνητικοί συντελεστές είναι δείκτες εκτός του κανόνα σε ορισμένες παραμέτρους της σύνθεσης του αίματος.
Μια βιοχημική εξέταση αίματος αποκαλύπτει την παρουσία αντισωμάτων στα καρκινικά κύτταρα. Τέτοια σώματα ονομάζονται καρκινικοί δείκτες. Ο αριθμός και το είδος των καρκινικών δεικτών εξαρτάται από τις ιδιαιτερότητες (εντόπιση) του καρκινικού όγκου και το στάδιο ανάπτυξής του. Οι καρκινικοί δείκτες περιλαμβάνουν:
Στην περίπτωση του καρκίνου του μαστού, ο θεράπων ιατρός θα ενδιαφέρεται πρωτίστως για την παρουσία του καρκινικού δείκτη CA-15-3, καθώς η παρουσία του στο αίμα υποδηλώνει αναμφισβήτητα μια ασθένεια καρκίνου του μαστού. Η αποκρυπτογράφηση του αποτελέσματος διαρκεί κατά μέσο όρο μία ημέρα. Η βιοχημική ανάλυση πραγματοποιείται αρκετές φορές κατά τη διάρκεια της νόσου. Το αίμα για αυτόν λαμβάνεται από μια φλέβα το πρωί με άδειο στομάχι. Δύο εβδομάδες πριν από την εξέταση, ο ασθενής σταματά να τα παίρνει όλα φάρμακα(θα καθοριστεί από τον θεράποντα ιατρό). Δύο ημέρες πριν από την αιμοδοσία, δεν μπορείτε να πάρετε αλκοόλ, λιπαρά και τηγανητά τρόφιμα.
Μια ώρα πριν από τη διαδικασία, δεν μπορείτε να καπνίσετε και είναι επιθυμητό να μειώσετε το συναισθηματικό στρες. Αίμα επάνω βιοχημική ανάλυσησυνήθως δεν τα παρατάτε αμέσως μετά την ακτινοβολία και τη φυσιοθεραπεία.
Ορισμός γενετικών παραγόντων
Πριν μιλήσουμε για μια γενετική εξέταση αίματος, θα πρέπει να τονιστεί η διαφορά μεταξύ των εννοιών «γενετική» και «κληρονομική». γενετικός παράγονταςΗ εμφάνιση καρκίνου είναι μια ευρύτερη έννοια που συνεπάγεται όχι μόνο την παρουσία συγγενών με καρκίνο του μαστού, αλλά και μια συγκεκριμένη γονιδιακή μετάλλαξη, λόγω της οποίας αυξάνεται ο κίνδυνος αυτής της ασθένειας.
Ο κληρονομικός παράγοντας υποδηλώνει πιθανό κίνδυνο καρκίνου του μαστού με βάση το οικογενειακό ιστορικό. Ταυτόχρονα, όχι μόνο οι γυναίκες, αλλά και οι άνδρες μπορούν να λάβουν ένα μεταλλαγμένο γονίδιο, αλλά ο φορέας του δεν θα αρρωστήσει απαραίτητα.
Οποιαδήποτε γυναίκα μπορεί να υποβληθεί σε γενετική ανάλυση. Αυτό συνιστάται ιδιαίτερα για εκείνους των οποίων οι άμεσοι συγγενείς είχαν καρκίνο του μαστού. Πριν από τη διαδικασία αιμοδοσίας για ανάλυση, ένας ειδικός στον τομέα της γενετικής θα πρέπει να μιλήσει με τον ασθενή, ο οποίος θα εξηγήσει τις αποχρώσεις της αποκρυπτογράφησης των αποτελεσμάτων. Ειδική εκπαίδευσηπριν από τη δωρεά αίματος από τον ασθενή δεν απαιτείται.
Στην περίπτωση θετικού αποτελέσματος μετάλλαξης BRCA, αλλά απουσία άλλου συμπτώματα άγχους, δεν υπάρχει λόγος πανικού. Για τις γυναίκες με μετάλλαξη σε αυτά τα γονίδια, μπορούν να συστηθούν τακτικές αυτοεξετάσεις και φυσικές εξετάσεις ως προληπτικά μέτρα. Μετά από 40 χρόνια, είναι λογικό να σκεφτόμαστε την αφαίρεση των ωοθηκών και των μαστών, γυναίκες μικρότερη ηλικίαπου δεν σκοπεύουν να αποκτήσουν παιδιά στο μέλλον, μερικές φορές συνιστούν τη λήψη αντισυλληπτικά. Η απόφαση για αυτά τα μέτρα βαρύνει εξ ολοκλήρου την ίδια τη γυναίκα και απαιτεί προσεκτική προσέγγιση και διαβούλευση με τους γιατρούς.
Οι πιο πρόσφατες διαγνωστικές μέθοδοι
Μια φασματική ανάλυση αίματος αποκαλύπτει την παρουσία νεοπλασμάτων στο σώμα με πιθανότητα έως και 93%. Πρόκειται για μια σχετικά φθηνή διαγνωστική μέθοδο που βασίζεται στην υπέρυθρη ακτινοβολία ορού αίματος και στην ανάλυση της μοριακής του σύνθεσης.
Το συμπέρασμα για τη φασματική ανάλυση του αίματος δίνεται στην αρχή της «παρουσίας-απουσίας» και στοχεύει στον εντοπισμό των περισσότερων τύπων κακοήθων όγκων. Επίσης, αυτή η μελέτη είναι σε θέση να προσδιορίσει το στάδιο ανάπτυξης του καρκίνου του μαστού. Η ερμηνεία των αποτελεσμάτων γίνεται στο εργαστήριο και δεν απαιτεί επιπλέον γνωμάτευση γιατρού.
Για να δοθεί αίμα για φασματική ανάλυση, είναι απαραίτητο να ολοκληρωθεί η λήψη του φαρμάκου 2 μήνες πριν από τη διαδικασία. Από τη στιγμή της ακτινογραφίας ή άλλης έκθεσης, καθώς και της χημειοθεραπείας, πρέπει να περάσουν τουλάχιστον 3 μήνες. Επιπλέον, η γυναίκα δεν πρέπει να είναι έγκυος ή να έχει έμμηνο ρύση τη στιγμή της αιμοληψίας. Η αιμοληψία πραγματοποιείται με άδειο στομάχι το πρωί. Η φασματική ανάλυση αίματος διαρκεί κατά μέσο όρο 12 εργάσιμες ημέρες.
Ενας από πιο πρόσφατες μεθόδουςδιάγνωση καρκίνων είναι η λεγόμενη «δοκιμή ψαριών» (FISH, fluorescent hybridization). Η αποτελεσματικότητά του είναι ακόμα υπό συζήτηση, το κύριο ζήτημα της σκοπιμότητάς του είναι η δαπανηρή ερευνητική διαδικασία. Η ουσία της μεθόδου συνίσταται στην επισήμανση κυτταρικών θραυσμάτων με φθορίζουσα σύνθεση και περαιτέρω εξέταση με μικροσκόπιοκύτταρα. Σύμφωνα με ποια μέρη του γενετικού υλικού έχουν έρθει σε επαφή τα επισημασμένα θραύσματα, μπορεί να γίνει κατανοητό εάν ο ασθενής έχει προδιάθεση για καρκίνο και ποιες μέθοδοι θεραπείας θα είναι σχετικές σε μια συγκεκριμένη περίπτωση.
Η δοκιμή FISH δεν απαιτεί πλήρως ώριμα κύτταρα, επομένως αυτή η ανάλυση είναι πολύ πιο γρήγορη από άλλες εργαστηριακές εξετάσεις. Επιπλέον, η μέθοδος FISH σάς επιτρέπει να παρατηρήσετε με μεγαλύτερη σαφήνεια τη γενετική βλάβη, κάτι που δεν είναι δυνατό με άλλους τύπους αναλύσεων. Το τεστ FISH χρησιμοποιείται συχνότερα ειδικά για την ανίχνευση του καρκίνου του μαστού, αλλά λειτουργεί επίσης και για την ανίχνευση ορισμένων άλλων τύπων καρκίνου.
Στα μειονεκτήματα του τεστ FISH συγκαταλέγεται, εκτός από το υψηλό κόστος του, η αδυναμία του να λειτουργήσει σε ορισμένα μέρη των χρωμοσωμάτων λόγω της ιδιαιτερότητας των σημαδιών. Επιπλέον, το τεστ FISH αγνοεί ορισμένους τύπους μεταλλάξεων και διαταραχές του γενετικού κώδικα, κάτι που μπορεί να είναι μια σημαντική παράλειψη στη διάγνωση. Συγκριτικές ΣπουδέςΤο FISH με το φθηνότερο τεστ IHC δεν έδειξε σημαντικό πλεονέκτημα στον προσδιορισμό της ευαισθησίας των καρκινικών κυττάρων στο Herceptin. Ωστόσο, η δοκιμή FISH για αυτή τη στιγμήείναι το ταχύτερο μεταξύ μεθόδους υψηλής ακρίβειαςδιάγνωση καρκίνου.
Μια σύγχρονη μέθοδος κυτταρογενετικής ανάλυσης, η οποία επιτρέπει τον προσδιορισμό των ποιοτικών και ποσοτικών αλλαγών στα χρωμοσώματα (συμπεριλαμβανομένων των μετατοπίσεων και των μικροδιαγραφών) και χρησιμοποιείται για διαφορική διάγνωσηκακοήθεις παθήσεις του αίματος και συμπαγείς όγκοι.
Ρωσικά συνώνυμα
Φθορίζον in situ υβριδισμό
Ανάλυση FISH
Αγγλικά συνώνυμα
Φθορισμός επί τόπουπαραγωγή μικτών γενών
Ερευνητική μέθοδος
Φθορίζον in situ υβριδισμό.
Ποιο βιοϋλικό μπορεί να χρησιμοποιηθεί για έρευνα;
Δείγμα ιστού, δείγμα ιστού σε μπλοκ παραφίνης.
Πώς να προετοιμαστείτε σωστά για έρευνα;
Δεν απαιτείται προετοιμασία.
Γενικές πληροφορίες για τη μελέτη
Fluorescent in situ υβριδισμός (FISH) σε- situυβριδοποίηση) είναι ένα από τα πιο σύγχρονες μεθόδουςδιάγνωση χρωμοσωμικών ανωμαλιών. Βασίζεται στη χρήση ανιχνευτών DNA που έχουν επισημανθεί με φθορίζουσα ετικέτα. Οι ανιχνευτές DNA είναι θραύσματα DNA που έχουν συντεθεί ειδικά, η αλληλουχία των οποίων είναι συμπληρωματική με την αλληλουχία DNA των μελετώμενων ανώμαλων χρωμοσωμάτων. Έτσι, τα δείγματα DNA διαφέρουν ως προς τη σύνθεση: διαφορετικά, ειδικά δείγματα DNA χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό διαφορετικών χρωμοσωμικών ανωμαλιών. Οι ανιχνευτές DNA ποικίλλουν επίσης σε μέγεθος: κάποιοι μπορεί να κατευθύνονται σε ένα ολόκληρο χρωμόσωμα, άλλοι σε έναν συγκεκριμένο τόπο.
Κατά τη διαδικασία υβριδισμού, εάν υπάρχουν ανώμαλα χρωμοσώματα στο δείγμα δοκιμής, συνδέονται με τον ανιχνευτή DNA, ο οποίος, όταν εξετάζεται με φθορίζον μικροσκόπιο, προσδιορίζεται ως φθορίζον σήμα ( θετικό αποτέλεσμαΔοκιμή FISH). Ελλείψει ανώμαλων χρωμοσωμάτων, τα μη δεσμευμένα δείγματα DNA «ξεπλένονται» κατά τη διάρκεια της αντίδρασης, η οποία, όταν εξετάζεται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού, ορίζεται ως η απουσία φθορίζοντος σήματος (αρνητικό αποτέλεσμα δοκιμής FISH). Η μέθοδος καθιστά δυνατή την αξιολόγηση όχι μόνο της παρουσίας ενός σήματος φθορισμού, αλλά και της έντασης και του εντοπισμού του. Έτσι, η δοκιμή FISH δεν είναι μόνο ποιοτική, αλλά και ποσοτική μέθοδος.
Το τεστ FISH έχει μια σειρά από πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλες κυτταρογενετικές μεθόδους. Πρώτα απ 'όλα, η μελέτη FISH μπορεί να εφαρμοστεί τόσο στους μεταφασικούς όσο και στους μεσοφασικούς πυρήνες, δηλαδή σε κύτταρα που δεν διαιρούνται. Αυτό είναι το κύριο πλεονέκτημα του FISH σε σχέση με με κλασικούς τρόπουςκαρυότυπος (για παράδειγμα, χρώση χρωμοσωμάτων σύμφωνα με τον Romanovsky-Giemsa), που ισχύουν μόνο για τους πυρήνες μεταφάσεως. Αυτό κάνει το FISH να μελετά περισσότερο ακριβής μέθοδοςγια τον προσδιορισμό των χρωμοσωμικών ανωμαλιών σε ιστούς με χαμηλή πολλαπλασιαστική δραστηριότητα, συμπεριλαμβανομένων των συμπαγών όγκων.
Δεδομένου ότι η δοκιμή FISH χρησιμοποιεί σταθερό DNA πυρήνων μεσοφάσης, μπορεί να χρησιμοποιηθεί μια ποικιλία βιοϋλικών για έρευνα - αναρροφήσεις λεπτής γωνίας βιοψία αναρρόφησης, επιχρίσματα, αναρροφήσεις μυελός των οστών, δείγματα βιοψίας και, κυρίως, διατηρημένα θραύσματα ιστού, όπως ιστολογικά μπλοκ. Έτσι, για παράδειγμα, μια δοκιμή FISH μπορεί να πραγματοποιηθεί επιτυχώς σε επαναλαμβανόμενα παρασκευάσματα που λαμβάνονται από ιστολογικό μπλοκ δείγματος βιοψίας μαστού όταν επιβεβαιώνεται η διάγνωση "αδενοκαρκινώματος μαστού" και η ανάγκη προσδιορισμού της κατάστασης HER2/neu του όγκου. Θα πρέπει να τονιστεί ότι αυτή τη στιγμή η μελέτη FISH συνιστάται ως επιβεβαιωτική εξέταση όταν λαμβάνεται ένα απροσδιόριστο αποτέλεσμα της ανοσοϊστοχημικής μελέτης του όγκου για τον καρκινικό δείκτη HER2/neu (IHC 2+).
Ένα άλλο πλεονέκτημα του FISH είναι η ικανότητά του να ανιχνεύει μικροδιαγραφές που δεν ανιχνεύονται με κλασικό καρυότυπο ή PCR. Αυτό έχει ιδιαίτερη σημασία σε περιπτώσεις υποψίας για σύνδρομο DiGeorge και αγγειοκαρδιοπροσωπικό σύνδρομο.
Το τεστ FISH χρησιμοποιείται ευρέως στη διαφορική διάγνωση κακοήθων νοσημάτων, κυρίως στην ογκοαιματολογία. Χρωμοσωμικές ανωμαλίες που σχετίζονται με κλινική εικόνακαι τα δεδομένα των ανοσοϊστοχημικών μελετών αποτελούν τη βάση για την ταξινόμηση, τον καθορισμό των θεραπευτικών τακτικών και την πρόγνωση των λεμφο- και μυελοπολλαπλασιαστικών νόσων. κλασικά παραδείγματαείναι χρόνια μυελογενής λευχαιμία - t (9;22), οξεία προμυελοκυτταρική λευχαιμία– t (15;17), χρόνια λεμφοκυτταρική λευχαιμία- τρισωμία 12 και άλλες. Όσον αφορά τους συμπαγείς όγκους, η μελέτη FISH χρησιμοποιείται συχνότερα στη διάγνωση του καρκίνου του μαστού, της ουροδόχου κύστης, του παχέος εντέρου, του νευροβλαστώματος, του αμφιβληστροειδούς και άλλων.
Η μελέτη FISH μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί στην προγεννητική και προεμφυτευτική διάγνωση.
Η δοκιμή FISH πραγματοποιείται συχνά σε συνδυασμό με άλλες μεθόδους μοριακής και κυτταρογενετικής διάγνωσης. Το αποτέλεσμα αυτής της μελέτης αξιολογείται σε συνδυασμό με τα αποτελέσματα πρόσθετων εργαστηριακών και οργάνων δεδομένων.
Σε τι χρησιμεύει η έρευνα;
- Για τη διαφορική διάγνωση κακοήθων νοσημάτων (αίματος και συμπαγών οργάνων).
Πότε προγραμματίζεται η μελέτη;
- Όταν υπάρχει υποψία ότι έχει κακοήθης νόσοςαίματος ή συμπαγών όγκων, η τακτική θεραπείας και η πρόγνωση των οποίων εξαρτώνται από τη χρωμοσωμική σύνθεση του κλώνου όγκου.
Τι σημαίνουν τα αποτελέσματα;
Θετικό αποτέλεσμα:
- Η παρουσία ανώμαλων χρωμοσωμάτων στο δείγμα δοκιμής.
Αρνητικό αποτέλεσμα:
- Η απουσία ανώμαλων χρωμοσωμάτων στο δείγμα δοκιμής.
Τι μπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα;
- Αριθμός ανώμαλων χρωμοσωμάτων.
- Ανοσοϊστοχημική μελέτη κλινικό υλικό(χρησιμοποιώντας 1 αντίσωμα)
- Ανοσοϊστοχημική μελέτη κλινικού υλικού (χρησιμοποιώντας 4 ή περισσότερα αντισώματα)
- Προσδιορισμός της κατάστασης του όγκου HER2 Μέθοδος FISH
- Προσδιορισμός της κατάστασης του όγκου HER2 με τη μέθοδο CISH
Ποιος παραγγέλνει τη μελέτη;
Ογκολόγος, παιδίατρος, μαιευτήρας-γυναικολόγος, γενετιστής.
Βιβλιογραφία
- Wan TS, Ma ES. Μοριακή κυτταρογενετική: ένα απαραίτητο εργαλείο για τη διάγνωση του καρκίνου. Anticancer Res. 2005 Ιουλ-Αυγ;25(4):2979-83.
- Κολιαλέξη Α, Τσαγγάρης Γ.Τ., Κίτσιου Σ, Καναβάκης Ε, Μαύρου Α. Επίδραση κυτταρογενετικών και μοριακών κυτταρογενετικών μελετών σε αιματολογικές κακοήθειες. Chang Gung Med J. 2012 Mar-Apr;35(2):96-110.
- Mühlmann M. Μοριακή κυτταρογενετική σε κύτταρα μετάφασης και μεσοφάσεως για καρκίνο και γενετική έρευνα, διάγνωση και πρόγνωση. Εφαρμογή σε τομές ιστού και κυτταρικά εναιωρήματα. Genet ΜοΙ Res. 2002 Jun 30;1(2):117-27.