Η διαγνωστική μέθοδος (ELISA) είναι ενημερωτική και όχι πολύ δαπανηρή, έτσι πολλά εργαστήρια προσφέρουν στους πελάτες τους αυτή τη μέθοδο (ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία). Η μελέτη πραγματοποιείται με άδειο στομάχι, λαμβάνεται αίμα για ανάλυση από την κυλινδρική φλέβα του ασθενούς. Πριν από την ELISA, συνιστάται να μην καπνίζετε ή να πίνετε αλκοόλ.
Τι είναι η εξέταση αίματος ELISA;
Μεταξύ των μεθόδων ανάλυσης αίματος που επιτρέπουν την αξιολόγηση της ικανότητας του σώματος να αντισταθεί μεταδοτικές ασθένειεςκαι δείχνει τη φάση της νόσου, σημαντικό μέροςπαίρνει συνδεδεμένη ανοσοπροσροφητική δοκιμασία(ΑΝ ΕΝΑ). Η διεξαγωγή αυτής της μελέτης σάς επιτρέπει να αξιολογήσετε διεξοδικά τη δραστηριότητα της προστατευτικής λειτουργίας του αίματος και να προσδιορίσετε την κατάσταση της ανοσοανεπάρκειας στο μολυσματικές παθολογίεςκαθώς και αιματολογικές παθήσεις, αυτοάνοσες διεργασίες, ορμονικά προβλήματα.
Αυτό εργαστηριακή έρευνα, το οποίο σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία συγκεκριμένων αντισωμάτων ( προστατευτικούς παράγοντεςαίμα πρωτεϊνικής φύσης) σε ορισμένα αντιγόνα (παθογόνους παράγοντες). Μεταξύ των αντισωμάτων υψίστης σημασίας είναι οι ανοσοσφαιρίνες, οι οποίες μπορούν να υπάρχουν με τη μορφή ανοσοσυμπλεγμάτων.
Οι ανοσοσφαιρίνες παράγονται ως αποτέλεσμα πολύπλοκων νευροχυμικών αντιδράσεων της ανθρώπινης ανοσίας που συμβαίνουν ως αποκριτικότηταστην εισαγωγή ξένων αντιγόνων. Κάθε τύπος παθογόνου παράγει τα δικά του ειδικά αντισώματα. Δρουν «δεσμεύοντας» ένα αντιγόνο ή έναν παθολογικό μικροοργανισμό, σχηματίζοντας μια σύμπλοκη ένωση «αντιγόνου-αντισώματος», ακολουθούμενη από εξουδετέρωση, ενζυματική λύση, αντιδράσεις φαγοκυττάρωσης και απέκκριση από το σώμα. Με την παρουσία ορισμένων συμπλεγμάτων η μέθοδος ELISA καθορίζει τον τύπο του παθογόνου ή της επιβλαβούς ουσίας που υπάρχει στον ασθενή.
Αξίζει να θυμόμαστε ότι μετά την πορεία της θεραπείας, τα αντισώματα μπορούν να παραμείνουν στο σώμα μας για πολύ μεγάλο χρονικό διάστημα, ακόμη και αφού η μόλυνση έχει φύγει από το σώμα μας, δηλ. παραμένει η λεγόμενη «ορολογική ουλή». Για να δώσω ένα παράδειγμα: υπάρχουν χιλιάδες αστέρια στον νυχτερινό ουρανό. Πολλά από αυτά τα αστέρια έχουν πεθάνει εδώ και πολύ καιρό, αλλά το φως τους εξακολουθεί να μας λάμπει για αιώνες. Στην πραγματικότητα, βλέπουμε μόνο το ίχνος του αστεριού. Υπάρχει φως, αλλά τα αστέρια έχουν φύγει προ πολλού.
Αλλά αν δεν υπάρχει φως, αυτό δεν σημαίνει ότι το αστέρι δεν ήταν εκεί. Το ίδιο ισχύει και με τα αντισώματα. Η παρουσία τους δεν εγγυάται την παρουσία του επιθυμητού μολυσματικού παράγοντα στον οργανισμό. Η απουσία αντισωμάτων δεν σημαίνει ότι δεν υπάρχει μόλυνση. Εάν το αποτέλεσμα της ανάλυσης με ELISA είναι θετικό, τότε αυτό σημαίνει ότι πρέπει να αναζητήσετε τη μόλυνση με πιο συγκεκριμένες και ακριβές μεθόδους - PCR, βακτηριολογικές καλλιέργειες. Πιθανό ψευδές θετικό αποτέλεσμαεάν πολλά μικρόβια έχουν παρόμοια αντιγονική δομή, τότε θα παραχθούν «παρόμοια» αντισώματα σε διαφορετικά μικρόβια.
Τι είναι οι ανοσοσφαιρίνες
Έχουν ανακαλυφθεί και μελετηθεί 5 κύριες κατηγορίες ανοσοσφαιρινών - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ο ρόλος των υπολοίπων δεν έχει ακόμη αποσαφηνιστεί πλήρως και βρίσκονται στο στάδιο της επιστημονικής έρευνας.
Το κύριο καθήκον της ανοσοσφαιρίνης Α (IgA) είναι οι προστατευτικές λειτουργίες των βλεννογόνων αναπνευστικής οδού, γαστρεντερικός σωλήναςκαι του ουροποιητικού συστήματος. Με οξεία έναρξη της νόσου, είναι αδύνατο να τα αναγνωρίσουμε. Αυτά τα προστατευτικά συμπλέγματα εμφανίζονται μόνο από τη 2η εβδομάδα έναρξης της νόσου, μερικές φορές αργότερα. Το μεγαλύτερο μέρος της ανοσοσφαιρίνης Α συγκεντρώνεται στους βλεννογόνους ιστούς. Περίπου το 80%. Τα υπόλοιπα αντισώματα κυκλοφορούν στο αίμα.
Η κύρια λειτουργία είναι η εξουδετέρωση και η καταστροφή των μικροοργανισμών. Μετά την καθίζηση οξείες εκδηλώσειςασθένεια, ο αριθμός αυτών των ανοσοσφαιρινών αρχίζει να μειώνεται και εξαφανίζεται εντελώς για έως και 8 εβδομάδες μετά την έναρξη της νόσου. Εάν τα IgA βρίσκονται σε περισσότερα από καθυστερημένες ημερομηνίες, τότε αυτό υποδηλώνει χρονισμό της διαδικασίας.
Κύριοι και πρώτοι δείκτες οξεία φάση αναπτύσσοντας παθολογίαείναι ανοσοσφαιρίνες κατηγορίας Μ (IgM). Βρίσκονται την 5η ημέρα από την έναρξη της αδιαθεσίας. Μπορείτε να προσδιορίσετε την παρουσία τους στο αίμα για περίπου 6 εβδομάδες. Μετά αρχίζουν να εξαφανίζονται γρήγορα.
Η υπολειπόμενη ανοσοαπόκριση χαρακτηρίζει την παρουσία ανοσοσφαιρινών κατηγορίας G (IgG) στο αίμα. Η εμφάνιση αυτών των παραγόντων στο αίμα ανιχνεύεται περίπου ένα μήνα μετά την έναρξη της νόσου. Στο μέλλον, μπορούν να καθοριστούν για πολλούς μήνες, χρόνια, ακόμη και μια ζωή, εκτελώντας προστατευτική λειτουργίααπό την επιστροφή (υποτροπή) της νόσου, και σε ορισμένες περιπτώσεις καθιστώντας αδύνατη τη δευτερογενή ανάπτυξη της παθολογίας.
Εάν η ποσότητα της ανοσοσφαιρίνης G άρχισε να αυξάνεται ξανά, τότε μπορεί να υποψιαστείτε την επαναμόλυνση. Ένα παρόμοιο συμπέρασμα μπορεί να εξαχθεί με τη διεξαγωγή δύο ή τριών δειγμάτων που λαμβάνονται με μεσοδιάστημα 2 εβδομάδων.
Πώς γίνεται η ELISA αίματος;
Για ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία, στις περισσότερες περιπτώσεις χρησιμοποιείται αίμα ασθενών, μερικές φορές λαμβάνεται ιστός υαλοειδές σώμα, υγρό σπονδυλικό κανάλι, αμνιακό υγρό.
Το αίμα λαμβάνεται μέσω μιας βελόνας ένεσης σε μια σύριγγα από την κυλινδρική φλέβα. Η μελέτη πραγματοποιείται με άδειο στομάχι. Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι η λήψη μερικών ιατρικά παρασκευάσματαμπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα της ανάλυσης. Πριν δώσετε αίμα, πρέπει να αποφύγετε το κάπνισμα, την κατανάλωση αλκοόλ. Η χρήση ναρκωτικών ουσιών μπορεί να αλλοιώσει τα αποτελέσματα.
Στην περίπτωση αρνητικών τιμών των ανοσοσφαιρινών IgM, IgG, IgA, μπορούμε να μιλήσουμε για απουσία ασθένειας ή αρχική φάση, επίσης ένα αποτέλεσμα με μειονεκτήματα είναι δυνατό για πλήρης ανάρρωσημετά από σημαντικό χρονικό διάστημα.
Εάν τα IgA και IgM δεν ανιχνευθούν και η IgG είναι θετική, τότε κατά πάσα πιθανότητα μιλαμεσχετικά με τη σχηματισμένη ανοσία μετά από μολυσματική ασθένεια ή μετά από εμβολιασμό.
Εάν δεν ανιχνευθούν IgA και IgM και το IgG είναι θετικό, τότε κατά πάσα πιθανότητα μιλάμε για σχηματισμένη ανοσία μετά από μια μολυσματική ασθένεια ή μετά από εμβολιασμό
Στην περίπτωση υψηλού τίτλου IgM με αρνητικές τιμές IgG, IgA, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι υπάρχει οξεία λοιμώδης νόσος.
Ταυτόχρονος θετικές αξίεςτα αποτελέσματα των ανοσοσφαιρινών - IgA, IgM, IgG είναι χαρακτηριστικά της οξείας φάσης υποτροπής μιας υπάρχουσας χρόνιας νόσου.
Τι δίνει η παρουσιαζόμενη τεχνολογία: προσδιορισμός της παρουσίας ελμινθών στο αίμα. Ψάχνετε για άλλα παθογόνα στο σώμα. μπορείτε να μάθετε τους λόγους για την επιδείνωση της υγείας σας. Η θεραπεία βασίζεται επίσης σε αναλύσεις που λαμβάνονται με αυτόν τον τρόπο. μπορείτε να παρακολουθείτε την κατάσταση του ανοσοποιητικού σας συστήματος.
Αλλο ένα καλό χαρακτηριστικό- τη δυνατότητα παρακολούθησης ογκολογικών δεικτών, ανεξάρτητα από την προέλευσή τους, αλλά με την επιφύλαξη της παρουσίας τους στο σώμα, φυσικά. Αυτό το τεστκατάλληλο για την περιγραφή της πολιτείας ΑΝΑΠΑΡΑΓΩΓΙΚΟ ΣΥΣΤΗΜΑπρόσωπο. Η παρουσία ορισμένων πρωτεϊνών, ορμονών και πεπτιδίων καθιστούν δυνατό να κρίνουμε τις δυνατότητες ενός συντρόφου όσον αφορά τη σύλληψη ενός παιδιού, καθώς και την αναμενόμενη ποιότητα του μελλοντικού εμβρύου.
Μια εξέταση αίματος για Giardia είναι μια αρκετά δημοφιλής πρακτική μεταξύ των σύγχρονων γιατρών. Επιπλέον, αυτή η ερευνητική μέθοδος είναι ένα εξαιρετικό εργαλείο για βιοϊατρικές αναλύσεις και ποσοτικές στατιστικές όσον αφορά συγκεκριμένα αντιγόνα.
Πώς χρησιμοποιείται το ELISA;
Αλήθεια, είναι περισσότερο δύσκολες περιπτώσεις, επομένως η ποιότητα μιας τέτοιας ανάλυσης θα εξαρτηθεί σε μεγάλο βαθμό από τους εργαζόμενους του εργαστηρίου που θα πραγματοποιήσουν τη δοκιμή. Χαρακτηριστικά της τεχνολογίας και η διαφορά της από την παλιά εργαστηριακή έρευνα:
- τώρα, αντί για δείγμα κοπράνων, χρησιμοποιείται αίμα για τον προσδιορισμό της παρουσίας ελμινθών.
- η μελέτη του δείγματος πραγματοποιείται στο εργαστήριο πολύ γρήγορα, την επόμενη μέρα μπορείτε να λάβετε πλήρεις πληροφορίες.
- το κόστος της εργαστηριακής έρευνας είναι φθηνό, αφού η θεολογία είναι πολύ απλή.
- εξέταση αίματος για έλμινθες υψηλή απόδοσηακρίβεια.
Αναλύσεις στην ανοσολογική ανάλυση αίματος με ELISA
Λίγοι γνωρίζουν τι είναι οι εξετάσεις αίματος από την άποψη του ανθρώπινου ανοσολογικού συστήματος, καθώς αυτές οι εξετάσεις δεν είναι τόσο συνηθισμένες. Κατά κανόνα, μια τέτοια εξέταση αίματος παρέχει πληροφορίες σχετικά με τον ιό ανοσοανεπάρκειας στο ανθρώπινο σώμα και είναι ανώνυμη, καθώς πραγματοποιείται κατόπιν αιτήματος του ασθενούς.
Για τη δειγματοληψία χρησιμοποιείται αίμα που λαμβάνεται με άδειο στομάχι από φλέβα, από το οποίο λαμβάνεται ορός για εξέταση με φυγοκέντρηση. Επιπλέον, η μελέτη του ορού αίματος μπορεί να αποκαλύψει μια σειρά από σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα(σύφιλη, έρπης, χλαμύδια), καθώς και όλων των τύπων ηπατίτιδας, ιλαράς, ερυθράς, παρωτίτιδας και τοξοπλάσμωσης.
Βασικά, για την ανάλυση ELISA, η μελέτη βιολογικό υλικόείναι αίμα, ωστόσο, η μελέτη μπορεί να είναι εγκεφαλονωτιαίο υγρό, περιεχόμενο του υαλοειδούς σώματος, αμνιακό υγρόκαι τα λοιπά.
Οι ανοσοσφαιρίνες είναι ανοσολογικά μόρια που μπορούν να συνδεθούν και να εξουδετερώσουν τους περισσότερους μολυσματικούς παράγοντες και τοξίνες στο σώμα. Στην περίπτωση αυτή, το πιο σημαντικό χαρακτηριστικό των ανοσοσφαιρινών είναι η ειδικότητά τους, δηλαδή η ικανότητα δέσμευσης σε ένα συγκεκριμένο αντιγόνο. Είναι αυτή η ιδιότητα που χρησιμοποιείται για τη διεξαγωγή εξέτασης αίματος για ανοσοσφαιρίνη.
Υπάρχουν πέντε τύποι ανοσοσφαιρινών, αλλά οι πιο μελετημένοι είναι οι ανοσοσφαιρίνες A, M και G. Οι ανοσοσφαιρίνες M και G είναι ενεργές στο αίμα. Οι ανοσοσφαιρίνες Α είναι ένα είδος φραγμού στην επιφάνεια των βλεννογόνων, καθώς υπάρχουν εκεί σε μεγάλες ποσότητες.
Μια ανοσολογική εξέταση αίματος σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε τον τύπο των ανοσοσφαιρινών, χάρη σε αυτό, η ELISA σας επιτρέπει όχι μόνο να διαγνώσετε την ασθένεια, αλλά και να προσδιορίσετε το στάδιο αυτής της ασθένειας και να παρακολουθήσετε τη δυναμική της νόσου:
- Στις πρώτες 2 εβδομάδες της νόσου, ανιχνεύονται μόνο ανοσοσφαιρίνες Α.
- Από τη 2η έως την 3η εβδομάδα της νόσου, οι ανοσοσφαιρίνες Α και Μ ανιχνεύονται στο αίμα.
- Cc3 για 4 εβδομάδες, μια εξέταση αίματος για ανοσοσφαιρίνη καθορίζει και τους τρεις τύπους.
- κατά την ανάκαμψη, οι ανοσοσφαιρίνες Μ εξαφανίζονται στο αίμα και η ποσότητα των Α και G μειώνεται κατά 2-4 φορές.
- παρουσία μιας χρόνιας διαδικασίας, οι ανοσοσφαιρίνες G είναι απαραίτητα στο αίμα, οι ανοσοσφαιρίνες Μ απουσιάζουν, οι ανοσοσφαιρίνες Α μπορεί να υπάρχουν ή να μην υπάρχουν.
Πεδίο εφαρμογής της ανοσολογικής εξέτασης αίματος με ELISA
- Διαγνωστικά ιογενείς ασθένειες: ηπατίτιδα, έρπης, Ιός Epstein-Barr, κυτταρομεγαλοϊός, κ.λπ.
- σεξουαλικά μεταδιδόμενες λοιμώξεις: χλαμύδια, γονόρροια, τριχομονάδες, μυκόπλασμα, ουρεόπλασμα.
- σύφιλη; ενδοκρινολογία (προσδιορισμός των επιπέδων ορμονών);
- καρκινικοί δείκτες (διάγνωση ογκολογικά νοσήματα) ανοσολογία (διάγνωση ανοσοανεπάρκειας);
- αλλεργιολογία (διάγνωση και θεραπεία αλλεργιών).
Ορολογική εξέταση αίματος - εργαστηριακή μέθοδοεξετάσεις αίματος που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση μεταδοτικές ασθένειεςκαι ορισμοί σκηνής μολυσματική διαδικασία. Ορολογική αντίδρασημε βάση την αλληλεπίδραση αντισωμάτων και αντιγόνων.
Ο προσδιορισμός των αντιγόνων χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό του γένους και του είδους των μικροοργανισμών. Αυτή η ερευνητική μέθοδος χρησιμοποιείται στην ουρολογία και την αφροδισιολογία. αίμα για ορολογική ανάλυσηαίμα λαμβάνεται το πρωί με άδειο στομάχι από μια φλέβα.
Ενδείξεις για συνταγογράφηση και ασθένειες που ανιχνεύονται με ELISA
Το κύριο βιοϋλικό για την ELISA είναι ο ορός αίματος: στο εργαστήριο, λαμβάνεται δείγμα αίματος από έναν ασθενή από μια φλέβα, από την οποία στη συνέχεια αφαιρείται διαμορφωμένα στοιχείαεμποδίζοντας την ανάλυση. Σε ορισμένες άλλες περιπτώσεις, για ανάλυση χρησιμοποιούνται εγκεφαλονωτιαίο υγρό, αμνιακό υγρό, επιχρίσματα βλεννογόνου κ.λπ.
Προκειμένου να αποφευχθούν στρεβλώσεις στα αποτελέσματα, συνιστάται η αιμοδοσία με άδειο στομάχι και δύο εβδομάδες πριν από τη μελέτη (εάν ο στόχος είναι η διάγνωση χρόνιων, λανθάνουσας μολυσματικής νόσου), είναι απαραίτητο να σταματήσετε τη λήψη αντιβιοτικών και αντιιικών φαρμάκων Αδύνατη η κάλυψη πλήρης λίσταενδείξεις για ELISA.
Τα αδιαμφισβήτητα πλεονεκτήματα του ELISA είναι η υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα της μεθόδου. Ευαισθησία είναι η ικανότητα αναγνώρισης της επιθυμητής ουσίας, ακόμα κι αν η συγκέντρωσή της στο δείγμα είναι χαμηλή. Η ειδικότητα, από την άλλη πλευρά, συνεπάγεται την ακρίβεια της διάγνωσης: εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, σημαίνει ότι ακριβώς το αντίσωμα ή το αντιγόνο που υποτίθεται ότι βρέθηκε και όχι κάποια άλλα.
Η ELISA έχει αντικαταστήσει σε μεγάλο βαθμό το "χρυσό πρότυπο" της μικροβιολογίας - βακτηριολογική μέθοδοςδιαγνωστικά, κατά τα οποία, προκειμένου να εντοπιστεί το παθογόνο, ήταν απαραίτητο να απομονωθεί από το σώμα και στη συνέχεια να αναπτυχθεί η καλλιέργεια σε θρεπτικό υλικό σε δοκιμαστικό σωλήνα για αρκετές ημέρες.
Όλη την ώρα που γινόταν η ανάλυση, οι γιατροί αναγκάζονταν να αντιμετωπίζουν τον ασθενή «στα τυφλά», μαντεύοντας την προέλευση του μικροοργανισμού από τα συμπτώματα της νόσου. Ο προσδιορισμός του IgM με τη χρήση ELISA σάς επιτρέπει να κάνετε μια ακριβή διάγνωση ήδη από τις πρώτες ημέρες της νόσου.
Υψηλός βαθμόςη δυνατότητα κατασκευής της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας ελαχιστοποιεί την επίδραση του ανθρώπινου παράγοντα, γεγονός που μειώνει την πιθανότητα λάθους. Τα περισσότερα χρησιμοποιημένα σε σύγχρονα εργαστήριαΤα δοκιμαστικά συστήματα και τα αντιδραστήρια για ELISA παράγονται στο βιομηχανικό περιβάλλονπου εγγυάται ακριβή αποτελέσματα.
Μειονεκτήματα της μεθόδου ELISA
Δυστυχώς, για να πραγματοποιήσετε μια ELISA, πρέπει να ξέρετε τι να αναζητήσετε: η τεχνική ανάλυσης υποδηλώνει ότι ο γιατρός έχει μια υπόθεση σχετικά με τη φύση της νόσου εκ των προτέρων. Επομένως, δεν έχει νόημα να συνταγογραφηθεί μια τέτοια εξέταση με την ελπίδα να "μαντέψουμε" κατά λάθος τη διάγνωση.
Στην περίπτωση διάγνωσης μολυσματικών ασθενειών, η ενζυμική ανοσοδοκιμασία δεν μπορεί να βρει το παθογόνο και να καθορίσει τις ειδικές του ιδιότητες: υποδεικνύει μόνο την παρουσία αντισωμάτων στο αίμα του ασθενούς, υποδηλώνοντας έμμεσα την παρουσία ξένου μικροοργανισμού στο ανθρώπινο σώμα. Το ELISA είναι μια εξαιρετικά ακριβής, αλλά όχι φθηνή μέθοδος, επομένως πρέπει να τη χρησιμοποιήσετε με σύνεση και ένας εξειδικευμένος γιατρός θα πρέπει να ερμηνεύσει τα αποτελέσματα.
Πιθανά αποτελέσματα ELISA
Ανάλογα με το περιεχόμενο της ανάλυσης στη φόρμα, τα δεδομένα μπορούν να παρουσιαστούν με τη μορφή πίνακα που περιλαμβάνει όλα τα αντισώματα ή αντιγόνα με σημάδια για αρνητικά ή θετική αντίδραση, ή θα υποδεικνύεται η ποσοτική τιμή του αποτελέσματος (αρνητικό, ασθενώς θετικό, θετικό ή έντονα θετικό).
Τελευταία επιλογήκαθορίζει πόσα αντισώματα περιέχονται στο αναλυόμενο δείγμα. Ένας άλλος ποσοτικός δείκτης είναι ο δείκτης απληστίας αντισωμάτων, εκφρασμένος ως ποσοστό. Υποδεικνύει πόσος χρόνος έχει περάσει από την έναρξη της μολυσματικής διαδικασίας (όσο υψηλότερος είναι ο δείκτης, τόσο περισσότερο).
Σήμερα, παράγονται χιλιάδες τύποι συστημάτων δοκιμών ELISA, τα οποία καθιστούν δυνατή την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων και αντιγόνων το πολύ. διαφορετικές παθολογίες. Επομένως, αυτή η ανάλυση χρησιμοποιείται σχεδόν σε όλους τους ιατρικούς κλάδους. Η διάγνωση που γίνεται με τη βοήθεια της ELISA αποτελεί εγγύηση για το διορισμό της κατάλληλης θεραπείας και αποτελεσματική θεραπείαασθένειες.
Υπό την παρουσία του απαραίτητα αντιδραστήριακαι καλή οργάνωση του εργαστηρίου, θα λάβετε το αποτέλεσμα της ανάλυσης εντός 1-2 ημερών μετά την αιμοληψία. Σε ορισμένες περιπτώσεις, εάν χρειάζεστε επείγουσα απάντηση, αυτή η περίοδος μπορεί να μειωθεί σε 2-3 ώρες.
αντιπροσωπεύοντας μοντέρνα εμφάνισηΗ εργαστηριακή έρευνα, η ELISA ή η ενζυμική ανοσοδοκιμασία σάς επιτρέπει να βρείτε συγκεκριμένα αντισώματα ή αντιγόνα στο αίμα για ορισμένες ασθένειες. Αυτό σας επιτρέπει να εντοπίσετε τόσο την αιτιολογία της νόσου όσο και να προσδιορίσετε το στάδιο της. Ταυτόχρονα, τα αποτελέσματα αυτού του είδους της έρευνας μπορούν να εκδοθούν τόσο ποσοτικά όσο και ποιοτικά. Ας εξετάσουμε λοιπόν λεπτομερώς την αρχή της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας, τη μεθοδολογία και την ουσία της.
Τι είναι η ενζυμική ανοσοδοκιμασία
Διορίστηκε για την πληρέστερη ολοκληρωμένη αξιολόγησηκατάσταση υγείας, η ενζυμική ανοσοδοκιμασία επιτρέπει την αξιολόγηση γενική κατάστασηυγείας και να αξιολογήσει τις προστατευτικές του λειτουργίες. Αυτή η εργαστηριακή μελέτη σάς επιτρέπει να διαγνώσετε μολυσματικές, αυτοάνοσες, αιματολογικές παθολογίες σε μια εξέταση αίματος.
Η ουσία της ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας συζητείται στο παρακάτω βίντεο:
Σε ποιον ανατίθεται
Αυτή η μελέτη μπορεί να ανατεθεί σε εκείνους τους ασθενείς που έχουν τις ακόλουθες ασθένειες:
- ασθένεια ιογενής προέλευση, που περιλαμβάνουν ηπατίτιδα,
- σεξουαλικά μεταδιδόμενα νοσήματα - χλαμύδια, τριχομονάδα, σύφιλη, ουρεόπλασμα, μυκόπλασμα.
- ανοσοανεπάρκεια?
- προεγχειρητική ολοκληρωμένη εξέταση.
Συνταγογραφείται επίσης μια εξέταση αίματος ELISA για τον προσδιορισμό του επιπέδου των ορμονών και την αξιολόγηση της ποιότητας του είδους της θεραπείας που διεξάγεται.
Ο γιατρός μπορεί να διορίσει αυτή η ανάλυσηγια να ορίσετε το στάδιο μιας υπάρχουσας ασθένειας, η οποία επιτρέπει έγκαιρες προσαρμογές στη θεραπεία που χρησιμοποιείται. Και η υψηλή ακρίβεια των δεδομένων που λαμβάνονται σας επιτρέπει να έχετε την πιο λεπτομερή εικόνα της υγείας. Ταυτόχρονα, λαμβάνονται δεδομένα μετά τη διεξαγωγή της μελέτης σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα, το οποίο σας επιτρέπει να παρακολουθείτε τη δυναμική της ανάπτυξης παθολογική διαδικασία.
Γιατί να κάνετε αυτές τις εξετάσεις;
Δεδομένου ότι χάρη στην εξέταση αίματος ELISA, μπορείτε να λάβετε σημαντικές πληροφορίες σχετικά με την κατάσταση της υγείας και τις παθολογικές διεργασίες που συμβαίνουν στο σώμα, είναι αυτό που καθιστά δυνατό να ληφθούν πλήρως υπόψη τα αρχικά δεδομένα (γενική υγεία, στάδιο της νόσου, δυναμική της ανάπτυξης της παθολογικής διαδικασίας, δείκτης της αποτελεσματικότητας της θεραπείας που χρησιμοποιείται) κατά τη σύνταξη θεραπευτικών σχημάτων.
Για το λόγο αυτό, για να επιτευχθεί το πιο έντονο αποτέλεσμα της θεραπείας και ο ταχύτερος τερματισμός της παθολογικής διαδικασίας στο σώμα, συνταγογραφείται εξέταση αίματος ELISA. Σοβαρές ασθένειεςτου ανοσοποιητικού συστήματος, η παρουσία αντιγόνων στο αίμα και τα αίτια των αλλεργιών, με βάση τα δεδομένα που λαμβάνονται, μπορούν να θεραπευτούν πιο γρήγορα, χρησιμοποιώντας τις πιο αποτελεσματικές μεθόδους.
Ο διορισμός μιας ανάλυσης ELISA πραγματοποιείται για μια ποικιλία παθολογιών και θα πρέπει να γίνεται μόνο σύμφωνα με τις οδηγίες του γιατρού. Η συχνότητα της ανάλυσης ορίζεται επίσης από τον γιατρό και κατά την αιμοδοσία για ανάλυση ELISA, η εικόνα της νόσου είναι η πιο πλήρης. Δεδομένου ότι είναι δυνατό να ληφθεί η δυναμική της πορείας της νόσου με τη λήψη αυτής της ανάλυσης περισσότερες από μία φορές, οι αιμοδοσίες από τρεις έως πέντε φορές μπορούν να συνταγογραφηθούν συχνότερα. Αυτό καθιστά δυνατή τη σύγκριση της ποσότητας των αντισωμάτων στο αίμα σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα.
Τύποι τέτοιας διαδικασίας
Υπάρχουν διάφοροι τύποι ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας. Διαφέρουν ως προς τον τύπο του υγρού που λαμβάνεται από το ανθρώπινο σώμα, βάσει του οποίου μελετάται η σύστασή του και η παρουσία ορισμένων αντιγόνων.
Ταυτόχρονα, όχι μόνο ανθρώπινο αίμα, αλλά και άλλα υγρά μπορούν να ληφθούν για ανάλυση:
- αμνιακό υγρό,
- εγκεφαλονωτιαίο υγρό,
- περιεχόμενο του υαλοειδούς
- επιχρίσματα,
- βλέννα από την ουρήθρα και τον αυχενικό σωλήνα.
Η ίδια η επέμβαση για τη λήψη ενός συγκεκριμένου τύπου υγρού είναι τυπική και πραγματοποιείται σε νοσοκομείο ημέρας.
Ενδείξεις για κράτημα
Συνήθως, μια ανάλυση ELISA συνταγογραφείται από γιατρό εάν είναι απαραίτητο να ληφθεί μια λεπτομερής εικόνα της τρέχουσας νόσου, η οποία λαμβάνει χώρα σε οποιαδήποτε μορφή: χρόνια, υποτονική ή οξεία. Και οι ακόλουθες συνθήκες και θεραπευτικοί σκοποί μπορούν να θεωρηθούν ενδείξεις για αυτόν τον τύπο ανάλυσης:
- αναζήτηση αντιγόνων ορισμένων ασθενειών.
- προσδιορισμός της ορμονικής κατάστασης.
- ανίχνευση του ιού της ηπατίτιδας στο σώμα.
- έρευνα σε;
- αναζήτηση αντισωμάτων για κάθε είδους μολυσματικές ασθένειες.
- εξέταση για την παρουσία αυτοάνοσων βλαβών του σώματος.
Για μια ενζυμική ανοσοδοκιμασία, δείτε το παρακάτω βίντεο:
Αντενδείξεις για κράτημα
Αντενδείξεις για την ενζυμική ανοσοδοκιμασία δεν έχουν εντοπιστεί μέχρι σήμερα.
Κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, όταν υπάρχει μια συνεχής αλλαγή στην περιεκτικότητα των ορμονών στο αίμα, είναι απαραίτητο να διεξάγετε επανειλημμένα αυτή την ανάλυση για να επιβεβαιώσετε το αποτέλεσμα. Νεογέννητα και παιδιά ΒΡΕΦΙΚΗ ΗΛΙΚΙΑμπορεί επίσης να έχει λανθασμένα δεδομένα ανάλυσης: κατά την ανάπτυξη του εμβρύου, ορισμένοι τύποι αντισωμάτων μπορούν να εισέλθουν στο αίμα του εμβρύου μέσω του πλακούντα της μητέρας. Επομένως, η παρουσία τους στη ληφθείσα ανάλυση δεν θα πρέπει να θεωρείται σημάδι υπάρχουσας μόλυνσης.
Δοκιμή ασφάλειας
Η διενέργεια της διαδικασίας λήψης οποιουδήποτε είδους υγρού από τον ανθρώπινο οργανισμό δεν επιφέρει αρνητικές επιπτώσεις στον οργανισμό. Η πλήρης στειρότητα κατά τη διάρκεια των χειρισμών αποφεύγει την πιθανότητα μόλυνσης από οποιοδήποτε είδος ασθένειας.
Προετοιμασία για την εκδήλωση
Για να πάρει το μέγιστο αξιόπιστα αποτελέσματαη έρευνα θα πρέπει να απέχει από τη χρήση αλκοολούχα ποτάκαι ναρκωτικά πριν πάρετε αίμα (ή άλλο υγρό) για ανάλυση.
Πώς είναι η διαδικασία, αισθήσεις κατά τη διάρκεια της
Για τη διεξαγωγή μιας δοκιμής ELISA, το αίμα του ασθενούς λαμβάνεται αυστηρά με άδειο στομάχι: δεν πρέπει να τρώτε φαγητό σε οποιαδήποτε μορφή τουλάχιστον μία ώρα πριν από τη διαδικασία. Η ανάλυση λαμβάνεται από την κυβική φλέβα.
Η παρουσία οποιωνδήποτε ασθενειών και τα φάρμακα που λαμβάνονται αναφέρονται στον γιατρό εκ των προτέρων, τις περισσότερες φορές τα φάρμακα κατά τη στιγμή της αιμοδοσίας θα ακυρώνονται. Τα συναισθήματα κατά τη διάρκεια της διαδικασίας είναι παρόμοια με τη λήψη αίματος για βιοχημική ανάλυση.
Αποκρυπτογράφηση των αποτελεσμάτων
Η διάγνωση ELISA σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία μόλυνσης στο σώμα, τη δραστηριότητα της παθολογικής διαδικασίας και την αιτιολογία της υπάρχουσας μόλυνσης. Η ταχεία λήψη του αποτελέσματος της ανάλυσης (εντός μιας ημέρας) είναι ένα από τα πλεονεκτήματα αυτού του τύπου μελέτης.
Η διαδικασία αποκωδικοποίησης των πληροφοριών που λαμβάνονται πραγματοποιείται από τον γιατρό. Ταυτόχρονα, θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι η ορθότητα των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται για τη δυναμική οποιωνδήποτε διεργασιών είναι εγγυημένη κατά τη διεξαγωγή αναλύσεων σε ένα εργαστήριο.
Μέσο κόστος της διαδικασίας
Η μέση τιμή μιας μελέτης ELISA εξαρτάται από την κατεύθυνση της ανάλυσης και τον προσδιορισμό συγκεκριμένων τιμών. Έτσι, ο προσδιορισμός ορολογικών δεικτών λοιμωδών νοσημάτων διάφορα είδη(anti-HAV IgG, anti-HAV IgM, HBsAg) θα κοστίσει από 200 έως 320 ρούβλια και πραγματοποιείται εντός 2 εργάσιμων ημερών. Ο δείκτης του κόστους αυτής της διαδικασίας θεωρείται επίσης το πλεονέκτημά της: η διαθεσιμότητα τιμών για κάθε είδους έρευνα επιτρέπει τη διεξαγωγή έρευνας με οποιοδήποτε προϋπολογισμό.
Το κόστος μιας μελέτης ELISA εξαρτάται από την πολιτική ιατρικό ίδρυμα, ωστόσο, θα πρέπει να θεωρείται μια δημόσια διαδικασία που σας επιτρέπει να αποκτήσετε μια λεπτομερή εικόνα της υπάρχουσας νόσου και να παρέχετε την πιο ολοκληρωμένη θεραπεία.
Σχετικά με τους κανόνες και τα χαρακτηριστικά της μελέτης ELISA, δείτε το παρακάτω βίντεο:
(σύνδεσμος στο 3ο άρθρο αυτού του αρχείου), επιτρέποντας την αξιολόγηση της ικανότητας του οργανισμού να αντιστέκεται σε μολυσματικές ασθένειες και δείχνοντας τη φάση της νόσου, σημαντική θέση κατέχει η ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA). Η διεξαγωγή αυτής της μελέτης σάς επιτρέπει να αξιολογήσετε διεξοδικά τη δραστηριότητα της προστατευτικής λειτουργίας του αίματος και να προσδιορίσετε την κατάσταση ανοσοανεπάρκειας σε μολυσματικές παθολογίες, καθώς και ασθένειες αίματος, αυτοάνοσες διεργασίες και ορμονικά προβλήματα.
Πώς είναι δυνατόν να καλυφθούν τόσοι πολλοί στόχοι σε μία ανάλυση και ποιες είναι οι ενδείξεις για την υλοποίησή της; Ας προσπαθήσουμε να το καταλάβουμε.
Τι είναι η εξέταση αίματος ELISA;
Αυτή είναι μια εργαστηριακή δοκιμή που σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία συγκεκριμένων αντισωμάτων (προστατευτικοί παράγοντες αίματος πρωτεϊνικής φύσης) σε ορισμένα αντιγόνα (παθογόνους παράγοντες). Μεταξύ των αντισωμάτων υψίστης σημασίας είναι οι ανοσοσφαιρίνες, οι οποίες μπορούν να υπάρχουν με τη μορφή ανοσοσυμπλεγμάτων.
Οι ανοσοσφαιρίνες παράγονται ως αποτέλεσμα πολύπλοκων ανθρώπινων νευροχυμικών αντιδράσεων που συμβαίνουν ως απόκριση στην εισαγωγή ξένων αντιγόνων. Κάθε τύπος παθογόνου παράγει τα δικά του ειδικά αντισώματα. Δρουν «δεσμεύοντας» ένα αντιγόνο ή έναν παθολογικό μικροοργανισμό, σχηματίζοντας μια σύνθετη ένωση «αντιγόνου-αντισώματος», ακολουθούμενη από εξουδετέρωση, ενζυματική λύση, αντιδράσεις φαγοκυττάρωσης και απέκκριση από το σώμα.
Σημείωση:Είναι λόγω της παρουσίας ορισμένων συμπλεγμάτων που η μέθοδος ELISA καθορίζει τον τύπο του παθογόνου ή της επιβλαβούς ουσίας που υπάρχει στον ασθενή.
Για να ξέρεις βασικές αρχέςλειτουργία της ανθρώπινης ανοσίας, μπορείτε κοιτάζοντας Αυτό το βίντεοανασκόπηση:
Τι είναι οι ανοσοσφαιρίνες
Έχουν ανακαλυφθεί και μελετηθεί 5 κύριες κατηγορίες ανοσοσφαιρινών - IgA, IgM, IgG, IgD, IgE. ο ρόλος των υπολοίπων δεν έχει ακόμη αποσαφηνιστεί πλήρως και βρίσκονται στο στάδιο της επιστημονικής έρευνας.
Σημείωση:Οι πιο σημαντικές στην πρακτική ιατρική είναι οι ανοσοσφαιρίνες των κατηγοριών - A, M και G. Η κατατοπιστικότητα του ορισμού βασίζεται σε διαφορετικά χρονικά διαστήματα εμφάνισης, μέγιστου και εξαφάνισής τους.
Ας εξετάσουμε αυτό το ερώτημα με περισσότερες λεπτομέρειες.
Το κύριο καθήκον ανοσοσφαιρίνη Α (IgA)Συνίσταται στις προστατευτικές λειτουργίες των βλεννογόνων της αναπνευστικής οδού, του γαστρεντερικού συστήματος και του ουροποιητικού συστήματος. Με οξεία έναρξη της νόσου, είναι αδύνατο να τα αναγνωρίσουμε. Αυτά τα προστατευτικά συμπλέγματα εμφανίζονται μόνο από τη 2η εβδομάδα έναρξης της νόσου, μερικές φορές αργότερα. Το μεγαλύτερο μέρος της ανοσοσφαιρίνης Α συγκεντρώνεται στους βλεννογόνους ιστούς. Περίπου το 80%. Τα υπόλοιπα αντισώματα κυκλοφορούν στο αίμα. Η κύρια λειτουργία είναι η εξουδετέρωση και η καταστροφή των μικροοργανισμών. Αφού υποχωρήσουν οι οξείες εκδηλώσεις της νόσου, η ποσότητα αυτών των ανοσοσφαιρινών αρχίζει να μειώνεται και εξαφανίζεται εντελώς για έως και 8 εβδομάδες μετά την έναρξη της νόσου. Εάν ανιχνευθούν IgA σε μεταγενέστερη ημερομηνία, τότε αυτό υποδηλώνει μια χρόνια διαδικασία.
Οι κύριοι και πρώτοι δείκτες της οξείας φάσης της αναπτυσσόμενης παθολογίας είναι ανοσοσφαιρίνες κατηγορίας Μ (IgM). Βρίσκονται την 5η ημέρα από την έναρξη της αδιαθεσίας. Μπορείτε να προσδιορίσετε την παρουσία τους στο αίμα για περίπου 6 εβδομάδες. Μετά αρχίζουν να εξαφανίζονται γρήγορα.
Η υπολειπόμενη ανοσοαπόκριση χαρακτηρίζει την παρουσία στο αίμα ανοσοσφαιρίνες κατηγορίας G (IgG). Η εμφάνιση αυτών των παραγόντων στο αίμα ανιχνεύεται περίπου ένα μήνα μετά την έναρξη της νόσου. Στο μέλλον, μπορούν να προσδιοριστούν για πολλούς μήνες, χρόνια, ακόμη και μια ζωή, επιτελώντας προστατευτική λειτουργία έναντι της επιστροφής (υποτροπής) της νόσου και σε ορισμένες περιπτώσεις καθιστώντας αδύνατη τη δευτερογενή ανάπτυξη της παθολογίας. Εάν η ποσότητα της ανοσοσφαιρίνης G άρχισε να αυξάνεται ξανά, τότε μπορεί να υποψιαστείτε την επαναμόλυνση. Ένα παρόμοιο συμπέρασμα μπορεί να εξαχθεί με τη διεξαγωγή δύο ή τριών δειγμάτων που λαμβάνονται με μεσοδιάστημα 2 εβδομάδων.
Ανοσοσφαιρίνη D (IgD)βρίσκεται στα Β-λεμφοκύτταρα, είναι σε μικρή συγκέντρωση σε υγιείς ανθρώπους. Μετά από 10 χρόνια ζωής φτάνει τις μέγιστες τιμές της. Η ποσότητα της ανοσοσφαιρίνης D αυξάνεται κατά τη διάρκεια της εγκυμοσύνης, σε ασθενείς συστηματικά νοσήματα συνδετικού ιστού, ασθένειες που προκαλούνται από ανοσοανεπάρκεια.
Ενδείξεις για το διορισμό ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας
Προσδιορισμός αντισωμάτων για την παρουσία στο σώμα παθογόνων μικροβίων που προκαλούν:
- τριχομονίαση;
- ουρεαπλάσμωση και.
Υπάρχει αύξηση στον αριθμό των ανοσοσφαιρινών και με.
Η διάγνωση πραγματοποιείται για την ανίχνευση:
- ερπητικές ασθένειες?
- ομάδες ιογενούς ηπατίτιδας?
- Ιός Epstein-Barr;
- κυτταρομεγαλοϊός.
Με τη βοήθεια της ELISA, είναι δυνατό να προσδιοριστεί η παρουσία αντισωμάτων σε 600 τύπους αλλεργιογόνων, να ανιχνευθεί η κατάσταση ανοσοανεπάρκειας, να πραγματοποιηθεί ολοκληρωμένη εξέτασηπριν από τη χειρουργική επέμβαση μεταμόσχευσης σύνθετη ανάλυσησχετικά με την αποτελεσματικότητα της θεραπείας.
Η ELISA είναι πρόσθετη μέθοδοςανίχνευση καρκινικών κυττάρων.
Πώς γίνεται η ELISA αίματος;
Για την ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία, στις περισσότερες περιπτώσεις, χρησιμοποιείται αίμα ασθενών, μερικές φορές λαμβάνεται υαλώδης ιστός, υγρό νωτιαίου σωλήνα και αμνιακό υγρό.
Το αίμα λαμβάνεται μέσω μιας βελόνας ένεσης σε μια σύριγγα από την κυλινδρική φλέβα. Η μελέτη πραγματοποιείται με άδειο στομάχι. Θα πρέπει να θυμόμαστε ότι η λήψη ορισμένων φαρμάκων μπορεί να επηρεάσει το αποτέλεσμα της ανάλυσης. Πριν δώσετε αίμα, πρέπει να αποφύγετε το κάπνισμα, την κατανάλωση αλκοόλ. Η χρήση ναρκωτικών ουσιών μπορεί να αλλοιώσει τα αποτελέσματα.
Στην περίπτωση των αρνητικών τιμών των ανοσοσφαιρινών IgM, IgG, IgA, μπορούμε να μιλήσουμε για την απουσία της νόσου ή την αρχική της φάση και το αποτέλεσμα με τα μειονεκτήματα είναι επίσης δυνατό με πλήρη ανάκτηση μετά από σημαντικό χρονικό διάστημα.
Εάν τα IgA και IgM δεν ανιχνευθούν και το IgG είναι θετικό, τότε κατά πάσα πιθανότητα μιλάμε για σχηματισμένη ανοσία μετά από μια μολυσματική ασθένεια ή μετά από εμβολιασμό.
Στην περίπτωση υψηλού τίτλου IgM με αρνητικές τιμές IgG, IgA, μπορεί να συναχθεί το συμπέρασμα ότι υπάρχει οξεία λοιμώδης νόσος.
Οι ταυτόχρονες θετικές τιμές των αποτελεσμάτων των ανοσοσφαιρινών - IgA, IgM, IgG είναι χαρακτηριστικές της οξείας φάσης της υποτροπής μιας υπάρχουσας χρόνιας νόσου.
Για χρόνια μόλυνσηΗ ELISA, η οποία βρίσκεται στη φάση ύφεσης της διαδικασίας, εμφανίζει αρνητικές τιμές ανοσοσφαιρίνης Μ (IgM), ενώ το αποτέλεσμα των ανοσοσφαιρινών G (IgG) και Α (IgA) θα είναι θετικό.
Οφέλη της μεθόδου ενζυμικής ανοσοδοκιμασίας
Τα κύρια πλεονεκτήματα της μεθόδου ELISA είναι:
- χαμηλό κόστος ανάλυσης.
- διαγνωστική ειδικότητα, ακρίβεια.
- δυναμικός έλεγχος (επανάληψη ανάλυσης για τον προσδιορισμό της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και των σταδίων της νόσου).
- τη δυνατότητα διεξαγωγής μαζικών εξετάσεων στις εστίες μόλυνσης.
- την ταχύτητα απόκτησης του αποτελέσματος·
- σχετική απλότητα ανάλυσης.
- δυνατότητα χρήσης Τεχνολογίες πληροφορικήςσε επεξεργασία;
- ασφάλεια και ανώδυνη για τον ασθενή.
Υπάρχουν μειονεκτήματα της ELISA αίματος;
αρχηγός αρνητικό σημείοέρευνα είναι η δυνατότητα απόκτησης ψευδώς αρνητικών και ψευδώς θετικών δεδομένων. Η αιτία των παρεξηγήσεων μπορεί να είναι τεχνικά ελαττώματα, η λήψη φαρμάκων, που μπορεί να παραμορφώσουν την εικόνα.
Το ELISA χρησιμοποιείται για την ανίχνευση:
- (ascaris, pinworms)?
- απότομη και χρόνια μορφήοπισθορχίαση;
- τριχίνιαση;
- η παρουσία λάμβλιας (ως πρόσθετη ανάλυση).
- μορφές λεϊσμανίασης?
- αμοιβάδα;
- την περιεκτικότητα σε τοξόπλασμα·
Συμπερασματικά, πρέπει να σημειωθεί ότι η σύγχρονη ανοσολογία βρίσκεται συνεχώς σε στάδιο ανάπτυξης, αναζητώντας νέες μεθόδους διάγνωσης και θεραπείας ασθενειών.
Stepanenko Vladimir, χειρουργός
5.1 Ουσία και ταξινόμηση της ELISA.
Η ELISA εμφανίστηκε στα μέσα της δεκαετίας του '60 και αναπτύχθηκε αρχικά ως μέθοδος για την αναγνώριση ενός αντιγόνου σε ένα ιστολογικό παρασκεύασμα, καθώς και για την απεικόνιση των γραμμών καθίζησης σε μια δοκιμή ανοσοδιάχυσης και ανοσοηλεκτροφόρησης, και στη συνέχεια άρχισε να χρησιμοποιείται για τον ποσοτικό προσδιορισμό αντιγόνων και αντισώματα σε βιολογικά υγρά. Στην ανάπτυξη της μεθόδου συμμετείχαν οι E. Engvall και R. Pelman, καθώς και, ανεξάρτητα από αυτούς, οι V. Van Veeman και R. Schurs.
Ρύζι. 6 Βασική αρχή της ELISA:
για την ανίχνευση αντιγόνων. 2) για την ανίχνευση αντισωμάτων
Η μέθοδος βασίζεται στην ειδική δέσμευση ενός αντισώματος σε ένα αντιγόνο, ενώ ένα από τα συστατικά είναι συζευγμένο με ένα ένζυμο· ως αποτέλεσμα της αντίδρασης με το αντίστοιχο χρωμογόνο υπόστρωμα, σχηματίζεται ένα έγχρωμο προϊόν, η ποσότητα του οποίου μπορεί να προσδιορίζεται φασματοφωτομετρικά (Εικ. 6).
Η ανακάλυψη της δυνατότητας ακινητοποίησης αντιγόνου και αντισωμάτων σε διάφορους φορείς διατηρώντας τη δεσμευτική τους δραστηριότητα κατέστησε δυνατή την επέκταση της χρήσης ELISA σε διάφορους τομείς της βιολογίας και της ιατρικής.
Η εμφάνιση μονοκλωνικών αντισωμάτων χρησίμευσε ως περαιτέρω ανάπτυξη της ELISA, η οποία κατέστησε δυνατή την αύξηση της ευαισθησίας, της ειδικότητας και της αναπαραγωγιμότητας των αποτελεσμάτων.
Θεωρητικά, η ELISA βασίζεται στα δεδομένα της σύγχρονης ανοσοχημείας και χημικής ενζυμολογίας, στη γνώση των φυσικοχημικών νόμων της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος, καθώς και στις βασικές αρχές της αναλυτικής χημείας. Η ευαισθησία του ELISA και η διάρκειά του καθορίζονται από πολλούς κύριους παράγοντες: τα κινητικά και θερμοδυναμικά χαρακτηριστικά της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος, την αναλογία των αντιδραστηρίων, τη δραστηριότητα του ενζύμου και την ανάλυση των μεθόδων ανίχνευσης. ΣΕ γενική εικόναΗ αντίδραση αντιγόνου-αντισώματος μπορεί να περιγραφεί με έναν απλό τρόπο:
+[AG]↔[ATAG]
Η ποικιλία των αντικειμένων μελέτης από ενώσεις χαμηλού μοριακού βάρους έως ιούς και βακτήρια, καθώς και ένα ασυνήθιστα ευρύ φάσμα εργασιών που σχετίζονται με μια ποικιλία συνθηκών για τη χρήση του ELISA, καθορίζουν την ανάπτυξη ενός εξαιρετικά μεγάλου αριθμού παραλλαγών αυτής της μεθόδου. .
Οποιαδήποτε παραλλαγή ELISA περιέχει 3 υποχρεωτικά στάδια:
1. το στάδιο της αναγνώρισης της ελεγχόμενης ένωσης από ένα αντίσωμα ειδικό για αυτήν, το οποίο οδηγεί στο σχηματισμό ανοσοσυμπλεγμάτων.
2. το στάδιο σχηματισμού της σύνδεσης του συζυγούς με το ανοσοσύμπλεγμα ή τις ελεύθερες θέσεις δέσμευσης.
3. το στάδιο μετατροπής της ετικέτας ενζύμου σε καταχωρημένο σήμα. Η ταξινόμηση των μεθόδων ELISA βασίζεται σε διάφορες προσεγγίσεις:
1. Ανάλογα με τον τύπο των αντιδραστηρίων που υπάρχουν στο πρώτο στάδιο της ELISA, διακρίνονται οι ανταγωνιστικές και οι μη ανταγωνιστικές μέθοδοι.
Α) Στην ανταγωνιστική ELISA, στο πρώτο στάδιο, το σύστημα περιέχει τόσο την αναλυόμενη ένωση όσο και το ανάλογό της, σημασμένο με το ένζυμο και ανταγωνισμό για συγκεκριμένες θέσεις δέσμευσης με αυτό.
Β) Για μη ανταγωνιστικές μεθόδους, είναι χαρακτηριστική η παρουσία στο σύστημα στο πρώτο στάδιο μόνο της αναλυόμενης ένωσης και των ειδικών για αυτήν κέντρων δέσμευσης.
2. Όλες οι μέθοδοι ELISA χωρίζονται σε ομοιογενείς και ετερογενείς.
Εάν και τα τρία στάδια της ELISA πραγματοποιούνται σε διάλυμα και μεταξύ των κύριων σταδίων δεν υπάρχουν πρόσθετα στάδια διαχωρισμού των σχηματισμένων ανοσοσυμπλεγμάτων από συστατικά που δεν αντέδρασαν, η μέθοδος ανήκει στην ομάδα των ομοιογενών.
Η βάση της ομοιογενούς ELISA, η οποία χρησιμοποιείται συνήθως για τον προσδιορισμό ουσιών χαμηλού μοριακού βάρους, είναι η αναστολή της ενζυμικής δραστηριότητας όταν συνδυάζεται με ένα αντιγόνο ή αντίσωμα. Η ενζυμική δραστηριότητα αποκαθίσταται ως αποτέλεσμα της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος.
Όταν ένα αντίσωμα δεσμεύεται σε ένα αντιγόνο που περιέχει μια επισήμανση ενζύμου, η ενζυμική δραστηριότητα αναστέλλεται κατά 95% σε σχέση με ένα υπόστρωμα υψηλού μοριακού βάρους, το οποίο οφείλεται στον στερικό αποκλεισμό του υποστρώματος από το ενεργό κέντρο του ενζύμου. Καθώς η συγκέντρωση του αντιγόνου αυξάνεται, περισσότερα αντισώματα συνδέονται και διατηρούνται περισσότερα ελεύθερα συζεύγματα αντιγόνου-ενζύμου που μπορούν να υδρολύσουν το υπόστρωμα υψηλού μοριακού βάρους. Η ανάλυση πραγματοποιείται πολύ γρήγορα, απαιτείται 1 λεπτό για έναν προσδιορισμό. Η ευαισθησία της μεθόδου είναι αρκετά υψηλή. Με αυτό, μπορείτε να προσδιορίσετε την ουσία στο επίπεδο των picomoles.
Για ετερογενείς μεθόδους, είναι τυπικό να διεξάγεται ανάλυση σε σύστημα δύο φάσεων με τη συμμετοχή μιας στερεάς φάσης - ενός φορέα, και σε ένα υποχρεωτικό στάδιο διαχωρισμού ανοσοσυμπλεγμάτων από συστατικά που δεν αντέδρασαν (πλύσιμο), τα οποία βρίσκονται σε διαφορετικές φάσεις(τα σχηματισμένα ανοσοσυμπλέγματα βρίσκονται στη στερεά φάση και τα συμπλέγματα που δεν αντέδρασαν είναι σε διάλυμα). Οι ετερογενείς μέθοδοι, στις οποίες ο σχηματισμός ανοσοσυμπλεγμάτων στο πρώτο στάδιο προχωρά στη στερεά φάση, ονομάζονται μέθοδοι στερεάς φάσης.
Οι μέθοδοι ταξινομούνται ως ομοιογενείς-ετερογενείς, εάν το 1ο στάδιο - ο σχηματισμός συγκεκριμένων συμπλοκών συμβαίνει σε διάλυμα και, στη συνέχεια, χρησιμοποιείται στερεά φάση με ακινητοποιημένο αντιδραστήριο για τον διαχωρισμό των συστατικών.
3. Σύμφωνα με την αρχή του προσδιορισμού της ελεγχόμενης ουσίας:
Α) Άμεσος προσδιορισμός της συγκέντρωσης μιας ουσίας (αντιγόνου ή αντισώματος) από τον αριθμό των κέντρων δέσμευσης που αλληλεπιδρούν με αυτήν. Σε αυτή την περίπτωση, η επισήμανση του ενζύμου θα βρίσκεται στο προκύπτον ειδικό σύμπλοκο AG-AT. Η συγκέντρωση της αναλυόμενης ουσίας θα είναι ευθέως ανάλογη με το καταχωρημένο σήμα.
Β) Προσδιορισμός της συγκέντρωσης μιας ουσίας με διαφορά συνολικός αριθμόςθέσεις δέσμευσης και εναπομείνασες ελεύθερες θέσεις δέσμευσης. Σε αυτή την περίπτωση, η συγκέντρωση της αναλυόμενης ουσίας θα αυξηθεί και το καταγεγραμμένο σήμα θα μειωθεί, επομένως, σε αυτήν την περίπτωση, υπάρχει μια αντίστροφη εξάρτηση από το μέγεθος του καταγεγραμμένου σήματος.
5.2 Χαρακτηριστικά των εξαρτημάτων που χρησιμοποιούνται στην ELISA.
Ένζυμα.
Οι ετικέτες ενζύμων έχουν εξαιρετικά ισχυρό καταλυτικό αποτέλεσμα· ένα μόριο ενζύμου μπορεί να αντιδράσει με μεγάλο αριθμό μορίων υποστρώματος. Έτσι, ένα ένζυμο που υπάρχει σε αμελητέες ποσότητες μπορεί να ανιχνευθεί και να ποσοτικοποιηθεί από το σχηματισμό προϊόντων, την αντίδραση που καταλύει. Ένα άλλο πλεονέκτημα της χρήσης ενζύμων ως επισημάνσεων οφείλεται στην παρουσία στο μόριο πολυάριθμων λειτουργικών ομάδων (σουλφυδρύλ, καρβοξυλικά, υπολείμματα τυραζίνης, κ.λπ.), μέσω των οποίων μπορούν να προσκολληθούν ομοιοπολικά μόρια συνδέτη.
Οι ενζυματικοί δείκτες που χρησιμοποιούνται στην ELISA θα πρέπει να έχουν τις ακόλουθες ιδιότητες:
– υψηλή δραστηριότητα και σταθερότητα του ενζύμου υπό τις συνθήκες ανάλυσης, κατά την τροποποίηση και σε σύζευξη με αντισώματα ή άλλες πρωτεΐνες.
– η παρουσία ευαίσθητων υποστρωμάτων και η απλότητα της μεθόδου για τον προσδιορισμό των προϊόντων ή των υποστρωμάτων της ενζυμικής αντίδρασης.
– δυνατότητα προσαρμογής των συστημάτων υποστρώματος σε περαιτέρω ενίσχυση·
– η απουσία του ενζύμου και των αναστολέων του στη μελέτη βιολογικό υγρό.
Το ELISA μπορεί να χρησιμοποιήσει τουλάχιστον 15 διαφορετικά ένζυμα. Η υπεροξειδάση χρένου (HRP), η αλκαλική φωσφατάση (AP) και η β-D-γαλακτοσιδάση έχουν βρει τη μεγαλύτερη χρήση, σύμφωνα με τις παραπάνω απαιτήσεις. Και τα τρία είναι σταθερά και καταλύουν αντιδράσεις υψηλής ευαισθησίας. Επιπλέον, τα προϊόντα που προκύπτουν από τις αντιδράσεις που καταλύονται από αυτά τα ένζυμα, ανάλογα με το υπόστρωμα που χρησιμοποιείται, μπορούν να ανιχνευθούν όχι μόνο με χρωματομετρικές μεθόδους, αλλά και με μεθόδους φθορισμού. Άλλα ένζυμα χρησιμοποιούνται πολύ λιγότερο συχνά. Αυτό εξηγείται από τη χαμηλότερη ειδική δραστηριότητά τους σε σύγκριση με το HRP και το AP.
Υποστρώματα.
Η επιλογή του υποστρώματος καθορίζεται κατά κύριο λόγο από το ένζυμο που χρησιμοποιείται ως σήμα, καθώς η αντίδραση ενζύμου-υποστρώματος είναι εξαιρετικά ειδική.
Βασικές απαιτήσεις για το υπόστρωμα:
– εξασφάλιση υψηλής ευαισθησίας της μεθόδου για την ανίχνευση του ενζύμου στο συζυγές.
– σχηματισμός σαφώς καθορισμένων (για παράδειγμα, έγχρωμων) προϊόντων της αντίδρασης ενζύμου-υποστρώματος.
– το υπόστρωμα πρέπει να είναι ασφαλές, φθηνό, προσβάσιμο και βολικό στη χρήση.
Πιο συχνά χρησιμοποιούνται χρωμογόνα υποστρώματα, τα οποία όταν καταστραφούν σχηματίζουν μια έγχρωμη ουσία. Ελπιδοφόρα είναι η χρήση υποστρωμάτων υψηλής ενέργειας - φθορισμού, χημειοφωταύγειας. Η χρήση τέτοιων υποστρωμάτων καθιστά δυνατή θεωρητικά την αύξηση της ευαισθησίας του ELISA κατά δύο τάξεις μεγέθους.
σχηματισμός συζυγούς.
Ένα συζυγές είναι ένα αντιγόνο ή αντίσωμα σημασμένο με ενζυμική επισήμανση. Ο σχηματισμός συζυγούς είναι ένας από τους ορόσημαδιεξαγωγή ELISA.
Κατά το σχηματισμό του συζεύγματος, επιλέγεται μια τέτοια βέλτιστη μέθοδος για την εισαγωγή μιας ετικέτας ενζύμου έτσι ώστε και τα δύο συστατικά του συζεύγματος να διατηρούν τη βιολογική τους δράση: το ένζυμο - την ικανότητα αλληλεπίδρασης με το υπόστρωμα και το αντιγόνο ή το αντίσωμα - αντιγονικότητα και δέσμευση αντιγόνου δραστηριότητα, αντίστοιχα. Η παρουσία επισημασμένου, εξαιρετικά καθαρού αντιγόνου επιτρέπει τη χρήση ανταγωνιστικών μεθόδων. Σε αυτή την περίπτωση, η δραστηριότητα του συζεύγματος που δεν συνδέεται με ακινητοποιημένα αντισώματα μπορεί να μετρηθεί στο τελικό στάδιο, γεγονός που αποφεύγει τη διαδικασία πλύσης και κάνει την ανάλυση πιο βολική. Ωστόσο, τα αντιγόνα διαφέρουν ως προς τις φυσικοχημικές τους ιδιότητες και δομή, πράγμα που σημαίνει ότι είναι αδύνατο να αναπτυχθούν καθολικές μέθοδοι για τη λήψη ενός συζυγούς με ένα αντιγόνο. Σε αυτή την περίπτωση, η απόκτηση ενός συζυγούς αντιγόνου-ενζύμου είναι μια ξεχωριστή πρόκληση. Η παρασκευή επισημασμένων αντισωμάτων για ELISA είναι μεθοδικά πιο προσιτή.
Η σύζευξη ενός ενζύμου με ανοσοχημικά ενεργές πρωτεΐνες πραγματοποιείται με διάφορες μεθόδους: χημική διασύνδεση, ομοιοπολική σύνδεση ενός μορίου ενζύμου σε AG ή AT και σχηματισμός ενώσεων μέσω μη ομοιοπολικών δεσμών, για παράδειγμα, όταν η σύνδεση μεταξύ των ένζυμο και AG ή AT πραγματοποιείται ανοσολογικά, μέσω αλληλεπίδρασης αντιγόνου-αντισώματος.
Οι πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες ομοιοπολικές μέθοδοι για την παρασκευή συζυγών. Η επιλογή της αντίδρασης δέσμευσης καθορίζεται από τον τύπο των λειτουργικών ομάδων που είναι διαθέσιμες σε αυτά τα πρωτεϊνικά μόρια. Η γλουταραλδεΰδη, το υπεριωδικό νάτριο κ.λπ. χρησιμοποιούνται ως αντιδραστήρια που χρησιμοποιούνται για την εισαγωγή του ενζύμου σε μόρια αντιγόνου και αντισωμάτων.
Υπάρχουν μέθοδοι ενός σταδίου και δύο σταδίων για τη λήψη συζυγών με χρήση γλουταραλδεΰδης. Μπορούν να σχηματιστούν συζεύγματα διαφόρων μεγεθών με μειωμένη ενζυματική δραστηριότητα (15 - 60% του ελεύθερου ενζύμου). Το προκύπτον σύζευγμα μεγάλα μεγέθημπορεί να εμποδίσει στερικά τον προσδιορισμό της ελεγχόμενης ουσίας. Τα συζυγή σχετικά χαμηλού μοριακού βάρους αποτελούνται από ένα θραύσμα Fab και ένα μόριο ενζύμου.
Ως αποτέλεσμα μιας σύνθεσης δύο σταδίων, η οποία συνίσταται στη σταδιακή παρασκευή ενός ενζύμου που τροποποιήθηκε πρώτα με έναν παράγοντα διασύνδεσης, στην απομόνωσή του και στη συνέχεια στην επακόλουθη αλληλεπίδρασή του με ένα αντιγόνο (αντίσωμα), μόρια ενός σχηματίζεται ομοιογενής σύνθεση που περιέχει 1-2 μόρια ενζύμου ανά μόριο ανοσοσφαιρίνης και διατηρώντας υψηλή ενζυματική και ανοσολογική δράση. Ωστόσο, η ποσότητα τέτοιων συζυγών που σχηματίζονται είναι μικρή (για την υπεροξειδάση χρένου είναι 5-10%).
Η μέθοδος λήψης συζυγών ανοσοϋπεροξειδάσης, που βασίζεται στην οξείδωση του υδατανθρακικού συστατικού του ενζύμου με υπεριωδικό νάτριο (η δέσμευση της υπεροξειδάσης στο συζυγές φτάνει το 70-90% της αρχικής ποσότητας του ενζύμου), βρήκε τη μεγαλύτερη πρακτική εφαρμογή.
Ένα αξιόπιστο σύζευγμα πρέπει να έχει τις ακόλουθες ιδιότητες:
Υψηλό αντίσωμα τίγρη και υψηλή συγγένεια για το αντιγόνο, ώστε να μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε υψηλή αραίωση και έτσι να μειωθεί η μη ειδική δέσμευση.
Επαρκής εξειδίκευση στην εργασιακή εκτροφή.
Η επικράτηση των μονομερών μορφών έναντι των πολυμερών, γιατί Οι πολυμερείς μορφές τείνουν να προσκολλώνται μη ειδικά στο πλαστικό, με αποτέλεσμα υψηλό επίπεδο αντίδρασης στο υπόβαθρο.
Η βέλτιστη μοριακή αναλογία μεταξύ του ενζύμου και των αντισωμάτων (η βέλτιστη αναλογία είναι περίπου 1:1).
Επαρκής ενζυματική δραστηριότητα του συζυγούς. Αυτή η ιδιότητα καθορίζεται κυρίως από τις συνθήκες σύζευξης και την αναλογία μορίων ενζύμου και αντισώματος στο συζυγές.
5.3 Ετερογενείς μέθοδοι ELISA.
Οι ετερογενείς ELISA (ή ELISA στερεάς φάσης) περιλαμβάνουν μεθόδους στις οποίες η αναλυόμενη ουσία βρίσκεται σε δύο φάσεις. Για τον διαχωρισμό των συστατικών μιας ανοσοχημικής αντίδρασης, χρησιμοποιείται μια στερεή φάση (ένας αδιάλυτος φορέας, συνήθως πλαστικός) με αντισώματα ή ένα αντιγόνο ακινητοποιημένο πάνω του, το οποίο πλένεται σε κάθε στάδιο προκειμένου να αφαιρεθούν τα ενδιάμεσα προϊόντα των συστατικών που δεν αντέδρασαν.
Η ακινητοποίηση μπορεί να πραγματοποιηθεί με ομοιοπολική σύνδεση αντισωμάτων (αντιγόνα) σε ενεργοποιημένο φορέα χρησιμοποιώντας χημικές προσεγγίσεις, καθώς και με φυσική προσρόφηση αντισωμάτων (αντιγόνων) στην επιφάνεια στερεών πολυμερών (για παράδειγμα, πλάκες πολυστυρενίου). Στην ξένη βιβλιογραφία, αυτή η κατεύθυνση ονομάζεται δοκιμή ELISA ή ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία.
Μη ανταγωνιστική ELISA για ανίχνευση αντιγόνου χρησιμοποιώντας ενζυμικά επισημασμένα ειδικά αντισώματα και ακινητοποιημένα αντισώματα ως παράδειγμα.
Ένα διάλυμα που περιέχει το αναλυθέν αντιγόνο προστίθεται στον φορέα με ακινητοποιημένα αντισώματα. Κατά τη διάρκεια της επώασης, σχηματίζεται ένα ειδικό σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Στη συνέχεια, ο φορέας πλένεται από μη δεσμευμένα αντιγόνα και προστίθενται επισημασμένα αντισώματα - το συζυγές. Η ποσότητα του δεσμευμένου συζυγούς είναι ευθέως ανάλογη με την ποσότητα του αντιγόνου στο δείγμα δοκιμής. Μετά από μια δεύτερη επώαση και απομάκρυνση της περίσσειας του συζεύγματος, προστίθεται ένα χρωμογόνο υπόστρωμα για το ένζυμο που χρησιμοποιείται, το οποίο αλλάζει χρώμα υπό τη δράση του ενζύμου, δηλ. συμβαίνει μια ενζυματική αντίδραση με χρώση του διαλύματος στα φρεάτια. Ο βαθμός χρώσης είναι ευθέως ανάλογος με τον αριθμό των επισημασμένων με ένζυμο ειδικών αντισωμάτων, του ενζύμου και, κατά συνέπεια, του αντιγόνου δοκιμής. Οι μετρήσεις της οπτικής πυκνότητας του διαλύματος στα φρεάτια σε ένα συγκεκριμένο κύμα (ανάλογα με το υπόστρωμα που χρησιμοποιείται) πραγματοποιούνται με τη χρήση ειδικών φασματοφωτόμετρων προσαρμοσμένων για συσκευές ανάγνωσης μικροπλακών. Η συγκέντρωση του αντιγόνου στο δείγμα προσδιορίζεται ποσοτικά συγκρίνοντας τα αποτελέσματα με μια καμπύλη βαθμονόμησης της εξάρτησης της οπτικής πυκνότητας του διαλύματος από τη συγκέντρωση του τυπικού διαλύματος αντιγόνου.
Εικόνα 7
Δεδομένου ότι στο στάδιο της αναγνώρισης ενός συγκεκριμένου ανοσοσυμπλέγματος, το αντιγόνο συνδέεται με μόρια ακινητοποιημένων και επισημασμένων αντισωμάτων, στη βιβλιογραφία αυτή η μέθοδος ονομάζεται συχνά μέθοδος «σάντουιτς» (από το αγγλικό sandvich) ή μέθοδος ELISA δύο κέντρων (από η αγγλική ανάλυση δύο θέσεων).
Αυτή η μέθοδος μπορεί να χρησιμοποιηθεί μόνο για την ανάλυση αντιγόνων που έχουν τουλάχιστον δύο αντιγονικούς καθοριστές στην επιφάνειά τους. Είναι απαράδεκτο για την ανάλυση μεγάλου αριθμού μονοσθενών αντιγόνων (φάρμακα, φυτοφάρμακα κ.λπ.).
Κύριο πλεονέκτημα αυτή τη μέθοδο- υψηλή ευαισθησία. Το όριο ανίχνευσης ενώσεων με αυτή τη μέθοδο φτάνει σήμερα μια τιμή της τάξης των 10-21 mol, η οποία αντιστοιχεί στην ανίχνευση μόνο 600 μορίων της αναλυόμενης ουσίας στο δείγμα. Η μέγιστη ευαισθησία επιτυγχάνεται όταν κάθε ανοσολογική αντίδραση πραγματοποιείται σε κατάσταση ισορροπίας, η οποία επηρεάζει τη διάρκεια της ανάλυσης, η οποία είναι κατά μέσο όρο 4-6 ώρες. Μη ανταγωνιστική ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων χρησιμοποιώντας ως παράδειγμα δευτερογενή αντισώματα σημασμένα με ένζυμα και ακινητοποιημένα αντιγόνα.
Ο ορός που θα εξεταστεί προστίθεται στο ακινητοποιημένο αντιγόνο. Μετά την επώαση και την έκπλυση των μη δεσμευμένων αντισωμάτων, προστίθενται επισημασμένα δευτερεύοντα αντισώματα που είναι ειδικά για τα αναλυόμενα αντισώματα. Μετά από δευτερογενή επώαση και απομάκρυνση της περίσσειας επισημασμένων δευτερογενών αντισωμάτων, το περιεχόμενο της ετικέτας ενζύμου στον φορέα είναι ανάλογο με τη συγκέντρωση ειδικών αντισωμάτων στον ορό.
Αυτό το σχήμα είναι ένα από τα πιο κοινά ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων, καθώς επιτρέπει την ανίχνευση αντισωμάτων σε διαφορετικά αντιγόνα.
Ετερογενής ανταγωνιστική ELISA για ανίχνευση αντιγόνου χρησιμοποιώντας ως παράδειγμα επισημασμένο αντιγόνο και ακινητοποιημένα αντισώματα.
Ένα διάλυμα που περιέχει το αναλυόμενο αντιγόνο και μια σταθερή συγκέντρωση του συζυγούς αντιγόνου-ενζύμου προστίθεται στα αντισώματα που είναι ακινητοποιημένα στον φορέα. Μετά την επώαση, ο φορέας πλένεται από μη δεσμευμένο ελεύθερο και επισημασμένο αντιγόνο και καταγράφεται η ενζυματική δραστηριότητα στον φορέα, η οποία είναι αντιστρόφως ανάλογη με τη συγκέντρωση του αντιγόνου που προσδιορίζεται.
5.4 Μέθοδος ομογενούς ELISA.
Η ομογενής ενζυμική ανοσοδοκιμασία (HIFA) είναι ο πιο μεθοδικά απλός τύπος ELISA. Όταν ρυθμιστεί, ένας από τους συμμετέχοντες στην ανοσολογική αντίδραση (συνήθως ένα αντιγόνο χαμηλού μοριακού βάρους) επισημαίνεται με ένα ένζυμο και η πορεία σχηματισμού του συμπλόκου αντιγόνου-αντισώματος παρακολουθείται καταγράφοντας μια αλλαγή στη δραστηριότητα του ενζύμου.
Τέτοια διακοπή της ενζυματικής δραστηριότητας μπορεί να συμβεί είτε λόγω της χωρικής αποσύνδεσης του ενζύμου και του υποστρώματος, είτε λόγω διαμορφωτικών αλλαγών στο μόριο του ενζύμου που συνοδεύουν τον σχηματισμό του ανοσοσυμπλέγματος. Το GIFA έχει μια σειρά από σημαντικά πλεονεκτήματα σε σχέση με άλλες ανοσοχημικές μεθόδους. Πρώτον, υψηλή έκφραση (η όλη ανάλυση με χρήση GIFA διαρκεί λεπτά, ακόμη και κλάσματα λεπτών).
Ρύζι.8 Ομοιογενείς επιλογές ELISA(Α - η επίδραση της αποσύνδεσης του ενζύμου (F) και του υποστρώματος (C) λόγω στερικών εμποδίων κατά την αλληλεπίδραση του αντιγόνου (Ag) και του αντισώματος (Ab)· Β - η επίδραση μιας αλλαγής στη διαμόρφωση του ενζύμου κατά τον σχηματισμό του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος).
Δεύτερον, η μέθοδος έχει ένα μόνο στάδιο και δεν απαιτεί επίπονα και χρονοβόρα βήματα πλύσης. Και τέλος, τρίτον, η μέθοδος απαιτεί ελάχιστους όγκους (8-50 µl) και ποσότητες βιολογικού ή κλινικού δείγματος. Ωστόσο, η μέθοδος HIFA έχει ένα εξαιρετικά σημαντικό μειονέκτημα - μπορεί να χρησιμοποιηθεί για τη δημιουργία συστημάτων διαγνωστικών δοκιμών μόνο για αντιγόνα χαμηλού μοριακού βάρους. Μόνο σε αυτή την περίπτωση, το αντίσωμα, αλληλεπιδρώντας με το αντιγόνο, μπορεί να θωρακίσει ή να τροποποιήσει αποτελεσματικά το μόριο ενζύμου που σχετίζεται με αυτό το αντιγόνο. Σε αυτό το πλαίσιο (παρά τη φαινομενική απλότητα και τα προφανή πλεονεκτήματα έναντι άλλων μεθόδων), με βάση το HIFA, δημιουργήθηκαν διαγνωστικά κιτ για την ανίχνευση μόνο ορμονών, πεπτιδίων, φαρμακευτικών και ναρκωτικών ουσιών και ορισμένων πρωτεϊνών χαμηλού μοριακού βάρους.
5.5 "Σάντουιτς" - μια παραλλαγή του ELISA για την ανίχνευση αντιγόνων.
Τα αντιγόνα που ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας αυτήν την παραλλαγή ELISA πρέπει να έχουν πολλαπλούς επίτοπους που δεσμεύουν τα αντισώματα ή να έχουν επαναλαμβανόμενους, χωρικά διαχωρισμένους επίτοπους της ίδιας ειδικότητας.
Κατά τη διεξαγωγή αυτής της παραλλαγής της ELISA, πολύ ειδικά πολυ- ή μονοκλωνικά αντισώματα προσροφημένα στη στερεά φάση επωάζονται με το δείγμα δοκιμής. Μετά τη διαδικασία πλύσης, τα σημασμένα με ένζυμα αντισώματα (συζυγή) στο ίδιο αντιγόνο προστίθενται στα φρεάτια και στη συνέχεια διεξάγονται όλα τα άλλα στάδια της αντίδρασης. Η αποτελεσματικότητα του σχηματισμού ενός συγκεκριμένου συμπλόκου σε κάθε στάδιο της ανάλυσης εξαρτάται από τη σταθερά δέσμευσης της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος.