Vakcinacija se može okarakterisati na različite načine: genocid, istrebljenje populacije, veliki eksperimenti nad živom djecom, manipulacija masovna svijest. U svakom slučaju, zdrav pogled kroz ogledalo pokazuje da su zdravlje i vakcine nespojive stvari.
RGIV - novi proizvodi u prevenciji zaraznih bolesti. Primjer takve vakcine je vakcina protiv hepatitisa B. Naoružani metodama genetskog inženjeringa, medicinski biolozi imaju direktan pristup genomu. Sada je moguće ubaciti gene, izbrisati ih ili duplicirati.
Na primjer, gen iz jednog organizma može biti umetnut u genom drugog. Takav prijenos genetskih informacija moguć je čak i preko “evolucijske udaljenosti koja razdvaja ljude i bakterije”. Molekul DNK može se izrezati na pojedinačne fragmente pomoću specifičnih enzima i ovi fragmenti se mogu uvesti u druge ćelije.
Postalo je moguće inkorporirati gene drugih organizama u bakterijske ćelije, uključujući gene odgovorne za sintezu proteina. Na ovaj način u savremenim uslovima primaju značajnu količinu interferona, inzulina i drugih bioloških proizvoda. Na sličan način dobijena je i vakcina protiv hepatitisa B - gen virusa hepatitisa ugrađen je u ćeliju kvasca.
Kao i sve novo, a posebno genetski modifikovan lijek namijenjen parenteralnoj primjeni (opet, u velikim količinama i tri sata nakon rođenja djeteta!), i ova vakcina zahtijeva dugotrajna posmatranja – tj. mi pričamo o tome o istim “velikim pokusima... na djeci”.
Iz brojnih publikacija proizilazi: „Zapažanja postaju tačnija i vrednija ako se sprovode tokom masovnih kampanja imunizacije. U takvim kampanjama, veliki broj djeca. Pojava u ovom periodu grupe određenih patoloških sindroma ukazuje, po pravilu, na njihovu uzročnost sa vakcinacijom." Pojam određenog patološkog sindroma može uključivati kratkotrajnu temperaturu i kašalj, kao i potpunu ili djelomičnu paralizu ili mentalnu retardaciju.
Pored Engerix vakcine protiv hepatitisa B, južnokorejska vakcina protiv hepatitisa, koja se aktivno nameće našoj zemlji, proglašava se „jednako bezbednom i efikasnom“. Genetski modifikovane vakcine su "preventivni" tretman sa mnogo nepoznanica. Naša zemlja nije u mogućnosti provjeriti sigurnost ovih proizvoda zbog nedostatka odgovarajućih eksperimentalnih objekata. Ne možemo kvalitetno kontrolisati kupljene vakcine niti stvoriti uslove za pripremu bezbednih sopstvenih vakcina. Rekombinantno testiranje lijekovi- visokotehnološki eksperiment koji zahtijeva ogromne troškove. Jao, u tom pogledu smo jako daleko od nivoa naprednih laboratorija u svijetu i praktično smo potpuno neusmjereni na kontrolu takvih proizvoda. S tim u vezi, u Rusiji (i Ukrajini) se registruje sve što nije prošlo klinička ispitivanja kod stranih proizvođača ovih vakcina, ili je prošlo testove, ali u nedovoljnom obimu... Otuda lavinski broj vakcina iz raznih bunara -željnici koji "pokušavaju da pomognu Rusiji" i donose nam ne sutrašnje ili današnje tehnologije, već prekjučerašnje - "u suštini, otpad od svojih moderna proizvodnja, ili one vakcine koje treba proučavati u “velikim eksperimentima na djeci”. Češće se to naziva "velikim zapažanjima", ali zadatak je jedan - eksperimenti na našoj djeci!
Činilo bi se besmislenim i nemoralnim dokazivati opasnost od živinih soli za dojenčad, kada su posljedice njihovog djelovanja na organizam odrasle osobe nadaleko poznate.
Podsjetimo da su živine soli opasnije od same žive. Međutim, domaći DTP vakcina, koji sadrži 100 µg/ml mertiolata (organoživine soli) i 500 µg/ml formalina (najjači mutagen i alergen) koristi se oko 40 godina. Alergena svojstva formaldehida uključuju: angioedem, urtikariju, rinopatiju ( hronično curenje iz nosa), astmatični bronhitis, bronhijalna astma, alergijski gastritis, holecistitis, kolitis, eritem i pukotine na koži, itd. Sve to pedijatri bilježe već više od 40 godina, ali se statistika krije iza željeznih vrata od šire javnosti. Hiljade djece pate decenijama, ali medicinske službenike nije briga.
Nema podataka o dejstvu mertiodjata i formalina, NIKO NIJE PROUČAVAO OVAJ KONGLOMERAT na mlade životinje u smislu trenutnih reakcija i dugoročne posledice; recimo za tinejdžere. Firme UPOZORAVAJU, stoga, ne snose nikakvu odgovornost za postupke naših vakcinatora i kontrolora! Tako se u našoj zemlji nastavljaju dugogodišnja „velika ispitivanja” nad našom djecom s razvojem različitih patoloških sindroma. Svakim danom sve više nevinih beba (one koje su izbjegle abortus) bacaju se u ovu paklenu mašinu za mljevenje mesa, pridružujući se redovima invalidne djece i njihovih nesretnih roditelja, nesvjesnih pravog uzroka patnje svoje djece. Pažljivo pripremana i vođena „kampanja zastrašivanja stanovništva“ epidemijama difterije, tuberkuloze i gripa s jedne strane i mjerama zabrane prema vrtićima i školama ne ostavljaju šansu roditeljima.
NE MOŽEMO DOZVOLITI DA SAMO FIRME I NISKO KOMPETENTNI VAKCINATORI KORPORATIVNO ODLUČUJU O SUDBINI NAŠE DJECE.
S obzirom da se BCG vakcinacija novorođenčadi ne sprovodi nigde drugde u svetu, aktivnosti koje se provode u Rusiji i Ukrajini su eksperiment, jer „procenjuju efikasnost kombinovane imunizacije novorođenčadi protiv hepatitisa B i protiv tuberkuloze na pozadini masovnosti. imunizacija.” Neprihvatljiv stres za organizam novorođenčadi! Ovaj eksperiment, „velika vakcinacija za otkrivanje patoloških sindroma“, provodi se u državnim razmerama, koja je obezbedila neograničen broj sopstvene dece za takva posmatranja... bez obaveštavanja roditelja o tome! Osim toga, “patološki sindromi” se mogu pojaviti godinu dana kasnije, pet godina ili mnogo kasnije... Postoje dokazi da ova vakcina može izazvati cirozu jetre nakon 15-20 godina.
Koje komponente su uključene u ENGERIX (vakcinu protiv hepatitisa B)?
1. Osnova lijeka je "modificirana" pekarski kvasac, “naširoko se koristi u proizvodnji kruha i piva.” Riječ “genetski modificirana” ovdje očito nedostaje – očito zbog činjenice da je ova kombinacija već prilično uplašila stanovništvo na primjeru soje, krompira i kukuruza uvezenih iz inostranstva. Genetski modificirani proizvod kombinuje svojstva sastavnih sastojaka koji, kada se koriste, dovode do nepredvidivih posljedica. Šta su genetski inženjeri sakrili u ćeliji kvasca osim virusa hepatitisa B? Možete dodati gen virusa AIDS-a ili gen bilo koje bolesti raka.
2. Aluminijum hidroksid. Ovdje treba naglasiti da se već dugi niz decenija ne preporučuje (!) upotreba ovog adjuvansa za vakcinaciju djece.
3. Tiomerosal je mertiolat (organoživa so), čije štetno dejstvo na centralni nervni sistem je poznat od davnina i spada u kategoriju pesticida.
4. Polisorbent (nije dešifrovan).
http://www.ligis.ru/librari/3379.htm
Molekularne vakcine.
AG je prisutan u molekularnom obliku ili u obliku fragmenata svojih molekula koji određuju specifičnost antigenosti, odnosno u obliku epitopa, determinanti.
Antigeni u molekularnom obliku se dobijaju:
a) u procesu biosinteze tokom uzgoja prirodnih kao i rekombinantnih sojeva bakterija i virusa i
b) hemijska sinteza (radno intenzivnija i ima ograničene mogućnosti u poređenju sa biosintezom.
Tipičan primjer molekularnih antigena proizvedenih biosintezom od strane prirodnih sojeva je su toksoidi(tetanus, difterija, botulinum, itd.), dobijeni iz neutralizovanih toksina. Koristi se u medicinskoj praksi molekularna vakcina v. Vir. Hepatitis B, dobijen iz Ag virusa proizvedenog rekombinantnim sojem kvasca.
Genetski modifikovane vakcine. Genetski modifikovane vakcine sadrže patogene Ags dobijene metodama genetskog inženjeringa i uključuju samo visoko imunogene komponente koje doprinose stvaranju zaštitni imunitet
Postoji nekoliko opcija za genetski stvaranje konstruisane vakcine.
Uvođenje gena virulencije u avirulentne ili slabo virulentne mikroorganizme.
Uvođenje gena virulencije u nepovezane mikroorganizme sa naknadnom izolacijom Ag i njegovom upotrebom kao imunogenom.
Umjetno uklanjanje gena virulencije i korištenje modificiranih organizama u obliku korpuskularnih vakcina.
Vektorske (rekombinantne) vakcine
Vakcine dobivene metodama genetskog inženjeringa. Suština metode: geni virulentnog mikroorganizma odgovornog za sintezu zaštitnih antigena ubacuju se u genom bezopasnog mikroorganizma (npr. Coli), koji, kada se uzgaja, proizvodi i akumulira odgovarajući antigen.
Rekombinantne vakcine – za proizvodnju ovih vakcina koristi se rekombinantna tehnologija koja integriše genetski materijal mikroorganizma u ćelije kvasca koje proizvode antigen. Nakon kultivacije kvasca, iz njega se izoluje željeni antigen, pročišćava i priprema se vakcina. Primjer takvih vakcina je vakcina protiv hepatitisa B (Euvax B).
Vakcine se uglavnom koriste za aktivnu specifičnu prevenciju, ponekad i za liječenje bolesti.
Dječak Kolya I., 7 godina, postao je hirovit, odbija jesti, ima nemiran san, temperatura 38,5. Drugog dana nakon bolesti pedijatar je prilikom pregleda djeteta otkrio uvećanu desnu parotidnu žlijezdu. Koža iznad otoka je napeta, ali nije upaljena. Doktor je postavio dijagnozu Parotitis» Navedite karike u lancu epidemije: izvor, mogući načini transferi. Koje laboratorijske dijagnostičke metode treba koristiti za potvrdu dijagnoze? Koje lijekove treba koristiti za prevenciju?
br. 43 Vakcine za genetski inženjering. Principi dobijanja, primjene.
Genetski modifikovane vakcine su lekovi dobijeni korišćenjem biotehnologije, koja se u suštini svodi na genetsku rekombinaciju.
Prvo se dobija gen koji se mora integrisati u genom primaoca. Mali geni se mogu dobiti pomoću hemijska sinteza. Da bi se to postiglo, dešifruje se broj i redoslijed aminokiselina u proteinskom molekulu tvari, zatim se iz ovih podataka određuje redoslijed nukleotida u genu, nakon čega slijedi kemijska sinteza gena.
Velike strukture koje je prilično teško sintetizirati dobivaju se izolacijom (kloniranjem), ciljanom eliminacijom ovih genetskih formacija korištenjem restrikcijskih enzima.
Ciljni gen dobijen jednom od metoda spaja se sa enzimima na drugi gen, koji se koristi kao vektor za ubacivanje hibridnog gena u ćeliju. Kao vektori mogu poslužiti plazmidi, bakteriofagi, ljudski i životinjski virusi. Ekspresirani gen se ubacuje u bakterijski ili životinjska ćelija, koji počinje sintetizirati prethodno neobičnu supstancu koju kodira eksprimirani gen.
Kao primaoci ekspresiranog gena najčešće se koriste E. coli, B. subtilis, pseudomonade, kvasac, virusi, neki sojevi su sposobni da pređu na sintezu strane supstance do 50% svojih sintetičkih sposobnosti - ovi sojevi se nazivaju superproizvođači.
Ponekad se genetski modifikovanim vakcinama dodaje adjuvans.
Primjeri takvih vakcina su vakcina protiv hepatitisa B (Engerix), sifilisa, kolere, bruceloze, gripe i bjesnila.
Postoje određene poteškoće u razvoju i primjeni:
- dugo vrijeme genetski modifikovani lekovi tretirani su sa oprezom.
- značajna sredstva se troše na razvoj tehnologije za dobijanje vakcine
- pri dobijanju lijekova ovom metodom postavlja se pitanje istovjetnosti dobivenog materijala s prirodnom tvari.
Povezani i kombinovani preparati vakcine. Prednosti. Vakcinska terapija.
Povezane vakcine su preparati koji uključuju nekoliko različitih antigena i omogućavaju imunizaciju protiv više infekcija istovremeno. Ako lijek sadrži homogene antigene, tada se takva povezana vakcina naziva polivakcina. Ako se povezani lijek sastoji od različitih antigena, onda je preporučljivo nazvati ga kombiniranom vakcinom.
Moguća je i kombinovana imunizacija, kada se više vakcina istovremeno primenjuje na različite delove tela, na primer, protiv velikih boginja (kožno) i kuge (potkožno).
Primjer polivakcine je živa polio vakcina koja sadrži atenuirane sojeve virusa poliomijelitisa tipa I, II, III. Primjer kombinovana vakcina je DTP, koji uključuje inaktiviranu korpuskularnu vakcinu protiv pertusisa, difteriju i tetanusni toksoid.
Kombinovane vakcine se koriste u teškim protivepidemijskim situacijama. Njihovo djelovanje je zasnovano na sposobnosti imunološki sistem reaguju na nekoliko antigena istovremeno.
Genetski inženjering je eksperimentalna nauka koja proučava obrasce in vitro konstrukcije i ponašanja funkcionalno aktivnih rekombinantnih molekula DNK u ćeliji primaocu.
Predmet istraživanja genetskog inženjeringa su geni – segmenti DNK koji kodiraju sintezu određenih proteina.
Princip stvaranja genetski modificiranih cjepiva je da se gen koji nas zanima (odgovoran za sintezu imunološkog proteina virusa) „isecuje“ iz DNK virusa pomoću enzima (restrikcionih enzima) i ubacuje, koristeći enzime. (ligaze), u DNK vektora (na primjer, u plazmid E. coli je autonomna kružna DNK od 4-6 hiljada parova nukleotida, sposobna da se razmnožava u ćelijama E. coli). Zatim se ova rekombinantna DNK unosi u ćelije E. coli, u kojoj se rekombinantna DNK umnožava (replicira) i dolazi do ekspresije integrisanog gena, odnosno sinteze odgovarajućeg proteina (kodiranog integrisanim genom virusa).
Bakterijske ćelije E. coli se kultivišu u hranljivom mediju i „proizvode“ imunogeni protein virusa koji se izoluje i nakon odgovarajućeg prečišćavanja koristi kao materijal za vakcinu. Međutim, treba napomenuti da mnogi virusni proteini koji se uspješno sintetiziraju u mikroorganizmima imaju vrlo nisku imunogenu aktivnost. Razlog za to su posebnosti formiranja strukture virusnih proteina. U pravilu su glikozilirani i imaju složenu tercijarnu ili kvartarnu strukturu. Tako se hemaglutinin virusa influence nalazi u virionu u obliku trimera, koji se formira od monomernih polipeptida u životinjskim stanicama. Nije moguće dobiti takvu funkcionalno aktivnu strukturu hemaglutinina in vitro. Imunogenost hemaglutinina u virionu je nekoliko hiljada puta veća od one monomernog polipeptida sintetiziranog u bakterijama.
Prilikom proizvodnje genetski modifikovanih vakcina, pored plazmida, kao vektori se koriste fagi, kvasac i životinjski virusi (virus vakcinije, adenovirusi, bakulovirusi i herpesvirusi).
Najveći efekat je postignut sa virusom vakcinije koji se koristi kao vektor. Ovaj virus ima veliki genom (oko 187 hiljada parova baza). Iz njega je moguće ukloniti značajan dio (oko 30 hiljada parova nukleotida), koji nije od vitalnog značaja za reprodukciju ovog virusa u ćelijama, a na njegovo mjesto ubaciti strane gene virusa protiv kojih se proizvodi vakcina. Rezultirajuća rekombinantna DNK je sposobna da se umnožava u tijelu vakcinisanog i izaziva stvaranje imuniteta ne samo protiv velikih boginja, već i protiv virusa čiji je gen ugrađen u njegov genom. Upotreba virusa vakcinije kao vektora za vakcinaciju ima niz prednosti: sposobnost razmnožavanja u životinjskim ćelijama mnogih vrsta; eksprimirati više gena; induciraju humoralni i ćelijski imunitet s; termička stabilnost; ekonomična proizvodnja i jednostavnost upotrebe. Prethodno identificirani nedostaci virusa vakcinije povezani s reaktogenošću su u velikoj mjeri eliminirani genetskom manipulacijom. Mogućnost uključivanja nekoliko gena koji kodiraju odgovarajuće imunogene omogućavaju simultanu vakcinaciju životinja protiv nekoliko virusnih bolesti. Međutim, mora se imati na umu da za osobe koje su već imune na virus vakcinije, vakcinacija rekombinantnim virusima ne daje efekta zbog nedostatka njegovog preživljavanja.
IN poslednjih godina preventivni lijekovi su dobijeni iz rekombinantnog soja virusa vakcinije koji sadrži gene koji kodiraju površinske glikoproteine virusa gripe, bjesnila, respiratornog trakta, Aujeszkyjeve bolesti, infektivnog goveđeg rinotraheitisa itd.
Ako pronađete grešku, označite dio teksta i kliknite Ctrl+Enter.
Vakcinacija pomaže primaocu da razvije imunitet na patogene mikroorganizme i na taj način ga štiti od infekcije. Kao odgovor na oralnu ili parenteralnu primjenu vakcine, tijelo domaćina proizvodi antitijela na patogeni mikroorganizam, koja pri naknadnoj infekciji dovode do njegove inaktivacije (neutralizacije ili smrti), blokiraju njegovu proliferaciju i sprječavaju razvoj bolesti.
Efekat vakcinacije otkrio je prije više od 200 godina - 1796. - doktor Edward Jenner. Eksperimentalno je dokazao da osoba koja je imala kravlje boginje nije jako ozbiljna bolest goveda postaje imuna na male boginje. Velike boginje su veoma zarazna bolest sa visokom stopom smrtnosti; čak i ako pacijent ne umre, često razvija razne deformitete, mentalnih poremećaja i slepilo. Jenner je javno cijepio 8-godišnjeg dječaka Jamesa Phippsa s kravljim boginjama, koristeći eksudat iz pustule kravljih boginja, a zatim određeno vrijeme dva puta zarazio dijete gnojem iz pacijentove pustule male boginje. Sve manifestacije bolesti bile su ograničene na crvenilo na mjestu uboda, koje je nestalo nakon nekoliko dana. Vakcine ovog tipa nazivaju se Genera vakcine. Međutim, ova metoda vakcinacije nije dobila mnogo razvoja. To se objašnjava činjenicom da u prirodi nije uvijek moguće pronaći niskopatogeni analog patogenog mikroorganizma pogodnog za pripremu cjepiva.
Metoda vakcinacije koju je predložio Pasteur pokazala se obećavajućom. Primljene su Pasteur vakcine na bazi ubijenih (inaktiviranih) patogenih mikroorganizama ili živih, ali ne virulentnih ( oslabljen) sojeva. Da bi se to postiglo, soj divljeg tipa se uzgaja u kulturi, pročišćava, a zatim se inaktivira (ubija) ili slabi (oslabi) tako da proizvodi imuni odgovor koji je dovoljno efikasan protiv normalnog virulentnog soja.
Za imunoprofilaksiju nekih bolesti, poput tetanusa ili difterije, prisustvo samih bakterija u vakcini nije neophodno. Činjenica je da glavni razlog Ove bolesti su uzrokovane patogenim toksinima koje oslobađaju ove bakterije. Naučnici su otkrili da su ovi toksini inaktivirani formaldehidom i da se mogu bezbedno koristiti u vakcinama. Kada imuni sistem naiđe na vakcinu koja sadrži siguran toksoid, proizvodi antitijela za borbu protiv pravog toksina. Ove vakcine se zovu toksoidi.
Ranije takav zarazne bolesti, poput tuberkuloze, malih boginja, kolere, trbušnog tifusa, bubonske kuge i dječje paralize, bile su prava pošast za čovječanstvo. Pojavom vakcina, antibiotika i uvođenjem preventivnih mjera, ove epidemijska oboljenja uspeo da to stavi pod kontrolu. Nažalost, vakcine protiv mnogih bolesti ljudi i životinja još uvijek ne postoje ili su nedjelotvorne. Danas više od 2 milijarde ljudi širom svijeta pati od bolesti koje se mogu spriječiti vakcinacijom. Vakcine takođe mogu biti korisne u prevenciji “novih” bolesti koje se stalno pojavljuju (na primjer, AIDS).
Uprkos značajnom napretku u stvaranju vakcina protiv bolesti kao što su rubeola, difterija, veliki kašalj, tetanus i dečija paraliza, proizvodnja i upotreba klasičnih "Pasterovih" vakcina suočava se sa brojnim ograničenjima.
1. Ne mogu se uzgajati svi patogeni mikroorganizmi, tako da nisu stvorene vakcine za mnoge bolesti.
2. Za dobijanje životinjskih i ljudskih virusa potrebna je skupa kultura životinjskih ćelija.
3. Titar životinjskih i ljudskih virusa u kulturi i brzina njihove reprodukcije su često vrlo niski, što povećava troškove proizvodnje vakcine.
4. Mere predostrožnosti moraju se striktno poštovati kada se proizvode vakcine iz visoko patogenih mikroorganizama kako bi se spriječila infekcija osoblja.
5. Ako je proces proizvodnje poremećen, neke serije vakcine mogu sadržavati žive ili nedovoljno oslabljene virulentne mikroorganizme, što može dovesti do nenamjernog širenja infekcije.
6. Oslabljeni sojevi mogu revertirati (vratiti virulentnost), pa je potrebno stalno pratiti njihovu virulentnost.
7. Neke bolesti (kao što je AIDS) ne mogu se spriječiti tradicionalnim vakcinama.
8. Većina moderne vakcine imaju ograničen rok trajanja i ostaju aktivni samo na niskim temperaturama, što otežava njihovu upotrebu u zemljama u razvoju.
U posljednjoj deceniji, razvojem tehnologije rekombinantne DNK, postalo je moguće stvoriti novu generaciju vakcina koje nemaju nedostatke tradicionalnih vakcina. Glavni pristupi stvaranju novih vrsta vakcina zasnovanih na metodama genetskog inženjeringa su sledeći:
1. Modifikacija genoma patogenog mikroorganizma. Rad u ovoj oblasti odvija se u dva glavna pravca:
A) Patogeni mikroorganizam se modificira brisanjem (uklanjanjem) iz njegovog genoma gena odgovornih za virulenciju (geni koji kodiraju sintezu bakterijskih toksina). Zadržava se sposobnost izazivanja imunološkog odgovora. Takav mikroorganizam se može bezbedno koristiti kao živa vakcina, od uzgoja u čista kultura isključuje mogućnost spontane restauracije izbrisanog gena.
Primjer ovog pristupa je nedavno razvijena vakcina protiv kolere zasnovana na rekombinantnom soju V.cholerae, u kojoj je uklonjena nukleotidna sekvenca koja kodira sintezu enterotoksin, odgovorni za patogeni efekat. Trenutno se izvode kliničkim ispitivanjima Efikasnost ovog oblika kao vakcine protiv kolere još nije dala jasan rezultat. Vakcina pruža gotovo 90% zaštite od kolere, ali su neki subjekti iskusili nuspojave, tako da je potrebno dalje usavršavanje.
B) Drugi način da se dobiju nepatogeni sojevi pogodni za stvaranje živih vakcina na njihovoj osnovi je uklanjanje iz genoma patogenih bakterija hromozomskih regija odgovornih za neke nezavisne vitalne funkcije. važne funkcije(metabolički procesi), na primjer sinteza određenih dušičnih baza ili vitamina. U ovom slučaju, bolje je izbrisati najmanje dva takva područja, jer je vjerojatnost njihovog istovremenog obnavljanja vrlo mala. Pretpostavlja se da će soj sa dvostrukom delecijom imati ograničen proliferativni kapacitet (ograničen životni vijek u imuniziranom organizmu) i smanjenu patogenost, ali će osigurati razvoj imunološkog odgovora. Vakcina protiv salmoneloze i lišmanijaze je sada stvorena i prolazi kroz klinička ispitivanja koristeći sličan pristup.
2. Upotreba nepatogenih mikroorganizama sa ugrađenim ćelijski zid specifičnih imunogenih proteina. Metodama genetskog inženjeringa stvaraju se živi nepatogeni sistemi za prijenos pojedinačnih antigenskih mjesta (epitopa) ili cijelih imunogenih proteina nepovezanog patogenog organizma. Jedan od pristupa koji se koristi za stvaranje ovakvih vakcina je postavljanje proteina - antigena patogene bakterije na površinu žive nepatogene bakterije, budući da u ovom slučaju ima veću imunogenost nego kada je lokalizovana u citoplazmi. Mnoge bakterije imaju flagele napravljene od proteina flagelina; Pod mikroskopom izgledaju kao niti koje se protežu iz bakterijske ćelije. Ako napravite da flagele nepatogenog mikroorganizma nose specifičan epitop (proteinski molekul) patogenog mikroorganizma, tada će biti moguće potaknuti proizvodnju zaštitnih antitijela. Cjepivo stvoreno na bazi takvih rekombinantnih nepatogenih mikroorganizama doprinijet će razvoju izraženog imunološkog odgovora na patogeni mikroorganizam.
Upravo to je pristup korišten za stvaranje vakcina protiv kolere i tetanusa.
3. Stvaranje podjediničnih (peptidnih) vakcina. Ako neki patogeni mikroorganizmi ne rastu u kulturi, onda na njihovoj osnovi nije moguće stvoriti klasičnu Pasteurovu vakcinu. Međutim, moguće je izolirati, klonirati i ekspresirati u alternativnom nepatogenom domaćinu (npr. E. coli ili stanične linije sisara) geni odgovorni za proizvodnju određenih antigenskih proteina, a zatim izoluju i koriste te proteine nakon pročišćavanja kao "podjedinične" vakcine.
Podjedinične vakcine imaju svoje prednosti i nedostatke. Prednosti su što je lijek, koji sadrži samo pročišćeni imunogeni protein, stabilan i siguran, njegova hemijska svojstva su poznata, ne sadrži dodatne proteine i nukleinske kiseline, što bi moglo izazvati neželjene nuspojave kod domaćina. Nedostaci su što je pročišćavanje specifičnog proteina skupo i izolovani protein može imati drugačiju konformaciju od one koju ima in situ(tj. kao dio virusnog kapsida ili omotača), što može dovesti do promjene njegovih antigenskih svojstava. Odluka o proizvodnji podjedinične vakcine se donosi uzimajući u obzir sve relevantne biološke i ekonomske faktore. Trenutno u različite faze Vakcine protiv herpesa, slinavke i šapa i tuberkuloze su u razvoju i kliničkim ispitivanjima.
4. Kreiranje „vektorskih vakcina“. Ove vakcine se suštinski razlikuju od drugih vrsta vakcina po tome što se imunogeni proteini ne uvode gotovi u imunizovani organizam sa komponentama vakcine (ćelije mikroorganizama i produkti njihovog uništenja), već se sintetiziraju direktno u njemu, zbog ekspresije geni koji ih kodiraju, a koji se zatim prenose u imunizirani organizam pomoću posebnih vektora. Najrasprostranjenije „vektorske vakcine” baziraju se na virusu kravljih boginja (VSV), kao i nizu drugih oportunističkih ili nisko patogenih virusa (adenovirus, poliovirus, vodene kozice). VKO je prilično dobro proučavan, njegov genom je potpuno sekvencioniran. VKO DNK se replicira u citoplazmi inficiranih ćelija, a ne u jezgru, zbog prisustva virusnih gena za DNK polimerazu, RNA polimerazu i enzima koji provode kapiranje, metilaciju i poliadenilaciju mRNA. Stoga, ako se strani gen ubaci u VKO genom tako da je pod kontrolom VKO promotora, tada će biti eksprimiran nezavisno od regulatornih i enzimskih sistema domaćina.
Region Istočnog Kazahstana ima širok raspon domaćini (kralježnjaci i beskičmenjaci), ostaje održiv dugi niz godina nakon liofilizacije (isparavanje vode smrzavanjem) i nema onkogena svojstva, te je stoga vrlo pogodan za stvaranje vektorskih vakcina.
Vektorske VKO vakcine omogućavaju imunizaciju protiv više bolesti odjednom. Da biste to učinili, možete koristiti rekombinantni VKO, koji nosi nekoliko gena koji kodiraju različite antigene.
Ovisno o korištenom VKO promotoru, strani protein se može sintetizirati u ranoj ili kasnoj fazi infektivnog ciklusa, a njegova količina je određena snagom promotora. Kada se nekoliko stranih gena ubaci u jednu VKO DNK, svaki od njih se stavlja pod kontrolu posebnog VKO promotora kako bi se spriječila homologna rekombinacija između različitim oblastima virusna DNK, što može dovesti do gubitka integrisanih gena.
Živa rekombinantna vektorska vakcina ima niz prednosti u odnosu na nežive virusne i podjedinične vakcine:
1) formiranje i aktivnost autentičnog antigena se praktično ne razlikuje od one tokom normalne infekcije;
2) virus se može replicirati u ćeliji domaćinu i povećati količinu antigena, što aktivira proizvodnju antitijela od strane B stanica ( humoralni imunitet) i stimuliše proizvodnju T ćelija (ćelijski imunitet);
3) integracija nekoliko gena antigenskih proteina u genom VKO dodatno smanjuje njegovu virulentnost.
Nedostatak žive rekombinantne virusne vakcine je to što se kod vakcinisanja pojedinaca sa smanjenim imunološki status(na primjer, pacijenti sa AIDS-om) mogu razviti teške virusna infekcija. Da bi se riješio ovaj problem, gen koji kodira ljudski interleukin-2 može se ubaciti u virusni vektor, koji stimulira odgovor T-ćelija i ograničava proliferaciju virusa.
Neželjene nuspojave proliferacije VKO mogu se spriječiti inaktivacijom virusa nakon vakcinacije. U tu svrhu stvoren je virus osjetljiv na interferon (divlji tip VKO je relativno otporan na njegovo djelovanje), čija se proliferacija može regulisati u slučaju komplikacija koje nastanu tokom vakcinacije.
Vektor baziran na živom atenuiranom poliovirusu (njegova istraživanja tek počinju) atraktivan je jer omogućava oralnu vakcinaciju. Takve „sluzne“ vakcine (vakcine čije se komponente vezuju za receptore koji se nalaze u plućima ili gastrointestinalnom traktu) pogodne su za prevenciju većine razne bolesti: kolera, tifusne groznice, gripa, upala pluća, mononukleoza, bjesnilo, AIDS, lajmska bolest. Ali prije bilo kakvog kliničkog ispitivanja bilo kojeg naizgled bezopasnog virusa kao sistema isporuke i ekspresije odgovarajućeg gena, potrebno je osigurati da je istinski bezbedan. Na primjer, najčešće korišteni VKO uzrokuje komplikacije kod ljudi s učestalošću od približno 3,0-10 -6. Stoga je poželjno ukloniti sekvence odgovorne za virulenciju iz genoma rekombinantnog virusa koji je namijenjen za vakcinaciju ljudi.
Vakcine za životinje imaju manje stroge zahtjeve, pa su prve vakcine dobivene tehnologijom rekombinantne DNK bile vakcine protiv slinavke i šapa, bjesnila, dizenterije i proljeva prasadi. Stvaraju se i druge vakcine za životinje, a uskoro će se pojaviti i rekombinantne vakcine namenjene ljudima.
Još jedan obećavajući pravac u stvaranju nove generacije cjepiva je korištenje posebno stvorenih transgenih biljaka. Ako se geni koji kodiraju sintezu imunogenih proteina ili pojedinačni antigenski epitopi različitih patogenih mikroorganizama umetnu u genom ovih biljnih virusa, tada će biljke početi da ih eksprimiraju. Nakon konzumiranja takvih biljaka, u sluznici ljudskog želuca i crijeva će se proizvoditi odgovarajuća antitijela (tzv. mukozna antitijela). U bananama je, na primjer, bilo moguće eksprimirati antigen Vibrio cholerae i antigene virusa hepatitisa B, a takve vakcine već prolaze klinička ispitivanja. Antigeni dekarboksilaze glutaminske kiseline su izraženi u krompiru i imaju antidijabetički efekat u eksperimentima na životinjama. Pretpostavlja se da bi takve "banane vakcine" u bliskoj budućnosti mogle ozbiljno da konkurišu i tradicionalnim i genetski modifikovanim vakcinama.