Mga function ng complement system. Ang sistemang pandagdag: isang pangkalahatang-ideya

Complement system

Membrane attack complex na nagdudulot ng cell lysis.

Complement system- kumplikado kumplikadong mga protina patuloy na naroroon sa dugo. Ito ay isang cascade system ng proteolytic enzymes, na idinisenyo para sa humoral na proteksyon ng katawan mula sa pagkilos ng mga dayuhang ahente, ito ay kasangkot sa pagpapatupad ng immune response ng katawan. Ito ay isang mahalagang bahagi ng parehong likas at nakuha na kaligtasan sa sakit.

Kasaysayan ng konsepto

Sa pagtatapos ng ika-19 na siglo, natagpuan na ang serum ng dugo ay naglalaman ng isang tiyak na "factor" na may mga katangian ng bactericidal. Noong 1896, ipinakita ng isang batang Belgian na siyentipiko na si Jules Bordet, na nagtrabaho sa Pasteur Institute sa Paris, na mayroong dalawang magkaibang sangkap sa suwero, ang pinagsamang pagkilos na humahantong sa lysis ng bakterya: isang thermostable factor at isang thermolabile (nawawala ang mga katangian nito kapag ang serum ay pinainit) factor. Ang thermostable factor, tulad ng nangyari, ay maaari lamang kumilos laban sa ilang mga microorganism, habang ang thermolabile factor ay may nonspecific na aktibidad na antibacterial. Nang maglaon, pinangalanan ang thermolabile factor pandagdag. Ang terminong "complement" ay likha ni Paul Ehrlich noong huling bahagi ng 1890s. Si Ehrlich ang may-akda ng humoral theory of immunity at nagpakilala ng maraming termino sa immunology, na kalaunan ay naging pangkalahatang tinanggap. Ayon sa kanyang teorya, ang mga cell na responsable para sa mga reaksyon ng immune, may mga receptor sa ibabaw na nagsisilbing pagkilala sa mga antigen. Tinatawag na natin ngayon ang mga receptor na ito na "antibodies" (ang batayan ng variable na receptor ng mga lymphocytes ay isang antibody ng klase ng IgD na nakakabit sa lamad, mas madalas na IgM. Ang mga antibodies ng iba pang mga klase sa kawalan ng kaukulang antigen ay hindi nakakabit sa mga selula). Ang mga receptor ay nagbubuklod sa isang tiyak na antigen, gayundin sa sangkap na antibacterial na walang init ng serum ng dugo. Tinawag ni Ehrlich ang thermolabile factor na "complement" dahil ang bahaging ito ng dugo ay "nagsisilbing complement" sa mga selula ng immune system.

Naniniwala si Ehrlich na maraming mga pandagdag, na ang bawat isa ay nagbubuklod sa sarili nitong receptor, tulad ng isang receptor na nagbubuklod sa isang partikular na antigen. Sa kaibahan, nagtalo si Bordet na mayroon lamang isang uri ng "complement". Sa simula ng ika-20 siglo, nalutas ang hindi pagkakaunawaan pabor kay Bordet; ito ay lumabas na ang pandagdag ay maaaring maisaaktibo sa pakikilahok ng mga tiyak na antibodies o nang nakapag-iisa, sa isang hindi tiyak na paraan.

Pangkalahatang view

Mga bahagi ng sistema ng pandagdag

Ang Complement ay isang sistema ng protina na kinabibilangan ng humigit-kumulang 20 na mga sangkap na nakikipag-ugnayan: C1 (isang complex ng tatlong protina), C2, C3, ..., C9, factor B, factor D at isang bilang ng mga regulatory protein. Ang lahat ng mga sangkap na ito ay natutunaw na mga protina na may isang mol. tumitimbang mula 24,000 hanggang 400,000, na umiikot sa dugo at tissue fluid. Ang mga pandagdag na protina ay na-synthesize pangunahin sa atay at bumubuo ng humigit-kumulang 5% ng kabuuang bahagi ng globulin ng plasma ng dugo. Karamihan ay hindi aktibo hanggang sa ma-activate ang alinman sa pamamagitan ng immune response (na kinasasangkutan ng mga antibodies) o direkta ng isang invading microorganism (tingnan sa ibaba). Isa sa posibleng resulta complement activation - ang sunud-sunod na kumbinasyon ng mga tinatawag na late component (C5, C6, C7, C8 at C9) sa isang malaking protein complex na nagiging sanhi ng cell lysis (lytic, o membrane attack complex). Ang pagsasama-sama ng mga huling bahagi ay nangyayari bilang resulta ng isang serye ng mga sunud-sunod na proteolytic activation reaction na kinasasangkutan ng mga unang bahagi (C1, C2, C3, C4, factor B at factor D). Karamihan sa mga naunang sangkap na ito ay mga proenzyme na naisaaktibo nang sunud-sunod sa pamamagitan ng proteolysis. Kapag ang alinman sa mga proenzyme na ito ay partikular na nahati, ito ay nagiging aktibong proteolytic enzyme at pinuputol ang susunod na proenzyme, at iba pa. Dahil marami sa mga naka-activate na bahagi ay mahigpit na nagbubuklod sa mga lamad, karamihan sa mga kaganapang ito ay nangyayari sa ibabaw ng cell. Ang pangunahing bahagi ng proteolytic cascade na ito ay C3. Ang pag-activate nito sa pamamagitan ng cleavage ay ang pangunahing reaksyon ng buong complement activation chain. Maaaring i-activate ang C3 sa dalawang pangunahing paraan - klasikal at alternatibo. Sa parehong mga kaso, ang C3 ay pinuputol ng isang enzyme complex na tinatawag na C3 convertase. Dalawa iba't ibang paraan humantong sa pagbuo ng iba't ibang mga C3-convertases, gayunpaman, pareho ang mga ito ay nabuo bilang isang resulta ng kusang pag-uugnay ng dalawang bahagi ng pandagdag na na-activate nang mas maaga sa kadena ng proteolytic cascade. Hinahati ng C3 convertase ang C3 sa dalawang fragment, ang mas malaki kung saan (C3b) ay nagbubuklod sa target na lamad ng cell sa tabi ng C3 convertase; na nagreresulta sa pagbuo ng isang enzyme complex malalaking sukat na may binagong pagtitiyak - C5-convertase. Pagkatapos ay pinuputol ng C5 convertase ang C5 at sa gayon ay sinisimulan ang kusang pagpupulong ng lytic complex mula sa mga huling bahagi - mula C5 hanggang C9. Dahil ang bawat activated enzyme ay pumuputol sa maraming molekula ng susunod na proenzyme, ang activation cascade ng mga unang bahagi ay kumikilos bilang isang enhancer: bawat molekula na na-activate sa simula ng buong chain ay humahantong sa pagbuo ng maraming lytic complex.

Ang mga pangunahing yugto ng pag-activate ng sistema ng pandagdag.

Mga klasikal at alternatibong paraan ng pag-activate ng sistemang pandagdag.

Gumagana ang complement system bilang isang biochemical cascade ng mga reaksyon. Ang complement ay isinaaktibo ng tatlong biochemical pathway: ang classical, alternative, at lectin pathways. Lahat ng tatlong activation pathway ay gumagawa iba't ibang variant C3 convertase (protina na pumuputol sa C3). klasikong paraan(ito ay unang natuklasan, ngunit ebolusyonaryong bago) ay nangangailangan ng mga antibodies upang maisaaktibo (tiyak na immune response, adaptive immunity), habang alternatibo At lectin Ang mga landas ay maaaring i-activate ng mga antigen nang walang pagkakaroon ng mga antibodies (hindi tiyak na tugon sa immune, likas na kaligtasan sa sakit). Ang resulta ng complement activation sa lahat ng tatlong kaso ay pareho: C3 convertase hydrolyzes C3, lumilikha ng C3a at C3b at nagiging sanhi ng isang kaskad ng karagdagang hydrolysis ng mga elemento ng complement system at mga kaganapan sa pag-activate. Sa klasikal na landas, ang pag-activate ng C3 convertase ay nangangailangan ng pagbuo ng C4bC2a complex. Ang complex na ito ay nabuo sa cleavage ng C2 at C4 ng C1 complex. Ang C1 complex, sa turn, ay dapat magbigkis sa class M o G immunoglobulins para sa activation. Ang C3b ay nagbubuklod sa ibabaw ng mga pathogens, na humahantong sa isang mas malaking "interes" ng mga phagocytes sa mga cell na nauugnay sa C3b (opsonization). Ang C5a ay isang mahalagang chemoattractant na tumutulong upang maakit ang mga bagong sistema ng pandagdag sa lugar ng pag-activate ng sistema ng pandagdag. immune cells. Parehong may anaphylotoxic na aktibidad ang C3a at C5a, na direktang nagdudulot ng degranulation ng mga mast cell (bilang resulta, pagpapalabas ng mga nagpapaalab na mediator). Sinisimulan ng C5b ang pagbuo ng mga membrane attack complex (MAC) na binubuo ng C5b, C6, C7, C8 at polymeric C9. Ang MAC ay ang cytolytic end product ng complement activation. Ang MAC ay bumubuo ng isang transmembrane channel na nagiging sanhi ng osmotic lysis ng target na cell. Nilalamon ng mga macrophage ang mga pathogen na may label ng complement system.

biological function

Ngayon mayroong mga sumusunod na function:

1. pag-andar ng opsonizing. Kaagad pagkatapos ng pag-activate ng sistema ng pandagdag, ang mga bahagi ng opsonizing ay nabuo na sumasakop sa mga pathogen o immune complex, na umaakit sa mga phagocytes. Ang pagkakaroon ng C3b receptor sa ibabaw ng mga phagocytic cells ay nagpapahusay sa kanilang pagkakabit sa opsonized bacteria at pinapagana ang proseso ng pagsipsip. Ang mas mahigpit na pagkakadikit na ito ng mga selulang nakagapos ng C3b o mga immune complex sa mga phagocytic na selula ay tinawag hindi pangkaraniwang bagay ng immune attachment.
2. Solubilisasyon (i.e. dissolution) ng mga immune complex (C3b molecule). Sa kakulangan ng pandagdag, nabubuo ang immunocomplex pathology (tulad ng SLE). [SLE = systemic lupus erythematosus]
3. Pakikilahok sa mga nagpapasiklab na reaksyon. Ang pag-activate ng complement system ay nagreresulta sa pagpapalabas ng mga basophil ng tisyu(mga mast cell) at basophilic granulocytes dugo sa biyolohikal na paraan aktibong sangkap(histamine, serotonin, bradykinin), na nagpapasigla sa nagpapasiklab na tugon (nagpapaalab na mga tagapamagitan). Sa biyolohikal aktibong sangkap, na nabuo sa panahon ng paghahati C3 At C5, ay humahantong sa paglabas ng mga vasoactive amines, tulad ng histamine, mula sa mga basophil ng tissue (mast cells) at basophilic granulocytes ng dugo. Sa turn, ito ay sinamahan ng pagpapahinga. makinis na kalamnan at pag-urong ng mga capillary endothelial cells, nadagdagan ang vascular permeability. Fragment C5a at iba pang mga produkto ng pag-activate ng pandagdag ay nagtataguyod ng chemotaxis, pagsasama-sama at degranulation ng mga neutrophil at pagbuo ng mga libreng radikal na oxygen. Ang pangangasiwa ng C5a sa mga hayop ay nagresulta sa arterial hypotension, pulmonary vasoconstriction at tumaas na vascular permeability dahil sa endothelial damage.
   Mga function ng C3a:
   • kumilos bilang isang chemotactic factor, na nagiging sanhi ng paglipat ng mga neutrophil patungo sa lugar ng paglabas nito;
   • magbuod ng attachment ng neutrophils sa vascular endothelium at sa bawat isa;
   • buhayin ang mga neutrophil, na nagiging sanhi ng mga ito na magkaroon ng respiratory burst at degranulation;
   • pasiglahin ang paggawa ng mga leukotrienes ng neutrophils.
4. Cytotoxic o lytic function. Sa huling yugto ng activation ng complement system, ang isang membrane attack complex (MAC) ay nabuo mula sa huli na mga bahagi ng complement, na umaatake sa lamad ng isang bacterial o anumang iba pang cell at sinisira ito.

Ang Factor C3e, na nabuo sa panahon ng pagkasira ng factor C3b, ay may kakayahang magdulot ng paglipat ng mga neutrophil mula sa utak ng buto, at sa kasong ito ay maging sanhi ng leukocytosis.

Pag-activate ng sistema ng pandagdag

klasikong paraan

Ang klasikal na landas ay na-trigger sa pamamagitan ng pag-activate ng complex C1(kabilang dito ang isang C1q molekula at isang C1r at C1s bawat isa). Ang C1 complex ay nagbubuklod sa pamamagitan ng C1q sa class M at G immunoglobulins na nauugnay sa mga antigens. Ang Hexameric C1q ay hugis tulad ng isang palumpon ng mga hindi pa nabubuksang tulips, ang "mga putot" nito ay maaaring magbigkis sa antibody site. Ang isang solong molekula ng IgM ay sapat upang simulan ang landas na ito, ang pag-activate ng mga molekula ng IgG ay hindi gaanong mahusay at nangangailangan ng higit pang mga molekula ng IgG.

С1q direktang nagbubuklod sa ibabaw ng pathogen, humahantong ito sa mga pagbabago sa conformational sa molekula ng C1q, at nagiging sanhi ng pag-activate ng dalawang molekula ng C1r serine protease. Pinutol nila ang mga C1 (isa ring serine protease). Ang C1 complex ay nagbibigkis sa C4 at C2 at pagkatapos ay pinaghiwa-hiwalay ang mga ito upang mabuo ang C2a at C4b. Ang C4b at C2a ay nagbubuklod sa isa't isa sa ibabaw ng pathogen upang mabuo ang classical pathway na C3 convertase, C4b2a. Ang hitsura ng C3 convertase ay humahantong sa paghahati ng C3 sa C3a at C3b. Ang C3b ay bumubuo, kasama ng C2a at C4b, ang C5 convertase ng classical pathway. Ang C5 ay nahahati sa C5a at C5b. Ang C5b ay nananatili sa lamad at kumokonekta sa C4b2a3b complex. Pagkatapos ay ang C6, C7, C8 at C9 ay konektado, na nag-polymerize at lumilitaw ang isang tubule sa loob ng lamad. Kaya, ang osmotic na balanse ay nabalisa at, bilang resulta ng turgor, ang bacterium ay sumabog. Ang klasikal na paraan ay mas tumpak, dahil ang anumang dayuhang selula ay nawasak sa ganitong paraan.

Alternatibong landas

Ang isang alternatibong landas ay na-trigger ng hydrolysis ng C3 nang direkta sa ibabaw ng pathogen. Ang mga salik B at D ay kasangkot sa alternatibong landas. Sa kanilang tulong, nabuo ang enzyme C3bBb. Pinapatatag ito ng Protein P at tinitiyak ang pangmatagalang paggana nito. Dagdag pa rito, ina-activate ng PC3bBb ang C3, bilang resulta, nabuo ang C5-convertase at na-trigger ang pagbuo ng isang membrane attack complex. Ang karagdagang pag-activate ng mga sangkap na pandagdag sa terminal ay nangyayari sa parehong paraan tulad ng sa klasikal na landas ng pag-activate ng pandagdag. Sa likido sa C3bBb complex, ang B ay pinapalitan ng H factor at, sa ilalim ng impluwensya ng isang deactivating compound (H), ay nagiging C3bi. Kapag ang mga mikrobyo ay pumasok sa katawan, ang C3bBb complex ay nagsisimulang maipon sa lamad. Kumokonekta ito sa C5, na nahahati sa C5a at C5b. Ang C5b ay nananatili sa lamad. Pagkatapos ay konektado ang C6, C7, C8 at C9. Pagkatapos pagsamahin ang C9 sa C8, ang C9 ay polymerized (hanggang sa 18 molecule ang pinag-crosslink sa isa't isa) at nabuo ang isang tubo na tumatagos sa bacterial membrane, ang tubig ay nabomba at ang bacterium mga pagsabog.

Ang alternatibong landas ay naiiba sa klasikal sa sumusunod na paraan: ang pag-activate ng sistema ng pandagdag ay hindi nangangailangan ng pagbuo ng mga immune complex; nangyayari ito nang walang paglahok ng mga unang bahagi ng pandagdag - C1, C2, C4. Naiiba din ito sa na ito ay gumagana kaagad pagkatapos ng paglitaw ng mga antigens - ang mga activator nito ay maaaring bacterial polysaccharides at lipopolysaccharides (sila ay mitogens), viral particle, tumor cells.

Lectin (mannose) pathway ng activation ng complement system

Ang lectin pathway ay homologous sa classical pathway ng activation ng complement system. Gumagamit ito ng mannose-binding lectin (MBL), isang protina na katulad ng classical na C1q activation pathway, na nagbubuklod sa mga residue ng mannose at iba pang asukal sa lamad, na nagbibigay-daan para sa pagkilala sa iba't ibang mga pathogen. Ang MBL ay isang serum na protina na kabilang sa pangkat ng mga protina ng collectin, na pangunahing na-synthesize sa atay at maaaring i-activate ang complement cascade sa pamamagitan ng direktang pagbubuklod sa ibabaw ng pathogen.

Sa blood serum, ang MBL ay bumubuo ng isang complex na may MASP-I at MASP-II (Mannan-binding lectin Associated Serine Protease, MBL-binding serine protease). Ang MASP-I at MASP-II ay halos kapareho sa C1r at C1s ng classical activation pathway at maaaring magkaroon ng isang karaniwang evolutionary ancestor. Kapag ang ilang mga aktibong site ng MBL ay nagbubuklod sa partikular na nakatuon na mannose residues sa phospholipid bilayer ng pathogen, ang MASP-I at MASP-II ay ina-activate at hinahati ang C4 protein sa C4a at C4b, at ang C2 protein sa C2a at C2b. C4b at C2a pagkatapos ay pinagsama sa ibabaw ng pathogen upang bumuo ng C3 convertase, at ang C4a at C2b ay kumikilos bilang chemoattractants para sa mga selula ng immune system.

Regulasyon ng sistema ng pandagdag

Ang complement system ay maaaring maging lubhang mapanganib sa pag-host ng mga tisyu, kaya ang pag-activate nito ay dapat na maayos na kinokontrol. Karamihan sa mga bahagi ay aktibo lamang bilang bahagi ng complex, habang ang kanilang mga aktibong anyo ay maaaring umiral sa napakatagal na panahon. maikling panahon. Kung sa panahong ito ay hindi sila nakakatugon sa susunod na bahagi ng complex, kung gayon ang mga aktibong form ay mawawala ang kanilang koneksyon sa complex at nagiging hindi aktibo. Kung ang konsentrasyon ng alinman sa mga sangkap ay nasa ibaba ng threshold (kritikal), kung gayon ang gawain ng sistema ng pandagdag ay hindi hahantong sa mga pisyolohikal na kahihinatnan. Ang sistema ng pandagdag ay kinokontrol ng mga espesyal na protina na matatagpuan sa plasma ng dugo sa mas mataas na konsentrasyon kaysa sa mga protina ng complement system mismo. Ang parehong mga protina ay naroroon sa mga lamad ng sariling mga selula ng katawan, na nagpoprotekta sa kanila mula sa pag-atake ng mga protina ng sistema ng pandagdag.

Ang mga mekanismo ng regulasyon ay pangunahing gumagana sa tatlong punto.

1. C1. Kinokontrol ng Inhibitor C1 ang classical at lectin activation pathways. Gumagana ito sa dalawang paraan: nililimitahan nito ang pagkilos ng C4 at C2 sa pamamagitan ng pagbubuklod sa mga protease ng C1r at C1s at katulad din nitong pinapatay ang landas ng lectin sa pamamagitan ng pag-alis ng mga enzyme ng MASP mula sa MBP complex.
2. C3 convertase. Ang buhay ng C3-convertase ay nababawasan ng mga salik na nagpapabilis ng pagkabulok. Ang ilan sa mga ito ay matatagpuan sa ibabaw ng kanilang sariling mga cell (halimbawa, DAF at CR1). Gumaganap sila sa mga C3 convertases sa parehong klasikal at alternatibong mga landas ng pag-activate. Pinapabilis ng DAF ang pagkasira ng alternatibong pathway na C3 convertase. Ang CR1 (C3b/C4b receptor) ay matatagpuan pangunahin sa ibabaw ng mga erythrocytes at responsable para sa pag-alis ng mga opsonized na immune complex mula sa plasma ng dugo. Ang iba pang mga regulatory protein ay ginawa ng atay at natutunaw sa plasma ng dugo sa isang hindi aktibong estado. Ang Factor I ay isang serine protease na pumuputol sa C3b at C4b. Tinatanggal ng C4-binding protein (C4BP) ang C4 at tinutulungan ang factor I na buwagin ang C4b. Ang Factor H ay nagbubuklod sa mga glycosaminoglycans na nasa mga self cell ngunit hindi sa mga pathogen cell. Ang protina na ito ay isang factor I cofactor at pinipigilan din ang aktibidad ng C3bBb.
3. C9. Pinipigilan ng CD59 at Homologous Limiting Factor ang polymerization ng C9 sa panahon ng pagbuo ng membrane attack complex, na pinipigilan itong mabuo.

Ang papel ng complement system sa sakit

Malaki ang papel ng complement system sa maraming sakit na nauugnay sa immune.

Complement system ay isang kumplikadong kumplikado ng mga serum globulin. Ang cascade system na ito ng proteolytic enzymes ay inilaan para sa humoral na proteksyon ng katawan mula sa pagkilos ng mga dayuhang ahente at kasangkot sa pagpapatupad ng immune response ng katawan. Ang mga protina ng complement system ay nagbibigay ng mabilis at mahusay na pagtugon sa isang mahinang signal sa una at dinadala ito sa mga functional na kahihinatnan. Ang mga bahagi ng sistemang pandagdag ay karaniwang tinutukoy ng mga letrang Latin.

Mayroong dalawang mga mekanismo kung saan isinaaktibo ang sistema ng pandagdag:

klasiko;

alternatibo.

Ang mga mekanismong ito ay kumokonekta sa antas ng ika-5 bahagi at pagkatapos ay magpatuloy sa parehong paraan.

Klasikong paraan.

Ang mekanismo ng pag-trigger ay ang pagbuo ng isang antigen-antibody complex (AG-AT) sa ibabaw ng target na cell. Kasabay nito, nangyayari ang mga pagbabago sa konpormasyon sa molekula ng immunoglobulin (ito ay itinalaga: Ig o AT). Bilang resulta ng mga pagbabagong ito, nakuha ng Ig ang kakayahang magbigkis ng C 1 q-component ng complement. Ang C 1 r at C 1 s ay idinagdag sa kanila, at ang buong complex na ito ay sumasailalim sa isang conformational rearrangement at nagiging isang C 1 esterase, na kumikilos sa C 4, C 4 a ay natanggal, at ang C 4 b ay bahagi ng kumplikado. Pagkatapos C 2 ay sumali sa complex, na bumubuo ng isang bagong substrate para sa pagkilos ng C 1 s, C 2 b ay cleaved off, at C 2 a ay pumapasok sa complex.

Ang resultang complex ay tinatawag na "C 3 -convertase", at sa ilalim ng pagkilos nito ang peptide C 3 a ay pinuputol, at ang C 3 b ay bahagi ng complex, na ngayon ay tinatawag na "C 5 -convertase". Ang C5 convertase ay kumikilos sa C5, tinatanggal ang C 5 a mula dito, at ang C 5 b ay bahagi ng complex.

Pagkatapos nito, ang C 5 b ay magkakasunod na nauugnay sa C 6 , C 7 at C 8 . Bilang resulta, nabuo ang isang complex na may kakayahang mag-attach ng 2 C 9 na mga molekula.

Kung ang prosesong ito ay nangyayari sa ibabaw ng target na cell, ang mga bahagi ng C 5 b-C 9 complex ay bumubuo ng isang lamad na atake complex, na bumubuo ng mga transmembrane channel sa ibabaw ng target na cell, na ganap na natatagusan ng mga electrolyte at tubig. Namatay ang target na cell.

Ang mga by-product ng C 3 a at C 5 a na proseso ay may mga katangian ng anaphylotoxins.

regulasyon ng klasikal na landas.

Karamihan sa mga bahagi ay aktibo lamang bilang bahagi ng complex. Ang kanilang mga aktibong anyo ay maaaring umiral sa napakaikling panahon. Kung sa panahong ito ay hindi sila nakakatugon sa susunod na bahagi, kung gayon ang mga aktibong form ay mawawala ang kanilang koneksyon sa kumplikado at nagiging hindi aktibo. Kung ang konsentrasyon ng anumang bahagi ay nasa ibaba ng threshold (kritikal), kung gayon ang gawain ng sistema ng pandagdag ay hindi hahantong sa mga pisyolohikal na kahihinatnan.

Ang mga endogenous proteinase inhibitors ay kasangkot din sa regulasyon ng complement system. Ang pinaka-epektibo sa kanila ay C 1 -inhibitor.

Alternatibong landas.

Ang pagkakaiba sa pagitan ng alternatibong landas at ang klasikal ay hindi ito nangangailangan ng pagbuo ng mga immune complex upang simulan ito.

Ang mekanismo ng pag-trigger ng alternatibong landas ay ang pagbuo ng C 3 b mula sa C 3 sa ilalim ng pagkilos ng ilang trigger factor: halimbawa, polysaccharides ng bacterial cell wall.

Ang C3b ay bumubuo ng isang kumplikadong may salik na "B" (C 3 bB), na napapailalim sa pagkilos ng protease D (palaging aktibo sa plasma ng dugo!). Bilang isang resulta, ang "Ba" ay natanggal at ang C3bBb complex ay nabuo, na may proteolytic na aktibidad na may kaugnayan sa C 5 - tinatanggal nito ang C 5 a mula dito.

Pagkatapos nito, ang mga reaksyon ay nagpapatuloy sa parehong paraan tulad ng sa klasikal na paraan.

Ang substrate para sa C 3 b ay C 3 din, bilang isang resulta kung saan ang isa pa malaking dami Sa 3 b - ang positibong feedback ay sinusunod. Samakatuwid, kahit na maliit na halaga ng C 3 bBb ay sapat na upang makakuha ng higit pa at higit pa nito. aktibong anyo(pagpapalakas ng isang mahinang signal sa una).

Ang alternatibong landas ay karaniwang gumagana palagi at napakaaktibo, na nagbibigay ng mabilis na hindi tiyak na tugon sa pagpapakilala ng mga dayuhang selula.

Sa regulasyon ng sistema ng pandagdag, ang mga tiyak na inhibitor ay nakikilahok, na kumokontrol sa rate ng trabaho ng mga enzyme ng mga pangunahing reaksyon.

Komplemento ay isang sistema na binubuo ng mga complement protein mismo, membrane receptors para sa complement, plasma at lamad regulators ng complement activity.

Makadagdag sa mga protina ng system

Ang mga pandagdag na protina mismo ay isang serye ng glycoprotein at mga kadahilanan ng protina sa plasma ng dugo, na kinabibilangan ng 9 na magkakaibang bahagi. Bumubuo sila ng isang multi-enzymatic molecular cascade, kung saan ang produkto ng isang reaksyon ay ang substrate para sa susunod. Sa kasong ito, ang isang unti-unting pagtaas sa potensyal na lytic ay nangyayari, at ang unang mahina na pagsisimula ng stimulus ay humahantong sa isang malakas na panghuling epekto ng antimicrobial.

Mga receptor para sa sistema ng pandagdag

Mayroong 4 na uri ng mga receptor para sa mga bahagi ng pandagdag (complement receptor, CR - I, II, III, IV). Ang type 1 receptor (CR) ay matatagpuan sa ibabaw ng antigen-presenting cells at erythrocytes. Pinapamagitan nito ang pagkuha ng pathogen kung saan nakakabit ang C3b at C4b opsonins. Ang pagbubuklod ng mga immune complex ng mga erythrocytes ay nagsisiguro sa kanilang pagdadala sa atay at pali, kung saan ang mga macrophage ay nakapaloob. Ang pangalawang uri ng receptor (CR II) ay ipinahayag sa B lymphocytes at follicular dendritic cells. Ito ay nakikibahagi sa pag-aayos ng mga ipinahiwatig na mga selula: mga immune complex sa mga germinal center ng mga follicle mga lymph node, na nagiging sanhi ng karagdagang somatic hypermutagenesis ng immunoglobulin receptors ng B-lymphocytes at ang pagbuo ng memory B-cells. Ang CR III at CR IV ay likas na nabibilang sa β 2 -integrins (adhesion molecules) at partikular para sa iC3b (inactivated by factor H) at C3d. Ang mga receptor na ito ay matatagpuan higit sa lahat sa mga phagocytes at gumaganap ng isang dual function. Una, itinataguyod nila ang paglipat ng mga phagocytes sa lugar ng pamamaga, dahil maaari silang makipag-ugnayan sa mga molekula ng adhesion membrane na ICAM-1 at ICAM-2, ang pagpapahayag kung saan sa mga selula ng tisyu ay isa sa mga palatandaan para sa direktang paggalaw. Pangalawa, ang mga phagocytes, na tumatagos sa pokus salamat sa CR III CR IV, ay kinikilala ang mga bahagi ng pandagdag, na nag-aambag sa phagocytosis ng pathogen na may label na opsonins.

Makadagdag sa mga inhibitor ng system

Kasama ng maraming mga bahagi ng pandagdag, ang mga protina na may mga katangian ng antagonist ay nagpapalipat-lipat sa plasma ng dugo, na naglilimita sa pag-activate ng sistema ng pandagdag sa panahon ng neutralisasyon ng pathogen. Ang isa sa pinakamahalaga ay ang inhibitor ng unang bahagi (C1-inhibitor), ang kakulangan na sanhi nito tumaas ang panganib pag-unlad ng namamana angioedema. Tinitiyak ng tinatawag na factor H ang inactivation ng C3b, na nag-aambag sa karagdagang paghahati nito sa mga fragment na C3c at C3d, at sinisira ng factor I ang C3b at C4b.

Tulad ng makikita, 2 plasma na kadahilanan ang agad na neutralisahin ang C3b. Ito ay kinakailangan para sa tamang operasyon ng alternatibong landas, dahil ang labis sa fragment na ito ay nagdudulot ng hindi makatwirang complement hyperactivation, na nagiging sanhi ng matinding pinsala sa sarili. Ang pagsisimula ng cascade ay nangyayari nang tumpak dahil sa C3b, na nabuo sa panahon ng kusang hydrolysis ng C3. Dapat pansinin na ang kusang hydrolysis ay palaging limitado, na pumipigil sa posibleng hyperactivation ng system. Kasabay nito, sa ilalim ng pagkilos ng C3 convertase, ang C3b fragment ay nabuo sa isang sapat na halaga upang simulan ang isang bagong cascade, na maglalabas upang maglabas ng karagdagang bahagi ng C3b. Dahil sa positibong feedback na ito, pinapataas ng complement ang lytic potential sa pare-parehong dami ng pathogen. Gayunpaman, kung ang inilarawan na proseso ay hindi maayos na kinokontrol, ang hindi makatwirang pandagdag na hyperactivation sa isang alternatibong paraan ay posible at, bilang isang resulta, pinsala sa sariling mga tisyu. Bukod dito, ang alternatibong mekanismo ay maaari ding ma-potentiated ng C3b, na inilabas bilang isang resulta ng parallel na classical activation pathway. Samakatuwid, para sa tamang operasyon ng buong sistema, kinakailangan ang sapat na hindi aktibo ng nagreresultang C3b.

Dahil gumaganap ang complement sa pagkilala ng template, at ang mga istruktura ng lamad ng sarili nitong mga cell ay karaniwang sumasailalim sa mga dynamic na pagbabago, may potensyal na panganib ng complement-mediated na auto-aggression. Upang maiwasan ito, ang mga proteksiyon na protina ay "itinayo sa" mga lamad ng kanilang sariling mga selula, na hindi aktibo ang complement cascade. Ito ay tungkol tungkol sa Decay accelerating factor (DAF), na matatagpuan sa mga selula ng dugo, epitheliocytes at endothelial cells. Pinahuhusay nito ang catabolism ng mga pangunahing enzyme ng cascade - C3- at C5-convertases. Kasama rin sa mga protina ng proteksiyon ng lamad ang membrane cofactor protein (MCP), na isang cofactor sa proteolysis ng C3b at C4b sa tulong ng isang 1-factor.

Ang papel na ginagampanan ng sistemang pandagdag

Ang tungkulin ng sistemang pandagdag ay: materyal mula sa site

• Tinitiyak ang cytolysis (pagkasira ng binagong sariling mga selula) at aktibidad ng bactericidal (pagkasira ng bakterya). Sa ganitong kahulugan, ang pandagdag ay nagpupuno (Latin complementare - upang madagdagan) ang pagkilos ng lysozyme.
• Ang pagbuo ng anaphylatoxins (C3a, C4a at C5a), na nag-uudyok sa pagpapakawala ng histamine at iba pang biologically active substances mula sa mast cells at basophils, na nagiging sanhi ng pagbuo ng vasodilation, plasmorrhagia at contraction ng bronchial smooth muscles.
• Pagpapatupad ng isang chemotactic effect sa neutrophils, eosinophils at monocytes, na humahantong sa cell infiltration ng focus sa pamamaga.
• Tinitiyak ang pagdirikit, opsonization at phagocytosis, na nag-aambag sa pagkasira ng mga pathogen.
• Tinitiyak ang paglaban sa mga virus (Ang mga fragment ng C1-C9 ay nakakapag-lyse ng mga virus; Ang fragment ng C3b ay isang opsonin; hinaharangan ng mga indibidwal na bahagi ng complement ang pagtagos ng virus sa cell).
• Pakikilahok sa pagpapatupad ng clearance ng mga immune complex na nawasak kapwa nang direkta sa pamamagitan ng pandagdag at ng mga macrophage ng pali at atay na naglalaman ng mga receptor para sa pandagdag (pangunahin para sa Clq).
• Tinitiyak ang pag-iwas sa pinsala sa sarili sa pamamaga, dahil dahil sa pagkasira ng nagpapalipat-lipat na mga immune complex, ang posibilidad ng pagbuo ng immunocomplex pathology (glomerulonephritis, vasculitis) ay pinipigilan.
• Pagpapatupad ng activation

Complement - mahalagang elemento immune system ng mga vertebrates at tao, na gumaganap ng isang mahalagang papel sa humoral na mekanismo pinoprotektahan ang katawan mula sa mga pathogen. Ang termino ay unang ipinakilala ni Erlich upang sumangguni sa isang bahagi ng serum ng dugo, kung wala ito mga katangian ng bactericidal nawala. Kasunod nito, natagpuan na ang functional factor na ito ay isang hanay ng mga protina at glycoproteins, na, kapag nakikipag-ugnayan sa isa't isa at sa isang dayuhang selula, ay nagiging sanhi ng lysis nito.

Ang Complement ay literal na isinasalin bilang "complement". Sa una, ito ay itinuturing na isa pang elemento na nagbibigay ng bactericidal properties ng live serum. Mga modernong tanawin higit pa tungkol sa kadahilanang ito. Itinatag na ang complement ay ang pinaka-kumplikado, pinong regulated system na nakikipag-ugnayan sa parehong humoral at cellular na mga kadahilanan ng immune response at may malakas na epekto sa pag-unlad. nagpapasiklab na tugon.

pangkalahatang katangian

Sa immunology, ang complement system ay isang grupo ng mga vertebrate blood serum proteins na nagpapakita ng bactericidal properties, na isang likas na mekanismo ng humoral defense ng katawan laban sa mga pathogen, na may kakayahang kumilos nang nakapag-iisa at kasama ng mga immunoglobulin. Sa huling kaso, ang complement ay nagiging isa sa mga lever ng isang tiyak (o nakuha) na tugon, dahil ang mga antibodies sa kanilang sarili ay hindi maaaring sirain ang mga dayuhang selula, ngunit kumikilos nang hindi direkta.

Ang epekto ng lysis ay nakamit dahil sa pagbuo ng mga pores sa lamad ng isang dayuhang selula. Maaaring maraming ganoong butas. Ang membrane-perforating complex ng complement system ay tinatawag na MAC. Bilang resulta ng pagkilos nito, ang ibabaw ng dayuhang selula ay nagiging butas-butas, na humahantong sa pagpapalabas ng cytoplasm sa labas.

Kumpleto ang mga account para sa halos 10% ng lahat ng serum na protina. Ang mga bahagi nito ay palaging naroroon sa dugo, nang walang anumang epekto hanggang sa sandali ng pag-activate. Ang lahat ng mga epekto ng pandagdag ay resulta ng sunud-sunod na mga reaksyon - alinman sa paghahati ng mga bumubuo nitong protina, o humahantong sa pagbuo ng kanilang mga functional complex.

Ang bawat yugto ng naturang kaskad ay napapailalim sa mahigpit na reverse regulation, na, kung kinakailangan, ay maaaring huminto sa proseso. Ang mga aktibong bahagi ng pandagdag ay nagpapakita ng malawak na hanay ng mga katangian ng immunological. Kasabay nito, ang mga epekto ay maaaring magkaroon ng parehong positibo at negatibong epekto sa katawan. negatibong epekto.

Pangunahing Function at Effects ng Complement

Aksyon activated system kasama sa pandagdag:

• Lysis ng mga banyagang selula ng bacterial at non-bacterial na kalikasan. Isinasagawa ito dahil sa pagbuo ng isang espesyal na complex na naka-embed sa lamad at gumagawa ng isang butas sa loob nito (perforates).
• Pag-activate ng pag-alis ng mga immune complex.
• Opsonization. Ang pag-attach sa mga ibabaw ng mga target, ang mga pandagdag na bahagi ay ginagawa silang kaakit-akit sa mga phagocytes at macrophage.
• Pag-activate at chemotactic na atraksyon ng mga leukocytes sa pokus ng pamamaga.
• pagbuo ng anaphylotoxins.
• Pinadali ang pakikipag-ugnayan ng antigen presenting at B cells na may antigens.

Kaya, ang pandagdag ay may isang kumplikadong stimulating effect sa buong immune system. Gayunpaman, ang labis na aktibidad ng mekanismong ito ay maaaring makaapekto sa estado ng katawan. Ang mga negatibong pandagdag ay kinabibilangan ng:

• Pagkasira ng pagtagas mga sakit sa autoimmune.
• Mga proseso ng septic (napapailalim sa mass activation).
• Masamang impluwensya sa tissue sa pokus ng nekrosis.

Ang mga depekto sa sistema ng pandagdag ay maaaring humantong sa mga reaksyon ng autoimmune, i.e. pinsala sa malusog na tisyu ng katawan immune system. Iyon ang dahilan kung bakit mayroong isang mahigpit na multi-stage na kontrol ng activation mekanismong ito.

Makadagdag sa mga protina

Sa pag-andar, ang mga protina ng sistema ng pandagdag ay nahahati sa mga bahagi:

• Klasikal na paraan (C1-C4).
• Alternatibong landas (mga salik D, B, C3b at properdin).
• Membrane attack complex (C5-C9).
• Regulatoryo faction.

Ang mga bilang ng C-protein ay tumutugma sa pagkakasunud-sunod ng kanilang pagtuklas, ngunit hindi sumasalamin sa pagkakasunud-sunod ng kanilang pag-activate.

Ang mga pandagdag na regulatory protein ay kinabibilangan ng:

• H salik.
• C4 na nagbubuklod na protina.
• Membrane cofactor protein.
• Makadagdag sa mga receptor ng una at pangalawang uri.

Ang C3 ay susi functional na elemento, dahil pagkatapos ng pagkabulok nito, nabuo ang isang fragment (C3b), na nakakabit sa lamad ng target na cell, na nagsisimula sa proseso ng pagbuo ng lytic complex at nag-trigger ng tinatawag na amplification loop (positibong mekanismo ng feedback).

Pag-activate ng sistema ng pandagdag

Ang complement activation ay isang cascade reaction kung saan pinapagana ng bawat enzyme ang activation ng susunod. Ang prosesong ito ay maaaring mangyari kapwa sa pakikilahok ng mga bahagi ng nakuha na kaligtasan sa sakit (immunoglobulins), at kung wala sila.

Mayroong ilang mga paraan ng pagdagdag sa pag-activate, na naiiba sa pagkakasunud-sunod ng mga reaksyon at ang hanay ng mga protina na kasangkot dito. Gayunpaman, ang lahat ng mga kaskad na ito ay humahantong sa isang resulta - ang pagbuo ng isang convertase na humahati sa protina ng C3 sa C3a at C3b.

May tatlong paraan para i-activate ang complement system:

• Klasiko.
• Alternatibo.
• Lectin.

Kabilang sa mga ito, ang una lamang ang nauugnay sa nakuhang immune response system, habang ang iba ay may di-tiyak na katangian ng pagkilos.

Sa lahat ng mga activation pathway, 2 yugto ang maaaring makilala:

• Simula (o aktwal na pag-activate) - kasama ang buong kaskad ng mga reaksyon hanggang sa pagbuo ng C3 / C5-convertase.
• Cytolytic - nangangahulugan ng pagbuo ng isang membrane attack complex (MCF).

Ang ikalawang bahagi ng proseso ay katulad sa lahat ng mga yugto at nagsasangkot ng mga protina C5, C6, C7, C8, C9. Sa kasong ito, ang C5 lamang ang sumasailalim sa hydrolysis, habang ang iba ay nakakabit lamang, na bumubuo ng isang hydrophobic complex na may kakayahang pagsamahin at pagbutas ng lamad.

Ang unang yugto ay batay sa sunud-sunod na paglulunsad ng aktibidad ng enzymatic ng mga protina C1, C2, C3 at C4 sa pamamagitan ng hydrolytic cleavage sa malaki (mabigat) at maliit (magaan) na mga fragment. Ang mga resultang yunit ay tinutukoy ng maliliit na titik a at b. Ang ilan sa kanila ay nagsasagawa ng paglipat sa cytolytic stage, habang ang iba ay gumaganap ng papel na humoral na mga kadahilanan ng immune response.

klasikong paraan

Ang classical pathway ng complement activation ay nagsisimula sa pakikipag-ugnayan ng C1 enzyme complex sa antigen-antibody group. Ang C1 ay isang bahagi ng 5 molekula:

• C1q(1).
• C1r(2).
• C1s(2).

Sa unang hakbang ng cascade, ang C1q ay nagbubuklod sa immunoglobulin. Nagiging sanhi ito ng isang conformational rearrangement ng buong C1 complex, na humahantong sa autocatalytic self-activation nito at ang pagbuo ng aktibong enzyme C1qrs, na nag-cleave sa C4 protein sa C4a at C4b. Sa kasong ito, ang lahat ay nananatiling nakakabit sa immunoglobulin at, samakatuwid, sa lamad ng pathogen.

Matapos ang pagpapatupad ng proteolytic effect, ang antigen group - C1qrs ay nakakabit sa C4b fragment sa sarili nito. Ang ganitong kumplikado ay nagiging angkop para sa pagbubuklod sa C2, na agad na na-cleaved ng C1s sa C2a at C2b. Bilang resulta, ang C3 convertase C1qrs4b2a ay nilikha, ang pagkilos na bumubuo sa C5 convertase, na nag-trigger sa pagbuo ng MAC.

Alternatibong landas

Ang ganitong pag-activate ay tinatawag na idle, dahil ang hydrolysis ng C3 ay nangyayari nang kusang (nang walang pakikilahok ng mga tagapamagitan), na humahantong sa pana-panahon, walang dahilan na pagbuo ng C3 convertase. Ang isang alternatibong landas ay isinasagawa kapag ang pathogen ay hindi pa nabuo. Ang cascade ay binubuo ng mga sumusunod na reaksyon:

1. Blank hydrolysis ng C3 upang bumuo ng isang C3i fragment.
2. Ang C3i ay nagbubuklod sa factor B upang mabuo ang C3iB complex.
3. Kaugnay na kadahilanan Ang B ay magagamit para sa cleavage ng D-protein.
4. Ang Ba fragment ay tinanggal at ang C3iBb complex ay nananatili, na siyang C3 convertase.

Ang kakanyahan ng blangko na pag-activate ay ang C3-convertase ay hindi matatag sa likidong yugto at mabilis na nag-hydrolyze. Gayunpaman, sa pagbangga sa lamad ng pathogen, ito ay nagpapatatag at nagsisimula sa cytolytic stage sa pagbuo ng MAC.

lectin pathway

Ang lectin pathway ay halos kapareho ng classical. Ang pangunahing pagkakaiba ay nakasalalay sa unang hakbang ng pag-activate, na isinasagawa hindi sa pamamagitan ng pakikipag-ugnayan sa immunoglobulin, ngunit sa pamamagitan ng pagbubuklod ng C1q sa mga terminal na pangkat ng mannan na naroroon sa ibabaw. mga selulang bacterial. Ang karagdagang pag-activate ay isinasagawa na ganap na magkapareho sa klasikal na landas.

A. Ang sistemang pandagdag ay kasangkot sa inactivation ng mga microorganism, kasama namamagitan sa pagkilos ng mga antibodies sa mga mikrobyo.

B. Mga aktibong fraction ng complement system buhayin ang phagocytosis(opsonins - C3b at C5b).

B. Ang mga aktibong fraction ng complement system ay kasangkot sa pagbuo ng isang nagpapasiklab na tugon.

Ang kanilang pagkilos sa mga mast cell ay nagdudulot ng degranulation ng huli.

Ang mga anaphyllotoxin ay kumikilos din makinis na kalamnan nagiging sanhi ng pagkontrata nila.

Kumikilos din sila sa dingding ng daluyan: nagiging sanhi sila ng pag-activate ng endothelium at pagtaas ng pagkamatagusin nito, na lumilikha ng mga kondisyon para sa extravasation (paglabas) ng mga likido at mga selula ng dugo mula sa vascular bed sa panahon ng pagbuo ng isang nagpapasiklab na reaksyon.

Ang C3a ay gumaganap bilang isang immunosuppressor (i.e. pinipigilan ang immune response).

Ang C5a ay isang immunostimulant (i.e. pinahuhusay ang immune response).

Ang C5bC6C7C8C9 complex na nagreresulta mula sa complement activation ay tinatawag memranial attack complex (MAK).

Upang maisakatuparan ang bacteriolysis o cytolysis, kinakailangan ang pag-activate ng mga complement component mula C3 hanggang C9 sa pamamagitan ng classical o alternatibong pathway. Ang mga malalaking fragment ng C3b, C4b ay kumikilos bilang mga opsonins - na na-adsorbed sa ibabaw ng cell, pinapahusay nila ang reaksyon ng phagocytic, nagtataguyod ng immune adhesion ng AG-AT-complement complex sa ibabaw ng immunocompetent cells (B-lymphocytes). Ang mga low-molecular fragment - polypeptides - C3a, C5a ay nagtataguyod ng pagpapalabas ng mga biogenic amines (histamine, serotonin) mula sa mga mast cell, nagiging sanhi ng pag-urong ng makinis na mga kalamnan, pagtaas ng vascular permeability, sanhi ng chemotaxis ng neutrophils at monocytes sa lugar ng pamamaga. Ang mga bahagi ng CI-C4 ay neutralisahin ang ilang mga virus. Ang synthesis ng mga pandagdag na protina ay isinasagawa ng mga selula ng sistema ng mononuclear phagocytes, fiblast, at atay. Sa mga tao, may mga genetic na depekto sa karamihan ng mga bahaging pandagdag. Sa klinika, ipinakikita nila ang kanilang mga sarili sa anyo ng systemic lupus erythematosus syndrome, paulit-ulit na impeksyon sa pyogenic, at angioedema.

Ang data sa functional na aktibidad ng mga pandagdag na protina at ang kanilang konsentrasyon ay nagbibigay ng napakahalagang impormasyon tungkol sa kurso ng sakit; maaari silang magamit upang masuri ang kalubhaan ng kurso, ang pagiging epektibo ng mga therapeutic na hakbang, at ang pagbabala ng sakit.

Mga pamamaraan para sa pag-aaral ng complement system

I. Pagpapasiya ng kabuuang aktibidad ng hemolytic ng classical pathway. Ang serum ng dugo ay diluted na may physiological saline 1:10 at ipinakilala sa mga test tube sa dami ng 0.05 hanggang. 0.5 ml. Ang dami ng mga sample ay nababagay sa 1.5 ml na may asin at 1.5 ml ng hemolytic system ay idinagdag (isang halo ng pantay na dami ng 3% na suspensyon ng mga erythrocytes ng tupa at hemolytic serum). Ang mga tubo ay incubated sa 37°C sa loob ng 45 minuto, pinalamig sa 4°C upang ihinto ang reaksyon at sentrifuge sa 1500 rpm sa loob ng 4-5 minuto. Pagkatapos ng centrifugation, ang dami ng serum na nagiging sanhi ng lysis ng 50% ng sensitized erythrocytes ay tinutukoy (conditional hemolytic unit ng complement activity - CH 50), pagkatapos ay ang halaga ng CH 50 bawat ml ng buong serum ay kinakalkula. Sa malusog na tao, ang complement titer (CH 50 bawat ml) ay humigit-kumulang 40-60 CH 50.

Ang hemolytic activity ng alternatibong complement pathway ay tinutukoy din, ngunit sa halip na sensitized ovine erythrocytes, non-sensitized rabbit erythrocytes at saline na naglalaman ng Mg ions ngunit walang Ca ay ginagamit upang harangan ang classical activation pathway.

2. Pagpapasiya ng functional na aktibidad ng mga indibidwal na bahagi. Ang pamamaraang ito ay nagbibigay-daan upang matukoy ang bilang ng mga functionally active molecule sa 1 ml ng blood serum. Upang gawin ito, ang isang reagent para sa isang tiyak na bahagi ng pandagdag ay idinagdag sa sensitized erythrocytes (alinman sa isang halo ng mga bahagi ng pandagdag, hindi kasama ang ninanais, o ang serum ng dugo na walang aktibidad ng sangkap na ito ay ginagamit bilang isang reagent. Serum para sa titration ng ang mga bahagi ng klasikal na landas ay natunaw ng 40-50 beses, at ang kahalili - 5-7 beses. Sa ganitong paraan, posible na magtatag ng isang depekto sa ilang mga bahagi at matukoy ang profile ng pandagdag sa iba't ibang mga sakit.

3. Immunochemical na pagpapasiya ng konsentrasyon ng mga bahagi ng pandagdag. Ang paraan ng pananaliksik na ito ay nagpapahintulot sa iyo na matukoy ang konsentrasyon ng bawat isa sa mga pandagdag na protina gamit ang mga antisera (antibodies) sa kanila. Ang konsentrasyon ng protina ay ipinahayag sa g/l. Para sa pagpapasiya, ang paraan ng radial immunodiffusion sa arap ay ginagamit.

4 Pagpapasiya ng aktibidad ng pandagdag at mga bahagi nito sa pamamagitan ng radial hemolysis sa agar gel. Ang hemolytic system ay halo-halong may molten agar sa isang ratio na 1:7 at mabilis na ibinuhos sa sterile Petri dishes. Pagkatapos ng solidification sa agar, ang mga butas ay ginawa na may diameter na 4.mm - (hanggang sa 15 butas sa 1st cup). Ang mga balon ay pinupuno ng test sera at ang mga plato ay inilalagay sa refrigerator sa 4° C. sa loob ng 21 oras upang payagan ang mga complement protein na kumalat sa agar. Pagkatapos ang mga tasa ay inilalagay sa isang termostat sa loob ng 60 minuto para sa pagpapakita ng mga hemolysis zone. Ang pamantayan para sa aktibidad ng pandagdag ay ang parisukat ng diameter ng mga hemolysis zone.