Paghihiwalay ng purong kultura
Ang pangunahing paraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng bakterya ay ang pamamaraan na iminungkahi ni R. Koch, ang prinsipyo kung saan ay upang makakuha ng isang kultura ng bakterya mula sa mga nakahiwalay na kolonya. Kapag ibinubukod ang isang purong kultura ng aerobes, ang kultura ng pagpapayaman o ang materyal na pinag-aaralan ay inihahasik sa isang solidong nutrient medium. Ang pamamaraan ng pagpapatakbo ay ang mga sumusunod. Ang natunaw na nutrient medium ay ibinubuhos sa sterile Petri dishes. Matapos tumigas ang daluyan, ang isang patak ng materyal na pansubok ay inilapat sa ibabaw nito at, gamit ang isang sterile na Drigalsky spatula, ang patak ay ibinahagi muna sa isang gilid ng ibabaw ng nutrient medium sa isang Petri dish, pagkatapos ay kasama ang isa pa. Gamit ang parehong spatula, punasan ang ibabaw ng siksik na daluyan sa ika-2, ika-3 at ika-4 na tasa. Ang mga pinggan ay incubated sa pinakamainam na temperatura para sa mga microbes (madalas na 37°C) nang hanggang 2 araw. Karaniwan, ang patuloy na paglaki ng mga mikrobyo ay sinusunod sa unang dalawang pinggan pagkatapos ng pagpapapisa ng itlog, habang ang mga nakahiwalay na kolonya ay sinusunod sa kasunod na mga pinggan.
Ang kultura ng pagpapayaman ay maaaring ikalat gamit ang pamamaraan ng thinning streak. Sa kasong ito, ang kultura ng pagpapayaman o ang pagbabanto nito ay pinili gamit ang isang loop at ang mga streak ay iginuhit sa pamamagitan ng isang siksik na nutrient medium sa isang Petri dish sa isang tiyak na pagkakasunud-sunod. Bago ang bawat bagong stroke, ang loop ay isterilisado. Ang mga pinggan ay thermostated para sa 1-7 araw, depende sa rate ng paglago ng microorganism. Ang mga lumaki na nakahiwalay na kolonya ay sini-screen gamit ang streak method sa mga test tube papunta sa ibabaw ng isang slant medium o sa isang liquid medium.
Ang mga nakahiwalay na kolonya ng anaerobes at facultative anaerobes ay nakukuha sa pamamagitan ng malalim na inoculation. Para sa layuning ito, ang 0.5-1.0 ml ng isang dilution ng materyal na pansubok ay inoculated sa mga test tube na may isang molten nutrient medium na pinalamig sa 40-37°C sa paraang makakuha ng mga hiwalay na kolonya. Ang daluyan ay mabilis na pinalamig at ang ibabaw ay natatakpan ng isang layer ng sterile mixture ng paraffin at petroleum jelly. Maaari mong gamitin ang capillary Pasteur pipettes, kung saan ang naaangkop na pagbabanto ng agar medium na may inoculation ay nakolekta. Ang dulo ng capillary ay selyadong. Sa isang mahusay na napiling pagbabanto, ang mga nakahiwalay na kolonya ay lumalaki sa isang test tube o pipette. Upang alisin ang mga ito, ang test tube (o pipette) ay bahagyang pinainit sa pamamagitan ng mabilis na pag-ikot nito sa apoy ng burner o mabilis na paglubog nito sa maligamgam na tubig, habang ang agar na katabi ng dingding ay natutunaw at ang mga nilalaman ng column ay madaling dumulas sa isang sterile. Petri dish. Ang haligi ng agar ay pinutol gamit ang isang sterile scalpel at ang mga kolonya ay aalisin sa pamamagitan ng pagkuha sa kanila gamit ang isang sterile capillary pipette o loop. Ang mga nakuhang kolonya ay inililipat sa isang likidong daluyan na kanais-nais para sa pagbuo ng mga nakahiwalay na mikroorganismo. Kung ang mga nakahiwalay na kolonya ay nakuha sa isang maliliit na ugat, pagkatapos pagkatapos ng masusing pagdidisimpekta ito ay nasira gamit ang mga sterile tweezers at ang mga seksyon ng capillary na naglalaman ng mga nakahiwalay na kolonya ay inilipat sa isang sterile na kapaligiran.
Pagpapasiya ng kadalisayan ng nakahiwalay na kultura
Ang kadalisayan ng mga kolonya na na-screen sa slant agar ay maaaring masuri sa maraming paraan: visually, microscopically at sa pamamagitan ng plating sa isang bilang ng nutrient media. Sa panahon ng visual na inspeksyon, ang paglaki ng mga microorganism ay makikita sa kahabaan ng streak sa ibabaw ng beveled nutrient medium. Kung ang paglago sa kahabaan ng linya ay hindi pare-pareho, kung gayon ang pananim ay itinuturing na kontaminado. Gayunpaman, ang ganitong kontrol ay posible lamang para sa mga pananim na maaaring lumaki sa ibabaw ng solid nutrient media. Samakatuwid, ang kadalisayan ng kultura ay dapat na subaybayan sa ilalim ng mikroskopyo. Upang gawin ito, maghanda ng paghahanda ng mga stained cell at tingnan ito sa ilalim ng paglulubog. Ang isang purong kultura ay dapat na morphologically homogenous at maaaring may kaunting pagkakaiba-iba lamang sa laki ng cell.
Ang pagtukoy sa sistematikong posisyon ng bakterya ay kinabibilangan ng pag-aaral ng isang hanay ng mga katangian: morphological, cultural at physiological-biochemical.
Mga katangiang pangkultura
Kasama sa mga kultural o macromorphological na katangian ang mga katangiang katangian ng paglaki ng mga mikroorganismo sa solid at likidong nutrient media.
Paglago sa solid nutrient media.
Sa ibabaw ng siksik na nutrient media, ang mga mikrobyo ay maaaring lumaki sa anyo ng mga kolonya, mga guhit o isang tuluy-tuloy na damuhan. Ang kolonya ay isang nakahiwalay na koleksyon ng mga cell ng parehong uri, na lumalaki sa karamihan ng mga kaso mula sa isang cell. Depende sa kung saan nabuo ang mga selula, ang mga kolonya sa ibabaw, malalim at ilalim ay nakikilala. Ang mga kolonya na lumaki sa ibabaw ng daluyan ay lubos na magkakaibang. Kapag inilalarawan ang mga ito, ang mga sumusunod na katangian ay isinasaalang-alang:
hugis ng kolonya- bilog, hugis amoeba, hindi regular, rhizoid, atbp.;
ibabaw ng kolonya- makinis, magaspang, ukit, nakatiklop, kulubot, radially striated, na may concentric na bilog;
profile ng kolonya- flat, convex, crater-shaped, cone-shaped, convex sa gitna na may tagaytay sa gilid, depressed sa gitna, na may tagaytay sa gilid, atbp.;
ningning at transparency- makintab, matte, mapurol, pulbos, transparent;
kulay ng kolonya- walang kulay (maruruming puting kolonya ay inuri bilang walang kulay) o may kulay - puti, dilaw, ginto, orange, lilac, pula, itim. Lalo na kapansin-pansin ang paglabas ng pigment sa substrate;
gilid ng kolonya- makinis, kulot, tulis-tulis, palawit, hugis-ugat, atbp.;
istraktura ng kolonya- homogenous, fine- at coarse-grained, streaky (ang gilid at istraktura ng kolonya ay tinutukoy gamit ang magnifying glass o sa mababang magnification ng isang mikroskopyo);
pagkakapare-pareho ng kolonya- ito ay tinutukoy sa pamamagitan ng pagpindot sa kolonya na may isang loop. Ang kolonya ay madaling maalis mula sa agar, maging siksik, malambot, lumalaki sa agar, mucous (dumidikit sa loop), malapot, filmy (natanggal nang buo), marupok.
Ang mga malalim na kolonya ay medyo monotonous. Kadalasan ang mga ito ay mukhang mga pipi na lentil, sa projection mayroon silang hugis ng mga oval na may matulis na dulo. Ang mga kolonya ng ilang bakterya ay kahawig ng mga bundle ng cotton wool na may mga filamentous outgrowth sa medium. Ang pagbuo ng malalim na mga kolonya ay madalas na sinamahan ng pagkalagot ng siksik na daluyan kung ang mga mikrobyo ay gumagawa ng mga gas. Ang mga kolonya sa ibaba ng iba't ibang uri ng mga microorganism ay mukhang manipis na transparent na mga pelikula na kumakalat sa ilalim.
Ang laki at ilang iba pang mga katangian ng mga kolonya ay nagbabago sa edad at nakasalalay sa komposisyon ng daluyan; samakatuwid, kapag inilalarawan ang mga ito, ang edad ng kultura, ang komposisyon ng daluyan, at ang temperatura ng paglilinang ay ipinahiwatig.
Kapag inilalarawan ang paglaki ng isang microorganism sa pamamagitan ng stroke, ang mga sumusunod na tampok ay napapansin: ang paglago ay kakaunti, katamtaman o sagana, tuloy-tuloy na may makinis o kulot na gilid, malinaw na nakikita, na kahawig ng mga tanikala ng mga nakahiwalay na kolonya, nagkakalat, mabalahibo, parang puno o rhizoid. . Ilarawan ang mga optical na katangian ng plake, kulay, ibabaw at pagkakapare-pareho nito.
Paglago sa likidong nutrient media.
Ang mga sumusunod na anyo ng paglaki ng bacterial sa likidong nutrient media ay nakikilala:
Ulap ng daluyan. Ang ganitong paglago ay katangian ng maraming pathogenic microbes na kabilang sa grupo ng facultative anaerobes.
Paglago sa ilalim. Nailalarawan sa pamamagitan ng pagbuo ng sediment sa ilalim ng test tube. Maaari itong maging kakaunti o masagana, parang mumo, homogenous, fibrous o sa anyo ng malalaking maluwag na mga natuklap. Ang pagkakapare-pareho ng sediment ay maaaring malapot, malansa, malutong o malagkit. Kung ang kultura ay hindi gumagawa ng pigment, kung gayon ang kulay ng daluyan ay hindi nagbabago at ang sediment ay nagiging kulay-abo-puti o madilaw-dilaw. Ang paglago sa ilalim ay katangian ng bakterya na may anaerobic respiration.
Paglago ng pader Ang bakterya ay ipinahayag sa katotohanan na ang nutrient medium sa test tube ay nananatiling transparent. Ang mga bakterya ay lumalaki sa anyo ng malalaking maluwag na mga natuklap o mga compact na butil na nakakabit sa panloob na ibabaw ng mga dingding ng test tube.
Mababaw na paglaki Ang bakterya ay nailalarawan sa pamamagitan ng paglitaw ng isang pelikula sa ibabaw ng likidong nutrient medium. Ang pelikula ay maaaring manipis, walang kulay, nawawala kapag inalog o inalog, basa, malapot, malansa, siksik, tuyo, at kapag kinuha ang materyal mula dito, maaari itong ganap na alisin sa anyo ng isang bilog na disk. Kadalasan ang paglago ng mga microorganism sa isang likidong nutrient medium ay sinamahan ng hitsura ng gas at amoy.
Purong kultura ang mga mikrobyo ay isang populasyon ng mga mikroorganismo ng isang species na nakuha mula sa isang nakahiwalay na kolonya ng mikrobyo. Ang microbial colony ay tumutukoy sa mga supling ng bacteria na nagreresulta mula sa pagpaparami ng isang microbial cell.
Ang paghihiwalay ng isang purong kultura ng microbes ay isang ipinag-uutos na yugto ng anumang pag-aaral sa bacteriological. Ang dalisay na kultura ay kinakailangan para sa pag-aaral ng morphological, cultural, biochemical at antigenic properties, ang kabuuan nito ay tumutukoy sa mga species ng microorganism na pinag-aaralan.
Maraming iba't ibang mga pamamaraan ang iminungkahi para sa paghihiwalay ng mga purong kultura ng microbes mula sa mga materyales na naglalaman ng masaganang halo-halong microflora. Ang pinakamalawak na ginagamit na paraan ay ang mekanikal na paghihiwalay ng mga mikroorganismo na matatagpuan sa materyal na pinag-aaralan upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya sa ibabaw o sa kailaliman ng nutrient medium.
Ang elective nutrient media ay malawakang ginagamit upang pasiglahin ang pagbuo ng mga mikroorganismo na ang purong kultura ay dapat na ihiwalay.
Kapag ihiwalay ang isang purong kultura ng mga pathogenic microbes mula sa pathological na materyal na kontaminado ng dayuhang microflora, kung minsan ay gumagamit sila ng infecting mga hayop sa laboratoryo.
Kapag naghahasik sa isang likidong nutrient medium, ang loop na may materyal na nakalagay dito ay nahuhulog sa medium. Kung ang materyal ay malapot at hindi maalis sa loop, ito ay ipapahid sa dingding ng sisidlan at pagkatapos ay hugasan ng isang likidong daluyan.
Kapag inoculating sa slanted meat-peptone agar, ang test tube ay kinuha sa kaliwang kamay sa pagitan ng mga daliri I at II upang ang base ng tubo ay nasa ibabaw ng kamay at ang inoculation ay isinasagawa sa ilalim ng kontrol ng mata. Alisin ang stopper mula sa test tube gamit ang iyong kanang kamay gamit ang mga daliri V at IV, nang hindi hinahawakan ang bahagi ng stopper na pumapasok sa loob ng test tube. Ang natitirang 3 daliri ng kanang kamay ay mananatiling libre para sa
pagkuha ng bacterial loop kung saan isinasagawa ang inoculation. Ang loop ay gaganapin tulad ng isang panulat. Matapos tanggalin ang takip, ang test tube na may nutrient medium ay pinananatili sa isang hilig na posisyon upang maiwasan ang mga dayuhang microorganism na makapasok dito mula sa hangin.
Ang isang loop na may subcultured na materyal dito ay ipinasok sa test tube hanggang sa ibaba, ibinababa nang patag sa ibabaw ng nutrient medium at isang stroke ay inilapat na may mga paggalaw ng sliding mula sa ibaba hanggang sa itaas, mula sa isang dingding ng test tube patungo sa isa pa. .
Kapag naghahasik sa ibabaw ng isang siksik na nutrient medium sa Petri dish, ang ulam ay hawak sa kaliwang kamay. Ang ibaba ay hinahawakan sa isang gilid ng mga daliri I at II, at sa kabilang banda ng mga daliri IV at V. Ang talukap ng mata, bahagyang nakabukas upang ang isang loop o spatula ay maaaring malayang dumaan sa nagresultang puwang, ay naayos gamit ang mga daliri I at III o I at II. Ang isang maliit na halaga ng materyal na pansubok ay pinahiran ng bacterial loop sa ibabaw ng nutrient medium sa gilid ng ulam. Pagkatapos ay sinusunog ang loop upang sirain ang anumang labis na materyal dito. Ang linya ng paghahasik ay nagsisimula mula sa lugar kung saan matatagpuan ang materyal. Ang bacterial loop ay inilalagay nang patag sa nutrient medium upang hindi magasgasan ang ibabaw nito, at ang mga stroke ay ginagawa sa buong medium. Dapat mong subukang tiyakin na ang mga stroke na inilapat sa pamamagitan ng loop ay matatagpuan nang malapit sa isa't isa hangga't maaari, dahil pinahaba nito ang pangkalahatang linya ng paghahasik at ginagawang posible na makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya ng mga mikrobyo. Upang pantay na ipamahagi ang inoculated na materyal sa ibabaw ng siksik na nutrient medium, maaari kang gumamit ng tampon o spatula sa halip na isang loop.
Ang paghahasik sa pamamagitan ng pag-iniksyon sa isang haligi ng nutrient medium ay isinasagawa sa isang test tube na ang medium ay nagyelo sa anyo ng isang haligi. Ang test tube ay kinukuha sa kaliwang kamay, gaya ng dati, at ang isang loop na may materyal dito ay nakadikit sa gitna ng column hanggang sa ilalim ng test tube.
Upang pag-aralan ang mga katangian ng mga kolonya, ang mga mikrobyo ay nilinang sa solid nutrient media sa mga Petri dish. Kapag naghahasik ng materyal, sinusubukan nilang makakuha ng nakahiwalay na paglaki ng mga kolonya. Ang mga inoculated dish ay unang tinitingnan sa mata o sa pamamagitan ng isang magnifying glass, pagkatapos ay ilalagay ang mga ito nang pabaligtad sa entablado ng mikroskopyo at ang mga kolonya ay tinitingnan sa transmitted light na may low-power na layunin at isang makitid na siwang.
Ang mga kolonya ay nailalarawan sa laki, hugis, tabas ng gilid, lunas, ibabaw, kulay, istraktura at pagkakapare-pareho.
Magnitude Natutukoy ang isang kolonya sa pamamagitan ng diameter nito. Depende sa diameter, mayroong mga point colonies (diameter na mas mababa sa 1 mm), maliit (diameter 1-2 mm), medium (diameter 2-4 mm) at malaki (diameter 4-6 mm o higit pang mga).
Form Ang mga kolonya ay maaaring regular - bilog, irregular - amoeboid, rhizoid - hugis-ugat, nakapagpapaalaala sa magkakaugnay na mga ugat ng puno.
Katangian ng tabas ng gilid natutukoy sa pamamagitan ng pagsusuri sa kolonya sa ilalim ng magnifying glass o mikroskopyo na may mababang pag-magnify. May mga makinis na gilid sa anyo ng isang malinaw na tinukoy na linya at hindi pantay (scalloped, wavy, fringed).
Relief ng kolonya nailalarawan sa pamamagitan ng elevation nito sa ibabaw ng nutrient medium at ang tabas ng hugis sa isang vertical na seksyon. Ang kaluwagan ng kolonya ay natutukoy sa mata o gamit ang magnifying glass kapag tiningnan mula sa itaas at mula sa gilid. Ang mga ito ay nakikilala (hugis-drop, hugis-simboryo, hugis-kono, mga kolonya na may depressed center, flat).
Ibabaw Ang mga kolonya ay maaaring matte o makintab na may makintab, tuyo o basa, makinis o magaspang. Ang mga makinis na kolonya ay itinalaga ng letrang S (makinis), ang mga magaspang na kolonya ng letrang R (magaspang), na nangangahulugang "makinis" at "magaspang," ayon sa pagkakabanggit. Ang paglipat ng mga S-form sa R-form ay sinusunod sa panahon ng dissociation. Ang kababalaghan ng dissociation sa mga pathogenic microbes ay sinusunod sa ilalim ng impluwensya ng antibyotiko at chemotherapy, mga tiyak na kadahilanan ng kaligtasan sa sakit na nabuo sa panahon ng nakakahawang proseso, pati na rin kapag ang microbe ay pumasok sa panlabas na kapaligiran.
Kulay ng kolonya tinutukoy ng pigment na ginawa ng microbial culture. Ang napakaraming karamihan ng pathogenic bacteria ay hindi gumagawa ng pigment, bilang isang resulta kung saan ang kanilang mga kolonya ay walang kulay o milky-turbid na kulay, katulad ng opal. Sa ipinadalang liwanag, ang mga naturang kolonya ay higit pa o hindi gaanong transparent. Ang mga microbes na bumubuo ng pigment ay gumagawa ng mga kolonya ng iba't ibang kulay: cream, yellow, golden-orange, blue, red, lilac, black, atbp.
Istraktura ng kolonya tinutukoy sa ipinadalang liwanag sa mababang mikroskopyo magnification.
Batay sa likas na katangian ng istraktura, ang mga sumusunod na uri ng mga kolonya ay nakikilala:
1) hyaline - walang kulay, transparent, walang tiyak na nakikitang istraktura;
2) butil-butil;
3) filamentous o fibrous, na nailalarawan sa pagkakaroon ng mahaba, siksik na magkakaugnay na mga thread sa kapal ng kolonya.
Consistency ng kolonya sinusuri sa pamamagitan ng paghawak o pag-alis ng isang piraso ng materyal mula dito gamit ang bacterial loop.
Depende sa pagkakapare-pareho ng kolonya, mayroong:
1) pasty, madaling alisin at hugasan sa ibabaw ng nutrient medium, tulad ng mantikilya;
2) malapot o mauhog, dumidikit at sumusunod sa likod ng loop;
3) mahibla o parang balat, siksik, inalis mula sa ibabaw ng nutrient medium sa anyo ng isang nababanat na pelikula na naaayon sa laki at hugis ng kolonya;
4) marupok, tuyo, gumuho na mga loop kapag hinawakan.
Sa likidong nutrient media ang pattern ng paglago ng microbes ay hindi gaanong magkakaibang kaysa sa solid nutrient media. Gayunpaman, dito rin natukoy ang mga sumusunod na anyo ng paglaki ng bakterya.
Nutrient media para sa bacterial cultivation
Upang ihiwalay ang mga purong kultura ng pathogenic bacteria, ginagamit ang nutrient media na may nakapirming pH na pinakamainam para sa kanilang paglaki. Karamihan sa mga bakterya ay maaaring lumago sa iba't ibang nutrient media; ang pagbubukod ay chlamydia at rickettsia, na hindi lumalaki savitro mga kultura sa labas ng cell. Ang kapaligirang ginagamit ay dapat maglaman
Mga sangkap na ginagamit ng bakterya para sa iba't ibang proseso ng biosynthetic.
Pangkalahatang pinagmumulan nitrogen at carbon - protina hydrolysates (naglalaman ng buong hanay ng mga amino acid), peptides at peptone. Ang mga unibersal na pinagmumulan ng mga bitamina at microelement ay mga extract ng protina ng pinagmulan ng hayop o halaman at mga hydrolysate ng protina.
pH kapaligiran. Sa ilang mga kaso, ang mahahalagang aktibidad ng bakterya ay sinamahan ng isang pagbabago sa pH sa acidic o alkaline na bahagi, na nangangailangan ng pagdaragdag ng iba't ibang mga buffer system sa media (karaniwan ay isang phosphate buffer ang ginagamit). Ang balanseng media ay nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na buffering capacity at isang stable na pH optimum. Mahalaga rin na lumikha ng pinakamainam na konsentrasyon ng O 2 at CO 2.
Paghahasik at paglilinang
Kung mayroong sapat na nilalaman ng pathogenic bacteria sa sample, ang inoculation ay isinasagawa sa solid nutrient media (upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya). Kung kakaunti ang bakterya sa materyal ng pagsubok, ang pagbabakuna ay isinasagawa sa likidong pagpapayaman ng media. Sa pagsasagawa, ang paghihiwalay ng medyo hindi mapagpanggap na bakterya ay karaniwang isinasagawa sa simpleng media (halimbawa, KA, Ploskirev agar, thioglycollate broth, Sabouraud agar, atbp.). Upang ihiwalay ang mga fastidious species, idagdag sustansya(dugo, suwero, yeast extract, atbp.), pati na rin sumisipsip ng mga nakakalason na metabolite na nabuo sa panahon ng paglaki ng bakterya(halimbawa, uling). Ang mga microbiological loop at, hindi gaanong karaniwan, ang mga karayom at spatula ay ginagamit para sa inoculation.
Pagkuha ng mga hiwalay na kolonya
Upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya sa pagsasanay, ang pagbabago ng Drigalski sieving ay kadalasang ginagamit. Upang gawin ito, ang materyal ay inilapat sa ibabaw ng isang siksik na nutrient medium na mas malapit sa gilid at isang "plaque" ay ginawa. Pagkatapos ang materyal ay ibinahagi mula dito sa apat na mga parisukat, gumuhit ng mga stroke sa isang loop, tulad ng ipinapakita sa Fig. 1-12, pagpapaputok ng loop pagkatapos seeding bawat parisukat. Ang pamamaraang ito ay nagpapahintulot sa iyo na makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya at pag-aralan ang mga ito. Ang isang pagbubukod ay ang pamamaraan ng kultura para sa pagsusuri sa bacteriological ng ihi (ang pamamaraan ng streak seeding ay ipinapakita sa Fig. 1-13). Ang mga pamamaraan na ito ay angkop para sa paghahasik ng aerobic at facultative anaerobic bacteria, pati na rin ang banayad na anaerobes.
Temperatura ng paglilinang
Ang mga pathogen bacteria ay nag-iiba sa mga temperatura na pinakamainam para sa kanilang paglaki, ngunit karamihan ay lumalaki nang maayos sa 35-37 °C. Ang pagbubukod ay ilang atypical mycobacteria, ang sanhi ng salot, listeria at leptospira (temperatura pinakamabuting kalagayan 20-30 ° C), pati na rin ang Campylobacterjejuni(temperatura pinakamabuting kalagayan 42 °C).
Ang mga bakterya ay malinaw na nahahati kaugnay sa nilalaman ng oxygen sa kapaligiran ng paglilinang.
Aerobes. Ang aerobic bacteria ay lumaki sa mga simpleng thermostat. Ang ilang facultative anaerobic species ay maaari ding linangin sa atmospheric air, ngunit mas mahusay na ilagay ang mga pananim sa mga thermostat na may dosed supply ng oxygen. Sa pagsasagawa, mas madalas silang inilalagay sa mga desiccator, kung saan dinadala ang isang nasusunog na kandila; matapos itong masunog sa atmospera, bumababa ang nilalaman ng oxygen at tumataas ang nilalaman ng CO 2.
Anaerobes. Ang mga inoculation ng anaerobic bacteria sa likidong media ay puno ng Vaseline o iba pang langis. Kapag gumagamit ng siksik na media, ang mga pananim ay nilinang sa mga espesyal na aparato - anaerostats (kung saan ang hangin ay pumped out) o ang mga pananim ay puno ng isang manipis na layer ng agar. Ang mga anaerobic na kondisyon ay maaaring malikha ng kemikal sa pamamagitan ng paglalagay ng mga pananim sa mga desiccator, sa ilalim kung saan ang isang alkaline na solusyon ng pyrogallol, na sumisipsip ng oxygen, ay ibinuhos. Maaari mo ring gamitin ang mga paraan ng Fortner, Zeissler at Weinberg.
Paraan ni Fortner. Ang mga inoculation ay isinasagawa sa isang Petri dish na may makapal na layer ng daluyan, na hinati sa kalahati ng isang makitid na uka na hiwa sa agar. Ang isang kultura ng aerobic bacteria ay inoculated sa isang kalahati, at anaerobic bacteria sa isa. Ang mga gilid ng ulam ay puno ng paraffin at incubated sa isang termostat. Sa una, ang paglago ng aerobes ay sinusunod, at pagkatapos (pagkatapos ng pagsipsip ng oxygen) - ang paglago ng anaerobes.
Paraan ng Zeissler ginagamit upang ihiwalay ang mga purong kultura ng spore-forming anaerobes. Upang gawin ito, inoculate sa Kitta-Tarozzi medium, magpainit ng 15 minuto sa 80 °C (upang sirain ang mga vegetative form), punuin ng petroleum jelly at i-incubate sa loob ng 24 na oras. Pagkatapos ay inoculate sa sugar-blood agar para makakuha ng mga purong kultura. Pagkatapos ng 24 na oras na paglilinang, ang mga kahina-hinalang kolonya ay sinusuri at sinusuri sa Kitta-Tarozzi medium (sinusundan ng pagsubaybay sa kadalisayan ng nakahiwalay na kultura).
Pamamaraan ng Weinberg ginamit upang makakuha ng mga purong kultura ng mahigpit na anaerobes. Ang mga kulturang lumago sa Kitta-Tarozzi medium ay idinagdag sa sabaw ng asukal. Pagkatapos, gamit ang isang Pasteur pipette na may selyadong dulo, ang materyal ay inililipat sa makitid na mga test tube (Vignal tubes) na may asukal na MPA, na inilulubog ang pasteur pipette sa ilalim ng test tube. Ang inoculated tubes ay mabilis na pinalamig ng malamig na tubig, na nagpapahintulot sa mga indibidwal na bacterial cell na maayos sa kapal ng solidified agar. Ang mga tubo ay incubated at ang lumaki na mga kolonya ay sinusuri. Kung ang isang kahina-hinalang kolonya ay napansin, ang isang hiwa ay ginawa sa lugar nito, ang kolonya ay mabilis na napili at inoculated sa daluyan ng Kitta-Tarozzi (sinusundan ng pagsubaybay sa kadalisayan ng nakahiwalay na kultura).
Mga pamamaraan ng paglilinang
Kapag lumalaki ang bakterya, ginagamit ang isang nakatigil na pamamaraan, isang malalim na pamamaraan ng paglilinang na may aeration, at isang paraan ng daloy ng nutrient media. Alinsunod sa mga pamamaraan ng paglilinang, ang mga kultura ng bakterya ay nahahati sa pana-panahon(para sa nakatigil at malalim na paglilinang) at tuloy-tuloy(na may paglilinang ng daloy).
Nakatigil na pamamaraan-- kadalasang ginagamit sa pagsasanay. Ang komposisyon ng media ay nananatiling pare-pareho; walang karagdagang mga manipulasyon na isinasagawa sa kanila.
Malalim na pamamaraan ng paglilinang ginagamit sa pang-industriyang paglilinang ng bacterial biomass, kung saan ginagamit ang mga espesyal na reactor boiler. Nilagyan ang mga ito ng mga sistema para sa pagpapanatili ng temperatura, pagbibigay ng iba't ibang nutrients sa sabaw, paghahalo ng biomass at patuloy na pagbibigay ng oxygen. Ang paglikha ng mga kondisyon ng aerobic sa buong kapal ng medium ay nagtataguyod ng daloy ng mga proseso ng enerhiya sa kahabaan ng aerobic path, na nag-aambag sa maximum na paggamit ng potensyal ng enerhiya ng glucose at, dahil dito, ang pinakamataas na ani ng biomass.
Paraan ng daloy ng media(paraan ng pang-industriya na paglilinang) ay nagbibigay-daan sa iyo na patuloy na mapanatili ang isang kultura ng bakterya sa yugto ng paglaki ng exponential, na nakakamit sa pamamagitan ng patuloy na pagdaragdag ng mga sustansya at pag-alis ng isang tiyak na bilang ng mga selula ng bakterya. Ang pagkakaroon ng bakterya sa exponential stage ng paglago ay nagsisiguro ng pinakamataas na ani ng iba't ibang biologically active substances (bitamina, antibiotics, atbp.).
Pangunahing pagkakakilanlan ng bakterya
Sa karamihan ng mga kaso, ang pag-aaral ng mga katangian ng paglago para sa pangunahing pagkakakilanlan ng mga pathogen ay isinasagawa sa mga kolonya na lumaki sa loob ng 18-24 na oras.Ang likas na katangian ng paglago ng bacterial sa iba't ibang media ay maaaring magbigay ng maraming kapaki-pakinabang na impormasyon. Sa pagsasagawa, isang medyo maliit na hanay ng mga pamantayan ang ginagamit. Sa likidong media, ang likas na katangian ng ibabaw (pagbuo ng pelikula) o paglago sa ilalim (uri ng sediment) at ang pangkalahatang labo ng daluyan ay karaniwang isinasaalang-alang. Sa solid media, bumubuo ang bakterya mga kolonya--nakahiwalay na mga istraktura na nagreresulta mula sa paglaki at akumulasyon ng bakterya. Ang mga kolonya ay lumitaw bilang isang resulta ng paglaki at pagpaparami ng isa o higit pang mga selula. kaya, Ang subculture mula sa kolonya ay kasunod na ginagawang posible na gumana sa isang purong kultura ng pathogen. Ang paglaki ng bakterya sa siksik na media ay may higit pang mga katangiang katangian.
Sukat at hugis ng mga kolonya
Ang mga mahahalagang katangian ng mga kolonya ay ang kanilang sukat at hugis. Ang mga kolonya ay maaaring malaki o maliit. Ang laki ng mga kolonya ay isang tampok na nagbibigay-daan sa isa na makilala sa pagitan ng iba't ibang mga species, genera, at kahit na mga uri ng bakterya.
Sa karamihan ng mga kaso, ang mga kolonya ng gram-positive bacteria ay mas maliit kaysa sa mga kolonya ng gram-negative na bacteria. Ang mga kolonya ng bakterya ay maaaring patag, nakataas, matambok, o may depress o nakataas na sentro. Isa pang mahalagang palatandaan -- hugis ng mga gilid ng mga kolonya. Kapag pinag-aaralan ang hugis ng mga kolonya, ang likas na katangian ng ibabaw nito ay isinasaalang-alang: matte, makintab, makinis o magaspang. Ang mga gilid ng mga kolonya ay maaaring makinis, kulot, lobed (deeply indented), tulis-tulis, eroded, fringed, atbp. Ang laki at hugis ng mga kolonya ay kadalasang maaaring magbago. Ang ganitong mga pagbabago ay kilala bilang paghihiwalay.Ang mga asosasyon ng S- at R-duc ay madalas na matatagpuan. Ang mga S-colonies ay bilog, makinis at matambok, na may makinis na mga gilid at makintab na ibabaw. Ang mga R-colonies ay hindi regular ang hugis, magaspang, may tulis-tulis ang mga gilid.
Kulay ng kolonya
Kapag tumitingin ng mga pananim, bigyang-pansin ang kulay ng mga kolonya. Mas madalas ang mga ito ay walang kulay, puti, mala-bughaw, dilaw o murang kayumanggi; mas madalas - pula, lila, berde o itim. Minsan nagiging iridescent ang mga kolonya, ibig sabihin, kumikinang sila sa lahat ng kulay ng bahaghari [mula sa Griyego. iris bahaghari]. Ang pangkulay ay nangyayari bilang isang resulta ng kakayahan ng bakterya na bumubuo ng pigment. Sa espesyal na media sa pagkakaiba-iba, kabilang ang mga espesyal na sangkap o tina, ang mga kolonya ay maaaring makakuha ng iba't ibang kulay (itim, asul, atbp.) dahil sa pagsasama ng mga tina o ang kanilang pagpapanumbalik mula sa isang walang kulay na anyo. Sa kasong ito, ang kanilang kulay ay hindi nauugnay sa pagbuo ng anumang mga pigment.
Amoy
Ang amoy ay isang hindi gaanong mahalagang tanda ng mga kolonya, dahil ang mga asosasyong ibinubunga nito ay subjective. Sa partikular, ang mga kultura ng Pseudomonas aeruginosa ay may amoy ng karamelo, ang mga kultura ng Listeria ay may amoy ng whey, ang Proteus ay may mabahong amoy, at ang Nocardia ay may amoy ng sariwang hinukay na lupa.
Paraan ng Pasteur (paglilimita sa pamamaraan ng pagbabanto). Binubuo ito ng paggawa ng sunud-sunod na dilution mula sa materyal na pinag-aaralan sa isang likidong nutrient medium. Upang gawin ito, ang isang drop ng inoculum ay ipinakilala sa isang test tube na may sterile liquid medium, ang drop mula dito ay inilipat sa susunod na test tube at hanggang sa 8...10 test tubes ay inoculated sa ganitong paraan. Sa bawat pagbabanto, ang bilang ng mga microbial cell na pumapasok sa medium ay bababa at posible na makakuha ng isang dilution kung saan sa buong test tube na may medium ay magkakaroon lamang ng isang microbial cell, kung saan ang isang purong kultura ng microorganism ay lalabas. bumuo. Dahil lumalago ang mga mikrobyo sa likidong media, i.e. ay madaling ibinahagi sa buong kapaligiran, mahirap na ihiwalay ang isang microbial cell mula sa isa pa. Kaya, ang pamamaraan ni Pasteur ay hindi palaging nagbibigay ng isang dalisay na kultura. Samakatuwid, sa kasalukuyan, ang pamamaraang ito ay pangunahing ginagamit upang paunang bawasan ang konsentrasyon ng mga mikroorganismo sa materyal bago ito inoculate sa isang solidong daluyan upang makakuha ng mga nakahiwalay na kolonya.
Mga pamamaraan para sa mekanikal na paghihiwalay ng mga microorganism gamit ang solid nutrient media. Kasama sa mga ganitong pamamaraan ang pamamaraang Koch at ang pamamaraang Drigalski.
Paraan ng Koch (malalim na paraan ng paghahasik). Ang materyal na pansubok ay ipinapasok gamit ang isang bacteriological loop o Pasteur pipette sa isang test tube na may molten dense nutrient medium. Pukawin ang mga nilalaman ng test tube nang pantay-pantay sa pamamagitan ng pag-ikot nito sa pagitan ng iyong mga palad. Ang isang patak ng diluted na materyal ay inilipat sa pangalawang tubo ng pagsubok, mula sa pangalawa hanggang sa pangatlo, atbp. Ang mga nilalaman ng bawat test tube, simula sa una, ay ibinubuhos sa sterile Petri dish. Matapos ang daluyan ay patigasin sa mga pinggan, sila ay inilalagay sa isang termostat para sa paglilinang.
Upang ihiwalay ang mga anaerobic microorganism gamit ang paraan ng Koch, kinakailangan upang limitahan ang pag-access ng oxygen sa kultura. Para sa layuning ito, ang ibabaw ng deep seeding sa isang Petri dish ay puno ng sterile mixture ng paraffin at petroleum jelly (1:1). Maaari mo ring iwanan ang inoculum, na lubusan na hinaluan ng agar medium, nang direkta sa test tube. Sa kasong ito, ang cotton plug ay pinalitan ng isang goma o ang ibabaw ng agar ay puno ng pinaghalong paraffin at petroleum jelly. Upang kunin ang mga lumalagong kolonya ng anaerobic microorganism, ang mga tubo ay bahagyang pinainit sa pamamagitan ng mabilis na pag-ikot sa ibabaw ng apoy ng burner. Ang agar na katabi ng mga dingding ay natutunaw, at ang haligi ay madaling dumudulas sa inihandang Petri dish. Susunod, ang haligi ng agar ay pinutol ng isang sterile scalpel, ang mga kolonya ay tinanggal gamit ang isang sterile loop o isang sterile capillary cutter at inilipat sa isang likidong daluyan.
Pamamaraan ng Drigalski ay batay sa mekanikal na paghihiwalay ng mga microbial cell sa ibabaw ng isang siksik na nutrient medium sa Petri dishes. Ang bawat microbial cell, na nag-aayos ng sarili sa isang tiyak na lugar, ay nagsisimulang dumami, na bumubuo ng isang kolonya.
Para sa paghahasik gamit ang pamamaraang Drygalsky, maraming mga pagkaing Petri na puno ng isang siksik na nutrient medium ang ginagamit. Ang isang patak ng materyal na pagsubok ay inilalagay sa ibabaw ng daluyan. Pagkatapos, gamit ang isang sterile spatula, ang patak na ito ay ipinamamahagi sa buong nutrient medium (lawn seeding).
Ang paghahasik ay maaari ding gawin sa pamamagitan ng streaking gamit ang bacteriological loop. Ang parehong spatula o loop ay ginagamit upang maghasik ng pangalawa, pangatlo, atbp. mga tasa. Bilang isang patakaran, sa unang tasa pagkatapos ng paglilinang ng buto, lumilitaw ang paglaki ng microbial sa anyo ng isang tuluy-tuloy na patong; sa kasunod na mga tasa, bumababa ang nilalaman ng mga microorganism at nabuo ang mga nakahiwalay na kolonya, kung saan ang isang purong kultura ay madaling ihiwalay sa pamamagitan ng screening .
Kaya, sa mga unang sektor, ang tuluy-tuloy na paglago ay nakuha, at kasama ang kasunod na mga stroke, ang mga nakahiwalay na kolonya ay lalago, na kumakatawan sa mga supling ng isang cell.
Upang i-save ang media at mga kagamitan, maaari mong gamitin ang isang tasa, hatiin ito sa mga sektor, at sunud-sunod na ihasik ang mga ito ng isang streak (depleting streak method). Upang gawin ito, kunin ang materyal sa isang loop at gumuhit ng isang serye ng mga parallel stroke kasama nito, una sa ibabaw ng unang sektor, at pagkatapos ay sunud-sunod na binhi ang lahat ng iba pang mga sektor na may mga cell na natitira sa loop. Sa bawat kasunod na stroke, bumababa ang bilang ng mga seeded cell.
Paraan para sa paghihiwalay ng mga purong kultura gamit ang mga kemikal ginagamit upang ihiwalay ang mga kultura ng mga microorganism na lumalaban sa ilang mga kemikal. Halimbawa, gamit ang pamamaraang ito posible na ihiwalay ang isang purong kultura ng tuberculous mycobacteria na lumalaban sa mga acid, alkalis at alkohol. Sa kasong ito, ang materyal na pinag-aaralan ay pinupuno ng 15% acid solution o antiformin bago itanim at itago sa thermostat sa loob ng 3...4 na oras. Pagkatapos ng pagkakalantad sa acid o alkali, ang mga selula ng tuberculosis bacillus ay mananatiling buhay, at lahat ng iba pang microorganism na nakapaloob sa test material ay namamatay. Pagkatapos neutralisahin ang acid o alkali, ang ginagamot na materyal ay inihahasik sa isang solidong daluyan at ang mga nakahiwalay na kolonya ng tuberculosis pathogen ay nakuha.
Ang pag-aaral ng bakterya ay may malaking praktikal na kahalagahan para sa mga tao. Sa ngayon, ang isang malaking bilang ng mga prokaryote ay natuklasan, na naiiba sa bawat isa sa pathogenicity, lugar ng pamamahagi, hugis, sukat, bilang ng flagella at iba pang mga parameter. Upang pag-aralan ang strain na ito nang detalyado, isang bacteriological research method ang ginagamit.
Anong mga pamamaraan ng cell ang mayroon?
Upang matukoy kung ang bakterya ay pathogenic, sinusuri ang kultura sa iba't ibang paraan. Sa kanila:
1. Bacterioscopic na paraan.
2. Bacteriological na pamamaraan.
3. Biyolohikal na pamamaraan.
Ang bacterioscopic at bacteriological ay direktang nakabatay sa trabaho sa mga prokaryotic na selula, kapag kinakailangan ang biological analysis upang pag-aralan ang epekto ng naturang mga cell sa buhay na organismo ng mga eksperimentong hayop. Batay sa antas ng pagpapakita ng ilang mga palatandaan ng sakit, ang siyentipiko ay maaaring magtapos tungkol sa pagkakaroon o kawalan ng mga pathogen bacteria sa sample, at natural din na i-multiply ang mga ito sa katawan ng hayop upang makuha ang kanilang kultura at gamitin ang mga ito sa iba pang gawain.
Ang bacteriological research method ay naiiba sa bacterioscopic one. Sa una, ang isang espesyal na inihandang kultura ng mga nabubuhay na prokaryote ay ginagamit para sa pagsusuri, habang sa pangalawa, ang trabaho ay isinasagawa gamit ang mga patay o buhay na mga cell sa isang glass slide.
Mga yugto ng pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological. Microbiology
Ang prinsipyo ng pag-aaral ng mga katangian ng isang bacterial culture ay maaaring maging kapaki-pakinabang kapwa para sa mga microbiologist na nagtakda ng layunin na pag-aralan ang mga prokaryotic cells, at para sa mga laboratoryo technician na ang gawain ay itatag ang pathogenicity o non-pathogenicity ng bacteria, at pagkatapos ay ang diagnosis ng pasyente. .
Ang pamamaraan para sa pag-aaral ng bakterya ay nahahati sa tatlong yugto:
1. Paghihiwalay ng bakterya mula sa unang sample.
2. Paghahasik ng bacteria at pagpapalaki at pag-aaral ng mga katangian nito.
Unang yugto
Ang isang sample, o smear, ay kinuha mula sa libreng ibabaw ng daluyan o mula sa pasyente. Kaya, nakakakuha tayo ng "cocktail" ng maraming uri ng bacteria na dapat na inoculated sa isang nutrient medium. Minsan nagiging posible na agad na ihiwalay ang mga kinakailangang bakterya, alam ang kanilang mga lugar ng pamamahagi sa katawan.
Pagkatapos ng dalawa o tatlong araw, ang mga kinakailangang kolonya ay pipiliin at ihasik sa solidong media sa mga Petri dish gamit ang isang sterile loop. Maraming laboratoryo ang gumagana sa mga test tube na maaaring naglalaman ng solid o likidong nutrient media. Ito ay kung paano isinasagawa ang bacteriological method ng pananaliksik sa microbiology.
Pangalawang yugto
Matapos makuha ang mga indibidwal na kolonya ng bakterya, ang direktang macro- at microanalysis ay isinasagawa. Ang lahat ng mga parameter ng mga kolonya ay sinusukat, ang kulay at hugis ng bawat isa sa kanila ay tinutukoy. Kadalasan, ang mga kolonya ay binibilang sa isang Petri dish at pagkatapos ay sa panimulang materyal. Mahalaga ito kapag sinusuri ang pathogenic bacteria, ang bilang nito ay tumutukoy sa antas ng sakit.
Ang pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological, ang ika-2 yugto kung saan ay ang pag-aaral ng mga indibidwal na kolonya ng mga microorganism, ay maaaring isama sa isang biological na pamamaraan para sa pagsusuri ng bakterya. Ang isa pang layunin ng trabaho sa yugtong ito ay upang madagdagan ang dami ng panimulang materyal. Magagawa ito sa isang nutrient medium, o maaari kang magsagawa ng eksperimento sa mga natural na kondisyon sa mga nabubuhay na eksperimentong organismo. Ang mga pathogen bacteria ay dadami, at bilang resulta, ang dugo ay maglalaman ng milyun-milyong prokaryotic cells. Mula sa dugo na kinuha ay madaling ihanda ang kinakailangang materyal sa pagtatrabaho para sa bakterya.
Ikatlong yugto
Ang pinakamahalagang bahagi ng pag-aaral ay ang pagpapasiya ng morphological, biochemical, toxigenic at antigenic properties ng bacterial culture. Ang gawain ay isinasagawa gamit ang dati nang "purified" na mga kultura sa isang nutrient medium, pati na rin sa mga paghahanda (madalas na marumi) sa ilalim ng mikroskopyo.
Ang pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological ay nagpapahintulot sa amin na itatag kung ang pathogenic o oportunistikong bakterya ay nabibilang sa isa o ibang sistematikong grupo, pati na rin matukoy ang kanilang paglaban sa mga gamot. Stage 3 - antibiotics, i.e. pagsusuri ng pag-uugali ng mga bacterial cell sa pagkakaroon ng mga gamot sa kapaligiran.
Ang pag-aaral ng paglaban ng isang kultura sa isang antibiotic ay may malaking praktikal na kahalagahan kapag kinakailangan na magreseta ng kinakailangan at, higit sa lahat, mabisang gamot para sa isang partikular na pasyente. Ito ay kung saan makakatulong ang bacteriological research method.
Ano ang isang nutrient medium?
Upang bumuo at magparami, ang bakterya ay dapat na nasa naunang inihandang nutrient media. Sa pamamagitan ng pagkakapare-pareho maaari silang maging likido o solid, at sa pinagmulan - halaman o hayop.
Mga pangunahing kinakailangan para sa nutrient media:
1. Sterility.
2. Pinakamataas na transparency.
3. Mga pinakamainam na tagapagpahiwatig ng kaasiman, aktibidad ng tubig at iba pang biological na dami.
Pagkuha ng mga hiwalay na kolonya
1. Pamamaraang Drigalsky. Kabilang dito ang paglalagay ng pahid na naglalaman ng iba't ibang uri ng microorganism sa isang bacterial loop. Ang loop na ito ay dumaan sa unang Petri dish na may nutrient medium. Susunod, nang hindi binabago ang loop, ang natitirang paraan ng materyal ay isinasagawa sa pangalawa at pangatlong mga pagkaing Petri. Kaya, sa mga huling sample ng kolonya, ang bakterya ay hindi inoculated ng masyadong makapal, at sa gayon ay pinapasimple ang pagkakataon na mahanap ang bakterya na kinakailangan para sa trabaho.
2. Paraan ng Koch. Gumagamit ito ng mga test tube na may molten nutrient medium. Ang isang loop o pipette na may pahid ng bakterya ay inilalagay doon, pagkatapos kung saan ang mga nilalaman ng tubo ay ibinuhos sa isang espesyal na plato. Ang agar (o gelatin) ay tumigas pagkatapos ng ilang oras, at sa kapal nito ay madaling makita ang nais na mga kolonya ng mga selula. Mahalagang palabnawin ang pinaghalong bacteria sa mga test tubes bago simulan ang trabaho upang hindi masyadong mataas ang konsentrasyon ng mga microorganism.
Ang mga yugto kung saan ay batay sa paghihiwalay ng nais na kultura ng bakterya, ay hindi magagawa nang wala ang dalawang paraan ng paghahanap ng mga nakahiwalay na kolonya.
Antibioticogram
Biswal, ang reaksyon ng bakterya sa mga gamot ay mapapansin sa dalawang praktikal na paraan:
1. Paraan ng papel na disc.
2. Dilution ng bacteria at antibiotic sa isang likidong medium.
Ang paraan ng paper disc ay nangangailangan ng kultura ng mga mikroorganismo na lumaki sa isang solidong nutrient medium. Ang ilang mga bilog na piraso ng papel na pinapagbinhi ng mga antibiotic ay inilalagay sa naturang daluyan. Kung matagumpay na na-neutralize ng gamot ang mga selula ng bakterya, pagkatapos ng naturang paggamot ay magkakaroon ng isang lugar na walang mga kolonya. Kung negatibo ang reaksyon sa antibiotic, mabubuhay ang bacteria.
Sa kaso ng paggamit ng likidong nutrient medium, maghanda muna ng ilang test tube na may bacterial culture na may iba't ibang antas ng dilution. Ang mga antibiotic ay idinagdag sa mga tubo na ito, at ang proseso ng pakikipag-ugnayan sa pagitan ng sangkap at mga mikroorganismo ay sinusubaybayan sa loob ng 24 na oras. Sa huli, ang isang mataas na kalidad na antibiogram ay nakuha, kung saan maaaring hatulan ng isa ang pagiging epektibo ng gamot para sa isang naibigay na pananim.
Pangunahing gawain ng pagsusuri
Ang mga layunin at yugto ng pamamaraan ng bacteriological na pananaliksik ay nakalista dito bawat punto.
1. Kunin ang panimulang materyal na gagamitin upang ihiwalay ang mga kolonya ng bakterya. Ito ay maaaring isang pahid mula sa ibabaw ng anumang bagay, mucous membrane o cavity ng organ ng tao, o isang pagsusuri sa dugo.
2. sa isang solid nutrient medium. Pagkatapos ng 24-48 na oras, ang mga kolonya ng bakterya ng iba't ibang uri ay maaaring makita sa Petri dish. Pinipili namin ang kailangan namin batay sa morphological at/o biochemical na pamantayan at nagsasagawa ng karagdagang gawain dito.
3. Pagpaparami ng nabuong kultura. Ang pamamaraan ng pananaliksik na bacteriological ay maaaring batay sa isang mekanikal o biyolohikal na pamamaraan ng pagtaas ng bilang ng mga kultura ng bakterya. Sa unang kaso, ang trabaho ay isinasagawa gamit ang solid o likidong nutrient media, kung saan ang bakterya ay dumami sa isang termostat at bumubuo ng mga bagong kolonya. Ang biological na pamamaraan ay nangangailangan ng mga natural na kondisyon upang madagdagan ang bilang ng mga bakterya, kaya dito ang eksperimentong hayop ay nahawahan ng mga mikroorganismo. Pagkalipas ng ilang araw, maraming prokaryote ang maaaring makita sa isang sample ng dugo o smear.
4. Paggawa gamit ang dalisay na kultura. Upang matukoy ang sistematikong posisyon ng bakterya, pati na rin ang kanilang pag-aari sa mga pathogen, kinakailangan na magsagawa ng masusing pagsusuri ng mga selula ayon sa mga katangian ng morphological at biochemical. Kapag nag-aaral ng mga pathogenic na grupo ng mga microorganism, mahalagang malaman kung gaano kabisa ang pagkilos ng mga antibiotic.
Ito ay isang pangkalahatang katangian ng pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological.
Mga tampok ng pagsusuri
Ang pangunahing tuntunin para sa pagsasagawa ng bacteriological research ay maximum sterility. Kung nagtatrabaho ka sa mga test tube, ang paghahasik at muling pagtatanim ng bakterya ay dapat gawin lamang sa isang heated alcohol lamp.
Ang lahat ng mga yugto ng pamamaraan ng pananaliksik sa bacteriological ay nangangailangan ng paggamit ng isang espesyal na loop o Pasteur pipette. Ang parehong mga instrumento ay dapat na pre-treat sa apoy ng isang alcohol lamp. Tulad ng para sa pipette ng Pasteur, bago ang thermal sterilization kinakailangan na putulin ang dulo ng pipette na may mga sipit.
Ang pamamaraan ng paghahasik ng bakterya ay mayroon ding sariling mga katangian. Una, kapag nag-inoculate sa solid media, isang bacterial loop ang ipinapasa sa ibabaw ng agar. Ang loop, siyempre, ay dapat na magkaroon ng isang sample ng mga microorganism sa ibabaw. Isinasagawa din ang panloob na inoculation, kung saan ang loop o pipette ay dapat umabot sa ilalim ng Petri dish.
Kapag nagtatrabaho sa likidong media, ginagamit ang mga test tube. Narito ito ay mahalaga upang matiyak na ang mga likido ay hindi hawakan ang mga gilid ng laboratoryo glassware o stoppers, at ang mga instrumento na ginamit (pipette, loop) ay hindi hawakan ang mga dayuhang bagay at ibabaw.
Ang kahalagahan ng biological research method
Ang pagsusuri ng isang sample ng bakterya ay may praktikal na aplikasyon. Una sa lahat, ang bacteriological research method ay maaaring gamitin sa medisina. Halimbawa, kinakailangang pag-aralan ang microflora ng pasyente upang maitatag ang tamang diagnosis, pati na rin bumuo ng tamang kurso ng paggamot. Ang isang antibiogram ay tumutulong dito, na magpapakita ng aktibidad ng mga gamot laban sa pathogen.
Ginagamit ang bacterial testing sa laboratoryo upang tuklasin ang mga mapanganib na sakit tulad ng tuberculosis, relapsing fever o gonorrhea. Ginagamit din ito upang pag-aralan ang komposisyon ng bakterya ng tonsil at mga lukab ng organ.
Ang pamamaraan ng pananaliksik na bacteriological ay maaaring gamitin upang matukoy ang kontaminasyon sa kapaligiran. Batay sa data sa quantitative at qualitative na komposisyon ng isang smear mula sa ibabaw ng isang bagay, ang antas ng populasyon ng isang partikular na kapaligiran ng mga microorganism ay tinutukoy.