Dahil ang FISH test ay maaaring makakita ng mga genetic abnormalities na nagdudulot ng kanser, ito ay isang epektibong paraan para sa pag-diagnose ng ilang uri ng kanser. Ginagamit din ang pagsusulit upang kumpirmahin ang diagnosis at nagbibigay ng karagdagang impormasyon tungkol sa posibleng kahihinatnan ng sakit at ang advisability ng chemotherapy.
Halimbawa, sa mga pasyenteng may kanser sa suso, ang FISH test ng tissue na kinuha sa panahon ng biopsy ay nakakatulong na matukoy ang pagkakaroon ng mga kopya ng HER2 gene sa mga selula.
Ang mga cell na may mga kopya ng HER2 gene ay may mas maraming HER2 receptor, na tumatanggap ng mga signal na nagpapasigla sa paglaki ng mga selula ng kanser sa suso. Samakatuwid, para sa mga pasyente na may mga kopya ng gene ng HER2, ipinapayong gumamit ng Herceptin (trastuzumab), isang gamot na pumipigil sa kakayahan ng mga receptor ng HER2 na makatanggap ng mga signal.
Dahil sa mataas na gastos at kamag-anak na hindi naa-access ng FISH test, isa pang pagsubok para sa pag-detect ng breast cancer, ang immunohistochemistry (IHC), ay mas karaniwang ginagamit.
Mayroong kontrobersya sa mga medikal na lupon tungkol sa mataas na pagganap ng pagsubok sa FISH kumpara sa mga karaniwang pagsusuri. Gayunpaman, dahil sa pag-unlad ng teknolohiya, nagiging mas mura at mas naa-access ang FISH test sa iba't ibang klinikal na setting.
Paano gumagana ang FISH test
Kapag nagsasagawa ng FISH test sa sample ng tissue ng pasyente, ginagamit ang mga fluorescent na label na nagbubuklod lamang sa ilang mga rehiyon ng chromosome. Pagkatapos, sa tulong ng isang fluorescent microscope, ang mga rehiyon ng mga chromosome kung saan nakipag-ugnayan ang mga fluorescent probes ay tinutukoy, at ang pagkakaroon ng mga posibleng abnormalidad na pumukaw sa pag-unlad ng kanser.
Ang mga selula ng kanser ay maaaring magpakita ng mga sumusunod na abnormalidad:
- translocation - ang paglipat ng isang seksyon ng isang chromosome sa isang bagong posisyon sa pareho o isa pang chromosome;
- inversion - isang pagliko ng isang seksyon ng isang chromosome sa pamamagitan ng 180 degrees habang pinapanatili ang isang koneksyon sa chromosome mismo;
- pagtanggal - pagkawala ng bahagi ng isang chromosome;
- pagdoble - pagdodoble ng isang seksyon ng isang chromosome, na humahantong sa isang labis na nilalaman ng mga kopya ng isang gene sa isang cell.
Ang mga pagsasalin ay tumutulong sa pag-diagnose ng ilang uri ng leukemia, lymphoma, at sarcoma. Ang pagkakaroon ng duplikasyon sa mga selula ng kanser sa suso ay tumutulong sa doktor na pumili ng pinakamahusay na paggamot.
Ang bentahe ng FISH test kaysa sa mga karaniwang cytogenetic na pagsusuri (na sumusuri sa genetic na komposisyon ng mga cell) ay na ito ay nakakatuklas ng kahit na ang pinakamaliit na genetic na pagbabago na hindi makikita sa isang conventional microscope.
Ang isa pang mahalagang tampok ng pagsubok sa FISH ay maaari itong maisagawa sa mga cell na hindi pa nagsisimulang aktibong umunlad. Ang iba pang mga pagsusuri ay ginagawa lamang sa mga cell pagkatapos na lumaki ang mga ito sa lab sa loob ng dalawang linggo, kaya ang buong proseso ay maaaring tumagal ng hanggang tatlong linggo, kung saan ang mga resulta ng pagsubok sa FISH ay makukuha sa loob ng ilang araw.
Mga halimbawa ng FISH test para sa diagnosis ng cancer
Bagama't ang FISH test ay pinakakaraniwang ginagamit upang pag-aralan ang mga genetic na abnormalidad sa kanser sa suso, nagbibigay din ito ng mahalagang impormasyon tungkol sa iba pang mga uri ng kanser.
Halimbawa, kapag nag-diagnose ng kanser sa pantog, ang isang FISH test para sa mga selula ng ihi ay mas tumpak kaysa sa mga pagsusuri para sa mga hindi tipikal na selula. Bilang karagdagan, pinapayagan ka nitong matukoy ang pag-ulit ng kanser sa pantog 3-6 na buwan nang mas maaga.
Nakakatulong din ang FISH test na makita ang mga chromosomal abnormalities sa leukemia, kabilang ang mga cell na nagpapahiwatig ng isang agresibong anyo ng chronic lymphocytic leukemia (CLL). Ang mga pasyente na may isang agresibong anyo ng CLL ay maaaring mangailangan ng agarang paggamot, habang para sa mga hindi gaanong agresibong anyo, ang pagmamasid ay maaaring sapat.
FISH test controversy
Hindi lahat ng eksperto ay sumasang-ayon na ang FISH test ay ang pinakatumpak na pagsusuri para sa pag-diagnose ng mga kanser na madaling kapitan ng Herceptin.
Noong 2010, sinabi ng mga siyentipiko mula sa Mayo Institute (Ireland) na ang mas murang IHC test ay halos kasing epektibo sa pagtukoy ng pagkamaramdamin sa Herceptin bilang ang FISH test.
Pinuna ng iba pang mga eksperto ang FISH test dahil sa hindi pagtukoy ng maliliit na mutasyon gaya ng maliliit na pagtanggal, pagsingit, at point mutations, at para sa pagbabalewala sa ilang inversion.
Pagpapabuti ng pagsubok sa FISH
Sa kabila ng katotohanan na ang teknolohiya ng pagsubok ng FISH ay hindi pa pinapayagan ang pagsusuri sa lahat ng bahagi ng mga kromosom, patuloy itong umuunlad sa direksyong ito.
Halimbawa, noong 2007, inanunsyo ng mga siyentipiko ng Canada ang pagbuo ng isang microscope slide-sized na chip na magpapahintulot sa isang FISH test na maisagawa gamit ang isang device na akma sa iyong palad.
Tinatawag na FISH Test on a Chip, ang pinahusay na pagsubok na ito ay maghahatid ng mga resulta sa isang araw at mas mura kaysa sa iba pang mga pagsubok.
Pagpapasiya ng katayuan ng tumor ng HER-2 sa pamamagitan ng paraan ng FISH- pag-aaral ng predisposisyon sa pagbuo ng tumor at pagpili ng napapanahong sapat na paggamot para sa kanser sa suso (BC) o kanser sa tiyan (GC).
HER-2 (HER-2/neu)- Human epidermal growth factor receptor-2 ay isang protina na maaaring makaimpluwensya sa paglaki ng mga selula ng kanser. Ito ay nilikha ng isang espesyal na gene na tinatawag na HER-2/neu gene. Ang HER-2 ay ang receptor para sa isang partikular na growth factor na tinatawag na human epidermal growth factor na natural na nangyayari sa mga tao. Kapag ang epidermal growth factor ng tao ay nakakabit sa mga HER-2 na receptor sa mga selula ng kanser sa suso, maaari nitong pasiglahin ang paglaki at paghahati ng mga selulang ito. Sa malusog na tissue, ang HER-2 ay nagpapadala ng mga signal na kumokontrol sa paglaganap at kaligtasan ng cell, ngunit ang sobrang pagpapahayag ng HER-2 ay maaaring humantong sa malignant na pagbabago ng cell.
Ang hyperexpression ng HER-2 sa ilang mga subtype ng breast cancer ay humahantong sa pagtaas ng proliferation at angiogenesis, dysregulation ng apoptosis (genetically programmed self-destruction of cells). Ipinakita na ang sobrang pagpapahayag ng receptor na ito sa tissue ng tumor sa kanser sa suso ay nauugnay sa isang mas agresibong kurso ng sakit, isang pagtaas ng potensyal na metastatic ng tumor, at isang hindi gaanong kanais-nais na pagbabala. Ang pagtuklas ng kaugnayan ng sobrang pagpapahayag ng HER-2 na may mahinang pagbabala ng kanser sa suso ay humantong sa paghahanap para sa mga ganitong paraan ng paggamot na naglalayong partikular na hadlangan ang HER-2/neu oncogene (naka-target na anti-HER2 therapy).
Kanser sa Suso (BC)- isang malignant na tumor ng glandular tissue ng dibdib. Sinasakop ng RZhM ang unang lugar sa lahat ng mga malignant na sakit sa mga kababaihan.
Depende sa pagkakaroon ng mga biological marker ng tumor - ang pagpapahayag ng mga receptor ng hormone (estrogen at / o progesterone), ang pagpapahayag ng HER-2 - hormone-receptor-positive, HER-2-positibo at triple negatibong kanser sa suso ay nakahiwalay.
Ang mga uri ng HER-2/neu-positive (HER-2+) ng kanser sa suso ay nailalarawan sa mataas na pagpapahayag ng HER-2/neu na protina.
Ang HER=2/neu-negative (HER-2-) na mga uri ng kanser sa suso ay nailalarawan sa mababang pagpapahayag o kawalan ng HER-2/neu na protina.
Tinatayang isa sa limang babaeng may kanser sa suso ay positibo sa HER-2. Karamihan sa mga kanser sa suso ay umaasa sa hormone: ang mga estrogen at progesterone ay may nakapagpapasigla na epekto sa kanila (proliferative at neoplastic). Sa HER-2-positive na kanser sa suso, mayroong labis na mga receptor ng HER-2 sa ibabaw ng mga selulang tumor. Ang phenomenon na ito ay tinatawag na "positive HER-2 status" at na-diagnose sa 15-20% ng mga babaeng may breast cancer.
SIYA-2- human epidermal growth factor receptor type 2, na naroroon sa mga tisyu at normal, nakikilahok sa regulasyon ng cell division at pagkita ng kaibhan. Ang labis nito sa ibabaw ng mga selula ng tumor (hyperexpression) ay tumutukoy sa mabilis na hindi makontrol na paglaki ng neoplasm, isang mataas na panganib ng metastasis, at ang mababang bisa ng ilang uri ng paggamot. Ang HER-2-positibong kanser sa suso ay isang partikular na agresibong anyo ng sakit, kaya ang tumpak na pagpapasiya ng katayuan ng HER-2 ay napakahalaga para sa pagpili ng mga taktika sa paggamot.
Kanser sa tiyan (SC)- isang malignant na tumor na nagmumula sa epithelium ng gastric mucosa.
Ang gastric cancer ay ika-4 sa istruktura ng oncological morbidity at ika-2 sa istraktura ng oncological mortality sa mundo. Ang insidente ng gastric cancer sa mga lalaki ay 2 beses na mas mataas kaysa sa mga babae. Ang Russia ay kabilang sa mga rehiyon na may mataas na saklaw ng gastric cancer at namamatay mula sa sakit na ito. Ang diagnosis ng gastric cancer sa mga unang yugto ay mahirap dahil sa mahabang asymptomatic na kurso ng sakit. Kadalasan, ang gastric cancer ay nakikita sa mga huling yugto, kapag ang 5-taong survival rate ay hindi lalampas sa 5-10%, at ang chemotherapy ay nananatiling tanging paggamot.
Ang pangunahing paraan ng paggamot ng gastric cancer ay surgical. Gayunpaman, sa karamihan ng mga pasyente sa oras ng diagnosis, ang isang malawak na proseso ng tumor ay tinutukoy, na ginagawang imposible na magsagawa ng isang radikal na operasyon at nangangailangan ng systemic na therapy sa gamot. Ang pagsasagawa ng chemotherapy ayon sa istatistika ay makabuluhang nagpapataas sa pangkalahatang kaligtasan ng mga pasyente na may metastatic gastric cancer, na nagpapaganda ng kanilang kalidad ng buhay.
Ang HER-2 oncogene (erbB-2) ay orihinal na nakilala sa mga tumor sa suso. Ang amplification at overexpression ng gene na ito ay medyo tiyak na kaganapan para sa mga breast carcinoma at halos hindi nangyayari sa mga tumor ng iba pang mga localization. Ang gastric cancer ay tila isa sa ilang mga eksepsiyon: Ang HER-2 activation ay nabanggit sa humigit-kumulang 10-15% ng mga malignant neoplasms ng organ na ito at nauugnay sa agresibong kurso ng sakit.
Ang sobrang pagpapahayag ng HER-2 ay isang mahinang prognostic factor. Ayon sa iba't ibang mga pag-aaral, ang amplification ng HER-2 gene sa mga pasyente na may gastric cancer ay nauugnay sa mababang pangkalahatang mga rate ng kaligtasan.
Ang paraan ng FISH ay ginagamit upang masuri ang katayuan ng HER-2 sa GC at BC.
ISDA- Ang pananaliksik ay nagbibigay-daan sa iyo upang matukoy ang husay at dami ng mga pagbabago sa mga kromosom para sa pagsusuri ng mga malignant na sakit sa dugo at mga solidong tumor.
Ngayon, malawakang ginagamit ang FISH studies sa buong mundo.
FISH method (fluorescent hybridization in situ) - ang pag-aaral ng bilang ng HER-2/neu-genes sa loob ng cancer cells.
Mga indikasyon:
- kanser sa suso - para sa mga layunin ng pagbabala at pagpili ng therapy;
- kanser sa tiyan - para sa mga layunin ng pagbabala at pagpili ng therapy.
Tinutukoy ng dumadating na manggagamot.
Histological protocol at immunohistochemical protocol, IHC glass ay kinakailangan.
Interpretasyon ng mga resulta
Ang mga resulta ng pagsubok sa FISH ay ipinahayag tulad ng sumusunod:
1. Positibo (nadagdagang nilalaman, mayroong amplification ng HER-2 gene):
- HER-2 positibong kanser sa suso;
- HER-2 negatibong kanser sa suso.
Sa lahat ng mga kaso, nang walang pagbubukod, ang pagbuo at paglaki ay nauugnay sa aktibidad ng gene ng uri ng HER2. Siya ang may pananagutan sa kung gaano karaming protina ang ilalaan sa babaeng katawan para sa pagpapaunlad ng tisyu ng dibdib. Kapag ang mga unang malulusog na selula ay nabago sa mga malignant na selula, ang mga receptor ng gene ay tumatanggap ng impormasyon na nangangailangan ng karagdagang dibisyon ng cellular na materyal.
Ang gene ay nagsisimula ng isang programa upang bumuo ng karagdagang tissue sa loob ng dibdib, bagaman sa katotohanan ang cellular material na ito ay gagamitin ng tumor para sa paglaki at pag-unlad nito. Kaya, ang carcinoma, sa katunayan, ay nililinlang ang katawan, at pinipilit itong pakainin ang kanser sa gastos ng sarili nitong mga mapagkukunan.
Ang gawain ng pagsusuri ng isda sa kanser sa suso ay tiyak na tukuyin ang malfunctioning ng HER2 gene, at gumawa ng naaangkop na mga hakbang sa pagtugon sa mga tuntunin ng pagrereseta ng sapat na medikal na paggamot.
Kung ang isang pagsubok sa isda ay hindi isinasagawa sa isang napapanahong paraan para sa kanser sa suso, kung gayon kahit na ang ilang mga gamot ay ginagamit sa proseso ng paggamot, ito ay maaaring humantong sa ang katunayan na ang tumor ay patuloy na agresibong bubuo, na sumasaklaw sa lahat ng mga bagong tisyu ng suso. Ito ang mga tinatawag na kahihinatnan ng maling iniresetang therapy dahil sa kakulangan ng layunin ng data sa paggana ng HER2 gene.
Sa proseso ng pagpasa sa pagsusuri ng isda, ipinakilala ng doktor sa dugo ng pasyente ang mga espesyal na sangkap na naglalaman ng mga elemento ng pangkulay na maaaring mailarawan ang larawan ng mga chromosomal disorder. Kaya, nakikita ng doktor at higit pang mapag-aralan ang mga genetic abnormalities sa genome ng babae na humantong sa pag-unlad ng breast cancer.
Kung ang mga abnormalidad sa gawain ng HER2 gene ay nakumpirma, pagkatapos ay inireseta ang naaangkop na paggamot. Kung hindi, kung gayon ang doktor, gamit ang iba pang mga pagsusuri, ay nagtatatag ng ibang dahilan para sa pag-unlad ng kanser sa suso.
Ang isa pang mahalagang bentahe ng pagsusuri ng isda ay sa loob ng ilang araw ang pasyente ay tumatanggap ng isang komprehensibong ulat sa genetic predisposition sa pag-unlad ng isang partikular na kanser. Sa tulong ng medikal na pagsubok na ito, posible na sabay na masuri ang patolohiya ng hindi lamang ang mammary gland, kundi pati na rin ang lahat ng mga organo ng tiyan.
Video na nagbibigay-kaalaman
Maikling sagot: Ang paraan ng fluorescence in situ hybridization (FISH - fluorescence in situ hybridization) ay nagsasangkot ng paggamit ng mga natatanging DNA nucleotide sequence bilang isang probe upang hanapin ang gustong DNA sequence sa materyal na nakuha mula sa pasyente. Ang pamamaraan ay batay sa komplementaryong pagbubuklod ng isang DNA probe sa DNA ng metaphase chromosome o interphase cells. Ang DNA probe at test DNA ay na-denatured para bumuo ng single-stranded DNA. Ang DNA probe ay idinagdag sa paghahanda ng chromosome at incubated para sa isang tiyak na oras. Ang presensya o kawalan ng fluorochrome-labeled probe sa DNA pagkatapos ng hybridization ay natutukoy sa pamamagitan ng pagsusuri sa mga chromosome gamit ang fluorescent microscopy.
Detalyadong tugon:
Paraan ng fluorescent hybridization sa lugar ng kinaroroonan nagbibigay-daan sa iyo na tukuyin ang mga indibidwal na chromosome o ang kanilang mga indibidwal na rehiyon sa mga paghahanda ng metaphase chromosome o interphase nuclei batay sa komplementaryong interaksyon ng isang DNA probe na pinagsama sa isang fluorescent na label at ang nais na rehiyon sa chromosome. Upang mailarawan ang mga peptide-nucleic compound sa chromosome, ginagamit ang mga PNA probes batay sa isang produktong protina.
Ang pamamaraan ay batay sa komplementaryong pagbubuklod ng DNA probe sa DNA ng metaphase chromosomes o interphase cells at kasama ang mga sumusunod na hakbang:
1. Denaturasyon double-stranded probe DNA at target na DNA sa single-stranded sa ilalim ng impluwensya ng mataas na temperatura o mga kemikal na ahente.
2. Hybridization DNA probe na may target ng DNA ayon sa prinsipyo ng complementarity sa pagbuo ng isang double-stranded hybrid molecule
3. Post-hybridization wash upang alisin ang unhybridized DNA probe
4. Pagsusuri mga signal ng hybridization na may fluorescent microscope
Mga kalamangan Ang FISH molecular genetic diagnostic na mga pamamaraan ay kinabibilangan ng mabilis na pagsusuri ng isang malaking bilang ng mga cell, mataas na sensitivity at specificity, at ang kakayahang mag-aral ng mga di-culturable at non-dividing cells.
Bahid Ang pamamaraan ay ang imposibilidad na makakuha ng impormasyon tungkol sa pisikal na estado ng pinag-aralan na DNA o chromosome segment.
Ang FISH ay ginagamit sa prenatal molecular genetic diagnosis at para sa paglalarawan ng mga tumor; sa pediatric practice, ginagamit ito, bilang panuntunan, upang matukoy ang mga submicroscopic na pagtanggal na nauugnay sa mga partikular na malformations. Ang mga sindrom batay sa mga microdeletion ay dating itinuturing na mga sakit na hindi kilalang etiology, dahil ang mga chromosomal na pagtanggal at muling pagsasaayos na nagdudulot ng pag-unlad ng mga sakit na ito ay karaniwang hindi nakikita sa mga tradisyonal na pamamaraan ng pagsusuri ng chromosomal. Ang ganitong maliliit na pagtanggal sa mga partikular na rehiyon ng chromosome ay maaaring matukoy nang may mahusay na katumpakan ng FISH. Kasama sa mga sakit na dulot ng mga submicroscopic na pagtanggal Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis syndromes at velocardiofacial syndrome. Pinapadali ng FISH ang pag-diagnose ng mga sindrom na ito sa mga hindi tipikal na kaso, lalo na sa pagkabata, kapag wala pa rin ang maraming diagnostic na makabuluhang palatandaan ng sakit. Ang paggamit ng pamamaraang ito ng molecular genetic diagnosis ay ipinapayong din sa pagbibinata at pagtanda, kapag ang mga tipikal na klinikal na palatandaan ng sakit, katangian ng pagkabata, ay sumasailalim sa mga pagbabago.
121. DNA probe. Ang kanilang paggamit sa pagpapasiya ng mga namamana na sakit.
Maikling pagsusuri
DNA probe ay isang maikling fragment ng DNA na pinagsama sa fluorescein, isang enzyme, o isang radioactive isotope, na ginagamit upang mag-hybrid sa komplementaryong rehiyon ng target na molekula ng DNA.
Pangunahing bahagi
Mga sistema ng diagnostic ng DNA
Ang impormasyon tungkol sa buong iba't ibang katangian ng isang organismo ay nakapaloob sa genetic material nito. Kaya, ang pathogenicity ng bakterya ay natutukoy sa pamamagitan ng pagkakaroon ng isang tiyak na gene o hanay ng mga gene sa kanila, at ang isang namamana na genetic na sakit ay nangyayari bilang isang resulta ng pinsala sa isang tiyak na gene. Ang segment ng DNA na tumutukoy sa biological na katangiang ito ay may mahigpit na tinukoy na pagkakasunud-sunod ng nucleotide at maaaring magsilbi bilang isang diagnostic marker.
Maraming mabilis at maaasahang diagnostic na pamamaraan ang nakabatay sa nucleic acid hybridization - ang pagpapares ng dalawang komplementaryong segment ng iba't ibang molekula ng DNA. Ang pamamaraan sa pangkalahatang termino ay ang mga sumusunod.
1. Pag-aayos ng isang single-stranded na target ng DNA sa isang filter ng lamad.
2. Paglalapat ng may label na single-stranded DNA probe, na, sa ilalim ng ilang partikular na kundisyon (temperatura at lakas ng ionic), ay pares sa target na DNA.
3. Paghuhugas ng filter upang alisin ang labis na hindi nakatali na may label na DNA probe.
4. Detection ng probe/target hybrid molecules.
Sa mga diagnostic na pagsusuri batay sa nucleic acid hybridization, tatlong bahagi ang susi: isang DNA probe, isang DNA target, at isang hybridization signal detection method. Ang sistema ng pagtuklas ay dapat na lubos na partikular at napakasensitibo.
* Ang Fluorescein (dioxifluoran, uranine A) ay isang organic compound, isang fluorescent dye. Sa analytical chemistry, ang fluorescein ay ginagamit bilang isang luminescent acid-base indicator. Sa biochemistry at molecular biology, isothiocyanate derivatives ng fluorescein bilang biological dyes para sa pagtukoy ng mga antigen at antibodies.
* Ang pagtuklas ay ang pagtuklas, pagkakakilanlan, paghahanap ng isang bagay.
*conjugation=conjugation
*Kung ang pinaghalong DNA, halimbawa, ang tao at mouse, ay natunaw at na-annealed sa isang "test tube", kung gayon ang ilang mga seksyon ng mga chain ng DNA ng mouse ay muling magsasama sa mga pantulong na seksyon ng mga chain ng DNA ng tao upang bumuo ng mga hybrid. Ang bilang ng mga naturang site ay depende sa antas ng pagkakaugnay ng mga species. Kung mas malapit ang mga species sa isa't isa, mas maraming mga rehiyon ng complementarity ng DNA strands. Ang kababalaghang ito ay tinatawag DNA-DNA hybridization.
122. Mga pamamaraan at kundisyon para sa paggamit ng direktang DNA diagnostics.
Maikling pagsusuri:
Gamit ang mga direktang pamamaraan, ang mga kaguluhan sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA (mutation at kanilang mga uri) ay nakita. Ang mga direktang pamamaraan ay nailalarawan sa pamamagitan ng katumpakan na umaabot sa halos 100%.
Ang layunin ng mga direktang diagnostic ay upang matukoy ang mga mutant alleles (mga abnormalidad sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA, mga mutasyon at kanilang mga uri).
Ang kawalan ng direktang diagnostic ng DNA ay ang pangangailangang malaman ang eksaktong lokasyon ng gene at ang spectrum ng mga mutasyon nito. Ang mga pamamaraan ng direktang diagnostic ng DNA ay ipinahiwatig para sa mga sakit tulad ng phenylketonuria (mutation R408W), cystic fibrosis - (ang pinakakaraniwang delF508 mutation), Huntington's chorea (pagpapalawak ng trinucleotide repeats-CTG repeats), atbp.
Buong sagot:
Gamit ang mga direktang pamamaraan, ang mga kaguluhan sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA (mutation at kanilang mga uri) ay nakita. Ang mga direktang pamamaraan ay nailalarawan sa pamamagitan ng katumpakan na umaabot sa halos 100%. Gayunpaman, sa pagsasagawa, ang mga pamamaraang ito ay maaaring ilapat sa ilalim ng ilang mga kundisyon:
1) kilalang cytogenetic localization ng gene na responsable para sa pagbuo ng isang namamana na sakit,
2) ang gene ng sakit ay dapat na ma-clone at malaman ang pagkakasunud-sunod ng nucleotide nito.
Ang layunin ng mga direktang diagnostic ay upang matukoy ang mga mutant alleles (mga abnormalidad sa pangunahing pagkakasunud-sunod ng nucleotide ng DNA, mga mutasyon at kanilang mga uri). Ang mataas na katumpakan ng direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA sa karamihan ng mga kaso ay hindi nangangailangan ng pagsusuri ng DNA ng lahat ng miyembro ng pamilya, dahil ang pagtuklas ng isang mutation sa kaukulang gene ay ginagawang posible upang kumpirmahin ang diagnosis na may halos 100% na katumpakan at matukoy ang genotype ng lahat ng miyembro ng pamilya ng isang may sakit na bata, kabilang ang mga heterozygous carrier.
Ang kawalan ng direktang diagnostic ng DNA ay ang pangangailangang malaman ang eksaktong lokasyon ng gene at ang spectrum ng mga mutasyon nito.
Ang mga pamamaraan ng direktang diagnostic ng DNA ay ipinahiwatig para sa mga sakit tulad ng phenylketonuria (mutation R408W), cystic fibrosis - (ang pinakakaraniwang delF508 mutation), Huntington's chorea (pagpapalawak ng trinucleotide repeats-CTG repeats), atbp.
Gayunpaman, hanggang ngayon, ang mga gene ng maraming mga sakit ay hindi na-map, ang kanilang exon-intron na organisasyon ay hindi kilala, at maraming mga namamana na sakit ay nailalarawan sa pamamagitan ng binibigkas na genetic heterogeneity, na hindi pinapayagan ang buong paggamit ng mga direktang pamamaraan ng diagnostic ng DNA. Samakatuwid, ang nilalaman ng impormasyon ng paraan ng direktang pagsusuri ng DNA ay malawak na nag-iiba. Kaya, sa diagnosis ng Huntington's chorea, achondroplasia, ito ay 100%, na may phenylketonuria, cystic acidosis, adrenogenital syndrome - mula 70 hanggang 80%, at may Wilson-Konovalov disease at Duchenne / Becker myopathy - 45-60%. Sa pagsasaalang-alang na ito, ang mga hindi direktang pamamaraan ng molekular na genetic diagnosis ng mga namamana na sakit ay ginagamit.
Ang pamamaraan ng FISH, Fluorescent in situ hybridization, ay binuo noong kalagitnaan ng 1980s at ginagamit upang makita ang presensya o kawalan ng mga tiyak na pagkakasunud-sunod ng DNA sa mga chromosome, pati na rin ang alpha satellite ng DNA na matatagpuan sa centromere ng chromosome 6, CEP6( 6p11.1-q11. 1).
Nagbigay ito ng isang makabuluhang pagbabago sa pagsusuri ng mga sakit na oncological ng melanocytic na pinagmulan dahil sa pagtuklas ng mga antigens ng tumor. Laban sa background ng malignancy, ang isang mutation sa tatlong antigens ay tinutukoy: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) at CMM1(1p). Sa pagsasaalang-alang na ito, ang posibilidad ng layunin na diagnosis ng pagkakaiba-iba batay sa pagpapasiya ng mga genetic na katangian ng melanocytic na mga tumor sa balat ay napakahalaga sa maagang pagsusuri ng melanoma at mga precursor nito. Sa nucleus na may normal na hanay ng mga pinag-aralan na gene at chromosome 6 , dalawang RREB1 genes ang nabahiran ng pula, dalawang MYB genes ang sinusunod. sa dilaw, dalawang CCND1 genes sa berde, at dalawang chromosome 6 centromeres sa asul. Para sa mga layunin ng diagnostic, ginagamit ang mga fluorescent sample.
Pagsusuri ng mga resulta ng reaksyon: ang bilang ng pula, dilaw, berde at asul na mga signal sa 30 nuclei ng bawat sample ay binibilang, apat na mga parameter ng iba't ibang mga variant ng genetic disorder ay nakilala, kung saan ang sample ay genetically consistent sa melanoma. Halimbawa, ang isang sample ay tumutugma sa melanoma kung ang average na bilang ng CCND1 gene bawat nucleus ay ≥2.5. Ang bilang ng kopya ng iba pang mga gene ay tinatantya ayon sa parehong prinsipyo. Ang isang gamot ay itinuturing na positibo sa ISDA kung matugunan ang kahit isa sa apat na kondisyon. Ang mga sample kung saan ang lahat ng apat na parameter ay nasa ibaba ng mga breakpoint ay itinuturing na FISH-negative.
Ang pagpapasiya ng mga tiyak na pagkakasunud-sunod ng DNA sa mga chromosome ay isinasagawa sa mga seksyon ng biopsy specimens o surgical material. Sa praktikal na pagpapatupad, ang reaksyon ng FISH ay ang mga sumusunod: ang materyal sa pagsubok na naglalaman ng DNA sa nuclei ng mga melanocytes ay pinoproseso upang bahagyang sirain ang molekula nito upang masira ang double-stranded na istraktura at sa gayon ay mapadali ang pag-access sa nais na rehiyon ng gene. Ang mga sample ay inuri ayon sa lugar ng pagkakadikit sa molekula ng DNA. Ang materyal para sa reaksyon ng FISH sa klinikal na kasanayan ay mga seksyon ng paraffin tissue, smears at mga print.
Ang reaksyon ng FISH ay nagpapahintulot sa iyo na makahanap ng mga pagbabago na naganap sa molekula ng DNA bilang isang resulta ng isang pagtaas sa bilang ng mga kopya ng isang gene, pagkawala ng isang gene, isang pagbabago sa bilang ng mga chromosome at mga pagbabago sa husay - ang paggalaw ng gene. loci pareho sa parehong chromosome at sa pagitan ng dalawang chromosome.
Upang maproseso ang data na nakuha gamit ang reaksyon ng FISH at pag-aralan ang kaugnayan sa pagitan ng numero ng kopya ng mga gene ng tatlong pinag-aralan na grupo, ginagamit ang koepisyent ng ugnayan ng Spearman.
Ang melanoma ay nailalarawan sa pamamagitan ng pagtaas ng numero ng kopya kumpara sa nevus at dysplastic nevus.
Ang isang simpleng nevus, kumpara sa isang dysplastic nevus, ay may mas kaunting mga abnormalidad sa numero ng kopya (ibig sabihin, mas maraming normal na mga kopya).
Upang bumuo ng mga panuntunan sa pagpapasya upang mahulaan kung ang isang sample ay kabilang sa isang partikular na klase (differential diagnosis ng simple at dysplastic nevi), ang mathematical apparatus ng "mga puno ng desisyon" ay ginagamit. Ang diskarte na ito ay napatunayan ang sarili sa pagsasanay, at ang mga resulta ng paglalapat ng pamamaraang ito (hindi katulad ng maraming iba pang mga pamamaraan, tulad ng mga neural network) ay maaaring malinaw na bigyang-kahulugan upang bumuo ng mga panuntunan sa pagpapasya para sa pagkakaiba ng simple, dysplastic nevi, at melanoma. Ang paunang data sa lahat ng kaso ay ang mga numero ng kopya ng apat na gene.
Ang gawain ng pagbuo ng isang panuntunan ng desisyon para sa mga diagnostic ng kaugalian ay nahahati sa ilang mga yugto. Sa unang yugto, ang melanoma at nevus ay naiiba, nang hindi isinasaalang-alang ang uri ng nevus. Sa susunod na yugto, ang isang tuntunin ng desisyon ay binuo upang paghiwalayin ang simple at dysplastic nevi. Sa wakas, sa huling yugto, posible na bumuo ng isang "puno ng desisyon" upang matukoy ang antas ng dysplastic nevus dysplasia.
Ang ganitong paghahati ng gawain ng pag-uuri ng nevi sa mga subtask ay ginagawang posible upang makamit ang mataas na katumpakan ng mga hula sa bawat yugto. Ang data ng input para sa pagbuo ng puno ng desisyon ay data sa numero ng kopya ng apat na gene para sa mga pasyente na na-diagnose na may melanoma at mga pasyente na na-diagnose na may non-melanoma (mga pasyente na may iba't ibang uri ng nevus - simple at dysplastic). Para sa bawat pasyente, ang mga numero ng kopya ng gene ay magagamit para sa 30 mga cell.
Kaya, ang paghahati sa gawain ng paghula ng diagnosis sa ilang mga yugto ay nagbibigay-daan sa pagbuo ng mga tuntunin ng desisyon na may mataas na katumpakan hindi lamang para sa pagkakaiba sa pagitan ng melanoma at nevi, kundi pati na rin para sa pagtukoy ng uri ng nevi at paghula sa antas ng dysplasia para sa isang dysplastic nevus. Ang mga ginawang "mga puno ng desisyon" ay isang malinaw na paraan upang mahulaan ang isang diagnosis batay sa mga numero ng kopya ng gene at madaling magamit sa klinikal na kasanayan upang makilala ang mga benign, premalignant, at malignant na melanocytic na mga tumor sa balat. Ang iminungkahing karagdagang paraan ng differential diagnosis ay lalong mahalaga sa pagtanggal ng higanteng congenital pigmented nevi at dysplastic nevi sa mga pasyenteng pediatric, dahil ang mga naturang pasyente ay bumibisita sa mga institusyong medikal na may mataas na porsyento ng mga diagnostic error. Ang mga resulta ng paggamit ng inilarawan na paraan ay lubos na epektibo, ipinapayong gamitin ito sa pagsusuri ng mga pigmented na tumor sa balat, lalo na sa mga pasyente na may FAMM syndrome.