Karagdagang mga pamamaraan ng pagsusuri ng dugo sa pagpapasiya ng hematocrit ng reticulocytes. Nagbibilang ng mga reticulocytes sa isang smear pagkatapos mantsang ito ng mga espesyal na tina. Nangangailangan sila ng hiwalay na kulay.

Ang mga reticulocyte ay mga batang pulang selula ng dugo na nabuo pagkatapos ng pagkawala ng nuclei ng mga normoblast. Ang isang tampok na katangian ng reticulocytes ay ang pagkakaroon sa kanilang cytoplasm ng isang butil-filamentous substance (reticulum), na kumakatawan sa pinagsama-samang ribosome at mitochondria.

1.) Binibilang ang bilang ng mga reticulocytes sa isang smear pagkatapos mantsang ito ng mga espesyal na tina.

Ang pamamaraang ito ay ang pinaka ginagamit na pamamaraan sa pagsasanay dahil sa ang katunayan na ito ay simple, medyo mura at hindi nangangailangan ng espesyal na mamahaling kagamitan, samakatuwid maaari itong magamit sa anumang klinikal na diagnostic na laboratoryo.

Ang prinsipyo ng pamamaraan ay batay sa pagtuklas ng isang granular-mesh substance ng reticulocytes sa panahon ng supravital staining na may alkaline dyes (saturated solution ng brilliant cresyl blue sa absolute alcohol / azure I solution / azure II solution) kasama ang kanilang karagdagang pagbibilang sa dugo. pahid. Ang paglamlam ng mga reticulocytes ay isinasagawa alinman sa salamin o sa isang test tube. Ang pagbibilang ay isinasagawa gamit ang isang mikroskopyo: ang mga pahid na inihanda ng isa sa mga pamamaraan sa itaas ay naka-microscope sa isang immersion lens; sa isang smear, ang mga reticulocyte at erythrocytes ay nabahiran ng madilaw-berde, ang butil-filamentous na substansiya sa reticulocytes ay asul (kapag nabahiran ng azure II at brilliant cresyl blue) o mala-bughaw-lila (kapag nabahiran ng azure I).

2.) Pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes gamit ang fluorescent microscopy.

Ang pamamaraang ito ay simple at tumatagal ng kaunting oras, mas tumpak kaysa sa tradisyonal na pamamaraan, dahil ang fluorescent microscopy ay nagpapakita ng pinakamaliit na butil ng reticulate-filamentous substance, ngunit ito ay posible lamang sa isang luminescent microscope at mga espesyal na tina, at samakatuwid ay magagamit lamang sa ilang laboratoryo.

Ang prinsipyo ng pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes gamit ang fluorescent microscopy ay batay sa paggamit ng kakayahan ng substance ng reticulocytes na mag-fluoresce pagkatapos ng paggamot sa dugo na may acridine orange. Ang dugo ay halo-halong may acridine orange sa isang test tube o mixer sa isang ratio ng 1 bahagi ng dugo at 10 bahagi ng tina (ang halo ay maaaring maimbak nang hindi hihigit sa 5 oras). Ang halo ay hinalo sa loob ng 2 minuto, ang isang patak ng halo ay inilapat sa isang glass slide at tinatakpan ng isang coverslip. Sa kasong ito, ang likido ay hindi dapat lumampas sa coverslip.

Microscopically gamit ang isang light filter ZhS-17. Sa paghahanda, ang mga erythrocyte ay may madilim na berdeng balangkas at hindi nag-fluoresce, habang sa mga reticulocytes, ang butil-reticulate na substansiya ay kumikinang na maliwanag na pula, na ginagawang madali ang pagbilang ng mga reticulocytes. Sa dugo na nagpapatatag sa heparin o sodium citrate, ang reticulocyte fluorescence ay hindi sinusunod.

3.) Awtomatikong pagbibilang ng reticulocyte gamit ang isang hematology analyzer.

Sa modernong hematological analyzers, ang teknolohiya para sa pagbibilang ng mga selula ng dugo ay batay sa conductometric method na iminungkahi nina H. Wallace at Joseph R. Culter noong 1947. Ang prinsipyo ng pamamaraan ay ang bilangin ang bilang at matukoy ang likas na katangian ng mga impulses na nangyayari kapag ang isang Ang cell ay dumadaan sa isang maliit na butas sa diameter (aperture), sa magkabilang panig kung saan mayroong dalawang electrodes na nakahiwalay sa bawat isa. Ang bawat pagpasa ng isang cell sa pamamagitan ng aperture ay sinamahan ng hitsura ng isang electrical impulse, na naitala ng isang electronic sensor. Ang paghahati ng mga cell sa mga kategorya (erythrocytes, leukocytes, platelets, sediment) ay isinasagawa ng aparato batay sa pagsusuri ng amplitude ng natanggap na mga pulso. Upang matukoy ang konsentrasyon ng mga cell, sapat na upang pumasa sa isang tiyak na dami ng sample sa pamamagitan ng channel at bilangin ang bilang ng mga pulse na nabuo.

Dapat pansinin na bilang karagdagan sa klasikong parameter ng reticulocytes - ang kamag-anak (%) na nilalaman ng reticulocytes (RET%, porsyento ng mga reticulocytes), na tinutukoy gamit ang mga pamamaraan 1 at 2 ng mga diagnostic ng laboratoryo, dahil sa pagdating ng high-tech na hematological analyzers (paraan 3), naging posible na makakuha (halimbawa, gamit ang isang patentadong fluorescent dye para sa Sysmex-XT-2000i analyzer) karagdagang impormasyon na mga parameter ng reticulocyte:
reticulocytes na may mababang nilalaman ng RNA, ang pinaka-mature (LFR%, mababang fluorescence reticulocyte fractions, fraction ng reticulocytes na may mababang fluorescence);
reticulocytes na may average na nilalaman ng RNA (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - isang bahagi ng reticulocytes na may medium fluorescence);
reticulocytes na may mataas na nilalaman ng RNA (HFR%, mataas na fluorescence reticulocyte fractions) - isang bahagi ng reticulocytes na may mataas na fluorescence);
immature reticulocyte fraction (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Ang pagkakaiba-iba ng mga reticulocytes, batay sa antas ng kapanahunan at, nang naaayon, ang nilalaman ng mga nucleic acid, ay isang salamin ng aktibidad ng hematopoietic ng utak ng buto.

Paraan (Sysmex-XT-2000i analyzer). Sa daloy ng cell, ang mga cell ay tumatawid sa sinag ng isang semiconductor laser, habang ang sinag ay nakakalat sa malaki at maliit na mga anggulo at ang fluorescent dye ay nasasabik. Ginagawa nitong posible na matukoy ang iba't ibang mga yugto ng kapanahunan ng mga reticulocytes sa pamamagitan ng nilalaman ng RNA sa mga selula at ang intensity ng kanilang luminescence. Ang awtomatikong bilang ng reticulocyte ay lubos na tumpak (higit sa 30,000 pulang selula ng dugo ang binibilang) at maaaring kopyahin (ang koepisyent ng pagkakaiba-iba ay humigit-kumulang 6%). Ang teknolohiyang ito ay nagbibigay ng tumpak na bilang ng mga reticulocytes kahit na sa napakababang konsentrasyon.

Detection ng granular-mesh substance ng reticulocytes kapag nabahiran ng brilliant-cresyl blue nang walang paunang pag-aayos.

Reagents:

1% na solusyon ng brilliant-cresyl blue: 50 mg ng dye ay natunaw sa 5 ml ng asin at 20 mg ng sodium citrate ay idinagdag (ang solusyon ay naka-imbak sa isang madilim na lalagyan ng salamin, ito ay mabuti para sa ilang araw).

Pamamaraan:

Maglagay ng 2 patak ng 1% brilliant cresyl blue dye solution at 1 drop ng dugo sa glass slide na may balon. Dahan-dahang haluin gamit ang isang glass rod at ang timpla ay inilalagay sa isang mamasa-masa na silid (Petri dish, kung saan ang bahagyang basa-basa na gasa o mga cotton roll ay inilalagay sa paligid ng mga gilid) sa loob ng 30 minuto sa temperatura ng silid. Pagkatapos ay gagawin ang mga pahid at tuyo.

Bilang ng reticulocyte:

Sa mga smear, ang mga erythrocyte ay nabahiran ng madilaw-dilaw na berde, at ang butil-butil na mesh na substansiya sa mga reticulocytes ay asul at lila.

Ang mga smear ay naka-microscope na may immersion lens. Ang mga reticulocytes ay binibilang sa bawat 1000 erythrocytes (mas mataas na katumpakan ang nakukuha kapag nagbibilang ng 2000-3000 erythrocytes).

Ang isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes ay sinusunod sa:

pagpapasigla ng erythropoiesis (pagkawala ng dugo, hemolysis, krisis sa reticulocyte na may matagumpay na paggamot ng B12 deficiency anemia, matinding kakulangan ng oxygen).

Ang isang pagbawas sa bilang ng mga reticulocytes ay sinusunod sa:

pagsugpo ng erythropoiesis (aplastic at hypoplastic anemia, hindi ginagamot na anemia sa kakulangan sa B12, metastases ng kanser sa buto),

mga sakit sa bato, mga sakit sa endocrine.

Ang pagtaas sa kanilang mga reticulocytes sa peripheral blood (reticulocytosis) ay nabanggit: na may hemolytic anemia (ang bilang ng mga reticulocytes ay maaaring umabot ng hanggang 60% o higit pa (lalo na ang pagtaas sa panahon ng hemolytic crises); na may talamak na pagkawala ng dugo (isang reticulocyte crisis ay nangyayari 3- 5 araw pagkatapos ng pagkawala ng dugo), kasama ang, isang pagtaas sa mga reticulocytes ay ginagawang posible na maghinala ng nakatagong pagdurugo (halimbawa, sa mga pasyente na may peptic ulcer ng gastrointestinal tract, typhoid fever); may malaria; may polycythemia; sa paggamot ng bakal deficiency anemia na may iron (ilang araw (3 - 10) pagkatapos ng pagsisimula ng antianemic na paggamot ng pernicious anemia); may matinding kakulangan ng oxygen; may tumor metastases sa bone marrow. Dapat tandaan na sa kaso ng mas mataas na pagkasira ng erythrocytes, ang proporsyon ng mga reticulocytes ay maaaring lumampas sa 50% dahil sa isang artipisyal na pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes (tulad ng nabanggit kanina, ang proporsyon ng mga reticulocytes ay kinakalkula sa% ng lahat ng erythrocytes Sa ganitong mga kaso, upang masuri ang kalubhaan ng anemia, ang "reticular index" ay ginagamit, na kinakalkula ng formula: (% ng reticulocytes x hematocrit) / 45 x 1.85, kung saan ang 45 ay normal na hematocrit, 1.85 ang bilang ng mga araw na kinakailangan para sa pagdating ng mga bagong reticulocytes sa dugo. Kung index

MGA PARAAN PARA SA PAGBILANG NG BILANG NG RETICULOCYTES

(1) Binibilang ang bilang ng mga reticulocytes sa isang smear pagkatapos mamantsa ang mga ito ng mga espesyal na tina. Ang pamamaraang ito ay ang pinaka ginagamit na pamamaraan sa pagsasanay dahil sa ang katunayan na ito ay simple, medyo mura at hindi nangangailangan ng espesyal na mamahaling kagamitan, samakatuwid maaari itong magamit sa anumang klinikal na diagnostic na laboratoryo. Ang prinsipyo ng pamamaraan ay batay sa pagtuklas ng isang granular-mesh substance ng reticulocytes sa panahon ng supravital staining na may alkaline dyes (saturated solution ng brilliant cresyl blue sa absolute alcohol / azure I solution / azure II solution) kasama ang kanilang karagdagang pagbibilang sa dugo. pahid. Ang paglamlam ng mga reticulocytes ay isinasagawa alinman sa salamin o sa isang test tube. Ang pagbibilang ay isinasagawa gamit ang isang mikroskopyo: ang mga pahid na inihanda ng isa sa mga pamamaraan sa itaas ay naka-microscope sa isang immersion lens; sa isang smear, ang mga reticulocyte at erythrocytes ay nabahiran ng madilaw-berde, ang butil-filamentous na substansiya sa reticulocytes ay asul (kapag nabahiran ng azure II at brilliant cresyl blue) o mala-bughaw-lila (kapag nabahiran ng azure I). (2) Binibilang ang bilang ng mga reticulocytes gamit ang fluorescent microscopy. Ang pamamaraang ito ay simple at tumatagal ng kaunting oras, mas tumpak kaysa sa tradisyonal na pamamaraan, dahil ang fluorescent microscopy ay nagpapakita ng pinakamaliit na butil ng reticulate-filamentous substance, ngunit ito ay posible lamang sa isang luminescent microscope at mga espesyal na tina, at samakatuwid ay magagamit lamang sa ilang laboratoryo. Ang prinsipyo ng pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes gamit ang fluorescent microscopy ay batay sa paggamit ng kakayahan ng substance ng reticulocytes na mag-fluoresce pagkatapos ng paggamot sa dugo na may acridine orange. Ang dugo ay halo-halong may acridine orange sa isang test tube o mixer sa isang ratio ng 1 bahagi ng dugo at 10 bahagi ng tina (ang halo ay maaaring maimbak nang hindi hihigit sa 5 oras). Ang halo ay hinalo sa loob ng 2 minuto, ang isang patak ng halo ay inilapat sa isang glass slide at tinatakpan ng isang coverslip. Sa kasong ito, ang likido ay hindi dapat lumampas sa coverslip. Microscopically gamit ang isang light filter ZhS-17. Sa paghahanda, ang mga erythrocyte ay may madilim na berdeng balangkas at hindi nag-fluoresce, habang sa mga reticulocytes, ang butil-reticulate na substansiya ay kumikinang na maliwanag na pula, na ginagawang madali ang pagbilang ng mga reticulocytes. Sa dugo na nagpapatatag sa heparin o sodium citrate, ang reticulocyte fluorescence ay hindi sinusunod. (3) Awtomatikong pagbibilang ng reticulocyte gamit ang hematology analyzer. Sa modernong hematological analyzers, ang teknolohiya para sa pagbibilang ng mga selula ng dugo ay batay sa conductometric na pamamaraan na iminungkahi ni H. Wallace at Joseph R. Culter noong 1947. Ang prinsipyo ng pamamaraan ay upang mabilang ang bilang at matukoy ang likas na katangian ng mga impulses na nangyayari kapag ang isang cell ay dumaan sa isang maliit na diameter na butas (aperture), sa magkabilang panig kung saan mayroong dalawang electrodes nakahiwalay sa isa't isa. Ang bawat pagpasa ng isang cell sa pamamagitan ng aperture ay sinamahan ng hitsura ng isang electrical impulse, na naitala ng isang electronic sensor. Ang paghahati ng mga cell sa mga kategorya (erythrocytes, leukocytes, platelets, sediment) ay isinasagawa ng aparato batay sa pagsusuri ng amplitude ng natanggap na mga pulso. Upang matukoy ang konsentrasyon ng mga cell, sapat na upang pumasa sa isang tiyak na dami ng sample sa pamamagitan ng channel at bilangin ang bilang ng mga pulse na nabuo. Dapat pansinin na bilang karagdagan sa klasikong parameter ng reticulocytes - ang kamag-anak (%) na nilalaman ng reticulocytes (RET%, porsyento ng mga reticulocytes), na tinutukoy gamit ang mga pamamaraan 1 at 2 ng mga diagnostic ng laboratoryo, dahil sa pagdating ng high-tech na hematological analyzers (paraan 3), naging posible na makakuha (halimbawa, gamit ang isang patentadong fluorescent dye para sa Sysmex-XT-2000i analyzer) karagdagang impormasyon na mga parameter ng reticulocyte: reticulocytes na may mababang nilalaman ng RNA, ang pinaka-mature (LFR%, mababang fluorescence reticulocyte fractions , mababang fluorescence reticulocyte fraction); reticulocytes na may average na nilalaman ng RNA (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - isang bahagi ng reticulocytes na may medium fluorescence); reticulocytes na may mataas na nilalaman ng RNA (HFR%, mataas na fluorescence reticulocyte fractions) - isang bahagi ng reticulocytes na may mataas na fluorescence); immature reticulocyte fraction (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction). Ang pagkakaiba-iba ng mga reticulocytes, batay sa antas ng kapanahunan at, nang naaayon, ang nilalaman ng mga nucleic acid, ay isang salamin ng aktibidad ng hematopoietic ng utak ng buto. Paraan (Sysmex-XT-2000i analyzer). Sa daloy ng cell, ang mga cell ay tumatawid sa sinag ng isang semiconductor laser, habang ang sinag ay nakakalat sa malaki at maliit na mga anggulo at ang fluorescent dye ay nasasabik. Ginagawa nitong posible na matukoy ang iba't ibang mga yugto ng kapanahunan ng mga reticulocytes sa pamamagitan ng nilalaman ng RNA sa mga selula at ang intensity ng kanilang luminescence. Ang awtomatikong bilang ng reticulocyte ay lubos na tumpak (higit sa 30,000 pulang selula ng dugo ang binibilang) at maaaring kopyahin (ang koepisyent ng pagkakaiba-iba ay humigit-kumulang 6%). Ang teknolohiyang ito ay nagbibigay ng tumpak na bilang ng mga reticulocytes kahit na sa napakababang konsentrasyon.

Reticulocytopenia at reticulocytosis, mga sanhi ng pag-unlad, diagnostic na halaga ng kanilang pagtuklas.

studfiles.net

Reticulocytes (reticulocytus)

Ang mga reticulocyte ay mga batang erythrocyte na nabuo pagkatapos ng pagkawala ng nuclei ng mga normoblast.

Ang isang tampok na katangian ng reticulocytes ay ang pagkakaroon ng isang butil-butil na sangkap, na lumilitaw na may supravital staining, ibig sabihin, nang walang paunang pag-aayos ng mga cell.

Ipinakita ng mikroskopiko ng electron na ang mga butil-butil na istruktura ay ang mga labi ng endoplasmic reticulum, ribosome at mitochondria na naglalaman ng RNA. Sa reticulocytes, ang synthesis ng protina (globin), heme, purines, pyrimidine nucleotides, phosphatides, lipids ay isinasagawa sa isang maliit na lawak, ngunit ang RNA ay hindi na-synthesize sa kanila. Sa loob ng 2 araw, ang reticulocyte ay nananatili sa daloy ng dugo, pagkatapos nito, habang bumababa ang RNA, ito ay nagiging isang mature na erythrocyte.

Sa mga smear na nabahiran ng maginoo na pamamaraan ng hematological, ang mga grayish-pink reticulocytes ay polychromatophilic, i.e. tinina ng iba't ibang tina.

Sa kasalukuyan, ang isang pinag-isang paraan para sa pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes pagkatapos ng paglamlam sa kanila ay ginagamit.

makikinang na cresyl blue,
Azur ko o
Azur II direkta sa salamin o sa isang test tube.

1. Ang prinsipyo ng pamamaraan

Pagkilala sa granular-mesh substance ng mga erythrocytes kapag nabahiran ng alkaline na mga pintura kasama ang kanilang karagdagang pagbibilang sa isang blood smear.

2. Reagents:

a) isang puspos na solusyon ng makinang na cresyl blue sa ganap na alkohol (upang maghanda ng ganap na alkohol, 96% na ethanol ay dapat itago sa ilang mga pagbabago ng calcined copper sulfate powder): 1.2 g ng pintura bawat 100 ml ng alkohol;

b) azure I solution: azure I - 1 g, ammonium oxalate - 0.4 g, sodium chloride - 0.8 g, ethyl alcohol 96% - 10 ml, distilled water - 90 ml. Ang solusyon sa pintura sa isang saradong vial ay inilalagay sa loob ng 2-3 araw sa isang termostat sa 37 °C at pana-panahong inalog nang malakas. Pagkatapos ay pinalamig sa temperatura ng silid at sinala sa pamamagitan ng filter na papel. Ang solusyon ay nakaimbak sa isang madilim na lalagyan ng salamin. Kung lumitaw ang isang namuo, ang pintura ay dapat na i-filter muli;

c) Solusyon ng Azur II: Azur II - 1 g, sodium citrate - 5 g, sodium chloride - 0.4 g, distilled water - 45 ml. Ang solusyon ay iniiwan sa isang termostat sa 37 °C sa loob ng 2 araw, paminsan-minsang hinahalo. Upang mapabilis ang pagkatunaw, ang pintura ay maaaring painitin sa mababang init sa loob ng 15-20 minuto nang hindi kumukulo. Palamig sa temperatura ng silid at salain. Mag-imbak sa isang madilim na lalagyan ng salamin.

3. Pangkulay

Pangkulay sa salamin:

ang isang well-washed at defatted glass slide ay pinainit sa ibabaw ng apoy ng burner. Gamit ang isang basong baras, ang isang patak ng isa sa mga tina ay inilalapat sa salamin at isang pahid ng pintura ay inihanda gamit ang pinakintab na salamin. Ang gilid ng salamin kung saan inilapat ang pahid ng pintura ay minarkahan ng isang glass printer. Sa form na ito, ang salamin ay maaaring ihanda para sa hinaharap na paggamit at naka-imbak sa isang tuyo, madilim na lugar;
ang isang patak ng dugo ay inilapat sa mga baso na inihanda sa ganitong paraan, isang manipis na pahid ay ginawa, at ang baso ay agad na inilagay sa isang mahalumigmig na silid. Upang gawin ito, gumamit ng isang Petri dish na may takip, kung saan ang bahagyang moistened gauze o cotton roll ay inilalagay sa mga gilid;
Ang mga pahid ay inilalagay sa isang mamasa-masa na silid sa loob ng 3-5 minuto, at pagkatapos ay tuyo sa hangin. Ang granular-mesh substance ng mga reticulocytes ay nagiging purple-blue, malinaw na nakatayo laban sa greenish-bluish background ng erythrocytes.

Pangkulay sa vitro:

Paraan 1: bago gamitin, maghanda ng gumaganang solusyon ng makikinang na cresyl blue sa isang test tube bawat patak ng 1% potassium oxalate solution 4 na patak ng dye solution 1. Magdagdag ng 40 µl ng dugo sa dye (dalawang pipette sa markang 0.02). Paghaluin nang lubusan ngunit malumanay at mag-iwan ng 30 minuto. Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke;
Paraan 2: 0.05 ml ng dye solution 3 at 0.2 ml ng dugo ay inilalagay sa isang test tube. Ang halo ay lubusan na halo-halong at iniwan sa loob ng 20-30 minuto. Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke;
Paraan 3: maglagay ng 0.3-0.5 ml ng dye solution 2 at 5-6 patak ng dugo sa isang test tube na may pipette mula sa Panchenkov apparatus. Ang tubo ay sarado na may rubber stopper, ang timpla ay lubusan ngunit dahan-dahang pinaghalo at iniiwan sa loob ng 1–1½ oras (mas mabahiran ang reticulocytes kapag nalantad sa loob ng 1½ oras–3 oras). Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke.

4. Bilang ng reticulocyte

Sa mga smears, ang mga erythrocyte ay nabahiran ng madilaw-dilaw-berde, butil-filamentous na substansiya - asul o mala-bughaw-lila.

Ang mga smear na inihanda ng isa sa mga pamamaraan sa itaas ay naka-microscope sa isang immersion lens;
kinakailangang magbilang ng hindi bababa sa 1000 erythrocytes at tandaan kasama ng mga ito ang bilang ng mga erythrocytes na naglalaman ng granular-filamentous substance. Sa pare-parehong manipis na smears, kung saan ang mga erythrocyte ay nakaayos sa isang hilera, ang gayong larangan ng pagtingin ay napili, kung saan mayroong, halimbawa, 50 erythrocytes, at pagkatapos ay 20 tulad ng mga larangan ng pagtingin ay kinakalkula;
sa pagsasagawa, para sa higit na katumpakan, isang espesyal na eyepiece ang ginagamit, kung saan ang larangan ng pagtingin ay maaaring mabawasan sa kinakailangang laki. Sa kawalan ng isang yari na eyepiece, madali itong maihanda sa pamamagitan ng pag-alis ng takip sa eyepiece ng ×7, paglalagay ng isang piraso ng papel na may maliit na parisukat na ginupit dito at i-screw ito. Ang bilang ng mga binibilang na reticulocytes ay ipinahayag sa bawat 1000 o bawat 100 erythrocytes.

RATE: 0.5–1.2% (30–70 × 109/l)

Ang isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes ay sinusunod sa:

pagkawala ng dugo (lalo na talamak);
hemolytic anemia, lalo na sa panahon ng isang krisis (hanggang 20-30%);
laban sa background ng paggamot ng megaloblastic anemia na may bitamina B12 (krisis ng reticulocyte - isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes sa ika-4-8 araw ng paggamot).

Ang pagbaba sa bilang ng mga reticulocytes ay karaniwang para sa:

aplastic at hypoplastic anemia;
hindi ginagamot na megaloblastic anemia;
sakit sa radiation;
pag-inom ng mga cytotoxic na gamot.

Buhay ba si Kristo? Nabuhay na ba si Kristo mula sa mga patay? Pinag-aaralan ng mga mananaliksik ang mga katotohanan

diagnostic.ru

Ang mga reticulocytes ay normal at binibilang ang kanilang bilang

Ang mga reticulocytes, na ang pamantayan ay nag-iiba dahil sa maraming mga kadahilanan, ay mga hindi nabuong anyo ng mga pulang selula ng dugo, at sila ay matatagpuan sa bone marrow at peripheral na dugo. Bilang isang patakaran, ang mga reticulocytes sa dugo ay mature sa tatlo hanggang limang araw, at pagkatapos ang mga selulang ito ay nagiging mga mature na pulang selula ng dugo. Bukod dito, ang bilang ng mga hindi nabuong erythrocytes sa mga bagong silang na sanggol ay higit na malaki kaysa sa mga matatanda.

Pagtuklas ng mga reticulocytes:

Kapag tinutukoy ang mga reticulocytes, ang pamantayan kung saan ay tinutukoy gamit ang isang espesyal na talahanayan, kinakailangang isaalang-alang ang kanilang mga pagkakaiba mula sa mga mature na erythrocytes. Ang iba't ibang mga selula ng dugo ay maaaring naglalaman ng isang buong nucleus, o ang mga labi nito ay naobserbahan bilang bahagi ng isang butil-filamentous na substansiya. Upang matukoy ang bilang ng naturang mga selula, kinakailangang pag-aralan ang kulay ng isang pahid ng dugo sa laboratoryo. Para sa mga ito, ang isang asul na solusyon ng brilyante ay ginagamit, na inilalapat sa isang degreased at pre-washed na baso, at pagkatapos lamang ang isang smear ay ginawa.

Kapag ang mga reticulocytes ay napansin, ang pamantayan ng kung saan ay naiiba, kaagad pagkatapos ng pahid, ang baso na ginamit ay dapat ilagay sa isang Petri dish - isang espesyal na mahalumigmig na silid, pagkatapos ay gaganapin ng limang minuto, lubusan na tuyo sa sariwang hangin, at pagkatapos ay mikroskopiko. Bukod dito, ang sangkap ng granular-filamentous na uri sa loob ng reticulocyte ay karaniwang nabahiran ng kulay-lila-asul na kulay, at ang background ng mga erythrocytes ay namumukod-tangi dahil sa isang mala-bughaw-berdeng tint.

Kung gagamitin ang pamamaraang Gel-Meyer, mas makikita ang paglamlam ng mga immature na selula ng dugo, ngunit nangangailangan ito ng Vidal tube. Sa sisidlang ito, ang isang pares ng mga patak ng dugo ay halo-halong may isang makinang na solusyon at sodium chloride, pagkatapos ay ang tubo ay sarado na may takip, at ang pahid mismo ay ginanap sa loob ng isang oras.

Bilang ng reticulocyte:

Kapag kinakalkula ang bilang ng mga immature na selula ng dugo, kailangan mong kumuha ng 1000 pulang selula ng dugo bilang batayan, at pagkatapos ay isaalang-alang ang mga reticulocytes, ang rate ng kung saan ay karaniwang nag-iiba sa antas ng 0.2% -1.2% ng bilang ng mga pang-adultong pulang selula ng dugo. Sa karaniwan, sa karamihan ng mga tao, ang bilang ng mga immature na pulang selula ng dugo ay karaniwang 0.7% ng kabuuang bilang ng mga ganap na mature na selula ng dugo. Kung ang bilang ng mga reticulocytes ay mas mataas kaysa sa maximum na pinahihintulutang pamantayan ng 10% o higit pa, ang isang tao ay nagkakaroon ng reticulocytosis, isang sakit na sinamahan ng regular na talamak na pagdurugo at hemolytic anemia.

Kapag nagbibilang ng mga reticulocytes (karaniwang mataas ang pamantayan sa mga bata), sulit na panoorin na ang kanilang bilang ay hindi lalampas sa mga halaga ng limitasyon na karaniwan para sa mga matatanda. Ang mga pamantayan ay nakasalalay din sa kasarian, dahil sa mga kababaihan 2.07% ng mga immature erythrocytes ay itinuturing pa rin na isang katanggap-tanggap na parameter, at sa mga lalaki ang figure na ito ay hindi dapat lumampas sa 1.92%.

Sa mga kaso kung saan ang antas ng reticulocytes ay makabuluhang tumaas, ito ay nagpapahiwatig ng pagkakaroon ng mga naturang karamdaman sa katawan tulad ng malaria at thalassemia, polycythemia at hypoxia, anemia, lahat ng uri ng hemolytic syndromes, ngunit ang mga naturang tagapagpahiwatig ay posible rin sa paggamot ng cyanocobalamin. Kung ang antas ng immature erythrocytes ay binabaan, ang isang tao ay maaaring makaranas ng aplastic at hypoplastic anemia, lahat ng uri ng sakit sa bato at myxedema, pati na rin ang pagkalat ng tumor metastases sa mga buto.

Upang masuri ang kalubhaan ng anemia, kinakailangang kalkulahin ang "reticulocyte index", na kinakalkula bilang ratio ng porsyento ng mga reticulocytes at normal na mga halaga ng hematocrit, na pinarami ng bilang ng mga araw na kinakailangan para sa mga wala pa sa gulang na mga selula upang makapasok sa peripheral na dugo. Kung ang resultang index ay hindi lalampas sa dalawa, ang indicator ay nagpapahiwatig ng hypoproliferative component ng anemia, at kung ito ay lumampas sa dalawa, ito ay nagpapakita ng posibilidad ng pagtaas ng pagbuo ng mga pulang selula ng dugo.

fb.ru

Pag-aaral ng dugo. Pagsusuri ng dugo

Pagpapasiya ng konsentrasyon ng hemoglobin

Kabilang sa mga pamamaraan para sa pagtukoy ng hemoglobin, ang mga pamamaraan batay sa colorimetry, i.e., pagtukoy sa intensity ng kulay, ay ang pinaka-malawak na ginagamit. may mga selyadong glass tube na may pamantayan ng kulay (hematin hydrochloride sa glycerin). Ang isang 0.1% na solusyon ng hydrochloric acid ay unang ibinuhos sa gitnang test tube sa marka na katumbas ng 2 o 3 g%, pagkatapos ay maingat na idagdag (eksaktong!) 0.02 ml ng dugo na kinuha mula sa isang daliri na may espesyal na pipette na nakakabit sa isang hemometer. Ang ibabaw na layer ng acid ay hinuhugasan ng isang pipette at, na pinaghalo ang dugo at acid sa isang glass rod, mag-iwan ng 5 minuto upang bumuo ng hematin hydrochloride. Pagkatapos, sa pamamagitan ng pagdaragdag ng distilled water at patuloy na paghahalo gamit ang isang stick, ang kulay ng likido sa gitnang test tube ay ganap na tumutugma sa mga pamantayan. Ang konsentrasyon ng hemoglobin ay tumutugma sa marka ng antas ng solusyon sa mas mababang meniskus. Ang konsentrasyon ng hemoglobin ay maaaring ipahayag alinman sa g% ng hemoglobin o sa maginoo na mga yunit. Ang 16.67 g ng hemoglobin ay kinuha bilang 100 mga yunit.

Ang konsentrasyon ng hemoglobin sa dugo sa mga kababaihan ay mula 11.7 hanggang 15.8 g ° / o o mula 117 hanggang 158 g / l, sa mga lalaki - mula 13.3 hanggang 18 g% o mula 133 hanggang 180 g / l.

Pagkuha ng dugo para sa pagbibilang ng mga nabuong elemento

Upang mabilang ang mga nabuong elemento, ang dugo ay diluted sa mga mixer (melangers) o mga test tube, na kamakailan ay naging mas malawak na ginagamit. Para sa pagbibilang ng mga pulang selula ng dugo, ang dugo ay diluted ng 200 beses na may 3% sodium chloride solution; kung gagamit tayo ng hemometer pipette para kumuha ng dugo, ang dami nito ay 0.02 ml, dapat tayong kumuha ng 4 ml ng sodium chloride solution.Upang mabilang ang mga leukocytes, ang dugo ay natunaw ng 20 beses, kaya 0.02 ml ng dugo at 0.38 ml ng 3% ay kinuha ng isang tinted na solusyon ng methylene blue acetic acid, na kung saan ay kinakailangan upang maging sanhi ng pagkasira ng mga erythrocytes. sa labas ng pipette ay humahantong sa isang pagtaas sa error ng pagpapasiya. Bago punan ang silid, kinakailangang punasan ang pinakintab na salamin sa silid upang lumitaw ang mga iridescent ring. Bago punan ang silid, ang natunaw na dugo ay lubusang pinaghalo, habang ang mga selula tumira sa mga dingding ng test tube o mga ampoules ng mixer, pagkatapos nito ang isang patak ng dugo ay inilagay sa ilalim ng lupa na pinakintab na baso ng silid at iniwan ng 1 min sa pahinga para sa mga cell upang manirahan .

Ang pagbibilang ng mga nabuong elemento ay isinasagawa sa mababang pag-magnify ng mikroskopyo (layunin 8X, eyepiece 15X o 10X) sa isang madilim na larangan ng pagtingin.

Ang mga erythrocyte ay binibilang sa 5 malalaking parisukat (16x5 = 80 maliliit na parisukat) na matatagpuan sa iba't ibang bahagi ng silid, maaari kang kumuha ng mga parisukat na matatagpuan pahilis.Ang mga erythrocyte na nasa loob ng parisukat at ang mga nasa itaas at kaliwang gilid nito ay binibilang; Ang mga erythrocyte na nakahiga sa ibaba at kanang bahagi ay hindi binibilang, dahil nabibilang na sila sa iba pang mga parisukat.

Ang pagbilang ng bilang ng mga erythrocytes (A) sa 5 malalaking parisukat, nahanap nila ang arithmetic mean na bilang ng mga erythrocytes sa isang maliit na parisukat A / 80, ibig sabihin, sa 1/4000 μl. Samakatuwid, upang mahanap ang bilang ng mga pulang selula ng dugo sa 1 µl, dapat nating i-multiply ang bilang na nakuha mula sa paghahati sa pamamagitan ng 4000 at sa pamamagitan ng 200 (dilution).

Kaya, nakukuha namin ang sumusunod na formula:

X=A*4000*200/80,

kung saan ang X ay ang bilang ng mga erythrocytes sa 1 µl, at ang A ay ang bilang ng mga erythrocytes sa 5 malalaking parisukat. Kung bibilangin natin ang mga erythrocytes sa 5 malalaking parisukat at natunaw na dugo ng 200 beses, kung gayon ang kabuuang kadahilanan para sa bilang A ay magiging 10,000.

Ang normal na nilalaman ng mga pulang selula ng dugo sa dugo ng mga kababaihan ay 4-5 * 106, lalaki - 4.5-5.5 * 106.

Ang mga leukocyte ay binibilang sa 100 malalaking parisukat, hindi nahahati sa maliliit, na tumutugma sa 1600 maliliit. Kaya, ang bilang ng mga leukocytes na matatagpuan sa 100 mga parisukat ay nahahati sa 1600, pinarami ng 4000 at 20 (pagbabanto). Sa kasong ito, upang makuha ang resulta, sapat na upang i-multiply ang bilang ng mga binibilang na leukocytes sa pamamagitan ng 50. Ang normal na nilalaman ng mga leukocytes sa dugo ay 5 * 103 - 8 * 103 sa 1 μl.

Tagapagpahiwatig ng kulay ng dugo. Ang indicator ng kulay ng dugo ay isang numero na nagpapakita ng average na saturation ng hemoglobin ng isang indibidwal na erythrocyte ng isang naibigay na dugo kumpara sa saturation ng isang indibidwal na erythrocyte ng normal na dugo. 100 units ang kinuha para sa normal na nilalaman ng hemoglobin, at ang normal na bilang ng erythrocytes ay 5,000,000. Ang halaga ng color index ng malulusog na tao ay nag-iiba mula 0.9 hanggang 1.1. Pag-aaral ng peripheral blood smear. Sa blood smears, pinag-aaralan ang morphology ng erythrocytes at isinasaalang-alang ang leukocyte formula, iyon ay, ang percentage ratio sa pagitan ng iba't ibang uri ng leukocytes. Upang maging matagumpay ang pag-aaral, ang paghahanda, pag-aayos at paglamlam ng mga blood smear ay dapat gawin Upang maghanda ng isang pahid, ang ibabaw ng isang malinis, walang taba na baso sa layo na 0.5 cm mula sa gilid ng slide, hinawakan nila ang isang patak ng dugo sa lugar ng pagbutas sa daliri, at pagkatapos ay ang ang pinakintab na coverslip ay inilalagay sa isang anggulo ng 45 ° sa slide at ang una ay dinadala sa patak ng dugo upang ito ay kumalat sa likurang gilid ng coverslip at paggalaw ng mga baga, nang walang matalim na presyon gumawa ng isang pahid. Ang smear ay dapat magtapos sa glass slide na may "panicle". Ang smear ay pinatuyo sa hangin, kapag natuyo, ang isang magandang, manipis na pahid ay may dilaw na kulay.

Sa pamamagitan ng isang simple, matalas na lapis sa gitna ng pahid, ang pangalan ng pasyente at ang petsa ng pag-aaral ay nakasulat, pagkatapos nito ang mga smear ay naayos sa methyl alcohol nang hindi bababa sa 5 minuto at nabahiran ng mantsa ayon sa paraan ng Romanovsky-Giemsa.

Ang pintura ay binubuo ng pinaghalong acidic (eosin) at basic (Azur II) dyes. Ginagawang posible ng pamamaraang ito ng paglamlam na maiiba ang mga selula. Ang unang hakbang sa pagtatrabaho sa isang smear ay upang masuri ang morpolohiya ng mga pulang selula ng dugo. Upang gawin ito, pumili ng isang manipis na lugar kung saan ang mga cell ay nakahiga nang hiwalay, at hindi sa anyo ng mga haligi ng barya. Ang mga normal na erythrocytes ay walang nuklear, kulay-rosas na mga selula, bilugan, humigit-kumulang sa parehong diameter - 7.5 microns, ang mga erythrocyte ay may hugis ng isang biconcave disk, samakatuwid, sa smear mayroon silang paliwanag sa gitna at isang mas matinding stained periphery.

(direktang module4)

Paghahanda ng isang makapal na patak

Upang masuri ang dugo para sa Plasmodium malaria, isang makapal na patak ang ginawa. Ang dugo ay kinukuha sa karaniwang paraan mula sa pulp ng daliri. Ang isang patak ng dugo na lumalabas sa lugar ng pag-iiniksyon ay hinawakan sa ibabaw ng isang glass slide. Ang 2-3 patak na inilapat nang hiwalay ay pinahiran ng sulok ng isa pang baso. Ang isang dry smear ay ibinuhos (nang walang pag-aayos) na may pintura ni Romanovsky sa loob ng 30-40 minuto, pagkatapos ay ang kulay na patak ay maingat na hugasan ng tubig at ang paghahanda ay tuyo sa isang tuwid na posisyon.

Halimbawang data ng pagsusuri

Ang isang pagtaas ng bilang ng mga erythrocytes at hemoglobin sa dugo ay maaaring may sakit ng mga pulang selula ng dugo - erythremia, pagkatapos ay ang bilang ng mga erythrocytes ay umabot sa 9-106 o higit pa, at ang bilang ng mga pulang selula ng dugo ay tumataas bilang resulta ng mga sakit ng iba pang mga organo at sistema (na may decompensated diffuse pneumosclerosis, emphysema, ilang uri ng congenital heart defects, vascular sclerosis ng pulmonary artery system, right heart defects, circulatory failure III degree, atbp.). Ang sintomas na ito ay tinatawag na erythrocytosis.

Ang morphologically altered erythrocytes ay lumilitaw sa hyperchromic (megaloblastic) anemia. Kasabay nito, ang malalaking erythrocytes na may mataas na nilalaman ng hemoglobin (macrocytes), embryonic erythrocytes (megaloblasts), na kadalasang hindi matatagpuan sa peripheral blood, ay matatagpuan sa dugo. Ang morpolohiya ng mga erythrocytes ay nagbabago din sa hypochromic anemia: lumilitaw ang mga maliliit na erythrocytes (microcytes), binago ang hugis (poikilocytes) at mga erythrocytes na may mababang nilalaman ng hemoglobin (hypochromic erythrocytes).

Bilang ng leukocyte

Kapag kinakalkula ang formula ng leukocyte, kinakailangan upang matukoy ang mga tampok na istruktura ng cytoplasm at cell nuclei. Ang pag-aari ng isang cell sa isang partikular na grupo ay tinutukoy batay sa kabuuan ng lahat ng mga palatandaan ng cytoplasm at nucleus. Kapag kinakalkula ang formula, dapat sumunod ang isa sa parehong paraan ng paglipat ng salamin sa ilalim ng mikroskopyo. Kadalasan, ang paraan ng mikroskopya ay ginagamit sa 4 na lugar ng smear. Ito ay kilala na ang mga leukocytes ay ipinamamahagi nang hindi pantay sa smear: may mas kaunting mga lymphocytes sa mga gilid kaysa sa gitna, at mayroong higit pang mga monocytes sa dulo ng smear kaysa sa simula. Samakatuwid, kapag kinakalkula ang formula ng leukocyte, pinakamahusay na lumipat sa isang putol na linya, binibilang ang lahat ng mga cell na nakatagpo. Ang pagbibilang ng 200 na mga cell ay isang praktikal na minimum para sa karaniwang mga klinikal na pag-aaral. Ang mga peripheral blood leukocytes, depende sa presensya o kawalan ng granularity sa cytoplasm, ay nahahati sa granulocytes (neutrophilic, eosinophilic, basophilic) at agranulocytes (monocytes at lymphocytes).

Neutrophils. Ang laki ng cell ay 10-12 microns. Ang cytoplasm ng mga cell ay maputlang kulay rosas na may pinong, masagana, purple na butil. Karaniwan, ang mga saksak (2-4%) at naka-segment (60-65%) na mga neutrophil ay matatagpuan sa dugo.

Mga eosinophil. Ang mga selula ay kapareho ng laki ng mga neutrophil, kung minsan ay mas malaki ng kaunti, ang cytoplasm ay puno ng malalaking madilaw-dilaw na pulang butil, ang nucleus ay karaniwang may dalawang mga segment ng parehong laki. Ang mga eosinophil ay normal na 2-4%. Basophils. Ito ang pinakamaliit na granulocyte sa laki. Ang nucleus ay hindi regular, multi-lobed, sumasakop sa halos buong cell, ang maputlang pink na cytoplasm ay naglalaman ng malalaking dark purple granules. Ang mga butil ng basophil ay natutunaw sa tubig, at kung minsan, bilang isang resulta ng paghuhugas kapag nabahiran ang paghahanda, ang mga walang kulay na selula ay nananatili sa lugar ng mga butil. Karaniwan, ang mga basophil ay 0.1%. Lymphocytes. Ang laki ng cell ay mula 7 hanggang 10 µm. Ang nucleus ay siksik, bilugan o hugis-bean. Ang cytoplasm ng mga cell ay maputlang asul na may isang zone ng paliwanag sa paligid ng nucleus (perinuclear), kung minsan sa cytoplasm mayroong hiwalay na mga butil ng azurophilic na kulay pula-lila. Sa peripheral blood, 20-35% ng mga lymphocytes ay normal. Monocytes. Ang laki ng cell ay mula 12 hanggang 20 µm. Ang nucleus ay kadalasang hugis ng horseshoe, kung minsan ay hindi regular ang hugis. Ang cytoplasm ay mas malawak kaysa sa mga lymphocytes, abo-asul ang kulay na may pino, pinong, mapula-pula na butil. Ang mga monocytes ay normal na 6-8%.

Ang tumaas na nilalaman ng mga leukocytes sa dugo ay tinatawag na leukocytosis, at ang nabawasan na nilalaman ay tinatawag na leukopenia.

Paglamlam at pagbibilang ng reticulocyte

Ang mga reticulocyte ay mga batang pulang selula ng dugo na may manipis na asul na retina o granularity sa cytoplasm. Ang mga cell na ito ay nagpapakilala sa aktibidad ng pulang hematopoiesis. Upang makita ang bilang ng mga reticulocytes, ang paraan ng supravital (panghabambuhay) na paglamlam ay ginagamit. Ang mga smear ng brilliantcresyl blue na pintura ay ginawa sa mga glass slide sa ganap na alkohol, at pagkatapos ay ang isang blood smear ay ginawa sa stained glass sa karaniwang paraan at inilagay sa isang mahalumigmig na silid sa loob ng 3-5 minuto, pagkatapos nito ay tuyo at mikroskopyo ng isang immersion lens. Karaniwan, 8-10 reticulocytes ay matatagpuan sa bawat 1000 erythrocytes, ang kanilang bilang ay karaniwang ipinahayag bilang isang porsyento (0.8-1%) o sa ppm (8-10% o) na may kaugnayan sa mga erythrocytes. Ang mga reticulocytes ay mga cell na nagpapakilala ng mas mataas na produksyon ng erythrocytes sa bone marrow.

Lumalabas ang mga ito sa malaking porsyento sa peripheral blood na may hypochromic anemia ("malignant anemia"), na may hemolytic anemia, at iba pang mga sakit. Ang isang pinababang nilalaman ng reticulocytes at ang kanilang kumpletong pagkawala sa peripheral na dugo ay sinusunod sa panahon ng exacerbation ng hyperchromic anemia.

Upang maiwasan ang pagsasama-sama (gluing) ng mga platelet, ang isang pagbutas sa balat ay ginawa sa pamamagitan ng isang patak ng 14% na solusyon ng magnesium sulfate na inilapat sa daliri. Ang dugo ay halo-halong may magnesia at ang mga manipis na smear ay inihanda sa mga glass slide, na pagkatapos ay naayos at marumi ayon sa Romanovsky sa loob ng 2 oras. Ang bilang ng mga platelet sa bawat 1000 erythrocytes ay tinutukoy, at alam ang bilang ng mga erythrocytes sa 1 μl, ang bilang ng mga platelet sa 1 μl ng dugo ay binibilang. Ang mga normal na platelet ay naglalaman ng mula 250,000 hanggang 400,000.

Kahulugan ng ESR

Ang rate ng sedimentation ng erythrocyte ay tinutukoy sa dugo na halo-halong sa isang ratio na 4: 1 na may sodium citrate. Ang reaksyon ay nakatakda sa Panchenkov apparatus. Ang capillary ng Panchenkov ay hugasan ng sodium citrate, pagkatapos ay ang citrate ay iguguhit hanggang sa marka 50, kung saan ang titik R ay nakatayo (reagent) at hinipan sa isang Vidalevsky test tube. Ang parehong capillary ay ginagamit upang kumuha ng dugo ng dalawang beses hanggang sa K mark (dugo) at ihalo ito sa citrate. Ang parehong capillary ay puno ng dugo na may halong citrate hanggang division 0 at inilagay patayo sa isang tripod sa loob ng isang oras. Pagkalipas ng isang oras, sa millimeters, ang halaga ng haligi ng plasma na nabuo sa itaas ng mga naayos na erythrocytes ay nabanggit, na isang sukatan ng rate ng sedimentation ng erythrocyte.Ang normal na ESR sa mga lalaki ay 10 mm / h, sa mga kababaihan - 14 mm / h.

Ang erythrocyte sedimentation rate ay tumataas sa nagpapasiklab, talamak at malalang sakit, malignant na mga tumor at iba pang sakit.

Pagsubok sa pagiging tugma ng Rh factor

Ang 2-3 ML ng dugo ng tatanggap ay dinadala sa isang test tube na walang citrate, pagkatapos ng pamumuo ng dugo, ang namuong dugo ay bilugan ng isang basong baras at ang dugo ay isine-centrifuge. Dalawang patak ng serum mula sa tubo na ito ay inilapat sa isang Petri dish, kalahati ng isang patak ng dugo ng donor ay idinagdag dito, halo-halong, at ang tasa ay inilalagay sa isang paliguan ng tubig (42-45 °). Pagkatapos ng 10 minuto, ang tasa ay aalisin at titingnan sa liwanag na may bahagyang pag-alog. Ang hitsura ng agglutination ay magpahiwatig ng hindi katanggap-tanggap na pagsasalin ng dugo na ito.

… Ang pagtukoy sa bilang ng mga reticulocytes ay isang mahalagang tagapagpahiwatig ng function ng bone marrow.

Reticulocytes- ito ay mga batang anyo ng erythrocytes na nabuo mula sa mga normoblast pagkatapos ng pagkawala ng kanilang nucleus (non-nuclear, immature erythrocytes), ang pagkahinog nito ay nangyayari sa loob ng 24-48 na oras pagkatapos makapasok sa peripheral na dugo mula sa bone marrow, at sumasalamin sa kakayahan ng pagbabagong-buhay. ng bone marrow (i.e. erythropoietic bone marrow activity).

MORPOLOHIYA AT KLINIKAL NA KAHALAGAHAN NG RETICULOCYTES

Ang mga reticulocyte ay karaniwang mas malaki kaysa sa mga mature na erythrocytes. Ang cytoplasm ng reticulocytes ay naglalaman ng isang basophilic mesh (reticulum) sa anyo ng mga maliliit na butil, indibidwal na mga filament, glomeruli, atbp., na isang pinagsama-samang ribosome at mitochondria.

Ayon sa antas ng kapanahunan, 5 uri ng reticulocytes ay nakikilala:
(1) reticulocytes na may nucleus (erythronormoblasts), at ang kanilang granularity ay matatagpuan sa anyo ng isang siksik na talutot sa paligid ng nucleus;
(2) ang mga reticulocyte na mayroong granular-reticulate substance sa anyo ng bola o bukol;
(3) reticulocytes, pagkakaroon ng granularity sa anyo ng isang siksik na network;
(4) reticulocytes, pagkakaroon ng granular-reticulate substance sa anyo ng mga indibidwal na mga thread;
(5) reticulocytes na naglalaman ng mga indibidwal na butil.

Tandaan: karaniwan, ayon kay G. A. Alekseev, halos 80% ng mga reticulocytes ay nabibilang sa mga pangkat IV - V.

Karaniwan, ang peripheral blood ay naglalaman ng 0.2 - 1% ng mga reticulocytes ("%" - ang nilalaman ng mga reticulocytes mula sa kabuuang bilang ng mga erythrocytes). Ang tagapagpahiwatig na ito ay sumasalamin sa posibilidad ng mga reticulocytes na pumasok sa peripheral na dugo at ang kanilang karagdagang pagbabago sa mga mature na erythrocytes (pagkahinog), bilang isang variant ng pamantayan, na nasa peripheral na dugo (sa loob ng ilang oras). ( ! ) Sa normal na erythropoiesis, karamihan sa mga pulang selula ng dugo ay dumadaan sa yugto ng reticulocyte sa bone marrow.

Ang pagtaas sa kanilang mga reticulocytes sa peripheral blood (reticulocytosis) ay nabanggit:
na may hemolytic anemia (ang bilang ng mga reticulocytes ay maaaring umabot ng hanggang 60% o higit pa (lalo na ang pagtaas sa panahon ng hemolytic crises);
na may talamak na pagkawala ng dugo (sa loob ng 3-5 araw pagkatapos ng pagkawala ng dugo, nangyayari ang isang krisis sa reticulocyte), kabilang ang isang pagtaas sa mga reticulocytes, na ginagawang posible na maghinala ng nakatagong pagdurugo (halimbawa, sa mga pasyente na may peptic ulcer ng gastrointestinal tract, typhoid fever );
may malaria;
may polycythemia;
sa paggamot ng iron deficiency anemia na may iron (ilang araw (3 - 10) pagkatapos ng pagsisimula ng antianemic na paggamot ng pernicious anemia);
na may matinding kakulangan ng oxygen;
na may tumor metastases sa bone marrow.

Dapat tandaan na sa kaso ng mas mataas na pagkasira ng mga erythrocytes, ang proporsyon ng mga reticulocytes ay maaaring lumampas sa 50% dahil sa isang artipisyal na pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes (tulad ng nabanggit kanina, ang proporsyon ng mga reticulocytes ay kinakalkula sa% ng lahat ng mga erythrocytes). Sa ganitong mga kaso, upang masuri ang kalubhaan ng anemia, ang "reticular index" ay ginagamit, na kinakalkula ng formula: (% reticulocytes x hematocrit) / 45 x 1.85, kung saan ang 45 ay normal na hematocrit, 1.85 ang bilang ng mga araw na kinakailangan para sa mga bagong reticulocytes na makapasok sa dugo. Kung index< 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если >2-3, pagkatapos ay mayroong pagtaas sa pagbuo ng mga pulang selula ng dugo.

Tunay na reticulocytosis: isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes sa peripheral blood na may sabay na pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes sa bone marrow.

Maling reticulocytosis: ang kawalan ng mas mataas na bilang ng mga reticulocytes sa bone marrow na may pagtaas sa kanilang bilang sa peripheral blood (na nagpapahiwatig ng pagtaas ng leaching ng reticulocytes mula sa bone marrow papunta sa peripheral blood).

Ang kadahilanan na humahantong sa isang pagtaas sa halaga ng% na nilalaman ng mga reticulocytes ay maaaring ang pagkuha ng mga sumusunod na gamot: corticotropin, antimalarial na gamot, antipyretic na gamot, furazolidone (sa mga bata), levodopa.

Tandaan: Ang reticulocytosis, na walang katumbas na erythronormoblastic na reaksyon ng bone marrow, ay sinusunod kapag ang ilang bahagi nito ay inis sa pamamagitan ng metastases ng kanser o inflammatory foci.

Ang pagbawas sa bilang o kawalan ng mga reticulocytes (reticulocytopenia) ay sinusunod:
na may regenerative aplastic at hypoplastic anemias;
may anemia na sanhi ng kakulangan ng iron, bitamina B12, folic acid (microcytic-hypochromic at megaloblastic anemia);
may thalassemia;
may sideroblastic anemia;
na may mga metastases ng kanser sa buto;
may radiation sickness at radiation therapy;
sa paggamot ng cytostatics;
na may mga sakit na autoimmune ng hematopoietic system;
may sakit sa bato;
may alkoholismo;
na may pag-ulit ng Addison-Birmer anemia;
na may myxedema.

Mga salik na nakakasira sa resulta ng isang pag-aaral sa laboratoryo ng% na nilalaman ng mga reticulocytes:
maling pagpili ng anticoagulant o hindi sapat na paghahalo ng dugo sa anticoagulant;
matagal na pagpisil ng kamay gamit ang isang tourniquet;
pagkuha ng sulfonamides (parehong underestimated at overestimated na mga resulta ay posible);
pagsasalin ng dugo ilang sandali bago ang pag-aaral;
hemolysis ng isang sample ng dugo.

Mga indikasyon para sa appointment ng isang pagsusuri para sa mga reticulocytes:
pagtatasa ng aktibidad ng erythropoiesis sa mga kondisyon na sinamahan ng hemolysis o pagkawala ng dugo;
pagtatasa ng kakayahan ng bone marrow na muling makabuo pagkatapos ng cytotoxic therapy at bone marrow transplantation;
pagtatasa ng pagpapanumbalik ng erythropoietin synthesis pagkatapos ng paglipat ng bato;
kontrol ng doping sa mga atleta (pagkuha ng erythropoietin);
diagnosis ng hindi epektibong hematopoiesis o nabawasan ang produksyon ng mga pulang selula ng dugo;
differential diagnosis ng anemia;
pagtuklas ng kapansanan sa bone marrow regenerative capacity sa iron deficiency, bitamina B12, B6, folate, tanso at pagsubaybay sa naaangkop na therapy;
pagtatasa ng tugon sa therapy na may erythropoietin, erythrosuppressors.

MGA PARAAN PARA SA PAGBILANG NG BILANG NG RETICULOCYTES

(1) Binibilang ang bilang ng mga reticulocytes sa isang smear pagkatapos mantsang sila ng mga espesyal na tina.

Ang pagbibilang ay isinasagawa gamit ang isang mikroskopyo: ang mga pahid na inihanda ng isa sa mga pamamaraan sa itaas ay naka-microscope sa isang immersion lens; sa isang smear, ang mga reticulocyte at erythrocytes ay nabahiran ng madilaw-berde, ang butil-filamentous na substansiya sa reticulocytes ay asul (kapag nabahiran ng azure II at brilliant cresyl blue) o mala-bughaw-lila (kapag nabahiran ng azure I).

(2) Pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes gamit ang fluorescent microscopy.

(3) Awtomatikong bilang ng reticulocyte na may isang hematology analyzer.

Dapat pansinin na bilang karagdagan sa klasikong parameter ng reticulocytes - ang kamag-anak (%) na nilalaman ng reticulocytes (RET%, porsyento ng mga reticulocytes), na tinutukoy gamit ang mga pamamaraan 1 at 2 ng mga diagnostic ng laboratoryo, dahil sa pagdating ng high-tech na hematological analyzers (paraan 3), naging posible na makakuha (halimbawa, gamit ang isang patentadong fluorescent dye para sa Sysmex-XT-2000i analyzer) karagdagang impormasyon na mga parameter ng reticulocyte:
reticulocytes na may mababang nilalaman ng RNA, ang pinaka-mature (LFR%, mababang fluorescence reticulocyte fractions, reticulocyte fraction na may mababang fluorescence);
reticulocytes na may average na nilalaman ng RNA(MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - fraction ng reticulocytes na may medium fluorescence);
reticulocytes na may mataas na nilalaman ng RNA(HFR%, mataas na fluorescence reticulocyte fractions) - reticulocyte fraction na may mataas na fluorescence);
immature fraction ng reticulocytes(IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Ang pagkakaiba-iba ng mga reticulocytes, batay sa antas ng kapanahunan at, nang naaayon, ang nilalaman ng mga nucleic acid, ay isang salamin ng aktibidad ng hematopoietic ng utak ng buto.

Reticulocytes - isang tagapagpahiwatig ng bilang ng mga selula, mga precursor ng mga pulang selula ng dugo, na nabuo sa utak ng buto. Reticulocytes - ang mga batang pulang selula ng dugo ay sumasalamin sa regenerative capacity ng bone marrow. Ang bilang ng reticulocyte ay ginagamit upang masuri ang intensity ng hematopoiesis. Ang pag-aaral ay isinasagawa sa: isang pagbaba sa bilang ng mga pulang selula ng dugo, pinaghihinalaang hemolysis, pagtatasa ng erythropoiesis, sa paggamot ng anemia na may mga paghahanda sa bakal at bitamina B 12, erythropoietin.

Ang mga reticulocytes ay hindi nuklear, hindi pa nabubuong erythrocytes, ang pagkahinog nito ay nangyayari sa loob ng 24-48 na oras pagkatapos makapasok sa peripheral na dugo mula sa bone marrow. Ang bilang ng mga nabuong reticulocytes ay sumasalamin sa erythropoietic na aktibidad ng bone marrow. Sa madaling salita, ang nilalaman ng reticulocytes ay sumasalamin sa rate ng pagbuo ng mga erythrocytes at nagsisilbing tagapagpahiwatig ng tugon ng bone marrow sa anemization.

Bilang karagdagan sa pangkalahatang tinatanggap na mga parameter ng reticulocytes - ang ganap at kamag-anak (%) na nilalaman ng mga reticulocytes, ang paglitaw ng mga bagong hematological analyzer (paglamlam ng mga espesyal na tina para sa mga nucleic acid) ay naging posible upang makakuha ng karagdagang mga parameter ng reticulocyte:

Reticulocytes na may mababang nilalaman ng RNA, pinaka-mature (LFR%, fraction ng reticulocytes na may mababang fluorescence);
reticulocytes na may average na nilalaman ng RNA (MFR%, fraction ng reticulocytes na may average na fluorescence);
mataas na RNA reticulocytes (HFR%, mataas na fluorescence reticulocyte fraction);
immature reticulocyte fraction (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Ang pagkakaiba-iba ng mga reticulocytes, batay sa antas ng kapanahunan at, nang naaayon, ang nilalaman ng mga nucleic acid, ay isang salamin ng aktibidad ng hematopoietic ng utak ng buto.

Ang mga reticulocytes ay Ang mga batang erythrocyte ay nabuo pagkatapos ng pagkawala ng nuclei ng mga normoblast.

Isang katangian ng mga reticulocytes ay ang pagkakaroon ng isang granular-mesh substance, na lumilitaw na may supravital staining, ibig sabihin, nang walang paunang pag-aayos ng mga cell.

Electron microscopically ipinapakita na ang butil-butil na mga istruktura ay ang mga labi ng endoplasmic reticulum, ribosome at mitochondria na naglalaman ng RNA. Sa reticulocytes, ang synthesis ng protina (globin), heme, purines, pyrimidine nucleotides, phosphatides, lipids ay isinasagawa sa isang maliit na lawak, ngunit ang RNA ay hindi na-synthesize sa kanila. Sa loob ng 2 araw, ang reticulocyte ay nananatili sa daloy ng dugo, pagkatapos nito, habang bumababa ang RNA, ito ay nagiging isang mature na erythrocyte.

Sa mga smear na nabahiran ng maginoo na pamamaraan ng hematological, ang mga grayish-pink reticulocytes ay polychromatophilic, i.e. tinina ng iba't ibang tina.

Mga pamamaraan para sa pagbibilang ng mga reticulocytes

Sa kasalukuyan, ang isang pinag-isang paraan para sa pagbibilang ng bilang ng mga reticulocytes pagkatapos ng paglamlam sa kanila ay ginagamit.

makikinang na cresyl blue,
Azur ko o
Azur II direkta sa salamin o sa isang test tube.

1. Ang prinsipyo ng pamamaraan

Pagkilala sa granular-mesh substance ng mga erythrocytes kapag nabahiran ng alkaline na mga pintura kasama ang kanilang karagdagang pagbibilang sa isang blood smear.

2. Reagents:

a) puspos na solusyon ng makikinang na cresyl blue sa ganap na alkohol(upang maghanda ng ganap na alkohol, kinakailangang makatiis ng 96% ethanol sa ilang mga pagbabago ng calcined copper sulphate powder): 1.2 g ng pintura bawat 100 ML ng alkohol;

b) solusyon sa azure I: azure I - 1 g, ammonium oxalate - 0.4 g, sodium chloride - 0.8 g, ethyl alcohol 96% - 10 ml, distilled water - 90 ml. Ang solusyon sa pintura sa isang saradong vial ay inilalagay sa loob ng 2-3 araw sa isang termostat sa 37 °C at pana-panahong inalog nang malakas. Pagkatapos ay pinalamig sa temperatura ng silid at sinala sa pamamagitan ng filter na papel. Ang solusyon ay nakaimbak sa isang madilim na lalagyan ng salamin. Kung lumitaw ang isang namuo, ang pintura ay dapat na i-filter muli;

c) solusyon ng Azura II: azure II - 1 g, sodium citrate - 5 g, sodium chloride - 0.4 g, distilled water - 45 ml. Ang solusyon ay iniiwan sa isang termostat sa 37 °C sa loob ng 2 araw, paminsan-minsang hinahalo. Upang mapabilis ang pagkatunaw, ang pintura ay maaaring painitin sa mababang init sa loob ng 15-20 minuto nang hindi kumukulo. Palamig sa temperatura ng silid at salain. Mag-imbak sa isang madilim na lalagyan ng salamin.

3. Pangkulay

Pangkulay sa salamin:

ang isang well-washed at defatted glass slide ay pinainit sa ibabaw ng apoy ng burner. Gamit ang isang basong baras, ang isang patak ng isa sa mga tina ay inilalapat sa salamin at isang pahid ng pintura ay inihanda gamit ang pinakintab na salamin. Ang gilid ng salamin kung saan inilapat ang pahid ng pintura ay minarkahan ng isang glass printer. Sa form na ito, ang salamin ay maaaring ihanda para sa hinaharap na paggamit at naka-imbak sa isang tuyo, madilim na lugar;
ang isang patak ng dugo ay inilapat sa mga baso na inihanda sa ganitong paraan, isang manipis na pahid ay ginawa, at ang baso ay agad na inilagay sa isang mahalumigmig na silid. Upang gawin ito, gumamit ng isang Petri dish na may takip, kung saan ang bahagyang moistened gauze o cotton roll ay inilalagay sa mga gilid;
Ang mga pahid ay inilalagay sa isang mamasa-masa na silid sa loob ng 3-5 minuto, at pagkatapos ay tuyo sa hangin. Ang granular-mesh substance ng mga reticulocytes ay nagiging purple-blue, malinaw na nakatayo laban sa greenish-bluish background ng erythrocytes.

Pangkulay sa vitro:

paraan 1: bago gamitin, maghanda ng gumaganang solusyon ng makikinang na cresyl blue sa isang test tube bawat patak ng 1% potassium oxalate solution 4 na patak ng solusyon sa pintura 1. Magdagdag ng 40 µl ng dugo sa pintura (dalawang pipette sa markang 0.02). Paghaluin nang lubusan ngunit malumanay at mag-iwan ng 30 minuto. Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke;
paraan 2: Ang 0.05 ml ng dye solution 3 at 0.2 ml ng dugo ay inilalagay sa isang test tube. Ang halo ay lubusan na halo-halong at iniwan sa loob ng 20-30 minuto. Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke;
paraan 3: Ang 0.3-0.5 ml ng dye solution 2 at 5-6 na patak ng dugo ay inilalagay sa isang test tube na may pipette mula sa Panchenkov apparatus. Ang tubo ay sarado na may rubber stopper, ang timpla ay lubusan ngunit dahan-dahang pinaghalo at iniiwan sa loob ng 1–1½ oras (mas mabahiran ang reticulocytes kapag nalantad sa loob ng 1½ oras–3 oras). Paghaluin at maghanda ng mga manipis na stroke.

4. Bilang ng reticulocyte

Sa mga smears, ang mga erythrocyte ay nabahiran ng madilaw-dilaw-berde, butil-filamentous na substansiya - asul o mala-bughaw-lila.

Ang mga smear na inihanda ng isa sa mga pamamaraan sa itaas ay naka-microscope sa isang immersion lens;
kinakailangang magbilang ng hindi bababa sa 1000 erythrocytes at tandaan kasama ng mga ito ang bilang ng mga erythrocytes na naglalaman ng granular-filamentous substance. Sa pare-parehong manipis na smears, kung saan ang mga erythrocyte ay nakaayos sa isang hilera, ang gayong larangan ng pagtingin ay napili, kung saan mayroong, halimbawa, 50 erythrocytes, at pagkatapos ay 20 tulad ng mga larangan ng pagtingin ay kinakalkula;
sa pagsasagawa, para sa higit na katumpakan, isang espesyal na eyepiece ang ginagamit, kung saan ang larangan ng pagtingin ay maaaring mabawasan sa kinakailangang laki. Sa kawalan ng isang yari na eyepiece, madali itong maihanda sa pamamagitan ng pag-alis ng takip sa eyepiece ng ×7, paglalagay ng isang piraso ng papel na may maliit na parisukat na ginupit dito at i-screw ito. Ang bilang ng mga binibilang na reticulocytes ay ipinahayag sa bawat 1000 o bawat 100 erythrocytes.

Dami ng nilalaman ng reticulocytes

NORM: 0.5–1.2% (30–70 × 10 9 / l)

Ang isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes ay sinusunod sa:

pagkawala ng dugo (lalo na talamak);
hemolytic anemia, lalo na sa panahon ng isang krisis (hanggang 20-30%);
laban sa background ng paggamot ng megaloblastic anemia na may bitamina B12 (krisis ng reticulocyte - isang pagtaas sa bilang ng mga reticulocytes sa ika-4-8 araw ng paggamot).

Ang pagbaba sa bilang ng mga reticulocytes ay karaniwang para sa:

aplastic at hypoplastic anemia;
hindi ginagamot na megaloblastic anemia;
sakit sa radiation;
pag-inom ng mga cytotoxic na gamot.