Immunofluorescence reaction - RIF (Koons method) May tatlong uri ng direct method, indirect method, na may complement. Ang reaksyon ng Koons ay isang mabilis na paraan ng diagnostic para sa pag-detect ng mga microbial antigens o pag-detect ng mga antibodies.
Ang direktang paraan ng RIF ay batay sa katotohanan na ang mga tissue antigens o microbes na ginagamot sa immune sera na may mga antibodies na may label na mga fluorochromes ay maaaring kumikinang sa mga sinag ng UV ng isang fluorescent microscope. Ang mga bakterya sa isang smear, na ginagamot ng tulad ng isang luminescent serum, ay kumikinang sa paligid ng cell sa anyo ng isang berdeng hangganan.
Ang hindi direktang paraan ng RIF ay binubuo sa pagtukoy ng antigen-antibody complex gamit
antiglobulin (anti-antibody) serum na may label na fluorochrome. Upang gawin ito, ang mga smear mula sa isang suspensyon ng mga microbes ay ginagamot ng mga antibodies ng antimicrobial rabbit diagnostic serum. Pagkatapos ay ang mga antibodies na hindi nakagapos ng mga microbial antigens ay hinuhugasan, at ang mga antibodies na natitira sa mga microbes ay makikita sa pamamagitan ng paggamot sa smear na may antiglobulin (anti-rabbit) serum na may label
fluorochromes. Bilang resulta, nabuo ang isang kumplikadong microbe + antimicrobial rabbit antibodies + anti-rabbit antibodies na may label na fluorochrome. Ang kumplikadong ito ay sinusunod sa isang fluorescent
mikroskopyo, tulad ng sa direktang pamamaraan.
23. Enzyme immunoassay Mga sangkap, pagbabalangkas, accounting, pagsusuri. Mga lugar ng paggamit.
I Radioimmunoassay.
Ang radioimmune method, o analysis (RIA), ay isang napakasensitibong paraan batay sa antigen-antibody reaction gamit ang mga antigen o antibodies na may label na radionuclide (125J, 14C, 3H, 51Cr, atbp.). Pagkatapos ng kanilang pakikipag-ugnayan, ang nagreresultang radioactive immune complex ay pinaghihiwalay at ang radioactivity nito ay tinutukoy sa isang naaangkop na counter (beta o gamma radiation). Ang intensity ng radiation ay direktang proporsyonal sa bilang ng mga nakagapos na molekula ng antigen at antibody.
idagdag ang serum ng pasyente, antiglobulin serum na may label na enzyme at ang substrate/chromogen para sa enzyme.
II. Kapag tinutukoy ang antigen, ang antigen (halimbawa, serum ng dugo na may nais na antigen) ay ipinakilala sa mga balon na may sorbed antibodies, diagnostic serum laban dito at pangalawang antibodies (laban sa diagnostic serum) na may label na isang enzyme ay idinagdag, at pagkatapos substrate/chromogen para sa enzyme.
24. Mga reaksyon ng immune lysis, aplikasyon. Makadagdag sa nagbubuklod na reaksyon. Mga sangkap, pagbabalangkas, accounting, pagsusuri. Aplikasyon.
Ang complement fixation reaction (RCC) ay binubuo sa katotohanan na kapag ang mga antigen at antibodies ay tumutugma sa isa't isa, sila ay bumubuo ng isang immune complex, kung saan ang complement (C) ay nakakabit sa pamamagitan ng Fc fragment ng mga antibodies, at ang complement ay nakagapos ng antigen-antibody kumplikado. Kung ang antigen-antibody complex ay hindi nabuo, kung gayon ang pandagdag ay nananatiling libre. Ang RSK ay isinasagawa sa dalawang yugto: 1st phase - incubation ng isang halo na naglalaman ng antigen + antibody + complement, 2nd phase (indicator) - pagtuklas ng libreng complement sa pinaghalong sa pamamagitan ng pagdaragdag dito ng isang hemolytic system na binubuo ng mga erythrocytes ng tupa, at hemolytic serum naglalaman ng mga antibodies sa kanila. Sa 1st phase ng reaksyon, kapag nabuo ang isang antigen-antibody complex, nangyayari ang complement binding, at pagkatapos ay sa 2nd phase, ang hemolysis ng mga erythrocytes na sensitized ng antibodies ay hindi magaganap (positibo ang reaksyon). Kung ang antigen at antibody ay hindi tumutugma sa isa't isa (walang antigen o antibody sa sample ng pagsubok), ang complement ay mananatiling libre at sa ika-2 yugto ay sasali sa erythrocyte-antierythrocyte antibody complex, na magdudulot ng hemolysis (negatibong reaksyon).
25. Dynamics ng pagbuo ng cellular immune response, ang mga manifestations nito. Immunological
alaala.
Ang immune cellular response (CIR) ay isang kumplikado, multicomponent na kooperatiba na reaksyon ng immune system na dulot ng dayuhang antigen (T-cell epitopes). Ipinatupad ng T-system of immunity. Mga yugto ng KIO
1. APC Antigen Capture
2. Processor. AG sa proteasomes.
3. Pagbuo ng complex peptide + MHC class I at II.
4. Makadagdag sa transportasyon sa APC membrane.
5. Makadagdag sa pagkilala ng mga T-helpers na partikular sa AG 1
6. activation ng APC at T-helpers 1, release ng IL-2 at gamma-interferon ng E-helpers1. Paglaganap at pagkita ng kaibhan sa lugar ng T-lymphocytes na umaasa sa AG.
7. Pagbuo ng mga mature na T-lymphocytes ng iba't ibang populasyon at memory T-lymphocytes.
8. Pakikipag-ugnayan ng mga mature na T-lymphocytes sa AH at pagsasakatuparan ng end effector.
Mga pagpapakita ng KIO:
anti-infective AI:
antiviral,
antibacterial (intracellularly located bacteria);,
mga uri ng allergy IV at I;
antitumor IO;
transplant AI;
immunological tolerance;
immunological memory;
mga proseso ng autoimmune.
26. Characterization ng regulatory at effector subpopulasyon ng T-lymphocytes. Pangunahing
mga marker. T-cell receptor (TCR). Ang genetic na kontrol ng pagkakaiba-iba ng TCR
Ang mga T-lymphocytes ay kumakatawan sa pangalawang mahalagang populasyon ng mga lymphocytes, ang mga pasimula nito ay nabuo sa utak ng buto at pagkatapos ay lumipat para sa karagdagang pagkahinog at
pagkita ng kaibhan sa thymus (ang pangalan na "T-lymphocyte" ay sumasalamin sa thymus-dependence, bilang pangunahing lugar ng maagang yugto ng pagkahinog).
Ayon sa spectrum ng biological activity, ang T-lymphocytes ay mga regulatory at effector cells na nagbibigay ng adaptive function ng T-system of immunity. Hindi sila gumagawa ng mga molekula ng antibody. Ang TCR ay isang molekula ng lamad na naiiba sa HCR, ngunit sa istruktura at functional na katulad ng mga antibodies.
TCR - AG-specific. receptor. Ito ang pangunahing molekula na kabilang sa Ig superfamily. Ito ay may 3 bahagi: supramembranous, membranous at cytoplasmic. Ang buntot ng TCR ay nabuo ng 2 globular alpha at beta molecule na may variable at pare-parehong mga domain (Vα at Vβ, Сα at Сβ).
Ang Vα at Vβ ay bumubuo ng aktibong TCR complex. Mayroong 3 hypervariable na rehiyon - constant deterministic regions (CDO). Ang function ng KDO ay ang pagkilala at pagbubuklod ng T-cell peptides, i.e. determinant na grupo ng AG. Mahigpit na nakaupo ang TCR sa cell at ang cytoplasmic tail nito, ang cytoplasmic na bahagi nito, ay kasangkot sa pagsasagawa ng inf. Sa nucleus sa panahon ng pakikipag-ugnayan nito sa AG. Humigit-kumulang 90% TCR. Nagdadala sila ng mga alpha at beta chain, at humigit-kumulang 10% ang nagdadala ng gamma at delta chain.
Ang TCR ay genetically encoded. Ang mga α at γ chain, sa pamamagitan ng pagkakatulad sa IG light chain, ay naka-encode ng V, G at C genes, at β at δ, sa pamamagitan ng pagkakatulad sa IG heavy chain, ni V, G, E. α at γ sa chromosome 7, at β at δ sa chromosome 14.
Ang CD-3 receptor ay isang pantulong na istraktura, isang molekula ng Ig. Ito ay nabuo sa pamamagitan ng 3 transmembrane proteins: εδ, εγ at dimer-zeta., supramembranous, vembrane at cytosolic tail. Kinakatawan nila ang isang solong kumplikado na may TCR, na nagsisiguro sa pagpapadaloy ng mga signal na tukoy sa AG sa cell nucleus.
CD4 at CD8. Nagpapahayag sila nang sabay-sabay sa TCR o hiwalay dito. Ginagampanan nila ang function ng mga co-receptor. Pinapahusay nila ang pagdirikit sa AG-presenting cell. Tinitiyak nila ang pagpapadaloy ng isang AG-specific na signal sa cell nucleus.
Ang mga T-lymphocytes ay nahahati ayon sa uri ng pagkilala, MOLECULE:
CD4 rec. Peptide MHC 2nd class
CD8 peptide + MHC 1st class
Mga katangian ng pangunahing subpopulasyon ng T-lymphocytes: ang populasyon ng T-lymphocytes ay maaaring maiuri sa tatlong klase:
A. Helpers, HRT effectors (CD 4+) at Cytotoxic suppressors (CD 8+);
B. Unstimulated (CD 45 RA+) at memory cell (CD 45 RO+);
C. Uri 1 - (IL-2, INF-gamma, paggawa ng TNF-beta);
Uri 2 - (IL-4, IL-5, IL-6, IL9, IL 10 na gumagawa).
Ang immunofluorescence test (IF) ay isang serological test na nakakakita ng mga antibodies sa mga kilalang antigens. Ang pamamaraan ay binubuo sa microscopy ng stained smears.
Ang reaksyong ito ay ginagamit sa immunology, virology at microbiology. Pinapayagan ka nitong matukoy ang pagkakaroon ng mga virus, bakterya, fungi, protozoa at ICC. Ang RIF ay napakalawak na ginagamit sa diagnostic practice para sa pagtuklas ng mga viral at bacterial antigens sa nakakahawang materyal. Ang pamamaraan ay batay sa kakayahan ng fluorochrome na magbigkis sa mga protina nang hindi lumalabag sa kanilang immunological specificity. Pangunahing ginagamit ito sa pagsusuri ng mga impeksyon sa ihi.
Mayroong mga sumusunod na paraan ng pagsasagawa ng reaksyon ng immunofluorescence: direkta, hindi direkta, na may pandagdag. Ang direktang paraan ay binubuo sa paglamlam ng materyal na may mga fluorochromes. Dahil sa kakayahan ng mga antigen ng microbes o tissue na kumikinang sa mga sinag ng UV ng isang fluorescent microscope, ang mga ito ay tinukoy bilang mga cell na may maliwanag na kulay na berdeng hangganan.
Ang hindi direktang paraan ay binubuo sa pagtukoy ng antigen+antibody complex. Upang gawin ito, ang pang-eksperimentong materyal ay ginagamot sa mga antibodies ng antimicrobial rabbit serum na inilaan para sa mga diagnostic. Pagkatapos magbigkis ang mga antibodies sa mga mikrobyo, ihihiwalay sila sa mga hindi nakagapos at ginagamot ng anti-rabbit serum na may label na fluorochrome. Pagkatapos nito, ang kumplikadong microbe+animicrobial antibodies+anti-rabbit antibodies ay tinutukoy gamit ang isang ultraviolet microscope sa parehong paraan tulad ng sa direktang pamamaraan.
Ang reaksyon ng immunofluorescence ay kailangang-kailangan sa pagsusuri ng syphilis. Sa ilalim ng impluwensya ng fluorochrome, ang causative agent ng syphilis ay tinutukoy bilang isang cell na may dilaw-berdeng hangganan. Ang kawalan ng glow ay nangangahulugan na ang pasyente ay hindi nahawaan ng syphilis. Ang pagsusuri na ito ay madalas na inireseta na may positibong reaksyon ng Wasserman. Ang pamamaraang ito ay napaka-epektibo sa pagsusuri, dahil pinapayagan ka nitong makilala ang pathogen sa mga unang yugto ng sakit.
Bilang karagdagan sa katotohanan na pinapayagan ka ng RIF na mag-diagnose ng syphilis, ginagamit din ito upang matukoy ang pagkakaroon ng mga pathogen tulad ng chlamydia, mycoplasma, Trichomonas, pati na rin ang mga pathogens ng gonorrhea at genital herpes.
Para sa pagsusuri, ginagamit ang mga smear o venous blood. Ang pamamaraan para sa pagkuha ng isang smear ay ganap na walang sakit at hindi nagdudulot ng anumang panganib. Maghanda para sa pagsusuring ito. Labindalawang oras bago ito, hindi inirerekomenda na gumamit ng mga produkto sa kalinisan, tulad ng kaunti o gel. Gayundin, kung minsan, ayon sa patotoo ng isang doktor, ang isang provocation ay isinasagawa. Upang gawin ito, inirerekumenda nila ang pagkuha ng maanghang na pagkain o alkohol, o isang iniksyon ng isang nakakapukaw na sangkap, tulad ng gonovaccine o pyrogenal, ay isinasagawa. Bilang karagdagan, ang agwat sa pagitan ng pagkuha ng mga antibacterial na gamot at pagkuha ng pagsusulit ay dapat na hindi bababa sa labing-apat na araw.
Kapag sinusuri ang mga resulta, dapat isaalang-alang ng isa ang katotohanan na ang luminescence ay sinusunod hindi lamang sa mga nabubuhay na bakterya, kundi pati na rin sa mga patay, lalo na para sa chlamydia. Pagkatapos ng isang kurso ng antibiotics, ang mga patay na selula ng chlamydia ay kumikinang din.
Sa wastong paghahanda ng pasyente at pagsunod sa pamamaraan ng pagkuha ng isang smear, ang pagsusuri na ito ay nagbibigay-daan sa iyo upang makilala ang mga sakit sa mga unang yugto, na napakahalaga para sa napapanahong paggamot. Ang mga positibong aspeto ng pamamaraang ito ay ang maikling panahon para makuha ang resulta, kadalian ng pagpapatupad at mababang halaga ng pagsusuri.
Kasama sa mga disadvantage ang katotohanan na ang isang sapat na malaking halaga ng materyal na pinag-aaralan ay kinakailangan para sa pagsusuri. Bilang karagdagan, ang isang nakaranasang espesyalista lamang ang maaaring suriin ang mga resulta.
Talaan ng mga Nilalaman:Mga direktang pamamaraan
Dark field microscopy
Ang mga maputlang treponema ay hindi maaaring tumubo sa nutrient media at hindi nakikita sa ilalim ng isang light microscope. Dahil imposible ang pagtuklas ng isang pathogen gamit ang conventional microscopy, isang espesyal na mikroskopyo na may madilim na field ang ginagamit, kung saan ang pathogen ay makikita bilang isang spiral laban sa isang madilim na background.
Para sa mikroskopya, kinukuha ang isang biomaterial mula sa isang pokus na kahina-hinala para sa isang sakit. Ang dark field microscopy ay isang posibleng paraan upang suriin ang mga sugat sa balat tulad ng chancre ng pangunahing syphilis o warts ng pangalawang syphilis. Kung ang maculopapular lesion ay tuyo, suriin ang lymph node aspirate.
Ang isang negatibong resulta ay hindi nagbubukod ng isang proseso ng pathological; ayon sa istatistika, ang pathogen ay maaaring makita lamang sa 80%.
Mga diagnostic ng PCR
Ang isang reaksyon na naglalayong isang maramihang pagtaas sa DNA ng maputlang treponema ay nagpapahintulot sa amin na tapusin na mayroong impeksyon sa syphilis o kawalan nito.
Ang biomaterial para sa pagsusuri ay maaaring anuman: dugo, mga nilalaman ng syphilide, cerebrospinal fluid, atbp. Ang pagsusulit ay angkop para sa panahon ng pagpapapisa ng itlog.
Ang PCR ay ganap na tiyak.
Mga hindi direktang serological na pagsusuri para sa syphilis: treponemal at non-treponemal na pagsusuri
Ang mga pagsusuri sa serological (CSR o isang kumplikadong mga reaksyon ng serological) ay itinuturing na pinakakaraniwang paraan upang masuri ang lahat ng mga yugto ng syphilis. Ang mga sumusunod na reaksyon ay nakikilala:
- aglutinasyon;
- pag-ulan;
- immunofluorescence;
- enzyme immunoassay, atbp.
Gayundin, ang mga serological na pagsusuri para sa syphilis ay nahahati sa treponemal at non-treponemal.
Nontreponemal
Kung pinaghihinalaan ang nakuhang syphilis, isinasagawa ang screening testing, kung saan ginagamit nila mga pagsubok na hindi treponemal , na tumutukoy sa mga antibodies sa lipoid antigens ng mga tisyu ng host o pathogen sa iba't ibang mga pagbabago. Sa Russian Federation, ang isang microprecipitation reaction (RMP) ay regular na ginagawa, na ginagawang posible upang makita ang mga antibodies sa mga cell na nasira ng pathogen sa dugo. Mataas ang pagiging maaasahan ng screening, ngunit mababa ang specificity, kaya angkop ang pagsubok para sa pangunahing screening para sa mga layuning pang-iwas.
Ang sensitivity ng mga mabilis na pagsusuri ay tinatantya na 78-86% para sa pangunahing syphilis, 100% para sa pangalawang syphilis, at 95-98% para sa tertiary syphilis.
Pagtitiyak - mula 85-99%, minsan mas mababa, na nangyayari sa mga sumusunod na kondisyon:
- pagbubuntis;
- regla;
- oncology;
- mga sakit sa connective tissue;
- mga sakit na viral;
- sakit sa atay;
- pagbabakuna;
- "sariwa" IM;
- tipus, atbp.
Bilang karagdagan, ang labis na taba sa diyeta, pagkonsumo ng mga inuming may alkohol, at ilang partikular na gamot ay maaaring humantong sa mga maling positibo.
Nagiging positibo ang mga resulta ng screening test 1 hanggang 2 linggo pagkatapos ng pagbuo ng chancre. Ang mga pagsusuring hindi treponemal ay negatibo ilang sandali pagkatapos ng paggamot. Sa katayuan ng HIV, ang mga non-treponemal antibodies ay maaaring matukoy nang mahabang panahon, minsan sa buong buhay (na kinukumpirma ng mga resulta ng isang naaangkop na randomized na pagsubok).
Iba pang mga uri ng non-treponemal test: VDRL, plasmoreagin test (RPR), toluidine red test, complement fixation test na may cardiolipin antigen (RSKk).
Reaksyon ng Wasserman (RW)
Ang pag-aayos ng pandagdag ay ang tugon ng immune system sa impeksyon, ang resulta ay nag-iiba mula sa negatibo (ilagay ang "-") hanggang sa isang matinding positibong "++++" o 4 plus.
Sa unang yugto ng pangunahing syphilis, negatibo ang RW.
Treponemal
Dahil sa posibilidad ng mga maling positibong resulta, upang kumpirmahin ang anumang positibo o kaduda-dudang resulta ng pagsubok na hindi ntreponemal, gamitin mga pagsubok sa treponema:
- immunofluorescence reaksyon (RIF);
- hemagglutination (RPGA),
- enzyme immunoassay (ELISA) para sa class G immunoglobulins (IgG) at immunoglobulin M (IgM);
- immunoblotting;
- RIBT / RIT (treponema pallidum immobilization reaction).
Ang mga pagsusuri sa treponemal ay hindi ginagamit upang masuri ang pagiging epektibo ng therapy.
Ang RIF para sa pagpapasiya ng treponemal antibodies ng klase ng IgG ay ginagamit pagkatapos ng isang positibong resulta ng mga mabilis na pagsusuri (sensitivity 84% para sa pangunahing syphilis at 100% para sa iba pang mga yugto, pagtitiyak 96%). Hindi naaangkop para sa diagnosis sa mga bagong silang.
Ang ilang mga laboratoryo ay gumagamit ng "reverse" screening studies.
Inirerekomenda ng CDC (Centers for Disease Control and Prevention, USA) ang mga tradisyunal na pag-aaral, na may pagpapatunay sa pamamagitan ng quantitative non-treponemal na mga pagsusuri, na may positibong resulta, ang paggamot ay isinasagawa.
Immunofluorescence reaction (RIF)
Ang serum na may mga antibodies na may label na fluorochrome na tiyak sa antigen ng maputlang treponema ay inilalapat sa nakolektang materyal, ang pathogen ay umaakit ng mga immune complex, na nagiging sanhi ng pagkinang nito sa isang fluorescent microscope.
Passive hemoagglutination reaction o RPHA
Bago ang hitsura ng hemagglutination (gluing) ng mga erythrocytes, hindi bababa sa 4 na linggo ay dapat na lumipas mula sa sandali ng pagpapakilala ng maputlang treponema.
Ang mga inihanda na erythrocytes na may nakapirming mga fraction ng protina ng pathogen ay nakikipag-ugnayan sa plasma, kung mayroong mga antibodies sa syphilis, nangyayari ang isang reaksyon.
Angkop para sa pagkumpirma ng anumang yugto ng sakit.
Naka-link na immunosorbent assay
Ito ay batay sa isang antigen-antibody reaction. Ang mga antibodies ng iba't ibang klase ay nakita, na maaaring mabilang.
Ang mga resulta na nakuha ay posible upang hatulan ang tagal ng proseso ng pathological, ang tagumpay ng paggamot, ang immunological status, at ang aktibidad ng mga pathogens.
Ang immunoblotting ay isang uri ng ELISA, na ginagamit para sa mga malalim na diagnostic na may lahat ng mga kaduda-dudang resulta.
Sensitivity at specificity malapit sa 100%, ang ultra-sensitive na paraan ngayon para sa pagkilala sa protina.
RIBT
Ang pamamaraan ay batay sa reaksyon ng antigen-antibody. Ang Treponema pallidum, na nilinang sa mga testicle ng kuneho, ay nagsisilbing isang antigen. Kapag nakikipag-ugnayan sa mga antibodies ng isang nahawaang tao, ang mga pathogen ay nawawala ang kanilang kadaliang kumilos. Ang tugon ay tinasa ng dark field microscopy.
tala
Ang RIBT ay mas madalas na ngayong ginagamit dahil sa labor intensity, ngunit ang pagsusuri ay maaaring maging kapaki-pakinabang para sa paglutas ng mga kontrobersyal na isyu (mga maling positibong reaksyon sa syphilis).
Differential Diagnosis
Ang pinakamalaking kahirapan ay ang diagnosis ng tertiary syphilis, na sanhi ng mga sintomas mula sa cardiovascular at nervous system, pati na rin ang mga manifestations mula sa balat.
Ang mga pasyente ay dapat suriin para sa, at.
Inililista namin ang mga sakit kung saan isinasagawa ang differential diagnosis para sa syphilis:
- dermatological manifestations;
- genital warts ();
- donovanosis;
- venereal lymphogranuloma;
- virus;
- yaws.
Ano ang diagnosis ng syphilis
Sa una, ang isang pag-uusap ay gaganapin sa pasyente, kung saan ang mga detalye ay nilinaw: kapag nagkaroon ng kahina-hinalang pakikipagtalik at ano ang mga reklamo.
Matapos mangolekta ng isang anamnesis, nagpapatuloy sila sa isang pisikal na pagsusuri, ang espesyal na pansin ay binabayaran sa genital at anus, mauhog lamad at mga lymph node. Ang isang paunang pagsusuri ay maaari nang maitatag. Ang panghuling pagpapatunay ay nagaganap sa tulong ng mga pagsubok sa laboratoryo.
Sa pagsasalita lamang tungkol sa kumplikado, pagkatapos ay ibinubunyag ng ilang mga pagsubok ang causative agent ng syphilis, habang ang iba ay sumasalamin sa reaksyon ng katawan sa pagpapakilala ng maputlang treponema.
Upang maitatag ang pangwakas na diagnosis ng RPHA, 1 treponemal at 1 hindi treponemal na pagsusuri ang dapat idagdag.
Diagnosis ng syphilis sa mga buntis na kababaihan
Ang ipinag-uutos na pagsusuri para sa syphilis ay isinasagawa nang maraming beses sa panahon ng pagbubuntis.
Ang isang referral para sa pagsusuri ng DSC ay ibinibigay sa unang pagbisita ng isang babae sa isang konsultasyon, at ang pagsusuri ay isinasagawa ng tatlong beses sa panahon ng pagbubuntis. Ang mga pasyente mula sa isang high risk na grupo na may mabigat na kasaysayan: antisocial, dependent, atbp. ay nangangailangan ng partikular na malapit na atensyon.
Kung ang mga resulta ng pagsusuri ay positibo, ang isang mas malalim na pagsusuri ay isinasagawa, at ayon sa mga indikasyon, ang paggamot ay inireseta, na nakasalalay sa yugto at mga klinikal na pagpapakita.
Diagnosis ng congenital syphilis
Karamihan sa mga batang may ay ipinanganak sa mga ina na hindi ginagamot o huli na ang natanggap na therapy.
Ang mga pagsusuri sa treponemal gamit ang neonatal serum ay hindi inirerekomenda dahil sa passive transfer ng IgG antibodies. Ang lahat ng mga sanggol na ipinanganak sa mga ina na may syphilis ay dapat ma-screen gamit ang quantitative non-treponemal serological test (RPR o VDRL) na isinagawa gamit ang serum ng bagong panganak.
Paano bigyang-kahulugan ang mga resulta ng serological studies
Ang reaksyon ng microprecipitation, RIF at RPHA ay negatibo - ang pamantayan, positibo - kumpirmasyon ng syphilis.
Ang reaksyon ng microprecipitation ay negatibo, ang iba ay positibo - isang kasaysayan ng syphilis pagkatapos ng partikular na therapy, o isang huling yugto.
Negatibong RIF na may positibong RPHA at reaksyon ng microprecipitation - ang resulta ay nagdududa, paulit-ulit na komprehensibong pagtatasa.
Isang negatibong resulta ng RIF at microprecipitation, ngunit ang isang positibong RPHA ay isang kondisyon pagkatapos ng matagumpay na antibiotic therapy o isang maling positibong resulta.
Positibong RIF na may negatibong RPHA at reaksyon ng microprecipitation - isang maagang yugto, ang paggamot na ginawa o ang hindi pagiging maaasahan ng resulta.
Ang isang positibong reaksyon ng microprecipitation, na hindi nakumpirma ng alinman sa RPHA o RIF, ay ang kawalan ng syphilis.
Instrumental na pagsusuri para sa syphilis
Ang mga instrumental na diagnostic ay isinasagawa depende sa paglahok ng mga organo. Halimbawa, ang granulomatous liver disease ay makikita sa tiyan.
Ang mga pasyente na may tertiary syphilis ay maaaring magpakita ng paglawak ng aorta. Ang linear calcification kasama ang kurso ng aorta ay nagpapahiwatig ng syphilitic aortitis.
Ginagamit ng pamamaraang ito ang phenomenon ng luminescence.
Ang kakanyahan ng kababalaghan ng luminescence ay nakasalalay sa katotohanan na kapag ang iba't ibang uri ng enerhiya (ilaw, elektrikal, atbp.) ay hinihigop ng mga molekula ng ilang mga sangkap, ang kanilang mga atomo ay napupunta sa isang nasasabik na estado, at pagkatapos, bumalik sa kanilang orihinal na estado. , naglalabas ng hinihigop na enerhiya sa anyo ng liwanag na radiation.
Sa RIF, luminescence ay nagpapakita ng sarili sa anyo ng fluorescence - ito ay isang glow na nangyayari sa sandali ng pag-iilaw na may kapana-panabik na liwanag at huminto kaagad pagkatapos na ito ay natapos.
Maraming mga sangkap at mga nabubuhay na mikroorganismo ay may sariling pag-ilaw (ang tinatawag na pangunahin), ngunit ang intensity nito ay napakababa. Ang mga sangkap na may matinding pangunahing pag-ilaw at ginagamit upang magbigay ng mga katangian ng fluorescent sa mga di-fluorescent na sangkap ay tinatawag na fluorochromes. Ang ganitong sapilitan na pag-ilaw ay tinatawag na pangalawa.
Upang pukawin ang fluorescence sa fluorescent microscopy, ang ultraviolet o blue-violet na bahagi ng spectrum (wavelength 300-460 nm) ay kadalasang ginagamit. Para sa mga layuning ito, ang mga laboratoryo ay may luminescent microscope ng iba't ibang mga modelo - ML-1-ML-4, "Lumam".
Sa virological practice, dalawang pangunahing paraan ng fluorescent microscopy ang ginagamit: fluorochromization at fluorescent antibodies (o RIF).
Fluorochromization- ito ang paggamot ng mga paghahanda na may fluorochrome upang mapataas ang lakas at kaibahan ng kanilang luminescence. Ang pinakamalaking interes ay ang fluorochrome acridine orange, na nagiging sanhi ng polychromatic fluorescence ng mga nucleic acid. Kaya, kapag ang mga paghahanda ay ginagamot sa fluorochrome na ito, ang deoxyribonucleic acid ay lumiliwanag nang maliwanag sa berde, at ribonucleic acid - ruby red.
Ang pamamaraan ng RIF ay binubuo sa katotohanan na ang mga antibodies na konektado sa isang fluorochrome ay nagpapanatili ng kakayahang pumasok sa isang tiyak na relasyon sa isang homologous antigen. Ang nagreresultang antigen + antibody complex, dahil sa pagkakaroon ng fluorochrome sa loob nito, ay nakita sa ilalim ng isang fluorescent microscope ng isang katangian na glow.
Upang makakuha ng mga antibodies, ginagamit ang mataas na aktibong hyperimmune sera, kung saan ang mga antibodies ay nakahiwalay at may label na fluorochrome. Ang pinakakaraniwang ginagamit na fluorochromes ay ang FITC-fluorescein isothiocyanate (berdeng ilaw) at PCX-rhodamine sulfochloride (pulang ilaw). Ang isang antibody na may label na fluorochrome ay tinatawag na conjugate.
Ang paraan ng paghahanda at paglamlam ng mga paghahanda ay ang mga sumusunod:
- maghanda ng mga pahid, mga kopya mula sa mga organo o sa mga cover slip - isang nahawaang cell culture sa mga glass slide; Magagamit din ang mga histosection;
- ang mga paghahanda ay tuyo sa hangin at naayos sa pinalamig na acetone sa temperatura ng silid o sa minus 15 °C (mula 15 minuto hanggang 4-16 na oras);
- nabahiran ng direkta o hindi direktang pamamaraan; panatilihin ang mga tala sa ilalim ng isang fluorescent microscope ayon sa intensity ng glow, na tinatantya sa mga krus.
Sa parallel, maghanda at mantsa ng mga paghahanda mula sa isang malusog na hayop - kontrol.
Mayroong dalawang pangunahing paraan ng paglalapat ng fluorescent antibodies: direkta at hindi direkta.
Direktang pamamaraan (isang hakbang). Ang isang conjugate (fluorescent serum sa pinaghihinalaang virus) ay inilapat sa nakapirming paghahanda, na incubated sa loob ng 30 minuto sa temperatura na 37 ° C sa isang mahalumigmig na silid. Pagkatapos ang gamot ay hugasan mula sa hindi nakatali na conjugate na may asin (pH 7.2 - 7.5), pinatuyo sa hangin, inilapat ang hindi fluorescent na langis at sinusuri sa ilalim ng mikroskopyo.
Ang direktang paraan ay nagbibigay-daan sa pagtuklas at pagkakakilanlan ng antigen. Upang gawin ito, kailangan mong magkaroon ng fluorescent serum para sa bawat virus.
Hindi direktang pamamaraan (dalawang yugto). Ang isang walang label na serum na naglalaman ng mga antibodies sa pinaghihinalaang virus ay inilapat sa nakapirming paghahanda, na incubated sa loob ng 30 minuto sa 37 °C, ang mga hindi nakatali na antibodies ay nahuhugasan. Ang isang fluorescent na anti-species na serum ay inilalapat sa paghahanda, na naaayon sa uri ng hayop na gumagawa ng mga homologous na antiviral antibodies, at inilublob sa loob ng 30 minuto sa 37 °C. Pagkatapos ang gamot ay hugasan mula sa hindi nakatali na may label na mga antibodies, pinatuyo sa hangin, inilapat ang hindi fluorescent na langis at sinusuri sa ilalim ng isang fluorescent microscope.
Ang mga anti-species na sera ay nakukuha sa pamamagitan ng pagbabakuna sa mga hayop na may mga globulin ng mga species na nagsisilbing producer ng anti-viral antibodies. Kaya, kung ang mga antiviral antibodies ay nakuha sa mga kuneho, pagkatapos ay ginagamit ang fluorescent anti-rabbit serum.
Ang hindi direktang pamamaraan ay nagbibigay-daan hindi lamang upang makita at makilala ang antigen, ngunit din upang makita at matukoy ang titer ng antibody. Bilang karagdagan, ang pamamaraang ito ay maaaring makakita ng mga antigen ng iba't ibang mga virus na may isang solong may label na sera, dahil ito ay batay sa paggamit ng anti-species na sera. Mas karaniwang ginagamit ang anti-rabbit, anti-bovine, anti-horse sera at sera laban sa guinea pig globulin.
Maraming mga pagbabago ng hindi direktang pamamaraan ang binuo. Ang paraan ng paggamit ng pandagdag ay nararapat na bigyang pansin. Ang pamamaraan ay binubuo sa paglalapat ng inactivated non-fluorescent specific serum at guinea pig na pandagdag sa nakapirming paghahanda, pinapanatili ito ng 30 minuto sa 37 °C, paghuhugas nito, at upang makita ang antigen + antibody + complement complex, paglalapat ng fluorescent anti-complementary serum , pinapanatili ito ng 30 minuto sa 37 °C , hinugasan, pinatuyo sa hangin at sinuri sa ilalim ng fluorescent microscope.
Mga kalamangan ng RIF: mataas na pagtitiyak at pagiging sensitibo; kadalian ng diskarte sa pagtatakda; nangangailangan ng pinakamababang bilang ng mga bahagi. Isa itong express diagnostic method, dahil makakakuha ka ng sagot sa loob ng ilang oras. Kasama sa mga disadvantage ang pagiging subjectivity sa pagtatasa ng intensity ng luminescence at, sa kasamaang-palad, minsan ang fluorescent sera ay hindi maganda ang kalidad. Sa kasalukuyan, ang RIF ay malawakang ginagamit sa pagsusuri ng mga viral na sakit sa hayop.
Kung makakita ka ng error, mangyaring i-highlight ang isang piraso ng teksto at i-click Ctrl+Enter.
Immunofluorescent method (RIF, immunofluorescence reaction, Koons reaction) ay isang paraan para sa pag-detect ng mga partikular na antigen gamit ang mga antibodies na pinagsama-sama ng fluorochrome. Ito ay may mataas na sensitivity at specificity.
Ginagamit ito para sa pagpapahayag ng mga diagnostic ng mga nakakahawang sakit (pagkilala ng pathogen sa materyal ng pagsubok), pati na rin para sa pagpapasiya ng mga antibodies at mga receptor sa ibabaw at mga marker ng leukocytes (immunophenotyping) at iba pang mga cell.
Ang pagtuklas ng bacterial at viral antigens sa mga nakakahawang materyales, tissue ng hayop, at cell culture gamit ang fluorescent antibodies (sera) ay malawakang ginagamit sa diagnostic practice. Ang paghahanda ng fluorescent sera ay batay sa kakayahan ng ilang fluorochromes (halimbawa, fluorescein isothiocyanate) na pumasok sa isang kemikal na bono na may mga serum na protina nang hindi nilalabag ang kanilang immunological specificity.
Mayroong tatlong uri ng pamamaraan: direkta, hindi direkta, na may pandagdag. Ang direktang paraan ng RIF ay batay sa katotohanan na ang mga tissue antigens o microbes na ginagamot sa immune sera na may mga antibodies na may label na mga fluorochromes ay maaaring kumikinang sa mga sinag ng UV ng isang fluorescent microscope. Ang mga bakterya sa isang smear, na ginagamot ng tulad ng isang luminescent serum, ay kumikinang sa paligid ng cell sa anyo ng isang berdeng hangganan.
Ang hindi direktang paraan ng RIF ay binubuo sa pagtukoy sa antigen-antibody complex gamit ang antiglobulin (anti-antibody) serum na may label na fluorochrome. Upang gawin ito, ang mga smear mula sa isang suspensyon ng mga microbes ay ginagamot ng mga antibodies ng antimicrobial rabbit diagnostic serum. Pagkatapos ay ang mga antibodies na hindi nakagapos ng mga microbial antigens ay hinuhugasan, at ang mga antibodies na natitira sa mga mikrobyo ay makikita sa pamamagitan ng paggamot sa smear na may antiglobulin (anti-rabbit) serum na may label na fluorochromes. Bilang resulta, nabuo ang isang kumplikadong microbe + antimicrobial rabbit antibodies + anti-rabbit antibodies na may label na fluorochrome. Ang kumplikadong ito ay sinusunod sa isang fluorescent microscope, tulad ng sa direktang pamamaraan.
Mekanismo. Sa isang glass slide, ang isang smear ay inihanda mula sa materyal na pagsubok, na naayos sa isang apoy at ginagamot sa immune rabbit serum na naglalaman ng mga antibodies laban sa mga pathogen antigens. Upang bumuo ng isang antigen-antibody complex, ang paghahanda ay inilalagay sa isang mamasa-masa na silid at inilublob sa 37 °C sa loob ng 15 minuto, pagkatapos nito ay lubusan itong hugasan ng isotonic sodium chloride solution upang alisin ang mga antibodies na hindi nakagapos sa antigen. Pagkatapos, ang isang fluorescent antiglobulin serum laban sa mga globulin ng kuneho ay inilapat sa paghahanda, na incubated para sa 15 minuto sa 37 ° C, at pagkatapos ay ang paghahanda ay lubusan na hugasan ng isotonic sodium chloride solution. Bilang isang resulta ng pagbubuklod ng fluorescent antiglobulin serum na may mga tiyak na antibodies na naayos sa antigen, ang mga luminous na antigen-antibody complex ay nabuo, na napansin ng fluorescent microscopy.
22. Enzyme immunoassay- isang laboratoryo na immunological na pamamaraan para sa qualitative o quantitative determination ng iba't ibang compound, macromolecules, virus, atbp., na batay sa isang partikular na antigen-antibody reaction. Ang pagtuklas ng nabuo na kumplikado ay isinasagawa gamit ang enzyme bilang isang label para sa pagpaparehistro ng signal.
Pag-uuri:
Competitive (ang nasuri na tambalan at ang analogue nito ay sabay na naroroon sa system)
Non-competitive (Kung tanging ang nasuri na tambalan at ang mga kaukulang binding site nito (antigen at mga partikular na antibodies) ang nasa system)
Direkta at hindi direkta
1. Serum na naglalaman ng isang halo ng am ay incubated na may anti, naayos sa isang solid substrate.
2.at na huwag magbigkis ag ay inalis sa pamamagitan ng paulit-ulit na paghuhugas.
3. magdagdag ng antiserum na may label na enzyme sa mga antibodies na nagbubuklod sa antigen
4. tukuyin ang dami ng marker enzyme na nakatali sa at
Hindi direkta:
Sa positibong serum
1.specific antibodies sa serum sa ilalim ng pag-aaral magbigkis antigen naayos sa isang solid substrate
2. ang mga partikular na antibodies na may label na enzyme ay hindi nakikipag-ugnayan sa nakagapos na ag - mababa ang nilalaman ng marker sa substrate
Ab-negatibong suwero
1. Ang mga nonspecific na antibodies sa test serum ay hindi nagbibigkis ng antigen na naayos sa isang solidong substrate
2. Ang mga partikular na antibodies na may label na enzyme ay nakikipag-ugnayan, na may nakapirming ag - mataas ang nilalaman ng marker
Ang pinakakaraniwan ay solid-phase ifa, kung saan ang isa sa mga bahagi ng immune response (antigen o antibody) ay na-sorbed sa isang solidong carrier. Ang polystyrene micropanels ay ginagamit bilang solidong carrier. Kapag tinutukoy ang mga antibodies, ang serum ng dugo na may label na enzyme at isang pinaghalong solusyon para sa enzyme at chromogen ay sunud-sunod na idinaragdag sa mga balon na may adsorbed antigen. Sa bawat oras pagkatapos idagdag ang susunod na bahagi, ang mga hindi nakatali na reagents ay aalisin mula sa mga balon sa pamamagitan ng masusing paghuhugas. Sa isang positibong resulta, nagbabago ang kulay ng chromogen solution.
Ang isang solid-phase carrier ay maaaring maging sensitibo hindi lamang sa isang antigen, kundi pati na rin sa isang antibody. Pagkatapos, ang nais na antigen ay ipinapasok sa mga balon na may adsorbed antibodies, ang immune serum laban sa antigen na may label na enzyme ay idinagdag, at pagkatapos ay idinagdag ang pinaghalong substrate na solusyon para sa enzyme at chromogen.
Application: para sa pagsusuri ng mga sakit na dulot ng viral at bacterial pathogens.
23. Serological reaksyon- isang reaksyon kung saan pinag-aaralan ang reaksyon ng isang antigen (microbe, virus, dayuhang protina) na may mga antibodies sa serum ng dugo.
Serological na pag-aaral- ito ay mga pamamaraan para sa pag-aaral ng ilang antibodies o antigens sa serum ng dugo ng mga pasyente, batay sa mga immune reaction. Sa kanilang tulong, ang mga antigen ng microbes o tissue ay natutukoy din upang makilala ang mga ito.
Ang pagtuklas sa serum ng dugo ng pasyente ng mga antibodies sa causative agent ng impeksyon o ang kaukulang antigen ay ginagawang posible upang maitatag ang sanhi ng sakit.
Ginagamit din ang mga serological na pag-aaral upang matukoy ang mga antigen ng mga grupo ng dugo, mga antigen ng tissue at ang antas ng humoral immunity.
Kasama sa mga pag-aaral ng serological ang iba't ibang mga reaksyon ng serological:
1. Agglutination reaksyon.
2. Reaksyon ng pag-ulan.
3. Reaksyon ng neutralisasyon.
4. Reaksyon na may kasamang pandagdag.
5. Reaksyon gamit ang mga may label na antibodies o antigens.