Вакцинацию можно охарактеризовать по-разному: геноцидом, уничтожением населения, широкомасштабным экспериментом над живыми детьми, манипуляцией массового сознания. В любом случае здравый взгляд на зазеркалье показывает, что здоровье и вакцины - вещи не совместимые.
РГИВ - новая продукция в профилактике инфекционных болезней. Примером такой вакцины является вакцина против гепатита В. Вооружившись методами генной инженерии, медико-биологи получили прямой доступ к геному. Теперь возможно встраивать гены, удалять их или удваивать.
Например, ген одного организма можно встроить в геном другого. Подобный перенос генетической информации возможен даже через «эволюционное расстояние, разделяющее человека и бактерию». Молекулу ДНК можно разрезать на отдельные фрагменты с помощью специфических ферментов и ввести эти фрагменты в другие клетки.
Стало возможным включать в бактериальные клетки гены других организмов, в том числе гены, ответственные за синтез белков. Таким способом в современных условиях получают значительное количество интерферона, инсулина и других биопрепаратов. Аналогичным путём получена вакцина против гепатита В - ген вируса гепатита встроен в клетку дрожжей.
Как и все новое, тем более генно-инженерное лекарственное средство, предназначенное для парентерального введения (у нас опять-таки массово и через три часа после рождения ребенка!), эта вакцина требует проведения продолжительных наблюдений - то есть, речь идет о тех же «широкомасштабных испытаниях... на детях».
Из многочисленных публикаций следует: «Наблюдения становятся более точными и ценными, если они проводятся в период массовых кампаний иммунизации. В таких кампаниях в течение короткого времени прививается большое количество детей. Появление в этот период группы определенных патологических синдромов свидетельствует, как правило, об их причинной связи с вакцинацией». В понятие определённого патологического синдрома может входить как кратковременная лихорадка и кашель, так и полный или частичный паралич или отставание в умственном развитии.
Кроме вакцины «Энджерикс против гепатита В» «такой же безопасной и эффективной» заявлена противогепатитная южнокорейская вакцина, активно навязываемая нашей стране. Генно-инженерные вакцины - «профилактическое» средство со многими неизвестными. Наша страна не в состоянии проверить безопасность этой продукции из-за отсутствия соответствующих экспериментальных баз. Мы не можем ни качественно проконтролировать докупаемые вакцины, ни создать условия для приготовления безопасных собственных вакцин. Проверка рекомбинантных лекарственных средств - высокотехнологический эксперимент, требующий огромных затрат. Увы, мы в этом отношении очень далеки от уровня передовых лабораторий мира и практически совершенно не ориентированы на контроль подобной продукции. В связи с этим в России (и Украине) регистрируется все то, что не прошло клинических испытаний у зарубежных производителей этих вакцин, или испытания прошли, но в недостаточном объеме... Отсюда лавинообразное количество вакцин от разных доброхотов, «стремящихся помочь России» и везущих нам не завтрашние и не сегодняшние технологии, а позавчерашние - «по сути, отходы от их современного производства, или те вакцины, которые необходимо исследовать в «широкомассштабных экспериментах на детях». Чаще это именуют «широкомасштабными наблюдениями», а задача одна - опыты на наших детях!
КАЗАЛОСЬ БЫ, БЕССМЫСЛЕННО И БЕЗНРАВСТВЕННО ДОКАЗЫВАТЬ ОПАСНОСТЬ СОЛЕЙ РТУТИ ДЛЯ ГРУДНЫХ ДЕТЕЙ, КОГДА ШИРОКО ИЗВЕСТНЫ ПОСЛЕДСТВИЯ ИХ ВОЗДЕЙСТВИЯ НА ОРГАНИЗМ ВЗРОСЛОГО ЧЕЛОВЕКА.
Напомним, что соли ртути более опасны, нежели сама ртуть. Однако отечественная вакцина АКДС, содержащая 100 мкг/мл мертиолята (ртутьорганической соли) и 500 мкг/мл формалина (сильнейшего мутагена и аллергена) применяется около 40 лет. К аллергенным свойствам формалина относятся: отёк Квинке, крапивница, ринопатая (хронический насморк), астматические бронхиты, бронхиальна астма, аллергические гастриты, холециститы, колиты, эритемы и трещины кожи и др. Всё это отмечается педиатрами более 40 лет, но статистика запрятана за железными дверями от широкой общественности. Тысячи детей страдают десятки лет, но чиновникам от медицины до этого дела нет.
Нет никаких данных о действии мертиодята и формалина, НИКОГДА И НИКТО НЕ ИЗУЧАЛ ЭТОГО КОНГЛОМЕРАТА на детенышах животных в плане непосредственных реакций и отдаленных последствий; скажем, для подростков. Фирмы ПРЕДУПРЕЖДАЮТ, следовательно, не несут никакой ответственности за действия наших вакцинаторов и контролеров! Таким образом, в нашей стране продолжаются многолетние, «широкомасштабные испытания» на наших детях с развитием разнообразных патологических синдромов. С каждым днём в эту адскую мясорубку бросают всё новых и новых безвинных младенцев (тех, кто избежал аборта), пополняя ряды детей-инвалидов и их несчастных родителей, не подозревающих об истинной причине страданий их чад. Тщательно подготовленная и проводимая «кампания по запугиванию населения» эпидемиями дифтерии, туберкулёза, гриппа с одной стороны и запретительные меры в отношении детских садов и школ не оставляют никаких шансов родителям.
НЕЛЬЗЯ ДОПУСКАТЬ, ЧТОБЫ ТОЛЬКО ФИРМЫ И МАЛОКОМПЕТЕНТНЫЕ ВАКЦИНАТОРЫ КОРПОРАТИВНО РЕШАЛИ СУДЬБУ НАШИХ ДЕТЕЙ.
Поскольку больше нигде в мире не проводится вакцинация БЦЖ новорожденным, проводимые в России и Украине мероприятия являются экспериментом, потому что «проводят оценку эффективности сочетанной иммунизации новорождённых против гепатита В и против туберкулёза на фоне массовой иммунизации». Недопустимая нагрузка на организм новорождённых! Этот эксперимент, «широкомасштабная вакцинация на предмет выявления патологических синдромов» проводится в масштабе государства, предоставившего для таких наблюдений неограниченное число собственных детей... не поставив в известность об этом родителей! К тому же «патологические синдромы» могут проявиться и год спустя, и пять лет и значительно позже... Существуют данные, что эта вакцина спустя 15 -20 лет может вызвать цирроз печени.
Какие же компоненты входят в состав ЭНДЖЕРИКС (вакцина против гепатита В)?
1. Основа препарата- «модифицированные» пекарские дрожжи, «широко применяемые в производстве хлеба и пива». Здесь явно пропущено слово «генетически-модифицированные» - по-видимому из-за того, что это сочетание уже изрядно напугало население на примере сои, картофеля, кукурузы, ввозимых из-за границы. Генетически-модифицированный продукт сочетает в себе свойства входящих в него ингредиентов, приводящих при применении к непредсказуемым последствиям. Что упрятали генные инженеры в дрожжевую клетку кроме вируса гепатита В? Можно подселить туда ген вируса СПИДа или ген любого онкозаболевания.
2. Гидроокись алюминия. Здесь следует подчеркнуть, что многие десятилетия не рекомендуется (!) использовать этот адъювант для вакцинации детей.
3. Тиомеросаль - это мертиолят (ртутьорганическая соль), о пагубном влиянии которого на центральную нервную систему известно давно, относится к разряду пестицидов.
4. Полисорбент (не расшифровывается).
http://www.ligis.ru/librari/3379.htm
Молекулярные вакцины .
АГ нах-ся в молекулярной форме или в виде фрагментов его молекул, определяющих специфичность антигенности, т.е в виде эпитопов, детерминант.
Антигены в молекулярном виде получают:
а) в процессе биосинтеза при выращивании природных, а также рекомбинантных штаммов бактерий и вирусов и
б) химическим синтезом.(более трудоёмок и имеет ограниченные возможности по сравнению с биосинтезом.
Типичным примером молекулярных антигенов, образуемых биосинтезом природными штаммами, являются анатоксины (столбнячный, дифтерийный, ботулинический и др.), получаемые из обезвреженных токсинов. В мед практике используется молекулярная вакцина против Вир. Гепатита В, полученная из АГ вируса, продуцируемого рекомбинантным штаммом дрожжей.
Генно-инженерные вакцины . Генно-инженерные вакцины содержат Аг возбудителей, полученные с использованием методов генной инженерии, и включают только высокоиммуногенные компоненты, способствующие формированию защитного иммунитета
Возможны несколько вариантов создания генно-инженерных вакцин.
Внесение генов вирулентности в авирулентные или слабовирулентные микроорганизмы.
Внесение генов вирулентности в неродственные микроорганизмы с последующим выделением Аг и его использованием в качестве иммуногена.
Искусственное удаление генов вирулентности и использование модифицированных организмов в виде корпускулярных вакцин.
Векторные (рекомбинантные) вакцины
Вакцины, полученные методами генной инженерии. Суть метода: гены вирулентного микроорганизма, отвечающий за синтез протективных антигенов, встраивают в геном какого - либо безвредного микроорганизма (e. Coli), который при культивировании продуцирует и накапливает соответствующий антиген.
Рекомбинантные вакцины - для производства этих вакцин применяют рекомбинантную технологию, встраивая генетический материал микроорганизма в дрожжевые клетки, продуцирующие антиген. После культивирования дрожжей из них выделяют нужный антиген, очищают и готовят вакцину. Примером таких вакцин может служить вакцина против гепатита В (Эувакс В).
Вакцины в основном используют для активной спецефической профилактики, иногда для лечения болезней.
Мальчик Коля И., 7 лет, стал капризным, отказывается от еды, сон беспокойный, температура 38,5. На 2 ой день после заболевания педиатр при осмотре ребенка обнаружил увеличенную правую околоушную железу. Кожа над припухлостью напряжена, но не воспалена. Врач поставил диагноз «Эпидемический паротит» Перечислите звенья эпидемической цепочки: источник, возможные пути передачи. Какие методы лаб диагностики стоит использовать для подтверждения диагноза? Какими препаратами должна быть подведена профилактика?
№ 43 Генно-инженерные вакцины. Принципы получения, применение.
Генно-инженерные вакцины – это препараты, полученные с помощью биотехнологии, которая по сути сводится к генетической рекомбинации.
Для начала получают ген, который должен быть встроен в геном реципиента. Небольшие гены могут быть получены методом химического синтеза. Для этого расшифровывается число и последовательность аминокислот в белковой молекуле вещества, затем по этим данным узнают очерёдность нуклеотидов в гене, далее следует синтез гена химическим путем.
Крупные структуры, которые довольно сложно синтезировать получаются путем выделения (клонирования), прицельного выщепления этих генетических образований с помощью рестриктаз.
Полученный одним из способов целевой ген с помощью ферментов сшивается с другим геном, который используется в качестве вектора для встраивания гибридного гена в клетку. Вектором могут служить плазмиды, бактериофаги, вирусы человека и животных. Экспрессируемый ген встраивается в бактериальную или животную клетку, которая начинает синтезировать несвойственное ей ранее вещество, кодируемое экспрессируемым геном.
В качестве реципиентов экспрессируемого гена чаще всего используется E. coli, B. subtilis, псевдомонады, дрожжи, вирусы, некоторые штаммы способны переключаться на синтез чужеродного вещества до 50% своих синтетических возможностей – эти штамм называются суперпродуцентами.
Иногда к генно-инженерным вакцинам добавляется адъювант.
Примерами таких вакцин служат вакцина против гепатита В (энджерикс), сифилиса, холеры, бруцеллёза, гриппа, бешенства.
Есть определённые сложности в разработке и применении:
- длительное время к генно-инженерным препаратам относились настороженно.
- на разработку технологии для получения вакцины затрачиваются значительные средства
- при получении препаратов данным способом возникает вопрос об идентичности полученного материала природному веществу.
Ассоциированные и комбинированные вакцинные препараты. Достоинства. Вакцинотерапия.
Ассоциированные вакцины – препараты, включающие несколько разнородных антигенов и позволяющие проводить иммунизацию против нескольких инфекций одновременно. Если в препарат входят однородные антигены, то такую ассоциированную вакцину называют поливакциной. Если же ассоциированный препарат состоит из разнородных антигенов, то его целесообразно называть комбинированной вакциной.
Возможна так же комбинированная иммунизация, когда одновременно вводят несколько вакцин в различные участки тела, например, против оспы (накожно) и чумы (подкожно).
Примером поливакцины можно считать живую полиомиелитную поливакцину, содержащую аттенуированные штаммы вируса полиомиелита I, II, III типов. Примером комбинированной вакцины является АКДС, куда входят инактивированная корпускулярная коклюшная вакцина, дифтерийный и столбнячный анатоксин.
Комбинированные вакцины применяются в сложной противоэпидемической обстановке. В основе их действия лежит способность иммунной системы отвечать на несколько антигенов одновременно.
Генная инженерия - это экспериментальная наука, изучающая закономерности конструирования in vitro и поведение в реципиентной клетке функционально активных молекул рекомбинантной ДНК.
Объектом исследования генной инженерии являются гены - отрезки ДНК, кодирующие синтез тех или иных белков.
Принцип создания генно-инженерных вакцин заключается в том, что интересующий нас ген (ответственный за синтез иммунного белка вируса) «вырезают» из ДНК вируса с помощью ферментов (рестриктаз) и встраивают, используя ферменты (лигазы), в ДНК вектора (например, в плазмиду Е. coli - это автономная кольцевая ДНК из 4-6 тыс. пар нуклеотидов, способная размножаться в клетках Е. сой). Затем эту рекомбинантную ДНК вводят в клетки Е. coli, в которых рекомбинантная ДНК размножается (реплицируется) и происходит экспрессия встроенного гена, т. е. синтез соответствующего белка (кодируемого встроенным геном вируса).
Бактериальные клетки Е. coli культивируют в питательной среде, и происходит «наработка» иммуногенного белка вируса, который выделяют и после соответствующей очистки используют в качестве материала для вакцины. Однако необходимо отметить, что многие вирусные белки, успешно синтезированные в микроорганизмах, имеют очень низкую иммуногенную активность. Причина этого в особенностях формирования структуры вирусных белков. Как правило, они гликозилированы, имеют сложную третичную или четвертичную структуру. Так, гемагглютинин вируса гриппа находится в вирионе в виде тримера, который образуется из мономерных полипепдидов в клетках животных. Получить in vitro такую функционально активную структуру гемагглютинина не удается. Иммуногенность гемагглютинина в вирионе в несколько тысяч раз выше, чем мономерного полипептида, синтезированного в бактериях.
При получении генно-инженерных вакцин в качестве векторов кроме плазмид используют фаги, дрожжи, вирусы животных (вирус осповакцины, аденовирусы, бакуло — и герпесвирусы).
Наибольший эффект получен с вирусом осповакцины, используемым в качестве вектора. Этот вирус имеет большой геном (около 187 тыс. пар нуклеотидов). Из него можно удалить значительный участок (около 30 тыс. пар нуклеотидов), который не является жизненно необходимым для репродукции этого вируса в клетках, а на его место встроить чужеродные гены тех вирусов, против которых получают вакцину. Полученные при этом рекомбинантные ДНК способны размножаться в организме привитых и индуцировать образование иммунитета не только против оспы, но и против того вируса, чей ген встроен в его геном. Использование вируса осповакцины в качестве вектора для вакцинации имеет ряд преимуществ: способность размножаться в клетках животных многих видов; экспрессировать несколько генов; индуцировать гуморальный и клеточный иммунитеты; термостабильность; экономичное производство и легкость применения. Выявленные ранее недостатки у вируса осповакцины, связанные с реактогенностью, были в основном устранены с помощью генетических манипуляций. Возможность включения нескольких генов, кодирующих соответствующие иммуногены, дают возможность вакцинировать животных одновременно против нескольких вирусных болезней. Однако необходимо иметь в виду, что индивидуумы, уже иммунные к вирусу осповакцины, при вакцинации рекомбинантным вирусам не дают эффекта ввиду отсутствия его приживаемости.
В последние годы получены профилактические препараты из рекомбинантного штамма вируса осповакцины, содержащего гены, кодирующие поверхностные гликопротеиды вирусов гриппа, бешенства, респираторно-сицитиального, болезни Ауески, инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота и др.
Если вы нашли ошибку, пожалуйста, выделите фрагмент текста и нажмите Ctrl+Enter .
Вакцинация способствует формированию у реципиента иммунитета к патогенным микроорганизмам и тем самым защищает его от инфекции. В ответ на пероральное или парентеральное введение вакцины в организме хозяина вырабатываются антитела к патогенному микроорганизму, которые при последующей инфекции приводят к его инактивации (нейтрализации или гибели), блокируют его пролиферацию и не позволяют развиться заболеванию.
Эффект вакцинации открыл более 200 лет назад - в 1796 г. - врач Эдуард Дженнер. Он доказал экспериментально, что человек, перенесший коровью оспу, не очень тяжелую болезнь крупного рогатого скота, становится невосприимчивым к оспе натуральной. Натуральная оспа - высококонтагиозное заболевание с высокой смертностью; даже если больной не погибает, у него нередко возникают различные уродства, психические расстройства и слепота. Дженнер публично провел прививку коровьей оспы 8-летнему мальчику Джеймсу Фиппсу, использовав дая этого экссудат из пустулы больной коровьей оспой, а затем через определенное время дважды инфицировал ребенка гноем из пустулы больного натуральной оспой. Все проявления заболевания ограничились покраснением в месте прививки, исчезнувшим через несколько дней. Вакцины такого типа получили название дженеровских. Однако такой путь вакцинации не получил большого развития. Это объясняется тем, что в природе не всегда возможно найти малопатогенный аналог болезнетворного микроорганизма, пригодный для приготовления вакцины.
Более перспективным оказался метод вакцинации предложенный Пастером. Пастеровские вакцины получают на основе убитых (инактивированных) патогенных микроорганизмов либо живых, но не вирулентных (аттенуированных) штаммов. Для этого штамм дикого типа выращивают в культуре, очищают, а затем инактивируют (убивают) или ослабляют (аттенуируют) таким образом, чтобы он вызывал иммунный ответ, достаточно эффективный в отношении нормального вирулентного штамма.
Для иммунопрофилактики некоторых болезней, таких, например, как столбняк или дифтерия, наличие самих бактерий в вакцине необязательно. Дело в том, что главной причиной этих заболеваний являются выделяемые этими бактериями патогенные токсины. Ученые обнаружили, что эти токсины инактивируются формалином и могут затем безопасно использоваться в вакцинах. При встрече иммунной системы с вакциной, содержащей безопасный анатоксин, она вырабатывает антитела для борьбы с настоящим токсином. Такие вакцины получили название анатоксины .
Ранее такие инфекционные болезни, как туберкулез, оспа, холера, брюшной тиф, бубонная чума и полиомиелит, были настоящим бичом для человечества. С появлением вакцин, антибиотиков и внедрением мер профилактики эти эпидемические болезни удалось взять под контроль. К сожалению, против многих болезней человека и животных вакцин до сих пор не существует или они малоэффективны. Сегодня во всем мире более 2 млрд. людей страдают заболеваниями, которые можно было бы предотвратить с помощью вакцинации. Вакцины могут оказаться полезными и для профилактики постоянно появляющихся «новых» болезней (например, СПИДа).
Несмотря на значительные успехи в создании вакцин против таких заболеваний, как краснуха, дифтерия, коклюш, столбняк и полиомиелит, производство и использование классических ”пастеровских” вакцин сталкивается с целым рядом ограничений.
1. Не все патогенные микроорганизмы удается культивировать, поэтому для многих заболеваний вакцины не созданы.
2. Для получения вирусов животных и человека необходима дорого-стоящая культура животных клеток.
3. Титр вирусов животных и человека в культуре и скорость их размноже-ния часто бывают очень низкими, что удорожает производство вакцин.
4. Необходимо строго соблюдать меры предосторожности при производстве вакцин из высокопатогенных микроорганизмов, чтобы не допустить инфицирования персонала.
5. При нарушении производственного процесса в некоторые партии вакцины могут попасть живые или недостаточно ослабленные вирулентные микроорганизмы, что может привести к неумышленному распространению инфекции.
6. Аттенуированные штаммы могут ревертировать (восстанавливать свою вирулентность), поэтому необходимо постоянно контролировать их вирулентность .
7. Некоторые заболевания (например, СПИД) нельзя предупреждать с помощью традиционных вакцин.
8. Большинство современных вакцин имеют ограниченный срок годности и сохраняют активность только при пониженной температуре, что затрудняет их использование в развивающихся странах.
В последнее десятилетие, с развитием технологии рекомбинантных ДНК, появилась возможность создать новое поколение вакцин, не обладающих недостатками традиционных вакцин. Основные подходы к созданию вакцин нового типа на основе методов генной инженерии заключаются в следующем:
1. Модификация генома патогенного микроорганизма. Работы в этой области ведутся по двум основным направлениям:
А) Патогенный микроорганизм модифицируют, делетируя (удаляя) из его генома гены, ответственные за вирулентность (гены кодирующие синтез бактериальных токсинов). Способность вызывать иммунный ответ при этом сохраняется. Такой микроорганизм можно безбоязненно использовать в качестве живой вакцины, поскольку выращивание в чистой культуре исключает возможность спонтанного восстановления удаленного гена.
Примером такого подхода является разработанная недавно противохолерная вакцина на основе рекомбинантного штамма V.cholerae, у которого была удалена нуклеотидная последовательность, кодирующая синтез энтеротоксина, ответственного за патогенный эффект. Проводимые в настоящее время клинические испытания эффективности этой формы как противохолерной вакцины пока не дали однозначного результата. Вакцина обеспечивает почти 90%-ную защиту от холеры, но у некоторых испытуемых наблюдаются побочные эффекты, поэтому она нуждается в дальнейшей доработке.
Б) Другой способ получения непатогенных штаммов, пригодных для создания на их основе живых вакцин, состоит в удалении из генома патогенных бактерий хромосомных областей, отвечающих за некоторые независимые жизненно важные функции (метаболитические процессы), например синтез определенных азотистых оснований или витаминов. При этом лучше делетировать по крайней мере две такие области, поскольку вероятность их одновременного восстановления очень мала. Предполагается, что штамм с двойной делецией будет обладать ограниченной пролиферативной способностью (ограниченным сроком жизни в иммунизируемом организме) и сниженной патогенностью, но обеспечит выработку иммунного ответа. На подобном подходе в настоящее время созданы и проходят клинические испытания вакцины против сальмонеллеза и лейшманиоза.
2. Использование непатогенных микроорганизмов с встроенными в клеточную стенку специфическими имуногенными белками. С помощью методов генной инженерии создают живые непатогенные системы переноса отдельных антигенных участков (эпитопов) или целых имуногенных белков неродственного патогенного организма. Один из подходов, используемых при создании таких вакцин, состоит в размещении белка - антигена патогенной бактерии на поверхности живой непатогенной бактерии, так как в этом случае он обладает более высокой иммуногенностью, чем когда он локализован в цитоплазме. Многие бактерии имеют жгутики, состоящие из белка флагеллина; под микроскопом они выглядят как нити, отходящие от бактериальной клетки. Если сделать так, что жгутики непатогенного микроорганизма будут нести специфический эпитоп (белковую молекулу) патогенного микроорганизма, то можно будет индуцировать выработку защитных антител. Вакцина созданная на основе таких рекомбинантных непатогенных микроорганизмов будет способствовать развитию выраженного иммунного ответа на патогенный микроорганизм.
Именно такой подход использовали при создании противохолерной и противостолбнячной вакцины.
3. Создание субъединичных (пептидных) вакцин. Если какие то патогенные микроорганизмы не растут в культуре, то на их основе не возможно создать классическую пастеровскую вакцину. Однако, можно выделить, клонировать и экспрессировать в альтернативном непатогенном хозяине (например, в Е. coli или линии клеток млекопитающих) гены, отвечающие за выработку тех или иных антигенных белков, а затем выделить и использовать эти белки после очистки как «субъединичные» вакцины.
Субъединичные вакцины имеют свои достоинства и недостатки. Достоинства состоят в том, что препарат, содержащий только очищенный иммуногенный белок, стабилен и безопасен, его химические свойства известны, в нем отсутствуют дополнительные белки и нуклеиновые кислоты, которые могли бы вызывать нежелательные побочные эффекты в организме-хозяине. Недостатки заключаются в том, что очистка специфического белка стоит дорого, а конформация выделенного белка может отличаться от той, которую он имеет in situ (т.е. в составе вирусного капсида или оболочки), что может приводить к изменению его антигенных свойств. Решение о производстве субъединичной вакцины принимается с учетом всех имеющих отношение к делу биологических и экономических факторов. В настоящее время в разных стадиях разработки и клинических испытаний находятся вакцины против герпеса, ящура и туберкулеза.
4. Создание “векторных вакцин”. Эти вакцины принципиально отличаются от вакцин других типов тем, что имуногенные белки не вводятся в готовом виде в имунизируемый организм с компонентами вакцины (клетки микроорганизмов и продукты их разрушения), а синтезируются в непосредственно в нем, за счет экспрессии кодирующих их генов, которые в свою очередь переносятся в имунизируемый организм с помощью специальных векторов. Наиболее широко “векторные вакцины” создаются на основе вируса коровьей оспы (ВКО), а так же ряда других условно- или малопатогенных вирусов (аденовирус, полиовирус, вирус ветряной оспы). ВКО достаточно хорошо изучен, его геном полностью секвенирован. ДНК ВКО реплицируется в цитоплазме инфицированных клеток, а не в ядре, благодаря наличию у вируса генов ДНК-полимеразы, РНК-полимеразы и ферментов, осуществляющих кэпирование, метилирование и полиаденили-рование мРНК. Поэтому, если в геном ВКО встроить чужеродный ген, так чтобы он находился под контролем ВКО-промотора, то он будет экспрессиироваться независимо от регуляторных и ферментных систем хозяина.
ВКО имеет широкий спектр хозяев (позвоночных и беспозвоночных), остается жизнеспособным в течение многих лет после лиофилизации (испарения воды с помощью замораживания) и не обладает онкогенными свойствами, а потому весьма удобен для создания векторных вакцин.
Векторные ВКО-вакцины позволяют провести иммунизацию сразу от нескольких заболеваний. Для этого можно использовать рекомбинантный ВКО, который несет несколько генов, кодирующих разные антигены.
В зависимости от используемого ВКО-промотора чужеродный белок может синтезироваться в ранней или поздней фазе инфекционного цикла, при этом его количество определяется силой промотора. При встраивании в одну ДНК ВКО нескольких чужеродных генов каждый из них помещают под контроль отдельного ВКО-промотора, чтобы предотвратить гомологическую рекомбинацию между различными участками вирусной ДНК, которая может привести к утрате встроенных генов.
Живая рекомбинантная векторная вакцина имеет ряд преимуществ перед неживыми вирусными и субъединичными вакцинами:
1) образование и активность аутентичного антигена практически не отличается от такового при обычной инфекции;
2) вирус может реплицироваться в клетке-хозяине и увеличивать количество антигена, который активирует продукцию антител В-клетками (гуморальный иммунитет) и стимулирует выработку Т-клеток (клеточный иммунитет);
3) встраивание нескольких генов антигенных белков в геном ВКО еще больше уменьшает его вирулентность.
Недостаток живой рекомбинантной вирусной вакцины состоит в том, что при вакцинации лиц со сниженным иммунным статусом (например, больных СПИДом) у них может развиться тяжелая вирусная инфекция. Чтобы решить эту проблему, можно встроить в вирусный вектор ген, кодирующий человеческий интерлейкин-2, который стимулирует Т-клеточный ответ и ограничивает пролиферацию вируса.
Нежелательные побочные эффекты пролиферации ВКО можно предупредить инактивацией вируса после вакцинации. Для этого был создан чувствительный к интерферону вирус (ВКО дикого типа относительно устойчив к его действию), пролиферацию которого можно регулировать в случае возникших при вакцинации осложнений.
Вектор на основе живого аттенуированного полиовируса (его исследования только начинаются) привлекателен тем, что позволяет проводить пероральную вакцинацию. Такие «слизистые» вакцины (вакцины, компоненты которых связываются с рецепторами, расположенными в легких или желудочно-кишечном тракте) пригодны для профилактики самых разных заболеваний: холеры, брюшного тифа, гриппа, пневмонии, мононуклеоза, бешенства, СПИДа, болезни Лайма. Но до любых клинических испытаний любого на первый взгляд безобидного вируса как системы доставки и экспрессии соответствующего гена необходимо убедиться в том, что он действительно безопасен. Например, повсеместно используемый ВКО вызывает у людей осложнения с частотой примерно 3,0-10 -6 . Поэтому из генома рекомбинантного вируса, который предполагается использовать для вакцинации человека, желательно удалить последовательности, ответственные за вирулентность.
К вакцинам для животных предъявляются менее жесткие требования, поэтому первыми вакцинами, полученными с помощью технологии рекомбинантных ДНК, были вакцины против ящура, бешенства, дизентерии и диареи поросят. Создаются и другие вакцины для животных, а в скором времени появятся и рекомбинантные вакцины, предназначенные для человека.
Еще одним перспективным направлением в создании вакцин нового поколения является использование специально созданных трансгенных растений. Если встроить в геном вирусов этих растений гены, кодирующие синтез имуногенных белков или отдельных антигенных эпитопов различных патогенных микроорганизмов, то растения начнут их экспрессировать. После употребления в пищу таких растений в слизистой желудка и кишечника человека будут вырабатываться соответствующие антитела (так называемые мукозальные антитела). В бананах, например, удалось экспрессировать антиген холерного вибриона, антигены вируса гепатита В, и такие вакцины уже проходят клинические испытания. Антигены декарбоксилазы глутаминовой кислоты экспрессируются в картофеле и оказывают в опытах на животных антидиабетическое действие. Предполагается, что такие "банановые вакцины" в недалеком будущем могут составить серьезную конкуренцию как традиционным, так и генноинженерным вакцинам.