Mečnikov je granularne polimorfonuklearne krvne leukocite svrstao u mikrofage, koji, emigrirajući iz krvnih žila, ispoljavaju energičnu fagocitozu uglavnom u odnosu na bakterije, a u znatno manjoj mjeri (za razliku od makrofaga) na različite produkte raspadanja tkiva.
Fagocitna aktivnost mikrofaga posebno je vidljiva kod bakterija koje sadrže gnoj.
Mikrofagi se također razlikuju od makrofaga po tome što ne percipiraju vitalnu boju.
Makrofagi sadrže enzime za varenje fagocitiranih supstanci. Ovi enzimi se nalaze u vakuolama (vezikulama) zvanim lizosomi i sposobni su da razgrađuju proteine, masti, ugljikohidrate i nukleinske kiseline.
Makrofagi čiste ljudsko tijelo od čestica anorganskog porijekla, kao i od bakterija, virusnih čestica, umirućih stanica, toksina – otrovnih tvari koje nastaju prilikom razgradnje stanica ili proizvode bakterije. Osim toga, makrofagi luče neke humoralne i sekretorne supstance u krv: elemente komplementa C2, C3, C4, lizozim, interferon, interleukin-1, prostaglandine, o^-makroglobulin, monokine koji regulišu imuni odgovor, citoksine – toksične za ćelijske supstance. .
Makrofagi imaju suptilan mehanizam za prepoznavanje stranih čestica antigene prirode. Oni razlikuju i brzo apsorbuju stare i nove crvene krvne ćelije bez uticaja na normalne crvene krvne ćelije. Makrofagima je dugo vremena pripisivana uloga „čistača“, ali su oni i prva karika u specijalizovanom odbrambenom sistemu. Makrofagi, uključujući i antigen u citoplazmi, prepoznaju ga uz pomoć enzima. Supstance se oslobađaju iz lizosoma koje rastvaraju antigen u roku od otprilike 30 minuta, nakon čega se izlučuje iz tijela.
Antigen se manifestuje i prepoznaje od strane makrofaga, nakon čega prelazi u limfocite. Neutrofilni granulociti (neutrofili ili mikrofagi) se takođe formiraju u koštanoj srži, odakle ulaze u krvotok, gde cirkulišu 6-24 sata.
Za razliku od makrofaga, zreli mikrofagi ne primaju energiju iz disanja, već iz glikolize, poput prokariota, odnosno postaju anaerobi i mogu obavljati svoje aktivnosti u zonama bez kisika, na primjer, u eksudatima tijekom upale, nadopunjujući aktivnost makrofaga. Makrofagi i mikrofagi na svojoj površini nose receptore za imunoglobulin JgJ i element komplementa C3, koji pomažu fagocitu u prepoznavanju i vezivanju antigena za površinu svoje ćelije. Poremećaj aktivnosti fagocita se često manifestira u obliku ponavljajućih gnojno-septičkih bolesti, kao što su kronična pneumonija, pioderma, osteomijelitis itd.
Kod brojnih infekcija dolazi do različitih akvizicija fagocitoze. Dakle, tuberkulozne mikobakterije se ne uništavaju tokom fagocitoze. Stafilokok inhibira njegovu apsorpciju od strane fagocita. Poremećaj aktivnosti fagocita također dovodi do razvoja kroničnih upala i bolesti povezanih s činjenicom da se materijal koji se nakuplja u makrofagama razgradnjom fagocitiranih tvari ne može ukloniti iz tijela zbog nedostatka određenih enzima fagocita. Patologija fagocitoze može biti povezana s kršenjem interakcije fagocita s drugim sistemima ćelijskog i humoralnog imuniteta.
Fagocitozu olakšavaju normalna antitijela i imunoglobulini, komplement, lizozim, leukini, interferon i brojni drugi enzimi i krvne sekrecije koji prethodno obrađuju antigen, čineći ga pristupačnijim za hvatanje i probavu od strane fagocita.
Sedamdesetih godina prošlog veka formulisana je hipoteza mononuklearnog fagocitnog sistema, prema kojoj makrofagi predstavljaju završnu fazu diferencijacije krvnih monocita, koji su zauzvrat izvedeni iz multipotentnih krvnih matičnih ćelija u koštanoj srži. Međutim, studije provedene 2008.-2013. pokazale su da makrofage u tkivima odraslih miševa predstavljaju dvije populacije koje se razlikuju po porijeklu, mehanizmu održavanja broja i funkcijama. Prva populacija je tkivo ili rezidentni makrofagi. Potječu od eritromijeloidnih prekursora (koji nisu povezani s matičnim stanicama krvi) žumančane vrećice i embrionalne jetre i naseljavaju tkiva u različitim fazama embriogeneze. Rezidentni makrofagi dobijaju tkivno specifične karakteristike i održavaju svoj broj kroz proliferaciju in situ bez ikakvog učešća monocita. Dugovječni tkivni makrofagi uključuju Kupfferove ćelije jetre, mikrogliju centralnog nervnog sistema, alveolarne makrofage pluća, peritonealne makrofage trbušne duplje, Langerhansove ćelije kože, makrofage crvene pulpe slezene.
Drugu populaciju predstavljaju relativno kratkotrajni makrofagi monocitnog (koštane srži) porijekla. Relativni sadržaj takvih ćelija u tkivu zavisi od vrste i starosti organizma. Dakle, makrofagi porijeklom iz koštane srži čine manje od 5% svih makrofaga mozga, jetre i epiderme, mali udio makrofaga pluća, srca i slezene (međutim, taj se udio povećava sa godinama tijela) i većina makrofaga lamina propria crijevne sluznice. Broj makrofaga monocitnog porijekla naglo se povećava tokom upale i vraća se u normalu nakon njenog završetka.
Aktivacija makrofaga
In vitro, pod uticajem egzogenih stimulusa, mogu se aktivirati makrofagi. Aktivacija je praćena značajnom promjenom u profilu ekspresije gena i formiranjem ćelijskog fenotipa specifičnog za svaku vrstu stimulusa. Istorijski gledano, prva su otkrivena dva uglavnom suprotna tipa aktiviranih makrofaga, koji su, po analogiji sa Th1/Th2, nazvani M1 i M2. M1 makrofagi diferenciraju ex vivo nakon stimulacije prekursora interferonom γ uz učešće transkripcionog faktora STAT1. M2 makrofagi se razlikuju ex vivo nakon stimulacije interleukinom 4 (preko STAT6).
Dugo vremena su M1 i M2 bili jedini poznati tipovi aktiviranih makrofaga, što je omogućilo formulisanje hipoteze o njihovoj polarizaciji. Međutim, do 2014. godine su se nakupile informacije koje ukazuju na postojanje čitavog spektra aktiviranih stanja makrofaga koji ne odgovaraju ni tipu M1 ni tipu M2. Trenutno nema uvjerljivih dokaza da aktivirana stanja makrofaga uočena in vitro odgovaraju onome što se dešava in vivo i da li su ta stanja trajna ili prolazna.
Makrofagi povezani sa tumorom
Maligni tumori utiču na mikrookruženje svog tkiva, uključujući makrofage. Monociti krvi infiltriraju tumor i pod uticajem signalnih molekula koje tumor luči (M-CSF, GM-CSF, IL4, IL10, TGF-β), diferenciraju se u makrofage sa „protuupalnim“ fenotipom i potiskujući antitumor imunitet i podstiču stvaranje novih krvnih sudova, potiču rast tumora i metastaze.
Makrofagi (monociti, von Kupfferove ćelije, Langerhansove ćelije, histiofagi, alveolociti, itd.) su u stanju da efikasno hvataju i intracelularno uništavaju različite mikrobe i oštećene strukture.
Mikrofagi (granulociti: neutrofili, eozinofili, bazofili, trombociti, endotelne ćelije, mikroglijalne ćelije, itd.) u manjoj meri, ali su takođe sposobni da hvataju i oštećuju mikrobe.
U fagocitima, tokom svih faza mikrobne fagocitoze, aktiviraju se i mikrobicidni sistemi ovisni i o kisiku neovisni.
Glavne komponente mikrobicidnog sistema fagocita zavisnog od kiseonika su mijeloperoksidaza, katalaza i reaktivne vrste kiseonika (singletni kiseonik - O2, superoksidni radikal - O2, hidroksilni radikal - OH, vodonik peroksid - H2O2).
Glavne komponente mikrobicidnog sistema fagocita nezavisnog od kiseonika su lizozim (muramidaza), laktoferin, katjonski proteini, H+ joni (acidoza), lizozomske hidrolaze.
3. Humoralni baktericidni i bakteriostatski faktori:
Lizozim, uništavajući muramsku kiselinu peptidoglikana u zidovima gram-pozitivnih bakterija, uzrokuje njihovu osmotsku lizu;
Laktoferin, menjajući metabolizam gvožđa kod mikroba, remeti njihov životni ciklus i često dovodi do njihove smrti;
- (3-lizini su baktericidni za većinu gram-pozitivnih bakterija;
Faktori komplementa, koji imaju opsonizirajući učinak, aktiviraju fagocitozu mikroba;
Interferonski sistem (posebno a i y) pokazuje izrazito nespecifično antivirusno djelovanje;
Djelovanje mikroresica i žljezdastih stanica sluzokože dišnih puteva, kao i znojnih i lojnih žlijezda kože, koje luče odgovarajuće izlučevine (sputum, znoj i sebum), pomaže u uklanjanju određenog broja raznih mikroorganizama iz tijelo.
Fagocitoza, proces aktivnog hvatanja i apsorpcije živih i neživih čestica od strane jednoćelijskih organizama ili posebnih stanica (fagocita) višećelijskih životinjskih organizama. Fenomen F. otkrio je I. I. Mechnikov, koji je pratio njegovu evoluciju i razjasnio ulogu ovog procesa u zaštitnim reakcijama tijela viših životinja i ljudi, uglavnom tijekom upale i imuniteta. F. igra važnu ulogu u zacjeljivanju rana. Sposobnost hvatanja i varenja čestica je u osnovi ishrane primitivnih organizama. U procesu evolucije, ova sposobnost se postepeno prenosila na pojedinačne specijalizovane ćelije, prvo na probavne, a zatim na posebne ćelije vezivnog tkiva. Kod ljudi i sisara aktivni fagociti su neutrofili (mikrofagi ili posebni leukociti) krvi i ćelije retikuloendotelnog sistema, sposobni da se pretvore u aktivne makrofage. Neutrofili fagocitiraju male čestice (bakterije, itd.), makrofagi su u stanju da apsorbuju veće čestice (mrtve ćelije, njihova jezgra ili fragmente, itd.). Makrofagi su također sposobni akumulirati negativno nabijene čestice boja i koloidnih supstanci. Apsorpcija malih koloidnih čestica naziva se ultrafagocitoza ili koloidopeksija.
Fagocitoza zahtijeva energiju i povezana je prvenstveno s djelovanjem ćelijske membrane i unutarćelijskih organela - lizosoma, koji sadrže veliki broj hidrolitičkih enzima. Tokom F. razlikuje se nekoliko faza. Prvo se fagocitirana čestica veže za ćelijsku membranu, koja je zatim obavija i formira unutarćelijsko tijelo - fagosom. Iz okolnih lizosoma, hidrolitički enzimi ulaze u fagosom i probavljaju fagocitiziranu česticu. U zavisnosti od fizičko-hemijskih svojstava potonjeg, probava može biti potpuna ili nepotpuna. U potonjem slučaju nastaje zaostalo tijelo koje može dugo ostati u ćeliji.
Komplement - (zastarjeli aleksin), proteinski kompleks koji se nalazi u svježem krvnom serumu; važan faktor prirodnog imuniteta kod životinja i ljudi. Termin su uveli njemački naučnici P. Ehrlich i J. Morgenroth 1899. godine. K. se sastoji od 9 komponenti, koje su označene od C "1 do C" 9, pri čemu prva komponenta uključuje tri podjedinice. Svih 11 proteina koji čine K. mogu se razdvojiti imunohemijskim i fizičko-hemijskim metodama. K. se lako uništava kada se surutka zagreva, čuva duže vreme ili izlaže svetlosti. K. učestvuje u brojnim imunološkim reakcijama: spajanjem kompleksa antigena (vidi antigene) sa antitelom (vidi antitela) na površini ćelijske membrane, izaziva lizu bakterija, eritrocita i drugih tretiranih ćelija. sa odgovarajućim antitelima. Uništavanje membrane i kasnija ćelijska liza zahtijeva učešće svih 9 komponenti. Neke komponente antigena imaju enzimsku aktivnost, a komponenta koja se prethodno pridružila kompleksu antigen-antitelo katalizira dodavanje sledećeg. U organizmu K. takođe učestvuje u reakcijama antigen-antitelo koje ne izazivaju lizu ćelija. Djelovanje K. povezano je sa otpornošću organizma na patogene mikrobe, oslobađanjem histamina u trenutnim alergijskim reakcijama i autoimunim procesima. U medicini se konzervirani preparati K. koriste u serološkoj dijagnostici niza zaraznih bolesti i za detekciju antigena i antitijela.
INTERFERONI su grupa glikoproteina niske molekularne težine koje proizvode ljudske ili životinjske stanice kao odgovor na virusnu infekciju ili pod utjecajem različitih induktora (na primjer, dvolančane RNK, inaktiviranih virusa, itd.) i imaju antivirusni učinak.
Interferoni su predstavljeni u tri klase:
alfa-leukocit, proizveden od nuklearnih krvnih stanica (granulociti, limfociti, monociti, slabo diferencirane stanice);
beta-fibroblast - sintetiziraju ga ćelije mišićno-kutanog, vezivnog i limfoidnog tkiva:
gama imuni - proizvode T-limfociti u saradnji sa makrofagima, prirodnim ubicama.
Antivirusni učinak ne nastaje direktno kroz interakciju interferona sa virusom, već indirektno kroz ćelijske reakcije. Enzimi i inhibitori, čiju sintezu inducira interferon, blokiraju početak translacije stranih genetskih informacija i uništavaju molekule RNK glasnika. Interakcijom sa ćelijama imunog sistema, oni stimulišu fagocitozu, aktivnost prirodnih ćelija ubica i ekspresiju glavnog kompleksa histokompatibilnosti. Direktnim djelovanjem na B ćelije, interferon reguliše proces stvaranja antitijela.
ANTIGEN - Hemijski molekuli koji se nalaze u (ili ugrađeni) u ćelijsku membranu i sposobni su da izazovu imuni odgovor nazivaju se antigeni. Dijele se na diferencirane i determinističke. Diferencirani antigeni uključuju CD antigene. Glavni kompleks histokompatibilnosti uključuje HLA (himan lencocyte antigen).
Antigeni se dijele na:
Toxins;
izoantigeni;
Heterofilni antigeni;
Domaći antigeni;
Bučice;
Imunogeni;
Adjuvansi;
Skriveni antigeni.
Toksini su otpadni produkti bakterija. Toksini se mogu hemijski pretvoriti u toksoide, koji tada gube svoja toksična svojstva, ali zadržavaju svoja antigena svojstva. Ova karakteristika se koristi za pripremu brojnih vakcina.
A- i B-izoantigeni su mukopolisaharidni antigeni protiv kojih tijelo uvijek ima antitijela (aplotinine).
Antitijela na A- i B-izoantigene određuju 4 krvne grupe.
Heterofilni antigeni prisutni su u ćelijama tkiva mnogih životinja, a u ljudskoj krvi ih nema.
Domaći antigeni uključuju samo-antigene, od kojih je većina tolerantna na imuni sistem.
Gantene su tvari koje specifično reagiraju s antitijelima, ali ne doprinose njihovom stvaranju. Gantene nastaju zbog alergijskih reakcija na lijekove.
Imunogeni (virusi i bakterije) su moćniji od rastvorljivih antigena.
Adjuvansi su supstance koje pojačavaju imuni odgovor kada se uvede antigen.
Skriveni antigen može biti sperma, koja u nekim slučajevima djeluje kao strani protein u slučajevima traumatskog oštećenja testisa ili promjena uzrokovanih zaušnjacima.
Antigeni se također dijele na:
Antigeni, koji su komponente ćelija;
Eksterni antigeni koji nisu komponente ćelija;
Autoantigeni (skriveni) koji ne prodiru u imunokompetentne ćelije.
Antigeni se takođe klasifikuju prema drugim kriterijumima:
Po vrsti izazivanja imunološkog odgovora - imunogeni, alergeni, tolerogeni, transplantacija);
Po stranosti - hetero- i autoantigeni;
Po povezanosti sa timusnom žlijezdom - T-ovisni i T- nezavisni;
Po lokalizaciji u tijelu - O-antigeni (nula), termostabilni, visoko aktivni itd.);
Po specifičnosti za mikroorganizam nosioca - vrsta, tipična, varijanta, grupa, stadijum.
Interakcija tijela sa antigenima može se odvijati na različite načine. Antigen može prodrijeti u makrofag i eliminirati se unutar njega.
Uz drugu opciju, moguće je povezivanje sa receptorima na površini makrofaga. Antigen je u stanju da reaguje sa antitelom na procesu makrofaga i dođe u kontakt sa limfocitom.
Osim toga, antigen može zaobići makrofag i reagirati s receptorom antitijela na površini limfocita ili ući u ćeliju.
Specifične reakcije pod dejstvom antigena javljaju se na različite načine:
Sa stvaranjem humoralnih antitijela (tokom transformacije imunoblasta u plazma stanicu);
Senzibilizirani limfocit se pretvara u memorijsku ćeliju, što dovodi do stvaranja humoralnih antitijela;
Limfocit dobija svojstva limfocita ubice;
Limfocit se može pretvoriti u ćeliju koja ne reagira ako su svi njegovi receptori povezani s antigenom.
Antigeni daju ćelijama sposobnost da sintetišu antitela, što zavisi od njihovog oblika, doze i puta ulaska u organizam.
Vrste imuniteta
Postoje dvije vrste imuniteta: specifični i nespecifični.
Specifični imunitet je individualne prirode i formira se tokom čitavog života osobe kao rezultat kontakta njegovog imunog sistema sa različitim mikrobima i antigenima. Specifični imunitet čuva sjećanje na infekciju i sprječava njeno ponovno pojavljivanje.
Nespecifični imunitet je specifičan za vrstu, odnosno gotovo je isti kod svih predstavnika iste vrste. Nespecifični imunitet osigurava borbu protiv infekcije u ranim fazama njenog razvoja, kada specifični imunitet još nije formiran. Stanje nespecifičnog imuniteta određuje predispoziciju osobe za različite uobičajene infekcije, čiji su uzročnici oportunistički mikrobi. Imunitet može biti specifičan ili urođen (npr. osoba na uzročnika pseće kuge) i stečen.
Prirodni pasivni imunitet. AT sa majke se prenose na dete preko posteljice, sa majčinim mlekom. Pruža kratkotrajnu zaštitu od infekcije, jer se antitijela troše i njihov broj se smanjuje, ali pružaju zaštitu do formiranja vlastitog imuniteta.
Prirodni aktivni imunitet. Proizvodnja sopstvenih antitela u kontaktu sa antigenom. Imunološke memorijske ćelije pružaju najtrajniji, ponekad doživotni, imunitet.
Stečeni pasivni imunitet. Nastaje vještačkim putem unošenjem gotovih antitijela (seruma) iz imunoloških organizama (serum protiv difterije, tetanusa, zmijskih otrova). Ova vrsta imuniteta takođe ne traje dugo.
Stečeni aktivni imunitet. Mala količina antigena se unosi u organizam u obliku vakcine. Ovaj proces se zove vakcinacija. Koristi se mrtvi ili oslabljeni antigen. Tijelo se ne razbolijeva, već proizvodi AT. Ponovljena primjena je česta i stimulira bržu i dugotrajniju proizvodnju antitijela koja pružaju dugotrajnu zaštitu.
Specifičnost antitela. Svako antitijelo je specifično za određeni antigen; to je zbog jedinstvene strukturne organizacije aminokiselina u varijabilnim regijama njegovih lakih i teških lanaca. Organizacija aminokiselina ima različitu prostornu konfiguraciju za svaku specifičnost antigena, tako da kada antigen dođe u kontakt sa antitelom, brojne prostetske grupe antigena odgovaraju kao zrcalna slika istim grupama antitela, zbog čega brzo i između antitela i antigena dolazi do čvrstog vezivanja. Ako je antitijelo visoko specifično i postoji mnogo mjesta vezivanja, dolazi do snažne adhezije između antitijela i antigena putem: (1) hidrofobnih veza; (2) vodonične veze; (3) jonsko privlačenje; (4) van der Waalove sile. Kompleks antigen-antitelo takođe poštuje termodinamički zakon delovanja mase.
Struktura i funkcije imunog sistema.
Struktura imunog sistema. Imuni sistem je predstavljen limfoidnim tkivom. Ovo je specijalizirano, anatomski različito tkivo, rasuto po cijelom tijelu u obliku različitih limfoidnih formacija. Limfoidno tkivo uključuje timus, ili timus, žlijezdu, koštanu srž, slezinu, limfne čvorove (grupne limfne folikule ili Peyerove zakrpe, krajnike, aksilarne, ingvinalne i druge limfne formacije rasute po cijelom tijelu), kao i limfocite koji se nalaze u krvotoku. . Limfoidno tkivo se sastoji od retikularnih ćelija koje čine skelet tkiva i limfocita koji se nalaze između ovih ćelija. Glavne funkcionalne ćelije imunog sistema su limfociti, podeljeni na T- i B-limfocite i njihove subpopulacije. Ukupan broj limfocita u ljudskom tijelu dostiže 1012, a ukupna masa limfoidnog tkiva je otprilike 1-2% tjelesne težine.
Limfoidni organi se dijele na centralne (primarne) i periferne (sekundarne).
Funkcije imunološkog sistema. Imuni sistem obavlja funkciju specifične zaštite od antigena, a to je limfoidno tkivo koje je sposobno da kroz kompleks ćelijskih i humoralnih reakcija koje se sprovode pomoću seta imunoreagensa neutrališe, neutrališe, uklanja, uništava genetski strani antigen koji je ušao u organizam. tijelo izvana ili formirano u samom tijelu.
Specifična funkcija imunološkog sustava u neutraliziranju antigena dopunjena je kompleksom mehanizama i reakcija nespecifične prirode čiji je cilj osiguranje otpornosti tijela na djelovanje bilo koje strane tvari, uključujući antigene.
Serološke reakcije
In vitro reakcije između antigena i antitijela, ili serološke reakcije, naširoko se koriste u mikrobiološkim i serološkim (imunološkim) laboratorijama u različite svrhe:
serodijagnostika bakterijskih, virusnih, rjeđe drugih zaraznih bolesti,
seroididentifikacija izolovanih bakterijskih, virusnih i drugih kultura različitih mikroorganizama
Serodijagnostika se provodi pomoću skupa specifičnih antigena koje proizvode komercijalne kompanije. Na osnovu rezultata serodijagnostičkih reakcija procjenjuje se dinamika akumulacije antitijela tokom procesa bolesti i intenzitet postinfektivnog ili postvakcinalnog imuniteta.
Seroididentifikacija mikrobnih kultura vrši se kako bi se odredio njihov tip i serovar korištenjem setova specifičnih antiseruma, koje također proizvode komercijalne kompanije.
Svaka serološka reakcija karakterizira specifičnost i osjetljivost. Specifičnost se odnosi na sposobnost antigena ili antitela da reaguju samo sa homolognim antitelima sadržanim u krvnom serumu, odnosno sa homolognim antigenima. Što je veća specifičnost, to je manje lažno pozitivnih i lažno negativnih rezultata.
Serološke reakcije uključuju antitijela koja uglavnom pripadaju imunoglobulinima IgG i IgM klasa.
Reakcija aglutinacije je proces lijepljenja i precipitacije korpuskularnog antigena (aglutinogena) pod utjecajem specifičnih antitijela (aglutinina) u otopini elektrolita u obliku grudica aglutinata.
Aktivacija- najvažnija faza funkcionalnog sazrijevanja makrofaga. Određeni citokini imaju aktivacijski učinak – proteinska jedinjenja koja prenose signale između stanica i na taj način utiču na proces upale ili imunološki odgovor. Ovi citokini uključuju interferone, interleukine, faktore rasta, hemokine i TNF. Oni koji aktiviraju makrofage uključuju IFN-γ, GM-CSF, M-CSF i TNF-α.
Aktivirajte makrofage također hormon rasta i bakterijski endotoksin ili proteini ćelijskog zida. Izraz "aktivirani makrofag" u svom najširem smislu znači da ima povećanu sposobnost ubijanja mikroorganizama ili tumorskih stanica. Nakon aktivacije, makrofagi postaju veći, njihov broj pseudopodija se povećava, a plazma membrana postaje više naborana.
Intenzivne funkcije aktivirane:
Baktericidna aktivnost.
Antitumorska aktivnost.
Hemotaksa.
Fagocitoza (većine čestica).
Pinocitoza.
Transport i metabolizam glukoze.
Prateća fagocitoza je proizvodnja slobodnih radikala (O2, H2O2).
Formiranje dušikovog oksida.
Prezentacija antigena.
lučenje:
- komponente komplementa;
- lizozim;
- kisele hidrolaze;
- kolagenaza;
- aktivator plazminogena;
- citolitička proteaza;
- arginaza;
- fibronektin;
- interleukini (IL-1, IL-10, IL-12, IL-15);
- TNF-a;
- IFN-a i -b.
Faktori angiogeneze.
Aktivacija makrofaga tokom infekcije nastaje interakcijom njihove površinske molekule CD40 sa CD40 ligandom na Th ćelijama senzibiliziranim na antigen, kao i djelovanjem citokina koje proizvode ovi limfociti. Aktivirani makrofagi oslobađaju IL-12, koji zauzvrat aktivira T limfocite. Ove interakcije čine osnovu ćelijskog imuniteta.
Posebno važno aktiviranje makrofagi citokin, IFN-γ, trenutno se koristi za prevenciju infekcija kod pacijenata s kroničnom granulomatoznom bolešću i za liječenje kongenitalne osteopetroze (spore resorpcije kosti) povezane sa smanjenom funkcijom osteoklasta.
Kada su izloženi endotoksin ili drugih medijatora upale, makrofagi oslobađaju TNF-a, koji aktivira druge makrofage. Aktivirani makrofagi eksprimiraju veći broj TNF-a receptora. Tako makrofagi u područjima upale stječu sposobnost međusobnog aktiviranja i time obavljaju svoje funkcije brže nego u klasičnom ćelijskom imunološkom odgovoru, koji zahtijeva akumulaciju senzibiliziranih T limfocita.
Na drugoj strani, makrofagi, kao i Th ćelije, luče IL-10, koji inhibira proizvodnju IFN-γ i inhibira potencijalno opasne posljedice nekontrolirane aktivacije makrofaga.
Makrofagi su članovi imunološkog sistema koji su vitalni za razvoj nespecifičnih odbrambenih mehanizama koji pružaju prvu liniju odbrane od. Ove velike imunološke ćelije prisutne su u gotovo svim tkivima i aktivno uklanjaju mrtve i oštećene ćelije, bakterije i ćelijske ostatke iz tijela. Proces kojim makrofagi gutaju i probavljaju stanice i patogene naziva se.
Makrofagi također pomažu u ćelijskom ili adaptivnom imunitetu hvatanjem i predstavljanjem informacija o stranim antigenima imunološkim stanicama koje se nazivaju limfociti. Ovo omogućava imunološkom sistemu da se bolje brani od budućih napada istih napadača. Osim toga, makrofagi su uključeni u druge važne funkcije u tijelu, uključujući proizvodnju hormona, imunološku regulaciju i zacjeljivanje rana.
Fagocitoza makrofaga
Fagocitoza omogućava makrofagima da se riješe štetnih ili neželjenih tvari u tijelu. Fagocitoza je oblik u kojem ćelija preuzima supstancu i uništava je. Ovaj proces se pokreće kada makrofag cilja stranu tvar uz pomoć antitijela. Antitijela su proteini koje proizvode limfociti koji se vezuju za stranu tvar (antigen), donoseći je u ćeliju radi uništenja. Jednom kada je antigen otkriven, makrofag šalje projekcije koje okružuju i gutaju antigen (mrtve ćelije, itd.), okružujući ga u vezikuli.
Internacionalizirana vezikula koja sadrži antigen naziva se fagozom. u makrofagu se spajaju sa fagozomom, formirajući fagolizozom. Lizozomi su membranske vrećice formiranih hidrolitičkih enzima koji su sposobni probaviti organski materijal. Sadržaj enzima u lizosomima se oslobađa u fagolizozom, a strana tvar se brzo razgrađuje. Degradirani materijal se zatim izbacuje iz makrofaga.
Razvoj makrofaga
Makrofagi se razvijaju iz bijelih krvnih stanica zvanih monociti. Monociti su najveća vrsta bijelih krvnih zrnaca. Imaju veliki soliter, koji je često u obliku bubrega. Monociti se proizvode u koštanoj srži i cirkulišu za jedan do tri dana. Ove ćelije izlaze iz krvnih sudova, prolazeći kroz endotel krvnih sudova da bi ušle u tkiva. Jednom kada stignu na svoje odredište, monociti se pretvaraju u makrofage ili druge imunološke stanice koje se nazivaju dendritične stanice. Dendritske ćelije pomažu u razvoju antigenskog imuniteta.
Makrofagi, koji se razlikuju od monocita, specifični su za tkivo ili organ u kojem su lokalizirani. Kada postoji potreba za više makrofaga u određenom tkivu, živi makrofagi proizvode proteine zvane citokini, uzrokujući da se monociti reaguju da se razviju u potreban tip makrofaga. Na primjer, makrofagi koji se bore protiv infekcije proizvode citokine koji potiču razvoj makrofaga koji su specijalizirani za borbu protiv patogena. Makrofagi, koji su specijalizirani za zacjeljivanje rana i popravak tkiva, razvijaju se iz citokina proizvedenih kao odgovor na oštećenje tkiva.
Funkcija i lokacija makrofaga
Makrofagi se nalaze u gotovo svim tkivima tijela i obavljaju brojne funkcije izvan imunološkog sistema. Makrofagi pomažu u proizvodnji polnih hormona u muškim i ženskim reproduktivnim organima. Oni potiču razvoj mreže krvnih sudova u jajniku, što je od vitalnog značaja za proizvodnju hormona progesterona. Progesteron igra važnu ulogu u implantaciji embrija u matericu. Osim toga, makrofagi prisutni u oku pomažu u razvoju mreže krvnih žila neophodnih za pravilan vid. Primjeri makrofaga koji se nalaze na drugim mjestima u tijelu uključuju:
- Centralni nervni sistem: mikroglije su glijalne ćelije koje se nalaze u nervnom tkivu. Ove izuzetno male ćelije patroliraju mozgom i kičmenom moždinom, uklanjaju ćelijski otpad i štite od mikroorganizama.
- Masno tkivo: Makrofagi u masnom tkivu štite od mikroba i pomažu masnim stanicama da održe osjetljivost tijela na inzulin.
- Integumentarni sistem: Langerhansove ćelije su makrofagi u koži koji služe imunološkoj funkciji i pomažu u razvoju stanica kože.
- bubrezi: Makrofagi u bubrezima pomažu u filtriranju mikroba iz krvi i potiču stvaranje kanala.
- slezena: Makrofagi u crvenoj pulpi slezene pomažu u filtriranju oštećenih crvenih krvnih zrnaca i mikroba iz krvi.
- Limfni sistem: Makrofagi pohranjeni u središnjem dijelu limfnih čvorova filtriraju mikrobe koji sadrže limfu.
- Reproduktivni sistem: Makrofagi pomažu u razvoju zametnih stanica, embrija i proizvodnji steroidnih hormona.
- Probavni sustav: Makrofagi u crijevima kontroliraju okruženje koje štiti od mikroba.
- pluća: alveolarnih makrofaga, uklanjaju klice, prašinu i druge čestice sa respiratornih površina.
- Kost: Makrofagi u kostima mogu se razviti u koštane stanice koje se nazivaju osteoklasti. Osteoklasti pomažu u reapsorbciji i asimilaciji koštanih komponenti. Nezrele ćelije od kojih se formiraju makrofagi nalaze se u nevaskularnim delovima koštane srži.
Makrofagi i bolesti
Iako je primarna funkcija makrofaga odbrana od, ponekad ovi patogeni mogu izbjeći imunološki sistem i inficirati imunološke ćelije. Adenovirusi, HIV i bakterije koje uzrokuju tuberkulozu su primjeri patogena koji uzrokuju bolest inficiranjem makrofaga.
Osim ovih vrsta bolesti, makrofagi su povezani s razvojem bolesti kao što su kardiovaskularne bolesti, dijabetes i rak. Makrofagi u srcu doprinose kardiovaskularnim bolestima pomažući u razvoju ateroskleroze. Kod ateroskleroze zidovi arterija postaju debeli zbog kronične upale uzrokovane bijelim krvnim zrncima.
Makrofagi u masnom tkivu mogu uzrokovati upalu, koja izaziva inzulinsku rezistenciju u masnim stanicama. To može dovesti do razvoja dijabetesa. Kronična upala uzrokovana makrofagima također može doprinijeti razvoju i rastu ćelija raka.
Kratak izlet u istoriju
Sadašnje stanje doktrine fagocitoze
Makrofagi peritonealnog eksudata kao model
fagocitoza i poremećaji fagocitne aktivnosti
Dobivanje modela
Metode za snimanje rezultata
Neki simulirani procesi
SMANJENJE BAKTERIJSKE AKTIVNOSTI PERITONEALA
MAKROFAGI MIŠEVA U KOMBINOVANIM USLOVIMA
UPOTREBA STAFILOKOKNOG ENTEROTOKSINA TIPA A I ENDOTOKSINA
OTKAZIVANJE EFEKTA OPSONINA POBOLJŠANOG FAGOCITOZOM
UPOTREBA FRAGMENTA ANTITIJELA PROTIV Fc RECEPTORA MAKROFAGA
POBOLJŠANE REAKCIJE SA KITOZANOM
KONTAKTNA INTERAKCIJA MAKROFAGA SA TIMOCITIMA in vitro
AKTIVACIJA FAGOCITNIH ĆELIJA I ĆELIJA
IMUNITET OD SINTETIČKIH POLIELEKTROLITA
FAGOCITNA AKTIVNOST MAKROFAGA
PERITONEALNI EKSUDAT MIŠEVA EFEKTI LIJEKOVA PLATINE
PROUČAVANJE FAGOCITNE AKTIVNOSTI PERITONEALNIH MAKROFAGA U
ODNOS YERSINIA PESTIS SA DEFEKTNIM I KOMPLETNIM FRA GENIMA
UTJECAJ MODIFIKATORA PRIRODNOG BIOLOŠKOG ODGOVORA
PORIJEKLO FUNKCIONALNE AKTIVNOSTI MAKROFAGA
PERITONEALNI MAKROFAGI KAO MODEL
PROUČAVANJE ATEROGENOG POTENCIJALA KRVNOG SERUMA
UTICAJ GABA, GHB I GLUTAMINA
KISELINE NA FUNKCIONALNU AKTIVNOST FAGOCITA
Zaključak
Neki drugi modeli za proučavanje fagocitoze
Književnost
Kratak izlet u istoriju
Prošlo je više od 100 godina od otkrića teorije fagocita, koju je stvorio naš veliki prirodnjak, dobitnik Nobelove nagrade I. I. Mečnikov. Otkriće, razumevanje fenomena fagocitoze i opštu formulaciju osnova fagocitne teorije napravio je u decembru 1882. Godine 1883. izložio je osnove nove fagocitne teorije u izveštaju „O lekovitim moćima tijelo” u Odesi na VII kongresu prirodnjaka i ljekara i objavio ih u štampi. Prvo su izraženi osnovni principi teorije fagocita, koje je I. I. Mečnikov kasnije razvijao tokom svog života. Iako su samu činjenicu apsorpcije drugih čestica od strane živih stanica mnogi prirodoslovci opisali mnogo prije naučnika, samo je on dao briljantno tumačenje ogromne uloge fagocita u zaštiti tijela od patogenih mikroba.
Mnogo kasnije, na 70. godišnjicu naučnika, kolega i prijatelj I. I. Mečnikova Emil Roux će napisati: „Danas, prijatelju, posmatraš doktrinu fagocitoze sa smirenim zadovoljstvom oca, čije je dete napravilo dobru karijeru u svijetu, ali koliko ti je brige izazvao! Njegov izgled je izazvao proteste i otpor i dvadeset godina ste se morali boriti za njega.” Doktrina fagocitoze „... jedna je od najplodonosnijih u biologiji: povezala je fenomen imuniteta sa unutarćelijskom probavom, objasnila nam je mehanizam upale i atrofije; oživjela je patološku anatomiju, koja je, ne mogavši dati prihvatljivo objašnjenje, ostala čisto deskriptivna... Vaša erudicija je toliko ogromna i istinita da služi cijelom svijetu.”
I. I. Mechnikov je tvrdio da „...imunitet kod zaraznih bolesti treba pripisati aktivnoj ćelijskoj aktivnosti. Među ćelijskim elementima, fagociti bi trebali zauzeti prvo mjesto. Osjetljivost i pokretljivost, sposobnost apsorpcije čvrstih tvari i proizvodnje tvari koje mogu uništiti i probaviti mikrobe glavni su faktori aktivnosti fagocita. Ako su ova svojstva dovoljno razvijena i paraliziraju patogeno djelovanje mikroba, onda je životinja prirodno imuna... kada fagociti ne otkriju prisustvo svih ili jednog od ovih svojstava u dovoljnoj mjeri, tada je životinja podložna infekciji ...”. U isto vrijeme, ako bakterijski produkti uzrokuju negativnu kemotaksiju u fagocitima, ili ako, uz pozitivnu kemotaksu, fagociti ne apsorbiraju bakterije ili ih apsorbiraju, ali ih ne ubijaju, također se razvija fatalna infekcija. Rješenje temeljnih problema komparativne embriologije i biologije, koje je dovelo do naučnikovih velikih otkrića, omogućilo je I. I. Mečnikovu da ustanovi da je „fagocitoza izuzetno česta u životinjskom svijetu... i na najnižem nivou životinjske ljestvice, na primjer , kod protozoa i... .kod sisara i ljudi... fagociti su mezenhimske ćelije.”
I. I. Mechnikov je u isto vrijeme bio prvi koji je poduzeo komparativnu studiju fenomena fagocitoze. Pažnja naučnika bila je skrenuta ne samo na tradicionalne laboratorijske predmete, već i na takve predstavnike životinjskog svijeta kao što su dafnije, morske zvijezde, krokodili i majmuni. Komparativna studija fagocitoze bila je neophodna da I. I. Mechnikov dokaže univerzalnost fenomena apsorpcije i uništavanja stranog materijala od strane fagocitnih mononuklearnih ćelija, široku rasprostranjenost u prirodi oblika imunološke odbrane koji je proučavao.
Mehnikovova ćelijska teorija odmah je naišla na otpor. Prije svega, predložen je u vrijeme kada je većina patologa na upalni odgovor, kao i na mikrofage i makrofage povezane s njim, gledala ne kao zaštitnu, već kao štetnu reakciju. U to vrijeme se čak vjerovalo da iako su fagocitne stanice zaista sposobne apsorbirati patogene, to ne dovodi do uništenja patogena, već do njegovog prenošenja u druge dijelove tijela i širenja bolesti. I u tom periodu intenzivno se razvijala humoralna teorija imuniteta, čije je temelje postavio P. Ehrlich. Otkrivena su antitela i antigeni, identifikovani su mehanizmi humoralne rezistencije organizma na određene patogene mikroorganizme i njihove toksine (difterija, tetanus i dr.). Začudo, ali dva takva otkrića se neko vrijeme nisu mogla slagati. Kasnije 1888. godine, Nuttall je pronašao supstance u serumu normalnih životinja koje su bile toksične za određene mikroorganizme i pokazao da su takva antibakterijska svojstva značajno poboljšana imunizacijom životinje. Kasnije je otkriveno da serum sadrži dvije različite supstance čije kombinovano djelovanje dovodi do lize bakterija: faktor stabilan na toplinu, koji je tada identificiran kao serumska antitijela, i faktor labilan na toplinu, nazvan komplement, ili aleksin (od Grčki aleksein - zaštititi). Sam student Mečnikov Bordet opisao je lizu crvenih krvnih zrnaca humoralnim antitelima i komplementom, a većina istraživača je počela da se slaže sa Kochom da su humoralisti pobedili. Mečnikov i njegovi učenici nikako nisu nameravali da daju gore. Provedeni su jednostavni eksperimenti u kojima su mikrobi, stavljeni u malu vrećicu filter papira koja ih je štitila od fagocita, zadržali virulenciju, iako su bukvalno okupani tkivnom tekućinom bogatom antitijelima. U Engleskoj su Sir Elmroth Wright i S. R. Douglas pokušali pomiriti razlike između ove dvije škole u svojim glavnim studijama procesa opsonizacije (od grčkog. opsonein - učinite ga jestivim). Ovi naučnici su tvrdili da su ćelijski i humoralni faktori podjednako važni i međusobno ovisni u tome da humoralna antitijela, specifično reagirajući sa svojim ciljnim mikroorganizmom, pripremaju ga za fagocitozu od strane makrofaga.
Švedska akademija je 1908. godine zajednički dodijelila Nobelovu nagradu za medicinu Mečnikovu, osnivaču ćelijske oblasti, i Erlihu, koji je personificirao humoralne ideje tog vremena, a nagrada im je dodijeljena kao „priznanje za njihov rad na imunitetu“.
Mečnikovljeva zasluga nije samo u stvaranju briljantne teorije. Još ranije je počeo proučavati zarazne bolesti ljudi i domaćih životinja: zajedno sa svojim učenikom N.F. Gamaleyom proučavao je tuberkulozu, stočnu kugu i tražio načine za borbu protiv poljoprivrednih štetočina. Jedan od najvažnijih događaja u istoriji ruske medicine datira iz 1886. Ovog ljeta u Odesi je počela sa radom prva ruska bakteriološka stanica koju su stvorili Mečnikov i njegov talentovani učenik N.F. Gamaleya. Stvorio je najveću naučnu školu mikrobiologa u Rusiji. Izvanredni naučnici N. F. Gamaleya, D. K. Zabolotny, L. A. Tarasevich i mnogi drugi bili su učenici I. I. Mechnikova. Ilja Iljič Mečnikov je umro 1916. godine, radeći na pitanjima imunologije i ćelijskog imuniteta do kraja svog života. I nauka o imunitetu se brzo i brzo razvijala. U tom periodu pojavio se neobično veliki broj radova i naučnika koji su proučavali faktore unutrašnje odbrane organizma.
Period od 1910. do 1940. godine bio je period serologije. U to vrijeme je formulisan stav o specifičnosti i da su AT prirodni, visoko varijabilni globulini. Tu je veliku ulogu odigrao rad Landsteinera, koji je došao do zaključka da specifičnost antitijela nije apsolutna.
Od 1905. pojavljuju se radovi (Carrel, Guthrie) o transplantaciji organa. Godine 1930 K. Landsteiner otkriva krvne grupe. Amadeus Borrell se bavi radom na fagocitozi, bakteriofagiji, virusima i patogenezi kuge. Nagrada je dodijeljena F. Macfarlaneu Burnetu (1899 - 1985) i Peteru Medawaru (1915 - Engleska) "za otkriće stečene imunolotske tolerancije." Medawar je pokazao da odbacivanje stranog presatka kože poštuje sva pravila imunološke specifičnosti, a temelji se na istim mehanizmima kao u zaštiti od bakterijskih i virusnih infekcija. Naknadni rad koji je obavio sa brojnim studentima postavio je čvrste temelje za razvoj transplantacijske imunobiologije, koja je postala važna naučna disciplina i potom omogućila mnoge pomake u području kliničke transplantacije organa. Burnet je objavio knjigu “Formiranje antitela” (1941). Sa svojim kolegom Frankom Fennerom, Burnet je tvrdio da se sposobnost imunoloških reakcija javlja u relativno kasnim fazama embrionalnog razvoja i da istovremeno postoji sjećanje na postojeće markere „ja“ u antigenima prisutnim u ovom trenutku. Tijelo naknadno stječe toleranciju na njih i nije u stanju na njih odgovoriti imunološkom reakcijom. Svi antigeni koji se ne pamte će biti percipirani kao „ne ja“ i moći će dalje izazvati imunološki odgovor. Pretpostavlja se da će bilo koji antigen uveden tokom ovog kritičnog perioda razvoja tada biti prihvaćen kao samostalan i izazvati toleranciju, a kao rezultat toga neće moći dalje aktivirati imuni sistem. Ove ideje je dalje razvio Burnet u svojoj teoriji stvaranja antitijela klonske selekcije. Pretpostavke Burneta i Fennera podvrgnute su eksperimentalnom testiranju u studijama Medawara, koji je 1953. godine, koristeći miševe čistih linija, dobio jasnu potvrdu Burnet-Fennerove hipoteze, opisujući fenomen koji je Medawar dao naziv stečenoj imunološkoj toleranciji.
Godine 1969 Istovremeno, nekoliko autora (R. Petrov, M. Berenbaum, I. Royt) predložilo je troćelijsku shemu saradnje imunocita u imunološkom odgovoru (T-, B-limfociti i makrofagi), što je dugo godina odredilo proučavanje mehanizmi imunološkog odgovora, subpopulacijska organizacija ćelija imunog sistema.
Filmske metode su imale značajnu ulogu u ovim studijama. Mogućnost kontinuiranog dinamičkog proučavanja mikrobioloških objekata in vivo i in vitro u uslovima kompatibilnim sa njihovom životnom aktivnošću, vizualizacija elektromagnetnog zračenja nevidljivog ljudskom oku, registracija brzih i sporih procesa, kontrola vremenske skale i neke druge karakteristične karakteristike istraživačke kinematografije otvorile su velike i na mnogo načina jedinstvene mogućnosti za proučavanje interakcija ćelija.
Koncept fagocita je prošao kroz značajnu evoluciju tokom vremena. Godine 1970. Van Furth et al. predložio je novu klasifikaciju koja odvaja MF od RES u poseban sistem mononuklearnih fagocita. Istraživači su odali počast I. I. Mečnikovu, koji je početkom 20. vijeka koristio termin "mononuklearni fagocit". Fagocitna teorija, međutim, nije postala nepromjenjiva dogma. Činjenice koje je nauka neprestano akumulirala promijenile su i zakomplikovale razumijevanje onih fenomena u kojima se činilo da je fagocitoza odlučujući ili jedini faktor.
Može se tvrditi da danas doktrina o fagocitima koju je stvorio I. I. Mečnikov doživljava svoj preporod; nove činjenice su je značajno obogatile, pokazujući, kako je Ilya Ilyich predvidio, ogroman opći biološki značaj. Teorija I. I. Mečnikova bila je snažan pokretač napretka imunologije u cijelom svijetu, a sovjetski naučnici su tome dali veliki doprinos. Međutim, čak i danas glavne odredbe teorije ostaju nepokolebljive.
Primarni značaj fagocitnog sistema potvrđuje stvaranje u SAD-u društva naučnika koji se bave proučavanjem retikuloendotelnog sistema (RES), izdaje se poseban “Journal of Reticulo-Endothelial Society”.
U narednim godinama razvoj fagocitne teorije povezan je s otkrićem citokinske regulacije imunološkog odgovora i, naravno, proučavanjem utjecaja citokina na ćelijski odgovor, uključujući makrofage. U zoru ovih otkrića bili su radovi naučnika kao što su N. Erne,
G. Koehler, Ts. Milstein.
U SSSR-u je 80-ih uočeno intenzivno zanimanje za fagocite i procese povezane s njima. Ovdje je potrebno napomenuti rad A.N. Mayanskog, koji je proučavao utjecaj makrofaga ne samo u svjetlu njihove imunološke funkcije. Pokazao je važnost RES ćelija za funkcionisanje organa kao što su jetra, pluća i gastrointestinalni trakt. Radove je izveo i A.D. Ado, V.M. Zemskov, V.G. Galaktionov, eksperimente za proučavanje rada MF u žarištu hronične upale izveo je Serov.
Treba reći da je 90-ih pao interes za nespecifičnu vezu imuniteta. To se dijelom može objasniti činjenicom da su svi napori naučnika uglavnom bili usmjereni na limfocite, a posebno na citokine. Možemo reći da je „bum citokina“ trenutno u toku.
Međutim, to ni na koji način ne znači da je relevantnost problema smanjena. Fagocitoza je primjer procesa za koji se ne može izgubiti interes. Doći će do otkrića novih faktora koji stimulišu njegovu aktivnost, otkriće se supstance koje inhibiraju OIE. Biće otkrića koja će razjasniti suptilne mehanizme interakcije MF sa limfocitima, sa intersticijskim ćelijama i sa antigenskim strukturama. Ovo može biti posebno relevantno sada u vezi s problemom rasta tumora i AIDS-a. Može se samo nadati da će se među otkrićima koje je započeo veliki Mečnikov pojaviti imena ruskih naučnika.
TRENUTNO STANJE UČENJA O FAGOCITOZI
Osnovni principi o fagocitima i sistemu fagocitoze, koje je sjajno formulirao I. I. Mečnikov i koji su razvili njegovi učenici i sljedbenici, dugo su odredili razvoj ove najvažnije oblasti biologije i medicine. Ideja antiinfektivnog imuniteta, koja je toliko fascinirala savremenike I. I. Mečnikova, odigrala je odlučujuću ulogu u razvoju stanične imunologije, evoluciji pogleda na upalu, fiziologiju i patologiju reaktivnosti i otpornosti organizma. Paradoksalno je i u isto vrijeme prirodno da je doktrina fagocitoze započela velikim generalizacijama i konceptima, koji su se tijekom mnogo godina dopunjavali činjenicama posebne prirode koje su imale mali utjecaj na razvoj problema u cjelini. Talas savremenih imunoloških informacija, obilje elegantnih metoda i hipoteza usmerili su interesovanja mnogih istraživača ka proučavanju limfocitnih mehanizama ćelijskog i humoralnog imuniteta. A ako su imunolozi brzo shvatili da ne mogu bez makrofaga, sudbina druge klase fagocitnih ćelija - polinuklearnih (segmentiranih) leukocita - donedavno je ostala nejasna. Tek sada možemo sa sigurnošću reći da je ovaj problem, koji je napravio kvalitativni skok u proteklih 5-10 godina, postao čvrsto uspostavljen i da ga uspješno razvijaju ne samo imunolozi, već i predstavnici srodnih profesija - fiziolozi, patolozi, biohemičari i kliničari. Proučavanje polinuklearnih fagocita (neutrofila) jedan je od rijetkih primjera u citofiziologiji, a još više u imunologiji, kada broj studija na objektu “ljudskog porijekla” premašuje broj radova izvedenih u eksperimentima na životinjama.
Danas je doktrina fagocitoze skup ideja o slobodnim i fiksiranim ćelijama porijekla iz koštane srži, koje, posjedujući snažan citotoksični potencijal, izuzetnu reaktivnost i visoku mobilizacionu spremnost, djeluju u prvoj liniji efektorskih mehanizama imunološke homeostaze. Antimikrobna funkcija se doživljava kao posebna, iako važna, epizoda ove ukupne strategije. Dokazano je snažne citotoksične potencijale mono- i polinuklearnih fagocita, koje se, pored baktericidnih svojstava, izražavaju u uništavanju malignih i drugih oblika patološki izmijenjenih ćelija, promjeni tkiva tokom nespecifične upale u imunopatološkim procesima. Ako su neutrofili (dominantni tip polinuklearnih stanica) gotovo uvijek usmjereni na uništenje, tada su funkcije mononuklearnih fagocita složenije i dublje. Oni sudjeluju ne samo u destrukciji, već iu stvaranju, pokrećući fibroblastične procese i reparativne reakcije, sintetizirajući kompleks biološki aktivnih supstanci (faktori komplementa, induktori mijelopoeze, imunoregulacijski proteini, fibronektin itd.). Ostvaruje se strateška prognoza I. I. Mečnikova, koji je fagocitne reakcije uvek posmatrao iz opšte fiziološke perspektive, potvrđujući značaj fagocita ne samo u zaštiti od „štetnih agenasa“, već i u opštoj borbi za homeostazu, koja se svodi na održavanje relativne postojanosti unutrašnjeg okruženja tijela. “U imunitetu, atrofiji, upali i liječenju, fagociti sudjeluju u svim fenomenima od najvećeg značaja u patologiji.”
Mononuklearni fagociti, koji su prethodno bili klasifikovani kao deo retikuloendotelnog sistema, izdvajaju se u nezavisnu porodicu ćelija - mononuklearni fagocitni sistem, koji objedinjuje koštanu srž i krvne monocite, slobodne i fiksne tkivne makrofage. Dokazano je da se pri izlasku iz krvi monocit mijenja prilagođavajući se uslovima sredine u kojoj se nalazi. Time se osigurava specijalizacija ćelije, odnosno maksimalna usklađenost sa uslovima u kojima mora „raditi“. Druga alternativa nije isključena. Sličnost monocita može biti čisto vanjska (kao što se dogodilo s limfocitima), a neki od njih su unaprijed određeni da se transformiraju u različite varijante makrofaga. Iako postoji heterogenost zrelih neutrofila, ona je znatno manje izražena. Gotovo se ne mijenjaju morfološki kada uđu u tkiva; za razliku od makrofaga, tamo ne žive dugo (ne više od 2-5 dana) i očito nemaju plastičnost svojstvenu monocitima. To su visoko diferencirane ćelije koje gotovo završavaju svoj razvoj u koštanoj srži. Nije slučajno da su prošli pokušaji da se pronađe korelacija između nuklearne segmentacije i sposobnosti leukocita da fagocitozu bili neuspješni. Ipak, ideja o funkcionalnoj heterogenosti morfološki zrelih neutrofila i dalje dobiva potvrdu. Poznate su razlike između neutrofila u koštanoj srži i perifernoj krvi, neutrofila u krvi, tkivima i eksudatu. Uzroci i fiziološko značenje ovih karakteristika su nepoznati. Očigledno, varijabilnost polinuklearnih ćelija, za razliku od monocit-makrofaga, je taktičke prirode.
Proučavanje fagocitoze provodi se prema klasičnim postulatima I. I. Mečnikova o fazama fagocitne reakcije - kemotakse, privlačenja (vezivanja) i apsorpcije, destrukcije (probavljanja). Trenutno je pažnja usmjerena na karakteristike svakog od ovih procesa, kojima su posvećene monografije i prikazi. Rezultati brojnih studija omogućili su da se dublje prodre u suštinu ovih reakcija, da se preciziraju molekularni faktori koji su u njihovoj osnovi, da se pronađu zajednički čvorovi i otkriju posebni mehanizmi stanične reaktivnosti. Fagocitoza služi kao odličan model za proučavanje funkcije migracije, prostorne orijentacije ćelija i njihovih organela, fuzije membrane i novoformiranja, regulacije stanične homeostaze i drugih procesa. Ponekad se fagocitoza često izjednačava sa gutanjem. Ovo je očito žalosno, jer narušava povijesno utemeljenu ideju fagocitoze kao integralnog procesa koji objedinjuje zbir ćelijskih reakcija, počevši od prepoznavanja objekta i završavajući njegovim uništenjem ili željom za uništenjem. Sa funkcionalne tačke gledišta, fagociti mogu biti u dva stanja - mirovanju i aktiviranju. U svom najopćenitijem obliku, aktivacija je rezultat transformacije vanjskog stimulusa u reakciju efektorskih organela. Više se piše o aktiviranom makrofagu, iako se u principu isto može učiniti i za polinuklearne ćelije. Potrebno je samo odabrati početnu tačku - na primjer, funkcionalni status u vaskularnom krevetu normalnog tijela. Aktivacija se razlikuje ne samo po stepenu ekscitacije pojedinih ćelija, već i po stepenu pokrivenosti populacije ćelija u celini. Normalno se aktivira mali broj fagocita. Pojava iritansa dramatično mijenja ovaj pokazatelj, odražavajući povezanost fagocita s reakcijama koje ispravljaju unutarnje okruženje tijela. Želja da se aktivira fagocitni sistem, čime se povećavaju njegove efektorske sposobnosti, više puta se čula u radovima I. I. Mechnikova. Savremena istraživanja adjuvansa, bioloških i farmakoloških modulatora mononuklearnih i polinuklearnih fagocita suštinski razvijaju ovu ideju sa stanovišta međućelijske saradnje, opšte i specifične patologije. Čini se da je to perspektiva racionalnog utjecaja na upale, reparativne i regenerativne procese, imunopatologiju, otpornost na akutni i kronični stres, otpornost na infekcije, tumore itd.
Mnogi znakovi aktivacije su stereotipni i ponavljaju se u svim fagocitnim stanicama. To uključuje promjene u aktivnosti lizosomskih i membranskih enzima, povećan energetski i oksidativni metabolizam, sintetičke i sekretorne procese, promjene adhezivnih svojstava i receptorske funkcije plazma membrane, sposobnost nasumične migracije i kemotaksije, apsorpciju i citotoksičnost. Ako uzmemo u obzir da je svaka od ovih reakcija integrativne prirode, onda će broj posebnih znakova po kojima se može suditi o uzbuđenju ćelija biti ogroman.
Isti stimulans može izazvati sve ili većinu znakova aktivacije. Međutim, ovo je prije izuzetak nego pravilo. Danas se mnogo zna o specifičnim mehanizmima koji ostvaruju efektorska svojstva mono i polinuklearnih fagocita. Dešifrovana je strukturna osnova motoričkih reakcija, otkrivene organele koje obezbeđuju orijentaciju vektora u prostoru, proučavani su obrasci i kinetika formiranja fagolizosoma, utvrđena priroda citotoksičnosti i baktericidne aktivnosti, utvrđene sintetičke i sekretorne potencije. , otkriveni su receptorski i katalitički procesi u plazma membrani itd. Postaje sve očiglednije da se diskretne manifestacije ćelijske reaktivnosti obezbeđuju ili barem iniciraju odvojenim mehanizmima i mogu nastati nezavisno jedna od druge. Moguće je suzbiti ili pojačati kemotaksiju bez promjene sposobnosti apsorpcije i citotoksičnosti, sekrecija nije povezana s apsorpcijom, povećana adhezivnost ne ovisi o potrošnji kisika itd. Genetski defekti su poznati kada se izgubi jedna ili više od navedenih funkcija, a mnogi od njih su stereotipni prema kliničkim simptomima. Ako tome dodamo i patologiju medijatorskih sistema koji stvaraju hemoatraktante i opsonine, postaje jasno koliko bi danas trebalo da bude složena i istovremeno specifična dijagnoza koja navodi kršenje fagocitoze.
Glavni događaj bilo je uspostavljanje molekularne osnove citotoksičnosti (uključujući baktericidnost) i njenog odnosa sa reaktivnošću ćelije. Želja da se shvati suština reakcija koje dovode do smrti apsorbiranih bakterija vidljiva je u većini radova I. I. Mečnikova. Dugi niz godina ovaj se problem tradicionalno svodio na „probavu“, koja uključuje hidrolitičke enzime (citaze, prema I. I. Mečnikovu), za koje se vjerovalo da određuju antimikrobna svojstva fagocita. Ova pozicija je uvelike poljuljana kada je otkriveno da lizosomalne hidrolaze imaju malu ili nikakvu in vitro baktericidnu aktivnost. Savremeni pogledi se zasnivaju na zapažanjima koja ukazuju na povećanje oksidativnog metabolizma aktiviranih fagocita i razdvajanje dva glavna događaja - efekta ubijanja i degradacije ubijenih, neživih objekata. Napuštena je prethodna terminologija koja je uspostavljala uzročnu vezu između uništenja žive mete i probavne funkcije ćelije. Digestija, koju uzrokuju kisele i neutralne hidrolaze formirane u granulama, sekundarna je i cilja na objekte koje ubijaju mehanizmi zavisni i neovisni o kisiku - biooksidansi, sistem mijeloperoksidaze, kationski proteini, laktoferin, lizozim. Implementacija citotoksičnosti odražava reaktivnu ekscitaciju fagocitnih stanica, koje luče efektorske molekule u fagozome (sa formiranjem fagolizosoma) ili prema van, napadaju vanćelijske (neapsorbirane) objekte. Odavno je poznato da se količina kiseonika koju apsorbuju leukociti značajno povećava tokom fagocitoze. Međutim, pravo značenje ovog fenomena, koji se u modernoj literaturi često naziva respiratornom ili metaboličkom eksplozijom, shvaćen je tek posljednjih godina. Za razliku od mnogih ćelija, disanje kiseonika nije sistem za održavanje života za fagocite - oni dobro podnose hipoksiju i obavljaju niz funkcija u uslovima anaerobioze. Uz pomoć respiratorne eksplozije, monociti-makrofagi i neutrofili rješavaju čisto efektorske probleme, “naoružavajući se” protiv mikroba i drugih objekata koje percipiraju kao antihomeostatske faktore. U anaerobnom okruženju, fagociti zadržavaju sposobnost apsorpcije, ali naglo smanjuju toksičnost protiv mnogih patogenih i oportunističkih bakterija. Ključni mehanizam je aktivacija membranskih oksidaza koje kataliziraju prijenos elektrona s NADPH na molekularni kisik. Ovo stimulira oksidaciju glukoze u heksoza monofosfatnom šantu, što dovodi do hiperprodukcije vodikovog peroksida i slobodnih radikala kisika - bioloških oksidanata sa snažnim citotoksičnim potencijalom. Klinički značaj ovakvih reakcija postao je očigledan nakon što je otkriveno fatalno smanjenje antiinfektivnog imuniteta kod djece s urođenom patologijom neutrofilnog respiratornog burst sistema. Međutim, bilo bi pogrešno suprotstaviti različite antimikrobne faktore. Njihova efikasnost umnogome zavisi od međusobne ravnoteže uslova u kojima se fagocitoza javlja i vrste mikroba. Neutrofili, lišeni sposobnosti da koriste baktericidna svojstva aktiviranog kisika, ipak normalno ubijaju Staphylococcus epidermidis, Pseudomonas aeruginosa, Viridans streptococcus i obligate anaerobe. Relativna otpornost na fagocitozu određena je zbirom karakteristika – površinskim svojstvima mikrobne ćelije, prisustvom faktora kao što su leukotoksini i antifagini, inaktivacija biooksidanata, itd. Sposobnost nekih bakterija da inhibiraju stvaranje fagolizosoma odavno je poznata. otkriveno. Ovaj mehanizam, koji isključuje kontakt sa citotoksičnim komponentama fagocita, osigurava dugotrajnu perzistenciju bacila tuberkuloze u makrofagima, a Brucela, kao i drugih mikroorganizama, u neutrofilima. Jedan od razloga se vidi u povećanju intracelularnog nivoa cikličkog adenozin monofosfata, koji blokira mobilizaciju granula i njihovu fuziju sa fagosomima. Ovaj primjer pokazuje koliko duboki mogu biti odnosi koji se razvijaju tokom procesa fagocitoze.
Razvoj pogleda na mehanizme citotoksičnosti fagocita nije potkopao Mečnikov koncept citaza kao medijatora koji posreduju destruktivne funkcije stanica. I. I. Mechnikov je više puta naglašavao da, osim što uništavaju mikrobe, fagociti mogu oštetiti vlastita tkiva. Ove ideje su dobile briljantan razvoj u modernom radu na enzimologiji lizosomskih granula i metodama njihovog povezivanja s fagocitnim reakcijama. U granulama mono- i polinuklearnih fagocita identificiran je veliki arsenal hidrolitičkih enzima (neutralne i kisele hidrolaze), za koje se svaki cilj može naći u ekstracelularnom prostoru. Oni ciljaju kolagena i elastinska vlakna, peptidoglikanski matriks hrskavice, fibronektin, faktore komplementa, kalikrein-kinin sisteme, koagulaciju, fibrinolizu, imunoglobuline i ćelijske membrane. Za razliku od starih ideja, danas je akcenat na aktivnom, sekretornom oslobađanju efektorskih molekula, što značajno povećava efektorsku plastičnost ćelije, omogućavajući joj da se mobiliše i racionalno koristi svoje sposobnosti u najkraćem mogućem vremenu u fiziološkim situacijama i tokom različitih patoloških procesa. Sekrecijom, fagociti utiču na druge posredničke sisteme i uništavaju vanćelijske objekte čija veličina isključuje mogućnost apsorpcije. To je očigledno slučaj sa plućnim emfizemom, reakcijama na imunološke komplekse, te akutnim i kroničnim upalama. Pored hidrolaza i drugih komponenti lizosomskih granula, aktivirani fagociti luče pirogene, interferone i interferonu slične supstance, prostaglandine, tromboksane, biooksidante, monokine, faktore koji stimulišu prekursore mijelopoeze itd. Leukotrieni izazivaju kontrakciju glatkih mišića i vaskularna permeabilnost, djeluje 100-10.000 puta jače od histamina.
I.I.Mechnikov je bio u pravu kada je govorio o širokom spektru zadataka koje rješavaju fagociti i raznolikosti njihovih funkcionalnih kontakata („živi lanac“, prema I.I.Mechnikovu) s drugim ćelijama i tkivima. Aktivirani makrofagi i neutrofili služe kao jedan od najupečatljivijih primjera hitne mobilizacije efektorskih mehanizama sa širokim obimom primjene na skali ne samo vezivnog tkiva, već i cijelog organizma.
Aktivatori monocita-makrofaga i polinuklearnih ćelija formiraju se u sistemima komplementa, koagulacije, fibrinolize, kalikrein-kinina, imunoglobulina, a luče ih limfociti, fibroblasti, trombociti i endotel. Složeni odnosi se takođe razvijaju unutar samog fagocitnog sistema. Infiltrat monocita tokom upale nastaje pod uticajem hemoatraktanata koje proizvode neutrofili, koji prvi migriraju u zonu alteracije. Zauzvrat, monociti i makrofagi luče faktore koji selektivno aktiviraju neutrofile. Bitna je funkcionalna saradnja između sličnih fagocita, koja uključuje učešće “autokatalitičkih” mehanizama koji kontrolišu migraciju, sekretorne i druge funkcije aktiviranih ćelija. Metaboliti lipoksigenaze arahidonske kiseline - različite varijante hidroksieikozantetraenske kiseline su hemotaktične u malim dozama (posebno za neutrofile) i, budući da su potencijalni "fragmenti" ćelijskog metabolizma, ujedinjuju signale koji obezbjeđuju usmjerenu migraciju fagocita na mjesta oštećenja tkiva. Svaka povreda bilo kog tkiva može izazvati takve reakcije. Ovo prati jedan od univerzalnih mehanizama homeostaze - unutar populacije fagocita, na skali vezivnog tkiva i šire.
Iz navedenog slijedi važan zaključak. Teško je pronaći takvu promjenu u unutrašnjem okruženju tijela koju ne bi zabilježio sistem fagocitoze. Kao moćni efektori, fagociti se pretvaraju u komunikacioni čvor, svojevrsnu stratešku metu kroz koju se transformišu sve reakcije krvi i vezivnog tkiva. Neutrofili su posebno indikativni. Razmjenjujući se u opticaju svakih 5 sati, čini se da fotografišu pomake koji se dešavaju u tom periodu, kao svojevrsno ogledalo homeostaze. Nije slučajno što se indikatorski testovi zasnovani na visokoj reaktivnosti polinuklearnih ćelija već dugo koriste u klinici i često su informativniji od drugih hematoloških indikatora.
Velika pažnja se poklanja molekularnim mehanizmima aktivacije fagocita. U skladu sa općim principima moderne citofiziologije, shema fagocitne reakcije uključuje prepoznavanje i prijem (vezivanje) vanjskog signala, reaktivne promjene u plazma membrani, aktivaciju intracelularnih intermedijarnih signala i funkcionalnu transformaciju efektorskih organela. Otkriće stimulansa sa poznatom strukturom dovelo je do zaključka da je njihov efekat na fagocite posredovan preko diskretnih delova plazma membrane – specifičnih receptora koji su komplementarni stimulativnom agensu u molekularnoj konfiguraciji. To određuje najvažnije svojstvo plazma membrane - da razlikuje molekularni profil vanjskih podražaja i transformira ga u određeni oblik ćelijskog odgovora. Makrofagi i neutrofili primaju Fc fragment IgG i IgA imunoglobulina, derivate komplementa (C3b, C3d, C3e, C5a, C567), razne kemoatraktante, pektine, bakterijske glikoproteine, fibronektin, adrenergike i holinergike, holinergike i dr. Zajedno određuju farmakološki profil,
odnosno reaktivnost ćelije na odgovarajući skup funkcionalnih modulatora. Ispostavilo se da je receptorski aparat veoma dinamičan sistem. Imajući određeni početni nivo, mijenja se ovisno o specifičnom okruženju i stanju ćelija. Intenzitet specifičnog prijema jedan je od najzanimljivijih oblika reaktivnosti, čija će kontrola omogućiti utjecaj na najranije faze procesa fagocita. Važno je da se ekspresija različitih receptora asinhrono mijenja, diferencira farmakološkim agensima i dovodi do različitih funkcionalnih posljedica. Prijem koji je pasivan čisto vanjskim znakovima (na primjer, hemoatraktanti su vezani uništenim stanicama) praćen je molekularnim pomacima u plazma membrani, od kojih mnogi igraju ključnu ulogu u aktivaciji stanica. Jedan od postulata moderne citofiziologije, koji potvrđuje funkcionalno ili čak strukturno jedinstvo receptora i enzima plazma membrane (ektoenzima), ogleda se iu proučavanju fagocitoze. U plazma membrani fagocita pronađene su serin esteraze, proteinaze, adenilat ciklaze, oksidaze i ATPaze. Vjeruje se da se aktiviraju nakon stimulacije, osjetivši promjene u molekularnoj topografiji ćelijske površine. Enzimologija plazma membrane odražava želju za razumijevanjem mehanizama koji iniciraju prebacivanje energije iritacije u energiju ćelijske ekscitacije. Potraga za univerzalnim inicijatorskim enzimom nije se ostvarila, što prije govori o specifičnosti različitih oblika ćelijskih reaktivnost, a ne negiranje same ideje posredovanja ektoenzima. Potraga za univerzalnom posredničkom vezom između reakcija plazma membrane i efektorskih organela također je bila neuspješna. Ciklični nukleotidi, Ca2+ i derivati aktiviranog kiseonika bili su kandidati za ovu ulogu. Svaki od njih kontrolira više ili manje složen skup ćelijskih funkcija, ali općenito njihov učinak nije univerzalan. Naprotiv, postoje činjenice koje nas uvjeravaju da unutarćelijska medijacija može biti polideterminantna, odnosno ovisi o zajedničkom djelovanju više medijatora. Upravo ta kombinacija određuje konačni oblik odgovora i karakteristična je za većinu fagocitnih reakcija. Prema najnovijim podacima, mehanizmi koji omogućavaju pristup istim organelama mogu biti različiti za različite stimulanse. Ideje I. I. Mečnikova i njegovih suvremenika o opsoninima, koji su nekada imali odlučujuću ulogu u objedinjavanju staničnih i humoralnih koncepata imuniteta, duboko su razvijene. Koncept opsonina formuliran je 1903. godine, a povećana fagocitoza u serumskom mediju primjećena je još ranije. Međutim, samo su posljednje decenije obilježene radikalnim napretkom u proučavanju molekularne osnove opsonične funkcije i njene implementacije na nivou efektorskih ćelija. Porodica opsonina obično uključuje četiri grupe dobro okarakteriziranih serumskih proteina - IgG, C3 (C3b), fibronektin, C-reaktivni protein, ali u stvarnosti ih je očigledno više. C3b i IgG antitijela imaju najuniverzalnija svojstva. Međusobno sarađujući stvaraju snažnu opsoničku barijeru, koja se tradicionalno smatra jednim od glavnih faktora antiinfektivnog imuniteta. Funkcije drugih opsonina su očigledno ograničenije; njihova aktivnost više ovisi o svojstvima fagocitiranog objekta i vrsti fagocita. Upravo heterogenost supstrata s kojima se fagocitne ćelije susreću treba smatrati osnovnim uzrokom evolucijski fiksirane heterogenosti opsoničnih faktora.
Važno pitanje je odnos fagocitoze i stečenog (specifičnog) imuniteta. Klasični postulat I. I. Mechnikova o probavi antigenskog materijala fagocitima kao neophodnoj fazi u formiranju antitijela pretočen je u moderni koncept predstavljanja antigenskih determinanti T-limfocitima u obliku kompleksa s proizvodima imunoregulatornih gena ( Ia-proteini) premium na plazma membrani makrofaga. Zajedno sa medijatorima kao što su interleukini, ovo određuje centralnu poziciju mononuklearnih fagocita u mehanizmima formiranja stečenog imuniteta. Za neutrofile nije bilo moguće postići više od činjenice slabog povećanja proliferacije B-limfocita neutralnim proteinazama ljudskih neutrofila i negativnog efekta viška neutrofila na sličan fenomen. Najvjerovatnije se radi o reakcijama iz epruvete koje nemaju ozbiljnu primjenu u regulaciji funkcija limfocita in vivo. Inače će biti
na nivou efektorske karike imunoloških procesa. U suštini, nijedna od manifestacija stečenog imuniteta se ne reprodukuje u potpunosti bez učešća monocita-makrofaga i (ili) polinuklearnih ćelija. O tome svjedoče reakcije izazvane opsonin antitijelima, preosjetljivost odgođenog tipa, oštećenja uzrokovana imunološkim kompleksima itd.
Od MF zavisi odgovor limfocita na nespecifične mitogene - fitohemaglutinin, konkanavalin A, perjodat, kao i njihova proizvodnja limfokina - MIF, MAF, limfotoksin itd. Pretpostavlja se da se aktivacija T-limfocita vrši direktno slobodnim ili MF-vezanim mitogenom, a MF luči faktor , transformirajući T ćelije. MF, oslobađajući različite faktore, reguliše proliferaciju i diferencijaciju nezrelih MF koštane srži, progranulocita i eventualno eritroidnih ćelija. Bilo je moguće identifikovati genetski određene razlike u regulatornom efektu MF na proliferativnu aktivnost hematopoetskih matičnih ćelija. Makrofagi takođe uz pomoć različitih rastvorljivih faktora pospešuju proliferaciju fibroblasta, epidermalnih ćelija kože, vaskularnog endotela i učestvuju u sazrevanju ćelija timusa.
Danas se hipoteza o središnjoj ulozi timusa i T stanica u antitumorskome nadzoru ne može u potpunosti prihvatiti, jer postoje podaci o istoj učestalosti tumora kod atimičnih i normalnih životinja, istom odbacivanju kod imunodeficijentnih ili suprimiranih životinja, ograničen broj tumora kod osoba sa teškom imunosupresijom. Prema istraživačima, uloga T limfocita je sasvim jasna u odbacivanju tumora izazvanih virusom, ali je mala kod spontanih i kancerogenih neoplazmi. Brojni dokazi ukazuju na složen sistem prirodne i stečene antitumorske odbrane organizma i ograničenu ulogu T-limfocita u njemu. O tome svjedoči rani razvoj prirodne rezistencije na tumore nekoliko dana nakon rođenja, njeno suzbijanje uvođenjem supstanci koje inhibiraju MF neposredno prije ili istovremeno s transplantacijom tumora, te podudarnost inducirane stimulacije rezistencije na tumore sa aktivacijom. of MF. Stoga MF postaje sve važniji u ovom sistemu. Pokazalo se da neaktivirani MF nemaju antitumorski učinak, ali se situacija mijenja aktivacijom ćelije, koja može biti specifična i nespecifična. Specifična aktivacija se dešava u ćelijama uzetim iz imunog organizma ili u intaktnim MF inkubiranim sa imunim T-limfocitima, sa ovim limfocitima i Ag ili sa produktima reakcije. U ovom slučaju, MF se aktiviraju specifičnim faktorom pojačanja, specifično prepoznaju i ubijaju tumor kao rezultat citolize. Nespecifičnu aktivaciju uzrokuju infektivni procesi, endotoksini, lipid A, polinukleotidi i imunološki kompleksi druge specifičnosti. MF aktivirani na ovaj način dobijaju citostatička svojstva. MF se mogu pojačati faktorom specifičnim za ove limfocite različite specifičnosti za razliku od faktora izazvanog tumorskim Ags, u kom slučaju postaju nespecifično citotoksični za tumor. Stoga, ako se imunim MF dodaju specifične tumorske ćelije, a zatim nakon nekog vremena nespecifične, MF će specifično lizirati homolognu metu i nespecifično potisnuti nesrodnu.
Dakle, MF u tijelu najvjerovatnije pokazuju i specifičnu i nespecifičnu ćelijsku citotoksičnost, otkrivajući citolitičke potencije u prvom slučaju i citostatičke u drugom.
Aktivirani MF suzbijaju proliferaciju normalnih i tumorskih singenih, alogenih i ksenogenih ćelija - ćelije koje se brzo razmnožavaju su jače od onih koje se sporo razmnožavaju. Međutim, brzo proliferirajuće tumorske ćelije su potpuno potisnute, dok su normalne samo djelimično potisnute.
Mehanizam MF citotoksičnosti je složen. Specifični pojačavajući faktor s molekulskom težinom od 25.000-50.000 daltona ima afinitet za tumorske antigene, vezuje se za površinu MF-a i luče ga angažirani T-limfociti. Važan je međućelijski kontakt mete i MF, koji se stalno dešava, a kontaktna zona ima 100-200A. Pretpostavlja se da može promovirati lokalnu fuziju i injekciju MF lizosoma u metu, lizirajući je. Prema različitim izvorima, ubijanje se može izvršiti pomoću serinskih proteaza, što nastaje pod utjecajem lizosomalnih hidrolaza od strane C3-podkomponente komplementa, kationskog proteina, ili indukcije aberantne diobe makrofaga u meti, što dovodi do njihove lize. Međutim, smatra se da uloga prostaglandina, arginaze, vodikovog peroksida i interferona nije toliko značajna u direktnom citolitičkom dejstvu.
Određeni značaj pridaje se promjenama u strukturi membrana efektora i meta, budući da tretman MF fosfolipazom ili lizolecitinom u njima izaziva antitumorsku citotoksičnost, što se objašnjava mogućim formiranjem citolitičke strukture na membrani kao rezultat promjene. u svojoj konformaciji. Slični procesi se očigledno dešavaju prilikom aktivacije MF lipopolisaharidima (LPS), usled čega se LPS, preko lipida A, vezuje za plazma membranu MF, menjajući njegovu organizaciju kao rezultat formiranja lipida A - membranskog lipida. kompleksa, iz istog razloga, možda, tumoricidna sposobnost MF-a je bila oštro potisnuta nakon njihovog izlaganja lipoproteinima niske gustine ili liposomima holesterola.
U tijelu se, zbog stalnog oslobađanja bakterijskih endotoksina, imunoloških reakcija različite specifičnosti, praćenih oslobađanjem limfokina, formiranjem imunoloških kompleksa, stalno održava populacija nespecifično aktiviranih MF-a, nadzirući spontano nastale transformirane stanice i eliminirajući ih. .
MF su od velike važnosti za sistem mononuklearnih fagocita u prirodnoj otpornosti organizma na tumore. Budući da supresija proliferacije makrofagama ne zavisi od vrste i tipa ćelija, karakteristika rasta, transformacije i reaktivnosti, to ukazuje na prisustvo struktura prepoznavanja u MF koje nemaju imunološku specifičnost. Ciljevi pokazuju opšte promjene koje prepoznaju sveprisutni MF, koji su stoga široki regulatori ukupne ćelijske homeostaze.
Tokom 120 godina koliko je prošlo od stvaranja doktrine o fagocitima od strane I. I. Mechnikova, otišlo se daleko naprijed. Pokazalo se da je uloga MF-a nemjerljivo šira i izlazi iz okvira imunologije.
Ova teorija imala je najdublji konstruktivni uticaj na cjelokupni razvoj moderne imunologije. Ona je bila ta koja je pokrenula proučavanje ćelijskih aspekata imuniteta. Neki aspekti teorije koju je predvideo I. I. Mečnikov i dalje su nedovoljno razvijeni. Očigledno je da će naučno naslijeđe koje nam je ostavio I. I. Mechnikov u budućnosti odrediti glavne smjerove proučavanja fagocita.
Makrofagi peritonealnog eksudata kao model fagocitoze i poremećaja fagocitne aktivnosti.
U ljudskom tijelu, fagocitnu funkciju obavlja nekoliko vrsta stanica. Prije svega, to su ćelije koje pružaju zaštitu prilikom bilo kakvih infekcija i invazija - makrofagi, monociti i neutrofili. U manjoj mjeri je zastupljen u eozinofilima i bazofilima. Osim toga, dobro je poznata činjenica da u različitim tkivima fagocitnu funkciju preuzimaju (pored sveprisutnih makrofaga) specifični ćelijski elementi datog tkiva, na primjer: fibroklasti, osteoklasti, mikroglijalne ćelije. Također ne smijemo zaboraviti da te važne ćelije, zahvaljujući kojima se javlja specifičan imunološki odgovor, uključuju dendritske ćelije, koje su široko zastupljene u barijeranim područjima u tijelu. I iako njihova fagocitna funkcija nije u potpunosti dokazana, postoje dokazi da je to tako.
Postoje različite metode za proučavanje fagocitne aktivnosti u gore navedenim ćelijama. U ovom sažetku će se govoriti o metodama proučavanja onih fagocita kod kojih je fagocitna funkcija najizraženija i koji su od izuzetnog značaja u imunološkom sistemu čovjeka, a njihova patologija je teška. Govorimo o makrofagima (MF). Lako ih je proučavati in vivo I in vitro, uzgoj; modeliranje različitih procesa na ovim ćelijama je postalo široko rasprostranjeno i dalo je dobre rezultate. To je zbog njihove velike veličine, široke distribucije u tijelu, aktivnosti metaboličkih procesa koji se odvijaju u njima i raznolikosti funkcija koje su im dodijeljene.
Kao model koji se dokazao i koji se najčešće koristi u eksperimentima na proučavanju fagocita možemo smatrati model peritonealnih makrofaga. in vitro. Ovaj model je postao široko rasprostranjen iz nekoliko razloga. Prvo, lako se reprodukuje. Drugo, olakšava snimanje rezultata istraživanja. Treće, ovaj model se može dobiti i kod laboratorijskih životinja (pacovi, miševi, zamorci) i kod ljudi. Četvrto, kada provodite eksperimente na životinjama, možete koristiti različite sojeve životinja (uključujući nokaute) i životinje sa stečenim (umjetno izazvanim) imunološkim defektima. Peto, prilikom postavljanja eksperimenata moguće je izazvati septičku i aseptičku upalu; prije uzimanja ćelija mogu se izvršiti različiti efekti, a rezultati se mogu samo zabilježiti na modelu (tj. sama reakcija se odvija in vivo).
Mogu se navesti i drugi razlozi, ali ćemo se na njih ograničiti. Naravno, ovaj model nije jedini, već su predloženi i drugi, koji će biti spomenuti u nastavku.
Dakle, razmatranje odabranog modela će se odvijati na sljedeći način:
- Opcije za dobijanje modela.
- Moguće metode za evidentiranje rezultata istraživanja.
- Različite opcije za simulirane procese.
Pitanja koja se odnose na praktični aspekt korištenja rezultata istraživanja će se razmatrati od slučaja do slučaja i neće biti predstavljena u posebnom dijelu.
I. Dobijanje modela.
Eksperimenti su rađeni na bijelim miševima, pacovima, zamorcima (u rijetkim slučajevima zečevima) različitih sojeva (CC57/W, CBA, “WISTAR”, C57BL/6), kao i na nelinearnim životinjama. Postoje indukovane i neindukovane MF. Ako su potrebni intaktni MF, životinjama se intraperitonealno ubrizgava sterilna 10% otopina peptona ili nekoliko ml sterilnog parafinskog ulja; možete koristiti i 2,5% otopinu škroba u fiziološkom rastvoru. rješenje. Obično se nakon 48 sati anestezirana životinja žrtvuje, peritonealna šupljina se ispere, a peritonealna tekućina se aspirira. U nastalu tečnost dodaju se stabilizator (heparin, glutation) i antibiotici (ali ne i makrolidni niz!), a češće se koriste penicilin i streptomicin. Zatim se tečnost može centrifugirati i zatim čuvati, ili se može odmah držati u staklenim kivetama (2 sata). Osnovni princip je da makrofagi imaju sposobnost da se vežu za staklo ili plastiku, dok druge ćelije nemaju. Nakon ekspozicije, sam medij se ocijedi (ili opere) i priprema novi koji ne sadrži heparin. Smatra se da se rezultirajuća ćelijska populacija sastoji od 95% MF. Zatim se ćelije stavljaju na specijalne podloge (N199) sa hranljivim materijama i antibioticima. Takvi MF se mogu čuvati ne više od 48-72 sata uz održavanje optimalne temperature (37 C) i jonsko-osmotske ravnoteže.
Ako su potrebni aktivirani MF-ovi, tada se njihova aktivacija vrši od strane
- Imunizacija životinje uvođenjem različitih seruma ili moćnih antigena,
- Izazivanje žarišta septičke upale peritoneuma (unošenje toksina u otopinu peptona, unošenje suspenzije mrtvih ili živih mikroorganizama).
Dalje radnje se poklapaju sa već navedenim.
Izolacija ljudskih MF je također od interesa. Obično se dobijaju iz ascitične tečnosti pacijenata sa stadijumom III cirkulatornog zatajenja. Zatim se peletiraju centrifugiranjem (400 g, 10 min) i zamrzavaju na temperaturi tekućeg dušika. Nakon odmrzavanja stavljaju se u posebne posude sa podlogom i kultivišu.
Ponekad MF direktno dobijeni iz peritonealnog eksudata služe samo za snimanje iskustva izvršenog na životinji in vivo a njihova kultivacija je samo dijagnostičke prirode.
II.Registracija rezultata
Nakon provođenja eksperimenata, postavlja se razumno pitanje: kako otkriti promjene u aktivnosti MF, kako odrediti one promjene koje su utjecale na rad fagocitnih stanica. U našoj zemlji se najviše koristi nekoliko metoda.
- Za proučavanje faze apsorpcije fagocitoze koriste se različiti test objekti. Osim mikroba, mogu poslužiti kao eritrociti i razne indiferentne čestice: lateks, trup, karmin, koloidni ugljik, kadmijum. Apsorpciona aktivnost fagocita procjenjuje se direktnim vizualnim brojanjem unesenih mikroba ili drugih čestica unutar MF, kao i brojem čestica koje ostaju neapsorbirane, kao što su čestice lateksa pomoću elektronskog brojača čestica, crvena krvna zrnca spektrofotometrijskom koncentracijom hemoglobina, emulgirane uljnocrvene čestice sa spektrometrijskom registracijom ili označene mikrokokama fluorescein izotiocijanata pomoću fluorimetra. Visoka tačnost i produktivnost karakterišu metodu za proučavanje fagocitoze fluorescentnih čestica lateksa pomoću automatskog protočnog citometra. Kada se koristi direktna vizuelna metoda, izračunava se fagocitni indeks (PI) – procenat fagocitnih ćelija od ukupnog broja, fagocitni broj (PN) – prosečan broj čestica koje je uhvatila jedna ćelija. Rezultati nakon 1 i 3 sata se posebno uzimaju u obzir: FI1, FI3, FC1 i FC3, respektivno, kao i koeficijent fagocitnog broja (PFN): omjer FC1 prema FC3 je pokazatelj koji karakterizira stopu fagocitoze.
- Hemotaksa leukocita se procjenjuje pomoću dvije uobičajene metode. Boydenova metoda se zasniva na principu prolaska leukocita iz jedne polovine komore sa suspenzijom ćelija u drugu polovinu sa hemoatraktantom, odvojenih membranskim filterom. Za proučavanje kemotakse makrofaga koriste se filteri s veličinom pora od 5-8 mikrona. Dostupne varijacije Boydenove metode uključuju verzije s dva filtera i radioizotopa. Druga metoda se zasniva na hemotaksiji ispod sloja agaroze. Kao hemoatraktant često se koristi surutka tretirana zimozanom ili lipopolisaharidom, kazein, filtrat kulture E. coli ili drugih mikroorganizama, te sintetički formil peptidi.
- Za procjenu nivoa MF aktivnosti koristi se polarografska metoda (potrošnja kisika), NBT test (redukcija nitroplavog tetrazolijuma), jodiranje (prelazak radioaktivno označenog joda u talog nerastvorljiv u kiselini), oksidacija glukoze (formiranje 14CO2 molekula tokom oksidacije glukoze-1-14C). Ovi testovi se zasnivaju na činjenici da je aktivacija MF praćena metaboličkom „eksplozijom“ zavisnom od kiseonika. Klasika ovih metoda je NTS test. Činjenica je da su aktivirani fagociti sposobni apsorbirati nitroplavi tetrazolij (NBT) i reducirati ga u formazan. NBT test vam omogućava da napravite razliku između aktiviranih i intaktnih fagocita, ali se ne može smatrati kvantitativnim, jer je vizualna procjena rezultata subjektivna
- Također, za određivanje baktericidne sposobnosti MF-a, koristi se kemiluminiscentna metoda, predložena relativno nedavno. Kao što je poznato, fagocitoza neutrofila i makrofaga je praćena stvaranjem reaktivnih vrsta kiseonika (O2-, H2O2, OH-), izazivajući fenomen hemiluminiscencije. Potonji je proporcionalan intenzitetu stvaranja reaktivnih vrsta kisika od strane fagocita i može poslužiti kao indirektni kriterij njihove fagocitne sposobnosti, pogotovo jer nastali proizvodi imaju izražena baktericidna svojstva. Metoda hemiluminiscentne analize koristi se klinički i eksperimentalno.
- Najpreciznije i najbrže metode za određivanje fagocitne aktivnosti leukocita su radiometrijske. Dakle, kapacitet apsorpcije se procjenjuje na osnovu nivoa inkorporacije izotopa u fagocitne ćelije. U tu svrhu koriste se Cr-obilježeni eritrociti, radioaktivna uljna emulzija ili mikrobi obilježeni česticama 14C-glicina, 3H-leucina, 3H-uridina ili 192Ir. Ponekad se fagocitoza procjenjuje smanjenjem oznake (32P) u ekstracelularnom okruženju.
- Jedan od indikatora funkcionalne aktivnosti makrofaga je nivo aktivnosti 5'-nukleotidaze. Aktivnost ovog enzima određena je u suspenziji nerazrušenog MF prema metodi Tumanyan i Kirilicheva. Metoda je jednostavna, precizna, pouzdana i često se koristi.
Mora se imati na umu da efikasnost svih ovih indikatora zavisi od niza uslova, kao što su trajanje inkubacije, oblik dna posude – okruglo i konusno (veće stope fagocitoze su uočene u konusnim epruvetama, što je očito zbog stimulativnog utjecaja interakcije na kratkim udaljenostima), pH sredine, sadržaj kisika i ugljičnog dioksida.
Pokret ćelije u odsustvu hemotaktičkog stimulusa daje karakteristiku
nasumična motorička aktivnost (spontana migracija) fagocita.
Merenje elastičnosti ćelije se takođe može obaviti u Boyden komorama.
Adhezivna svojstva fagocita se procjenjuju lijepljenjem na staklenu površinu
ili u stupcima sa perlama. Između sposobnosti širenja makrofaga, op-
određuje se pod fazno-kontrastnim mikroskopom, a fagocitozom postoji
definitivna korelacija
Među metodama, registracija hemiluminiscencije (CL) je najosjetljivija i najinformativnija metoda funkcionalne procjene fagocitnih stanica, ali ujedno i jedna od najsloženijih, ne toliko u metodološkom smislu, koliko u razumijevanju prirode biohemijskih i fizičke procese koji dovode do emisije svjetlosti. Mehanizmi koji leže u osnovi HL fagocita su složeni i slabo shvaćeni. Luminescencija se može javiti u reakciji O2+O1=2O2+hV; OH- radikali mogu igrati važnu ulogu. Analiza različitih inhibitora luminiscencije dovodi do ideje da su singletni kisik, hidroksilni radikal i vodikov peroksid uključeni u proces CL.
CL fagocitnih ćelija je značajno pojačan u prisustvu luminola ili
lucigenin.
Predložene su mnoge metode za snimanje CL fagocitnih ćelija; ove metode se mogu podijeliti u 2 glavne klase.
/. Registracija vlastitog HL-a. Povećanje intrinzičnog CL fagocitnih ćelija se opaža nakon stimulacije opsoniziranim zimozanom, bakterijama i česticama lateksa. Vlastiti CL ćelije ima nizak intenzitet i leži u širokom spektralnom opsegu sa maksimumom u području od 400-500 nm. Registracija CL zahtijeva visoku osjetljivost uređaja i dovoljnu količinu izolacije ćelija (obično najmanje 106 ćelija). Crvena krvna zrnca, hemoglobin i krvni serum inhibiraju CL.
2. CL u prisustvu luminola. Sjaj ima 2-3 reda veličine veći intenzitet od unutrašnjeg CL. Pojačani CL se opaža pod uticajem zimosana, bakterija, čestica lateksa, kompleksa antigen-antitelo, kalcijum jonofora i hemotaktičkih peptida. CL se može uočiti u suspenziji izolovanih ćelija i ćelija u krvnom serumu.
Dakle, hemiluminiscentna metoda omogućava brzu kvantitativnu procjenu fagocitne i baktericidne aktivnosti ćelija. Može se koristiti za proučavanje malih količina biološkog krvnog materijala, ili može poslužiti i za procjenu stanja ćelija i za procjenu opsonične aktivnosti seruma i djelovanja lijekova.
Radiometrijske metode odlikuju se brzinom implementacije i objektivnošću evaluacije rezultata. U pravilu, na kraju inkubacije mikroba sa fagocitima, potonji se uništavaju osmotskom lizom, smrzavanjem-odmrzavanjem ili natrijum deoksiholatom, zatim se dodaje 3H-timidin 30 minuta na 37°C i radioaktivnost bakterija se taloži na filter se broji. Koristeći dvostruku oznaku, istovremeno se određuje apsorbirajuća i baktericidna funkcija leukocita. Da bi se to uradilo, mikrobi se prvo obeležavaju jednim od izotopa (14C-fenilalanin, 14C-natrijum acetat), a zatim se na kraju inkubacije uništavaju fagociti i dodaje 3H-timidin. Radioaktivnost inicijalno obilježenih mikroba uključenih u fagocite odražavat će njihovu apsorpcionu funkciju, a radioaktivnost uključena u mikrobe nakon uništenja fagocita karakterizirat će njihovu baktericidnu sposobnost. Postoje autoradiografske metode za procjenu završetka fagocitoze ugradnjom izotopa tokom inkubacije monosloja fagocita s mikrobima na staklu.
III. Neki simulirani procesi.
SMANJENJE BAKTERIJSKE AKTIVNOSTI MIŠIH PERITONEALNIH MAKROFAGA U USLOVIMA KOMBINIRANE PRIMJENE STAFILOKOKA
ENTEROTOKSIN TIPA A I ENDOTOKSIN
Mehanizmi patogenog djelovanja stafilokoknih enterotoksina (SE) nisu dovoljno proučavani. Poznato je da blokada retikuloendotelnog sistema (RES) Thorotrastom povećava osjetljivost životinja na povraćanje izazvano RE. Ovo sugerira da funkcionalni status RES igra važnu ulogu u odgovoru tijela na enterotoksin. Podaci iz literature također ukazuju na mogućnost utjecaja SE na funkcioniranje fagocitnih stanica. Prvo, primjena SE majmunima kroz želučanu sondu dovodi do razvoja akutnog gastroenteritisa s izlučivanjem neutrofila, makrofaga i drugih znakova upale. Drugo, najvažnije svojstvo SE je sposobnost da senzibilizira životinje na smrtonosne efekte endotoksina iz gram-negativnih bakterija (lipopolisaharida - LPS), što ih stavlja u ravan sa supstancama koje uzrokuju hiperaktivaciju RES-a i također imaju senzibilizirajuću osobinu. efekat. Uzimajući u obzir stalni kontakt tijela s oportunističkim bakterijama, a samim tim i endotoksinima crijevne mikroflore, proučavanje funkcija makrofaga odgovornih za eliminaciju mikroorganizama pod utjecajem SE i u kombinaciji s LPS postaje posebno relevantno. S tim u vezi, cilj eksperimenta bio je proučavanje glavnih obrazaca promjena fagocitnih i baktericidnih funkcija makrofaga pod utjecajem SE tipa A (SEA) i LPS.
Prva serija eksperimenata za proučavanje fagocitne i baktericidne aktivnosti izvedena je sa makrofagima dobijenim od miševa sljedećih grupa: 1. - 2 sata nakon injekcije enterotoksina, 2. i 3. - 24 sata nakon primjene SEA i LPS odvojeno, 4 -I - 24 sata nakon primjene endotoksina na pozadini SEA. SEA je izazvao dvostruko smanjenje ukupnog broja ćelija već 2 sata nakon injekcije; nakon 24 h ukupan broj ćelija je i dalje smanjen. Ako je LPS kod intaktnih miševa doprinio povećanju oslobađanja stanica u trbušnu šupljinu, onda na pozadini SEA njihov broj ne samo da se nije povećao pod utjecajem LPS-a, već se čak značajno smanjio u odnosu na kontrolu.
Studija fagocitne i baktericidne aktivnosti makrofaga 2 sata nakon davanja SEA miševima pokazala je njihovo značajno smanjenje u odnosu na indikatore za kontrolne životinje. Uočena je povećana fagocitoza 24 h nakon injekcije samo SEA i LPS. Otkriveni obrasci promjena u fagocitnoj funkciji makrofaga su u skladu sa literaturnim podacima o proučavanju klirensa drvenog uglja kod kunića nakon primjene stafilokoknih enterotoksina. N. Sugiyama je također uočio dvofazne promjene u fagocitnoj funkciji RES; suzbijanje stepena klirensa uglja 2 sata nakon ubrizgavanja, nakon čega slijedi njegovo povećanje dan kasnije.
Baktericidna aktivnost makrofaga dobijena 24 sata nakon odvojenog tretmana životinja sa SEA i LPS također se povećala. U slučaju zajedničkog davanja ovih toksina, funkcija apsorpcije se neznatno promijenila, ali se stupanj završetka fagocitoze naglo smanjio. Treba napomenuti da ispitivanje morfološkog sastava ćelija u peritonealnom eksudatu miševa 24 sata nakon injekcije SEA i LPS nije otkrilo značajne razlike u procentu makrofaga u eksperimentalnim grupama životinja. Stoga se može tvrditi da su utvrđene promjene u fagocitnim i baktericidnim funkcijama posljedica utjecaja proučavanih toksina.
Da bi se razjasnila priroda uticaja SEA i LPS na funkcionalnu aktivnost makrofaga, sprovedena je sledeća serija eksperimenata u in vitro sistemu. U tu svrhu rezidentni peritonealni makrofagi dobijeni od intaktnih životinja inkubirani su sa toksinima 24 sata, pri čemu se funkcija apsorpcije u manjoj mjeri promijenila. Baktericidna aktivnost, kao u in vivo eksperimentima, povećana je pod uticajem SEA i LPS odvojeno. Uz istovremeni dodatak toksina u makrofage, baktericidna funkcija se povećava, a u uvjetima koji se približavaju onima in vivo, odnosno uz dodatak LPS 4 sata nakon SEA, sposobnost makrofaga da ubijaju Staph. aureus se također naglo smanjio.
Dakle, u uvjetima kombinirane upotrebe SEA i LPS-a dolazi do oštrog smanjenja funkcije završene fagocitoze makrofaga. Činjenica da se isti obrasci primećuju u uslovima in vitro kao u in vivo sistemu sugeriše da SE ima direktan uticaj na funkcije makrofaga. S obzirom da fagocitne ćelije predstavljaju prvu liniju odbrane od izuzetno čestih oportunističkih mikroba, smanjenje baktericidnih svojstava u uslovima sinergističkog dejstva SE sa endotoksinima gram-negativnih bakterija u organizmu može dovesti do razvoja teških septičkih komplikacija.
PONIŠTENJE EFEKTA OPSONINA POBOLJŠANOG FAGOCITOZOM KORIŠTENJEM FRAGMENTA ANTITIJELA PROTIV Fc-MAKROFAGNIH RECEPTORA
Jedan od najvažnijih i dugo uspostavljenih imunoloških fenomena - povećano hvatanje korpuskularnih antigena od strane fagocitnih ćelija nakon njihove senzibilizacije IgG antitijelima - dugo je ostao slabo proučavan. Nakon razjašnjenja principa strukturne organizacije IgG molekula i otkrića receptora za Fc regiju IgG na površini fagocita, uključujući makrofage, postulirano je da opsonizirajuća antitijela obezbjeđuju pojačano preuzimanje korpuskularnog antigena zbog interakcije Fc region molekula antitela sa Fc receptorom (FcR) makrofaga. Jedini eksperimentalni dokaz u prilog tome bila je činjenica da Fab fragmenti opsonizirajućih antitijela nemaju sposobnost da pojačaju hvatanje korpuskularnog antigena, što je dokaz uključenosti FcR u proces hvatanja opsoniziranog korpuskularnog antigena. Takav eksperimentalni pristup ne može se smatrati adekvatnim da direktno demonstrira učešće FcR u procesu preuzimanja opsoniziranog korpuskularnog antigena. Na osnovu navedenog, odlučeno je da se pribave direktni dokazi o ulozi FcR-a u implementaciji mehanizma pojačavanja preuzimanja korpuskularnog antigena senzibiliziranog IgG antitijelima od strane makrofaga. Ovo je postignuto procenom uticaja na ovaj proces Fab fragmenata antitela protiv FcR makrofaga, za koje je utvrđeno da ometaju interakciju agregiranih IgG sa makrofagima. Pre-inkubacija peritonealnih makrofaga sa Fab fragmentima anti-FcR antitela u potpunosti je ukinula efekat pojačanog preuzimanja opsonizovanog antigena od strane makrofaga.
Kao rezultat eksperimenta, ustanovljeno je da Fab fragment IgG iz anti-FcR seruma efikasno blokira FcR mišjih makrofaga, sprečavajući ove ćelije da vežu heterologni agregirani IgG. Ovi podaci se dobro slažu sa činjenicom da je FcR peritonealnih makrofaga blokiran bivalentnim Fa fragmentima iz antiFcR. Ovi podaci, u kombinaciji s rezultatima kontrolnih eksperimenata koji ukazuju na odsustvo sposobnosti blokiranja FcR Fab fragmenata IgG iz antiseruma protiv imunološkog precipitata, ukazuju na mogućnost korištenja monovalentnih Fab fragmenata anti-FcR antitijela za proučavanje funkcije FcR makrofaga u implementacija djelovanja opsonina. Treba naglasiti da je upotreba monovalentnih fragmenata anti-FcR antitijela od fundamentalne važnosti za proučavanje funkcionalne uloge FcR, budući da, za razliku od necijepljenih antitijela ili bivalentnih Fa fragmenata, monovalentni Fab fragmenti nisu u stanju da se vežu za FcR i uzrokuju njihov lateralni kretanje na 37 °C duž citoplazmatske membrane i naknadno zatvaranje.
Dobijeni podaci ukazuju da preinkubacija makrofaga sa Fab fragmentima anti-FcR antitela u potpunosti poništava efekat pojačavanja fagocitoze S. typhimurium (uzete kao predmet ispitivanja efikasnosti fagocitoze), izazvane zečjim IgG antitelima protiv ovog mikroorganizma. Zapravo, Fab fragmenti anti-FcR antitijela nemaju nikakav učinak na fagocitozu bakterija koje nisu senzibilizirane antitijelima. Ako su Fab fragmenti zečjih antitijela protiv imunološkog precipitata formiranog od albumina jajeta i zečjih IgG antitijela protiv ovog antigena prethodno dodani makrofagima, to nije imalo nikakvog utjecaja na proces fagocitoze bakterijskih stanica koje su senzibilizirane antitijelima.
Dakle, Fab fragmenti anti-FcR antitijela selektivno potiskuju fagocitozu samo bakterija koje su senzibilizirane antitijelima. Uzimajući u obzir rezultate kontrolnih eksperimenata, ovo služi kao nesumnjiv dokaz u prilog činjenici da je povećano uzimanje korpuskularnog antigena nakon njegove opsonizacije IgG antitijelima posljedica interakcije Fc regije opsonizirajućih antitijela sa FcR makrofaga.
Zanimljiva je činjenica da su makrofagi prethodno tretirani Fab fragmentima anti-FcR antitijela manje efikasni u apsorpciji bakterijskih ćelija koje su senzibilizirane antitijelima od onih koje nisu senzibilizirane. Ovaj rezultat se može objasniti na osnovu ideje da nakon senzibilizacije bakterija, neke od njih doživljavaju sterično izolaciju površine ćelije, preko koje se mikroorganizmi vezuju za makrofage. Fagocitoza takvih bakterijskih ćelija se očito javlja nakon interakcije dva ili više molekula antitijela preko njihovih Fc mjesta sa nekoliko FcR na citoplazmatskoj membrani makrofaga. Ako je ova pretpostavka tačna, hvatanje ovog dijela senzibiliziranih bakterijskih stanica će biti nemoguće nakon blokiranja FcR korištenjem Fab fragmenata anti-FcR antitijela.
Podaci dobijeni u ovom radu otvaraju nove pristupe regulaciji procesa imunološke fagocitoze, što može biti značajno za detaljnu analizu uloge ovog procesa u različitim patološkim stanjima.
JAČANJE REAKCIJE KONTAKTNE INTERAKCIJE MAKROFAGA SA TIMOCITIMA IN VITRO UZ POMOĆ HITOSANA
Stari i višestruki problem imunostimulacije dobio je novi izraz u vezi s traženjem načina za stvaranje umjetnih vakcina. Glavni napori u ovom pravcu odnose se na proizvodnju konjugata antigenskih determinanti vakcine sa prirodnim ili veštački sintetizovanim polimernim nosačima. Uloga nosača u takvom molekularnom kompleksu bi trebala biti da pojača specifičan odgovor na odabranu antigensku determinantu.
Prilikom traženja efikasnog nosača koji bi se mogao koristiti za konjugaciju sa antigenom, potrebno je imati informacije o njegovom adjuvansnom dejstvu i odsustvu sporednih patogenetskih svojstava. S tim u vezi, pažnja je posvećena hitozanu, homopolisaharidu izolovanom iz hitina egzoskeleta beskičmenjaka. Molekularna masa ispitivane supstance je ~ 120.000 daltona.
Svrha rada je utvrditi učinak hitozana na proces kontaktne interakcije između makrofaga i timocita u in vitro eksperimentima. Privlačnost ovim tipovima ćelija nije slučajna. Poznato je da je interakcija makrofaga sa timocitima dodatni faktor u transformaciji nediferenciranih ćelija zavisnih od timusa u zrele T limfocite. S tim u vezi, zanimljivo je utvrditi da li odabrani homopolimer ima ikakvog uticaja na jednu od najranijih faza razvoja imunog sistema – formiranje funkcionalno aktivne populacije zrelih T ćelija.
Izvedene su tri serije eksperimenata. U 1. seriji proučavali smo prirodu interakcije singenih timocita sa adherentnim stanicama peritonealnog eksudata, koje su inkubirane neposredno prije reakcije s jednom od odabranih doza hitozana različito vrijeme. Utvrđeno je da se reakcija formiranja klastera najefikasnije odvija uz 30-minutnu inkubaciju makrofaga s hitozanom. Broj timocita grupisanih oko makrofaga je 2,5 puta veći nego u kontroli. U istoj seriji eksperimenata riješeno je pitanje intenziteta interakcije analiziranih tipova stanica u zavisnosti od doze korištene za inkubaciju hitozana, uz optimalno vrijeme inkubacije od 30 minuta. Utvrđeno je da se najveći porast reakcije formiranja klastera uočava kada se kulturi doda 50 μg polisaharida.
U 2. seriji eksperimenata, analiza reakcije formiranja klastera provedena je u uvjetima preliminarne 30- i 60-minutne inkubacije timocita s različitim dozama hitozana. Inkubacija u trajanju od 30 i 60 minuta dovela je do povećane kontaktne interakcije između timocita i makrofaga. Kao iu prethodnoj seriji eksperimenata, optimalna doza koja je pojačala učinak formiranja klastera bila je 50 mcg.
U završnoj 3. seriji eksperimenata proučavan je intenzitet formiranja klastera kada je hitozan uveden direktno u reagujući sistem makrofaga-limfocita. Kao iu prethodne 2 serije eksperimenata, uočeno je povećanje kontaktne interakcije između timocita i makrofaga.
Da bismo objasnili otkrivene činjenice, potrebno je imati na umu da je hitozan polikacija. Istovremeno, integralni naboj i timocita i makrofaga je negativan. Možda je učinak pojačavanja kontaktne interakcije povezan s elektrostatičkim međućelijskim privlačenjima pod utjecajem hitozana, uključujući 2 stupnja: 1. faza - adhezija pozitivno nabijenog hitozana na makrofag ili timocit, 2. - direktna interakcija negativno nabijene ćelije sa inkubiranim partnerom ćelija sa polikationom i nosačem što rezultira većim pozitivnim nabojem. Ovu ideju podržava činjenica da efekat pojačavanja reakcije formiranja klastera nije povezan sa shemom inkubacije i da će biti isti bez obzira na to koja vrsta ćelija je inkubirana sa hitozanom.
Druga točka koja zahtijeva objašnjenje je kratko vrijeme inkubacije ćelija s hitozanom, pri čemu se otkriva efekat pojačavanja kontaktne interakcije. Moguće je da je nedostatak efekta kod duže inkubacije posljedica fagocitoze polisaharida visoke molekularne težine, uslijed čega se obnavlja izvorni naboj stanica koje djeluju. Međutim, prikazano objašnjenje mora biti potvrđeno dodatnim eksperimentalnim činjenicama.
AKTIVACIJA FAGOCITNIH ĆELIJA I STANIČNOG IMUNITETA SINTETIČKIM POLIELEKTROLITIMA
Brojni obećavajući ne-prirodni polielektroliti koji se koriste za stvaranje sintetičkih vakcina imaju mnoge imunomodelirajuće potencijale: pospješuju migraciju matičnih stanica, T- i B-limfocita, stimulatori su T- i B-ćelija i zamjenjuju pomoćnu funkciju T-a. -limfociti i makrofagi. Ova svojstva pružaju snažan stimulativni učinak na humoralne i ćelijske imune odgovore.
U isto vrijeme, ostaje nejasno pitanje njihovog djelovanja na sistem fagocitnih stanica i formiranje ćelijskog, posebno transplantacijskog imuniteta. Svrha ovog rada bila je proučavanje ovih problema.
Metodologija istraživanja bila je sljedeća: hibridnim miševima (CBAXC57BL/6) su jednom intraperitonealno ubrizgane različite doze polielektrolita, MF je izoliran nakon 48 sati i analiziran.
Primjena polianiona NA-5 uzrokuje aktivaciju glikolize u makrofagima miša. Na primjer, u 3 eksperimenta, povećanje glikolize u odnosu na kontrolne ćelije bilo je 1,45, 2,35, 4,3 puta. Ovo je vrlo snažna aktivacija glikolize u stanicama, što ukazuje na njihov prijelaz na viši fiziološki nivo metabolizma. Intenzitet heksoza monofosfatnog šanta u ćelijama je takođe značajno povećan: u 2 od 3 eksperimenta, uvođenje polianiona je praćeno pojavom makrofaga sa prosečnom aktivnošću oksidacije glukoze koja odgovara 8,67 + 1,47 i 7,24 + 1,9106 MFU ćelije (u kontroli 5.17 + 0.95 i 4.1 + 1.29 MFU na 106 ćelija). Pokazalo se da je pojačanje ciklusa uree još jače, a razlike u kojima su u odnosu na kontrolne ćelije bile već uobičajene. Na primjer, u eksperimentima 1-3 bili su 8,43, 11,54 i 2,06 puta, respektivno.
Značajno povećanje glikolize uzrokovano je i davanjem karbolančanog poliamina H-3 životinjama: u 2 od 3 eksperimenta aktivacija je bila značajna; za LDH je bila 89,27 + 7,41 i 39,54 ± 4,56 MFU na 106 ćelija u eksperimentalnim makrofaga, u kontrolama - 26,36 + 8,36 i 20,59 + 3,86 MFU na 106 ćelija. Jednako je izraženo povećanje aktivnosti oksidacije glukoze, koje ga je premašilo kod eksperimentalnih makrofaga u odnosu na kontrolne u 3 eksperimenta za 2,11, 1,28 i 1,41 puta.
Intenziviranje ciklusa uree bilo je izuzetno značajno, budući da je aktivacija ključnog enzima ARG porasla u različitim eksperimentima za 3,65-54,6 puta.
Istovremeno, aktivnost polikacije D11-100e bila je znatno manje izražena, nije značajno utjecala na stanje glikolize i heksoza monofosfatnog šanta makrofaga. Međutim, aktivnost ciklusa uree u ćelijama je značajno povećana, mada manje značajno nego pod uticajem H-3 i NA-5.
U mišjim makrofagima stimuliranim polianionom NA-5, aktivnost lizosomalnih hidrolaza porasla je skoro dva puta, i iznosila je 27,42+4,09 nM R/h na 106 ćelija u eksperimentu i 15,04+3,66 nM R/h na 106 ćelija u kontrolnim ćelijama. . CP aktivnost nakon davanja N-3 miševima bila je još veća - 35,51 + 4,82 nM P/h na 106 ćelija. Takav porast ukazuje na značajno povećanje probavnog kapaciteta makrofaga.
U makrofagima miša, NA-5 polianion je izazvao ne samo intenziviranje nekih metaboličkih puteva, već i povećanje ekspresije receptora za IgG, što je bilo blago, ali statistički značajno.
Reakcija ćelija, otkrivena stvaranjem radikala kiseonika kod miševa kojima su ubrizgane različite doze poliamina H-3, pokazalo se da zavisi od doze. Dakle, ako je doza od 0,5 mg/mišu potisnula hemiluminiscenciju makrofaga tokom fagocitoze, a da je nije promijenila tokom stanične adhezije na staklo, tada su doze od 1, 5 i 10 mg/mišu već izazvale značajno povećanje hemiluminiscencije tokom fagocitoze čestica. Za adheziju su se i ove doze pokazale kao aktivirajuće, s izuzetkom doze od 5 mg/mišu. Optimalno povećanje u stvaranju reaktivnih radikala kisika uzrokovano je primjenom 1 mg/mišu lijeka H-3 životinjama - u ovom slučaju hemiluminiscencija se maksimalno povećala i za vrijeme fagocitoze i za vrijeme adhezije. Daljnje povećanje doze nije bilo praćeno povećanjem učinka na ćelije. Ovo zapažanje u potpunosti potvrđuju literaturni podaci o djelovanju ovog lijeka na različite imunološke parametre.
Dakle, sintetički polielektroliti - polianion NA-5 i karbolanac poliamin H-3 izazivaju aktivaciju makrofaga, pojačavajući glikolizu, heksoza monofosfatni šant, ciklus uree i aktivnost lizozomalnih hidrolaza. Lijekovi također povećavaju ekspresiju Fcv receptora na plazma membrani makrofaga. Postoje, međutim, posebnosti da ako H-3 uzrokuje povećanje stvaranja aktivnih radikala kisika od strane makrofaga, polianion NA-5 ispada neaktivan u tom pogledu. Polikation D11-100e ima manje izražen učinak na makrofage, ali značajno povećava ekspresiju Pc7 receptora na njima i intenzivira ciklus uree.
Formiranje transplantacijskog imuniteta proučavano je kod životinja koje su primile jednu dozu od 1 mg/mišu intraperitonealno na dan transplantacije kože.
Rezultati su pokazali da su sva 3 lijeka izazvala povećanje transplantacijskog imuniteta, izraženo u značajnom ubrzanju odbacivanja transplantata kod miševa kojima su davani. Štoviše, kao iu drugim modelima, posebno pri analizi stanja makrofaga pod utjecajem lijekova, aktivnost polijona D11-100e bila je inferiorna u odnosu na aktivnost NA-5 i H-3. Može se zaključiti da poliion NA-5 i karbolanac poliamin H3 imaju sposobnost da pojačaju ćelijski T-posredovani imunitet; D11-100e je bio manje aktivan.
AKTIVACIJA MAKROFAGA POD UTJECEM SINTETIČKOG ANTIOKSIDANTA
Sada je općenito prihvaćen sljedeći obrazac: aktivacija makrofaga (MP) povezana je s metaboličkom (oksidativnom) eksplozijom, s aktivacijom glukozno-monofosfatnog šanta (GMPS), s proizvodnjom i izlučivanjem visoko aktivnih nestabilnih produkata redukcije kisika - superoksida. anjoni O2~, vodikov peroksid (H2O2), OH~ radikali i singletni kiseonik (O2).
Nastali višak toksičnih superoksidnih radikala, kao i lipidnih peroksida koji se akumuliraju u fagosomima MF tokom fagocitoze, mogu uzrokovati oksidativno oštećenje ćelijskih membrana i povezano supresiju MF funkcija. MF ima vlastiti antioksidativni odbrambeni sistem, uključujući superoksid dismutazu, koja uklanja višak superoksidnih radikala, kao i glutation peroksidazu i NADP zavisnu glutation reduktazu, koje neutraliziraju lipoperokside.
Međutim, s nedostatkom endogenih antioksidansa može doći do različitih disfunkcija MF. Pokazalo se da su alkil-supstituirani derivati 3-hidroksipiridina (8 OP), koji imaju umjereno antioksidativno djelovanje, efikasni inhibitori reakcija slobodnih radikala i mogu se koristiti za zaštitu od destruktivnog djelovanja slobodnih radikala.
Svrha rada bila je proučavanje djelovanja sintetičkih antioksidanata na funkcije MF. Od brojnih sintetičkih derivata OP odabran je 2-tert-butil-3-hidroksipiridin (TBOP) za koji je opisano da može stabilizirati membrane eritrocita. Istraživanje je provedeno u poređenju sa standardnim MF aktivatorom - bakterijskim lipopolisaharidom (LPS iz E. coli O55).
Podaci dobijeni proučavanjem direktnog efekta TBOP u poređenju sa LPS na peritonealne MF su sledeći: pola sata inkubacije ćelija sa TBOP je dovoljno da se aktivira GPDH. Sudeći po povećanju aktivnosti enzima, učinak TBOP je sličan dejstvu standardnog aktivatora - bakterijskog LPS-a. Udio raširenih MF-a se povećava u odnosu na kontrolu nakon 2 sata inkubacije sa test preparatima. U ranim fazama (2 sata) efekat TBOP je izraženiji u odnosu na efekat standardnog aktivatora - LPS. U kasnijim fazama uzgoja (24 sata), aktivirajući učinak LPS-a nastavlja da raste, au isto vrijeme udio rasprostranjenih MF-a pod utjecajem TBOP-a ima tendenciju smanjenja u odnosu na rane faze, ali ostaje značajno povećan u odnosu na uz postepeno povećanje nivoa kontrole.
Nakon intraperitonealne primjene TBOP, u roku od 1 sata uzrokuje jasno povećanje broja ćelija u trbušnoj šupljini zbog MF-a sa pretežnom akumulacijom velikih MF-a, a ovaj efekat je sličan učinku LPS-a.
MF ekstrahovani iz trbušne šupljine miševa 1 sat nakon intraperitonealne primjene TBOP-a karakterizirano je povećanim širenjem u odnosu na MF kontrolnih životinja. Fagocitna aktivnost ovih istih MF je povećana, sudeći po intenzitetu njihovog hvatanja ćelija Candida albicans. U ovim eksperimentalnim uslovima, TBOP, u poređenju sa standardnim aktivatorom - bakterijskim LPS, u većoj meri aktivira širenje, a u manjoj meri povećava fagocitnu aktivnost. U kasnijim periodima nakon primjene ispitivanog lijeka (1,5-24 sata), nije uočeno dalje povećanje broja MF u trbušnoj šupljini i njihove funkcionalne aktivnosti. Nasuprot tome, nakon primjene LPS-a, broj MF u trbušnoj šupljini i njihova funkcionalna aktivnost dostigli su maksimalan nivo tek nakon 24 sata.
U vezi sa utvrđenim vremenskim razlikama u stimulativnim efektima pri proučavanju uticaja lijekova na intenzitet čišćenja trbušne šupljine miševa od unesene bakterije S. typhimurium (čišćenje), LPS je primijenjen 24 sata, a TBOP - 1 sat prije infekcije. . Za procjenu klirensa izračunali smo prosječne razlike u logaritmima koncentracija bakterija 1 sat nakon infekcije kod miševa kontrolne i eksperimentalne grupe. Značajno zaostajanje u intenzitetu klirensa nađeno je kod miševa koji su primili 1 ml podloge sa tioglikolatom 4 dana prije infekcije u odnosu na kontrolu.
Slika pokazuje da ni TBOP ni standardni MF aktivator bakterijski LPS ne utiču na intenzitet čišćenja trbušne šupljine od unesenih bakterija. Međutim, u pozadini defekta u baktericidnoj aktivnosti MF izazvanog preliminarnim uvođenjem medijuma s tioglikolatom, oba lijeka su podjednako značajno povećala inicijalno smanjeni intenzitet čišćenja trbušne šupljine miševa. Pod uticajem TBOP-a, kao i pod uticajem bakterijskog LPS-a, uočena je normalizacija nivoa čišćenja trbušne duplje, odnosno korekcija eksperimentalno simuliranog defekta u baktericidnoj aktivnosti MP.
Stoga je otkriveno da je proučavani sintetički antioksidans TBOP u stanju da aktivira mišje peritonealne MF nakon direktnog izlaganja in vitro. Nakon intraperitonealne primjene istog lijeka, uočeno je povećanje broja MF u trbušnoj šupljini i njihova funkcionalna aktivnost. Kod miševa s prethodno induciranim defektom u abdominalnoj funkciji klirensa, lijek je pomogao vraćanju normalnog nivoa antibakterijske zaštite. U svim ispitivanim testovima aktivacijskog djelovanja na MF, sintetički antioksidans nije bio inferioran standardnom MF aktivatoru - bakterijskom LPS. Kada je TBOP davan miševima, uočene su ranije manifestacije aktivacije MF u poređenju sa efektima LPS.
FAGOCITNA AKTIVNOST MAKROFAGA PERITONEALNOG EKSUDATA MIŠEVA POD UTJECEM LIJEKOVA PLATINE
Makrofagi su sposobni da izazovu lizu različitih tipova tumorskih ćelija bez oštećenja normalnih ćelija iste histogeneze. Normalni „nepojačani“, neaktivirani makrofagi stupaju u interakciju sa tumorskim ćelijama u fazi njihovog nastanka i tokom početne faze njihovog razvoja. Citostatske supstance koje se koriste u hemoterapiji neoplazmi utiču na imuni sistem makroorganizma, posebno utičući na sistem mononuklearnih ćelija. Detaljno je proučavan uticaj različitih klasa citostatika na funkcionisanje imunog sistema makrofaga. Međutim, u dostupnoj literaturi nema podataka o prirodi efekta nove klase antitumorskih jedinjenja, jedinjenja za koordinaciju platine, na makrofage. Provedeno je istraživanje kako bi se utvrdio učinak lijekova platine na fagocitnu aktivnost makrofaga u peritonealnom eksudatu. Korišteni lijekovi bili su oksoplatin (cisdihIV proizveden od Lachema) i cikloplatam (amineciklopeptilamin-5-malatoplatina (II) domaće proizvodnje).
U toku istraživanja ustanovljeno je da dodavanje preparata platine direktno u epruvete za brojanje prilikom snimanja hemiluminiscencije u in vitro eksperimentima izaziva blagi porast oslobađanja hidroksilnog radikala (OH~), superoksidnog anjona (O2-), singletnog kiseonika ( "02"), vodikov peroksid (H202), što nam indirektno omogućava da in vitro sudimo o stimulaciji fagocitne aktivnosti peritonealnih makrofaga lijekovima platine. Tako je kod cikloplatama uočeno maksimalno povećanje formiranja aktivnih metabolita kisika kod doza jednaka 0,5 MTD (LD = 23 mg/kg), a indeks hemiluminiscencije 3,2 u odnosu na 2,28 u kontroli, dok je dodatak oksoplatina u dozi jednakoj 1/4 MTD na suspenziju peritonealnih makrofaga uzrokovao je povećanje indeksa hemiluminiscencije sa 1,69 u kontrolnim uzorcima na 2,62 u eksperimentu.
Dvosmisleni i prilično kontradiktorni rezultati dobijeni su u daljnjim studijama o efektu oksoplatina i cikloplatama na fagocitnu funkciju peritonealnih makrofaga in vivo (kada su lijekovi davani intraperitonealno miševima). Primjena oksoplatina i cikloplatama neimunim miševima izazvala je supresiju fagocitoze (1. dana nakon primjene cikloplatama u svim dozama, 1. i 2. dana nakon primjene oksoplatina u svim dozama, sa stimulativnim djelovanjem ustanovljenim narednih dana za oba lijeka).
Međutim, primjena oksoplatina i cikloplatama u istim dozama u slično vrijeme zajedno s antigenom stimulacijom imala je suprotan učinak. Prvog dana nakon primjene oba lijeka izazvala su dozno-zavisno povećanje indeksa hemiluminiscencije za 2 ili više reda veličine (indeks hemiluminiscencije Ichl za oksoplatinu u dozi od 1,0 MTD bio je 106,9, za cikloplatam u dozi od 1,0 MTD - 407,0, zatim kao u kontroli - 1,3-2,5). U danima nakon primjene lijekova imunim miševima, stimulativni učinak na fagocitnu aktivnost peritonealnih makrofaga bio je jasno vidljiv za sve doze, ali je bio manje izražen.
Pretpostavlja se da se prilikom objašnjavanja ovog fenomena ne može zanemariti činjenica heterogenosti peritonealnih makrofaga i neizbježne reakcije na intraperitonealnu primjenu aloantigena, izražene u preraspodjeli subpopulacija peritonealnih makrofaga u korist tzv. za razliku od rezidentnih. Moguće je da se pojave nezreli rezidentni makrofagi, koji se također karakteriziraju većom aktivnošću peroksidaze.
Međutim, moguće je da je takvom reakcijom zabilježena činjenica hvatanja i apsorpcije čestica od strane peritonealnih makrofaga, koji mogu biti (i očito jesu) ne samo granule zimozana, već i heterologni eritrociti ovaca. U prilog tome govore i podaci rada Kh. M. Isina u laboratoriji I. Ya. Uchitel, da se prvog dana nakon imunizacije javlja maksimalno hvatanje, apsorpcija i uništavanje heterolognih eritrocita od strane makrofaga, nakon čega slijedi (do 48. sata) stabilizacija procesa. Stoga se zaključuje da se 1. dan primjene ne može smatrati temeljnim u potvrđivanju stimulativnog djelovanja oksoplatina i cikloplatama na fagocitnu aktivnost peritonealnih makrofaga, dok su rezultati narednih dana pouzdana potvrda ovog fenomena.
PROUČAVANJE FAGOCITSKE AKTIVNOSTI PERITONEALNIH MAKROFAGA U ODNOSU NA YERSINIA PESTIS SA DEFEKTNIM I KOMPLETNIM FRA GENIMA
Poznato je da je mogućnost razvoja infekcije kugom u velikoj mjeri određena ishodom interakcije ćelija patogena Y. pestis sa fagocitima, što zavisi od stepena baktericidne aktivnosti makrofaga (MP) i prisustva antifagocitnih faktora u mikrobima. . Antifagocitne supstance Y. pestis uključuju toplotno induciran kapsularni antigen „frakcija I“, antigene virulencije V, W, I, itd. Moguće je da postoje neidentifikovane komponente sa istom funkcijom. Djelovanje frakcije I povezano je sa inhibicijom baktericidne aktivnosti MF-a, negira se njeno učešće u procesu hvatanja bakterija MF-om. Specifična imunizacija životinja dovodi do promjene MF, što ubrzava apsorpciju virulentnih i vakcinalnih sojeva Y. pestis i njihovu kasniju lizu. Poslednjih godina ustanovljeno je da su determinante frakcije I i VW antigena lokalizovane na plazmidima, koji najverovatnije nose druge genetske informacije, koje još nisu identifikovane, ali su moguće povezane sa antifagocitnom aktivnošću Y. pestis. Podaci dostupni u literaturi o fagocitozi kod kuge dobijeni su u eksperimentima u kojima nije utvrđeno da li je poremećaj sinteze ispitivanih antigena povezan s defektom pojedinih specifičnih gena ili gubitkom cijelog odgovarajućeg plazmida. Posljednji događaj može istovremeno uzrokovati defekte u drugim, još neistraženim antigenima. Ovo još uvijek zahtijeva pojašnjenje.
Svrha rada je da se utvrdi doprinos frakcije I procesu interakcije patogena kuge sa MF indukovanim imuniziranim i intaktnim eksperimentalnim životinjama.
U eksperimentima je korišten prirodni virulentni soj Y. pestis 4 (Fra+) i izogeni soj 4 (Fra-), kod kojih je sinteza frakcije I „isključena“ umetanjem Tn10 elementa u odgovarajući plazmid gen. Testirana su tri klona svakog soja. Prije eksperimenta, bakterije su uzgajane 48 sati na 28 i 37 °C na LB agaru (Difco), pH 7,2. Fagocitoza je proučavana in vitro u kulturi induciranih peritonealnih MF zamoraca i bijelih miševa, intaktnih i imuniziranih supkutano jednom dozom od 106 mikrobnih stanica (MC) vakcinom protiv kuge. U eksperimentima sa fagocitima, opterećenje je bilo 50 mikrobnih ćelija (mc) po MF. Uzorci su inkubirani na 37 °C 6 sati.Intenzitet fagocitoze je procijenjen pomoću indeksa aktivnosti fagocita (PA) i indeksa završetka fagocitoze (PFI).
Sve proučavane bakterije uzgajane na 28°C (kulture od 28°C), kada je sinteza frakcije I na vrlo niskom nivou, apsorbovane su podjednako, bez obzira na sposobnost njihovih fra gena da normalno funkcionišu i da li su testirani MF izolovani. od imuniziranih ili netaknutih životinja. U eksperimentima s bakterijama uzgojenim na 37 °C (kulture od 37 °C), efikasnost hvatanja (AF) u svim uzorcima bila je značajno niža nego na 28 °C. Pošto je uočeno smanjenje kod sojeva sposobnih i nesposobnih za proizvodnju frakcije I, iznesena je pretpostavka da u kulturi 37° dolazi do indukcije sinteze ili ispoljavanja funkcija ne frakcije I, već nekih dodatnih komponenti bakterijskog ćelijskog zida koje ometaju uspostavljanje kontakta između bakterije i MF. Potreban je dalji rad na identifikaciji ovih komponenti.
MF od intaktnih bijelih miševa je podjednako uhvatio Fra+- i Fra- bakterije, dok je MF imuniziranih miševa apsorbirao Fra+-bakterije nešto aktivnije. Zamorci MF, bez obzira da li su dobiveni od intaktnih ili imuniziranih životinja, aktivnije su hvatali Fra+ bakterije. Čini se da se u organizmu zamoraca, u odnosu na ispitivani MF, frakcija I manifestira kao nespecifični stimulator fagocitoze, dok u MF bijelih miševa mora nastupiti specifično restrukturiranje koje prati imunizaciju prije nego što frakcija I bude u stanju da slabo stimuliraju hvatanje patogenih bakterija. Više AF vrijednosti kod cijepljenih zamoraca protiv Fra+- i Fra-kultura patogena kuge uzgojenih na 37 °C također sugeriraju pojavu dodatnih faktora u bakterijama na ovoj temperaturi koji imaju selektivnu aktivnost specifično protiv MF zamorca. Još izraženiji stimulativni učinak ovih dodatnih faktora manifestira se kada MF imuniziranih zamoraca dođe u kontakt sa 37° kulturama koje sadrže frakciju I, što također ukazuje na specifičan element djelovanja ovog antigena, usmjeren na pojačavanje hvatanja bakterija. ovim fagocitima.
Drugim riječima, eksperimentalni podaci pokazuju da, pored frakcije I, patogen kuge uzgojen na 37 °C sadrži komponente koje smanjuju fagocitnu aktivnost MF intaktnih i imuniziranih životinja, te komponente koje specifično potiču hvatanje bakterija od strane MF-a. zamorci. Djelovanje potonjeg djelomično ili potpuno u prisustvu frakcije I neutrališe dejstvo neidentifikovanih negativnih faktora. Frakcija I potiče hvatanje bakterija kuge MF i značajnija je za zamorce.
Općenito, iz ovog eksperimenta se mogu izvući sljedeći zaključci: 1. Imunizacija zamoraca vakcinom protiv kuge inducira restrukturiranje frakcije I u makrofagima, uzrokujući povećano uzimanje i probavu Fra+-Y. pestis uzgajan na 37 °C. To se ne dešava kod bijelih miševa.
2. Y. pestis defekt u fra genima i odsustvo frakcije I uzrokuju izraženije smanjenje efikasnosti hvatanja bakterija uzgojenih na 37 °C od strane makrofaga pliskavice.
nok, ali ne i bijeli miševi i veći stepen probave makrofaga zamoraca u svim eksperimentalnim uvjetima, a makrofaga bijelih miševa - samo u odnosu na 37° kulture.
3. U hvatanju i završetku fagocitoze, uloga frakcije je značajnija kod makrofaga zamorca.
UTICAJ MODIFIKATORA BIOLOŠKOG ODGOVORA PRIRODNOG POREKLA NA FUNKCIONALNU AKTIVNOST MAKROFAGA (ONKOLOŠKI ASPEKT)
Unatoč značajnom napretku u kemoterapiji za neke vrste malignih neoplazmi, rezultati primjene antitumorskih kemoterapijskih lijekova na najčešćim mjestima raka ostaju nezadovoljavajući. Sve je jasnije da je jedna od glavnih prepreka uspješnoj kemoterapiji malignih tumora heterogenost populacije neoplastičnih stanica, koja se posebno izražava u prisutnosti klonova stanica otpornih na kemoterapeutske agense. Štaviše, takva rezistencija se može odnositi na čitave klase lijekova, što može ograničiti efikasnost kompleksne polikemoterapije. Situaciju dodatno komplikuje genetska nestabilnost tumorskih ćelija, koje su, uz visok nivo spontanih mutacija, izuzetno lako izložene mutagenom dejstvu hemoterapijskih lekova i njihovih metaboličkih produkata. Ovo značajno povećava heterogenost populacije tumora, promovira stvaranje još većeg broja klonova otpornih na kemoterapiju i povećava njihovu sposobnost da metastaziraju i relapsiraju tokom tekuće kemoterapije.
U konačnici, čak i vrlo radikalno (99,5%) smanjenje tumorske mase tokom kemoterapije gotovo neizbježno dovodi do nastavka procesa zbog rezistentnih klonova koji su prethodili ili su nastali tokom kemoterapije. Štaviše, takvi klonovi su u poodmakloj fazi tumorske progresije i stoga su maligniji.
U ovim uslovima, čini se sasvim logičnim tražiti načine da se eliminišu tumorske ćelije sa takozvanom rezistencijom na više lekova koristeći druge mehanizme, posebno litički potencijal imunokompetentnih ćelija. Makrofagi su od posebnog interesa u ovom pogledu. Za razliku od drugih tipova imunocita, njihova aktivnost je manje potisnuta tokom intenzivne citoreduktivne terapije, sposobni su za efikasne antitumorske reakcije u omjeru efektor/cilj koji se približava 1:1 i, infiltrirajući tumorsku stromu, imaju dovoljno mogućnosti da stupe u kontakt sa tumorskom ćelijom. Pokazana je mogućnost aktivacije citolitičkog djelovanja makrofaga uz pomoć različitih modifikatora biološkog odgovora (BRM) nakon izlaganja antitumorskim kemoterapijskim lijekovima, dok se aktivnost ostalih efektorskih sistema može značajno suzbiti. Stoga se trenutno aktivno razvijaju metode adjuvantne imunoterapije s uključivanjem aktivatora makrofaga. U ovom slučaju, preliminarna procjena učinka potonjeg provodi se in vitro i uglavnom se temelji na sposobnosti induciranja citolitičke i citostatičke aktivnosti. Održavanjem ove sposobnosti tokom upotrebe kemoterapijskih antitumorskih lijekova, procjenjuje se i „kompatibilnost“ MBO-a sa njima. Međutim, indukcija citotoksičnosti samo je jedna strana aktivacije makrofaga; pod utjecajem MBO dolazi do drugih značajnih promjena u funkcionalnoj aktivnosti ovih stanica, a posebno se pojačava proizvodnja i izlučivanje niza faktora rasta. Koristeći ovaj pristup, proučavan je učinak BCG-a i ciklofosfamida na peritonealne makrofage miša. Ovi lijekovi su odabrani kao model lijekova zbog njihove dovoljno proučavanja kao induktora antitumorske aktivnosti makrofaga in vitro i in vivo, kao i njihove prilično široke primjene u kliničkoj praksi.
Poznato je da citotoksična aktivnost makrofaga in vitro dostiže svoj maksimum nakon 48-72 sata kultivacije, a zatim brzo opada. Procijenjena je aktivnost stimulacije rasta rezidentnih i BCG-aktiviranih makrofaga tokom in vitro kultivacije.
Utvrđeno je da se sposobnost podržavanja rasta tumorskih ćelija progresivno smanjuje kod rezidentnih makrofaga i povećava kod onih koji su aktivirani BCG-om. Ako je u prva 3 dana povećanje broja ćelija na makrofagima aktiviranim BCG značajno manji nego na rezidentnim (što se može objasniti citotoksičnom aktivnošću), onda se opaža suprotna situacija.
Dakle, ako je BCG-indukovana aktivacija antitumorske aktivnosti makrofaga prolazna, tada je aktivacija proizvodnje faktora rasta stabilnija tokom vremena. Osim toga, ispitivanjem citotoksične i stimulativne aktivnosti makrofaga izolovanih iz peritonealne šupljine miševa u različito vrijeme nakon primjene BCG-a, otkriveno je da je citotoksična aktivnost (citolitička i citostatička) maksimalna 10. dana. 15. i 20. dana javlja se samo citolitička aktivnost, a citostatička aktivnost nestaje. Aktivnost stimulacije rasta je maksimalna 15. i 20. dana. Posljedično, in vitro aktivacija makrofaga BCG-om dovodi do prolazne ekspresije antitumorske aktivnosti i dugotrajne trajne aktivnosti stimulacije rasta.
Uzimajući u obzir ove podatke, postaje jasna priroda interakcije između BCG-aktiviranih makrofaga i tumorskih ćelija tokom dugotrajne ko-kultivacije in vitro: u prvim danima, zbog citotoksičnosti, broj živih ćelija je značajno smanjen, na istovremeno citostatski faktori inhibiraju njihovu proliferaciju, ali tada, zbog otpuštenih faktora rasta, intenzitet proliferacije preživjelih tumorskih stanica značajno premašuje intenzitet rezidentnih makrofaga, zbog čega njihov ukupan broj dostiže pa čak i premašuje početni nivo.
U nekim slučajevima, kada se uzgajaju male doze tumorskih ćelija - do 10 po jažici (tj. u omjeru efektor/cilj od 5000:1) - citotoksična aktivnost može biti dovoljna da eliminira cjelokupnu populaciju tumora, međutim, u slučajevima kada frakcija rasta prelazi određeni prag citotoksične aktivnosti, uočava se intenzivan rast preostalih tumorskih ćelija. Upravo to objašnjava nedostatak pouzdanosti rezultata uzgoja malih doza ćelija, jer su odstupanja od prosječne vrijednosti bila veća po amplitudi.
Dakle, sposobnost BCG-aktiviranih makrofaga da kontrolišu rast tumorskih ćelija in vitro je ograničena i manifestuje se samo u omjerima efektor/cilj, koji su veoma daleko od onoga što je stvarno moguće in vivo - 500:1 - 5000:1. Istovremeno, antitumorska aktivnost je prolazna, dok je tumor-stimulirajuća aktivnost duža i stabilnija. Stoga je učinjen pokušaj da se pojača antitumorska aktivnost BCG-aktiviranih makrofaga izlaganjem ciklofosfamidu. Prema literaturi, ovaj antitumorski lijek je u potpunosti „kompatibilan“ sa BCG agensom (tj. stimulira citotoksičnost izazvanu BCG-om) i stoga može biti komponenta kombinovane hemoimunoterapije zasnovane na upotrebi BCG-a.
Ciklofosfamid je davan intraperitonealno miševima u dozi od 200 mg/kg, koji su 9 dana prije primili i 1 mg BCG intraperitonealno. Sljedećeg dana, peritonealne stanice su izolirane i procijenjene na njihovu citotoksičnu aktivnost, sposobnost da podrže rast tumorskih ćelija u suboptimalnim koncentracijama i utiču na rast autonomno rastuće tumorske populacije u uslovima kokulture. Pokazalo se da ciklofosfamid nezavisno indukuje značajne citolitičke i citostatičke aktivnosti, osim toga značajno povećava citotoksičnost izazvanu BCG-om.Štaviše, u prisustvu makrofaga aktiviranih kombinacijom BCG-a sa ciklofosfamidom, nivo proliferacije tumorskih ćelija u zavisnosti od koncentracije faktora rasta (102 ćelije po jažici) iznosio je 2,9"104±3,25-103 i značajno je premašio onaj kod kultivacije tumorskih ćelija na makrofagima aktiviranim BCG - 3,7-103±1,4-102, praktično se ne razlikuje od njihovog rasta u prisustvu nestimulisanih makrofagi - 3,2-104±4,82-103.
Dakle, uprkos vrlo visokom nivou citotoksičnosti makrofaga izazvanog njihovim tretmanom ciklofosfamidom nakon BCG-a, takvi makrofagi su izgubili sposobnost čak i da imaju ograničenu kontrolu nad populacijom tumorskih ćelija koje su zajedno sa njima kultivisane.
Uzimajući u obzir vrlo značajan gubitak ćelija u ovoj seriji eksperimenata pod uticajem faktora citotoksičnosti (u nekim eksperimentima citolitička aktivnost je dostizala 70%) i rast ćelija uporediv sa onim nakon kokultivacije na rezidentnim makrofagima, može se smatrati da je kombinovana upotreba BCG-a i ciklofosfamida ima aditivni efekat na proizvodnju faktora rasta od strane makrofaga.
Dakle, podaci dostupni u literaturi o kompatibilnosti BCG-a i ciklofosfamida, iako potpuno tačni u pogledu antitumorske aktivnosti aktiviranih makrofaga, ne odražavaju mogući konačni rezultat takve kombinacije, koja je s kliničkog stanovišta očigledno nepoželjna. Treba napomenuti da je priroda odgovora makrofaga na aktivaciju MBO in vivo slična onoj in vitro. Kako se pokazalo u prvim studijama o upotrebi BCG-a, imunoterapija ovim lijekom je efikasna samo kratko vrijeme, a zatim se stimulira tumorski proces, te antitumorska aktivnost makrofaga, koja prilično brzo nestaje i in vitro. a in vivo se po pravilu ne može obnoviti ponovljenim davanjima lijeka koji ga je uzrokovao, a ako je uspješna, takva reaktivacija je kratkotrajna.
Podaci iz literature jasno ukazuju da ne postoji korelacija između citotoksične aktivnosti BCG-aktiviranih makrofaga in vitro i njihovog učinka na tumorske ćelije in vivo. Na osnovu podataka koje smo iznijeli, ovo postaje sasvim razumljivo: uništavanje in vitro čak i većine tumorskih stanica uz naknadnu stimulaciju rasta preostalih dovodi do jasne neutralizacije učinka citolitičkog djelovanja, posebno ako se uzeti u obzir njegovo relativno kratko trajanje u poređenju sa efektom stimulacije rasta. Osim toga, citostatska aktivnost otkrivena in vitro ovisi o faktorima kao što su arginaza, iscrpljivanje podloge za kulturu zbog pojačanog metabolizma aktiviranih makrofaga, produkcija toksičnih radikala, atomskog kisika, itd. U in vivo uvjetima, ovi efekti se možda neće pojaviti zbog do priliva arginina, drugih nutrijenata u ćelije, prisutnosti radikalnih antagonista, itd.
Kao što je poznato, makrofagi tokom tumorskog procesa doprinose razvoju tumora na nivou „organa“ poboljšavajući mikrookruženje (što znači stimulacija angiogeneze, formiranje tumorske strome, eliminacija produkata raspada tumorskih ćelija). Imunosupresivni faktori koje proizvode makrofagi, posebno prostaglandin E2, su u stanju da inaktiviraju druge imunološke mehanizme otpornosti na rast tumora. Faktori kao što su interleukin-1 (IL-1) i faktor tumorske nekroze (TNF), koje luče aktivirani makrofagi, mogu potisnuti proliferaciju većine poznatih tumorskih ćelijskih linija, ali i stimulirati rast nekih od njih.
S obzirom na visok stepen heterogenosti populacije tumora i pojačan rast pod uticajem produkata aktiviranih makrofaga, ne može se isključiti pojava rezistentnih, pa čak i TNF- i IL-2 zavisnih klonova. A ako se takvi efekti ne pojave u relativno kratkim periodima interakcije između makrofaga i tumorskih ćelija u eksperimentalnim modelima, onda se u realnim uslovima verovatnoća takve selekcije ne može zanemariti. Ovo je posebno relevantno ako uzmemo u obzir da su makrofagi gotovo neizbježno uključeni u provođenje bilo kojeg imunoterapijskog efekta, stoga ovdje prikazane negativne posljedice njihove aktivacije mogu uticati i na efikasnost cjelokupnog programa imunoterapije, prvobitno usmjerenog na druge efektore imunološkog sistema. .
Dakle, proizvodnja faktora koji stimulišu rast tumorskih ćelija od strane makrofaga je veoma značajna komponenta odgovora ovih ćelija na MBT. U skladu s tim, prilikom procjene i odabira potencijalnih MBO-a, potrebno je procijeniti ne samo njihovu sposobnost induciranja antitumorskih reakcija, već i mogućnost ispoljavanja sporedne aktivnosti stimulacije rasta. Samo dubinsko proučavanje ove problematike, usmjereno na identifikaciju faktora koji stimuliraju rast tumorskih stanica, puteve njihove biosinteze u makrofagima i njihovu regulaciju, može biti osnova za razvoj metoda selektivne supresije stimulirajućeg rasta tumorskih stanica. svojstva MBO-aktiviranih makrofaga, nepoželjnih u onkološkoj situaciji, dok istovremeno čuvaju i aktiviraju njihova antitumorska svojstva.
PERITONEALNI MAKROFAGI KAO MODEL ZA PROUČAVANJE ATEROGENOG POTENCIJALA KRVNOG SERUMA
Akumulacija lipida u glatkim mišićnim ćelijama (SMC) i makrofagima intime aorte je karakteristična karakteristika ateroskleroze kod ljudi i eksperimentalnih životinja. Pokazalo se da krvni serumi pacijenata sa koronarnom bolešću srca (CHD) sa angiografski potvrđenom koronarnom aterosklerozom, za razliku od krvnih seruma zdravih osoba, imaju sposobnost da izazovu akumulaciju lipida u kultivisanim ćelijama intime ljudske aorte. Ovo svojstvo je nazvano aterogenost, jer je akumulacija lipida bila praćena drugim aterosklerotskim manifestacijama na ćelijskom nivou - povećanom proliferativnom aktivnošću i sintezom ekstracelularnog matriksa. Međutim, veza između aterogenosti i ateroskleroze nije u potpunosti razjašnjena.
Studije o ovom problemu zasnivaju se na primarnoj kultivaciji subendotelnih ćelija intime ljudske aorte. Složenost posla je posljedica potrebe za stalnim obezbjeđivanjem sterilnog materijala za obdukciju, kao i visoke cijene izolacije i kultivacije ćelija.
Ranije je pokazano da humani aortni SMC i mononuklearne ćelije periferne krvi imaju sposobnost akumulacije intracelularnog holesterola kada se uzgajaju sa aterogenim serumom. Ovi podaci sugeriraju da se ne samo subendotelne stanice intime aorte mogu koristiti za određivanje aterogenosti krvnog seruma.
Svrha rada bila je utvrditi mogućnost korištenja lako dostupnih peritonealnih makrofaga za određivanje aterogenosti krvnog seruma.
Krv za istraživanje bi se uzimala od pacijenata sa koronarnom bolešću potvrđenom koronarografijom i zdravim davaocima. SMC su izolovani iz aorte muškaraca uzetih u aseptičnim uslovima 24 sata nakon iznenadne smrti usled infarkta miokarda. Ljudski peritonealni makrofagi izolovani su iz ascitične tečnosti pacijenata sa cirkulatornom insuficijencijom. Mišji peritonealni MF su dobijeni od nestimulisanih miševa.
Uticaj krvnog seruma zdravih davalaca i pacijenata sa koronarnom bolešću na nivo holesterola u ćelijama
Intima aorte
aortni medij
Makrofagi miša
Ljudski makrofagi
U tabeli je prikazan sadržaj ukupnog holesterola u SMC intime i medija ljudske aorte, u peritonealnim mišjim i humanim makrofagima inkubiranim 24 sata u prisustvu 20% krvnih seruma zdravih davalaca i pacijenata sa koronarnom bolešću. Vidi se da inkubacija ćelija u 20% krvnog seruma zdravih davalaca ne dovodi do statistički značajnog povećanja nivoa holesterola u ćelijama, a inkubacija u 20% krvnog seruma pacijenata sa IHD izaziva značajno povećanje sadržaja. intracelularnog holesterola u SMC i peritonealnim makrofagima. Stoga, baš kao intimalni i medijalni SMC aorte, mišji i humani peritonealni makrofagi mogu se koristiti za procjenu aterogenog potencijala krvnog seruma. Pored toga, akumulacija holesterola u makrofagima se dešava 1,5-2,5 puta brže nego u SMC. Obje ove činjenice, kao i lakši način za dobivanje kulture makrofaga, sugeriraju da se ove stanice mogu koristiti za procjenu aterogenog potencijala krvnog seruma mnogo češće nego SMC.
Prilikom uzgoja mišjih, humanih makrofaga i SMC sa 10 aterogenih i 10 neaterogenih krvnih seruma, utvrđena je direktna korelacija između akumulacije kolesterola u makrofagima i u SMC intime aorte. Osim toga, akumulacija holesterola u ljudskim i mišjim makrofagima direktno je povezana sa koncentracijom u serumu (Slika 1) i vremenom kulture (Slika 1A). Prilikom uzgoja makrofaga sa serumom zdravih osoba, takav učinak nije otkriven.
Tokom inkubacije humanih i mišjih makrofaga sa krvnim serumom pacijenata sa ishemijskom bolešću srca, otkriveno je povećanje sadržaja slobodnog holesterola i triglicerida u ćeliji za 1,5-2 puta, a estera holesterola za 2,5-3 puta. Gde. nivoi fosfolipida se nisu promenili.
U grupi zdravih davalaca, samo 22 (28%) od 80 osoba imalo je krvni serum koji je uzrokovao akumulaciju holesterola u ćelijskoj kulturi. U grupi pacijenata sa ishemijskom bolešću srca, kod 83% osoba, krvni serum je izazvao značajno povećanje nivoa ukupnog holesterola u makrofagima, odnosno imali su aterogena svojstva.
Nije utvrđena korelacija između aterogenosti krvi pacijenata sa koronarnom bolešću i sadržaja ukupnog holesterola, triglicerida, apo-A1, apo-B i HDL holesterola u serumu.
Dobijeni podaci ukazuju na direktnu korelaciju između akumulacije lipida u SMC i makrofaga, kao i na sposobnost detekcije aterogenosti u krvnom serumu. Kada se koriste peritonealni makrofagi, ne razlikuju se od podataka dobivenih ranije kada se koriste SMC iz intime aorte. Tokom kultivacije, peritonealni makrofagi akumuliraju slobodni i esterifikovani holesterol, trigliceride, odnosno iste lipide koji tokom inkubacije uključuju SMC intime aorte. Upotreba MMC-a je otežana zbog poteškoća u dobijanju aseptičnog materijala u zapremini dovoljnoj za rad. Ljudski, a posebno mišji makrofagi nemaju ove nedostatke. Ove činjenice dokazuju da se kultura peritonealnih makrofaga, zajedno sa kulturom SMC iz intime aorte, može koristiti kao test sistem za procjenu aterogenog potencijala krvnog seruma.
Makrofagi su vjerovatno jedan od glavnih ćelijskih akceptora lipida u vaskularnom zidu. Prisustvo makrofaga opterećenih lipidima u aterosklerotskim plakovima je dugo dokazano. Eksperimentalni rad sa ćelijskom kulturom otkrio je sposobnost makrofaga da intenzivno akumuliraju holesterilne estere kada se inkubiraju sa hemijski modifikovanim lipoproteinima.
Korištenje kulture makrofaga omogućit će nam nastavak proučavanja prirode aterogenosti u krvnom serumu pacijenata s koronarnom arterijskom bolešću i njene uloge u patogenezi ateroskleroze.
UTICAJ GABA, GHB I GLUTAMIČNE KISELINE NA FUNKCIONALNU AKTIVNOST FAGOCITA
Posljednjih godina se intenzivno proučava uloga neuroaktivnih aminokiselina u imunološkim procesima. Razlog tome je široka upotreba ovih aminokiselina u neurološkoj i psihijatrijskoj praksi, ali su istovremeno s njihovim direktnim djelovanjem dobiveni podaci o njihovom utjecaju na imunološke procese. Dobijeni su podaci o uticaju gama-aminomaslačne (GABA), gama-hidroksimaslačne (GHB) i glutaminske kiseline na broj ćelija koje formiraju antitelo, rozetaće i druge pokazatelje imuniteta. Eksperimenti su izvedeni u dve serije: u seriji I proučavan je uticaj neuroaktivnih aminokiselina na funkcionalno stanje MF i neutrofila na intaktnim miševima. U seriji II proučavan je učinak istih supstanci na stanje fagocita na pozadini preliminarne imunizacije životinja. Imunizacija je obavljena 5% suspenzijom ovčijih eritrocita u količini od 1 ml trećeg dana nakon primjene lijeka. Kontrolnu grupu činili su intaktni miševi koji su primali fiziološki rastvor (kontrola I) i životinje koje su primale fiziološki rastvor i imunizovane eritrocite ovaca (kontrola II).
Primjena neuroaktivnih aminokiselina intaktnim životinjama (Serija I) bila je praćena značajnim promjenama aktivnosti kisele fosfataze u MP i neutrofilnim leukocitima. Treba napomenuti da je promjena aktivnosti u ispitivanim grupama bila višesmjerna. Tako je u uslovima primene GABA aktivnost enzima u MF i leukocitima u krvi povećana za 1,7 puta u odnosu na kontrolnu grupu, dok je sa uvođenjem GHB došlo do značajnog smanjenja aktivnosti kisele fosfataze samo u MF. Pokazatelji aktivnosti enzima kada je glutaminska kiselina davana intaktnim miševima nisu se razlikovali od onih u kontrolnoj grupi.
Proučavanje utjecaja biološki aktivnih tvari na pozadini preliminarne imunizacije eritrocitima ovaca u svim eksperimentalnim grupama serije II otkrilo je značajno smanjenje aktivnosti kisele fosfataze u neutrofilnim leukocitima. Relativno nizak nivo aktivnosti u ispitivanim krvnim ćelijama zabeležen je uvođenjem GHB i glutaminske kiseline, koji su bili 2, odnosno 1,4 puta niži od kontrolnog nivoa. Aktivnost ispitivanog enzima u MF eksperimentalnih grupa serije II nije se razlikovala od one u kontroli, sa izuzetkom grupe u kojoj je tokom imunizacije primijenjen GHB, gdje je sadržaj kisele fosfataze smanjen skoro 2 puta.
U nizu citoloških istraživanja utvrđeno je da neuroaktivne aminokiseline u ispitivanim dozama ne izazivaju distrofične i destruktivne promjene u stanicama fagocitnog niza. Dakle, ni u jednoj ispitivanoj grupi prve serije nije bilo znakova dezintegracije, fragmentacije i lize citoplazmatske i nuklearne membrane, niti piknoze nuklearnog ireksisa. Istovremeno, u grupama u kojima su davani GABA i GHB, jezgra monocita su izgledala hipertrofirana i hipohromna, a citoplazma je bila umereno vakuolisana. Moguće je da neuroaktivne aminokiseline u biološki prihvatljivim dozama nemaju citotoksični učinak na monocite i neutrofilne leukocite u krvi intaktnih miševa. Međutim, značajne promjene u aktivnosti glavnog markera lizosomalne kisele fosfataze upućuju na to da ispitivane biološki aktivne tvari, bez direktnog toksičnog djelovanja na ćelijsku membranu, i dalje uzrokuju destabilizaciju struktura unutarstanične membrane, i prije svega, lizosomske. one. Uzimajući u obzir činjenicu da aktivnost lizosomskih enzima u velikoj mjeri ovisi o funkcionalnom stanju membrane, tačnije o stupnju njene permeabilnosti, provedena je posebna serija eksperimenata za proučavanje permeabilnosti lizosomskih membrana primjenom intravitalne fluorohromizacije. fagocita sa akridin narandžastom (AO). Rezultati istraživanja upotrebom AO pokazali su da je uočena promjena tinktorijalnih svojstava ciljnih stanica kada su sve proučavane neuroaktivne aminokiseline unesene u tijelo miševa. Uvođenjem GABA, GHB i glutaminske kiseline, vrijeme poluraspada (T 1/2) je primjetno smanjeno, a uz izlaganje T"/a, tokom kojeg dolazi do postepene promjene tinktorijalnih svojstava sastavnih komponenti ćelije (citoplazma, jezgro, područja lokalizacije lizosoma), broj fagocita sa zelenom fluorescencijom jezgara značajno je smanjen u eksperimentalnim grupama serije I. Sličan trend je jasno vidljiv u svim eksperimentalnim grupama serije II.
Sumirajući navedeno, možemo zaključiti da neuroaktivne aminokiseline imaju značajan utjecaj na aktivnost kisele fosfataze u fagocitima. Posebno treba napomenuti da je efekat dobijen u grupama koje su davale GABA i GHB bio dijametralno suprotan: ta se činjenica najjasnije vidi u slučajevima kada su MF bili predmet proučavanja aktivnosti kisele fosfataze. Uvođenje GABA i glutaminske kiseline u pozadini preliminarne imunizacije nije uticalo na aktivnost kisele fosfataze u MF, dok su u neutrofilnim leukocitima sve proučavane neuroaktivne aminokiseline izazvale značajno smanjenje aktivnosti enzima.
Eksperimenti sa AO kao indikatorom permeabilnosti lizosomskih membrana pokazali su da neuroaktivne aminokiseline, bez citodestruktivnog dejstva na ciljne ćelije, izazivaju destabilizaciju lizozomskih membrana, usmerenu ka povećanju njihove permeabilnosti. Poređenje pokazatelja permeabilnosti lizozomskih membrana životinja serije I i II pokazuje da za povećanje permeabilnosti pod utjecajem neuroaktivnih aminokiselina formiranje humoralnog imuniteta nije neophodan uvjet.
Dakle, neuroaktivne aminokiseline imaju selektivni učinak na morfofunkcionalno stanje lizosomskog aparata fagocita. To potvrđuju i podaci dobiveni o permeabilnosti lizozomskih membrana u odnosu na toksičnu boju i kvantitativno određivanje aktivnosti glavnog markera lizosoma - kisele fosfataze.
IV. Zaključak
Prikazani samo mali dio eksperimenata na modeliranju različitih efekata govori u prilog činjenici da je procese poremećaja ili promjena fagocitne aktivnosti vrlo pogodno proučavati izvođenjem eksperimenata na peritonealnim MF. Možemo reći da je ovaj model odavno postao osnova za testiranje raznih hemijskih i farmakoloških lekova kao agenasa koji utiču na ćelijsku komponentu imuniteta; proučavati procese interakcije infektivnih agenasa sa fagocitima. Također se koristi za proučavanje ne samo fagocitne funkcije, već i, obrnuto, različitih procesa povezanih sa samim infektivnim agensima. Može se spomenuti da se provode studije za proučavanje fagocita peritonealnog eksudata kod genetski dijabetičkih miševa, kod genetski imunosupresivnih štakora itd.
Naravno, podaci koje istraživači dobijaju prilično su relativni, jer uprkos visokoj kvaliteti eksperimenata koji se izvode, oni se i dalje izvode in vitro,što neminovno ostavlja trag - ćelije su lišene opsega citokinskih efekata koji su prisutni u živom organizmu; ne stupaju u interakciju sa stromalnim komponentama i drugim ćelijama. Prednost metode je njena jednostavnost, pristupačnost i, što je najvažnije, preglednost, kao i velika brzina dobijanja rezultata i široke mogućnosti za postavljanje „registracijskih“ reakcija. Međutim, kao što vidite, u modernoj patologiji ne možemo se ograničiti na to. Stoga se u savremenim naučnim i kliničkim studijama koriste druge metode i modeli. Neki od njih će biti ukratko razmotreni u nastavku.
NEKI DRUGI MODELI ZA PROUČAVANJE FAGOCITOZE.
- Jedan od najrealističnijih modela fagocitoze je model in vivo. Ovaj model vam omogućava da dobijete pouzdane informacije i simulirate procese uzimajući u obzir uticaj unutrašnjeg okruženja. Međutim, teže je implementirati i ponekad ne dozvoljava rad sa ljudskim tijelom. Model in vivo postoji u dvije verzije
- Model na fagocitima krvnog seruma. Naravno, u ovom slučaju predmet naše pažnje neće biti MF, već krvni monociti i neutrofilni leukociti. Model nam omogućava da proučavamo uticaj na stanje fagocita i fagocitnu funkciju opštih, sistemskih procesa, kao što su hipoksija, hipobarija, zračenje itd. Također, intravaskularnom primjenom različitih supstanci moguće je dobiti podatke o njihovom djelovanju. Proučava se i uticaj internih sistemskih aktivnih supstanci: histamina, prostaglandina
- Model fagocitoze u žarištu kronične upale. Jedan od "najkliničkijih" modela. Ovdje su predmet pažnje i MF tkiva i epiteloidne ćelije, gigantske multinuklearne ćelije, ćelije stranog tijela, itd. Velika pažnja se poklanja fenomenu nepotpune fagocitoze, procesima supresije migracije i smanjenju citotoksičnosti zavisne od kisika.
- Vrlo originalan model razvijen je u imunološkoj laboratoriji Instituta za akušerstvo i ginekologiju. Ott RAMS (autori: O.A. Pavlov, S.A. Selkov, A.V. Seljutin, E.E. Andreeva, itd.). Proučavali su ulogu placentnih MF u problemima porođaja i, posebno, u problemu pobačaja. Makrofazi fetoplazmatskog kompleksa (FPC), prema istraživačima, donedavno su obraćali neopravdano malo pažnje. Tek posljednjih godina pojavio se niz publikacija posvećenih ovim ćelijama. Ostaje da se razjasne mnoge funkcije MPA, ali već postaje očito da su među populacijama različitih ćelija koje čine placentno tkivo, MPA najvjerovatniji kandidati za ulogu regulatornog (i, moguće, ključnog) vezu u nizu reproduktivnih procesa. Sa stanovišta patogeneze razvoja porođaja tokom prijevremenih i terminskih porođaja, MFC su od posebnog interesa zbog karakteristika niza svojstava i položaja ovih ćelija.
Makrofagi placente (Kashchenko-Hoffbauer ćelije) pripadaju sistemu mononuklearnih fagocita, koji imaju isto porijeklo kao i obični MF. Ove ćelije se nalaze u značajnom broju u tkivu placente i čine veliku većinu njenih imunokompetentnih ćelija. Prema nekim autorima, makrofagi čine do 40% populacije netrofoblastičnih ćelija horionskih resica.
Tradicionalno se vjerovalo da je prerogativ mononuklearnih fagocita u fetoplacentarnom kompleksu uklanjanje ćelijskih ostataka, zaštita od mikroorganizama i sudjelovanje u fetalnom odbrambenom sistemu od lokalnog imunološkog odgovora majke. Oni su također uključeni u implementaciju i modulaciju imunološkog odgovora i predstavljaju prvu liniju odbrane od infekcije, obezbjeđujući nespecifične imunološke odgovore i proizvodeći regulatorne signale za specifične. Dakle, jedinstvena pozicija MFC-a je da, s jedne strane, one, kao efektorske ćelije, dolaze u direktan kontakt sa infektivnim agensima i drugim produktima koji prodiru u organizam domaćina (u ovom slučaju u jedinstvenu „majka-placenta-fetus”. “sistema”), a, s druge strane, budući da se aktiviraju kao rezultat ovog kontakta, sposobni su proizvesti mnoge rastvorljive signalne molekule koji utiču na funkcije obližnjih ćelija.
Ovi faktori uključuju i citokine čiji se sadržaj mijenja s početkom spontanog porođaja - TNFa, IL-1, IL-6 i IL-8. Pretpostavlja se da ovi citokini koje proizvode makrofagi stimulišu sintezu PG i time iniciraju kontraktilnu aktivnost materice. Štaviše, pokazalo se da makrofagi mogu nezavisno proizvesti PGE2 PG2a, koji direktno utiče na miometrijum. Makrofagi su takođe sposobni da luče transformišući faktor rasta-β (TGF-β), koji igra važnu ulogu u embrionalnoj morfogenezi i utiče na funkcije trofoblasta i ćelija endometrijuma. Nedavno u eksperimentima in vitro dobijeni su uvjerljivi dokazi o učešću ćelija placente u procesu rađanja. Autori su demonstrirali povećanje lučenja TNF-α u porođaju od strane makrofaga uzetih od žena kao rezultat spontanog porođaja ili izazvanog porođaja umjetnim porođajem, kao i IL-1 i IL-6 od strane endotelnih stanica placente. Svi ovi podaci ukazuju na doprinos ćelija placente, uključujući makrofage, povećanju nivoa citokina u fetoplacentarnom kompleksu tokom spontanog porođaja. Pretpostavke o mogućoj ulozi PM-a u prijevremenom i hitnom porođaju tjeraju nas da na ovu ćelijsku populaciju gledamo kao na najvažniji element koji utječe na gestacijske procese. U tom smislu, aktiviranje PM-a može se smatrati događajem koji vodi do prijevremenih ili terminskih porođaja. Utvrđena je pozitivna korelacija između porasta nivoa određenih citokina (faktor nekrotizacije tumora-α, interleukin-1 i -6), koje također luče aktivirani makrofagi, i početka prijevremenih i terminskih porođaja. Pokušali smo da identifikujemo vezu između prisustva porođaja u različitim fazama trudnoće i stepena aktivacije PM in vitro, ošto je ocjenjivano po nivou ekspresije MHC II antigena i fagocitnoj aktivnosti ćelija posredovanih Fc i C3 receptorima. u prisustvu porođaja. Povećao se broj ćelija koje eksprimiraju MHC II i SCZ i imaju sposobnost fagocitoze. U kasnijim fazama trudnoće nije bilo moguće otkriti značajno povećanje PM aktivnosti tokom porođaja. Prema podacima, do smanjenja nivoa fagocitoze došlo je usled smanjenja aktivnosti pojedine ćelije, dok se broj fagocita nije značajno promenio. Da bi se utvrdilo da li uočeni trend odražava postojeći obrazac, ili je posljedica heterogenosti proučavanog materijala, potrebno je ispitati dodatni broj posteljica.
Dobijeni rezultati ukazuju na obećanje korištenja obogaćenih PM kultura za proučavanje brojnih aspekata imunologije reprodukcije, posebno za razjašnjavanje ćelijskih mehanizama koji leže u osnovi normalnog i prijevremenog porođaja.
Književnost.
- DI. Mayansky, Kupfferova ćelija i sistem mononuklearnih fagocita, Moskva, 1983.
- Metode za proučavanje in vitro ćelijskog imuniteta, ur. Bloom and Glade, Moskva, 1974
- I. I. Mečnikov, Predavanja o komparativnoj patologiji upale, Moskva, 1947.
- Terapijski arhiv, 1990, T62, N11
- Pitanja medicinske hemije, 1988, T34, broj 1
- Laboratorijski rad, 1984, N5
- Laboratorijski rad, 1985, N1
- Laboratorijski rad, 1992, N2
- Laboratorijski rad, 1989, N4
- Imunologija, 1983, N1
- Imunologija, 1983, N2
- Imunologija, 1987, N6
- Imunologija, 1989, N4
- Imunologija, 1999, N1
- Bilten eksperimentalne biologije i medicine, 1988, N1
- Bilten eksperimentalne biologije i medicine, 1989, N11
- Bilten eksperimentalne biologije i medicine, 1990, N1
- Bilten eksperimentalne biologije i medicine, 2000, T129, N6
- Bilten eksperimentalne biologije i medicine, 1999, T127, N4
- Časopis za mikrobiologiju, epidemiologiju i imunobiologiju 1990, N5
- Arhiv patologije, 1994, T56, N1
- Medicinska imunologija, 2001, T3, N3
- Eksperimentalna i klinička medicina, 1989, T29, N3
- Eksperimentalna i klinička medicina, 1989, T29, N6
- Citologija, 1992, T34, N7
Makrofagi - kakva su to stvorenja? Ili formacije? Za šta su odgovorni u našem organizmu? Na ova, kao i na niz sličnih pitanja, odgovorit ćemo u članku.
opće informacije
Mononuklearni fagociti (ili makrofagi) su grupa dugovječnih stanica koje su sposobne za fagocitozu. Imaju dosta zajedničkih funkcija koje ih čine sličnima neutrofilima. Makrofagi su također aktivni učesnici u složenim upalnim i imunološkim reakcijama, gdje djeluju kao sekretorne ćelije. Kako funkcioniraju? Makrofagi, poput neutrofila, dijapedezom napuštaju vaskularni krevet i počinju slijediti svoj vlastiti put - cirkulirati u krvi. Ali oni se šalju u tkanine. Nakon toga dolazi do transformacije monociti → makrofagi. I već na mjestu dolaska obavljat će svoje specifične funkcije, koje zavise od anatomske lokacije. Ovo se odnosi na jetru, pluća, koštanu srž i slezenu. U njima će se baviti uklanjanjem štetnih čestica i mikroorganizama iz krvi. U šta se mogu „pretvoriti“? Kupferove i mikroglijalne ćelije, alveolarni makrofagi, makrofagi slezene, limfni čvorovi, koštana srž - to je ono u šta se transformišu.
Funkcionalni
Makrofagi u tijelu imaju dvije glavne funkcije, koje obavljaju različite vrste:
- Eliminacija korpuskularnih antigena. To rade takozvani "profesionalni" makrofagi.
- Prijem antigena, obrada i prezentacija T ćelijama. Ove poslove već obavlja agroindustrijski kompleks. Ova skraćenica se koristi zbog dugog naziva entiteta na mikro nivou - ćelije koje predstavljaju antigen.
Kada se odrasle formacije formiraju od promonocita koštane srži, posebno mnogi od njih ulaze (i tamo ostaju) u limfocite. Makrofagi obavljaju svoje funkcije dugo vremena zbog činjenice da su dugovječne stanice s dobro razvijenim mitohondrijama i grubim endoplazmatskim retikulumom.
Više o zadacima
Ali najveću pažnju ipak treba posvetiti borbi protiv protozoa, virusa i bakterija koje postoje unutar ćelija domaćina. To se ostvaruje zahvaljujući prisutnosti baktericidnih mehanizama koje posjeduju makrofagi. To ih dovodi do toga da su jedno od najmoćnijih oruđa urođenog imunog sistema. Ali to nije sve. Zajedno sa T- i B-limfocitima učestvuju u formiranju imunološkog odgovora. Osim toga, ne može se ne primijetiti uloga makrofaga u zacjeljivanju rana, eliminaciji stanica koje su već nadživjele svoju korisnost i u stvaranju aterosklerotskih plakova. Oni bukvalno proždiru štetne elemente u našem tijelu. To čak i njihovo ime govori. Dakle, prevedeno na ruski, „makrofag“ znači „veliki jedač“. I treba napomenuti da su ove ćelije zaista prilično velike.
Koje vrste makrofaga postoje?
Budući da su formacije koje razmatramo tkivni fagociti, njihove različite “modifikacije” mogu se naći u različitim dijelovima tijela. Ako uzmemo u obzir apsolutno sve, biće potrebno dosta vremena, pa će se pažnja posvetiti najznačajnijim predstavnicima, kao što su:
- Alveolarni makrofagi. Smješteni su u plućima i pročišćavaju udahnuti zrak od raznih štetnih i zagađujućih čestica.
- Kupfferove ćelije. Nalaze se u jetri. Uglavnom se bave uništavanjem starih krvnih zrnaca.
- Histociti. Žive u vezivnom tkivu, pa se mogu naći po celom telu. Ali oni se često nazivaju "lažnim" makrofagima zbog činjenice da su uključeni u formiranje okvira za većinu tjelesnih struktura, a ne direktno u uništavanje različitih štetnih elemenata.
- Žive u epitelu i ispod mukoznih membrana.
- Makrofagi slezene. Smješteni su u sinusoidnim žilama ovog organa i bave se hvatanjem i uništavanjem zastarjelih krvnih stanica. Nije uzalud što se slezena naziva grobljem mrtvih crvenih krvnih zrnaca.
- Peritonealni makrofagi. Žive u peritoneumu.
- Makrofagi limfnih čvorova. Gdje žive jasno je iz imena.
Zaključak
Naše tijelo je složeno. Naseljen je mnogim korisnim ćelijama koje nam olakšavaju život. Makrofagi nisu izuzetak. Nažalost, ponekad njihovo iskustvo nije dovoljno da osigura da imunološki sistem radi kako je potrebno. A onda se osoba razboli. Ali važna prednost našeg imunološkog sistema je to što se može prilagoditi.