Metode za laboratorijsku dijagnostiku virusnih infekcija podijeljene su u nekoliko velikih grupa.
- Direktne metode koje se sastoje od identifikacije samog virusa ili antitijela na njega direktno u biološkom materijalu.
- Indirektne metode uključuju umjetnu proizvodnju virusa u značajnim količinama i njegovu daljnju analizu.
Najrelevantnije dijagnostičke metode u svakodnevnoj praksi uključuju:
Serološke dijagnostičke metode - otkrivanje određenih antitijela ili antigena u krvnom serumu pacijenta kao rezultat reakcije antigen-antitijelo (AG-AT). Odnosno, prilikom traženja specifičnog antigena kod pacijenta koristi se odgovarajuće umjetno sintetizirano antitijelo, i, shodno tome, obrnuto, pri identifikaciji antitijela koriste se sintetizirani antigeni.
Imunofluorescentna reakcija (RIF)
Zasnovano na upotrebi antitela obeleženih bojom. Ako je prisutan virusni antigen, on se veže za obilježena antitijela, a pod mikroskopom se uočava specifična boja, što ukazuje na pozitivan rezultat. Ovom metodom je, nažalost, nemoguća kvantitativna interpretacija rezultata, već samo kvalitativna.
Mogućnost kvantitativnog određivanja pruža enzimski imunosorbentni test (ELISA). Slično je RIF-u, međutim, kao markeri se ne koriste boje, već enzimi koji pretvaraju bezbojne supstrate u obojene proizvode, što omogućava kvantificiranje sadržaja i antigena i antitijela.
- Nevezana antitela i antigeni se ispiru.
- Dodaje se bezbojni supstrat, a u jažice sa antigenom koje određujemo doći će do bojenja, jer bit će enzim povezan s antigenom, nakon čega se pomoću posebnog uređaja procjenjuje intenzitet luminescencije obojenog proizvoda.
Antitijela se otkrivaju na sličan način.
Indirektna (pasivna) reakcija hemaglutinacije (IPHA).
Metoda se zasniva na sposobnosti virusa da vežu crvena krvna zrnca. Normalno, crvena krvna zrnca padaju na dno ploče, formirajući takozvano dugme. Međutim, ako postoji virus u biološkom materijalu koji se proučava, on će vezati crvena krvna zrnca u takozvani kišobran koji neće pasti na dno bunara.
Ako je zadatak identificirati antitijela, onda se to može učiniti pomoću reakcija inhibicije hemaglutinacije (HAI). Različiti uzorci se usađuju u bunar sa virusom i crvenim krvnim zrncima. Ako su prisutna antitijela, ona će vezati virus, a crvena krvna zrnca će pasti na dno i formirati "dugme".
Sada se zadržimo na metodama za direktno dijagnosticiranje nukleinskih kiselina virusa koji se proučavaju, iPrije svega, o PCR-u (lančana reakcija polimeraze) .
Suština ove metode je otkrivanje specifičnog fragmenta DNK ili RNK virusa višestrukim kopiranjem pod umjetnim uvjetima. PCR se može provesti samo s DNK, odnosno za RNA viruse je prvo potrebno izvršiti reakciju reverzne transkripcije.
PCR se provodi direktno u posebnom uređaju koji se zove termalni ciklus, ili termalni ciklus, koji održava potrebnu temperaturu. PCR smjesa se sastoji od dodane DNK koja sadrži fragment koji nas zanima, prajmera (kratki fragment nukleinske kiseline, komplementaran ciljnoj DNK, služi kao prajmer za sintezu komplementarnog lanca), DNK polimeraze i nukleotida.
Faze PCR ciklusa:
- Denaturacija je prva faza. Temperatura raste do 95 stepeni, lanci DNK se razilaze jedan od drugog.
- Žarenje prajmera. Temperatura se smanjuje na 50-60 stepeni. Prajmeri pronalaze komplementarni region lanca i vezuju se za njega.
-
Sinteza. Temperatura se ponovo podiže na 72, to je radna temperatura za DNK polimerazu, koja, počevši od prajmera, gradi lance kćeri.
Ciklus se ponavlja mnogo puta. Nakon 40 ciklusa, jedan molekul DNK proizvodi 10*12 stepeni kopija kopija željenog fragmenta.
Prilikom izvođenja PCR-a u realnom vremenu, sintetizirane kopije fragmenta DNK obilježavaju se bojom. Uređaj bilježi intenzitet sjaja i gradi grafikone akumulacije željenog fragmenta kako reakcija napreduje.
Moderne metode laboratorijske dijagnostike visoke pouzdanosti omogućuju otkrivanje prisutnosti patogenog virusa u tijelu, često mnogo prije pojave prvih simptoma bolesti.
Imune reakcije koristi se u dijagnostičkim i imunološkim studijama kod bolesnih i zdravih ljudi. U tu svrhu koriste serološke metode , odnosno metode za proučavanje antitijela i antigena primjenom reakcija antigen-antitijelo koje se određuju u krvnom serumu i drugim tekućinama, kao i tjelesnim tkivima.
Detekcija u serumu Prisustvo antitela protiv antigena patogena omogućava postavljanje dijagnoze bolesti. Serološke studije se koriste i za identifikaciju mikrobnih antigena, raznih biološki aktivnih supstanci, krvnih grupa, tkivnih i tumorskih antigena, imunoloških kompleksa, ćelijskih receptora itd.
Kada je mikrob izolovan Patogen se identifikuje kod pacijenta proučavanjem njegovih antigenskih svojstava uz pomoć imuno dijagnostičkih seruma, odnosno krvnih seruma hiperimuniziranih životinja koje sadrže specifična antitijela. Ovo je tzv serološka identifikacija mikroorganizmi.
Široko se koristi u mikrobiologiji i imunologiji reakcije aglutinacije, precipitacije, neutralizacije, reakcije koje uključuju komplement, korištenjem obilježenih antitijela i antigena (radioimunološki, enzimski imunotest, imunofluorescentne metode). Navedene reakcije se razlikuju po evidentiranom efektu i tehnici proizvodnje, međutim, sve se zasnivaju na reakciji interakcije antigena s antitijelom i koriste se za otkrivanje i antitijela i antigena. Imunološke reakcije karakteriziraju visoka osjetljivost i specifičnost.
Osobine interakcije antitijela s antigenima su osnova dijagnostičkih reakcija u laboratorijama. Reakcija in vitro između antigena i antitijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. IN specifična faza dolazi do brzog specifičnog vezivanja aktivnog centra antitela za determinantu antigena. Onda dolazi nespecifična faza - sporije, što se manifestuje vidljivim fizičkim pojavama, kao što je stvaranje flokula (fenomen aglutinacije) ili taloga u vidu zamućenja. Ova faza zahteva prisustvo određenih uslova (elektroliti, optimalni pH sredine).
Vezivanje determinante antigena (epitopa) za aktivni centar Fab fragmenta antitijela je zbog van der Waalsovih sila, vodoničnih veza i hidrofobne interakcije. Snaga i količina antigena vezanog antitijelima zavise od afiniteta, avidnosti antitijela i njihove valencije.
Imunodeficijencije, kako primarne tako i posebno sekundarne, rasprostranjeni su među ljudima. Uzročnici su mnogih bolesti i patoloških stanja, te stoga zahtijevaju prevenciju i liječenje uz pomoć imunotropnih lijekova.
34. Inaktivirane (posebne) vakcine. Potvrda. Aplikacija. Prednosti. Nedostaci.
Inaktivirane (ubijene, korpuskularne ili molekularne) vakcine– preparati koji kao aktivni princip uključuju kulture patogenih virusa ili bakterija ubijenih hemijskim ili fizičkim putem (ćelija, virion) ili komplekse antigena ekstrahovane iz patogenih mikroba, koji sadrže zaštitne antigene (subcelularne, subvirionske vakcine).
Za izolaciju antigenskih kompleksa (glikoproteini, LPS, proteini) od bakterija i virusa koriste se trihloroctena kiselina, fenol, enzimi i izoelektrična precipitacija.
Dobivaju se uzgojem patogenih bakterija i virusa na umjetnim hranjivim podlogama, njihovim inaktiviranjem, izolacijom antigenskih kompleksa, njihovim pročišćavanjem i konstruiranjem u obliku tekućine ili liofilnog preparata.
Prednost ove vrste vakcine je njena relativna lakoća proizvodnje (nije potrebno dugo proučavanje i izolovanje sojeva). Nedostaci uključuju nisku imunogenost, potrebu za trokratnom upotrebom i visoku reaktogenost formaliziranih vakcina. Takođe, u poređenju sa živim vakcinama, imunitet koje proizvode ne traje dugo.
Trenutno se koriste sljedeće ubijene vakcine: tifus, obogaćen Vi antigenom; vakcina protiv kolere, vakcina protiv pertusisa.
119. Serološki testovi koji se koriste za dijagnosticiranje virusnih infekcija.
Detekcija u serumu Prisustvo antitela protiv antigena patogena omogućava postavljanje dijagnoze bolesti. Serološke studije se koriste i za identifikaciju mikrobnih antigena, raznih biološki aktivnih supstanci, krvnih grupa, tkivnih i tumorskih antigena, imunoloških kompleksa, ćelijskih receptora itd.
Kada je mikrob izolovan Patogen se identifikuje kod pacijenta proučavanjem njegovih antigenskih svojstava uz pomoć imuno dijagnostičkih seruma, odnosno krvnih seruma hiperimuniziranih životinja koje sadrže specifična antitijela. Ovo je tzv serološka identifikacija mikroorganizmi.
Široko se koristi u mikrobiologiji i imunologiji reakcije aglutinacije, precipitacije, neutralizacije, reakcije koje uključuju komplement, korištenjem obilježenih antitijela i antigena (radioimunološki, enzimski imunotest, imunofluorescentne metode). Navedene reakcije se razlikuju po evidentiranom efektu i tehnici proizvodnje, međutim, sve se zasnivaju na reakciji interakcije antigena s antitijelom i koriste se za otkrivanje i antitijela i antigena. Imunološke reakcije karakteriziraju visoka osjetljivost i specifičnost.
Osobine interakcije antitijela s antigenima su osnova dijagnostičkih reakcija u laboratorijama. Reakcija in vitro između antigena i antitijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. IN specifična faza dolazi do brzog specifičnog vezivanja aktivnog centra antitela za determinantu antigena. Onda dolazi nespecifična faza - sporije, što se manifestuje vidljivim fizičkim pojavama, kao što je stvaranje flokula (fenomen aglutinacije) ili taloga u vidu zamućenja. Ova faza zahteva prisustvo određenih uslova (elektroliti, optimalni pH sredine).
Vezivanje determinante antigena (epitopa) za aktivni centar Fab fragmenta antitijela je zbog van der Waalsovih sila, vodoničnih veza i hidrofobne interakcije. Snaga i količina antigena vezanog antitijelima zavise od afiniteta, avidnosti antitijela i njihove valencije.
Na pitanje o ekspresnoj dijagnostici:
1. Kultura izolirana u svom čistom obliku može se dijagnosticirati. 2. U posebno opremljenim laboratorijama (mora imati dozvolu) 3. Poštivanje strogih pravila kao što su: izolirana prostorija, potrebna posebna zaštitna odijela, obavezna potpuna sanitacija prostorije nakon rada sa patogenom, sanitacija istraživača nakon završetka rada. Metode stručne dijagnostike. 1. Bakteriologija - kombinovana politropna hranljiva podloga za brzo proučavanje morfa, tinktora, biohemije. svojstva. Upotreba enzimske indikatorske trake, elektrofizička metoda, metoda papirnih diskova natopljenih raznim supstancama (glukoza, laktoza itd.) 2. Dijagnostika faga. 3. Serodijagnostika - Mancinijeva metoda, precipitacija u gelu prema Ascoli, RA, RPGA. 4. Bakterioskopija - direktna i indirektna RIF. Ekspresne dijagnostičke metode za: Kolera - M.Z. Ermolyeva, stanica za imobilizaciju sa serumom za dijagnostiku kolere, RIF. Tularemija - RA na staklu, RPGA Chume - tipizacija faga, metoda ugljikohidratnog papirnog diska, RPGA. Ulkus sinusa - Ascoli metoda, RIF, RPGA. Obrazac rasta: postoje tri od njih: difuzni (fakultativni anaerobi), donji (obavezni anaerobi) i površinski (obavezni anaerobi).
Izolacija čiste kulture anaerobnih bakterija
U laboratorijskoj praksi često ćete morati raditi s anaerobnim mikroorganizmima. Zahtjevnije su za hranljive podloge od aerobnih, češće zahtevaju posebne dodatke za rast, zahtevaju prestanak pristupa kiseonika tokom uzgoja, a trajanje rasta im je duže. Stoga je rad s njima složeniji i zahtijeva značajnu pažnju bakteriologa i laboratorijskih tehničara.
Važno je zaštititi materijal koji sadrži anaerobne patogene od toksičnog djelovanja atmosferskog kisika. Zbog toga se preporučuje uzimanje materijala iz žarišta gnojne infekcije tokom punkcije pomoću šprica, vrijeme između uzimanja materijala i inokulacije na hranjivu podlogu treba biti što kraće.
Budući da se za uzgoj anaerobnih bakterija koriste posebne hranljive podloge, koje ne bi trebale sadržavati kisik i imaju nizak redoks potencijal (-20 -150 mV), u njihov sastav se dodaju indikatori - resazurin, metilensko plavo itd., koji reagiraju na promjenu u ovom potencijalu. Kako raste, bezbojni oblici indikatora se obnavljaju i mijenjaju boju: resazurin postaje srednje ružičasta, a metilen plava postaje srednje plava. Takve promjene ukazuju na nemogućnost korištenja medija za uzgoj anaerobnih mikroba.
Unošenje najmanje 0,05% agara u podlogu pomaže u smanjenju redoks potencijala, koji povećanjem svoje viskoznosti doprinosi smanjenju opskrbe kisikom. To se, pak, postiže korištenjem svježih (najkasnije dva sata nakon proizvodnje) i smanjenih hranjivih podloga.
Treba uzeti u obzir da zbog posebnosti fermentativnog tipa metabolizma anaerobne bakterije zahtijevaju okruženje bogatije nutritivnim komponentama i vitaminima. Najčešće se koriste infuzije srca i mozga i jetre, ekstrakti soje i kvasca, hidrolitički digesti kazeina, peptona, triptona. Obavezno je dodati faktore rasta kao što su Tween-80, hemin, menadion, puna ili hemolizirana krv.
Izolacija čiste kulture aerobnih mikroorganizama sastoji se od više faza. Prvog dana (faza 1 studije) patološki materijal se uzima u sterilnu posudu (epruveta, boca, boca). Proučava se izgled, konzistenciju, boju, miris i druge karakteristike, priprema se bris, farba i ispituje pod mikroskopom. U nekim slučajevima (akutna gonoreja, kuga) u ovoj fazi moguće je postaviti prethodnu dijagnozu, a osim toga odabrati podlogu na koju će se materijal inokulirati. Zauzimanje se vrši bakteriološkom petljom (koja se najčešće koristi), lopaticom po Drigalsky metodi i štapićem od pamučne gaze. Čaše se zatvaraju, okreću naopačke, potpisuju posebnom olovkom i stavljaju u termostat na optimalnoj temperaturi (37°C) na 18-48 godina. Svrha ove faze je dobivanje izoliranih kolonija mikroorganizama. Međutim, ponekad se, kako bi se akumulirao materijal, sije na tekuće hranjive podloge.
Od sumnjivih kolonija pripremaju se razmazi, boje se Gram metodom za proučavanje morfoloških i tinktorijalnih svojstava patogena, a ispituju se pokretne bakterije u „visećoj“ ili „zgnječenoj“ kapi. Ovi znakovi imaju izuzetno veliku dijagnostičku vrijednost kada se karakterišu određene vrste mikroorganizama. Ostaci kolonija koje se proučavaju pažljivo se uklanjaju s površine podloge bez dodirivanja drugih i inokuliraju se na kosine agara ili na sektore Petrijeve posude s hranjivom podlogom kako bi se dobila čista kultura. Epruvete ili posude sa kulturama stavljaju se u termostat na optimalnu temperaturu 18-24 sata.
Bakterije također mogu drugačije rasti na tekućim hranjivim podlogama, iako su karakteristike manifestacija rasta lošije nego na čvrstim podlogama.
Bakterije su sposobne uzrokovati difuzno zamućenje medija, njegova boja se ne može promijeniti ili dobiti boju pigmenta. Ovaj obrazac rasta najčešće se opaža kod većine fakultativnih anaerobnih mikroorganizama.
Ponekad se na dnu epruvete formira talog. Može biti mrvičasta, homogena, viskozna, sluzava itd. Podloga iznad nje može ostati providna ili postati mutna. Ako mikrobi ne formiraju pigment, sediment ima plavkasto-plavu ili žućkastu boju. U pravilu, anaerobne bakterije rastu na sličan način.
Parietalni rast se manifestuje formiranjem pahuljica i zrnaca pričvršćenih za unutrašnje zidove epruvete. Okruženje ostaje transparentno.
Aerobne bakterije imaju tendenciju da rastu površno. Osjetljiv, bezbojan ili plavkasti film često se formira u obliku jedva primjetnog premaza na površini, koji nestaje kada se medij protrese ili protrese. Film može biti vlažan, gust, žilave, sluzave konzistencije i lijepiti se za petlju, povlačeći se iza nje. Međutim, postoji i gust, suh, lomljiv film, čija boja ovisi o pigmentu koji proizvode mikroorganizmi.
Po potrebi se radi razmaz, bojenje, ispitivanje pod mikroskopom, a mikroorganizmi se inokuliraju petljom na površinu čvrste hranjive podloge kako bi se dobile izolirane kolonije.
Trećeg dana (faza 3 studije) proučava se obrazac rasta čiste kulture mikroorganizama i vrši se njegova identifikacija.
Prvo obraćaju pažnju na karakteristike rasta mikroorganizama na podlozi i prave bris, bojeći ga Gram metodom, kako bi se provjerila čistoća kulture. Ako se pod mikroskopom promatraju bakterije iste vrste morfologije, veličine i tinktorijalnih (sposobnosti bojenja) svojstava, zaključuje se da je kultura čista. U nekim slučajevima, na osnovu izgleda i karakteristika njihovog rasta, može se izvesti zaključak o vrsti izoliranih patogena. Određivanje vrste bakterija na osnovu njihovih morfoloških karakteristika naziva se morfološka identifikacija. Određivanje vrste patogena na osnovu njegovih kulturnih karakteristika naziva se kulturna identifikacija.
Međutim, ove studije nisu dovoljne da se donese konačni zaključak o vrsti izoliranih mikroba. Stoga se proučavaju biohemijska svojstva bakterija. Oni su prilično raznoliki.
Najčešće se proučavaju saharolitička, proteolitička, peptolitička, hemolitička svojstva, stvaranje enzima dekarboksilaze, oksidaze, katalaze, plazmakoagulaze, Dnaze, fibrinolizina, redukcija nitrata u nitrite i sl. U tu svrhu postoje posebne hranljive podloge koje su inokulisane mikroorganizmima (raznobojna Hiss serija, MPB, sirutka, mleko itd.).
Određivanje vrste patogena na osnovu njegovih biohemijskih svojstava naziva se biohemijska identifikacija.
METODE UZGOJA I IZOLACIJE ČISTE KULTURE BAKTERIJA Za uspješan uzgoj, pored pravilno odabranih podloga i pravilnog sjemena, potrebni su optimalni uslovi: temperatura, vlažnost, aeracija (dovod zraka). Uzgoj anaeroba je teži od aerobnih metoda za uklanjanje zraka iz hranljive podloge. Izolacija pojedinih vrsta bakterija (čista kultura) iz materijala za ispitivanje, koji obično sadrži mješavinu različitih mikroorganizama, jedna je od faza svake bakteriološke studije. Čista kultura mikroba se dobiva iz izolirane kolonije mikroba. Prilikom izolacije čiste kulture iz krvi (hemokultura), ona se prvo „gaji“ u tečnom mediju: 10-15 ml sterilno uzete krvi inokulira se u 100-150 ml tečne podloge. Odnos inokulisane krvi i hranljive podloge od 1:10 nije slučajan – na taj način se postiže razblaživanje krvi (nerazređena krv štetno deluje na mikroorganizme). Faze izolacije čiste kulture bakterija. Faza I (nativni materijal) Mikroskopija (približna ideja o mikroflori). Sjetva na čvrste hranljive podloge (dobivanje kolonija). Faza II (izolovane kolonije) Proučavanje kolonija (kulturna svojstva bakterija). Mikroskopsko proučavanje mikroba u obojenom razmazu (morfološka svojstva bakterija). Sjetva na kosim agarima za izolaciju čiste kulture. Faza III (čista kultura) Određivanje kulturnih, morfoloških, biohemijskih i drugih svojstava za identifikaciju bakterijske kulture IDENTIFIKACIJA BAKTERIJA Identifikacija izolovanih bakterijskih kultura se vrši proučavanjem morfologije bakterija, njihovih kulturnih, biohemijskih i drugih karakteristika svojstvenih svakoj vrsti .
Br. 1 Serološke reakcije koje se koriste za dijagnozu virusne infekcije.
Imunološke reakcije se koriste u dijagnostičkim i imunološkim studijama kod bolesnih i zdravih ljudi. U tu svrhu koriste serološke metode, odnosno metode za proučavanje antitijela i antigena primjenom reakcija antigen-antitijelo koje se određuju u krvnom serumu i drugim tekućinama, kao i tjelesnim tkivima.
Detekcija antitela protiv antigena patogena u krvnom serumu pacijenta omogućava postavljanje dijagnoze bolesti. Serološke studije se koriste i za identifikaciju mikrobnih antigena, raznih biološki aktivnih supstanci, krvnih grupa, tkivnih i tumorskih antigena, imunoloških kompleksa, ćelijskih receptora itd.
Prilikom izolacije mikroba od pacijenta, patogen se identifikuje proučavanjem njegovih antigenskih svojstava pomoću imuno dijagnostičkih seruma, odnosno krvnih seruma hiperimuniziranih životinja koje sadrže specifična antitijela. To je takozvana serološka identifikacija mikroorganizama.
U mikrobiologiji i imunologiji široko se koriste reakcije aglutinacije, precipitacije, neutralizacije, reakcije koje uključuju komplement, korištenjem obilježenih antitijela i antigena (radioimunološki, enzimski imunotest, imunofluorescentne metode). Navedene reakcije se razlikuju po evidentiranom efektu i tehnici proizvodnje, međutim, sve se zasnivaju na reakciji interakcije antigena s antitijelom i koriste se za otkrivanje i antitijela i antigena. Imunološke reakcije karakteriziraju visoka osjetljivost i specifičnost.
Osobine interakcije antitijela s antigenima su osnova dijagnostičkih reakcija u laboratorijima. In vitro reakcija između antigena i antitijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. U specifičnoj fazi dolazi do brzog specifičnog vezivanja aktivnog centra antitela za determinantu antigena. Zatim dolazi nespecifična faza – sporija, koja se manifestuje vidljivim fizičkim pojavama, na primjer stvaranjem ljuskica (fenomen aglutinacije) ili precipitata u vidu zamućenja. Ova faza zahteva prisustvo određenih uslova (elektroliti, optimalni pH sredine).
Vezivanje determinante antigena (epitopa) za aktivni centar Fab fragmenta antitijela je zbog van der Waalsovih sila, vodoničnih veza i hidrofobne interakcije. Snaga i količina antigena vezanog antitijelima zavise od afiniteta, avidnosti antitijela i njihove valencije.
br. 2 Uzročnici lajšmanijaze. Taksonomija. Karakteristike. Mikrobiološka dijagnostika. Tretman.
Taksonomija: tip Sarcomastigophorae, podfil Mastigophora - flagella, klasa Zoomastigophora, red Kinetoplastida, rod Leishmania.
Uzgoj: NNN hranljiva podloga koja sadrži defibrinirani agar od krvi kunića. Leishmania također raste na korionskoj alantoičnoj membrani pilećeg embriona iu ćelijskim kulturama.
Epidemiologija: u toplim klimama. Mehanizam prenošenja patogena je prenosiv, ubodom vektora komaraca. Glavni izvori patogena: za kožnu antroponotsku lišmanijazu - ljudi; za kožnu zoonotsku lajšmaniozu - glodavci; za visceralnu lišmanijazu - ljudi; za mukokutanu lišmaniozu - glodavce, divlje i domaće životinje.
Patogeneza i klinika. Postoje dva uzročnika kožne lajšmanijaze: L. tropica - uzročnik antroponotske lajšmanijaze i L. major - uzročnik zoonotske kožne lajšmanijaze.
Antroponotsku kožnu lajšmaniozu karakterizira dug period inkubacije od nekoliko mjeseci. Na mjestu uboda komarca pojavljuje se tuberkul koji se nakon 3 mjeseca uvećava i ulcerira. Čirevi se najčešće nalaze na licu i gornjim ekstremitetima, a do kraja godine ostaju ožiljci. Zoonotska kožna lajšmanijaza (rana ulcerirajuća lajšmanijaza, Pendinski ulkus, ruralni oblik) je akutnija. Period inkubacije je 2-4 sedmice. Ulkusi koji plaču najčešće su lokalizirani na donjim ekstremitetima. Mukokutanu lajšmaniozu uzrokuje Leishmania complex L. braziliensis; Razvijaju se granulomatozne i ulcerativne lezije kože nosa, sluznice usta i larinksa. Antraponotsku visceralnu lišmanijazu uzrokuje Leishmania complex L. donovani; Kod pacijenata su zahvaćeni jetra, slezena, limfni čvorovi, koštana srž i probavni trakt.
imunitet: uporan doživotno
U razmazima (iz tuberkula, sadržaja čireva, punktata iz organa), obojenih prema Romanovsky-Giemsi, nalaze se intracelularno smještene male lajšmanije ovalnog oblika (amastigoti). Da biste izolovali čistu kulturu patogena, inokulirajte na NNN medijum: inkubacija 3 nedelje. Serološke metode nisu dovoljno specifične. Moguće je koristiti RIF, ELISA.
Kožni alergijski test za HNL na lajšmanin koristi se u epidemiološkim studijama lajšmanijaze.
tretman: Za visceralnu lišmanijazu koriste se preparati antimona i diamidina (pentamidin). Za kožnu lišmanijazu - kinakrin, amfotericin.
Prevencija: uništavati bolesne životinje, boriti se protiv glodara i komaraca. Imunoprofilaksa kožne lajšmanijaze provodi se inokulacijom žive kulture L. major.
TICKET#28
br. 1Imunoglobulini, struktura i funkcije.
Priroda imunoglobulina. Kao odgovor na unošenje antigena, imuni sistem proizvodi antitela – proteine koji se mogu specifično vezati za antigen koji je izazvao njihovo formiranje, i na taj način učestvovati u imunološkim reakcijama. Antitijela se odnose na β-globuline, odnosno najmanje pokretnu frakciju proteina krvnog seruma u električnom polju. U tijelu, β-globuline proizvode posebne ćelije - plazma ćelije. β-globulini koji nose funkcije antitijela nazivaju se imunoglobulini i označeni su simbolom Ig. Stoga su antitijela imunoglobulini proizvedeni kao odgovor na uvođenje antigena i sposobni za specifičnu interakciju s istim antigenom.
Funkcije. Primarna funkcija je interakcija njihovih aktivnih centara sa njihovim komplementarnim determinantama antigena. Sekundarna funkcija je njihova sposobnost da:
Vezuju antigen kako bi ga neutralisali i eliminisali iz organizma, odnosno učestvovali u formiranju zaštite od antigena;
Učestvuju u prepoznavanju „stranog” antigena;
Osigurati saradnju imunokompetentnih ćelija (makrofaga, T- i B-limfocita);
Učestvuju u različitim oblicima imunološkog odgovora (fagocitoza, funkcija ubojice, HNT, HRT, imunološka tolerancija, imunološka memorija).
Struktura antitijela. Po svom hemijskom sastavu, imunoglobulinski proteini se klasifikuju kao glikoproteini, jer se sastoje od proteina i šećera; izgrađen od 18 aminokiselina. Imaju razlike u vrstama povezane uglavnom sa skupom aminokiselina. Njihovi molekuli su cilindričnog oblika i vidljivi su u elektronskom mikroskopu. Do 80% imunoglobulina ima konstantu sedimentacije 7S; otporan na slabe kiseline, alkalije, zagrijavanje do 60 °C. Imunoglobulini se iz krvnog seruma mogu izolovati fizičkim i hemijskim metodama (elektroforeza, izoelektrična precipitacija alkoholom i kiselinama, isoljavanje, afinitetna hromatografija itd.). Ove metode se koriste u proizvodnji za pripremu imunobioloških preparata.
Imunoglobulini se prema svojoj strukturi, antigenskim i imunobiološkim svojstvima dijele u pet klasa: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD. Imunoglobulini M, G, A imaju podklase. Na primjer, IgG ima četiri podklase (IgG, IgG 2, IgG 3, IgG 4). Sve klase i podklase razlikuju se po sekvenci aminokiselina.
Molekule imunoglobulina svih pet klasa sastoje se od polipeptidnih lanaca: dva identična teška lanca H i dva identična laka lanca L, međusobno povezani disulfidnim mostovima. Shodno tome, svaka klasa imunoglobulina, tj. M, G, A, E, D, postoji pet vrsta teških lanaca: ? (mu), ? (gama), ? (alfa), ? (epsilon) i? (delta), koji se razlikuju po antigenosti. Laki lanci svih pet klasa su uobičajeni i dolaze u dva tipa: ? (kapa) i? (lambda); L-lanci imunoglobulina različitih klasa mogu se kombinovati (rekombinovati) sa homolognim i heterolognim H-lancima. Međutim, u istoj molekuli mogu postojati samo identični L-lanci (? ili?). I H- i L-lanci imaju varijabilnu - V regiju, u kojoj sekvenca aminokiselina nije konstantna, i konstantnu - C regiju sa konstantnim skupom aminokiselina. U lakim i teškim lancima razlikuju se NH 2 - i COOH-terminalne grupe.
Tokom obrade? -globulin sa merkaptoetanolom razgrađuje disulfidne veze i molekul imunoglobulina se razlaže u zasebne lance polipeptida. Kada je izložen proteolitičkom enzimu papainu, imunoglobulin se dijeli na tri fragmenta: dva nekristalizirajuća fragmenta koji sadrže determinantne grupe za antigen i nazivaju se Fab fragmenti I i II i jedan Fc fragment koji kristalizira. FabI i FabII fragmenti su slični po svojstvima i sastavu aminokiselina i razlikuju se od Fc fragmenta; Fab i Fc fragmenti su kompaktne formacije povezane jedna s drugom fleksibilnim dijelovima H-lanca, zbog čega molekuli imunoglobulina imaju fleksibilnu strukturu.
I H lanci i L lanci imaju različite, linearno povezane kompaktne regije koje se nazivaju domeni; ima ih 4 u H-lancu, a 2 u L-lancu.
Aktivni centri, ili determinante, koji se formiraju u V regijama zauzimaju približno 2% površine molekula imunoglobulina. Svaki molekul sadrži dvije determinante vezane za hipervarijabilne regije H i L lanaca, odnosno svaki molekul imunoglobulina može vezati dva molekula antigena. Prema tome, antitela su dvovalentna.
Tipična struktura molekula imunoglobulina je IgG. Preostale klase imunoglobulina razlikuju se od IgG po dodatnim elementima organizacije svojih molekula.
Kao odgovor na uvođenje bilo kojeg antigena, mogu se proizvesti antitijela svih pet klasa. Obično se prvo proizvodi IgM, zatim IgG, ostalo nešto kasnije.
br. 2 Uzročnik klamidije. Taksonomija. Karakteristike. Mikrobiološka dijagnostika. Tretman.
Taksonomija: red Chlamydiales, porodica Chlamydaceae, rod Chlamydia. Rod je predstavljen vrstama C.trachomatis, C.psittaci, C.pneumoniae.
Bolesti uzrokovane klamidijom se nazivaju klamidija. Bolesti uzrokovane C. trachomatis i C. pneumoniae su antroponoze. Ornitoza, uzrokovana C. psittaci, je zooantroponotska infekcija.
Morfologija klamidije: male, gram “-” bakterije, sfernog oblika. Ne formiraju spore, nema flagela ili kapsula. Ćelijski zid: 2-slojna membrana. Imaju glikolipide. Po Gramu - crvena. Glavna metoda bojenja je Romanovsky-Giemsa.
2 oblika postojanja: elementarna tijela (neaktivne infektivne čestice, izvan ćelije); retikularna tijela (unutarnje ćelije, vegetativni oblik).
Uzgoj: Može se razmnožavati samo u živim ćelijama. U žumančanoj vrećici pilećih embriona u razvoju, u tijelu osjetljivih životinja i u ćelijskoj kulturi
Aktivnost enzima: mala. Oni fermentiraju pirogrožđanu kiselinu i sintetiziraju lipide. Nisu u stanju sintetizirati visokoenergetska jedinjenja.
Antigenska struktura: Antigeni tri tipa: termostabilni lipopolisaharid specifičan za rod (u ćelijskom zidu). Detektovano pomoću RSC-a; vrsta-specifični antigen proteinske prirode (u vanjskoj membrani). Detektovano pomoću RIF-a; varijantno-specifični antigen proteinske prirode.
Faktori patogenosti. Proteini vanjske membrane klamidije povezani su sa njihovim adhezivnim svojstvima. Ovi adhezini se nalaze samo u elementarnim tijelima. Hlamidija proizvodi endotoksin. Neke klamidije imaju protein toplotnog šoka koji može izazvati autoimune reakcije.
Otpor. Visok do različitih faktora okoline. Otporan na niske temperature i sušenje. Osetljiv na toplotu.
C. trachomatis je uzročnik bolesti ljudskog genitourinarnog sistema, očiju i respiratornog trakta.
Trahom je kronična zarazna bolest koju karakterizira oštećenje konjunktive i rožnice oka. Antroponoza. Prenosi se kontaktom i kućnim kontaktom.
Patogeneza: utiče na sluzokožu očiju. Prodire u epitel konjunktive i rožnice, gdje se umnožava, uništavajući ćelije. Razvija se folikularni keratokonjunktivitis.
dijagnostika: pregled struganja iz konjuktive. U zahvaćenim ćelijama, bojenje Romanovsky-Giemsa otkriva ljubičaste citoplazmatske inkluzije koje se nalaze u blizini jezgra - tijela Provacek. Za otkrivanje specifičnog klamidijskog antigena u zahvaćenim stanicama, također se koriste RIF i ELISA. Ponekad pribjegavaju uzgoju trahoma klamidije na pilećim embrionima ili ćelijskoj kulturi.
tretman: antibiotici (tetraciklin) i imunostimulansi (interferon).
Prevencija: Nespecifičan.
Urogenitalna klamidija je spolno prenosiva bolest. Ovo je akutna/kronična zarazna bolest, koju karakterizira primarno oštećenje genitourinarnog trakta.
Ljudska infekcija se javlja preko sluzokože genitalnog trakta. Glavni mehanizam infekcije je kontakt, put prijenosa je seksualni.
Imunitet: ćelijski, sa serumom inficiranih ljudi - specifična antitijela. Nakon bolesti se ne formira.
Dijagnostika: Za očne bolesti koristi se bakterioskopska metoda - intracelularne inkluzije se otkrivaju u struganjima iz epitela konjunktive. Za otkrivanje antigena klamidije u zahvaćenim stanicama koristi se RIF. U slučaju oštećenja genitourinarnog trakta može se koristiti biološka metoda koja se zasniva na infekciji ćelijske kulture ispitivanim materijalom (epitelni struganje iz uretre, vagine).
RIF i ELISA mogu otkriti antigene klamidije u test materijalu. Serološka metoda - za otkrivanje IgM protiv C. trachomatis u dijagnostici pneumonije kod novorođenčadi.
Tretman. antibiotici (azitromicin iz grupe makrolida), imunomodulatori, eubiotici.
Prevencija. Samo nespecifično (liječenje pacijenata), lična higijena.
Lymphogranuloma venereum je spolno prenosiva bolest koju karakterizira oštećenje genitalnih organa i regionalnih limfnih čvorova. Mehanizam infekcije je kontakt, put prenošenja je seksualni.
imunitet: perzistentni, ćelijski i humoralni imunitet.
dijagnostika: Materijal za istraživanje - gnoj, biopsija zahvaćenih limfnih čvorova, krvni serum. Bakterioskopska metoda, biološka (kultivacija u žumančanoj vrećici pilećeg embriona), serološka (RSC sa uparenim serumom je pozitivan) i alergološka (intradermalni test sa alergenom na klamidiju) metode.
Tretman. Antibiotici - makrolidi i tetraciklini.
Prevencija: Nespecifičan.
C. pneumoniae je uzročnik respiratorne klamidije, uzrokujući akutni i kronični bronhitis i upalu pluća. Antroponoza. Infekcija se prenosi kapljicama iz vazduha. U pluća ulaze kroz gornje disajne puteve. Izazvati upalu.
dijagnostika: postavljanje RSC-a za otkrivanje specifičnih antitijela (serološka metoda). Prilikom primarne infekcije uzima se u obzir otkrivanje IgM. RIF se također koristi za otkrivanje hlamidijskog antigena i PCR.
tretman: To se radi upotrebom antibiotika (tetraciklina i makrolida).
Prevencija: Nespecifičan.
S. psittaci je uzročnik ornitoze, akutne zarazne bolesti koju karakteriše oštećenje pluća, nervnog sistema i parenhimskih organa (jetra, slezina) i intoksikacija.
Zooantroponoza. Izvori infekcije su ptice. Mehanizam infekcije je aerogeni, put prenosa je vazdušno-kapnicom. Uzročnik je putem sluzi. školjke dišu. putevi, u epitel bronha, alveole, umnožavanje, upala.
dijagnostika: Materijal za istraživanje - krv, sputum pacijenta, krvni serum za serološka istraživanja.
Koristi se biološka metoda - uzgoj klamidije u žumančastoj vrećici pilećeg embriona, u ćelijskoj kulturi. Serološka metoda. RSK, RPGA, ELISA se koriste pomoću uparenih krvnih seruma pacijenata. Intradermalni alergijski test sa ornitinom.
Tretman: antibiotici (tetraciklini, makrolidi).
TICKET#29
Br. 1 Uzročnik difterije. Taksonomija i karakteristike. Uslovno patogene korinebakterije. Mikrobiološka dijagnostika. Detekcija anoksičnog imuniteta. Specifična prevencija i liječenje.
Difterija je akutna zarazna bolest koju karakterizira fibrinozna upala u ždrijelu, larinksu, a rjeđe u drugim organima i simptomima intoksikacije. Njegov uzročnik je Corynebacterium diphtheriae.
Taksonomija. Corynebacterium pripada odjelu Firmicutes, rodu Corynebacterium.
Morfološka i tinktorijalna svojstva. Uzročnik difterije karakterizira polimorfizam: tanki, blago zakrivljeni štapići (najčešći) i kokoidni i razgranati oblici. Bakterije se često nalaze pod uglom jedna prema drugoj. Ne formiraju spore, nemaju flagele, a mnogi sojevi imaju mikrokapsulu. Karakteristična karakteristika je prisustvo zrna volutina na krajevima štapa (što uzrokuje oblik batine). Uzročnik difterije pozitivno se mrlje na Gramu.
Kulturna dobra. Fakultativni anaerob, optimalan. temperaturu. Mikrob raste na posebnim hranjivim podlogama, na primjer, na Claubergovoj podlozi (krvavi telurit agar), na kojoj bacil difterije stvara kolonije 3 vrste: a) velike, sive, s neravnim rubovima, radijalnim prugama, koje podsjećaju na tratinčice; b) mali, crni, konveksni, sa glatkim ivicama; c) slično prvom i drugom.
U zavisnosti od kulturnih i enzimskih svojstava razlikuju se 3 biološke varijante C.diphtheriae: gravis, mitis i intermediate intermedius.
Aktivnost enzima. Visoko. Oni fermentiraju glukozu i maltozu u kiselinu, ali ne razlažu saharozu, laktozu i manitol. Ne proizvode ureazu i ne stvaraju indol. Proizvodi enzim cistinazu, koji razgrađuje cistein do H 2 S. Formira katalazu, sukcinat dehidrogenazu.
Antigenska svojstva. O-antigeni su termostabilni polisaharidi koji se nalaze duboko u ćelijskom zidu. K-antigeni su površinski, termolabilni, sivkasto-specifični. Uz pomoć seruma na K-antigen C.diph. podijeljeni na serovare (58).
Faktori patogenosti. Egzotoksin koji remeti sintezu proteina i zbog toga utiče na ćelije miokarda, nadbubrežne žlezde, bubrege i nervne ganglije. Sposobnost proizvodnje egzotoksina je posljedica prisustva profaga u ćeliji koji nosi tox gen odgovoran za stvaranje toksina. Enzimi agresije - hijaluronidaza, neuraminidaza. Mikrokapsula je također faktor patogenosti.
Otpor. Otporan je na sušenje i niske temperature, pa može ostati na predmetima ili u vodi nekoliko dana.
Epidemiologija. Izvor difterije su bolesni ljudi. Infekcija se češće javlja preko respiratornog trakta. Moguć je i glavni put prijenosa zračnim putem - preko posteljine i posuđa.
Patogeneza. Ulazna vrata infekcije su sluznice ždrijela, nosa, respiratornog trakta, očiju, genitalija i površine rane. Na mjestu ulazne kapije uočava se fibrinozna upala, formira se karakterističan film koji se teško odvaja od podložnih tkiva. Bakterije oslobađaju egzotoksin koji ulazi u krvotok, uzrokujući toksinemiju. Toksin utiče na miokard, bubrege, nadbubrežne žlezde i nervni sistem.
Klinika. Postoje različiti lokalizacijski oblici difterije: difterija ždrijela, koja se opaža u 85-90% slučajeva, difterija nosa, larinksa, očiju, vanjskih genitalija, kože, rana. Period inkubacije se kreće od 2 do 10 dana. Bolest počinje povećanjem tjelesne temperature, bolom pri gutanju, pojavom filma na krajnicima i povećanjem limfnih čvorova. Razvija se oticanje larinksa, sapi od difterije, što može dovesti do gušenja i smrti. Ostale ozbiljne komplikacije koje također mogu uzrokovati smrt su toksični miokarditis i paraliza respiratornih mišića.
Imunitet. Nakon bolesti - uporan, intenzivan antitoksični imunitet. Od posebnog značaja je formiranje antitela na fragment B. Oni neutrališu histotoksin difterije, sprečavajući potonjeg da se veže za ćeliju. Antibakterijski imunitet – neojačan, sivkasto-specifičan
Mikrobiološka dijagnostika. Uz pomoć brisa pacijentu se uzima film i sluz iz grla i nosa. Za postavljanje preliminarne dijagnoze moguće je koristiti bakterioskopsku metodu. Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka: kultura na podlozi Klauber II (krvavi teluritni agar), na čvrstom serumskom mediju za otkrivanje proizvodnje cistinaze, na Hiss mediju, na podlozi za određivanje toksigenosti patogena. Intraspecifična identifikacija se sastoji od određivanja bio- i serovara. Za ubrzanu detekciju toksina difterije koriste se: IRHA (reakcija indirektne hemaglutinacije) sa dijagnostikom eritrocita antitela, reakcija neutralizacije antitela (prisustvo toksina se ocenjuje po efektu prevencije hemaggutinacije); RIA (radioimuni test) i ELISA (enzimski imunosorbentni test).
Tretman. Glavna metoda terapije je neposredna primjena specifičnog antitoksičnog antidifterijskog tekućeg konjskog seruma. Humani imunoglobulin protiv difterije za intravensku primjenu.
Povezane vakcine: DPT (apsorbovana vakcina protiv pertusisa-tetanusa), ADS (apsorbovani toksoid difterije-tetanusa).
Br. 2 Klase imunoglobulina, njihove karakteristike.
Imunoglobulini se prema svojoj strukturi, antigenskim i imunobiološkim svojstvima dijele u pet klasa: IgM, IgG, IgA, IgE, IgD.
Imunoglobulinska klasa G. Izotip G čini najveći dio Ig u krvnom serumu. On čini 70-80% svih serumskih Ig, a 50% se nalazi u tkivnoj tečnosti. Prosječan sadržaj IgG u krvnom serumu zdrave odrasle osobe iznosi 12 g/l. Poluživot IgG je 21 dan.
IgG je monomer, ima 2 centra za vezivanje antigena (mogu istovremeno da vežu 2 molekula antigena, dakle, njegova valencija je 2), molekulsku težinu od oko 160 kDa i konstantu sedimentacije 7S. Postoje podtipovi Gl, G2, G3 i G4. Sintetiziraju ga zreli B limfociti i plazma ćelije. Dobro se detektuje u krvnom serumu na vrhuncu primarnog i sekundarnog imunološkog odgovora.
Ima visok afinitet. IgGl i IgG3 vezuju komplement, pri čemu je G3 aktivniji od Gl. IgG4, poput IgE, ima citofilnost (tropizam ili afinitet za mastocite i bazofile) i uključen je u razvoj alergijske reakcije tipa I. U imunodijagnostičkim reakcijama, IgG se može manifestirati kao nekompletno antitijelo.
Lako prolazi kroz placentnu barijeru i pruža humoralni imunitet novorođenčetu u prva 3-4 mjeseca života. Takođe je sposoban da se luči u sekrete sluzokože, uključujući i u mleko difuzijom.
IgG osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena, pokreće citolizu posredovanu komplementom i ćelijski posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitijela.
Imunoglobulin klase M. Najveći molekul od svih Ig. Ovo je pentamer koji ima 10 centara za vezivanje antigena, odnosno valencija mu je 10. Molekularna težina mu je oko 900 kDa, konstanta sedimentacije 19S. Postoje podtipovi Ml i M2. Teški lanci IgM molekula, za razliku od drugih izotipova, izgrađeni su od 5 domena. Poluživot IgM je 5 dana.
On čini oko 5-10% svih serumskih Ig. Prosječan sadržaj IgM u krvnom serumu zdrave odrasle osobe je oko 1 g/l. Ovaj nivo kod ljudi dostiže se u dobi od 2-4 godine.
IgM je filogenetski najstariji imunoglobulin. Sintetiziraju ga prekursori i zreli B limfociti. Formira se na početku primarnog imunološkog odgovora, a ujedno je i prvi koji se sintetizira u tijelu novorođenčeta - određuje se već u 20. nedjelji intrauterinog razvoja.
Ima visoku avidnost i najefikasniji je aktivator komplementa putem klasičnog puta. Učestvuje u formiranju serumskog i sekretornog humoralnog imuniteta. Budući da je polimerna molekula koja sadrži J-lanac, može formirati sekretorni oblik i izlučivati se u mukozne sekrete, uključujući mlijeko. Većina normalnih antitijela i izoaglutinina su IgM.
Ne prolazi kroz placentu. Otkrivanje specifičnih antitijela izotipa M u krvnom serumu novorođenčeta ukazuje na bivšu intrauterinu infekciju ili defekt placente.
IgM osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena, pokreće citolizu posredovanu komplementom i citotoksičnost posredovanu ćelijama zavisnu od antitijela.
Imunoglobulin klase A postoji u serumskim i sekretornim oblicima. Oko 60% svih IgA nalazi se u mukoznim sekretima.
Serum IgA: On čini oko 10-15% svih serumskih Ig. Krvni serum zdrave odrasle osobe sadrži oko 2,5 g/l IgA, maksimum se postiže u dobi od 10 godina. Poluživot IgA je 6 dana.
IgA je monomer, ima 2 centra za vezivanje antigena (tj. 2-valentni), molekulsku težinu od oko 170 kDa i konstantu sedimentacije 7S. Postoje podtipovi A1 i A2. Sintetiziraju ga zreli B limfociti i plazma ćelije. Dobro se detektuje u krvnom serumu na vrhuncu primarnog i sekundarnog imunološkog odgovora.
Ima visok afinitet. Može biti nekompletno antitelo. Ne vezuje komplement. Ne prolazi kroz placentnu barijeru.
IgA osigurava neutralizaciju, opsonizaciju i obilježavanje antigena i pokreće citotoksičnost posredovanu ćelijama zavisnu od antitijela.
Sekretorni IgA: Za razliku od seruma, sekretorni sIgA postoji u polimernom obliku u obliku di- ili trimera (4- ili 6-valentni) i sadrži J- i S-peptide. Molekularna masa 350 kDa i više, konstanta sedimentacije 13S i više.
Sintetiziraju ga zreli B-limfociti i njihovi potomci - plazma ćelije odgovarajuće specijalizacije samo unutar sluzokože i izlučuju se u njihove sekrete. Količina proizvodnje može doseći 5 g dnevno. Bazen slgA smatra se najbrojnijim u tijelu - njegova količina premašuje ukupan sadržaj IgM i IgG. Nije otkriven u krvnom serumu.
Sekretorni oblik IgA je glavni faktor specifičnog humoralnog lokalnog imuniteta sluzokože gastrointestinalnog trakta, genitourinarnog sistema i respiratornog trakta. Zahvaljujući S-lancu, otporan je na proteaze. slgA ne aktivira komplement, već se efikasno vezuje za antigene i neutrališe ih. Sprječava adheziju mikroba na epitelnim stanicama i generalizaciju infekcije unutar sluzokože.
Imunoglobulin klase E. Naziva se i reagin. Sadržaj u krvnom serumu je izuzetno nizak - oko 0,00025 g/l. Detekcija zahtijeva korištenje posebnih visoko osjetljivih dijagnostičkih metoda. Molekularna težina - oko 190 kDa, konstanta sedimentacije - približno 8S, monomer. On čini oko 0,002% svih cirkulirajućih Ig. Ovaj nivo dostiže se u dobi od 10-15 godina.
Sintetizuju ga zreli B limfociti i plazma ćelije uglavnom u limfoidnom tkivu bronhopulmonalnog stabla i gastrointestinalnog trakta.
Ne vezuje komplement. Ne prolazi kroz placentnu barijeru. Ima izraženu citofilnost - tropizam za mastocite i bazofile. Učestvuje u razvoju preosjetljivosti neposrednog tipa - reakcija tipa I.
Imunoglobulin klase D. Nema puno podataka o Ig ovog izotipa. Gotovo u potpunosti sadržan u krvnom serumu u koncentraciji od oko 0,03 g/l (oko 0,2% od ukupnog cirkulirajućeg Ig). IgD ima molekularnu težinu od 160 kDa i konstantu sedimentacije 7S, monomer.
Ne vezuje komplement. Ne prolazi kroz placentnu barijeru. To je receptor za prekursore B-limfocita.
TICKET#30
Br. 1 Uzročnik amebijaze. Taksonomija. Karakteristično. Mikrobiološka dijagnostika. Specifičan tretman.
Taksonomija: tip Sarcomastigophorae, podfil Sarcodina, klasa Lobosia, red Amoebida.
morfologija: Postoje dvije faze razvoja patogena: vegetativni i cistični. Vegetativni stadij ima nekoliko oblika: veliki vegetativni (tkivni), mali vegetativni; precistična forma, slična luminalnoj, formirajući ciste.
Cista (stadij mirovanja) ima ovalni oblik. Zrela cista sadrži 4 jezgra. Luminalni oblik je neaktivan, živi u lumenu gornjeg dijela debelog crijeva kao bezopasni komensal, hrani se bakterijama i detritusom.
Veliki vegetativni oblik nastaje, pod određenim uslovima, od male vegetativne forme. Najveći je, formira pseudopodije i ima kretanje. Može fagocitirati crvena krvna zrnca. Nalazi se u svježem izmetu tokom amebijaze.
Uzgoj: na podlogama bogatim hranjivim tvarima.
Otpor: Izvan tijela, vegetativni oblici patogena brzo umiru (u roku od 30 minuta). Ciste su postojane u okolini i perzistiraju u izmetu i vodi. U hrani, povrću i voću, ciste traju nekoliko dana. Umiru kada se prokuvaju.
Epidemiologija: Amebijaza je antroponotska bolest; izvor invazije su ljudi. Mehanizam prijenosa je fekalno-oralni. Do infekcije dolazi kada se ciste unesu hranom, vodom ili kućnim potrepštinama.
Patogeneza i klinika: Ciste koje ulaze u crijevo i luminalni oblici ameba koji se tada formiraju iz njih mogu živjeti u debelom crijevu bez izazivanja bolesti. Kada se otpor tijela smanji, amebe prodiru u crijevni zid i razmnožavaju se. Razvija se crijevna amebijaza.
Trofozoiti u obliku tkiva su pokretljivi zbog stvaranja pseudopodija. Prodiru u zid debelog crijeva, uzrokujući nekrozu; sposoban da fagocitira crvena krvna zrnca; mogu se naći u ljudskom izmetu. Uz nekrozu nastaju čirevi. Klinički, crijevna amebijaza se manifestira u obliku česte, rijetke, krvave stolice, praćene povišenom temperaturom i dehidracijom. U stolici se nalaze gnoj i sluz, ponekad sa krvlju.
Amebe s krvotokom mogu ući u jetru, pluća i mozak, što rezultira razvojem ekstraintestinalne amebijaze.
imunitet: Nestabilan, pretežno se aktivira ćelijska komponenta.
Mikrobiološka dijagnostika. Glavna metoda je mikroskopski pregled stolice pacijenta, kao i sadržaja apscesa unutrašnjih organa. Razmazi se boje Lugolovom otopinom ili hematoksilinom. Serološki testovi (RNGA, ELISA, RSK): najveći titar antitijela u krvnom serumu otkriva se kod ekstraintestinalne amebijaze.
tretman: Koriste se metronidazol i furamid.
Prevencija: identifikacija i liječenje cististih ekskretora i prenosilaca ameba, provođenje općih sanitarnih mjera.
br. 2 Interferoni. Priroda, načini proizvodnje. Aplikacija.
Interferoni su glikoproteini koje proizvode stanice kao odgovor na virusnu infekciju i druge podražaje. Oni blokiraju reprodukciju virusa u drugim ćelijama i učestvuju u interakciji ćelija imunog sistema. Postoje dvije serološke grupe interferona: tip I - IFN-? i IFN -?; Tip II - IFN-.? Interferoni tipa I imaju antivirusno i antitumorsko dejstvo, dok interferoni tipa II regulišu specifičan imuni odgovor i nespecifičnu rezistenciju.
Interferon (leukocit) proizvode bijela krvna zrnca tretirana virusima i drugim agensima. β-interferon (fibroblast) proizvode fibroblasti tretirani virusima.
IFN tipa I, vezivanjem za zdrave ćelije, štiti ih od virusa. Antivirusni efekat tipa I IFN-a takođe može biti posledica činjenice da je u stanju da inhibira proliferaciju ćelija ometajući sintezu aminokiselina.
IFN-? koje proizvode T limfociti i NK. Stimuliše aktivnost T- i B-limfocita, monocita/makrofaga i neutrofila. Inducira apoptozu aktiviranih makrofaga, keratinocita, hepatocita, ćelija koštane srži, endotelnih ćelija i potiskuje apoptozu perifernih monocita i neurona inficiranih herpesom.
Genetski modifikovani interferon leukocita proizvodi se u prokariotskim sistemima (Escherichia coli). Biotehnologija za proizvodnju leukocitnog interferona obuhvata sledeće korake: 1) tretman leukocitne mase induktorima interferona; 2) izolovanje mešavine mRNK iz tretiranih ćelija; 3) dobijanje ukupne komplementarne DNK korišćenjem reverzne transkriptaze; 4) umetanje cDNK u plazmid E. coli i njegovo kloniranje; 5) selekcija klonova koji sadrže interferonske gene; 6) uključivanje jakog promotera u plazmid za uspešnu transkripciju gena; 7) ekspresija gena za interferon, tj. sinteza odgovarajućeg proteina; 8) uništavanje prokariotskih ćelija i prečišćavanje interferona afinitetnom hromatografijom.
Interferoni primijeniti za prevenciju i liječenje brojnih virusnih infekcija. Njihov učinak je određen dozom lijeka, ali visoke doze interferona imaju toksični učinak. Interferoni se široko koriste za gripu i druge akutne respiratorne bolesti. Lijek je efikasan u ranoj fazi bolesti i primjenjuje se lokalno. Interferoni imaju terapeutski učinak protiv hepatitisa B, herpesa, kao i malignih neoplazmi.
11621 0
Serološke reakcije se označavaju u skladu sa pojavama koje prate formiranje kompleksa antigen-antitijelo tokom interakcije komponenti različitih svojstava. Postoje reakcije aglutinacije, precipitacije i lize.
Reakcija aglutinacije (RA)
Reakcija aglutinacije (RA) temelji se na korištenju korpuskularnog antigena (suspenzije bakterija, senzibiliziranih eritrocita, čestica lateksa, itd.) u interakciji sa specifičnim antitijelima, kao rezultat toga nastali kompleks antigen-antitijelo precipitira. Ova reakcija se široko koristi u laboratorijskoj praksi za serološku dijagnozu bakterijskih infekcija i za identifikaciju izoliranih mikroorganizama.
RA se koristi za dijagnostiku mnogih infektivnih bolesti: bruceloze (Wright, Heddlesonova reakcija), tularemije, leptospiroze (RAL - Leptospira aglutinacija i reakcija lize), listerioze, tifusa (RAR - Rickettsia aglutination reakcija), šigeloze, yersiniosis, pseudotu itd.
Indirektna ili pasivna reakcija aglutinacije (RIGA ili RPGA).
Za insceniranje ove reakcije koriste se crvena krvna zrnca životinja (ovce, majmuni, zamorci, neke ptice) senzibilizirana antitijelima ili antigenom, što se postiže inkubacijom suspenzije crvenih krvnih stanica i otopine antigena ili imunološkog seruma.
Dijagnostikumi dobijeni na osnovu eritrocita senzibiliziranih antigenima nazivaju se dijagnostici antigena eritrocita. Namijenjeni su za određivanje antitijela u serijskim razrjeđenjima krvnih seruma, na primjer, erythrocyte shigella diagnosticums, erythrocyte salmonella O-diagnosticums.
Shodno tome, naziva se dijagnostika zasnovana na eritrocitima senzibiliziranim specifičnim imunoglobulinima antitela(imunoglobulin) dijagnostikumi i služe za identifikaciju antigena u različitim materijalima, na primjer, eritrocitni imunoglobulin difterija dijagnostikum za RIGA, koji se koristi za otkrivanje egzotoksina difterije korinebakterija u tekućem hranjivom mediju kada se u njega inokulira materijal iz nosa i orofarinksa.
Reakcija hemaglutinacije se koristi za dijagnosticiranje kako bakterijskih (tifusna groznica, paratifus, dizenterija, bruceloza, kuga, kolera itd.) tako i virusnih (gripa, adenovirusne infekcije, boginje itd.) infekcija. U smislu osjetljivosti i specifičnosti, RIGA je superiornija od RA.
Reakcija inhibicije hemaglutinacije (HAI)
Reakcija inhibicije hemaglutinacije (HAI) se koristi za titriranje antivirusnih antitijela u krvnom serumu, kao i za utvrđivanje vrste izoliranih virusnih kultura. RTGA se može koristiti za dijagnosticiranje onih virusnih infekcija čiji patogeni imaju hemaglutinirajuća svojstva.
Princip metode je da serum koji sadrži antitijela na određenu vrstu virusa potiskuje njegovu hemaglutinirajuću aktivnost i crvena krvna zrnca ostaju neaglutinirana.
Reakcija inhibicije (odlaganja) pasivne hemaglutinacije (RPHA).
U RTPGA su uključene tri komponente: imuni serum, antigen (testni materijal) i senzibilizirani eritrociti.
Ako testni materijal sadrži antigen koji specifično reagira s antitijelima imunološkog standardnog seruma, onda ih veže, a naknadnim dodavanjem eritrocita senzibiliziranih antigenom homolognim serumu, hemaglutinacija ne dolazi.
RTPHA se koristi za detekciju mikrobnih antigena, za njihovo kvantitativno određivanje, kao i za kontrolu specifičnosti RTPGA.
Reakcija lateks aglutinacije (RLA)
Čestice lateksa se koriste kao nosioci antitijela (imunoglobulina). RLA je ekspresna metoda za dijagnosticiranje zaraznih bolesti, uzimajući u obzir potrebno vrijeme (do 10 minuta) i mogućnost detekcije antigena u maloj količini test materijala.
RLA se koristi za indikaciju antigena Streptococcus pneumoniae, Haemophilus influenzae tip b, Neisseria meningitidis u cerebrospinalnoj tečnosti, za otkrivanje streptokoka grupe A u brisevima grla, za dijagnostiku salmoneloze, jersinioze i drugih bolesti. Osetljivost metode je 1-10 ng/ml, odnosno 10³ -10⁶ bakterijskih ćelija u 1 µl.
Reakcija koaglutinacije (CoA)
Reakcija koaglutinacije (CoA) zasniva se na sposobnosti proteina A stafilokoka da veže specifične imunoglobuline. RCA – metoda ekspresne dijagnostike – služi za identifikaciju topljivih termostabilnih antigena u ljudskim sekretima i u sastavu cirkulirajućih imunoloških kompleksa (CIC). Detekcija specifičnih antigena u sastavu CEC-a zahtijeva njihovu preliminarnu precipitaciju iz krvnog seruma.
Reakcija precipitacije
U reakciji precipitacije (RP), kao rezultat interakcije antitijela sa visoko dispergiranim rastvorljivim antigenima (proteini, polisaharidi), nastaju kompleksi uz učešće komplementa - precipitata. To je osjetljiv test koji se koristi za otkrivanje i karakterizaciju raznih antigena i antitijela. Najjednostavniji primjer visokokvalitetnog RP je formiranje neprozirne precipitacijske trake u epruveti na granici slojevitosti antigena na imunološkom serumu - reakcija taloženja prstena. Široko se koriste različiti tipovi RP u polutečnom agaru ili agaroznim gelovima (metoda dvostruke imunodifuzije, metoda radijalne imunodifuzije, imunoelektroforeza).
Reakcija fiksacije komplementa (CFR)
Reakcija fiksacije komplementa (CFR) zasniva se na fenomenu hemolize uz učešće komplementa, tj. sposoban da detektuje samo antitela koja fiksiraju komplement.
RSC se široko koristi za dijagnostiku mnogih bakterijskih i virusnih infekcija, rikecija, klamidije, infektivne mononukleoze, protozoalnih infekcija i helmintioza. RSC je složena serološka reakcija u kojoj su uključena dva sistema: test (krvni serum), predstavljen antigen-antitijelo i sistem komplementa, i hemolitički (crvena krvna zrnca ovaca + hemolitički serum). Hemolitički serum je serum krvi kunića inaktiviran toplinom imuniziran eritrocitima ovaca. Sadrži antitijela protiv crvenih krvnih zrnaca ovaca.
Pozitivan RSC rezultat - odsustvo hemolize - se opaža ako test serum sadrži antitijela homologna antigenu. U ovom slučaju nastali kompleks antigen-antitelo vezuje komplement, a u nedostatku slobodnog komplementa, dodavanje hemolitičkog sistema nije praćeno hemolizom. Ako u serumu nema antitela koja odgovaraju antigenu, ne dolazi do stvaranja kompleksa antigen-antitelo, komplement ostaje slobodan i serum izaziva hemolizu crvenih krvnih zrnaca, tj. prisustvo hemolize je negativan rezultat reakcije.
Yushchuk N.D., Vengerov Yu.Ya.