Uputstvo za upotrebu „Seta reagensa za određivanje antigena i antitela rezus sistema u ljudskoj krvi” (ag za Coombsov test). Coombsov test Pozitivan Coombsov test kod novorođenčeta

– antiglobulinski test za identifikaciju u Rh-negativnoj krvi nepotpunih antieritrocitnih antitijela na Rh faktor – specifični protein koji se nalazi na površini eritrocita Rh-pozitivne krvi. Postoje dvije vrste ovog testa: direktan – otkrivanje antitijela na površini crvenih krvnih zrnaca, indirektni – otkrivanje antitijela u krvnom serumu. Direktno testiranje se provodi u dijagnostici i praćenju liječenja bolesti krvi: hemolitičke anemije, hemolitičke bolesti novorođenčadi i drugih. Indirektni test se radi radi procene kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca tokom transfuzije, kao i utvrđivanja prisustva i rizika od Rh konflikta prilikom planiranja i vođenja trudnoće. Materijal za Coombsov test je venska krv; Obično oba testa daju negativan rezultat. Analiza se završava u roku od jednog dana.

Coombsov test je klinički test Rh negativne krvi čiji je cilj otkrivanje antitijela na Rh faktor. Test se koristi za identifikaciju rizika od razvoja Rh konflikta i hemolitičkih reakcija. U svakoj osobi, površina crvenih krvnih stanica sadrži određeni skup antigena ili aglutinogena - spojeva različite prirode, čije se prisustvo ili odsutnost koristi za određivanje krvne grupe i Rh faktora. U medicinskoj praksi postoje mnoge vrste antigena, aglutinogeni A i B koji određuju krvnu grupu, a aglutinogen D, Rh faktor, od najveće su praktične važnosti. S pozitivnim Rh faktorom, D antigeni se otkrivaju na vanjskoj membrani eritrocita, ali s negativnim faktorom nisu.

Coombsov test, koji se naziva i antiglobulinski test, ima za cilj otkrivanje nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela na sistem Rh faktora u krvi. Antitijela na Rh faktor su specifični imunoglobulini koji se stvaraju u Rh-negativnoj krvi kada u nju uđu crvena krvna zrnca sa aglutinogenom D. To se može dogoditi kada se krv fetusa i trudnice pomiješa, tokom transfuzije krvi koja se obavlja bez prethodne krvi. kucanje. Coombsov test postoji u dvije verzije - direktnoj i indirektnoj. Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, otkrivaju se antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih stanica. Studija se koristi za određivanje uzroka hemolitičke reakcije. Indirektni Coombsov test je usmjeren na otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u krvnoj plazmi. Potrebno je utvrditi kompatibilnost krvi između davaoca i primaoca ili majke i fetusa, te pomaže u sprječavanju razvoja Rh konflikta i naknadne hemolize crvenih krvnih zrnaca.

Krv za obje verzije Coombsovog testa uzima se iz vene. Analiza se vrši aglutinacijom upotrebom antiglobulinskog seruma. Rezultati istraživanja koriste se u hematologiji za identifikaciju uzroka hemolitičkih reakcija, u hirurgiji i reanimaciji pri provođenju transfuzije krvi, u akušerstvu i ginekologiji pri praćenju trudnoće kod žena s Rh negativnom krvlju.

Indikacije

Direktni Coombsov test, koji otkriva antitijela pričvršćena na površinu crvenih krvnih zrnaca, propisan je za hemolitičke reakcije (razaranje crvenih krvnih stanica) različitog porijekla. Studija je indicirana za primarnu autoimunu hemolitičku anemiju, posttransfuzijsku hemolitičku anemiju, hemolitičku bolest novorođenčeta, hemolizu crvenih krvnih zrnaca uzrokovanu autoimunim, tumorskim ili infektivnim bolestima, kao i uzimanje lijekova kao što su kinidin, metildopa, prokainamid . Indirektni Coombsov test, koji određuje antitijela u krvnoj plazmi, koristi se za sprječavanje razvoja Rh konflikta. Indiciran je za pacijente koji se pripremaju za transfuziju krvi, kao i za trudnice sa negativnim Rh faktorom, pod uslovom da budući otac djeteta ima pozitivan Rh faktor.

Da bi se utvrdila Rh kompatibilnost, Coombsov test se ne propisuje pacijentima s Rh pozitivnom krvlju. U tim slučajevima već postoje antigeni na površini crvenih krvnih zrnaca, proizvodnja antitijela ne može biti izazvana transfuzijom krvi ili ulaskom krvi fetusa u krvotok trudnice. Također, studija nije indicirana za trudnice ako oba roditelja imaju negativan Rh faktor – nasljednu recesivnu osobinu. Dijete u takvim parovima uvijek ima Rh-negativnu krv, nemoguć je imunološki sukob s majkom. Kod hemolitičkih patologija, antiglobulinski test se ne koristi za praćenje uspješnosti terapije, jer rezultati ne odražavaju aktivnost procesa uništavanja crvenih krvnih stanica.

Ograničenje Coombsovog testa je mukotrpnost istraživačkog postupka - da bi se dobili pouzdani rezultati, potrebno je pridržavati se temperaturnih i vremenskih uvjeta, pravila za pripremu reagensa i biomaterijala. Prednosti Coombsovog testa uključuju njegovu visoku osjetljivost. Kod hemolitičke anemije, rezultati ovog testa ostaju pozitivni, čak i ako se normalizuju nivoi hemoglobina, bilirubina i retikulocita.

Priprema za analizu i prikupljanje materijala

Materijal koji se koristi za izvođenje Coombsovog testa je venska krv. Ne postoje posebni zahtjevi za vrijeme uzimanja uzorka krvi i za pripremu pacijenta. Kao i kod svake studije, preporučuje se pauza nakon jela od najmanje 4 sata, a u posljednjih 30 minuta prestati pušiti, vježbati i izbjegavati emocionalni stres. Također je vrijedno unaprijed razgovarati sa svojim liječnikom o potrebi prestanka uzimanja lijekova - neki lijekovi mogu iskriviti rezultate Coombsovog testa. Krv se vadi štrcaljkom iz kubitalne vene, ili rjeđe iz vene na stražnjoj strani šake. U roku od nekoliko sati materijal se dostavlja u laboratoriju.

Prilikom izvođenja direktnog Coombsovog testa, serumu krvi pacijenta dodaje se antiglobulinski serum. Nakon nekog vremena, smjesa se ispituje na prisustvo aglutinata - oni nastaju ako postoje antitijela na crvenim krvnim zrncima. Ako je rezultat pozitivan, određuje se titar aglutinacije. Indirektni Coombsov test se sastoji od više koraka. Prvo, antitela prisutna u serumu se fiksiraju na ubrizganim crvenim krvnim zrncima tokom inkubacije. Zatim se uzorku dodaje antiglobulinski serum, nakon nekog vremena utvrđuje se prisustvo i titar aglutinata. Period analize je 1 dan.

Normalni rezultati

Obično je rezultat direktnog Coombsovog testa negativan (-). To znači da u krvi ne postoje antitijela povezana s crvenim krvnim zrncima i ne mogu izazvati hemolizu. Normalan rezultat indirektnog Coombs testa je također negativan (-), odnosno nema antitijela na Rh faktor u krvnoj plazmi. Prilikom pripreme za transfuziju krvi za primaoca, to znači kompatibilnost sa krvlju davaoca pri praćenju trudnoće, to znači odsustvo Rh senzibilizacije majke, nizak rizik od razvoja imunološkog konflikta. Fiziološki faktori, poput prehrane ili fizičke aktivnosti, ne mogu utjecati na rezultat testa. Stoga, ako je rezultat pozitivan, potrebna je konsultacija s liječnikom.

Dijagnostička vrijednost analize

Pozitivan rezultat Coombs testa izražava se kvalitativno, od (+) do (++++), ili kvantitativno, titrima od 1:16 do 1:256. Određivanje koncentracije antitijela na crvenim krvnim zrncima i u krvnom serumu vrši se u oba tipa uzoraka. Ako je direktni Coombsov test pozitivan, na vanjskoj membrani crvenih krvnih zrnaca otkrivaju se antitijela koja dovode do uništenja ovih krvnih stanica. Uzrok može biti transfuzija krvi bez prethodne tipizacije - posttransfuzijska hemolitička reakcija, kao i eritroblastoza novorođenčeta, hemolitička reakcija zbog upotrebe lijekova, primarna ili sekundarna autoimuna hemolitička anemija. Sekundarna destrukcija crvenih krvnih zrnaca može biti uzrokovana sistemskim eritematoznim lupusom, Evansovim sindromom, Waldenstromovom makroglobulinemijom, paroksizmalnom hladnom hemoglobinurijom, hroničnom limfocitnom leukemijom, limfomom, infektivnom mononukleozom, sifilisom, mikoplazma pneumoplazmama.

Pozitivan rezultat indirektnog Coombs testa ukazuje na prisustvo antitijela na Rh faktor u plazmi. U praksi to znači da je došlo do Rh senzibilizacije, te postoji mogućnost razvoja Rh konflikta nakon infuzije donorske krvi tokom trudnoće. Da bi se spriječile komplikacije trudnoće, žene s pozitivnim rezultatom Coombs testa stavljaju se u poseban registar.

Liječenje abnormalnosti

Coombsov test se odnosi na izoserološke studije. Njegovi rezultati omogućavaju identifikaciju hemolitičke reakcije, kao i utvrđivanje kompatibilnosti krvi davaoca i primaoca, majke i fetusa, kako bi se spriječio razvoj Rh konflikta. Ako je rezultat testa pozitivan, potrebno je potražiti savjet svog liječnika - akušera-ginekologa, hematologa, kirurga.

Antitijela, koji se nalazi na površini eritrocita, može biti u statičkom ili slobodnom stanju krvna plazma. U zavisnosti od stanja antitijela, izvodi se direktna ili indirektna Coombsova reakcija. Ako postoji razlog za vjerovanje da su antitijela fiksirana na površini crvenih krvnih zrnaca, izvodi se direktan Coombsov test. U ovom slučaju, test se odvija u jednoj fazi - zbrajanju antiglobulinski serum. Ako su nekompletna antitijela prisutna na površini crvenih krvnih stanica, aglutinacija crvena krvna zrnca

Indirektna reakcija

Indirektna Coombsova reakcija se javlja u 2 faze. Prvo morate umjetno implementirati senzibilizacija crvena krvna zrnca Da bi se to postiglo, crvena krvna zrnca i krvni serum koji se testira se inkubiraju, što uzrokuje fiksiranje antitijela na površini crvenih krvnih stanica. Nakon čega se provodi druga faza Coombsovog testa - dodavanje antiglobulinskog seruma.

Reakcija precipitacije - RP (od latinskog praecipilo precipitirati) je stvaranje i taloženje kompleksa rastvorljivog molekularnog antigena sa antitelima u obliku zamućenja tzv. precipitat. Nastaje mešanjem antigena i antitela u ekvivalentnim količinama, višak jednog od njih smanjuje nivo formiranja imunog kompleksa. Reakcija precipitacije se izvodi u epruvetama (reakcija precipitacije prstena), u gelovima, hranljivim medijima itd. Ouchterlony, radiap imunodifuzija, imunoepektroforeza i sl.

Prstenasta reakcija precipitacije. Reakcija se izvodi u uskim taložnim epruvetama: rastvorljivi antigen se nanosi na imuni serum. Sa optimalnim omjerom antigena i antitijela, neproziran taložni prsten. Ako se kao antigeni u reakciji koriste prokuhani i filtrirani ekstrakti tkiva, tada se ova reakcija naziva prva reakcija termoprecipitacije (reakcija u kojoj se otkriva antraks hapten).
Ouchterlony dvostruka imunodifuzijska reakcija. Za postavljanje reakcije, tanak sloj otopljenog agar gela se izlije na staklenu ploču i nakon stvrdnjavanja u njoj se izrezuju bunari. Antigeni i imunološki serumi se stavljaju odvojeno u jažice gela, koje difundiraju jedna prema drugoj. Na mjestu susreta, u ekvivalentnim proporcijama, formiraju talog u obliku bijele pruge. U višekomponentnim sistemima između jažica sa antigenima i antitelima pojavljuje se nekoliko linija precipitata; u identičnim AG, linije taloga se spajaju; u neidentičnim AG se seku.
Radijalna imunodifuzijska reakcija. Imuni serum sa rastopljenim agar gelom ravnomjerno se sipa na staklo. Nakon stvrdnjavanja u gelu, prave se jažice u koje se stavlja antigen u različitim razblaženjima. Antigen, difundirajući u gel, formira prstenaste precipitacijske zone oko jažica sa antitelima. Prečnik taložnog prstena je proporcionalan koncentraciji antigena. Reakcija se koristi za određivanje imunoglobulina različitih klasa, komponenti sistema komplementa itd. u krvnom serumu.
Imunoelektroforeza- kombinacija metode elektroforeze i imunoprecipitacije: mješavina antigena se unosi u jažice gela i odvaja u gelu pomoću elektroforeze, zatim se imunoserum dodaje u žlijeb paralelno sa zonama elektroforeze, čija antitijela difundiraju u gel i formiraju precipitacijske linije na mjestu “susreta” s antigenom.
Reakcija flokulacije(prema Ramonu) (od latinskog f1oecus - ljuspice vune) - pojava opalescencije ili flokulantne mase (imunoprecipitacije) u epruveti tokom reakcije toksin - antitoksin ili toksoid - antitoksin. Koristi se za određivanje aktivnosti antitoksičnog seruma ili toksoida.

HLA kucanje- proučavanje ljudskog glavnog kompleksa histokompatibilnosti - HLA kompleksa. Ova formacija uključuje regiju gena na hromozomu 6 koji kodiraju HLA antigene uključene u različite imunološke odgovore.

Zadaci za HLA kucanje može biti vrlo različita - biološka identifikacija (HLA tip se nasljeđuje uz roditeljske gene), određivanje predispozicije za razne bolesti, odabir donora za transplantaciju organa - u ovom slučaju se upoređuju rezultati HLA tipizacije tkiva donora i primaoca. Koristeći HLA tipizaciju, utvrđuje se koliko su supružnici slični ili različiti u pogledu antigena histokompatibilnosti kako bi se dijagnosticirali slučajevi neplodnosti.

HLA kucanje sugeriše Analiza HLA polimorfizma a provodi se dvije metode - serološkom i molekularno genetičkom. Klasična serološka metoda HLA tipizacije zasniva se na mikrolimfocitotoksičnom testu, a molekularna metoda koristi PCR (lančana reakcija polimeraze).

Serološki HLA kucanje sprovedeno na izolovanim populacijama ćelija. Antigene glavnog kompleksa histokompatibilnosti prenose uglavnom limfociti. Stoga se suspenzija T limfocita koristi kao glavni nosilac antigena klase I, a suspenzija B limfocita za određivanje antigena HLA klase II. Za izolaciju potrebne populacije stanica iz pune krvi koristi se centrifugiranje ili imunomagnetsko odvajanje. Vjeruje se da prva metoda može dovesti do lažno pozitivnih podataka, jer to rezultira smrću nekih stanica. Druga metoda je prepoznata kao specifičnija - više od 95% ćelija ostaje održivo.

Ali osnova za izvođenje limfocitotoksičnog testa HLA kucanje je specifičan serum koji sadrži antitijela na različite alelne varijante antigena HLA klase I i II. Serološkim testom se može utvrditi HLA tip ispitivanjem koji serumi reaguju sa limfocitima, a koji ne.

Ako dođe do reakcije između stanica i seruma, rezultat je stvaranje kompleksa antigen-antitijelo na površini stanice. Nakon dodavanja otopine koja sadrži komplement, dolazi do lize stanica i smrti. Serološki test tipizacije HLA se procjenjuje korištenjem fluorescentne mikroskopije za procjenu pozitivnih (crvena fluorescencija) i negativnih (zelena fluorescencija) reakcija, ili fazno-kontrastne mikroskopije za bojenje jezgara mrtvih ćelija. Rezultat HLA tipizacije se dobija uzimajući u obzir specifičnost reagovanih seruma i grupa antigena unakrsne reakcije, kao i intenzitet reakcije citotoksičnosti.

Nedostaci seroloških HLA kucanje su prisustvo unakrsnih reakcija, slab afinitet antitela ili niska ekspresija HLA antigena, odsustvo proteinskih proizvoda u nizu HLA gena.

Modernije, molekularne metode HLA kucanje koriste već standardizovane sintetičke uzorke koji ne reaguju sa antigenima na površini leukocita, već sa DNK i direktno ukazuju koji su antigeni prisutni u uzorku. Molekularne metode ne zahtijevaju živa bijela krvna zrnca koja se mogu proučavati, a dovoljno je nekoliko mikrolitara krvi ili se možete ograničiti na struganje sa oralne sluznice.

Molekularna genetika HLA kucanje koristi PCR metodu čiji je prvi korak dobivanje čiste genomske DNK (iz pune krvi, suspenzije leukocita, tkiva).

Uzorak DNK se zatim kopira - amplificira in vitro korištenjem prajmera (kratka jednolančana DNK) specifična za specifični HLA lokus. Krajevi svakog para prajmera moraju biti striktno komplementarni jedinstvenoj sekvenci koja odgovara specifičnom alelu, inače neće doći do amplifikacije.

Nakon PCR-a, tokom ponovljenog kopiranja, dobija se veliki broj DNK fragmenata koji se mogu vizuelno proceniti. Da bi se to postiglo, reakcione smjese se podvrgavaju elektrolizi ili hibridizaciji, a da li je došlo do specifičnog pojačanja utvrđuje se pomoću programa ili tablice. Rezultat HLA tipizacije je predstavljen u obliku sveobuhvatnog izvještaja na nivou gena i alela. Zbog standardizacije korištenih uzoraka, molekularni HLA kucanje tačnije serološki. Osim toga, pruža više informacija (više novih DNK alela) i viši nivo detalja, jer vam omogućava da identifikujete ne samo antigene, već i same alele, koji određuju koji je antigen prisutan u ćeliji.

Reakcija imunološke lize. Reakcija se zasniva na sposobnosti specifičnih antitela da formiraju imune komplekse sa ćelijama, uključujući eritrocite i bakterije, što dovodi do aktivacije sistema komplementa klasičnim putem i lize ćelija. Od reakcija imunološke lize najčešće se koristi reakcija hemolize, a reakcija bakteriolize rijetko se koristi (uglavnom u diferencijaciji kolere i vibrija sličnih koleri).

Reakcija hemolize. Pod utjecajem reakcije s antitijelima u prisustvu komplementa, zamućena suspenzija crvenih krvnih zrnaca pretvara se u svijetlocrvenu prozirnu tekućinu - "krv laka" zbog oslobađanja hemoglobina. Prilikom postavljanja dijagnostičke reakcije fiksacije komplementa (FFR), reakcija hemolize se koristi kao indikator: za testiranje prisutnosti ili odsustva (fiksacije) slobodnog komplementa.

Lokalna reakcija hemolize u gelu(Erne reakcija) je jedna od varijanti reakcije hemolize. Omogućava vam da odredite broj ćelija koje stvaraju antitijela. Broj ćelija koje luče antitijela - hemolizine - određen je brojem hemoliznih plakova koji se pojavljuju u agar gelu koji sadrži eritrocite, suspenziju stanica limfoidnog tkiva koje se proučava i komplementa.

Metoda imunofluorescencije

(RIF, reakcija imunofluorescencije) je metoda za detekciju specifičnih Ags (Abs) pomoću Abs (Ags) konjugiranih na fluorohrom. Ima visoku osjetljivost i specifičnost. Koristi se za ekspresnu dijagnostiku infekcija. bolesti (identifikacija patogena u materijalu za istraživanje), kao i za određivanje Ab i površinskih receptora i markera leukocita (imunofenotipizacija) i drugih ćelija. Direktno I. m. sastoji se od obrade dijela tkiva ili razmaza od patološkog materijala ili mikrobne kore koji sadrži specifične Abs konjugirane s fluorohromom; preparat se ispere da se oslobodi nevezanih abs i pregleda pod fluorescentnim mikroskopom. U pozitivnim slučajevima, svijetleći imunološki kompleks pojavljuje se oko periferije objekta. Kontrola je neophodna kako bi se isključila nespecifična luminiscencija. At indirektno. Njih. u prvoj fazi, presjek tkiva ili razmaz se tretira nefluorescentnim specifičnim sredstvom, u drugom - luminiscentnim sredstvom protiv -globulina životinje koja je korištena u prvoj fazi. U pozitivnom slučaju formira se blistavi kompleks koji se sastoji od Ar, At prema njemu i At protiv At (sendvič metoda). Pored fluorescentnog mikroskopa, RIF se uzima u obzir prilikom fenotipizacije ćelija. laserski sorter ćelija .

Protočna citometrija- metoda optičkog mjerenja parametara ćelije, njenih organela i procesa koji se u njoj odvijaju.

Tehnika uključuje detekciju rasipanja svjetlosti iz laserskog snopa dok ćelija prolazi kroz nju u mlazu tekućine, a stupanj disperzije svjetlosti omogućava da se dobije predodžbu o veličini i strukturi ćelije. Osim toga, analiza uzima u obzir nivo fluorescencije hemijskih spojeva koji su dio ćelije (autofluorescencija) ili su dodani uzorku prije protočne citometrije.

Suspenzija ćelija, prethodno obeležena fluorescentnim monoklonskim antitelima ili fluorescentnim bojama, ulazi u tok tečnosti koji prolazi kroz protočnu ćeliju. Uslovi su odabrani tako da se ćelije redaju jedna za drugom zbog tzv. hidrodinamičko fokusiranje mlaza u mlazu. U trenutku kada ćelija pređe laserski snop, detektori bilježe:

raspršivanje svjetlosti pod malim uglovima (od 1° do 10°) (ova karakteristika se koristi za određivanje veličine ćelija).

rasipanje svetlosti pod uglom od 90° (omogućava nam da procenimo odnos jezgra/citoplazma, kao i heterogenost i granularnost ćelija).

Intenzitet fluorescencije kroz nekoliko kanala fluorescencije (od 2 do 18-20) - omogućava vam da odredite subpopulacijski sastav ćelijske suspenzije itd.

Coombsov test je laboratorijski test koji se radi utjecajem na hemaglutinaciju. Zasniva se na osjetljivosti antitijela na imunoglobuline i enzimske elemente, kao i na njihovoj sposobnosti da aglutiniraju eritrocite obložene C3 ili Lg.

Direktna Coombsova dijagnoza

Koristi se za otkrivanje antitijela ili komponenti komplementa instaliranih na vanjskoj strani stanica. Direktni Coombsov test se izvodi na sljedeći način.

Upotreba takvog uzorka

Direktna Coombsova dijagnoza se koristi u određenim slučajevima, kao što su:

efekti transfuzije;
autoimuna hemoliza;
hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.

Indirektni Coombsov test

Ova dijagnoza omogućava otkrivanje antitijela na stanice u serumu, koji se u pravilu inkubira s donorskim crvenim krvnim zrncima tipa 0, a zatim se provodi direktan test. Indirektna Coombsova dijagnoza koristi se u sljedećim slučajevima:

Kako se pripremiti za analizu

Postoje neka pravila za pripremu ispita.

Ako je pacijent novorođenče, roditelji moraju biti svjesni da će test pomoći u dijagnosticiranju hemolitičke bolesti novorođenčeta.
Ukoliko pacijent sumnja na hemolitičku anemiju, treba mu objasniti da će mu analiza omogućiti da se utvrdi da li je uzrokovana zaštitnim poremećajima, lijekovima ili drugim faktorima.
Coombsov test, direktan i indirektan, ne postavlja nikakva ograničenja u ishrani ili ishrani.
Potrebno je obavijestiti pacijenta da će pregled zahtijevati vađenje krvi iz vene, te mu reći kada će se tačno izvršiti venepunkcija.
Također biste trebali upozoriti na vjerovatnoću neugodnih senzacija tokom perioda nanošenja zavoja na ruku i samog postupka.
Lijekove koji mogu utjecati na rezultate uzorka treba prekinuti.

Ovi lijekovi uključuju:

"Streptomicin";
"Metildopa";
"Prokainamid";
sulfonamidi;
"Melphalan";
"Kinidin";
"Rifampin";
"Izoniazid";
cefalosporini;
"Hydralazine";
"Klorpromazin";
"Levodopa";
"Tetraciklin";
"Difenilhidantoin";
"Etosuksimid";
"Penicilin";
mefenaminska kiselina.

Uzimanje krvi se radi ujutro na prazan želudac.

Kako se događaj održava

Coombsov test se provodi sljedećim redoslijedom:

Prilikom dijagnostike kod odraslog pacijenta, nakon punkcije vene, krv se uzima u epruvete sa EDTA (etilendiamintetraacetat).
Krv novorođenčeta se vadi iz pupčane vrpce u čašu koja sadrži EDTA.
Područje uboda se pritisne pamučnim štapićem dok krvarenje ne prestane.
Ako se na mjestu uboda vene pojavi modrica, propisuju se topli oblozi.
Nakon uzimanja krvi, pacijentu je dozvoljeno da se vrati uzimanju lijekova.
Potrebno je obavijestiti roditelje novorođenčeta da može biti potrebna sekundarna analiza za praćenje dinamike anemije.

Prednosti Coombsovog testa

Takvo istraživanje ima neke prednosti, a to su:

Nedostaci analize

Pozitivan Coombsov test je prilično radno intenzivna metoda ispitivanja, koja zahtijeva karakterističnu točnost izvođenja. Prilikom njegove upotrebe možete naići na određene poteškoće, posebno vezane za interpretaciju slabo pozitivnih efekata.

Utvrđeno je da pogrešne negativne ili slabo pozitivne reakcije pri izradi Coombsovih testova mogu biti posljedice nezadovoljavajuće aktivnog ispiranja stanica, slabljenja antiglobulinskog reagensa serumskim ostacima, kao i veze sa nemasnim površinama, na kojima antiglobulin može pričvrstiti, čime gubi svoju efikasnost.

Coombsov test ima još jedan nedostatak - nisku stabilnost antiglobulinskog reagensa, čije stjecanje i očuvanje imaju individualne karakteristike, što na sličan način otežava numeričku procjenu učinka antiglobulinskog seruma na hemaglutinaciju.

Bolesti koje se mogu otkriti tokom istraživanja

Coombsova dijagnostika omogućava otkrivanje određenih vrsta bolesti, kao što su:

hemolitička slabost novorođenčeta;
razne transfuzijske reakcije;
autoimuna hemoliza;
hemolitička anemija uzrokovana lijekovima.

Danas se Coombsov test smatra prilično popularnim sistemom za testiranje krvi i za odrasle i za novorođenčad. Omogućava prepoznavanje mnogih različitih bolesti.

Od mnogih postojećih antigena u medicinskoj praksi, najveći značaj pridaju se trima vrstama aglutinogena krvi. Jedan od njih je tip odgovoran za ispoljavanje Rh faktora: ako je prisutan na membrani eritrocita, krvna grupa se dijagnosticira kao Rh+, ako je odsutna - Rh-. Ako eritrociti s Rh+ aglutinogeni uđu u Rh negativnu krv, tijelo pokreće imunološki odgovor i počinje proizvoditi antitijela na ovaj antigen, što uzrokuje patološka stanja.

REFERENCA! Rh faktor je složen višekomponentni sistem od nekoliko desetina antigena. Najčešći od njih su aglutinogeni tipa D (85% slučajeva), kao i E i C.

Coombsov test se izvodi samo ako postoje direktni dokazi. Opća lista razloga za propisivanje Coombsovog testa:

planiranje i vođenje trudnoće (roditelji imaju različit Rh);
darivanje i priprema za transfuziju krvi (neusklađenost krvi prema Rh nije ništa manje destruktivna od nepodudaranja po sistemu AB0);
planirana hirurška intervencija (u slučaju nadoknade gubitka krvi transfuzijom krvi);
dijagnoza hemolitičkih bolesti.

Specifičnije indikacije zavise od vrste studije koja se izvodi.

Direktni Coombsov test

Direktan test otkriva antitijela na površini crvenih krvnih stanica. Ovo je neophodno za dijagnosticiranje postojećeg hemolitičke patologije:

autoimune (crvena krvna zrnca i hemoglobin su uništeni kao rezultat napada vlastitih antitijela);
medicinski (patološki proces se pokreće uzimanjem određenih lijekova kao što su kinidin ili prokainamid);
nakon transfuzije (ako se krvna grupa ne poklapa tokom transfuzije), kao i u obliku Rh konflikta tokom trudnoće (eritroblastoza novorođenčadi).

REFERENCA! Hemolitička anemija je bolest povezana s preranim uništavanjem crvenih krvnih stanica kao rezultatom hemolize, što dovodi do nedovoljne zasićenosti krvi kisikom i hipoksije mozga i/ili unutarnjih organa.

Hemoliza krvnih elemenata uočava se kod onkoloških, infektivnih i reumatskih bolesti, pa se direktni Coombsov test može koristiti kao dodatno sredstvo za dijagnosticiranje patološkog stanja. Vrijedi zapamtiti: negativna vrijednost testa ne isključuje mogućnost hemolize, ali je razlog za dodatni pregled.

Indirektni Coombsov test

Indirektno testiranje se češće koristi za prevenciju patoloških situacija. Pomaže u otkrivanju antitijela u krvnoj plazmi, što je neophodno za procjenu transfuzijske kompatibilnosti i dijagnosticiranje rizika od Rh konflikta tokom trudnoće.

Više od 80% ljudi ima pozitivan Rh faktor (Rh+), respektivno, nešto manje od 20% je Rh negativno. Ako Rh- majka razvije Rh+ dijete, njeno tijelo počinje proizvoditi antitijela koja napadaju crvena krvna zrnca fetusa, uzrokujući hemolizu.

Uzimajući u obzir činjenicu da postotak "različitih rezus" brakova dostiže 12-15%, rizik od hemolitičke bolesti novorođenčadi trebao bi biti visok, ali u stvarnosti samo u 1 od 25 takvih slučajeva žene doživljavaju fenomen senzibilizacije. (za 200 uspješnih porođaja postoji 1 primjer hemolitičke patologije). To je dijelom zbog činjenice da prvo Rh-pozitivno dijete obično ne izaziva otvorenu agresiju iz majčinog tijela; Velika većina slučajeva javlja se kod druge i sljedeće djece. Primjenjuje se isti princip kao i kod konvencionalne senzibilizacije na određeni alergen.

Pri prvom kontaktu nema reakcije. Tijelo se tek upoznaje sa novim antigenom, koji proizvodi antitijela klase IgM, koja su odgovorna za brzi imunološki odgovor, ali rijetko prodiru kroz placentnu barijeru u krv djeteta. Sve patološke reakcije se manifestiraju na drugom „sastanku“, kada tijelo počinje proizvoditi antitijela klase IgG koja lako prodiru u fetalni krvotok, započinjući proces hemolize.

Indirektni Coombs test tokom trudnoće omogućava vam da otkrijete prisustvo antitijela u majčinom tijelu i pravovremeno identificirate početnu fazu senzibilizacije. Za pozitivan odgovor potrebna je registracija uz mjesečni test titra antitijela i obavezna hospitalizacija 3-4 sedmice prije rođenja.

REFERENCA! Inkompatibilnost Rh faktora ni na koji način ne utiče na stanje majke; U teškim slučajevima i u nedostatku pravovremene reakcije, fetus može umrijeti u maternici ili odmah nakon rođenja.

Priprema za postupak i njegovo sprovođenje

Za dijagnozu se koristi venska krv. Za Coombsov test nije potrebna posebna dugoročna priprema. Pokušajte slijediti standardni skup pravila prije uzimanja krvi iz vene za analizu:

3 dana ranije odustati od alkohola i lijekova (ako je moguće);
Planirajte svoj posljednji obrok kasnije od 8 sati prije uzimanja krvi na analizu;
odustati od pušenja, fizičkog, mentalnog i emocionalnog stresa u roku od 1 sata;
Prije zahvata popijte čašu čiste negazirane vode.

Metoda istraživanja zasniva se na reakciji hemaglutinacije.

Prilikom izvođenja direktnog testa uzorak krvi se izlaže prethodno pripremljenom antiglobulinskom serumu sa poznatim indikatorima, smjesa se drži neko vrijeme i provjerava da li ima aglutinata, koji nastaju kada su antitijela prisutna na crvenim krvnim zrncima. Nivo aglutinata se dijagnosticira pomoću aglutinirajućeg titra.

Indirektni uzorak Coombs ima sličnu tehniku, ali složeniji slijed radnji. U izdvojeni krvni serum unose se antigeni eritrociti (sa Rh faktorom), a tek nakon ovih manipulacija se dodaje antiglobulinski serum za dijagnostiku i aglutinacijski titar.

Rezultati istraživanja

Normalno i ravno i indirektni Coombsov test treba dati negativan rezultat:

negativan direktni test ukazuje na to da su u krvi odsutna specifična antitijela na Rh faktor povezan s crvenim krvnim zrncima i ne mogu uzrokovati hemolizu
negativan indirektni test pokazuje da u krvnoj plazmi nema slobodnih antitijela na Rh faktor; ova činjenica ukazuje na kompatibilnost krvi davaoca sa krvlju primaoca (ili krvlju majke i djeteta) prema Rh faktoru.

Pozitivan Coombsov test ukazuje na činjenicu Rh senzibilizacije tijela, što je glavni uzrok Rh konflikta u slučaju transfuzije krvi ili nošenja djeteta s drugačijim Rh statusom. U tom slučaju rezultati ostaju nepromijenjeni 3 mjeseca (životni vijek crvenih krvnih zrnaca). Ako je uzrok autoimuna hemolitička anemija, onda pozitivan test može pratiti pacijenta nekoliko godina (u nekim slučajevima i cijeli život).

REFERENCA! Antiglobulinski test je vrlo osjetljiv, ali ima malo informacija. Ne bilježi aktivnost hemolitičkog procesa, ne određuje vrstu antitijela i nije u stanju identificirati uzrok patologije. Da bi se dobila potpunija slika, liječnik mora propisati dodatne pretrage (mikroskopija krvi, opšta i biohemijska analiza, reumatske pretrage, ESR, nivoi željeza i feritina).

Stepen senzibilizacije može se izraziti kvalitativno (od “+” do “++++”) ili kvantitativno u obliku titra:

1:2 - niska vrijednost, nije opasno;
1:4 - 1:8 - početak razvoja imunološke reakcije; ne predstavlja opasnost, ali zahtijeva stalno praćenje;
1:16 -1:1024 - jak oblik senzibilizacije, treba odmah preduzeti akciju.

Razlog za pozitivan test može biti:

transfuzija netipizirane krvi (ili sa greškom u tipkanju), kada se Rh faktor donora i primaoca ne poklapa;
Rh konflikt tijekom trudnoće (ako se sastav krvnih antigena kod oca i majke ne poklapa);
autoimuna hemolitička anemija – urođena (primarna) i sekundarna, koja je posljedica određenih bolesti (Evansov sindrom, infektivna pneumonija, sifilis, hladna hemoglobinurija, limfom);
hemolitička reakcija na lijek.

Nijedan od gore navedenih problema pacijent ne može riješiti bez medicinske pomoći. U svim slučajevima bit će potrebna hitna konsultacija, registracija ili hitna hospitalizacija.

PAŽNJA! U rijetkim slučajevima moguć je lažno pozitivan Coombsov test. Razlog tome mogu biti česte transfuzije krvi, kao i niz bolesti: reumatoidni artritis, eritematozni lupus, sarkoidoza. Ova pojava se može uočiti i nakon uklanjanja slezine, kao i kada je reakcija poremećena (često mućkanje sadržaja, prisustvo kontaminanata).

- studija koja pomaže u određivanju sadržaja nepotpunih anti-eritrocitnih antitijela u krvi. Ovaj antiglobulinski test vam omogućava da otkrijete antitela na kod trudnica.

Osim toga, omogućava dijagnosticiranje hemolitičke anemije kod novorođenčadi s Rh konfliktom u početnim fazama. Ovo pomaže u sprječavanju uništavanja crvenih krvnih stanica neophodnih za normalno stvaranje krvi. Ovaj test je 1945. godine kreirao Robert Coombs, zbog čega je i dobio ime.

Coombsov test je svestran test koji omogućava pravovremenu dijagnozu hematopoetskih poremećaja kod odraslih i djece.

Postoje sljedeće vrste takvih testova:

Direktni Coombsov test– omogućava vam da odredite antitijela koja se nalaze na površini crvenih krvnih zrnaca. Obično se takva studija propisuje za sumnju na hemolizu, autoimunu hemolitičku anemiju ili druge autoimune bolesti. Osim toga, provodi se nakon terapije lijekovima na bazi kinina, penicilina ili metildope, ili nakon transfuzije krvi. Da biste dobili preciznije rezultate, morate potpuno prestati uzimati lijekove najmanje 1 tjedan prije studije.
Indirektni Coombsov test– test koji se može koristiti za otkrivanje anti-eritrocitnih antitijela u plazmi. Obično se izvodi tokom trudnoće i prije transfuzije krvi. Anti-eritrocitna antitijela se pojavljuju u krvi osobe tokom reaktivnog imunološkog sistema ili kao reakcija na određene lijekove. Za precizniju studiju, nekoliko uzoraka se provodi odjednom u intervalu od 2 sata.

Indikacije za upotrebu

Coombsov test se izvodi samo ako postoje ozbiljne indikacije. Ovo je skupa i dugotrajna studija, koja je specifičan test.

Obično se sljedeće situacije smatraju indikacijama za njegovu primjenu:

Tokom transfuzije krvi. Test vam omogućava da utvrdite hoće li se krv primaoca ukorijeniti u ljudskom tijelu, kao i da li je moguće doniranje. U tom slučaju potrebno je pregledati materijal i od donatora i od primaoca. Važno je utvrditi prirodu antitijela, jer ako su nekompatibilna u tijelu u pozadini Rh konflikta, imunološki sistem je uništen. To dovodi do razvoja teških bolesti, au rijetkim slučajevima čak i smrti.
Prije operacije kada postoji opasnost od gubitka krvi. To se radi kako bi ljekar mogao odmah uvesti odgovarajuću krv za obnavljanje tijela.
Za otkrivanje Rh senzibilizacije. Rhesus je specifičan antigen koji se pojavljuje u tijelu svake žene tokom trudnoće. Ako majka ima pozitivan Rh, a otac negativan, ili obrnuto, za dijete nema zavisnosti – može naslijediti bilo koga. Ako dijete dobije suprotan rezus od majke, postoji visok rizik od senzibilizacije. Ovaj fenomen karakterizira miješanje krvi majke i djeteta. To se može dogoditi i tokom gestacije i tokom porođaja.

Ako u tijelu trudnice dođe do Rhesus konflikta, imuni sistem majke počinje da doživljava njen fetus kao strano tijelo. Zbog toga postoji veliki rizik da će početi da ga napada.

Kao rezultat takvih radnji, beba može razviti ozbiljne patologije. Najčešće se javlja eritroblastoza - pojava u kojoj djetetov organizam ne može proizvesti dovoljan broj crvenih krvnih stanica.

Osim toga, zbog Rh konflikta, fetalna smrt može nastupiti u maternici ili odmah nakon rođenja. Pravilnim pristupom liječenju takve ozbiljne posljedice se lako mogu izbjeći.

Odstupanja od norme

Ako je Coombsov test pozitivan, doktor zaključuje da u krvnom serumu postoje antitijela na crvena krvna zrnca. To znači da krv davaoca možda nije kompatibilna s krvlju pacijenta.

Ako se u tijelu trudnice s Rh negativnom krvlju dijagnosticira pozitivan rezultat, tada njeno tijelo sadrži antitijela na krv fetusa.

To ukazuje na Rh konflikt, koji zahtijeva izuzetno pažljiv pristup liječenju trudnoćom od strane doktora, kao i poštovanje svih uputa i preporuka žene.

Ako su u krvi djeteta prisutna antitijela, dijagnosticira se hemolitička bolest novorođenčeta. U tom slučaju se provodi ponovljena studija kako bi se utvrdilo dolazi li do povećanja razine antitijela u krvi buduće majke ili ne.

Moguće komplikacije iz Coombsovog testa

Coombsov test je prilično siguran test koji vam omogućava dijagnosticiranje niza autoimunih bolesti u ranim fazama. Rijetko uzrokuje komplikacije, obično su negativne posljedice povezane s uzorkovanjem krvi.

Oni su:

Krvarenje ili krvarenja ispod kože
Vrtoglavica i nesvjestica
Infektivna infekcija

7 295