Skrining dijagnoza HIV-a. Skrining test za dijagnosticiranje HIV infekcije. Kako se pripremiti za istraživanje

Rano otkrivanje HIV infekcije omogućava vam da kontrolirate reprodukciju virusa u krvi i spriječite razvoj AIDS-a. Standardni ELISA test otkriva antitijela u krvnoj plazmi bolesne osobe, koja imunološki sustav počinje proizvoditi mjesec i pol do tri mjeseca nakon infekcije (njihovu pojavu često prate simptomi karakteristični za gripu - povišena temperatura i opća malaksalost). PCR može otkriti HIV u roku od 2-3 sedmice nakon infekcije.

U cilju rane dijagnoze ove hronične virusne infekcije provode se skrining (masovni) pregledi grupa stanovništva sa povećanim rizikom od infekcije HIV-om (npr. korisnici droga).

Svaki ljekar može propisati takav test ako sumnja ili smatra da je potrebno isključiti HIV infekciju kod pacijenta. Standardni test svako može polagati na vlastiti zahtjev i besplatno, uključujući i anonimno, u centrima za prevenciju AIDS-a i njihovim ispostavama (punktovima). Rezultat takve analize je medicinska povjerljivost koja se daje pacijentu samo lično.

Glavne indikacije

nakon bilo kakvog nezaštićenog seksualnog kontakta sa novim, povremenim, nepoznatim partnerom;
nakon silovanja;
ako se otkrije da je seksualni partner (bivši, sadašnji) zaražen HIV-om;
ako je partner bio u situaciji s visokim rizikom od infekcije;
ako davanje opojnih supstanci nije obavljeno pojedinačnim špricevima i iglama;
nakon nanošenja tetovaže i izvođenja pirsinga iglama uobičajenim za grupu ljudi;
nakon upotrebe nesterilnih igala i medicinskih instrumenata;
nakon kontakta sa HIV-pozitivnom krvlju;
ako vam je dijagnosticirana spolno prenosiva bolest.

Ovo je takođe potrebno uraditi ako:

nagli gubitak težine bez objektivnog razloga;
neobjašnjiva hronična dijareja;
sindrom hroničnog umora;
česte prehlade;
noćno znojenje;
povećanje nekoliko grupa limfnih čvorova;
česta pojava virusnih infekcija.

Kako se pripremiti za istraživanje

Krv se uzima iz vene na prazan želudac, pa se ne preporučuje jesti 8 sati prije testa.

Karakteristike analize

Prisustvo virusa u krvnoj plazmi potvrđuje se pomoću tri testa - ELISA, imunobloting i PCR.

Enzimski imunosorbentni test (ELISA) otkriva proteinska antitijela na virus, koja počinju cirkulirati krvnom plazmom 3-6 mjeseci nakon njegovog pojavljivanja u tijelu. ELISA je prilično osjetljiva metoda, čija je tačnost do 99%.

Rezultat ovog testa može biti pozitivan, negativan ili neuvjerljiv. Ako je rezultat seronegativan sa visokim rizikom od infekcije ili upitan bez takvog rizika, tada se propisuju drugi testovi na HIV. Ponekad ELISA pokazuje lažno pozitivan rezultat za infektivne, onkološke ili autoimune bolesti, što također zahtijeva imenovanje drugih testova.

Imunobloting- Ovo je takođe test na prisustvo antitela u krvnoj plazmi, ali osetljiviji. Seropozitivni test potvrđuje HIV infekciju. Sumnjiv test se ponavlja nakon 4-6 sedmica. Ako se rezultat nije promijenio, krv se daruje još dva puta - svaka 3 mjeseca ili se radi drugi test.

Lančana reakcija polimerazom (PCR) identifikuje virusnu DNK u krvnoj plazmi 2-3 nedelje nakon što uđe u krv.

Međutim, cijena ovog testa i vjerovatnoća lažno pozitivnih odgovora sugeriraju njegovu upotrebu samo kada rezultati dvije prethodne (standardne) studije ne omogućavaju dijagnosticiranje ili isključivanje HIV infekcije.

Ako ozbiljno sumnjate na HIV infekciju, bolje je da se obratite centru za prevenciju AIDS-a, gdje se pod vodstvom ljekara možete podvrgnuti svim potrebnim pretragama i dobiti pouzdane rezultate.

U dijagnosticiranju HIV infekcije odlučujuću ulogu ima laboratorijska dijagnostika, koja se sastoji od otkrivanja antitijela na HIV u krvi ELISA metodom, nakon čega slijedi potvrda pozitivnih rezultata IB metodom. Ova metoda dijagnoze HIV infekcije omogućava identifikaciju osoba zaraženih HIV-om sa 99% efikasnosti.

Indikacije za upotrebu različitih laboratorijskih testova i karakteristike interpretacije rezultata

Trenutno se u fazi skrininga dijagnoze HIV infekcije koriste kompleti reagensa treće i četvrte generacije bazirani na ELISA metodi. Posebnost testova četvrte generacije je mogućnost istovremenog otkrivanja hipertenzije (p24) i ukupnih antitijela, dok testovi treće generacije omogućavaju određivanje samo antitijela. Gdje je moguće, prednost treba dati testovima četvrte generacije zbog njihove veće dijagnostičke osjetljivosti i sposobnosti otkrivanja infekcije kod pojedinaca tokom serološkog prozora.

Negativan rezultat pri otkrivanju antitijela na HIV pomoću ELISA ne ukazuje uvijek na odsustvo infekcije. Ozbiljan problem predstavljaju oni slučajevi kada je test obavljen tokom serološkog prozora, tj. u prvim nedeljama nakon infekcije, kada još nisu razvijene dovoljne količine antitela na HIV. Za neke osobe, serološki period se može produžiti na nekoliko mjeseci, tako da ako postoje dokazi o izloženosti nekome zaraženom HIV-om, ponovno testiranje se obično radi nakon 2-3 mjeseca. Lažno negativni rezultati otkrivanja antitijela na HIV pomoću ELISA-e mogu se dobiti u terminalnoj fazi bolesti, koju karakterizira teško oštećenje imunološkog sistema s dubokim poremećajem procesa stvaranja antitijela.

Pozitivan rezultat otkrivanja AT metodom ELISA ukazuje na vjerovatnoću zaraze HIV-om, ali ponekad ovaj rezultat može biti lažno pozitivan, na primjer, ako osoba ima tumore, alergijske bolesti, tokom trudnoće, sa autoimunim bolestima, značajnim promjenama u biohemijskim parametri krvnog testa, niz hroničnih bolesti. U takvim slučajevima potrebna su dodatna istraživanja u stručnoj laboratoriji.

U slučaju da se dobije pozitivan rezultat detekcije antitijela na HIV ELISA-om, potrebna je njegova potvrda. U prvoj fazi potvrde, analiza se ponavlja u istom ispitnom sistemu u dvije bušotine - time se eliminišu tehničke greške. Ako je rezultat potvrđen, određivanje AT pomoću ELISA u pacijentovom serumu se ponavlja pomoću dva referentna seta reagensa. Ako se barem u jednoj od ovih studija dobije pozitivan rezultat, provodi se treća faza potvrde: IB studija, koja omogućava otkrivanje antitijela na pojedinačne proteine HIV antigena.

Rezultati dobijeni metodom informacione sigurnosti tumače se kao pozitivni, sumnjivi i negativni. Rezultati se smatraju negativnim ako test serum ne sadrži antitela ni na jedan od antigena HIV-a ili postoji slaba reakcija sa proteinom p17. Najvažniji razlog za pozitivnu reakciju je otkrivanje antitijela na proteine omotača HIV-a (glikoproteini gp41, gp120, gp160). Rezultat se smatra pozitivnim ako se otkriju antitijela na bilo koja dva HIV glikoproteina. Ako postoji reakcija samo sa jednim od proteina ovojnice, u kombinaciji sa ili bez reakcije sa drugim proteinima, rezultat se smatra sumnjivim, u kom slučaju se preporučuje sprovođenje testova za otkrivanje p24 antigena ili HIV DNK/RNA. Ako se otkrije p24 antigen ili HIV DNK/RNA, ponovno ispitivanje pomoću IB se vrši 2 sedmice nakon dobijanja prvog neodređenog rezultata, a zatim svake 2 sedmice dok se ne dobije pozitivan rezultat potvrdnog testa. Ako se 6 mjeseci nakon prvog pregleda ponovo dobiju neodređeni rezultati, a pacijent nema faktore rizika za infekciju i kliničke simptome HIV infekcije, rezultat se smatra lažno pozitivnim.

Često se nakon 1-3-6 mjeseci od trenutka dobijanja sumnjivog rezultata u krvnom serumu pojavljuju jedno za drugim antitijela na sve HIV Ag. U ovom slučaju upitni rezultat je dokaz početne faze HIV infekcije. U nekim slučajevima, upitni rezultati IB-a se primjećuju kod neinficiranih osoba čija tijela sadrže antitijela slična pravim antitijelima na HIV.

Jedan od indirektnih znakova HIV infekcije je selektivno smanjenje CD4+ T pomoćnih ćelija zbog činjenice da HIV ima tropizam za CD4 ćelijski receptor. Međutim, ove promjene mogu izostati u određenim fazama HIV infekcije, imati individualne varijacije kod različitih pacijenata, a mogu se pojaviti i kod drugih bolesti. Tako kod odraslih pacijenata u latentnom stadijumu bolesti broj CD4+ limfocita obično prelazi 0,5. 109/l, što odgovara vrijednostima kod zdravih ljudi.

Rana dijagnoza HIV infekcije je neophodna. O tome ovisi složenost terapije i razvoj patoloških komplikacija. Danas postoji mnogo inovativnih istraživačkih metoda za identifikaciju tako strašne dijagnoze. Upravo o tome će se dalje govoriti.

Koje metode postoje za dijagnosticiranje HIV infekcije?

U stvari, postoji mnogo metoda za dijagnosticiranje HIV-a. U prosjeku su podijeljeni u podgrupe - laboratorijska istraživanja, diferencijalna ispitivanja i hardverska. Osim toga, potrebno je uzeti u obzir faze dijagnostičkih mjera. O svemu ovome i drugim aspektima ćemo detaljnije govoriti kasnije.

Laboratorijska dijagnostika

Dijagnostička metoda koja se razmatra zahtijeva visokospecijaliziranu laboratoriju. U takvim uslovima mogu se uočiti sljedeće indikacije:

Određuju se antitela, antigeni patogena i imuni kompleksi.
Kada se otkrije virus, uzgaja se i detektuju genomski materijal i enzimi.
Procjenjuje se funkcionalnost imunološkog sistema.
Vrši se epidemiološki nadzor i praćenje prevalencije virusa humane imunodeficijencije.
Proučava se dinamika distribucije i utvrđuje se populacija.
Može se utvrditi sigurnost transplantacije i transfuzije krvi.

Ukoliko se otkrije odgovarajući HIV patogen, pacijent se šalje na dodatni pregled. Nakon toga, osoba se registruje radi daljeg praćenja progresije bolesti.

Diferencijalna dijagnoza

Bolest se razlikuje iz različitih razloga:

Kod prvih simptoma HIV infekcije, koja je u akutnoj fazi, posebno ako postoji sindrom sličan mononukleozi. Dijagnoza se zasniva na patologijama kao što su infektivna mononukleoza, sifilis, rubeola, adenovirus, akutna leukemija, yersiniosis, hiperkeratoza.
Ako HIV uđe u stadij generalizirane limfadenopatije trajne prirode, tada se razlikuju bolesti kod kojih se povećavaju limfni čvorovi. Na primjer, limfocitna leukemija, sifilis, toksoplazmoza, limfogranulomatoza. U ovoj fazi simptomi pacijenta postaju izraženiji.
Ako se otkriju sekundarne patologije, razlikuje se imunodeficijencija koja je nastala tijekom uzimanja određenih skupina lijekova - terapija zračenjem, primjena glukokortikosteroida i citostatika. Imunitet je značajno smanjen i kod bolesti kao što su mijelom, limfoidna leukemija, rak itd.
Ako je HIV lokaliziran u usnoj šupljini, onda se razlikuju bolesti usne sluznice.

Ekspresna dijagnostika

Danas su razvijeni čak i brzi testovi, zahvaljujući kojima se prisustvo HIV infekcije može utvrditi u roku od 15 minuta. Ima ih nekoliko vrste:

Najprecizniji test je imunohromatografski. Test se sastoji od posebnih traka na koje se nanosi kapilarna krv, urin ili pljuvačka. Ako se otkriju antitijela na HIV, traka ima obojenu liniju i kontrolnu liniju. Ako je odgovor ne, vidljiva je samo linija.
Kompleti za kućnu upotrebu "OraSure Technologies1". Programer - Amerika. Ovaj test je odobrila FDA.
Postoje i drugi brzi testovi, ali oni nemaju odobrenje stručnjaka, pa se stoga ne preporučuju za testiranje.

Ukoliko se otkrije pozitivna reakcija na virus humane imunodeficijencije, potrebno je dodatno provesti odgovarajući pregled u kliničkom okruženju.

Rana dijagnoza

Rana dijagnoza HIV-a postoji kako bi se pravovremeno utvrdili rizici od oštećenja imuniteta. Zahvaljujući tome, bolest se zaustavlja u početnim fazama, zbog čega je infekcija drugih unutrašnjih organa svedena na minimum.

Da biste samostalno dijagnosticirali patologiju u ranim fazama, obratite pažnju na simptome koji postoje:

Lančana reakcija polimeraze

PCR ili lančana reakcija polimeraze koristi se za određivanje bilo kojeg infektivnog patogena, uključujući virus HIV-a. U tom slučaju se otkriva njegova RNK, a patogen se može otkriti u vrlo ranim fazama (mora proći najmanje 10 dana nakon infekcije).

Ovo je prilično skupa dijagnoza, ali u nekim slučajevima može dati lažni rezultat. Stoga se prilikom testiranja na HIV dodatno koriste druge metode.

Kvantitativna ekspresija lančane reakcije polimeraze je potrebna da bi se odredila stopa razvoja HIV-a i komplikacija kao što je AIDS. To omogućava pravovremeno određivanje prognoze očekivanog životnog vijeka pacijenata zaraženog HIV-om.

Imuno blotting

Imunološki bloting je posljednja metoda pregleda pacijenta prije postavljanja tačne dijagnoze. Tehnika se temelji na korištenju specijalizirane trake (nitroceluloze) s virusnim proteinima. Doktor prikuplja vensku krv i šalje je na obradu. Nakon ovog procesa, proteini surutke se razdvajaju u supstancu nalik gelu na osnovu molekularne težine i naboja. U tu svrhu koristi se oprema s aktivnim električnim poljem. Zatim se gornja traka stavlja u ovaj gel i upija, odnosno podvrgava upijanju. To se radi u specijalizovanoj komori.

Rezultat je određen vezivanjem proteina krvi na proteine nanesene na nitroceluloznu traku. Ako je HIV prisutan u tijelu pacijenta, pojavljuju se pojedinačne linije. Postoje određeni indikatori za identifikaciju linija koje signaliziraju prisustvo HIV-a. Ali postoje i potcijenjene brojke. U tom slučaju postoji rizik od razvoja početne faze virusa ljudske imunodeficijencije, stvaranja onkoloških tumora, tuberkuloze i transfuzije krvi.

ELISA test

ELISA test je metoda skrininga za sumnju na HIV infekciju. Istraživanje se izvodi u laboratorijskim uslovima. Tamo se stvaraju specifični proteini bolesti koji su u stanju uhvatiti proteine koje proizvodi ljudsko tijelo. Prilikom interakcije s reagensima, boja indikatora se mijenja. Dakle, ne otkriva se sam patogen, već antitijela na virus. Ovaj test može otkriti virus ljudske imunodeficijencije u ranim fazama razvoja.

Postoji nekoliko vrsta ELISA testova, ali se koriste samo najnovija dostignuća - 3. i 4. generacije. Tehnika se zasniva na prikupljanju krvne tečnosti iz vene. Postoji određena priprema - pacijent ne treba da jede hranu 8 sati pre testa. Zbog toga se krv uzima ujutro na prazan želudac.

Kako se postavlja dijagnoza u periodu inkubacije?

Period inkubacije HIV virusa je 90 dana. U ovom periodu teško je otkriti prisustvo patologije, ali to se može učiniti pomoću PCR-a.

Nakon toga, godinu dana osoba je pod strogom pažnjom ljekara i podvrgava se višestrukim pregledima. Tek nakon ovog perioda može se sa sigurnošću postaviti dijagnoza HIV-a.

Osobine dijagnoze kod djece

Ako se dijete rodi od žene kojoj je dijagnosticiran virus humane imunodeficijencije, beba se pregleda u prve 3 godine života. Činjenica je da majčina antitela mogu biti prisutna u djetetovoj krvnoj tečnosti tokom ovog perioda. Ali čak ni krvni testovi ne potvrđuju infekciju. Naravno, postoji mnogo slučajeva kada se bolest dijagnosticira odmah nakon rođenja. Saznajte više o trudnoći sa HIV infekcijom.

Prvi testovi na HIV detetu se uzimaju drugog dana po rođenju. Zatim nakon navršenih 2 mjeseca, zatim svaka 4 mjeseca.

Za otkrivanje patologije u djetinjstvu koriste se serološke metode ispitivanja i PCR. To je potonji tip dijagnoze bolesti koji omogućava identifikaciju DNK i RNK virusa u prvim mjesecima bebinog života. Da bi se to postiglo, uzima se bebina krv, koja se zatim stavlja u epruvetu koja sadrži konzervans EDTA. Zatim se materijal čuva 2 dana na temperaturi koja ne prelazi 8 stepeni. Ali ni zamrzavanje krvi nije dozvoljeno. Može se koristiti i osušena krvna tečnost, koja se dobija iz pune krvi i osušena.

Faze dijagnostike

Dijagnostičke mjere za identifikaciju virusa ljudske imunodeficijencije provode se u tri glavne faze:

Preliminarno sortiranje, poznato i kao skrining.
Referentna dijagnostika.
Potvrdni stadijum ili stručna dijagnoza.

Prosijavanje – prethodno sortiranje

Preliminarna faza ispitivanja omogućava vam da odredite ukupna antitijela pomoću enzimskog imunosorbentnog testa, odnosno ELISA. Informacije o prisutnosti virusa možete dobiti već 3 mjeseca nakon infekcije. Ali bilo je slučajeva otkrivanja patogena u ranijim fazama - nakon 3 tjedna.

Morate znati da ELISA može, pod određenim uslovima, dati lažno pozitivan rezultat. To se može dogoditi tokom trudnoće, kod autoimunih bolesti (psorijaza, reumatizam, lupus itd.), Epstein-Barove bolesti i drugih patologija.

Referentna dijagnostika

U ovoj fazi, različiti testovi se koriste najmanje dva puta, maksimalno tri puta. Ako je u dva slučaja rezultat pozitivan, potreban je korak potvrde.

Faza potvrde – ekspert

U ovoj fazi dijagnostika se provodi pomoću imunoblotinga. Antitijela se određuju u skladu s određenim proteinima patogena. Rezultat je obično tačan, ali ima i slučajeva lažnih pozitivnih rezultata. To je moguće u terminalnoj fazi razvoja AIDS-a i tokom zatišja HIV bolesti. Stoga je važno da se nakon određenog vremena dodatno podvrgne proceduri.

Greške tokom dijagnostike

Koliko god paradoksalno izgledalo, postoji mogućnost dobijanja lažno pozitivnog rezultata. To se obično dešava kod kućnog testiranja, posebno kada se koriste brzi testovi. U kliničkom okruženju, to je moguće samo za određene bolesti ili stanja:

period trudnoće;
unakrsna reakcija tijela;
autoimuni patološki poremećaji;
prehlade u akutnoj fazi;
onkološke neoplazme;
tuberkuloza;
skleroza.

Posebnost je da ako je osoba zaražena virusima i gljivicama, onda i rezultat testa može biti lažan. Ovo posebno važi za alergijska stanja.

Priprema za testove

Vrlo je važno pridržavati se pravila za pripremu za HIV testove, jer o tome ovisi točnost rezultata:

Prije svega, potrebno je posjetiti odgovarajućeg stručnjaka kako bi vam on dao precizne upute o pripremnim aktivnostima.
Krvni testovi se uvijek uzimaju na prazan želudac. Stoga ne biste trebali ništa jesti prije odlaska u kliniku. Vaš posljednji obrok treba da bude najkasnije do 21:00 sat.
Na dan testiranja zabranjeno je pušenje.
Ne bi trebalo da pijete alkohol prethodne noći.
Ako uzimate bilo kakve lijekove, obavezno se unaprijed posavjetujte sa svojim ljekarom. Zato što je mnoge lijekove zabranjeno koristiti prije testiranja na HIV.
Ne preporučuje se ultrazvučni pregled nekoliko dana prije prikupljanja analize.
Nije preporučljivo jesti preterano masnu hranu ili konzumirati puno slatkiša dan-dva pre zahvata.

Dijagnoza HIV infekcije (video)

Više o različitim dijagnostičkim metodama HIV-a možete saznati od kvalifikovanih stručnjaka. Da biste to učinili, trebali biste pogledati sljedeći video.

I

Antitela na HIV 1/2– komponente krvne plazme, proteinske prirode, koje sprečavaju proliferaciju HIV infekcije i potpuno neutrališu njihov negativan uticaj.

Šta je test na HIV antitela 1/2 (skrining)

Skrining test za antitela na HIV 1.2 je sistem testova koji mogu da identifikuju osobe zaražene virusom imunodeficijencije. Osim ovih, postoje i takozvani potvrdni (pomoćni) testovi, čiji je zadatak da identifikuju osobe koje nisu zaražene virusom, ali koje imaju pozitivnu reakciju na virus tokom skrininga.

Suština skrining studije na HIV infekciju je određivanje antitijela na virus imunodeficijencije. Njegova karakteristična karakteristika je povećana osjetljivost - više od 99,5%. Specifičnost testiranja je da skrining može dati lažno pozitivan rezultat ako tijelo pacijenta sadrži autoantitijela.

Identičan rezultat može se otkriti u slučaju bolesti jetre kod pacijenta, vakcinacije protiv gripe ili prisutnosti bilo koje akutne virusne bolesti. Na osnovu toga, da bi se dobili tačni rezultati, uz skrining, obično je uobičajeno da se uradi gore navedeni potvrdni test.

Indikacije za analizu

U medicinskoj praksi postoji prilično širok spektar indikacija za podvrgavanje skrining pregledu. Pacijent se može prijaviti ako:

sumnja na infekciju (ako je bio blizak kontakt sa nosiocem HIV infekcije);
s gubitkom težine, groznicom;
pneumonija koja ne reaguje na konvencionalnu terapiju;
kronične bolesti koje nastaju iz nepoznatih razloga;
u procesu pripreme za operaciju;
transfuzije krvi;
trudnoća i planiranje porodice;
Sa upaljenim limfnim čvorovima;
Slučajni seksualni odnosi.

Osobe u posebnom riziku: ovisnici o drogama i osobe koje su promiskuitetne.

Kako se vrši skrining na antitela na HIV 1/2?

Provođenje postupka zahtijeva poštivanje niza potrebnih pravila:

pacijent mora dati krv isključivo na prazan želudac (dozvoljeno je piti vodu);
mora da je prošlo najmanje osam sati od poslednjeg obroka;
ljekar mora biti obaviješten o tome koje lijekove pacijent uzima i znati dozu (ako ne postoji mogućnost čak i kratkotrajnog prekida);
ako pacijent može odgoditi primjenu lijekova, preporučuje se da to učini 10-15 dana prije dana manipulacije;
dan prije testiranja poželjno je da pacijent izbjegava jesti prženu ili masnu hranu, također mu je zabranjeno piti alkoholna pića, pušiti i ograničiti tešku fizičku aktivnost.

Treba napomenuti da laboratorijski testovi na prisustvo infekcije kod djece rođene od majki nosilaca virusa imunodeficijencije imaju svoje specifičnosti.

Prvi su namijenjeni identifikaciji svih osoba zaraženih HIV-om, drugi - identifikaciji osoba koje nisu zaražene HIV-om, ali su dale pozitivnu reakciju tokom skrining testiranja. Stoga su skrining testovi visoko osjetljivi, odnosno ne daju gotovo nikakve lažno negativne rezultate, a potvrdni testovi su visoko specifični, odnosno ne daju gotovo nikakve lažno pozitivne rezultate. Kada se kombinuju, ovi testovi daju tačne i pouzdane rezultate koji mogu otkriti kontaminirane krvne proizvode i postaviti dijagnozu HIV infekcije. Međutim, postoje biološki faktori koji smanjuju tačnost ovih testova; Moguće su i laboratorijske greške. Stoga svaka laboratorija koja vrši testove na HIV antitela mora imati odličan program kontrole kvaliteta ovih testova. Ne smijemo zaboraviti da pouzdanost laboratorijskih pretraga nikada nije stopostotna i da njihove rezultate uvijek treba posmatrati kao dodatak kliničkoj dijagnozi.

Period prozora i otkrivanje HIV infekcije u ranim fazama infekcije:

Antitijela na HIV počinju se proizvoditi ubrzo nakon infekcije, ali vrijeme njihovog pojavljivanja ovisi o mnogim faktorima, posebno o stanju imunološkog sistema pacijenta i svojstvima virusa. Važno je napomenuti da antitijela mogu biti prisutna u krvi rano nakon infekcije, ali njihova koncentracija je ispod granice osjetljivosti nekih metoda (period prozora). Prvi test sistemi su otkrili antitela kod skoro svih HIV-inficiranih osoba 6-12 nedelja nakon infekcije. Najnoviji sistemi za testiranje, uključujući treću generaciju trap ELISA, otkrivaju antitijela 3-4 sedmice nakon infekcije. Vrijeme između infekcije i dijagnoze HIV infekcije može se smanjiti za nekoliko dana korištenjem metoda za detekciju HIV antigena, a za nekoliko dana korištenjem metoda za otkrivanje HIV RNK. Ako koristite sve opisane metode, dijagnoza HIV infekcije kod većine pacijenata može se postaviti u roku od 2-3 sedmice nakon infekcije. Komercijalno dostupni test sistemi za skrining na HIV antitela imaju veoma visoku i približno ujednačenu osetljivost, dovoljnu za otkrivanje većine HIV inficiranih osoba (tzv. epidemiološka osetljivost). Međutim, različiti testni sistemi se razlikuju po analitičkoj osjetljivosti, odnosno u njihovoj sposobnosti da otkriju niske razine antitijela koje se javljaju prije nego što se serokonverzija završi.

Postoje testni sistemi dizajnirani za otkrivanje IgM antitijela na HIV, ali oni nisu našli široku upotrebu u ranoj dijagnozi HIV infekcije, budući da se IgM antitijela ne proizvode uvijek rano nakon infekcije. Neki test sistemi treće generacije istovremeno otkrivaju IgM i IgG antitela na HIV i imaju veću analitičku osetljivost.

Vidi također: Otkrivanje HIV statusa bez žaljenja, Devijacija nosnog septuma, Vaskularna aneurizma: skrivena prijetnja zdravlju, Prenatalni skrining; hromozomske abnormalnosti, Latentni strabizam (Strabismus latenta, Heterophoria), Skriveni rizik: žene i bolesti srca, Latentni sifilis (Syphilis latens), CDC Realtime RT-PCR protokol za otkrivanje i istraživanje virusa gripe A (H1N1), škrgutanje zubima , Oprez: skriveni alergeni

... dijagnoza bilo koje zarazne bolesti zasniva se na poređenju epidemioloških, kliničkih i laboratorijskih podataka, a preuveličavanje značaja jedne od grupa ovih podataka može dovesti do dijagnostičkih grešaka.

Dijagnoza HIV infekcije uključuje dvije faze:
I pozornica - utvrđivanje stvarne činjenice HIV infekcije;
II pozornica - određivanje stadijuma bolesti.

UTVRĐIVANJE ČINJENICE INFEKCIJE HIV-om

Utvrđivanje stvarne činjenice HIV infekcije (odnosno identifikacija osoba zaraženih HIV-om), zauzvrat, također uključuje dvije faze:
Faza I— vezani imunosorbentni test(ELISA): ELISA metoda je skrining (selekcija) – selekcija zaraženih osoba, odnosno njen cilj je da se identifikuju sumnjive osobe i eliminišu zdrave osobe; Antitijela na HIV se otkrivaju korištenjem drugih antitijela na željena antitijela (antitijela protiv drugih antitijela).

Ova "pomoćna" antitijela su označena enzimom. Svi skrining testovi moraju biti visoko osjetljivi kako ne bi propustili pacijenta. Zbog toga njihova specifičnost nije jako visoka, odnosno ELISA može dati pozitivan odgovor („vjerovatno bolestan“) kod neinficiranih osoba (na primjer, kod pacijenata s autoimunim bolestima: reumatizam, sistemski eritematozni lupus itd.). Učestalost lažno pozitivnih rezultata pri korištenju različitih test sistema kreće se od 0,02 do 0,5%. Ako nečiji ELISA test daje pozitivan rezultat, potrebno je dodatno ispitivanje kako bi se potvrdila činjenica infekcije HIV-om.

Prilikom izvođenja ELISA-e, lažno negativni rezultati mogući su u 3-5% slučajeva - ako je infekcija nastala relativno nedavno, a nivo antitijela je još uvijek vrlo nizak, ili u terminalnoj fazi bolesti, koju karakterizira teško oštećenje imunološkog sistema sa dubokim poremećajem procesa stvaranja antitijela. Stoga, ako postoje dokazi o kontaktu sa osobama zaraženim HIV-om, ponovljeni testovi se obično rade nakon 2 - 3 mjeseca.
Faza II — imunobloting(modificirani Western blot, Western blot): je složenija metoda i služi za potvrdu činjenice infekcije.

Ova metoda ne otkriva kompleksna antitijela na HIV, već antitijela na njegove individualne strukturne proteine (p24, gp120, gp41, itd.).

Rezultati imunoblotinga se smatraju pozitivnim ako se otkriju antitijela na najmanje tri proteina, od kojih je jedan kodiran env geni, drugi gag geni, a treći pol geni. Ako se otkriju antitijela na jedan ili dva proteina, rezultat se smatra upitnim i zahtijeva potvrdu.

U većini laboratorija dijagnoza HIV infekcije se postavlja ako se istovremeno otkriju antitijela na proteine p24, p31, gp4l i gpl20/gp160. Suština metode: virus se uništava u komponente (antigene), koje se sastoje od joniziranih aminokiselinskih ostataka, te stoga sve komponente imaju različito porijeklo jedna od druge; zatim se pomoću elektroforeze (električne struje) antigeni raspoređuju na površinu trake - ako test serum sadrži antitijela na HIV, tada će stupiti u interakciju sa svim grupama antigena, i to se može otkriti.

Treba zapamtiti da se antitela na HIV pojavljuju kod 90-95% inficiranih osoba u roku od 3 meseca nakon infekcije, kod 5-9% inficiranih osoba antitela na HIV se pojavljuju nakon 6 meseci, a kod 0,5-1% inficiranih osoba antitela na HIV se javljaju kasnije u roku.

Tokom stadijuma AIDS-a, broj antitela se može smanjiti sve dok potpuno ne nestanu.

U imunologiji postoji koncept kao "serološki prozor"- period od infekcije do pojave tolikog broja antitela koji se mogu otkriti.

Kod HIV-a ovaj period obično traje od 2 do 12 sedmica, u rijetkim slučajevima i duže. Tokom „serološkog prozora“, prema testovima, osoba je zdrava, a u stvari je zaražena HIV-om. Utvrđeno je da HIV DNK može ostati u ljudskom genomu najmanje tri godine bez znakova aktivnosti i da se antitijela na HIV (markeri HIV infekcije) ne pojavljuju.

Tokom ovog perioda („serološki prozor“) moguće je identifikovati osobu zaraženu HIV-om, pa čak i 1-2 nedelje nakon infekcije upotrebom lančana reakcija polimeraze(PCR).

Ovo je izuzetno osjetljiva metoda - teoretski se može otkriti 1 DNK na 10 ml medija. Suština metode je sljedeća: lančanom reakcijom polimeraze dobivaju se mnoge kopije nukleinske kiseline (virus je nukleinska kiselina - DNK ili RNA - u proteinskoj ljusci), koje se zatim identificiraju pomoću obilježenih enzima ili izotopa, kao i po njihovoj karakterističnoj strukturi. PCR je skupa dijagnostička metoda, pa se ne koristi za skrining niti rutinski.

ODREĐIVANJE STADIJA BOLESTI

Razvoj AIDS-a prvenstveno se zasniva na uništavanju pomoćnih T-limfocita, obilježenih monoklonskim antitijelima – klasterima diferencijacije – poput CD4.

S tim u vezi, dijagnosticiranje i praćenje progresije bolesti nemoguće je bez praćenja subpopulacije T pomoćnih ćelija, što se najpogodnije provodi pomoću laserskog sortera ćelija.

Za blagu HIV infekciju Broj T-limfocita je izuzetno varijabilan. Općenito, smanjenje broja CD4 ćelija (apsolutno i relativno) nalazi se kod osoba čija se infekcija HIV-om dogodila prije najmanje godinu dana.

S druge strane, u ranim fazama infekcije često postoji naglo povećan broj supresorskih T ćelija (CD8) kako u perifernoj krvi tako i u povećanim limfnim čvorovima.

Sa teškom AIDS-om apsolutna većina pacijenata ima smanjen ukupan broj T-limfocita (manje od 1000 u 1 μl krvi, uključujući CD4 limfocite - manje od 22 u 1 μl, dok apsolutna vrijednost sadržaja CD8 ostaje u granicama normale).

Shodno tome, omjer CD4/CD8 naglo opada. Odgovori T ćelija in vitro na standardne antigene i mitogene su smanjeni u strogom skladu sa relativno smanjenim brojem CD4.

Za kasne faze AIDS-a Karakterizira ga opća limfopenija, neutropenija, trombocitopenija (odnosno, smanjenje broja limfocita, neutrofila i trombocita), anemija.

Ove promjene mogu biti posljedica centralne inhibicije hematopoeze zbog oštećenja hematopoetskih organa virusom, kao i autoimune destrukcije staničnih subpopulacija na periferiji. Osim toga, AIDS karakterizira umjereno povećanje količine gama globulina uz dominantno povećanje sadržaja IgG.

Pacijenti sa teškim simptomima AIDS-a često imaju povišen nivo IgA. U nekim stadijumima bolesti, nivo markera AIDS-a kao što su 1-mikroglobulin, kiselinski stabilni interferon, 1-timozin značajno raste. Isto se dešava i sa lučenjem slobodnog neopterina, metabolita makrofaga.

Još uvijek nije moguće ocijeniti relativnu važnost svakog od navedenih testova, čiji se broj stalno povećava. Stoga ih treba razmotriti u interakciji sa markerima HIV infekcije, kako imunovirološkim tako i citološkim.

Klinički test krvi karakterizira leukopenija, limfopenija (odnosno, smanjenje broja leukocita i limfocita).

Faza 1 - " faza inkubacije» - antitijela na HIV još nisu otkrivena; dijagnoza HIV infekcije u ovoj fazi postavlja se na osnovu epidemioloških podataka i mora biti laboratorijski potvrđena detekcijom virusa humane imunodeficijencije, njegovih antigena i HIV nukleinskih kiselina u krvnom serumu pacijenta;
Faza 2 - " faza primarnih manifestacija“- u ovom periodu već postoji proizvodnja antitela:;
Faza 2A - " asimptomatski» — HIV infekcija se manifestuje samo stvaranjem antitela;
Faza 2B - “ akutna HIV infekcija bez sekundarnih bolesti"- limfociti široke plazme - "mononuklearne ćelije" mogu se otkriti u krvi pacijenata, a često se uočava prolazno smanjenje nivoa CD4 limfocita (akutna klinička infekcija se uočava kod 50-90% inficiranih osoba u prvom 3 mjeseca nakon infekcije početak perioda akutne infekcije, po pravilu, prethodi serokonverziji, tj.

pojava antitela na HIV);
Faza 2B - " akutna HIV infekcija sa sekundarnim oboljenjima“- na pozadini smanjenja razine CD4 limfocita i rezultirajuće imunodeficijencije, pojavljuju se sekundarne bolesti različite etiologije (angina, bakterijska i pneumocistična pneumonija, kandidijaza, herpetična infekcija itd.);
Faza 3 - " latentno“- kao odgovor na progresiju imunodeficijencije, dolazi do modifikacije imunološkog odgovora u vidu prekomjerne reprodukcije CD4 ćelija, praćenog postupnim smanjenjem nivoa CD4 limfocita, u prosjeku brzinom od 0,05-0,07 × 109 /l godišnje; antitijela na HIV su otkrivena u krvi;
Faza 4 - " stadijum sekundarnih bolesti“- iscrpljivanje limfocita CD4 populacije, koncentracija antitijela na virus značajno opada (u zavisnosti od težine sekundarnih bolesti razlikuju se stadijumi 4A, 4B, 4B);
Faza 5 - " terminalni stepen“—tipično smanjenje broja CD4 ćelija ispod 0,05×109/l; koncentracija antitijela na virus značajno se smanjuje ili se antitijela možda neće otkriti.

Laboratorijska dijagnostika HIV infekcije

Prilikom dijagnosticiranja HIV infekcije koriste se 4 grupe metoda:

1. Određivanje prisustva virusa, njegovih antigena ili RNK kopija u materijalima od pacijenta ili osobe zaražene HIV-om

Serološka dijagnoza zasnovana na detekciji specifičnih antitela na površinske (gp 120 i gp 41) i unutrašnje (p 18 i p 24) HIV proteine.

3. Identifikacija patognomoničnih (specifičnih) promjena u imunološkom sistemu za HIV infekciju.

Laboratorijska dijagnostika oportunističkih infekcija (bolesti povezanih sa AIDS-om).

1. Virološka dijagnoza. Materijal za izolaciju HIV-a su krvni T-limfociti, leukociti koštane srži, limfni čvorovi, moždano tkivo, pljuvačka, sperma, cerebrospinalna tečnost i krvna plazma.

Dobijeni materijal se koristi za inficiranje kontinuirane kulture T-limfocita (H9). Indikacija HIV-a u ćelijskoj kulturi vrši se CPD (formiranje simplasta), kao i imunofluorescencijom, elektronskom mikroskopijom i ekspresiranom aktivnošću reverzne transkriptaze.

Moderne metode istraživanja omogućavaju otkrivanje jednog inficiranog limfocita na 1000 stanica.

Detekcija virusnih antigena u inficiranim T limfocitima provodi se pomoću monoklonskih antitijela

Poslednjih godina određivanje broja kopija HIV RNK u krvnoj plazmi metodom lančane reakcije polimeraze (PCR) – takozvanog virusnog opterećenja – bilo je ključno za određivanje prognoze i težine HIV infekcije.

Ako je kod pacijenata koji ne primaju terapiju virusno opterećenje ispod granice detekcije (manje od 5000 kopija HIV RNK u 1 ml plazme), to ukazuje na odsustvo progresije ili sporo napredovanje. Stepen zaraze je minimalan. Visoko virusno opterećenje (više od 10.000 kopija RNK u 1 ml plazme) kod pacijenata sa brojem CO4 limfocita manjim od 300 u 1 μl uvijek ukazuje na progresiju bolesti.

Serološka dijagnoza. Trenutno je najrasprostranjeniji.

Materijal za istraživanje: 5 ml. heparinizirana krv, koja se može čuvati u hladnjaku, ali ne i zamrznuta, 6-8 sati prije isporuke u laboratoriju.

U svrhu serološke dijagnostike AIDS-a koriste se prvenstveno enzimske imunoesejske metode sa standardnim enzimskim imunološkim sistemima (ELISA).

Ovo je metoda skrininga. Princip rada je baziran na klasičnom principu direktne ELISA analize. Imunosorbent su polistirenske tablete s imobiliziranim inaktiviranim virus-specifičnim antigenom dobivenim od HIV-a ili sintetički.

Zatim se dodaje razrijeđeni test serum. Inkubacija se vrši u jamicama sa antigenom. Nakon vezivanja AG za AT, nevezani proteini se ispiru tri puta, a zatim se u jažice dodaje konjugat antitijela na humane imunoglobuline sa enzimskom oznakom.

Formiranje specifičnog AG+AT kompleksa detektuje se dodavanjem supstrata za enzim (rastvor ortofenilendiamina i vodikovog peroksida).

Kao rezultat toga, boja podloge se mijenja proporcionalno količini antitijela. Rezultati istraživanja se uzimaju u obzir na spektrofotometru.

Krvni serumi koji imaju antitijela specifična za virus prema ELISA podacima moraju se dodatno ispitati imunoblotingom.

Imuni bloting je potvrdni test jer otkriva antitijela na različite HIV proteine.

Zasnovan je na preliminarnom frakcioniranju po molekularnoj težini (odvajanju) HIV proteina elektroforezom u poliakrilamidnom gelu, nakon čega slijedi transfer antigena na nitroceluloznu membranu. Zatim se test serum nanosi na membranu. U ovom slučaju, specifična antitela formiraju kompleks sa specifičnim antigenom (gp.120, gp.41, str.24, str.18). Završna faza studije je identifikacija antitijela na različite HIV proteine.

Da bi se to postiglo, sistemu se dodaju antitela protiv humanih proteina, obeležena enzimskom ili radioizotopskom oznakom.

Dakle, virus-specifična antitijela na sve ili većinu antigena HIV-a se otkrivaju (ili ne otkrivaju) u serumu pacijenta.

3. Studije imunološkog statusa. S ciljem identifikacije:

1) smanjenje omjera CD4/CD8 ćelija (u N 2 i >, kod AIDS-a - 0,5 i<);

2) smanjenje sadržaja CD4 ćelija (<200 клеток/мл.);

3) prisustvo jednog od laboratorijskih znakova, uključujući anemiju, leukopeniju, trombopeniju, limfopeniju;

4) povećanje koncentracije Ig A i Ig G u krvnom serumu;

5) smanjenje odgovora formiranja blasta limfocita na mitogene;

6) odsustvo kožne reakcije GTZ na više antigena;

7) povećanje nivoa cirkulišućih imunoloških kompleksa.

Prethodno1234567891011Sljedeće

VIDJETI VIŠE:

Antitela na HIV 1/2– komponente krvne plazme, proteinske prirode, koje sprečavaju proliferaciju HIV infekcije i potpuno neutrališu njihov negativan uticaj.

Šta je test na HIV antitela 1/2 (skrining)

Suština skrining studije na HIV infekciju je određivanje antitijela na virus imunodeficijencije.

Njegova karakteristična karakteristika je povećana osjetljivost - više od 99,5%. Specifičnost testiranja je da skrining može dati lažno pozitivan rezultat ako tijelo pacijenta sadrži autoantitijela.

Indikacije za analizu

U medicinskoj praksi postoji prilično širok spektar indikacija za podvrgavanje skrining pregledu.

Pacijent može kontaktirati laboratoriju ako:

sumnja na infekciju (ako je bio blizak kontakt sa nosiocem HIV infekcije);
s gubitkom težine, groznicom;
pneumonija koja ne reaguje na konvencionalnu terapiju;
kronične bolesti koje nastaju iz nepoznatih razloga;
u procesu pripreme za operaciju;
transfuzije krvi;
trudnoća i planiranje porodice;
Sa upaljenim limfnim čvorovima;
Slučajni seksualni odnosi.

Osobe u posebnom riziku: ovisnici o drogama i osobe koje su promiskuitetne.

Kako se vrši skrining na antitela na HIV 1/2?

Provođenje postupka zahtijeva poštivanje niza potrebnih pravila:

pacijent mora dati krv isključivo na prazan želudac (dozvoljeno je piti vodu);
mora da je prošlo najmanje osam sati od poslednjeg obroka;
ljekar mora biti obaviješten o tome koje lijekove pacijent uzima i znati dozu (ako ne postoji mogućnost čak i kratkotrajnog prekida);
ako pacijent može odgoditi primjenu lijekova, preporučuje se da to učini 10-15 dana prije dana manipulacije;
dan prije testiranja poželjno je da pacijent izbjegava jesti prženu ili masnu hranu, također mu je zabranjeno piti alkoholna pića, pušiti i ograničiti tešku fizičku aktivnost.

Treba napomenuti da laboratorijski testovi na prisustvo infekcije kod djece rođene od majki nosilaca virusa imunodeficijencije imaju svoje specifičnosti.

Budući da u prvim mjesecima djetetovog života u njegovoj krvi mogu biti prisutna majčina antitijela na HIV, na osnovu rezultata analize nemoguće je dobiti objektivnu sliku o zdravstvenom stanju novorođenčeta, a čak ni negativan rezultat ne znači da virus nije mogao prodrijeti kroz placentnu barijeru.

Da bi se dobili tačni podaci, testiranje treba uraditi u roku od 36 mjeseci od rođenja bebe.

Usluge iz oblasti „Moderne dijagnostike“

Klinike iz oblasti "savremene dijagnostike"

Testiranje ili skrining na HIV antitela ima dva široka, ali vrlo jasno definisana cilja – otkrivanje slučajeva i nadzor. Prilikom identifikacije slučajeva, prvi korak je razjašnjavanje HIV infekcijskog statusa svakog pojedinca kako bi se propisao odgovarajući tretman ili praćenje uz odgovarajuće mjere.

Svrha epidemiološkog nadzora je procjena prevalencije HIV-a, distribucije slučajeva infekcije i njenih trendova u grupi ili populaciji.

Osetljivost testa na HIV antitela je mera njegove sposobnosti da precizno detektuje ova antitela u uzorku, a specifičnost testa je mera njegove sposobnosti da precizno potvrdi odsustvo antitela kada ona nisu prisutna u uzorku.

U idealnom slučaju, osjetljivost i specifičnost testa treba da dostigne 100%. U praksi, nijedan biološki test ne zadovoljava ovaj zahtjev, a ipak su testovi koji se koriste za HIV antitela među najosetljivijim i specifičnijim testovima koji su trenutno dostupni.

Laboratorijska dijagnostika AIDS-a sastoji se od provođenja viroloških, seroloških i imunoloških studija materijala oboljelih osoba za koje se sumnja da imaju ovu bolest.

U virološkim studijama, primarne kulture mononuklearnih krvnih stanica mogu se koristiti za izolaciju virusa.

Izolacija i identifikacija virusa su metodološki složeni i mogu se obaviti u specijaliziranim laboratorijama. Najefikasnija dijagnostička metoda koja se trenutno koristi za rutinske masovne preglede je otkrivanje antitijela na virus humane imunodeficijencije. Antitela na HIV mogu se pojaviti do kraja prvog meseca infekcije. Prema brojnim autorima, za razvoj serokonverzije potrebno je od 4-7 sedmica do 6 mjeseci ili više. Prisustvo antitijela ima dijagnostičku vrijednost za AIDS ili ukazuje na rizik od njegovog razvoja.

Antitijela nisu samo serološki marker AIDS-a. Otkriveni u pretkliničkoj fazi bolesti, omogućavaju njenu ranu dijagnozu. Njihovo prisustvo je od posebnog značaja za otkrivanje nosilaca.

Antitela se otkrivaju tokom mnogo godina, skoro tokom celog života. Istraživači su uspostavili paralelizam u identifikaciji virusa i antitijela na njega, odnosno prisustvo antitijela na virus imunodeficijencije ukazuje na veliku vjerovatnoću da je osoba nosilac virusa.

Antitela na HIV antigen, koja se pojavljuju u periodu inkubacije, nastavljaju da se intenzivno proizvode sa razvojem bolesti, jer antigensku iritaciju stimulišu virioni oslobođeni iz inficiranih limfocita, i komponente subviriona koje ulaze u krvotok tokom raspada inficiranih ćelija. i inficirani limfociti.

Istovremeno, provirus integriran u genom inficiranih stanica ostaje nedostupan specifičnim antitijelima. Ovo objašnjava naizgled paradoksalnu činjenicu: što je više antitijela na virus ljudske imunodeficijencije u krvnom serumu, lakše je izolirati sam virus od pacijenta.

To se događa zato što se antitijela proizvedena kao odgovor na virusnu infekciju ne neutraliziraju i kao rezultat toga nemaju primjetan učinak na virus, već su jednostavno prisutna u tijelu zajedno s njim. Za otkrivanje antitijela (AT) na virus AIDS-a razvijen je niz testova koji omogućavaju da se istraživanje provede na dovoljno visokom nivou specifičnosti i osjetljivosti. To su metode radioimunog testa čvrste faze, radioimunoprecipitacije, imunofluorescencije, enzimskog imunosorbentnog testa i imunoblotinga.

Metode koje se najčešće koriste u praksi su enzimski imunosorbentni test (ELISA), koji se odlikuje visokom osjetljivošću, sposobnošću kvantitativnog i vizualnog snimanja rezultata reakcije, što metodu čini dostupnom laboratorijama bilo kojeg nivoa.

ELISA koristi strane i domaće test sisteme.

Klinički tok HIV infekcije i AIDS-a

Treba biti oprezan u odnosu na djecu rođenu od zaraženih majki. U nedostatku klinike, dijete se smatra zaraženim ako AT na HIV perzistira nakon godinu dana. Kada dobijete pozitivan rezultat ELISA-e, potrebno je tri puta testirati serume koji su dali pojedinačne pozitivne rezultate i potvrditi pozitivan rezultat nezavisnim sistemom - imunoblotingom.

Detekcija AT u ELISA reakciji ne daje dovoljno informacija, jer ne ukazuje na stanje osobe koja se testira, već samo ukazuje na inkubaciju, bolest ili prisustvo asimptomatske infekcije.

Imunološki bloting daje više informacija, jer je prisustvo AT na mnogim HIV antigenima karakteristično za tešku bolest, dok je reakcija sa 1-2 antigena tipičnija za blagi infektivni proces

Informativno je izbrojati broj T (pomoćnika) i odnos T4 prema Te (supresor) limfocita, određen korištenjem antitijela na jedno tijelo.

Važan kriterij za bolest može biti naglo povećanje količine imunoglobulina, posebno A i V. U općem kliničkom testu krvi, bolest može biti indikovana limfopenijom, leukopenijom, eritropenijom, trombocitopenijom i eozinofilijom.

Testovi na HIV koji se koriste za epidemiološki nadzor ne moraju biti toliko precizni kao oni koji se zahtijevaju u kliničke svrhe.

Međutim, ako je prevalencija HIV-a u populaciji veoma niska, svi pozitivni uzorci moraju se ponovo pregledati dodatnim testovima.

Uzimanje krvi za test na HIV antitijela ili za skrining može biti praćeno registracijom imena subjekata (sakupljanje imena) ili se može obaviti bez registracije imena ili individualnih identifikacionih podataka (anonimno prikupljanje) (tabela

Anonimni skrining bez identifikacije ima sljedeće karakteristike: koristi uzorke krvi prikupljene u druge svrhe; Anonimnost je zagarantovana zbog činjenice da se identifikacioni podaci ne prikupljaju niti uzimaju u obzir; ne postoji obaveza pribavljanja saglasnosti subjekata; nije potreban kontakt sa savjetovalištem ili socijalnim službama; Konačno, i što je najvažnije, greške u statističkim procjenama u zavisnosti od nivoa učešća stanovništva svedene su na minimum.

Iako anonimno testiranje na HIV može pružiti preciznije podatke, ova metoda ima sljedeće nedostatke: ne može eliminirati potencijalnu pristrasnost odabira; podaci o visokorizičnom ponašanju i drugim važnim varijablama nisu dostupni i ne mogu se prikupljati retrospektivno; nemoguće je kontaktirati osobe zaražene HIV-om kako bi ih obavijestio o njihovom stanju; Pregled se može obaviti samo u grupama ljudi od kojih se krv uzima u druge svrhe.

U područjima u kojima se smatra da je prevalencija HIV infekcija vrlo niska, javnozdravstveni nadzor bi se trebao fokusirati prvenstveno na pojedince ili populacije s najrizičnim seksualnim partnerima

Krv za testiranje na HIV u ovoj rizičnoj grupi najlakše se uzima u centrima specijalizovanim za lečenje polno prenosivih bolesti ili sličnim ustanovama.

Ako je uobičajena i intravenska upotreba droga, potrebno je uzeti uzorke krvi od korisnika droga u posebnim ustanovama.

Obično će biti dovoljno prikupljanje krvi jednom svaka 3 ili 6 mjeseci u grupama s najvećim rizikom iz geografskih područja gdje su takve grupe najzastupljenije. Izuzetak može biti za rizične grupe kao što su ovisnici o drogama koji praktikuju intravensku primjenu droga, za koje može biti potrebno više privatnih pregleda.

SZO trenutno razvija sistem klasifikacije (stadijuma) bolesti za klinička ispitivanja koja se takođe mogu koristiti u ispitivanjima lečenja, koja takođe mogu imati prognostičku vrednost.

Međutim, takav sistem nije namijenjen da zamijeni postojeće definicije AIDS-a koje se koriste u nadzoru zdravstvenog sistema.

Trenutno se posvuda razvijaju planirani (rutinski) sistemi za praćenje HIV-a.

Ove sisteme je potrebno prilagoditi trenutnoj epidemiološkoj situaciji; Stoga se metode uzorkovanja u populacijama s vrlo niskom prevalencijom virusa nužno moraju razlikovati od onih koje se koriste u populacijama gdje je prevalencija umjerena ili visoka.

Takav nadzor uključuje rutinska ispitivanja dobro definiranih i dostupnih populacija.

Treba prvenstveno obuhvatiti one grupe koje su u najvećem riziku od infekcije, a iz svake od ovih grupa treba odabrati konstantan unaprijed određen broj osoba za pregled.

Posljednjih godina, anonimni skrining bez identiteta postaje sve češći kao precizna i isplativa metoda za nadzor HIV-a u zdravstvenim ustanovama.

Laboratorijske dijagnostičke metode za HIV

U visokospecijalizovanoj laboratoriji izvodi se sledeće:

a) određivanje antitela, antigena i imunoloških kompleksa koji cirkulišu u krvi; kultiviranje virusa, identificiranje njegovog genomskog materijala i enzima;

b) procjena funkcija ćelijskog dijela imunog sistema.

Glavna uloga pripada serološkim dijagnostičkim metodama koje imaju za cilj određivanje antitijela, kao i antigena patogena u krvi i drugim biološkim tekućinama tijela.

Testiranje na HIV antitela vrši se na:

a) sigurnost transfuzije i transplantacije krvi;

b) nadzor, testiranje u cilju praćenja prevalencije HIV infekcije i proučavanja dinamike njene prevalencije u određenoj populaciji;

c) dijagnoza HIV infekcije, tj.

e. dobrovoljno testiranje krvnog seruma od naizgled zdravih ljudi ili pacijenata s različitim kliničkim znakovima i simptomima sličnim HIV infekciji ili AIDS-u.

Sistem za laboratorijsku dijagnostiku HIV infekcije izgrađen je na principu od tri faze.

Prva faza je skrining, namijenjen za obavljanje primarnih testova krvi na prisustvo antitijela na proteine HIV-a. Druga faza je referentna - omogućava, koristeći posebne metodološke tehnike, da se razjasni (potvrdi) primarni pozitivan rezultat dobijen u fazi skrininga. Treća faza je ekspertna faza, namijenjena konačnoj provjeri prisustva i specifičnosti markera HIV infekcije identifikovanih u prethodnim fazama laboratorijske dijagnostike.

Potreba za nekoliko faza laboratorijske dijagnostike je prvenstveno zbog ekonomskih razloga.

U praksi se koristi nekoliko testova koji omogućavaju identifikaciju osoba zaraženih HIV-om s dovoljnim stepenom pouzdanosti:

ELISA test (enzimski imunosorbentni test) prvog nivoa detekcije, odlikuje se visokom osetljivošću, iako manje specifičnosti od sledećeg;

Imuni blot (Western-blot), vrlo specifičan i najčešće korišten test koji vam omogućava da razlikujete HIV-1 i HIV-2;

Test antigenemije p25, efikasan u početnim fazama infekcije;

Lančana reakcija polimeraze (PCR).

U slučajevima masovnog skrininga uzoraka krvi, preporučuje se testiranje mješavina seruma iz grupe ispitanika, sastavljenih na način da konačno razrjeđenje svakog uzorka ne prelazi 1:100.

Ako je mješavina seruma pozitivna, testira se svaki serum u pozitivnoj smjesi. Ova metoda ne dovodi do gubitka osjetljivosti i kod ELISA i imunoblota, ali smanjuje troškove rada i troškove inicijalnog pregleda za 60-80%.

Imunološke metode

broj T pomagača,

2. odnos T4 i T8,

3. stanje preosjetljivosti,

4. kompenzatorna funkcija sistema T ćelija.

Manifestuje se hiperprodukcijom imunoglobulina, oni su niskog afiniteta, a tjelesni materijal se još više troši.

Nedostaci: pojavljuju se kasno, neki imunološki pokazatelji mogu biti prisutni kod drugih infekcija.

Kliničke metode – m.b. slične su drugim bolestima, najtipičnije manifestacije se bilježe u kasnijim fazama, pa klinička dijagnoza nije previše efikasna

Glavna metoda – serološka – provodi se u 2 faze:

1 – skrining pregled – uzimanje uzoraka na ukupna antitela na sve proteine imunotesta.

Ova faza daje 95% istinitih rezultata i 5% lažno pozitivnih.

2 – potvrdna metoda – svi uzorci se ispituju potvrdnom metodom. Ova tehnika vam omogućava da otkrijete antitijela na virusni protein.

Pozitivan rezultat je kada se otkriju antitijela na najmanje 3 virusna proteina, ako je na 1 ili 2 rezultat upitan i zahtijeva dodatno ispitivanje.

Tokom primarne serodijagnostike HIV infekcije, ukupna antitijela se određuju skrining testovima - ELISA i reakcijama aglutinacije.

U drugoj (arbitražnoj) fazi koristi se složeniji test - imunoblot, koji omogućava ne samo da se potvrdi ili odbije početni zaključak, već i da se to učini na razini određivanja antitijela na pojedinačne proteine virusa.

Interpretacija rezultata testa na HIV antitela

Prilično veliki broj različitih faktora utiče na rezultat testa na antitijela na HIV, a među njima je važno vrijeme testiranja nakon moguće infekcije.

U većini slučajeva, antitijela na HIV mogu se otkriti 6-12 sedmica nakon infekcije.

Ovaj period od ulaska virusa u tijelo do pojave detektabilne količine antitijela naziva se period pozitivne serokonverzije ili period "prozora". Rijetki su slučajevi pojave antitijela 6 mjeseci nakon infekcije, a izvještaji o otkrivanju antitijela tek nakon 1 godine nemaju dokaza. Trenutno, dijagnostička služba koristi nove generacije ELISA metoda koje omogućavaju otkrivanje antitijela na HIV 3-4 sedmice nakon infekcije, a određene kombinacije ovih metoda, tzv. 3 sedmice, tj.

omogućavaju otkrivanje antitijela na HIV čim se počnu proizvoditi u tijelu.

Negativan rezultat znači da u krvi osobe koja se ispituje nisu otkrivena antitijela na HIV.

Ovo stanje se naziva seronegativnost i obično znači da osoba nije zaražena.

Negativan rezultat ne daje nikakvu garanciju za budućnost. On samo navodi stanje u trenutku pregleda. Mala je šansa da je istraživanje sprovedeno tokom perioda prozora. Stoga, ako je osoba prethodno bila izložena HIV-u i bila negativna na testu, treba je ponovo testirati najmanje 6 mjeseci nakon rizičnog događaja.

Pozitivan rezultat znači da su u krvi pacijenta pronađena antitijela na HIV.

Ovo stanje se naziva seropozitivnost – osoba je zaražena HIV-om. Važno je shvatiti da pozitivan rezultat ukazuje samo na HIV infekciju, a ne na SIDU.

Međutim, izuzetno je važno da se nakon pozitivnog nalaza obratite ljekaru za savjet i, ako je potrebno, medicinsku pomoć, što će vam omogućiti da održite kvalitetu svog života na dobrom nivou dugo vremena.

Nesiguran rezultat. U rijetkim slučajevima, rezultat testa na HIV antitijela je nejasan.

Laboratorij ne može odgovoriti da li je osoba seropozitivna ili seronegativna. U takvim okolnostima potrebno je konsultovati lekara i ponovo se testirati.