Интерфероны: понятие, методы получения, применение. Способ получения человеческого иммунного интерферона Способы получения интерферонов

Тема: Интерфероны. Получение интерферонов.

Интерфероны были открыты в 1957 году в Национальном институте медицинских исследований в Лондоне как факторы устойчивости к вирусной инфекции. Было установлено, что клетки животных, подвергнутые воздействию вируса, выделяют в среду фактор, способный придавать здоровым клеткам устойчивость к вирусной инфекции: он как бы препятствовал (интерферировал) размножению вирусов в клетке и в силу этой способности был назван интерфероном. Существует три разновидности интерферонов:

α, β, относимые к первому классу, γ-интерферон, относимый к второму классу.

Интерферон-α, продуцируемый лейкоцитами, обладает преимущественно противовирусным, антипролиферативным и противоопухолевым действием.

Интерферон-β, образуемый фибробластами, обладает преимущественно противоопухолевым, а также антивирусным действием.

Интерферон –γ – продуцируются Т-лимфоцитами и естественными киллерами (NΚ-клетками) и называется лимфоцитарным и иммунным. Он обладает преимущественно иммуномодулирующим и слабым противовирусным эффектом.

Продукцию интерферонов Ι класса индуцируют вирусы, двухцепочечные РНК, синтетические двухцепочечные олигонуклеотиды,продукцию интерферона – γ – вирусные и бактериальные антигены или антисыворотки против поверхностных детерминант лимфоцитов.Противовирусный эффект интерферонов обусловлен способностью активировать в клетках синтез двух ферментов – олигоаденилатсинтетазы и протеинкиназы, ингибирующих биосинтез белка и размножение вируса в инфицированной клетке, что вызывает ее лизис. Таков же механизм антипролиферативного противоопухолевого действия интерферонов.

Интерферон-γ – полифункциональный иммуномодулирующий лимфокин, влияющий на рост и дифференцировку клеток разных типов. Он активирует макрофаги на этапе передачи антигенной информации лимфоциту, повышает их антимикробную и противоопухолевую активность, продукцию ИЛ-1. ИФ-γ активирует естественные киллеры, цитотоксические лимфоциты, подавляющие рост опухолей.

Интерфероны-α являются протеинами, а β и γ – интерфероны – гликопротеинами, они представляют собой типичные глобулярные белки. В α – интерферонах обнаружены две дисульфидные связи. Интерфероны – низкомолекулярные белки из 146-166 аминокислотных остатков, видоспецифичны, т.е. человеческий интерферон биологически активен в организме человека, мышиный – только в организме мыши.

К числу наиболее хорошо исследованных интерферонов относятся α-интерфероны; число генов, их кодирующих примерно 20, они локализованы в 9-й хромосоме. В отношении β-интерферонов – выделен только один белок, соответствующий β-интерферону человека – интерферон β 1 – ему соответствует практически вся противовирусная активность. Не исключено, что в геноме существует ряд генов, кодирующих различные β – интерфероны. Гены β – интерферонов локализованы в 9-й хромосоме. Интерферон-γ представлен всего одним индивидуальным белком, который кодируется одним геном, расположенным в 12-й хромосоме.

Получение интерферонов . Интерфероны служат одним из самых эффективных средств лечения вирусных инфекций, но они видоспецифичны и могут быть получены только из клеток человека. Технология выделения и очистки интерферонов малоэффективна, прежде всего, из-за крайне малого выхода конечного продукта (из 1 л крови можно выделить всего 1 мкг интерферона, т.е. примерно одну дозу для инъекции).

На современном этапе наиболее перспективный метод – биосинтез интерферонов с помощью генетически сконструированных микроорганизмов. кДНК полученные обратным транскрибированием, были клонированы в E.coli. Ген интерферона был встроен в векторную ДНК, и к нему были присоединены бактериальные регуляторные элементы, программирующие его транскрипцию и трансляцию в бактериальной клетке. Сначала интерфероны в клетке синтезируются в виде предшественников, содержащих на N-конце полипептидной цепи сигнальный пептид, который затем отщепляется, и в результате чего образуется зрелый интерферон, обладающий полной биологической активностью. Бактерии не содержат ферментов, способных отщепить сигнальный пептид с образованием зрелого белка. Поэтому для того, чтобы бактерии синтезировали зрелый интерферон, следует ввести в плазмиду только ту часть гена, которая его кодирует, и удалить часть гена, кодирующую сигнальный пептид. Данная процедура осуществлялась следующим образом. Ген интерферона содержит три участка расщепления рестриктазой Sau 3А1, из которых один находится рядом с сигнальной частью. Неполное расщепление гена этим ферментом позволяет выделить фрагмент гена, содержащий нуклеотидную последовательность, кодирующую зрелый интерферон, но без первого цистеина. Триплет АТG, кодирующий цистеин, отщепляется ферментом вместе с сигнальной частью. Для восстановления полинуклеотидной последовательности полного гена химически был синтезирован небольшой фрагмент ДНК, содержащий данный триплет, а также примыкающий к нему триплет АТG – точка инициации синтеза белка. Этот фрагмент присоединили к изолированной части зрелого гена, и в результате был восстановлен полный ген зрелого интерферона. Реконструированный ген ввели в плазмиду таким образом, что с ним оказался рядом участок ДНК-промотор, обеспечивающий начало синтеза мРНК. Экстракты из E.coli, содержащие такую плазмиду, обладали противовирусной активностью. Синтезированный генно-инженерным способом интерферон был выделен, очищен и его физико-химические свойства оказались близкими свойствами интерферона, полученного из крови доноров. Удалось получить бактерии, способные синтезировать до 5 мг интерферона на 1л бактериальной суспензии, содержащей примерно 1011 бактериальных клеток, что в 5000 раз превосходит то количество интерферона, которое можно извлечь из 1л крови доноров.

При использовании генно-инженерных технологий в разных лабораториях были получены штаммы бактерий, продуцирующих различные интерфероны: α-, β- и γ- типов. Недостаток использования E.coli для получения β- и γ-интерферонов – отсутствие в бактерии аппарата гликолизирования эукариотических белков, что приводит к синтезу негликолизированных молекул. И хотя роль гликолизирования неясна и негликолизированные β- и γ-интерфероны практически полностью сохраняют противовирусную активность, эта особенность диктует осторожный подход к использованию генно-инженерных препаратов в медицинской практике.

В настоящее время гены интерферонов клонированы в дрожжи и клетки высших эукариот, способных осуществлять гликолизирование. В 1981 году в США впервые для синтеза лейкоцитарного интерферона человека были употреблены генетически сконструированные клетки дрожжей Saccharomyces cerevisiae. Полученная эффективная экспрессия гена LeIF и замена бактерий клетками дрожжей позволили увеличить производство интерферона в 10 раз.

Интерфероны выпускают в качестве лекарственных препаратов в виде каплей в нос, мазей и растворов для инъекций. Существуют натуральные интерфероны, полученные из лимфоцитов донорской крови и искусственно синтезированные с применением генно-инженерных технологий (рекомбинантные). В настоящее время в России и за рубежом выпускают коммерческие препараты – человеческий лейкоцитарный, лимфобластный (Велферон) и фибробластный (Ферон), а также интерфероны, полученные генно-инженерными методами: рекомбинантные α-интерферон (Роферон, Реальдерон и др.), β-интерферон и γ-интерферон (Гаммаферон).

Отправить свою хорошую работу в базу знаний просто. Используйте форму, расположенную ниже

Студенты, аспиранты, молодые ученые, использующие базу знаний в своей учебе и работе, будут вам очень благодарны.

Размещено на http://www.allbest.ru/

Введение

1 Классификация интерферонов

2 Методы получения интерферонов

2.1 Получение путем инфицирования лейкоцитов человека

2.2 Получение интерферонов генно-инженерным способом

3. Механизмы действия интерферонов

4. Терапевтическое применение интерферона человека

Заключение

Список использованной литературы

Введение

В 1957 году в Национальном институте медицинских исследований в Лондоне было установлено, что клетки человека и животных, подвергнутые воздействию вируса, выделяют вещества, придающие непораженным клеткам устойчивость к вирусной инфекции. Они как бы препятствуют (интерферируют) размножению вирусов в клетке и поэтому были названы интерферонами. Интерфероны помогают нашему организму бороться со множеством вирусных заболеваний.

Препараты на основе различных видов интерферонов используются как иммуномодуляторы для нормализации и усиления иммунной системы, в т. ч. для лечения различных тяжелых заболеваний - острого вирусного гепатита, рассеянного склероза, остеосаркомы, миеломы и некоторых видов лимфом.

Интерфероны представляют собой белковые молекулы с молекулярной массой от 15000 до 21000 дальтон, продуцируемые и секретируемые клетками в ответ на вирусную инфекцию или другие возбудители.

Интерфероны (ИФН) -- группа аутогенных гликопротеинов, биомеханизм действия которых связан с одновременным противовирусным эффектом - активацией клеточных генов, в результате чего синтезируются белки, ингибирующие синтез вирусной ДНК (РНК) и обладающие иммуномодулирующим эффектом -- способностью усиливать экспрессию антигенов на клеточных мембранах и увеличивать активность цитотоксических Т-клеток и естественных киллеров .

1. К лассификация интерферонов

В зависимости от типа клеток-продуцентов все интерфероны можно разделить на:

* б-интерфероны.

* в-интерфероны.

* г-интерфероны.

По способу получения интерфероны делятся на:

1. Природные, получаемые из культуры клеток лейкоцитов человека, стимулированных вирусами:

б-интерферон, в-интерферон, интерферон- б Nl;

2. Рекомбинантные, продуцируемые бактериями со встроенным геном интерферона в их геном:

Интерферон- б2А, интерферон- б2В, интерферон- вlb .

Интерферон - б вырабатывается лейкоцитами, и он получил название лейкоцитарного; в-интерферон называют фибробластным, поскольку он синтезируется фибробластами -- клетками соединительной ткани, а г -интерферон -- иммунным, так как он вырабатывается активированными Т-лимфоцитами, макрофагами, естественными киллерами, т. е. иммунными клетками

Под действием интерферона - г повышается продукция цитокинов, таких, как интерлейкин-1, интерлейкин-2, интерлейкин-12, ИФНв, и фактора некроза опухолей-б.

2. Методы получения интерферонов

Получают интерфероны двумя способами:

а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов крови человека безопасным вирусом, в результате чего инфицированные клетки синтезируют интерферон, который затем выделяют и конструируют из него препараты интерферона;

б) генно-инженерным способом -- путем выращивания в производственных условиях рекомбинантных штаммов бактерий, способных продуцировать интерферон .

2 . 1 П олучение путем инфицирования лейкоцитов человека

Известны способы получения лейкоцитарного интерферона человека из лейкоцитов донорской крови человека, индуцированных вирусами и другими индукторами .

Лейкоциты крови человека - основные продуценты природного интерферона-альфа, количество которых для производственных целей лимитируется донорским сырьем. В этой связи решение вопросов оптимизации методов культивирования лейкоцитов для повышения выхода целевого продукта и разработки унифицированного эффективного метода получения природного ИФН для создания новых лекарственных форм представляется на сегодня весьма важным и актуальным для практического здравоохранения .

Известна технология производства человеческого лейкоцитарного интерферона, которая включает в себя следующую последовательность операций: выделение лейкоцитов из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы, суспензирование их в питательной среде при температуре (37±0,5) o C, добавление к лейкоцитам аллантоисного вирус-индуктора и инкубирование при (30±0,5) o C 3 ч. После этого отделяют вирус-индуктор, а к осадку лейкоцитов добавляют питательную среду и суспензию выдерживают при (37±0,5) o C в течение 18-20 ч. На этом этапе происходит биосинтез интерферона в лейкоцитах и накопление его в питательной среде, полученной по этой технологии, имеет противовирусную активность 800-1000 МЕ в 1 мл препарата.

С целью увеличения продукции интерферона лейкоцитами на стадии биосинтеза в другом регламенте производства человеческого лейкоцитарного интерферона N 302-82 суспензию лейкоцитов выдерживают при 37,5 o C в течение 2 -10 ч в питательной среде, содержащей 100-200 ед/мл человеческого лейкоцитарного интерферона и 0,0015 ед/мл инсулина стадия прайминга добавляют вирус-индуктор на 1-2 ч стадия индукции интерферона. Затем удаляют вирус-индуктор, а к осадку лейкоцитов добавляют питательную среду и суспензию выдерживают при 37,5 o C в течение 18-20 ч стадия биосинтеза интерферона, а надосадочную жидкость, содержащую интерферон, подвергают инактивации.

Введение стадии прайминга значительно повышает продукцию интерферона лейкоцитами, а противовирусная активность интерферона, полученного этим способом составляет 4000-5000 МЕ/мл. Необходимо отметить, что во всех вышеприведенных производственных технологиях и других известных способах получения человеческого лейкоцитарного интерферона, лейкоциты выделяют из крови, которая хранится при 4-6 o C, а сам процесс выделения идет при такой же температуре с последующим внесением их в питательную среду с температурой 37,5 o C и проведение стадии прайминга, стадии индукции и биосинтеза интерферона .

В качестве прототипа выбирается следующий способ получения интерферона, так как он является наиболее близким по технической сущности. Цель метода повышение выхода целевого продукта. С этой целью предложен способ получения интерферона, включающий выделение лейкоцитов, суспендирование их в питательной среде и праймирование в условиях постепенного повышения температуры суспензии с 20 o до (36,6 ±0,1) o C в течение 4-6 ч, индукцию аллантоисным вирусом болезни Ньюкасла, биосинтез интерферона и инактивацию вируса-индуктора. Сравнительный анализ существенных признаков методов свидетельствует, что отличительными признаками заявляемого способа являются проведение прайминга лейкоцитов при медленном подъеме температуры суспензии с 20 o до (36,6±0,1) o C в течение 4-6 ч. Предложенный температурный режим праймирования лейкоцитов обеспечивает условия для интенсивного биосинтезаИНФ. Способ осуществляется следующим образом. Выделенные лейкоциты из донорской крови, лейкоцитарной или эритроцитарной массы суспендируют в 5 л питательной среды (среда 199), содержащей 0,0015 ед/мл инсулина и 1500-3000 МЕ/МЛ человеческого лейкоцитарного интерферона 5-10% плазмы крови человека или 1,5-2% альбумина человека и антибиотики. В 1 мл питательной среды содержится 10020 млн. лейкоцитов. Питательная среда, содержащая вышеперечисленные исходные компоненты, имеет исходную температуру 20 o C. В автоматизированном режиме, по программе, температуру суспензии с 20 o C повышают до (36,6±0,1) o C в течение 4-6 ч. Затем температуру суспензии доводят до (36,9±0,1) o C и в суспензию добавляют вирус-индуктор в дозе 2000-4000 ГАЕ на 2 млрд лейкоцитов, инкубируют взвесь при (36,9±0,1) o C в течение 18-20ч, постоянно перемешивая. Лейкоциты удаляют центрифугированием, а надосадочную жидкость в количестве 4,5 л, содержащую интерферон, подкисляют 10% соляной кислотой до pH 2,2-2,4. Выдерживают подкисленный полуфабрикат интерферона в течение 10 дней для инактивации вируса-индуктора. Противовирусная активность полученного таким способом интерферона составляет 10-12тысяч МЕ/мл .

Таким образом, предлагаемый способ получения человеческого лейкоцитарнрого интерферона обеспечивает повышение его противовирусной активности в 2 и более раза по сравнению с предыдущим способом. Использование предлагаемого способа в производстве будет способствовать экономии материальных затрат, т.к. он направлен на более эффективное использование лейкоцитов, а не на увеличение их количествa.

Основным недостатком этих способов получения интерферонов являются вероятность контаминации конечного продукта вирусами человека, такими как вирус гепатитов В и С, вируса иммунодефицита и др .

2.2 Получение интерферонов генно-инженерным способом

интерферон лейкоцит ген вирус

В настоящее время более перспективным признан способ получения интерферона микробиологическим синтезом, который обеспечивает возможность получения целевого продукта со значительно более высоким выходом из сравнительно недорогого исходного сырья. Используемые при этом подходы позволяют создать оптимальные для бактериальной экспрессии варианты структурного гена, а также регуляторных элементов, контролирующих его экспрессию .

В качестве исходных микроорганизмов используют различные конструкции штаммов Pichia pastoris, Pseudomonas putida и Escherichia coli.

Недостатком использования P. pastoris в качестве продуцента интерферона, является крайне сложные условия ферментации этого типа дрожжей, необходимость строго поддерживать концентрацию индуктора, в частности метанола, в процессе биосинтеза.

Недостатком использования штаммов Ps. putida является сложность процесса ферментации при низком уровне экспрессии (10 мг интерферона на 1 л культуральной среды). Более продуктивным является использование штаммов Escherichia coli .

Известно большое количество плазмид и созданных на их основе штаммов Е. coli, экспрессирующих интерферон: штаммы Е. coli ATCC 31633 и 31644 с плазмидами Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 или Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35-AHL6 (SU 1764515), штамм Е. coli pINF- AP2 (SU 1312961), штамм Е. coli pINF- F-Pa (AU 1312962), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой p280/21FN, штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой pINF14 (SU 1703691), штамм E.coli SG 20050 с плазмидой pINF16 (RU 2054041) и др. Недостатком технологий, основанных на использовании этих штаммов, является их нестабильность, а также недостаточный уровень экспрессии интерферона.

Наряду с особенностями используемых штаммов эффективность процесса во многом зависит от используемой технологии выделения и очистки интерферона.

Известен способ получения интерферона, включающий в себя культивирование клеток Ps. putida, разрушение биомассы, обработку полиэтиленимином, фракционирование сернокислым аммонием, гидрофобную хроматографию на фенилсилохроме С-80, рН-фракционирование лизата, его концентрирование и диафильтрацию, ионообменную хроматографию на целлюлозе DE-52, элюирование в градиенте рН, ионообменную хроматографию полученного элюента на целлюлозе СМ-52, концентрирование пропусканием через кассету фильтров и гель-фильтрацию на Сефадексе G-100 (SU 1640996). Недостатком этого способа кроме сложной многостадийной ферментации является многостадийность при получении конечного продукта.

Известен также способ получения интерферона, включающий в себя культивирование штамма E.coli SG 20050/pIF16, в LB-бульоне в колбах в термостатированном шейкере, центрифугирование биомассы, ее промывку буферным раствором и обработку ультразвуком для разрушения клеток. Полученный лизат центрифугируют, промывают 3М раствором мочевины в буфере, растворяют в растворе гуанидин хлорида в буфере, обрабатывают ультразвуком, центрифугируют, проводят окислительный сульфитолиз, диализ против 8 М мочевины, ренатурацию и окончательную двухстадийную хроматографию на СМ-52 целлюлозе и сефадексе G-50 (RU 2054041) .

Недостатками этого способа является его относительно невысокая производительность основных этапов процесса выделения и очистки. В особенности это относится к ультразвуковой обработке продукта, диализу и окислительному сульфитолизу, что приводит к нестабильности выхода интерферона, а также к невозможности использования этого метода для промышленного производства интерферона.

В качестве наиболее близкого аналога (прототипа) может быть указан способ получения лейкоцитарного интерферона человека, заключающийся в культивировании рекомбинантного штамма E.coli, замораживании полученной биомассы при температуре не выше -70°С, размораживании, разрушении клеток микроорганизма лизоцимом, удалении ДНК и РНК введением в лизат ДНК-азы и очисткой выделенной нерастворимой формы интерферона отмывкой буферным раствором с детергентами, растворении осадка интерферона в растворе гуанидин гидрохлорида, ренатурации и одностадийной очистке ионообменной хроматографией. В качестве продуцента используют штамм E.coli SS5, полученный с помощью рекомбинантной плазмиды pSS5, содержащей три промотора: Plac, Pt7 и Ptrp, и ген альфа -интерферона с введенными нуклеотидными заменами.

Экспрессия интерферона штаммом E.coli SS5, содержащим эту плазмиду, контролируется тремя промоторами: Plac, Pt7 и Ptrp. Уровень экспрессии интерферона составляет около 800 мг на 1 л клеточной суспензии .

Недостатком способа является низкая технологичность использования ферментативного разрушения клеток, ДНК и РНК микроорганизма и одностадийная хроматографическая очистка интерферона. Это обуславливает нестабильность процесса выделения интерферона, приводит к снижению его качества и ограничивает возможность использования приведенной схемы для промышленного производства интерферона.

Недостатками данной плазмиды и штамма на ее основе являются использование в плазмиде сильного нерегулируемого промотора фага Т7 в штамме Е. coli BL21 (DE3), в котором ген Т7 РНК полимеразы находится под промотором lac оперона и который всегда "течет". Следовательно, в клетке непрерывно происходит синтез интерферона, что приводит к диссоциации плазмиды и снижению жизнеспособности клеток штамма, и в результате - снижение выхода интерферона.

Пример получения рекомбинантного интерферона:

600 г биомассы клеток Pseudomonas putida 84,содержавших рекомбинантную плазмиду p VG-3, после культивирования содержали 130 мг альфа-2 интерферона. Клетки загружали в емкость баллистического дезинтегратора с механической мешалкой вместимостью 5,0 л и приливали к ней 3,0 л лизисного буфера, содержащего 1,2% хлористого натрия, 1,2% трис-(гидроксиметил)-аминометана, 10% сахарозы, 0,15% этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА), 0,02% фенилметилсульфонилфторида и 0,01% дитиотреитола при рН 7,7. Биомассу перемешивали до получения однородной суспензии в течение 30 мин, затем дезинтегрировали в циркуляционном режиме в баллистическом дезинтеграторе в соответствии с инструкцией по эксплуатации. Время дезинтеграции составляло 1,5 ч. Процесс дезинтеграции заканчивали, когда при микроскопировании препарата в нескольких полях зрения микроскопа практически не наблюдается целых клеток микроорганизмов. Объем суспензии лизированной биомассы составил 3,5 л.

Полученный на данной стадии лизат затем поступал на стадию осаждения нуклеиновых кислот. Для этого в емкость, содержащую лизат при перемешивании со скоростью 1-1,2 л/ч подавали 180 мл 5% раствора полиэтиленимина. Суспензию перемешивали в течение 1 ч и центрифугировали для отделения осадка нуклеиновых кислот 1 ч при (9500±500) об/мин, при температуре (5±2)С. После центрифугирования отделяли супернатант, объем которого составлял 3,0 л .

При медленном перемешивании мешалкой в супернатант всыпали 182 г сухого сульфата аммония малыми порциями (каждую следующую порцию добавляли после полного растворения предыдущей). После окончания внесения сульфата аммония перемешивание продолжали до полного растворения соли и суспензию осадка белков выдерживали при температуре (5±2)С 16 ч, а затем центрифугировали в течение 1 ч при (13500±500) об/мин при температуре (5±2)С.

Полученный осадок растворяли в дистиллированной воде, доводя общий объем до 4 л. Для осаждения сопутствующих белков проводили кислотное фракционирование полученного раствора, содержащего альфа-2 интерферон. Для этого в раствор добавляли 5,0 мл 50%-ной уксусной кислоты до рН 4,75. Полученную смесь переносили в холодильник и оставляли при температуре (5±2)С в течение 3 ч, затем центрифугировали суспензию белков при (13500±500) об/мин 30 мин при (5±2)С.

К 4 л супернатанта добавляли 50,0 мл 1 М раствора Триса до рН (6,9±0,1). Концентрация общего белка, определенная методом Лоури, составляла 9,0 мг/мл, биологическая активность альфа-2 интерферона (6,80,5)106 МЕ/мл. Удельная активность 8,5105 МЕ/мг. Общее содержание альфа-2 интерферона на данной стадии 2,91010 ME.

Сорбент Солоза КГ в количестве 0,6 л в виде водной взвеси помещали в хроматографическую колонку. Затем с помощью перистальтического насоса через сорбент последовательно пропускали 2,0 л 0,2 М раствора гидроокиси натрия, 6,0 л дистиллированной воды и 4,5 л 0,05 М трис-ацетатного буферного раствора при рН (7,1±0,1), который на выходе из колонки контролировали рН-метром.

Раствор белков, содержащий альфа-2 интерферон, разбавляли дистиллированной водой до проводимости (6,0+2,0) мСм/см при комнатной температуре. Объем раствора при этом составил 19,2 л.

Раствор наносили на колонку со скоростью 1,5 л/час, затем промывали сорбент 2,0 л трис-ацетатного буфера 0,05 М при рН 7,0. Элюцию проводили 1,2 л 0,05 М раствором Триса с рН (10,2±0,1) Содержание интерферона во фракциях, собранных с помощью коллектора фракций, определяли иммуноферментным методом.

Концентрация общего белка, определенная методом Лоури, составляет (2,2±0,2) мг/мл, биологическая активность альфа-2 интерферона (2,1±0,5)107 МЕ/мл, удельная активность препарата (9,7±0,5)106 МЕ/мг. Общее содержание альфа-2 интерферона на данной стадии составляет (1,5±0,5)1010 ME.

Сорбент Сфероцелл qae в количестве 0,15 л в виде водной суспензии загружали в колонку и промывали со скоростью 0,15 л/ч последовательно 0,5 л 2 М раствора хлористого натрия, 1,5 л дистиллированной воды и 1,0 л трис-ацетатного буферного раствора 0,05 М с рН 8,0, контролируя рН буферного раствора на выходе из колонки рН-метром .

Раствор белков объемом 0,7 л, содержащий альфа-2 интерферон наносили на колонку с сорбентом Сфероцелл-QAE объемом 0,15 л со скоростью 0,2 л/час. Промывку колонки осуществляли трис-ацетатным 0,05 М буферным раствором (рН 8,0) объемом 0,1 л, затем примесные белки отмывали 1,0 л того же буферного раствора с добавлением 0,05 М NaCI. Элюцию интерферона проводили 0,8 л 0,1 М натрий-ацетатным буферным раствором при рН 5,0. Содержание альфа-2 интерферона во фракциях, собранных с помощью коллектора определяли иммуноферментным методом. Концентрация белка составляла (0,35±0,05) мг/мл, биологическая активность альфа-2 интерферона (1,7±0,2)107 МЕ/мл. Удельная активность препарата 5,5107 МЕ/мг белка. Элюат содержал 1,20х1010 ME. Выход по биологической активности на данной стадии 82,5%.

Полученный раствор доводили до рН (5,0±0,1) 50% уксусной кислотой и разбавляли 0,05 М натрий-ацетатным буферным раствором. Удельная электропроводность составила (0,29±0,02) мСм/см при температуре (5±2)С. Подготовленный таким образом раствор белка наносили на колонку с сорбентом Сфероцелл ЛП-М со скоростью 0,1 л/ч, промывали 0,3 л вышеуказанного буферного раствора, а затем элюировали интерферон с помощью линейного градиента концентрации хлористого натрия, создаваемой с помощью градиентного смесителя Ультроград Элюат фракционировали с помощью коллектора фракций и измеряли концентрацию общего белка и альфа-2 интерферона. Концентрация белка в объединенных фракциях (0,45±0,02) мг/мл. Объем раствора 0,1 л. Общее содержание альфа-2 интерферона (8,6±0,2)109 ME. Удельная активность - е (7,5±0,2)107 МЕ/мг. Выход на данной стадии 73%.

Полученный 3 раствор объемом 0,1 л концентрировали до (5,0±0,2) мл с помощью ячейки для ультрафильтрации, используя мембрану Amicon YM-3. Подготовленный таким образом образец наносили на колонку с сорбентом Сефадекс G-100, уравновешенную фосфатно-солевым буфером со скоростью 0,025 л/ч. Объем фракций составляет 10,0 мл. Полученные после хроматографии фракции проверяли на содержание альфа-2 интерферона иммуноферментным методом и объединяя фракции, содержащие основной пик альфа-2 интерферона. Объем полученного раствора составил 30,2 мл. Концентрация общего белка, определенная методом Лоури, (0,90±0,02) мг/мл. Общее содержание альфа-2 интерферона в растворе 5,5109 ME. Удельная активность полученного препарата альфа-2 интерферона 2,3108 МЕ/мг. Выход по альфа-2 интерферону на данной стадии составляет 90,2%. Полученный продукт стерилизовали и расфасовывали. Общий выход препарата 35,8%, в том числе на стадии очистки 51% .

Для получения больших количеств ИФН используют шестидневные однослойные культуры клеток куриного эмбриона или культивируемые лейкоциты крови человека, зараженные определенным видом вируса. Иными словами, для получения ИФН создают определенную систему вирус-клетка .

Из клетки человека изолирован ген, ответственный за биосинтез ИФН. Экзогенный человеческий ИФН получают, используя технологию рекомбинантных ДНК. Процедура выделения кДНК ИФН-ов состоит в следующем:

1) Из лейкоцитов человека выделяют мРНК, фракционируют ее по размерам, проводят обратную транскрипцию, встраивают в сайт модифицированной плазмиды.

2) Полученным продуктом трансформируют Е. соli; образовавшиеся клоны подразделяют на группы, которые идентифицируют.

3) Каждую группу клонов гибридизируют с ИФН - мРНК.

4) Из образовавшихся гибридов, содержащих кДНК и хРНК, выделяют мРНК, проводят ее трансляцию в системе синтеза белка.

5) Определяют интерферонную противовирусную активность каждой смеси, полученной в результате трансляции. Группы, проявившие интерферонную активность, содержат клон с кДНК, гибридизировавшийся с ИФН - мРНК; повторно идентифицируют клон, содержащий полноразмерную ИФН - кДНК человека .

3 . Механизмы действия интерферонов

Интерфероны проявляют некоторые виды активности как лимфокины и иммуномодуляторы. ИФН I типа, действующие преимущественно как ингибиторы репликации вирусов в клетке, реализуют свой эффект, стимулируя выработку рибосомами клеток хозяина клеточных ферментов, которые тормозят продукцию вирусов, нарушая трансляцию вирусной мРНК и синтез вирусных белков .

Интерфероны вырабатывают большинство видов животных, но проявление их активности видоспецифично, т.е. они действуют только у того вида животных, в которых вырабатываются.

Интерфероны вызывают индукцию трех ферментов:

Протеинкиназы, нарушающей начальный этап построения пептидной цепи;

Олигоизоаденилат синтетазы, активирующей РНК-азу, которая разрушает вирусную РНК;

Фосфодиэстеразы, разрушающей конечные нуклеотиды тРНК, что приводит к нарушению элонгации пептида .

С учетом антивирусного и иммуномоделирующего эффектов интерферона в НПО "Биомед" предложены и успешно апробированы, суппозитории с ИФНаn1 и пробиотиками при терапии дисбактериозов вирусной и бактериальной этиологии, кандидозов; в гинекологической практике для лечения эндометритов, кольпитов, вагинитов и гинекологического герпеса .

4. Терапевтическое применение интерферона человека

Интерфероны (ИНФ) обладают универсально широким спектром антивирусной активности, поскольку действуют не на вирионы или их НК, а индуцируют антивирусное состояние клетки, стимулирую образование комплекса белков, блокирующих транскрипцию вирусной иРНК. ИНФ не проникают в клетки, а взаимодействуют с мембранными рецепторами, индуцируя образование цАМФ, передающего сигнал на соответствующий оперон ДНК. Кроме того, ИНФ активируют гены, кодирующие продукты с прямым антивирусным действием - протеинкиназы, нарушающие сборку белковой молекулы, и аденилатсинтетазы, продукт которых активирует эндонуклеазу, разрушающую вирусные иРНК. Гамма-ИНФ активирует цитотоксические лимфоциты, естественные киллеры, моноциты, макрофаги, гранулоциты, способствующие уничтожению инфицированных клеток .

Различают два поколения препаратов интерферона. Для первого поколения характерно натуральное происхождение, при котором его получают из крови доноров. Из него получают интерферон лейкоцитарный человеческий сухой, который применяют для ингаляций и закапывания в носовые проходы. Также производят интерферон в свечах, очищенный концентрированный интерферон в сухом виде и Лейкинферон .

Этот метод получения препаратов на основе интерферона является достаточно дорогим и малодоступным, поэтому в конце 20 века при помощи генной инженерии были созданы препараты интерферона второго поколения.

Таким образом, удалось разработать препараты Виферон, Интераль и другие, содержащие в себе рекомбинантный человеческий интерферон- б.

По причине своих уникальных свойств препараты интерферона применяют при лечении и профилактики всех респираторных заболеваний, большинства онкозаболеваний, для лечения многих вирусных заболеваний и гриппа. Препараты интерферона широко применяются в лечении гепатита геппатита В и С: интерферон ограничивает развитие вируса, препятствует возникновению цирроза и исключает смертельный исход.

У некоторых препаратов интерферона имеются побочные эффекты, например, кожные высыпания, аллергии и заболевания кроветворной системы.

При длительном приеме интерферона в организме вырабатываются антитела к интерферону, что делает его неспособным к борьбе вирусами . Причина этих явлений кроется в наличии альбумина в препаратах на основе интерферона.

Альбумин получают из крови, поэтому существует риск (хоть и минимальный) заражения гепатитом и другими болезнями, передающимися через кровь .

Таблица 1

Спектр активности интерферонов

Название препарата	Подтип ИНФ	Способ получения	Фармакологическое действие	Показания к применению
Интерферон		Биосинтез в культуре лейкоцитов донорской крови под воздействием вирусов	Антивирусное, иммуномодулирующее, антипролиферативное	Вирусные заболевания, лейкоз, злокачественная меланома, рак почек, карциноидный синдром
Интерлок		Биосинтез в культуре лейкоцитов донорской крови под воздействием парамиковирусов	Подавляет жизнедеятельность ряда вирусов	Вирусные заболевания глаз, гепатиты
Интерферон альфа-2		Рекомбинантный	Антивирусное, иммуномодулирующее, ингибирует пролиферацию большого спектра опухолевых клеток	Эпителиальная форма острой и рецидивирующей вирусной инфекции глаз; онкологические заболевания
Интерферон альфа-2а		Рекомбинантный. Белок, содержащий 165 аминокислот	Противовирусная, противоопухолевая активность	Лейкемический ретикулоэндотелиоз, саркома капоши, рак почки, мочевого пузыря, меланома, опоясывающий лишай
Реаферон		Рекомбинанатный ИНФ, продуцируемый бактериальным штаммом псевдомонады, в генетический аппарат которой встроен ген человеческого лейкоцитарного ИНФ б2. Идентичен человеческому лейкоцитарному ИНФ б2.		Вирусные, опухолевые заболевания
Интерферон альфа - n1		Высокоочищенный человеческий ИНФ	Противовирусная	Хронический активный инфекционный гепатит В
Инреферон бета		Суперпродуция фибробластов человека стимулятором в присутствии ингибиторов обменных процессов	Противовирусная, иммуномодулирующая, противоопухолевая активность	Хронические вирусные инфекции в офтальмологии, гинекологии и урологии, дерматологии, гепатологии, онкологии
Интерферон гамма		Рекомбинантный	Противовирусная, иммуномодулирующая, противоопухолевая активность	Хронические гранулематозные заболевания

ИНФ- б и ИНФ- в больше похожи друг на друга. Их гены локализуются в 9 хромосоме. Для выработки обоих индуцирующим сигналом являются вирусы. Обладают выраженным противовирусным и противоопухолевым действием, в гораздо меньшей степени проявляют иммуномодулирующие свойства.

ИНФ- г обладает выраженным иммуномодулирующим действием, вместе с интерлейкином-2 (ИЛ-2) и фактором некроза опухолей (ФНО или TNF) относится к основным провоспалительным цитокином, является индуктором клеточного звена иммунитета. Противовирусные и противоопухолевые свойства выражены слабее чем у ИНФ-б и ИНФ-в. Ген ИНФ-г расположен в 12 хромосоме, основными клетками продуцентами являются Т-лимфоциты, натуральные или естественные киллеры (NK-клетки). Индуцирующим сигналом для выработки могут быть любой антиген или другие цитокины.

Противовирусный эффект интерферонов заключается в подавление синтеза вирусной РНК, подавление синтеза белков оболочки вируса. Механизмом этого эффекта является активация внутриклеточных ферментов, таких например как протеинкиназа или аденилатсинтетаза. Протеинкиназа разрушает фактор инициации синтеза белка с матричной РНК, что подавляет белковый синтез. Аденилатсинтетаза - вызывает синтез веществ разрушающих вирусную РНК.

Иммуномодулирующий эффект интерферонов - способность регулировать взаимодействие клеток участвующих в иммунном ответе. Эту функцию интерфероны выполнят, регулируя чувствительность клеток к цитокинам и экспрессию на мембранах клеток молекул главного комплекса гистосовместимости I типа (ГКГ1). Усиление экспрессии ГКГ1 на вирус-инфицированных клетках значительно повышает вероятность того, что они будут распознаны иммунокомпетентными клетками и элеминированы из организма. Наиболее выраженными иммуномодулирующими свойствами обладает ИНФ-г, являясь продуктом Т-лимфоцитов-хелперов I типа он вместе с другими провоспалительными цитокинами активирует макрофаги, Т-цитотоксические лимфоциты, клетки-естественные киллеры (NK-клетки), подавляет активность В-лимфоцитов, активизирует простагландиновую и кортикостероидную системы. Все эти факторы усиливают фагоцитарные и цитотоксические реакции в зоне воспалительного очага и способствую эффективной элиминации инфекционного агента.

Противоопухолевый эффект интерферонов связан с их способностью замедлять или подавлять рост культуры клеток и активировать противоопухолевые механизмы иммунной системы. Это свойство интерферонов было обнаружено давно и широко используется в терапевтических целях. Все противоопухолевые эффекты интерферонов делятся на прямые и непрямые. Прямы связаны со способность оказывать непосредственное действие на опухолевый клетки, их рост и дифференцировку. Непрямые связаны с усилением способности иммунокомпетентных клеток обнаруживать и уничтожать атипичных клетки организма.

Прямые противоопухолевые эффекты интерферона:

· Подавление синтеза РНК.

· Подавление синтеза протеинов.

· Стимуляция недифференцированных клеток к созреванию.

· Увеличение экспрессии мембранных антигенов опухолевых клеток и рецепторов к гормонам.

· Нарушение процессов сосудообразования.

· Нейтрализация онковирусов.

· Подавление действие опухолевых ростовых факторов.

Непрямые противоопухолевые эффекты интерферона:

· Стимуляция активности клеток иммунной системы (макрофагов, NK-клеток, Т-цитотоксических лимфоцитов).

· Усиление экспрессии на клетках молекул гистосовместимости I класса.

Антипролиферативный эффект интерферонов заключается в способности интерферонов проявлять свойства цитостатиков - подавлять роста клеток за счет подавления синтеза РНК и протеинов, а так же ингибирования ростовых факторов стимулирующих пролиферацию клеток.

Индукторы ИНФ - это весьма разнородная по составу группа природных и синтетических соединений, способных вызывать в организме образование собственного (эндогенного) ИНФ. Подобно ИНФ они обладают универсально широким спектром противовирусной активности, а также иммуномодулирующим действием, которое определяет их эффективность при многих невирусных заболеваниях .

Таблица 2

Спектр противовирусной активности индукторов ИНФ

Препарат	Показания к применению
Акриданоны (циклоферон, неовир)	Грипп, энцефалиты, бешенство, ВИЧ- инфекция, СПИД
Флюореноны (амиксин)	Грипп, ОРВИ, герпес, гепатит А, энцефалиты, бешенство, рассеянный склероз
Поли (И): поли(У)- амплиген	ВИЧ- инфекция, СПИД
Поли (Г): поли(Ц)- полигуацил	Грипп, гепатит В, энцефалиты, бешенство
Двухспиральные РНК (ларифан, ридостин)	Грипп, ОРВИ, герпес, энцефалиты, бешенство
Поли(А): поли(У)- полудан	Герпетические поражения глаз
Полифенолы (мегасин, кагоцел, саврац, рагосин, гозалидон)	Грипп. ОРВИ, герпес, энцефалиты, бешенство, гепатиты, энтеровирусные инфекции

Заключение

Интерферон представляет собой семейство белков-гликопротеидов, которые синтезируются клетками иммунной системы и соединительной ткани. В зависимости от того, какими клетками синтезируется интерферон, выделяют три типа: б, в и г-интерфероны .

Получают интерферон двумя способами: а) путем инфицирования лейкоцитов или лимфоцитов крови человека безопасным вирусом; б) генно-инженерным способом.

В нашей стране рекомбинантный интерферон получил официальное название "Реаферон". Производство этого препарата во многом эффективнее и дешевле, чем лейкоцитарного .

Действие интерферона тем эффективнее, чем раньше он начинает синтезироваться или поступать в организм извне. Поэтому его используют с профилактической целью при многих вирусных инфекциях, например гриппе, а также с лечебной целью при хронических вирусных инфекциях, таких как парентеральные гепатиты (В, С, D), герпес, рассеянный склероз и др. Интерферон дает положительные результаты при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

Интерфероны обладают видоспецифичностью, т. е. интерферон человека менее эффективен для животных и наоборот. Однако эта видоспецифичность относительна .

Список используемой литературы

1. Временная фармакопейная статья 42У-23/60-439-97. Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-два.

2. Гавриков А.В. Оптимизация биотехнологического производства субстанций рекомбинантных интерферонов человека.- М., 2003,

3. Галынкин ВА., Заикина НА., Кочеровец В.И., Потехина Т.С. Основы фармацевтической микробиологии. С-Птб.: Проспект науки, 2008. -304 с.

4. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. М.: Мир, 2002. -589 с.

5. Государственная Фармакопея СССР. ХI изд., вып.1.-- С. 175.

6. Государственный реестр лекарственных средств / Под ред. А.В. Катлинского и др. - М., 2002.

7. Елинов Н.П. Основы биотехнологии. С-Птб.: Наука.-1995.-600 с.

8. Елинов Н.П., Заикина И.А., Соколова И.П. Руководство к лабораторным занятиям по микробиологии.- М.: Медицина, 1998.

9. Карабельский А.В. Рекомбинантные интерфероны.- М.: Книга по Требованию, 2010.- 132 с.

10. Машкина О.С., Буторина А.К. Генетическая инженерия и биобезопасность. Воронеж: ВГУ, 2005. 71 с.

11. Народицкий Б.С. Молекулярная биотехнология интерферонов. // сборник научно-практической конференции"Интерферону - 50 лет". - М., 2007 г., стр. 17-23

12. Основы фармацевтической биотехнологии: Учебное пособие / Т.В. Прищеп, В.С. Чучалин, К.Л. Зайков, Л,К. Михалева, Л.С. Белова - Ростов н/Д: Феникс; Томск: Издательство НТЛ, 2006.- 256 с.

13. Фролов А.Ф., Вовк А.Д., Дядюн С.Т. и др. Эффективность рекомбинантного альфа-два-интерферона при вирусном гепатите В//Врачебное дело.-- Киев, 1990.-- № 9.-- С. 105-108.

14. http://interferon.su/php/content.php?id=577

15. http://ru-patent.info/20/95-99/2098124.html

16. www.antibiotic.ru/ab/brviri.shtml

17. www.pharmvestnik.ru

Размещено на Allbest.ru

...

Подобные документы

Классы интерферонов: естественного происхождения и искусственно синтезируемые. Способы получения лейкоцитарного интерферона человека из лейкоцитов донорской крови и микробиологическим синтезом. Механизмы действия интерферонов, терапевтическое применение.

реферат , добавлен 27.01.2010

История открытия интерферонов, их характеристика, классификация, механизм действия и особенности получения; клинические особенности их применения. Технологическая схема производства лейкоцитарного и рекомбинантного интерферона в препаративных количествах.

курсовая работа , добавлен 23.12.2012

Врожденный антивирусный иммунитет. Типы интерферонов и механизмы антивирусного действия интерферонов. Способность антител и комплементов ограничить распространение вируса и предотвратить повторную инфекцию. Обход вирусами иммунологического контроля.

реферат , добавлен 27.09.2009

Изучение свойств интерферона. Исследование основных действий белка, обладающего противовирусным, антипролиферативным и иммуномоделирующим действием. Применение интерферона при лечении злокачественных опухолей и заболеваний, связанных с иммунодефицитами.

презентация , добавлен 17.11.2015

Процесс гемотрансфузии и его назначение, оценка безопасности на современном этапе развития медицины. Патологическое действие донорской крови, его причины и методы реабилитации больного. Применение реинфузии и аутогемотрансфузии крови и их достоинства.

реферат , добавлен 13.07.2009

Виды иммуномодуляции. Понятие об иммунотропных лекарственных средствах. Интерфероны, их индукторы. Механизм иммуномодулирующего действия бактериальных вакцин. Показания для назначения препаратов a-ИФ. Противопоказания для терапии препаратами интерферонов.

презентация , добавлен 03.04.2014

Анализ форменных элементов крови: эритроцитов, лейкоцитов, тромбоцитов. Гемоглобин и его функции в работе организма. Гранулоциты, моноциты и лимфоциты как составлющие лейкоцитов. Паталогии в составе крови, их влияние на функции организма человека.

реферат , добавлен 06.10.2008

Лечебно-профилактический механизм действия лечебных грязей, их классификация и применение с целью теплового воздействия на организм. Показания и противопоказания к теплолечению. Техника проведения общих и местных грязевых аппликаций и разводных ванн.

реферат , добавлен 21.12.2014

Функции крови - жидкой ткани сердечно-сосудистой системы позвоночных. Ее состав и форменные элементы. Формирование эритроцитов, типы патологий. Главная сфера действия лейкоцитов. Лимфоциты - основные клетки иммунной системы. Возрастные изменения крови.

презентация , добавлен 14.10.2015

Возрастная периодизация человека. Кроветворение в эмбриогенезе. Изменение концентрации эритроцитов, лейкоцитов, лимфоцитов и тромбоцитов с возрастом. Удельный вес и вязкость крови новорожденных и у пожилых людей. Классификация и сроки развития лейкоцитов.

Интерфероны (ИФН) - группа аутогенных гликопротеинов, биомеханизм действия которых связан с одновременным противовирусным эффектом - активацией клеточных генов, в результате чего синтезируются белки, ингибирующие синтез вирусной ДНК (РНК) и обладающие иммуномодулирующим эффектом - способностью усиливать экспрессию антигенов на клеточных мембранах и увеличивать активность цитотоксических Т-клеток и естественных киллеров .

ИФН подразделяются на два типа. К первому типу, действующему как ингибиторы репликации вируса и оказывающему преимущественно противовирусный эффект, относятся 22 различных подтипа ИФН-α и один подтип ИФН-β. Ко второму типу, проявляющему иммуномодуляторную активность, относятся ИФН-γ.

Существует три иммунологически различных класса ИФН: ИФН-α, ИФН-β, ИФН-γ.

К ИФН естественного происхождения относятся лимфобластоидный и лейкоцитарный ИФН (ИФН-α), синтезируемые соответственно стимулированными моноцитами и В-лимфоцитами человека, которые затем экстрагируются и очищаются; фибробластный ИФН (ИФН-β), получаемый из культуры фибробластов человека, и Т-лимфоцитарный ИФН (ИФН-γ).

К искусственно синтезируемым ИФН относится рекомбинантный ИФН-α, который представляет собой высокоочищенный единственный подтип ИФН-α, получаемый по рекомбинантной молекулярной технологии .

Известно большое количество плазмид и созданных на их основе штаммов Е. coli, экспрессирующих интерферон: штаммы Е. coli ATCC 31633 и 31644 с плазмидами Z-pBR322 (Psti) HclF-11-206 или Z-pBR 322(Pstl)/HclN SN 35-AHL6 (SU 1764515), штамм Е. coli pINF- AP2 (SU 1312961), штамм Е. coli pINF- F-Pa (AU 1312962), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой p280/21FN (Кравченко В.В. и др. Биоорганическая химия, 1987, т.13, №9, с.1186-1193), штамм E.Coli SG 20050 с плазмидой pINF14 (SU 1703691), штамм E.coli SG 20050 с плазмидой pINF16 (RU 2054041) и др. Недостатком технологий, основанных на использовании этих штаммов, является их нестабильность, а также недостаточный уровень экспрессии интерферона.

3) Каждую группу клонов гибридизируют с ИФН - мРНК.

2. Механизмы действия интерферонов

ИФН проявляют некоторые виды активности как лимфокины и им-муномодуляторы. ИФН I типа, действующие преимущественно как ингибиторы репликации вирусов в клетке, реализуют свой эффект, стимулируя выработку рибосомами клеток хозяина клеточных ферментов, которые тормозят продукцию вирусов, нарушая трансляцию вирусной мРНК и синтез вирусных белков.

ИФН вырабатывают большинство видов животных, но проявление их активности видоспецифично, т.е. они действуют только у того вида животных, в которых вырабатываются.

ИФН вызывают индукцию трех ферментов:

протеинкиназы, нарушающей начальный этап построения пептидной цепи;

олигоизоаденилат синтетазы, активирующей РНК-азу, которая разрушает вирусную РНК;

фосфодиэстеразы, разрушающей конечные нуклеотиды тРНК, что приводит к нарушению элонгации пептида.

С учетом антивирусного и иммуномоделирующего эффектов ИФН в НПО «Биомед» предложены и успешно апробированы, суппозитории с ИФНаn1 и пробиотиками при терапии дисбактериозов вирусной и бактериальной этиологии, кандидозов; в гинекологической практике для лечения эндометритов, кольпитов, вагинитов и гинекологического герпеса.

3. Терапевтическое применение ИНФ человека

Таким образом, удалось разработать препараты Виферон, Интераль и другие, содержащие в себе рекомбинантный человеческий интерферон альфа-

По причине своих уникальных свойств препараты интерферона применяют при лечении и профилактики всех респираторных заболеваний, большинства онкозаболеваний, для лечения многих вирусных заболеваний и гриппа. Препараты интерферона широко применяются в лечении гепатита В и С: интерферон ограничивает развитие вируса, препятствует возникновению цирроза и исключает смертельный исход.

При длительном приеме интерферона в организме вырабатываются антитела к интерферону, что делает его неспособным к борьбе с вирусами. Причина этих явлений кроется в наличии альбумина в препаратах на основе интерферона.

Название препарата	Подтип ИНФ	Способ получения	Фармакологическое действие	Показания к применению
Интерферон		Биосинтез в культуре лейкоцитов донорской крови под воздействием вирусов	Антивирусное, иммуномодулирующее, антипролиферативное	Вирусные заболевания, лейкоз, злокачественная меланома, рак почек, карциноидный синдром
Интерлок		Биосинтез в культуре лейкоцитов донорской крови под воздействием парамиковирусов	Подавляет жизнедеятельность ряда вирусов	Вирусные заболевания глаз, гепатиты	Рекомбинантный	Антивирусное, иммуномодулирующее, ингибирует пролиферацию большого спектра опухолевых клеток	Эпителиальная форма острой и рецидивирующей вирусной инфекции глаз; онкологические заболевания
Интерферон альфа-2а		Рекомбинантный. Белок, содержащий 165 аминокислот	Противовирусная, противоопухолевая активность	Лейкемический ретикулоэндотелиоз, саркома капоши, рак почки, мочевого пузыря, меланома, опоясывающий лишай
Реаферон		Рекомбинанатный ИНФ, продуцируемый бактериальным штаммом псевдомонады, в генетический аппарат которой встроен ген человеческого лейкоцитарного ИНФ α2. Идентичен человеческому лейкоцитарному ИНФ α2.		Вирусные, опухолевые заболевания
Интерферон альфа – n1		Высокоочищенный человеческий ИНФ	Противовирусная	Хронический активный инфекционный гепатит В
Инреферон бета		Суперпродуция фибробластов человека стимулятором в присутствии ингибиторов обменных процессов	Противовирусная, иммуномодулирующая, противоопухолевая активность	Хронические вирусные инфекции в офтальмологии, гинекологии и урологии, дерматологии, гепатологии, онкологии
Интерферон гамма		Рекомбинантный	Противовирусная, иммуномодулирующая, противоопухолевая активность	Хронические гранулематозные заболевания

1. www.antibiotic.ru/ab/brviri.shtml

2. www.interferon.su/php/content.php?id=71

3. www.pharmvestnik.ru

4. Временная фармакопейная статья 42У-23/60-439-97. Интерферон человеческий рекомбинантный альфа-два.

5. Гавриков А.В. Оптимизация биотехнологического производства субстанций рекомбинантных интерферонов человека.- М., 2003,

6. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология / Б.Глик, Дж. Пастернак. – М., Мир, 2002.

7. Государственная Фармакопея СССР. ХI изд., вып.1.- С. 175.

8. Государственный реестр лекарственных средств / Под ред. А.В. Катлинского и др. – М., 2002.

9. Народицкий Б.С. Молекулярная биотехнология интерферонов. // сборник научно-практической конференции«Интерферону – 50 лет». – М., 2007 г., стр. 17-23

10. Основы фармацевтической биотехнологии: Учебное пособие / Т.П. Прищеп, В.С. Чучалин, К.Л. Зайков, Л.К. Михалева. – Ростов-на-Дону.: Феникс; Томск: Издательство НТЛ, 2006.

11. Фролов А.Ф., Вовк А.Д., Дядюн С.Т. и др. Эффективность рекомбинантного альфа-два-интерферона при вирусном гепатите В//Врачебное дело.- Киев, 1990.- № 9.- С. 105–108.