Materijali su objavljeni samo u informativne svrhe i nisu recept za liječenje! Preporučujemo da se konsultujete sa hematologom u vašoj zdravstvenoj ustanovi!
Krvna grupa i Rh faktor su posebni proteini koji određuju njegov individualni karakter, baš kao i boja očiju ili kose osobe. Rh grupa i Rh su od velike važnosti u medicini u liječenju gubitka krvi, bolesti krvi, a utječu i na formiranje tijela, funkcioniranje organa, pa čak i na psihološke karakteristike osobe.
Pojam krvne grupe
Čak su i drevni doktori pokušavali da nadoknade gubitak krvi transfuzijom krvi od osobe do osobe, pa čak i od životinja. Po pravilu, svi ovi pokušaji su imali tužan ishod. I tek početkom dvadesetog stoljeća austrijski naučnik Karl Landsteiner otkrio je razlike u krvnim grupama kod ljudi, koje su bile posebne bjelančevine u crvenim krvnim zrncima - aglutinogeni, odnosno izazivali reakciju aglutinacije - lijepljenje crvenih krvnih zrnaca. Upravo je to uzrokovalo smrt pacijenata nakon transfuzije krvi.
Ustanovljene su dvije glavne vrste aglutinogena, koje su konvencionalno nazvane A i B. Adhezija crvenih krvnih zrnaca, odnosno nekompatibilnost krvi nastaje kada se aglutinogen spoji s istoimenim proteinom - aglutininom koji se nalazi u krvi. plazma, respektivno, a i b. To znači da u ljudskoj krvi ne mogu postojati istoimeni proteini koji uzrokuju sljepljivanje crvenih krvnih zrnaca, odnosno ako postoji aglutinogen A, onda u njoj ne može biti aglutinin a.
Također je otkriveno da krv može sadržavati oba aglutinogena - A i B, ali tada ne sadrži nijednu vrstu aglutinina, i obrnuto. Sve su to znakovi koji određuju krvnu grupu. Stoga, kada se spoje istoimeni proteini u crvenim krvnim zrncima i plazmi, dolazi do sukoba krvnih grupa.
Vrste krvnih grupa
Na osnovu ovog otkrića, kod ljudi su identificirane 4 glavne vrste krvnih grupa:
- 1., koja ne sadrži aglutinogene, ali sadrži i aglutinine a i b, ovo je najčešća krvna grupa koju posjeduje 45% svjetske populacije;
- 2., koji sadrži aglutinogen A i aglutinin b, detektuje se kod 35% ljudi;
- 3., koji sadrži aglutinogen B i aglutinin a, ima ga 13% ljudi;
- 4., koja sadrži i aglutinogene A i B, a ne sadrži aglutinine, ova krvna grupa je najrjeđa, određena je samo u 7% populacije.
U Rusiji je prihvaćeno označavanje krvne grupe prema sistemu AB0, odnosno prema sadržaju aglutinogena u njemu. U skladu s tim, tabela krvnih grupa izgleda ovako:
Krvna grupa je naslijeđena. Može li se vaša krvna grupa promijeniti? Odgovor na ovo pitanje je jasan: ne može. Iako povijest medicine poznaje samo jedan slučaj povezan s mutacijama gena. Gen koji određuje krvnu grupu nalazi se u 9. paru ljudskog hromozomskog seta.
Bitan! Sud o tome koja krvna grupa svima odgovara danas je izgubio na aktuelnosti, kao i koncept univerzalnog davaoca, odnosno vlasnika 1. (nulte) krvne grupe. Otkrivene su mnoge podvrste krvnih grupa, a transfuzuje se samo krv iste grupe.
Rh faktor: negativan i pozitivan
Uprkos Landsteinerovom otkriću krvnih grupa, transfuzijske reakcije su se nastavile javljati tokom transfuzije. Naučnik je nastavio svoja istraživanja, te je zajedno sa svojim kolegama Wienerom i Levineom uspio otkriti još jedan specifični protein-antigen eritrocita - Rh faktor. Prvi put je identifikovan kod rezus majmuna, odakle je i dobio ime. Pokazalo se da je Rh prisutan u krvi većine ljudi: 85% stanovništva ima ovaj antigen, a 15% ga nema, odnosno ima negativan Rh faktor.
Posebnost Rh antigena je da kada uđe u krv ljudi koji ga nemaju, potiče proizvodnju anti-Rh antitela. Pri ponovljenom kontaktu sa Rh faktorom, ova antitijela daju tešku hemolitičku reakciju, koja se naziva Rh konflikt.
Bitan! Kada je Rh faktor negativan, to ne znači jednostavno odsustvo Rh antigena u crvenim krvnim zrncima. U krvi mogu biti prisutna anti-Rh antitela, koja se mogu formirati tokom kontakta sa Rh-pozitivnom krvlju. Zbog toga je obavezna analiza na prisustvo Rh antitela.
Određivanje krvne grupe i Rh faktora
Krvna grupa i Rh faktor podliježu obaveznom određivanju u sljedećim slučajevima:
- za transfuziju krvi;
- za transplantaciju koštane srži;
- prije bilo kakve operacije;
- tokom trudnoće;
- za bolesti krvi;
- kod novorođenčadi sa hemolitičkom žuticom (rezus nekompatibilnost sa majkom).
Međutim, idealno bi bilo da svaka osoba, i odrasli i djeca, ima informacije o grupnoj i Rh pripadnosti. Nikada ne možete isključiti slučajeve teške ozljede ili akutne bolesti u kojima krv može biti hitno potrebna.
Određivanje krvne grupe
Određivanje krvne grupe vrši se sa posebno dobijenim monoklonskim antitelima po sistemu AB0, odnosno serumskim aglutininima, koji izazivaju adheziju crvenih krvnih zrnaca u kontaktu sa istoimenim aglutinogenima.
Algoritam za određivanje krvne grupe je sljedeći:
- Pripremite koliklone (monoklonska antitela) anti-A - roze ampule i anti-B - plave ampule. Pripremite 2 čiste pipete, staklene štapiće za miješanje i staklene pločice, jednokratnu špricu od 5 ml za vađenje krvi i epruvetu.
- Krv se vadi iz vene.
- Velika kap zoliklona (0,1 ml) se nanosi na staklenu pločicu ili posebnu označenu ploču; male kapi krvi koja se ispituje (0,01 ml) se pomešaju sa zasebnim staklenim štapićima.
- Posmatrajte rezultat 3-5 minuta. Kap s pomiješanom krvlju može biti homogena - minus reakcija (-), ili ispadaju pahuljice - plus reakcija ili aglutinacija (+). Rezultate mora procijeniti ljekar. Opcije za testiranje određivanja krvne grupe prikazane su u tabeli:
Određivanje Rh faktora
Određivanje Rh faktora vrši se slično kao i određivanje krvne grupe, odnosno korištenjem monoklonskog serumskog antitijela na Rh antigen. Velika kap reagensa (zoliklon) i mala kap svježe izvađene krvi nanose se na posebnu čistu bijelu keramičku površinu u istim omjerima (10:1). Krv se pažljivo miješa staklenom šipkom i reagensom.
Određivanje Rh faktora zoliklonima traje manje vremena, jer se reakcija javlja u roku od 10-15 sekundi. Međutim, potrebno je održavati period od maksimalno 3 minute. Kao iu slučaju određivanja krvne grupe, epruveta sa krvlju se šalje u laboratorij.
Danas se u medicinskoj praksi naširoko koristi pogodna i brza ekspresna metoda za određivanje grupne pripadnosti i Rh faktora pomoću suhih koliklona, koji se razrjeđuju sterilnom vodom za injekcije neposredno prije studije. Metoda se zove "Erythrotest-group card", veoma je zgodna kako u klinikama, u ekstremnim uslovima, tako i u terenskim uslovima.
Karakter i zdravlje osobe prema krvnoj grupi
Ljudska krv kao specifično genetsko svojstvo još nije u potpunosti proučeno. Posljednjih godina naučnici su otkrili varijante krvnih podgrupa, razvijaju nove tehnologije za određivanje kompatibilnosti itd.
Krvi se takođe pripisuje sposobnost da utiče na zdravlje i karakter svog vlasnika. I iako je ovo pitanje i dalje kontroverzno, dugogodišnja zapažanja otkrila su zanimljive činjenice. Na primjer, japanski istraživači vjeruju da je moguće odrediti karakter osobe prema njenoj krvnoj grupi:
- vlasnici 1. krvne grupe su ljudi jake volje, jaki, društveni i emotivni;
- vlasnici 2. grupe odlikuju se strpljenjem, skrupuloznošću, upornošću i napornim radom;
- predstavnici 3. grupe su kreativni pojedinci, ali su u isto vrijeme previše upečatljivi, dominantni i hiroviti;
- osobe sa krvnom grupom 4 više žive od osjećaja, karakteriziraju ih neodlučnost, a ponekad su i neopravdano oštri.
Što se tiče zdravlja u zavisnosti od krvne grupe, smatra se da je ono najjače kod većine populacije, odnosno u grupi 1. Osobe 2. grupe su sklone srčanim oboljenjima i karcinomima, 3. grupe karakteriše slab imunitet, niska otpornost na infekcije i stres, a predstavnici 4. grupe su skloni kardiovaskularnim patologijama, bolestima zglobova i karcinomima.
Često se koristi određivanje krvne grupe standardnim serumima (u poređenju sa drugim metodama). Ova tehnika se temelji na aglutininima i aglutinogenima sadržanim u krvi u različitim kombinacijama.
Kombinacija istog aglutinogena i aglutinina praćena je reakcijom aglutinacije (homogena mrlja se raspada na brojne male mrlje koje se sastoje od crvenih krvnih zrnaca koji su zalijepljeni zajedno).
Suština metode
Prilikom pružanja medicinske pomoći nije uvijek moguće brzo zaustaviti krvarenje, transfuzija zahtijeva određivanje krvne grupe i Rh faktora.
Postoje 2 antigena eritrocita (aglutinogeni A i B) i 2 antitela (a i b). Različite kombinacije antigena i antitijela formiraju 4 krvne grupe.
Ova metoda ima prednosti jer vam omogućava da brojna mjerenja svedete na jedno.
Metodologija za određivanje indikatora
Određivanje krvnih grupa pomoću standardnih seruma provodi se pomoću reagensa koji sadrže aglutinine različitih grupa koji reagiraju s aglutinogenima koji se nalaze na površini crvenih krvnih stanica.
Za identifikaciju krvne grupe dovoljno je koristiti standardne serume samo grupe II i III. Međutim, da bi se otklonile moguće greške, ostali (grupe I i IV) se takođe koriste za dodatnu kontrolu.
Izrada seruma
Standardni serumi za određivanje krvne grupe dobijaju se iz krvi donora. U tu svrhu koristi se poseban sistem: plazma se izoluje zajedno sa antitijelima sadržanim u njoj, a zatim se razrijedi izotoničnom otopinom natrijum hlorida.
Stavite 1 ml 0,9% rastvora NaCl u epruvetu, dodajte plazmu (1 ml), promućkajte kompoziciju. Uzmite 1 ml dobijene smjese i prenesite je u drugu epruvetu s izotoničnim rastvorom.
Manipulacija se ponavlja dok se smjesa ne razrijedi u omjeru 1:256. Druga razrjeđenja se ne koriste da bi se izbjegle greške.
Za jedno ispitivanje krvne grupe koristeći standardne serume, potrebne su 3 (2 serije za svaku grupu), koje se razlikuju po boji:
- I (0) - prozirna tečnost, boca je opremljena bijelom etiketom;
- II (A) - plava tečnost, boca sa 2 plave pruge;
- III (B) - blijedo ružičasta tečnost, bočica sa 3 ružičaste pruge;
- IV (AB) je žuta tečnost, na etiketi boce se nalaze 4 žute pruge.
Oznake označavaju:
- titar;
- najbolje do datuma;
- Datum izdavanja;
- serijski broj.
- informacije o proizvođaču.
Sprovođenje istraživanja
Temperatura prostorije treba da bude u granicama +15...+25°C, potrebno je dobro osvetljenje.
Koriste posebnu tabletu sa označenim područjima. Svaki serum se nanosi na njega (uzimaju se 2 uzorka, od toga 1 kontrolni, 2 za dijagnostiku).
Zatim se kap krvi stavlja pored svake kapi seruma, miješajući se sa svakom pojedinačnom otopinom koja reagira. Nakon nekoliko minuta (5-6) dobijeni podaci se analiziraju:
- ako dođe do reakcije aglutinacije, serumski test se smatra pozitivnim;
- u odsustvu aglutinacije, test je negativan.
Rezultati istraživanja
Ako je rezultat pozitivan, crvena krvna zrnca se lijepe (crveni ugrušci se stvaraju u otopini koja reagira).
Ako se boja otopine nije promijenila, reakcija se smatra negativnom. Postoje obrasci koji ovise o kombinacijama negativnih i pozitivnih reakcija koje se javljaju u otopinama:
- I(0), ako nijedan uzorak nema pozitivnu reakciju;
- II (A), ako se u uzorku II (A) stanje nije promijenilo, a u ostala 2 uzorka je bila pozitivna reakcija;
- III(B), ako je samo u uzorku III(B) reakcija ispala negativna;
- IV(AB), ako je reakcija bila pozitivna u svakom od 3 uzorka.
Pojava drugih kombinacija povezana je s greškama koje nastaju tokom istraživanja.
Upotreba starih reagensa ili neispravno izvođenje testa može dovesti do loših reakcija. U takvim slučajevima, radi pojašnjenja, potrebno je uraditi testove drugim metodama.
U kontaktu sa
Indikacije: potreba za transfuzijom krvi, priprema za operaciju.
pripremiti: standardna ploča sa udubljenjima; set staklenih štapića; izotonični rastvor natrijum hlorida; set hemaglutinirajućih seruma grupa 1,2,3,4 od dve serije; pipete; test krvi iz vene ili prsta; sat; Rukavice; Spremnici za otpadni materijal; posude sa dezinfekcionim rastvorima.
Priprema za manipulaciju:
- Medicinska sestra je potpuno spremna za izvođenje zahvata: obučena u odijelo (haljinu), masku, rukavice, kapu i zamjensku obuću.
- Provjera kvaliteta standardnih hemaglutinirajućih seruma: označavanje boje, izgled (svijetlo, prozirno); sigurnost pakovanja, prisustvo ispravno dizajnirane etikete.
- Pripremite sve što je potrebno za obavljanje manipulacije.
Izvođenje manipulacije:
Na bijelu ploču, prema oznaci, uzastopno nanesite jednu kap seruma iz grupa 1, 2, 3 od dvije serije. Svaku pipetu odmah spustite u istu ampulu (bočicu) iz koje je uzeta;
Uz pomoć staklenog štapića nanesite kap krvi koja se ispituje pored udubljenja (6 udubljenja). Kap krvi treba da bude 10 puta manja od kapi seruma;
zabilježite vrijeme i pomiješajte krv sa serumom od 1 g čistom, suhom staklenom šipkom, a zatim drugim štapićem od 2 g. itd. u svim udubljenjima;
kako dođe do aglutinacije, ali ne ranije od 3 minute, dodajte jednu kap izotonične otopine natrijum hlorida onim kapima u kojima je došlo do reakcije aglutinacije da biste isključili lažnu aglutinaciju i nastavite sa posmatranjem 5 minuta.
Evaluacija rezultata:
a) uz pozitivnu reakciju, u smjesi se pojavljuju sitna zrnca vidljiva oku, koja se sastoje od ljepljivih crvenih krvnih zrnaca. Sitna zrna se spajaju u krupna zrna, a ponekad i u pahuljice, a surutka postaje bezbojna;
b) sa negativnom reakcijom tečnost ostaje jednolično ružičasto obojena;
c) moguće su 4 kombinacije pozitivnih i negativnih reakcija:
1. ako nema aglutinacije ni u jednoj od ćelija, onda je krv I grupa (0).
2. ako postoji aglutinacija u prvoj i trećoj ćeliji, onda je krv II grupa (A).
3. ako je aglutinacija u prvoj i drugoj grupi, onda je krv grupa III (B).
4. ako je aglutinacija u prvoj, drugoj, trećoj ćeliji, onda je krv grupa IV (AB).
Da bi se isključile greške, krv se ispituje serumom grupe 4, gdje ne bi trebalo biti aglutinacije.
Kraj manipulacije:
- Skinite rukavice i stavite ih u rastvor za dezinfekciju.
- Operite ruke i osušite ih ručnikom.
Bilješka: Određivanje krvne grupe vrši se u prostoriji s dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15 - 25 0C.
Određivanje krvnih grupa pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma
Oprema: set standardnih izohemaglutinirajućih seruma I-IV krvne grupe dvije različite serije, bijeli porculanski ili emajlirani tanjir sa vlažnom površinom, na kojem se nalazi 8 (ili 7) jažica označenih 0(I), A (II), B (III), AB( IV), 0,9% rastvor natrijum hlorida, pipete, staklene šipke.
Tehnika izvođenja. Postupak se izvodi u dobro osvijetljenoj prostoriji na temperaturi zraka od 15 do 25 ºS. Serumi krvnih grupa I, II, III se nanose na tabletu pod odgovarajućom oznakom u zapremini od ~0,1 ml. Krv pacijenta se uzima iz prsta ili iz vene i ~0,01 ml (mala kap) se dodaje serumu. Krv i serum se miješaju staklenim štapićima. Čekanje na reakciju hemaglutinacije je 0,5-5 minuta. Dodajte 1 kap izotonične otopine onim kapima kod kojih je došlo do aglutinacije, nakon čega se bilježe rezultati testa prema donjem dijagramu.
| 0(I) | A (II) | B(III) | AB (IV) | Krvna grupa |
| - | - | Ne provode | 0(I) | |
| + | - | + | Ne provode | A (II) |
| + | - | Ne provode | B(III) | |
| + | + | - | AB (IV) |
Rice. 61. Šema za snimanje rezultata uzorka pri određivanju krvne grupe pomoću seta standardnih seruma. Dijagram prikazuje: + aglutinaciju, - nema aglutinacije.
Imajte na umu da se test sa serumom grupe IV (koji ne sadrži nikakve aglutinogene) provodi samo ako postoji aglutinacija u sve tri jažice na ploči kako bi se potvrdilo određivanje grupe IV isključivanjem nespecifične aglutinacije.
Rice. 62. Izgled gleđne tablete koja odgovara krvnoj grupi B (III).
Pojam krvnih grupa
AB0 krvne grupe
Krvne grupe sistema AB0 otkrio je 1900. K. Landsteiner, koji je miješanjem crvenih krvnih zrnaca nekih osoba s krvnim serumom drugih osoba otkrio da se kod nekih kombinacija krv zgrušava, stvarajući ljuspice (reakcija aglutinacije) , ali kod drugih nije. Na osnovu ovih studija, Landsteiner je podijelio krv svih ljudi u tri grupe: A, B i C. Godine 1907. otkrivena je još jedna krvna grupa.
Utvrđeno je da se reakcija aglutinacije javlja kada se antigeni jedne krvne grupe (oni se nazivaju aglutinogeni), koji se nalaze u crvenim krvnim zrncima – eritrocitima, zalijepe s antitijelima druge grupe (nazivaju se aglutinini) koja se nalaze u plazmi – tečni dio krvi. Podjela krvi prema sistemu AB0 u četiri grupe zasniva se na činjenici da krv može, ali i ne mora sadržavati antigene (aglutinogene) A i B, kao i antitijela (aglutinine) α (alfa ili anti-A) i β (beta ili anti-B).
Prva krvna grupa - 0 (I)
Grupa I - ne sadrži aglutinogene (antigene), ali sadrži aglutinine (antitijela) α i β. Označen je sa 0 (I). Budući da ova grupa ne sadrži strane čestice (antigene), može se transfuzirati svim ljudima. Osoba sa ovom krvnom grupom je univerzalni davalac.
Druga krvna grupa A β (II)
Grupa II sadrži aglutinogen (antigen) A i aglutinin β (antitela na aglutinogen B). Stoga se može transfuzirati samo u one grupe koje ne sadrže antigen B - to su grupe I i II.
Treća krvna grupa Bα (III)
Grupa III sadrži aglutinogen (antigen) B i aglutinin α (antitijela na aglutinogen A). Stoga se može transfuzirati samo u one grupe koje ne sadrže antigen A - to su grupe I i III.
Četvrta krvna grupa AB0 (IV)
Krvna grupa IV sadrži aglutinogene (antigene) A i B, ali sadrži aglutinine (antitijela). Stoga se može transfuzirati samo onima koji imaju istu, četvrtu krvnu grupu. Ali, budući da u krvi takvih ljudi nema antitijela koja se mogu zalijepiti sa antitijelima unesenim izvana, mogu se transfuzirati krvlju bilo koje grupe. Ljudi sa krvnom grupom IV su univerzalni primaoci.
Krvne grupe po ABO sistemu
Metoda za određivanje krvnih grupa
Krvna grupa prema ABO sistemu se određuje reakcijom aglutinacije. Trenutno postoje tri načina za određivanje krvnih grupa pomoću ABO sistema:
Prema standardnim izohemaglutinirajućim serumima;
Korištenje monoklonskih antitijela (kolikloni anti-A i anti-B).
Određivanje krvnih grupa pomoću standardnih izohemaglutinirajućih seruma
Suština metode je detekcija antigena grupe A i B u testnoj krvi pomoću standardnih seruma. U te svrhe koristi se reakcija aglutinacije. Test treba obaviti u prostoriji sa dobrim osvjetljenjem na temperaturi od 15-25°C.
Za izvođenje testa potrebno je: - Standardni izohemaglutinirajući serumi grupe O (I), A (II), B (III) i AB (IV) dvije različite serije. Serumi za određivanje krvnih grupa pripremaju se od donorske krvi u posebnim laboratorijama. Serumi se čuvaju u frižideru na temperaturi od 4 - 8°C. Rok trajanja seruma je naveden na etiketi. Oznaka također označava titar (maksimalno razrjeđenje seruma pri kojem može doći do reakcije aglutinacije), koji ne smije biti manji od 1:32 (za serum B (III) - ne niži od 1:16/32). Surutka treba da bude providna, bez znakova truljenja. Radi praktičnosti, standardni serumi su obojeni u određenu boju: O (I) - bezbojni (siva), A (II) - plava, B (III) - crvena, AB (IV) - svijetlo žuta. Ove boje prate sve oznake na krvnim proizvodima koji imaju grupnu pripadnost (krv, crvena krvna zrnca, plazma, itd.).
Bijeli porculanski ili emajlirani tanjuri ili drugi tanjuri sa površinom koja se može kvasiti, označena prema krvnoj grupi.
Izotonični rastvor natrijum hlorida.
Igle, pipete, stakleni štapići (slajdovi).
Tehnika reakcije.
1. Pod odgovarajućim oznakama krvne grupe, serum grupe I, II, III nanosi se na ploču (tanjir) u zapremini od 0,1 ml (jedna velika kap prečnika oko 1 cm). Da bi se izbjegle greške, primjenjuju se dvije serije seruma, jer jedna od serija može imati nisku aktivnost i ne dati jasnu aglutinaciju. Tako se dobija 6 kapi, formirajući dva reda od po tri kapi sledećim redom s leva na desno: 0 (I), A (II), B (III).
2. Krv za istraživanje uzima se iz prsta ili iz vene. Koristeći suvu staklenu šipku, 6 kapi krvi za ispitivanje, otprilike veličine glave igle od 0,01 ml (mala kap), sukcesivno se prebacuju na ploču na 6 tačaka, svaka pored kapi standardnog seruma. Štaviše, količina seruma bi trebala biti 10 puta veća od količine krvi koja se testira. Zatim se pažljivo miješaju pomoću staklenih šipki sa zaobljenim rubovima.
Moguća je i jednostavnija tehnika: jedna velika kap krvi se nanese na tanjir, zatim se odatle uzme uglom staklenog stakla i prenese se svaka kap seruma, pažljivo miješajući je s posljednjom. U tom slučaju, krv se svaki put uzima čistim kutom čaše, pazeći da se kapi ne miješaju.
3. Nakon miješanja kapi, povremeno protresite ploču. Aglutinacija počinje u prvih 10-30 sekundi. Ali posmatranje treba provoditi najmanje 5 minuta, jer je moguća kasnija aglutinacija, na primjer s crvenim krvnim zrncima grupe A 2 (II).
4. Dodajte jednu kap izotoničnog rastvora natrijum hlorida u one kapi na kojima je došlo do reakcije, nakon čega se procenjuju rezultati reakcije.
Reakcija aglutinacije može biti pozitivna ili negativna
Ako je reakcija pozitivna, u prvih 10-30 sekundi u smjesi se uočavaju mala crvena zrna (aglutinati), koja se sastoje od lijepljenih crvenih krvnih zrnaca, vidljivih golim okom. Sitna zrna se postepeno spajaju u veća zrna ili čak u pahuljice nepravilnog oblika. U negativnoj reakciji, kap ostaje jednolično obojena crvenom bojom.
Rezultati reakcija dvije serije u kapima sa serumom iste grupe moraju se podudarati.
Pripadnost krvi koja se testira odgovarajućoj grupi određuje se prisustvom ili odsustvom aglutinacije pri reakciji sa odgovarajućim serumom.
Ako su svi serumi dali pozitivnu reakciju, tada testna krv sadrži oba aglutinogena - A i B. Ali u takvim slučajevima, kako bi se isključila nespecifična reakcija aglutinacije, potrebno je izvršiti dodatni kontrolni test krvi sa standardnim serumom. grupe AB (IV).
Određivanje krvnih grupa pomoću monoklonskih antitijela
Za određivanje krvnih grupa ovom metodom koriste se monoklonska antitijela koja se dobivaju hibridom biotehnologijom.
Hibridom je stanični hibrid nastao fuzijom ćelije koštane srži (mijeloma) sa imunim limfocitom koji sintetizira specifična monoklonska antitijela. Hibridom ima sposobnost neograničenog rasta, karakterističan je za tumorsku ćeliju i ima svojstvenu sposobnost limfocita da sintetizira antitijela.
Razvijeni su standardni reagensi: monoklonska antitijela (mAbs): anti-A i anti-B kolikloni, koji se koriste za određivanje aglutinogena eritrocita. Zolikloni su liofilizirani prah crvene (anti-A) i plave (anti-B) boje, koji se razblaži izotoničnim rastvorom natrijum hlorida neposredno pre uzorka.
Tehnika.
Anti-A i anti-B zolikloni se nanose na bijelu tabletu, jednu veliku kap (0,1 ml) ispod odgovarajućih natpisa: anti-A ili anti-B. Uz kapi antitijela treba staviti jednu malu kap test krvi. Nakon miješanja komponenti, promatrajte reakciju aglutinacije 2-3 minute. Procjena rezultata je vrlo jednostavna.
Određivanje krvne grupe može biti praćeno greškama koje dovode do pogrešne interpretacije rezultata. Mogu se razlikovati tri glavne grupe grešaka: greške povezane sa reagensima niskog kvaliteta; tehničke greške; greške povezane sa karakteristikama Šema za procjenu rezultata određivanja krvnih grupa korištenjem monoklonskih antitijela (kolikloni anti-A i anti-B) krvi koja se testira. Prva dva se mogu izbjeći strogim poštovanjem gore opisanih zahtjeva za serumom, reakcionim uslovima itd. Treća grupa je povezana sa fenomenom nespecifične panaglutinacije (Thomsenov fenomen), čija je suština da serum na sobnoj temperaturi aglutinira sa sva crvena krvna zrnca, čak i sa svojim (autoaglutinacija), a eritrociti istovremeno daju aglutinaciju sa svim serumima, čak i sa serumom grupe AB. Slična pojava je opisana kod niza bolesti: bolesti krvi, splenomegalije, ciroze jetre, infektivnih bolesti itd. Opisana je i panaglutinacija i autoaglutinacija kod zdravih ljudi.
Fenomen panaglutinacije i autoaglutinacije se opaža samo na sobnoj temperaturi. Ako se određivanje pripadnosti grupi izvrši na temperaturi od 37°C, oni nestaju.
Mora se striktno imati na umu da u svim slučajevima nejasnih ili upitnih rezultata krvne grupe treba ponovo odrediti korištenjem standardnih seruma iz drugih serija, kao i na način poprečnog presjeka.
Standard postupanja medicinske sestre pri određivanju krvne grupe po ABO sistemu
Na pločici za određivanje krvne grupe serumske grupe 0 αß (I), Aß (II), Bα (III) su potpisane s lijeva na desno i puno ime i prezime pacijenta u uglu.
IN dva reda po tri velike kapi Prema potpisima, standardni serumi 0 αß (I), Aß (II), Bα (III) se nanose na ploču s lijeva na desno ( 0,1 ml). Svaki serum se nanosi posebnom pipetom (češće se koriste pipete za oči).
Pored svake kapi seruma, štapićem (ili posebnom pipetom) nanesite jednu malu kap krvi koja se testira. (0,01 ml).
Ratio "serum: krv" mora biti 10:1.
(Približno, kap standardnog seruma bi trebala biti jednaka novčiću, kap krvi = glava krojačke igle)
Kapi se temeljno miješaju štapićima (svaka kap posebnim štapićem, na uglu stakalca). Napredak reakcije se prati blagim trešenjem ploče.
Nakon 3 minute (ali ne ranije), dodajte onim kapima gdje je došlo do aglutinacije crvenih krvnih zrnaca kako biste isključili lažnu aglutinaciju jedna kap (0,05 ml) izotoničnog rastvora natrijum hlorida i nastavite posmatrati dok tresete ploče. Nakon dodavanja fiziološke otopine, lažna aglutinacija nestaje, prava aglutinacija ostaje nepromijenjena ili se pojačava.
- Ukupno vreme posmatranja reakcije je 5 minuta.
Podaci za procjenu rezultata reakcije sa standardnim izohemaglutinirajućim serumima:
Aglutinacija se smatra istinitom kada se u kapi pojave crvene kvržice, a serum postaje bistar, a ako se nakon dodavanja kapi fiziološkog rastvora serumu pomiješanom s krvlju, adhezija crvenih krvnih stanica ne gubi.
Rezultat se smatra negativnim ako kapljica ostane homogeno obojena i ne sadrži zrna ili grudvice.
Prilikom određivanja krvne grupe sa 3 para standardnih seruma moguća su 4 moguća rezultata:
1) nijedan od tri para standardnih seruma ne daje znake aglutinacije - krv koja se testira pripada grupi 0 (I);
2) Nema aglutinacije sa serumom grupe A(II). Aglutinacija je otkrivena u serumima grupa 0(I) i B(III) - ispitivana krv je bila grupa A(II);
3 ) nema aglutinacije sa serumom grupe B(III). U serumima 0(I) i A(II) grupa - aglutinacija. Krv – B(III) grupa;
4) svi serumi su izazvali aglutinaciju crvenih krvnih zrnaca.
U potonjem slučaju, da bi se isključila nespecifična aglutinacija eritrocita, potrebno je provesti dodatnu studiju sa standardnim serumom AB(IV) grupe. Samo u odsustvu aglutinacije u ispitivanju sa serumom grupe IV dozvoljava se da se krv koja se proučava kao grupa AB (IV).
2. Određivanje krvnih grupa sa monoklonskim antitelima (kolikloni anti-A i anti-B, anti-AB).
Određivanje krvnih grupa sa monoklonskim antitelima (kolikloni anti-A i anti-B, anti-AB) vrši se konvencionalnim metodama za identifikaciju antigena eritrocita: za masovno određivanje u ustanovama za krvotok - na tabletama ili automatskim sistemima, za individualno određivanje - na bijelom porculanu ili drugom tanjuru sa vlažnom površinom.
Standardni reagensi - anti-A i anti-B, anti-AB zolikloni su dobijeni sušenjem zamrzavanjem. Nisu produkti ljudskih stanica i stoga je isključena kontaminacija lijekova virusima hepatitisa i AIDS-a (sindrom stečene imunodeficijencije).
Anti-A (ružičasti) i anti-B (plavi) zolikloni dostupni su u bočicama ili ampulama od 20, 50, 100 i 200 doza.
Za svako određivanje krvne grupe dovoljno je koristiti jednu seriju anti-A i anti-B ciklona (zbog visoke aktivnosti reagensa).
Krvne grupe određuje ljekar. Medicinska sestra priprema opremu za obavljanje testova:
Standardne tablete
Stalak za epruvete sa krvlju davalaca (primatelja)
Stalak za zoliklone
Pipete
Rukavice
Peščani sat na 5 minuta
Dnevnik za bilježenje rezultata
Kontejneri za dezinfekciju polovnih predmeta.
Anti-A i anti-B zolikloni se nanose jednu po jednu veliku kap na tabletu ili porcelansku ploču. (0,1 ml) ispod odgovarajućih natpisa: anti-A, anti-B.
Pored kapi antitijela, jedna po jedna mala kap nanosi se testna krv, otprilike 10 puta manja od kapi antitijela. (0,01 ml).
Prilikom određivanja krvne grupe na tableti, antitijela i krv se pomiješaju s temeljito opranom suhom kuglom, protresajući tabletu.
Prilikom određivanja na porculanskoj ploči krv i antitijela se miješaju staklenim štapićem, koji se prvo ispere i osuši.
Praćenje tijeka reakcije sa zoliklonima vrši se blagim protresanjem ploče ili tablete za ne više od 5 minuta.
Rezultat reakcije u svakoj kapi može biti pozitivan ili negativan.
Pozitivan rezultat se izražava u aglutinaciji crvenih krvnih zrnaca.
U slučaju negativne reakcije, kap ostaje jednolično obojena crvenom bojom - u njoj se ne nalaze aglutinogeni.
Aglutinacija sa anti-A i anti-B ciklonima obično se javlja unutar prvih 3-5 sekundi.
Trebalo bi izvršiti posmatranje 2-5 min s obzirom na mogućnost kasnijeg početka aglutinacije s crvenim krvnim zrncima koja sadrže slabe varijante antigena A i B.
U mnogim slučajevima, hitna medicinska pomoć ozlijeđenom se može pružiti samo ako se poznaje klasifikacija njegove krvi prema klasifikaciji AB0. Uostalom, postoje situacije kada se krvarenje ne može odmah zaustaviti, a transfuzija je neophodna manipulacija za reanimaciju pacijenta. U hitnim slučajevima nemoguće je saznati grupu i Rh.
Poznavanje vaših karakteristika može ubrzati pružanje medicinske njege
Takođe je važno sprovesti slične studije prilikom planiranja i tokom trudnoće kako bi se utvrdila transfuzijska kompatibilnost i utvrdio rizik od hemolitičke bolesti kod novorođenčeta, koja je uzrokovana nekompatibilnošću krvi majke i fetusa prema ABO sistemu. Moguće razlike mogu dovesti do imunoloških sukoba u majčinom tijelu. Stoga je vrijedno što ranije saznati o prisutnosti ili odsutnosti teoretski moguće bolesti.
U tu svrhu postoje trenutni testovi koji vam omogućavaju da odredite svoju krvnu grupu.
Određivanje krvne grupe tokom trudnoće jedna je od važnih dijagnostičkih faza Metode određivanja
U modernoj medicini postoji nekoliko metoda pomoću kojih je moguće utvrditi pripada li krv nekoj od grupa:
- dijagnostika pomoću zoliklona, koji djeluje kao indikator;
- tehnika unakrsne reakcije;
- eritrotest;
- standardna metoda seruma.
Upravo posljednja od ovih metoda često se nalazi u istraživanjima: upotreba seruma za određivanje krvne grupe.
Testiranje krvi standardnim tehnikama seruma Suština metode na bazi seruma
Serumska metoda je dobra u slučajevima kada je, zbog dodatnih poteškoća u određivanju krvne grupe (na primjer, imunodeficijencija, faktor starosti), potreban prilično širok spektar testova. Serum može svesti mnoge dimenzije na jednu.
U hematologiji grupa označava skup antigena koji, locirani na crvenim krvnim zrncima, određuju njihove karakteristike.
Antigeni predstavljaju ogroman spektar supstanci sa različitim svojstvima i kvalitativnim karakteristikama, ali se klasifikuju prema dva sistema:
- AB0 sistem. Sastoji se od dva antigena eritrocita, kombinovanih u grupe - aglutinogena A i B, plus dva odgovarajuća antitela - a (anti-A) i b (anti-B). Njihova ukupnost ili međusobna kombinacija čini niz danas poznatih krvnih grupa (ukupno ih ima 4). Odvojeno se razlikuje niz varijanti jakih ili slabih varijanti istih antigena. Na primjer, antigen A1, koji ima koncentraciju veću od 80% ili A2, koji iznosi 20%, i tako dalje. Poznavanje ovakvih teoretskih specifičnosti ima za cilj spriječiti greške u rezultatima istraživanja koje mogu dovesti do smrti, jer će režim reanimacije biti potpuno poremećen, a nije uvijek moguće pronaći novog donora s odgovarajućom krvnom grupom.
Strogo je neophodna transfuzija krvi, crvenih krvnih zrnaca i plazme tipa koji je naznačen kod primaoca, kako ne bi došlo do reakcije odbacivanja tokom transfuzije. U posebnim hitnim situacijama moguća je transfuzija crvenih krvnih zrnaca grupe 0, koja nemaju grupne aglutinogene.
AB0 sistemska tablica - Sistem Rh faktora. Rh faktor je još jedan antigen, koji je označen latiničnim slovom D. On je ili prisutan na crvenim krvnim zrncima (bilo koje AB0 grupe) ili ne. U potonjem slučaju, osoba se smatra Rh negativnom. Postoje i drugi Rh antigeni, ali su mnogo manje imunogeni, ne izazivaju odbacivanje i stoga se ne uzimaju u obzir.
Određivanje Rh faktora Standardni serumi za određivanje krvne grupe su specijalne otopine dobivene ekstrakcijom plazme s uključenim antitijelima iz krvi donora i razrijeđene dodatkom izotonične otopine natrijevog klorida u ovu kompoziciju.
Metodologija za određivanje indikatora
Algoritam koji određuje određivanje krvne grupe i Rh faktora pomoću standardnih seruma svodi se na niz manipulacija.
Izrada seruma
Najlogičniji i najopćeprihvaćeniji korak u postupku proizvodnje seruma je ispiranje krvi prethodno primljene od davaoca kako bi se spriječilo ulazak stranih tvari u tijelo primatelja, što u budućnosti može izazvati reakciju koja će uzrokovati pogrešnu interpretaciju rezultata. Zatim, centrifugiranjem, krvna plazma u pročišćenom stanju je spremna za upotrebu u proizvodnji seruma.
Od prethodno dobijenog rastvora, pipetom se odvoji 1 ml plazme, nakon čega se doda u drugu posudu napunjenu izotoničnom otopinom. Mora se poštovati strogi odnos plazme od 1:256. U suprotnom, sastav krvi može biti pogrešno određen u narednim studijama.
Logično je napomenuti da se serumi namijenjeni određivanju krvne grupe razlikuju po sastavu. Ukupno, za jednu studiju, koriste se tri standardna seruma od dvije serije za svaku grupu, različite boje:
- I(0) – nema boju,
- II(A) – plava i III(B) – ružičasta.
Za jednu studiju postoje dva seruma istog tipa: jedan se smatra kontrolnim, dok drugi, zapravo, služi za samu studiju.
Sprovođenje istraživanja
Određivanje krvne grupe serumom vrši se striktno na temperaturi od 15-25 stepeni Celzijusa. Prostorija u kojoj se provodi ova klinička studija mora biti dobro osvijetljena i dizajnirana posebno za takve testove. Da biste to izvršili, morat ćete pripremiti sljedeće uređaje i alate za mjerenja:
- prethodno dezinficirano bijelo posuđe;
- upijajuća pamučna vuna,
- olovku, kojom ćete dodatno podijeliti ploču na sektore;
- set posebnih čaša i štapića;
- tri pipete;
- direktno standardni serumi, predstavljeni sa 0(I), A(II) i B(III) gr. krv;
- izotonični rastvor natrijum hlorida, jod i mravlji alkohol za preradu.
Za izvođenje studije potrebno je pripremiti nekoliko alata Studije za svaku grupu provode se posebnom pipetom kako bi se eliminisale moguće dijagnostičke greške.
Kao što je ranije opisano, određivanje krvne grupe i Rh faktora pomoću standardnih seruma zasniva se na reakcijama koje se javljaju kod crvenih krvnih zrnaca tokom perioda ispitivanja. Zbog toga je vrlo važno pratiti stanje opreme i instrumenata za ispitivanje, striktno izbjegavajući kontakt sa vlagom, koja uništava strukturu krvnih stanica.
Proces istraživanja:
- Tri uzorka različitih vrsta seruma stavljaju se na tanjir, prethodno olovkom, pomoću pipete podeljen na tri dela (sektora). I pored svake kapi označavaju naziv otopine koji odgovara krvnoj grupi.
- Nakon što se kap seruma stavi na sektor koji je za to označen, pipeta se mora odmah vratiti u istu posudu u kojoj je prethodno bila.
- Slijedi tretman prsta prije vađenja krvi, koji se sastoji od jednostavnog dezinfekcije područja kože medicinskim alkoholom. Zatim se krv vadi bockanjem mesa prsta.
- Dobivena grimizna tekućina skuplja se staklenim predmetom ili štapićem u količini od tri kapi, koja ne smije prelaziti veličinu glave jednostavne igle za šivanje. Odabrane kapi pažljivo se prebacuju na tanjir sa preostalim serumom. Nakon ove manipulacije, počinju računati vrijeme pomoću sata.
- Krv se pažljivo miješa sa otopinom seruma u strogim granicama svakog sektora pomoću staklenih štapića posebnih za svaki odjeljak. Nakon jedne akcije, štapovi se moraju zamijeniti novima. Ponovljene manipulacije moraju se provesti sve dok rezultirajuća konzistencija ne dobije jednoličnu ružičastu nijansu.
- Nakon pet minuta (vreme se kontroliše satom), kada su rastvori u stanju reakcije, dodaje im se izotonični natrijum hlorid u količini od jedne kapi za svaki sektor. Ploča se zatim lagano ljulja kako bi se uzorci krvi pomiješali s dodanim spojem, ali ne previše kako se uzorci ne bi pomiješali jedni s drugima.
Više informacija o tome kako se određuje krvna grupa opisano je u videu ispod:
Rezultati istraživanja
Ako je rezultat pozitivan, u prvih nekoliko minuta, čak i prije dodavanja izotonične otopine, crvena krvna zrnca se lijepe, što se očituje pojavom crvenih ugrušaka u reakcijskoj otopini. U budućnosti, ova zrna mogu, spajajući se jedno s drugim, formirati crvena "ostrva". Naučno rečeno, ovo je hemaglutinacija - proces lepljenja zajedno sa daljim taloženjem crvenih krvnih zrnaca.
Ako nakon manipulacija ružičasta boja otopine ostane nepromijenjena, onda je reakcija, što je logično, negativna.
Postoji niz obrazaca koji ovise o kombinacijama pozitivnih i negativnih reakcija u serumu:
- Ako nema pozitivne reakcije ni u jednom od ispitivanih sektora, to znači da primalac ima krv grupe 0 (I).
- Ako je stanje seruma A(I) ostalo nepromijenjeno, a druga dva su dala pozitivnu reakciju, to znači da krv osobe koja se testira ima grupu A(II).
- U slučaju negativne reakcije samo na B(III) od sva tri, kažu da primatelj ima krvnu grupu koja nije bila „podudarna“, odnosno B(III).
- Ako se u svakoj od tri tečnosti formiraju crvena zrna, onda takva krv pripada grupi AB (IV).
Radi lakšeg pamćenja koristi se dijagram ili tabela. Pojava ostalih kombinacija je klasifikovana kao pogrešna, nastala kao rezultat grešaka tokom istraživanja.
Rezultati istraživanja Postoji niz grešaka:
- Netačna koncentracija u krvi korištena za mjerenje. Obično su lažni rezultati uzrokovani prekoračenjem specificirane količine dodavanja serumu.
- Ustajalost uzetih uzoraka seruma ili njihovo nepravilno skladištenje dovodi do neaktivnih reakcija sa crvenim krvnim zrncima.
- Niske temperature mogu dovesti do panaglutinacije, koja je po pravilu i vrlo blaga.
- Netačno vrijeme može dovesti do isušivanja površine seruma. Odnosno, rezultat studije postaje gotovo nevidljiv.
Metoda provođenja testa krvne grupe pomoću standardnih seruma je najčešća među instant testovima u hitnim situacijama. To ga čini najznačajnijim i jedinstvenim u uslovima savremene medicine.
INSTRUKCIJE
O tehnici manipulacije
„Određivanje krvne grupe korišćenjem
serumi (prema ABO sistemu) »
po specijalnosti
2-79 01 01 “Medicina”,
2-79 01 31 “Njega”
Određivanje krvne grupe pomoću
standardna izohemaglutinacija
serumi (prema ABO sistemu)
Indikacije: potreba za transfuzijom krvi, priprema za operaciju.
Materijalna podrška:
1) dve serije standardnih hemaglutinirajućih seruma u posebnim policama;
2) boca sa izotoničnim rastvorom natrijum hlorida;
3) označene tablete;
5) pipeta za vađenje krvi;
6) pipete za izotonični rastvor;
7) pješčani sat za 5 minuta;
8) rukavice;
9) propisano dezinfekciono sredstvo.
Određivanje krvne grupe vrši se u prostoriji s dobrim osvjetljenjem i temperaturom od +15 do +20 °C. Manipulacija se izvodi u rukavicama. Ako dođe do povreda kože, medicinska sestra se privremeno suspenduje sa posla. U slučaju kontakta krvi sa kožom ili sluzokožom, liječenje se provodi prema važećim uputama.
Redoslijed izvođenja:
1. Provjerite kvalitetu standardnih hemaglutinirajućih seruma:
1) označavanjem u boji;
2) izgled (svetlo, providno);
3) sigurnost ampule;
4) prisustvo pravilno dizajnirane etikete sa naznakom krvne grupe, titra, roka trajanja, mesta pripreme;
2. Stavite na sto:
1) dva seta standardnih hemaglutinirajućih seruma tri grupe (O, A, B) od dve serije i jedna ampula sa AB serumom (IV), svaka ampula mora imati pipetu;
2) boca sa izotoničnim rastvorom, pipeta;
3) sterilna označena tableta;
4) stakala (staklene šipke);
5) pipeta za vađenje krvi;
6) pješčani sat;
3. Upišite svoje puno ime na tabletu. pacijent, krvna grupa;
4. Nosite rukavice;
5. Nanesite 1 kap (0,1 ml) standardnih hemaglutinirajućih seruma tri grupe od dvije serije na tabletu u odgovarajuće utore tablete;
6. Nanesite 1 kap krvi iz prsta ili iz epruvete pipetom u odgovarajuću ćeliju;
7. Stavite u svaki otvor tablete, pored seruma, 1 malu kap (0,1 ml) krvi za testiranje u krvi: odnos reagensa -1:10 (uzmite krv iz velike kapi pomoću različitih staklenih štapića);
8. Pomiješajte krv sa reagensom, nakon miješanja nježno ljuljajte tabletu u rukama. Dodajte 1 kap 0,9% rastvora natrijum hlorida u kapi seruma sa crvenim krvnim zrncima gde je došlo do aglutinacije, ali ne ranije od 3 minuta;
9. Procijenite rezultat 5 minuta nakon početka reakcije:
1) reakcija aglutinacije može biti pozitivna i negativna;
2) ako je serum dao pozitivnu reakciju, to znači da krv sadrži oba AB aglutinogena, u tom slučaju treba uraditi dodatnu kontrolnu studiju sa standardnim serumom grupe AB (IV);
10. Dezinficirajte otpadni materijal.