Za dijagnosticiranje mikoza mogu se koristiti mikroskopske, mikološke (kulturološke), alergijske, serološke, biološke i histološke metode istraživanja. Ovisno o patogenezi, materijal za istraživanje može biti gnoj, sputum, zahvaćena kosa, nokti, ljuspice kože, punkcije koštane srži, limfnih čvorova, unutrašnjih organa, krvi, žuči, fecesa, biopsije tkiva itd.
Mikroskopski pregled uključuje mikroskopiju nativnih (neobojenih) i obojenih razmaza. Za pripremu nativnih preparata, struganje kose, kože i noktiju bistre se u 10,30% rastvorima KOH ili NaOH. Alkalno tretirani materijal stavlja se na staklo u kapljicu glicerina, prekriva se pokrovnim stakalcem i mikroskopira (može se koristiti fazno-kontrastna mikroskopija), što omogućava proučavanje strukture gljive i lokacije spora. , ali konačni zaključak o vrsti gljive može se donijeti tek nakon kulturoloških studija.
Za bojenje razmaza najčešće se koriste metode Gram, Ziehl, Nielsen i Romanovsky-Giemsa. Metode Sabourauda, Adamsona i drugih također se koriste za bojenje dermatofita.
Kulturološka (mikološka) istraživanja se provode kako bi se izolirala čista kultura gljive i identificirala. Koristite čvrste i tečne hranljive podloge (Sabouraud, wort agar, Chapek, itd.). Inkubacija u termostatu (22,28ºS) je duga (3,4 sedmice). Čista kultura gljive identifikuje se skupom karakteristika: oblikom kolonija, njihovom bojom, konzistencijom, mikroskopskom slikom (priroda micelija, lokacija spora, konidiofora) i drugim karakteristikama. Serološke reakcije za dijagnozu gljivičnih oboljenja sprovode se gljivičnim antigenima prema opšteprihvaćenim metodama, kao i za dijagnostiku drugih zaraznih bolesti (RA, RP, RSK, RNGA, RIF i dr.).
Alergološki testovi se mogu izvesti prema opšteprihvaćenim metodama intradermalnim ubrizgavanjem odgovarajućih alergena (polisaharidne i proteinske frakcije iz ćelija ili ćelijskih membrana, suspenzija ćelija ubijenih gljiva, filtrati kulture). Za identifikaciju GNT-a možete koristiti test degranulacije tkivnih i serumskih bazofila, a za otkrivanje GNT-a možete koristiti reakciju inhibicije migracije fagocita i blastne transformacije limfocita.
Biološka istraživanja se provode na laboratorijskim modelima (miševi, pacovi, zamorci, zečevi, psi, mačke). Biološki model mikoze se koristi za identifikaciju patogenosti patogena, izolaciju čiste kulture i proučavanje novih antimikotika. Histološki pregled omogućava otkrivanje gljivice u tkivima, proučavanje njene morfologije i karakteristike patološkog procesa uzrokovanog njom u tijelu.
Sadržaj
Izuzetno je teško identificirati leziju i odrediti patogena kada je gljivica inficirana u prvim fazama. Dijagnoza je komplicirana činjenicom da se patologija ne manifestira odmah ili ima različite simptome. Za određivanje patogena uzima se biomaterijal iz područja zahvaćenog patogenom mikroflorom: sputum, dio kože, inficirani nokat, krv, biopsija limfnih čvorova ili unutrašnjih organa.
Šta su gljivične bolesti
Kako izgleda
Razlog za kontaktiranje dermatologa su, u pravilu, prve patološke manifestacije bolesti. Klinički znakovi će se razlikovati ovisno o mjestu infekcije i uzročniku gljivične bolesti. Razlikuju se sljedeće vrste patogenih mikroorganizama:
- Candida gljivica – izaziva infekcije kandidijazom;
- Trichophyton (Trichophyton) - izaziva zarazne patologije noktiju, kože, sluzokože;
- Kriptokokoza - napada unutrašnje organe, pluća;
- Aspergiloza je gljivična bolest uzrokovana smanjenim imunitetom.
Tokom dijagnoze lokalizacijom se može odrediti jedna od 2 grupe infekcije:
Patogena mikroflora prodire kroz rane na površini epiderme, mikrotraume; uzrok bolesti može biti svaka ogrebotina koja izaziva mikozu glatke kože. Tijelo se ne može nositi s napadom patogena kada su njegove zaštitne funkcije smanjene. Prilikom dijagnoze često se utvrđuje infekcija rodom Trichophyton ili Candida. Potonji uzrokuju sljedeće bolesti:
- drozd;
- kandidijaza kod muškaraca;
- oralna kandidijaza.
Postoji više od nekoliko desetina patogena, dijele se prema načinu oštećenja tkiva. Tokom dijagnoze mogu se identificirati sljedeće vrste gljivičnih mikroorganizama:
- duboke sistemske mikoze izaziva Histoplasma capsulatum;
- potkožne potkožne mikoze izaziva Sportrichum schenckii;
- epidermomikoza se razvija zbog Epidermophyton floccosum;
- pityriasis versicolor, površinska mikoza - Malassezia furfur;
- oportunističke gljivične bolesti - Candida albicans.
Klasifikacija mikoza
Opći naziv svih bolesti ove vrste krije različite vrste oštećenja ljudskog tijela gljivama. Prilikom postavljanja dijagnoze, liječnici dijele kožne bolesti u 4 grupe:
- Keratomikoza. Mjesto lokalizacije postaje stratum corneum epidermisa, u ostalim slojevima kože nema upalnih pojava (piedra, pityriasis versicolor, krasta, sporotrihoza). Sljedeće gljive uzrokuju ovu vrstu patologije: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
- Dermatomikoze. Karakterizira ih izražen upalni proces, lokaliziran na koži, vlasištu i noktima (faus, trihofitoza, epidermofitoza, mikrosporija). Sljedeći sojevi gljiva izazivaju patologije: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
- Kandidijaza. Ova vrsta gljivica pogađa sluznicu, kožu i njene dodatke. Unutrašnji organi su često meta napada gljivica roda Candida.
- Duboke mikoze. Provociraju teške infekcije svih slojeva kože, unutrašnjih organa, sluzokože, kostiju, mišića (mukoroza, peniciloza, aspergiloza).
Postoje zasebne pseudomikoze (aktinomikoza, eritrasma), koje nisu gljivične bolesti, ali su im simptomi slični pravim mikozama. U ovim slučajevima potrebna je diferencijalna dijagnoza. Dijagnostika je u takvim slučajevima vrlo važna jer pomaže u određivanju vrste gljivične infekcije ili njenom isključivanju. O tome ovisi svrha režima liječenja, njegovo trajanje i djelotvornost.
Dermatomikoze
Dermatofitne gljivice prodiru duboko u kožu i izazivaju dermatomikozu, na primjer, sljedeće poznate patologije:
- mikrosporija;
- trichophytosis;
- atletsko stopalo;
- rubrofitija;
- favus.
Ova vrsta patologije svrstava se u razne bolesti koje stvaraju ožiljke, deformacije ruku, noktiju na nogama, promjene u strukturi i gubitak kose. Patogeni zahvaćaju gornje, duboke slojeve kože, što dovodi do pojave čireva, pustularnih osipa i opsežnih žarišta upale. Povoljan uslov za razvoj je loša higijena stopala. Prvo, gljivice rastu na koži stopala, u prostorima između prstiju, a zatim se šire na nokte.
Kandidijaza
Patogeni mikroorganizmi utiču na duboke i površinske slojeve kože, šireći se na nokte, kosu i unutrašnje organe. Bolesti izazivaju gljivice roda Candida, koje spadaju u grupu kandidijaza. Razlikuju se sljedeće vrste ovih bolesti:
- generalizovano;
- površno;
- visceralni.
Gljive Candida su klasifikovane kao oportunističke. Uzročnici nalik kvascu mogu se otkriti tokom dijagnoze u crijevima, usnoj šupljini i kod zdrave osobe. Jak imunitet inhibira širenje patogenih mikroorganizama, a kada oslabi, počinje aktivna reprodukcija kandide, što dovodi do oštećenja kože trupa, stopala, glave i šaka. Kliničke promjene se uočavaju kod svih vrsta kandidijaze. Liječenje ovisi o težini bolesti i vrsti lezije.
Duboka mikoza
Ovo je vrsta bolesti koja zahvaća duboke slojeve kože i unutrašnje organe. Bolesti se razvijaju sa snažnim smanjenjem obrambenih snaga organizma, promjenama u hormonalnom nivou i metaboličkim poremećajima. Sljedeće patologije klasificiraju se kao duboke mikoze:
- kokcidioidoza;
- hromomikoza;
- rinosporidioza;
- histoplazmoza;
- sporotrihoza;
- blastomikoza;
- mukoroza;
- cefalosporioza;
- micetom;
- kladosporioza;
- Madura foot;
- aspergiloza.
Keratomikoza
Ovo je grupa patologija koje su lokalizirane samo na kutikulama dlake, stratum corneumu i površinskom sloju kože. Karakterističan znak keratomikoze je odsustvo upalnih pojava. Uzročnici bolesti su plijesni, gljivice slične kvascu, dermatofiti (oko 70 vrsta patogena). Oni izazivaju sledeće bolesti:
- shimberi;
- pityriasis alba;
- crni lišaj;
- imbricate mycosis;
- tropski bijeli i žuti lišajevi;
- nodularna trihosporija;
- piedra;
- pityriasis versicolor (pityriasis versicolor).
Kako dijagnosticirati gljivicu
Zatim počinje vizualni pregled koji pomaže u određivanju opsega oštećenja i područja koja su zahvaćena gljivicama. Liječnik treba obratiti pažnju na prisustvo imunodeficijencije pacijenta. Za utvrđivanje vrste patogena potrebno je prikupiti materijal koji se šalje na laboratorijsko ispitivanje. Iskusni liječnik može postaviti dijagnozu tokom inicijalnog pregleda, ali da biste napravili režim liječenja, još uvijek morate proučiti biomaterijal. Za dijagnosticiranje gljivičnih bolesti koriste se sljedeće metode:
- mikroskopija - pregled biomaterijala pod mikroskopom, uobičajena i jednostavna dijagnostička metoda;
- pregled pod Woodovom lampom - poseban spektar ultraljubičastog osvjetljenja (luminiscencije) pomaže u uočavanju gljivičnih lezija;
- bakteriološka kultura je točna metoda dijagnoze, ali potrebno je 2-3 tjedna dok kolonija ne poraste na hranjivom mediju;
- PCR dijagnostika je najprecizniji način za određivanje vrste patogene mikroflore, ali tačna dijagnoza može zahtijevati nekoliko testova, što zahtijeva ulaganje novca.
Laboratorijske metode
Samo pravovremena, tačna dijagnoza pomoći će u propisivanju učinkovitog režima liječenja i smanjenju trajanja tečaja. Laboratorijska dijagnostika gljivičnih oboljenja je najefikasnija metoda za određivanje vrste patogena. Za identifikaciju se koriste sljedeće mogućnosti istraživanja:
- bakteriološka kultura;
- histološka analiza;
- PCR dijagnostika;
- imunološka istraživanja;
- mikrobiološke studije;
- kulturna istraživanja.
Diferencijalna dijagnoza mikoza
Postavljanje točne dijagnoze je teško jer različite vrste mikoza uzrokuju različite simptome. U takvim slučajevima koristi se diferencijalna dijagnostička metoda i mikoza se uspoređuje s drugim dermatološkim patologijama. Često se znakovi mikoze brkaju s psorijazom, ali kada se ljuske ostružu, gljivična patologija neće krvariti. Slični simptomi se primjećuju i kod parapsorijaze.
Ljekar mora isključiti mogućnost razvoja numularnog ekcema. Ovo je posebna vrsta patologije koja se može otkriti samo laboratorijskom dijagnostikom. Često se znakovi gljivica pogrešno smatraju polimorfnom fotodermatozom, koja se može razviti samo kod odrasle osobe i nikada se ne javlja kod djeteta. Za postavljanje tačne dijagnoze i propisivanje kompetentnog liječenja potrebna je laboratorijska i diferencijalna dijagnostika.
Mikrobiološka dijagnostika mikoza
Ovo je najjednostavniji i najčešći metod za otkrivanje mikoze na koži i u krvi. Za tačnu dijagnozu potrebno je prikupiti materijal za istraživanje. Ako je zahvaćeno vlasište, potrebno je pincetom sakupiti zahvaćenu kosu i sastrugati oštećeno područje s kože. Laboratorijske studije na gljivična oboljenja mikrobiološkom metodom izvode se stavljanjem biomaterijala u 30% rastvor kalijum hidroksida, a zatim na stakalce.
Analiza će pomoći da se utvrdi gdje se gljiva nalazi (izvan ili unutar kože, dlake) i njena veličina. Ako se materijal prikupi pogrešno, analiza može dati pogrešan rezultat. Za dijagnozu se koriste sljedeće mikrobiološke dijagnostičke metode:
- mikroskopija sa prirodnim i neobojenim preparatima;
- mikroskopija sa obojenim preparatima.
Metode istraživanja
Prilikom postavljanja dijagnoze, specijalista mora uzeti u obzir strukturu micelija (struktura hifa, njihova septacija, boja), strukturne karakteristike spora, kondija, njihovu boju, oblik i veličinu, strukturu ćelijskog zida itd. uzimaju se u obzir. Za istraživanje se pripremaju domaći, obojeni preparati. Potonji zahtijevaju obradu materijala na različite načine:
- PAS bojenje. Ova vrsta bojenja pomaže u identifikaciji neutralnih polisaharida u zidovima mikroorganizama. To uključuje kompleks glukan-manan, koji se nalazi u ćelijskom zidu mnogih eumiceta. Provocira proces bojenja.
- PAS reakcija. Koristi se za dijagnosticiranje gljivične infekcije u obliku tkiva. U laboratoriji se za ovu studiju koriste različite modifikacije, na primjer, Gridleyjevo bojenje ili Bauerova reakcija.
- Gram metoda. Bojenje na ovaj način pomaže u prepoznavanju prisutnosti pratećih mikroorganizama.
- Ziehl-Nielsonovo bojenje. Pomaže u identifikaciji mikroorganizama otpornih na kiselinu. Ako je biomaterijal tečan, pripremite poseban neobojen razmaz u tekućinama za čišćenje za mikroskopiju: glicerin i alkohol se pomiješaju u jednakim omjerima.
Test kulture na gljive
Biomaterijal se stavlja na hranljivi medij (kultivacija) da bi se izolovala čista kultura na sobnoj temperaturi. Dimorfne gljive u takvim uvjetima formiraju micelij; kada narastu do 37 stupnjeva, počinju se formirati ćelije slične kvascu. Sabouraudov medij se koristi za dermatofite i gljivice Candida, a za pljesnive (hifalne) gljive potreban je Czapekov medij. U sastav se često dodaje antibiotik. Duboke mikoze mogu se utvrditi samo u kliničkim laboratorijskim centrima zbog njihove visoke zaraznosti.
Luminescentna dijagnostika gljivičnih oboljenja
Za identifikaciju zahvaćenih područja kože s patogenom mikroflorom iz roda Microsporum koristi se ultraljubičasta lampa. Ovo je opcija za ekspresnu dijagnostiku, koja se koristi ako je potrebno potvrditi prisutnost infekcije kože ili simptoma bolesti lišajeva. Ultraljubičasto zračenje nije glavni način za određivanje gljivica, ono je pomoćna metoda, tako da nije potrebno.
Za pregled pacijenta koristi se Woodova lampa koja emituje UV zračenje, pod njihovim uticajem otpadni produkti gljivice sijaju jakom svetlošću. Boja ovisi o vrsti patogena koji je utjecao na pacijenta:
- zelenkasto – lišaj vlasišta;
- plava – eritematozni lupus na usnama;
- žućkasto – plosnate formacije lišaja.
Imunološki enzimski test krvi na gljivice
Za otkrivanje mikoza koje su zahvatile kožu i unutrašnje organe (histoplazmoza, kokcidioidoza) koristi se imunološki enzimski test krvi na gljivične bolesti. Ova tehnika se često koristi ako iz određenih razloga nije moguće uzeti biopsiju tkiva za proučavanje. Tehnika se zasniva na traženju titra antitijela na određenu vrstu gljivične bolesti.
U ove svrhe koristi se određivanje IgG za aspergilozu i kandidijazu. Točnost analize je oko 80%, u rijetkim slučajevima možete dobiti lažno pozitivan rezultat u odsutnosti dubokih mikoza. To se dešava kada pacijent ima gljivicu na oralnoj sluznici ili uznapredovali oblik drozda. ELISA zahtijeva uzorak venske krvi, uzet rano ujutro ili 4 sata nakon posljednjeg obroka. Za analizu nije potrebna nikakva druga priprema.
Odgovor na analizu bit će nekoliko dana nakon prikupljanja biomaterijala. Retko kada period čekanja prelazi 5 dana. Kvalitet opreme u laboratoriji utječe na brzinu istraživanja, ako postoje razlozi za dodatno ispitivanje uzoraka krvi. Po završetku zahvata pacijentu se daje zaključak koji će ukazati na jednu od sljedećih vrijednosti:
- ako se potvrdi prisustvo gljivice, biće napisano „pozitivan rezultat“;
- ako nema potpune sigurnosti da je u krvi otkrivena gljivica, pišu "sumnjivi rezultat";
- u nedostatku patogene mikroflore u uzorku biomaterijala, upisuje se "negativan rezultat";
- Ako imate dobru opremu, krvni testovi mogu odrediti koncentraciju ćelija mikoze i ukazati na indikator u zaključku.
PCR dijagnostika gljivičnih oboljenja
Najprecizniji i najpouzdaniji način za dijagnosticiranje gljivica i drugih zaraznih bolesti je polidimenzionalna lančana reakcija. Dijagnostička metoda ima sljedeće prednosti:
- niska cijena analize;
- visoka preciznost;
- istraživanje biomaterijala se obavlja brzo;
- Za analizu možete uzeti bilo koji uzorak tkiva (komad kože, sluzokože, struganje sa tabana, prstiju, površine noktiju, kose, krvi).
Glavno ograničenje ove studije je njen uski fokus. Da biste postavili dijagnozu mikoze, morate tačno znati gdje je zahvatila ljudsko tijelo. PCR određuje vrstu patogena i njegovu koncentraciju u tijelu pacijenta. Rezultati će biti poznati za dan, u nekim slučajevima (u nedostatku nepovoljnih uslova), odgovori stižu na dan isporuke (za 5-6 sati). Brzina studije ovisi o ispravnosti uzimanja uzoraka, iskustvu medicinskog osoblja i opterećenosti laboratorije.
Kako prepoznati gljivicu kod kuće
Uz sposobnost prepoznavanja simptoma mikotičnih patologija i korištenje kućnih dijagnostičkih metoda, moguće je odrediti vrstu patogena. Pacijent mora ispravno procijeniti tok bolesti; u ranim fazama gljivična bolest se može zamijeniti s psorijazom ili lišajevom. Da biste to izbjegli, morate znati glavne znakove mikoze koji je razlikuju od drugih bolesti. Simptomi gljivične infekcije:
- nokti postaju žuti i počinju se ljuštiti;
- promjena oblika ploče nokta;
- nema razdoblja remisije i egzacerbacije, počinje potpuno odvajanje ploče, što se ne događa kod kožnih patologija i psorijaze;
- zahvaćeno područje ima neugodan miris, boli pri dodiru, svrbež, ljuštenje, a na površini kože mogu se stvoriti plakovi;
- Gljivice obično zahvaćaju prostore između prstiju na jednoj ili obje noge, zatim se bolest širi na nokat i ostatak stopala.
Dijagnoza gljivica noktiju na nogama pomoću kalijevog permanganata
Ako primijetite da su nokti na vašim prstima na rukama i nogama počeli da se mijenjaju, ili da se pojavio neprijatan miris, možete provjeriti prisustvo ili odsustvo infekcije kod kuće. Za analizu će vam trebati mangan, topla voda i posuda. Postupak se provodi na sljedeći način:
- ako postoje znakovi kožne bolesti, nanesite tanak sloj joda na ovo područje;
- sačekajte 2 minuta;
- ako postoji problem, tada će lezije poprimiti bogatu boju;
- zdrava područja kože neće biti istaknuta.
Koliko košta dijagnosticiranje gljivičnih bolesti u moskovskim klinikama?
| Ime | Vrsta studija | Cijena, rublje |
| Mikroskopsko ispitivanje uzoraka noktiju | ||
| Mikroskopija i kultura (koža/nokti) | ||
| Sjetva za gljive slične kvascu | ||
| Dušo. Zdravstvena akademija centar | Mikroskopski pregled struganja noktiju | |
| Mikroskopski pregled strugotina kože | ||
| Mikroskopski pregled kose | ||
| Struganje, analiza na virusne infekcije. | ||
| "Medline Service" | Candida krvni test (DNK) |
Video
Pažnja! Informacije predstavljene u članku su samo u informativne svrhe. Materijali u članku ne potiču na samoliječenje. Samo kvalificirani liječnik može postaviti dijagnozu i dati preporuke za liječenje na osnovu individualnih karakteristika određenog pacijenta.
Pronašli ste grešku u tekstu? Odaberite ga, pritisnite Ctrl + Enter i sve ćemo popraviti!Ljuske ili dlake stavljaju se na stakalnu stakalcu (staklo se mora odmastiti) i puniti sa jednom, dvije ili tri kapi 30% otopine kaustičnog kalija ili kaustične sode i prekrivati pokrovnim stakalcem. 2-3 minuta, uz lagano zagrevanje na plamenu alkoholnog gorionika, lagano pritiskati preparat poklopnom čašom dok se
sivi oblak pri ispitivanju vaga. Kosu ne treba uništavati, ona samo nabubri od takvog zagrijavanja. Mikroskopski pregled (uvećanje 100-200 puta) sa zatamnjenom dijafragmom otkriva gljivične elemente - spore ili niti micelija. Neophodan uslov za uspješnost mikroskopskog pregleda je temeljitost uzimanja ljuski i dlačica koje se moraju uzeti sa zahvaćenih područja posebnom pincetom (pinceta za trepavice). Neophodno je obratiti pažnju ne samo na jasno vidljive dlake, kore i ljuskice, već i na jedva primjetne ostatke dlaka (tzv. panjeve) i mitesere koji se uklanjaju skalpelom ili histološkom iglom. Nikada se ne biste trebali zadovoljiti upućivanjem pacijenta na zahvaćena područja, već sam liječnik mora pažljivo pregledati cijelo vlasište.
U kosi zahvaćenoj trihofitozom, spore gljivica su raspoređene u lancu. Kod mikrosporije, spore su mnogo manje nego kod lišaja, ne formiraju lance i nalaze se na vanjskoj strani dlake. Unutar dlake se protežu niti septiranog micelija. Kosa je kao obučena u pokrivač i spor. Kod krasta se uočavaju polimorfne spore, grube, raznolike niti i obično mjehurići zraka (Sl. 48).
U ovom slučaju gljivice ne zahvaćaju u potpunosti cijelu kosu, ali ostaju nezahvaćena područja.
Da bi se dobio materijal od glatke kože, ljuske se sastružu. periferna područja lezije oštrom kašikom ili skalpelom. Pogodnije je strugati nokte oštrim medicinskim nožem (skalpelom), uklanjajući male, ali duboke dijelove s unutrašnje površine nokatne ploče ili strugati prah pitirijaze sa rožnatih ploča nokta.
Početni materijal se prokuva u epruveti sa alkalijom i ostavi da odstoji u ovoj epruveti 12-20 sati.
Nakon toga se sadržaj centrifugira i sediment se ispituje pod mikroskopom (metoda N.A. Černogubova).
Gljive dobro rastu na umjetnim hranjivim podlogama koje sadrže ugljikohidrate i proteinske tvari. Posebno su česti takozvani originalni Sabouraud medijum, pivska sladovina, agar i povrće.
mikroskopija - ovo je jedna od glavnih metoda u laboratorijskoj dijagnostici mikoza. Ova studija se mora provesti od dana kada se prve kolonije pojave na hranljivoj podlozi. Prije mikroskopskog pregleda potrebno je znati da li je gljiva kvasac ili plijesan - po izgledu kolonija, rezultatima testa klijavosti.
Prilikom mikroskopiranja plijesni uzima se u obzir struktura micelija (tj. strukturne karakteristike hifa, njihova boja, septacija; strukturne karakteristike konidija i spora, uključujući veličinu, oblik, boju konidija; struktura njihovog ćelijskog zida , septacija, itd.)
Pripremite se za mikroskopiju native I oslikana droge. Za kuvanje oslikana materijal lijeka se obrađuje na različite načine:
1. BojanjePAS-metod. Upotreba PAS metode omogućava identifikaciju neutralnih polisaharida u zidovima mikroorganizama. Neutralni polisaharidi su kompleks glukan-manan koji se nalazi u ćelijskom zidu većine eumiceta; zbog toga dolazi do bojenja.
PAS-reakcije– jedna od metoda za mikroskopsku dijagnostiku tkivnih oblika gljivične infekcije. U praktičnim laboratorijama za mikroskopsku dijagnostiku koriste se različite modifikacije ove metode: oksidacija hromne kiseline - Bauerova reakcija; Gridley bojenje.
2. Bojenje po Gramu (modificirano po Gram-Weigertu) za identifikaciju povezanih mikroorganizama.
3. Ziehl-Nielsonovo bojenje za identifikaciju mikroorganizama otpornih na kiselinu. Ako je materijal koji se ispituje tečnost, zatim se od njega priprema neobojen razmaz za mikroskopiju u tekućinama za čišćenje: mješavina alkohola i glicerina u omjeru 1:1.
Sljedeća faza je mikološka istraživanja– izolacija i identifikacija gljivica. Razmotrimo karakteristike ove faze u zavisnosti od materijala koji se proučava.
Mikološka istraživanja
Kulturološka istraživanja. Kulturološka istraživanja temelje se na izolaciji patogena iz materijala koji se proučava. Razdoblji uzgoja variraju za različite vrste gljiva (od 2-4 dana do 4 sedmice); ako se sumnja na dimorfne gljive, kultura se izoluje do 8 sedmica. Glavni mediji za uzgoj u mikološkoj laboratoriji su Sabouraud-ov medij: Sabouraud-ov dekstrozni agar (čvrsta podloga), Sabouraud-ov bujon (tečna podloga). Da bi se suzbio rast bakterijske flore, u Sabouraudovu podlogu se dodaju antibiotici (kloramfenikol, gentamicin, a rjeđe streptomicin, penicilin). Za suzbijanje rasta saprofitnih gljivica u podlogu se dodaju cikloheksimid i hloramfenikol. Postoje gotovi mediji sa cikloheksimidom ( Mycobiotic Mycosel).
Optimalni režim uzgoja za većinu patogenih gljiva je 30 0 C, 20-25 0 C, rjeđe 37 0 C - ako se sumnja na dimorfne gljive. Vrijeme inkubacije za većinu gljiva je do 6 sedmica; ako se nakon ovog vremena ne primijeti rast, onda se daje negativan odgovor. Ako se sumnja na dimorfnu mikozu i nema rasta 6 sedmica, kultura se čuva 8 sedmica i tek nakon toga se daje negativan rezultat.
Na kulturnom pregledu dijagnostički značajno su:
Izolacija plijesni ili kvasca tokom ispitivanja normalno sterilnog materijala;
Izolacija dimorfne gljive.
Algoritam mikološkog istraživanja
1. Određivanje gljivične etiologije patogena (mikroskopija).
2. Odredite kvasac ili plijesan:
Mikroskopija kliničkog materijala (prisustvo micelija);
Priroda kolonija na hranjivom mediju, brzina rasta (kvasci rastu 48 sati, plijesni rastu sporo).
3. Konačna identifikacija gljive do nivoa vrste (intraspecifična) vrši se biohemijskim testovima i imunološkim metodama. Prilikom proučavanja biohemijskih svojstava proučava se sposobnost izolovane kulture za asimilaciju (auksanogram) i fermentaciju (zigogram). Moguće je koristiti automatizovane sisteme identifikacije (test sistemi za identifikaciju gljiva).
Kriterijumi za etiološki značaj izolacije oportunističkih gljiva
1. Ako su u izvornom preparatu (saprofitska vegetacija) vidljive samo blastospore, onda se to smatra nosačem.
3. Ako su blastospore pojedinačne i prevladava pseudomicelij, onda je to znak dubokih lezija organa.
4. Aktivno pupanje blastospora je dokaz akutnog procesa.
5. Kvantitativna procjena rezultata - izolacija gljive iz razblaženja
10 - izmet, urin;
10 – sputum.
6. Ponovljena sjetva iste vrste gljiva
7. Prisustvo antitela na izolovani soj.
Mikološki pregled sluzavog sekreta
1. Priprema materijala. Nakon sakupljanja materijala sa sluzokože, bris se stavlja u 2 ml tečne Sabouraud podloge ili agara od sladovine, ili MPB, koji se sipa u sterilne epruvete. Dobro ih protresite 5 minuta, pazeći da ne natopite čep. Od dobijene suspenzije se priprema serija razblaženja 1:10 i 1:100 itd.
Iz svakog razblaženja, 0,1 ml se posije na 2 šolje agara sladovine, Sabouraud agara ili MPA. Inokulacije na čvrstu podlogu i epruveta sa tečnom podlogom sa štapićem za obogaćivanje inkubiraju se na +37 0 C 48 sati:
Nakon proteka vremena, usjevi se pregledavaju i broj kolonija se broji i približno određuje broj kolonija kvasca. Njihov broj se množi sa 20 i razrjeđenjem od kojeg se vrši sjetva;
Ako nema rasta na pločama sa inokulacijom napravljenom od razblaženja, onda ponovo inokulirajte iz medijuma za obogaćivanje u ploču sa agarom sladovine.
Mikološki test krvi
1. Priprema materijala. Nakon uzimanja krvi, razrjeđuje se 1:10 tako da baktericidna svojstva krvi ne inhibiraju rast gljivica.
2. Kulturološki pregled.
5-10 ml krvi inokulira se u 50-100 ml tečne Sabouraudove podloge sa 2% glukoze. Na temperaturi od 37 0 C inkubiraju se nedelju dana;
Nakon 5 dana vrši se kontrolna sjetva. Da biste to učinili, uklonite sediment sterilnom pipetom; 3-4 kapi iz pipete se inokuliraju na agar sladovine i melju sterilnom bakteriološkom petljom;
Posjete se drže u termostatu na 37 0 C 2-5 dana;
Ako se otkrije rast, daje se preliminarni odgovor o fungemiji, a dalja identifikacija gljive se provodi tokom studije.
Mikološki pregled biopsijskih uzoraka
1. Za prikupljanje materijala koristite metodu otiska prsta.
2. Kulturološki pregled:
Napravite otisak sa komadom tkiva koji se ispituje na površini Sabouraudovog gustog hranljivog medija;
Isti komad tkiva stavlja se u 50 ml tečne hranjive podloge (wort ili Sabouraud);
Usjevi se inkubiraju na 37 0 C 5 dana.
4402 0
Nažalost, i danas se može konstatovati da je dijagnoza gljivičnih oboljenja često neblagovremena (područja prorijeđene kose, ljuštenja često se pogrešno smatraju „peruti“, „suvoće“). U isto vrijeme, subjektivni osjećaji (svrab, bol, itd.) često se ne javljaju u lezijama, pa se pacijenti iz tog razloga ne obraćaju specijalistu dugo vremena.
Promjene na noktima (ružne, mrvljene, stanjive) smatraju se „onihodistrofijom“ nakon modrice, promrzlina itd. krvožilni i limfni sistem, krvni sudovi itd. Pacijenti ostaju izvor gljivične infekcije na neodređeno vrijeme. U vezi s navedenim, uvijek je relevantna pravovremena laboratorijska dijagnoza mikoza i moguće rano liječenje.
Raznolikost kliničkih varijanti gljivičnih bolesti, uglavnom kod ljudi, kao i karakteristike mikrobiologije, morfostrukture, imunoloških i drugih parametara različitih vrsta (i rodova) gljiva odredile su dostupnost značajnog broja metoda za dijagnosticiranje mikoza. ; Treba napomenuti da se dostupne metode stalno poboljšavaju i (relativno nedavno) imaju posebnu pristrasnost prema imunološkim i molekularno genetskim testovima.
S druge strane, kulturološke studije su još uvijek „bliske zlatnim standardima“ i koriste se za potvrđivanje sumnjivih rezultata drugih studija; Postoji mišljenje da je kombinacija kulturoloških i molekularno-genetičkih metoda za dijagnostički „upitne“ oblike mikoza (posebno diseminiranih, na pozadini imunosupresije bilo kojeg porijekla, sa oštećenjem unutrašnjih organa itd.) jedna od najpouzdanijih. načini da se registruje mikotična priroda procesa.
Međutim, ne treba zanemariti ni „stare” metode, posebno bakterioskopiju (posebno prilikom inicijalnog pregleda), tim više što se u svakodnevnoj praksi mikroskopska „provjera” mikoze u mnogim dermatološkim ustanovama koristi najšire u odnosu na druge testove.
Uzimajući u obzir značajno povećanje broja alergijskih manifestacija na koži (a ponekad i visceralnim) - u slučaju dugotrajnog, kroničnog, periodično pogoršanog tijeka mikoze (koža, nokti i sl.), preporučljivo je obaviti alergološke testovi za utvrđivanje stepena senzibilizacije organizma, uključujući kombinovanu gljivično-bakterijsku infekciju; ova činjenica može utjecati na specifičnosti liječenja određenog pacijenta - na primjer, odrediti racionalno propisivanje antimikotika i desenzibilizirajućih sredstava itd.
Tradicionalno, pretpostavljena dijagnoza gljivične bolesti postavlja se na osnovu kliničkih manifestacija i potvrđuje laboratorijskim testovima.
U ovom dijelu knjige ukratko dajemo osnovne metode za snimanje mikoza (bez obzira na njihovu lokaciju), uzimajući u obzir „vrstu studija i preuzeti materijal“. Treba napomenuti da polimorfizam kliničkih manifestacija mikoza (uključujući i one s alergijskom komponentom) određuje raznolikost patološkog materijala koji se ispituje. Istovremeno, uspjeh u potrazi za elementima gljive ovisi o pravilnom odabiru iste.
Dakle, periferna zona eritematoskvamoznih, često figuriranih osipa bogatija je micelijumom, sporama gljivica; na dlakavim područjima lezije uzimaju se uvijena, bjelkasta, izbijeljena, bez sjaja kosa ili njeni fragmenti - "patrljci" (preporučljivo je kontrolirati prikupljanje dlaka pomoću Woodove lampe). Potrebne su određene vještine za prikupljanje materijala (pomoću igle) iz tzv. "crne tačke" - tamni rožnati češeri na ustima folikula.
U svakodnevnoj praksi najčešće se pregledavaju ljuspice kože (sakupljene struganjem, mazanjem, ljepljivom trakom), struganje izmjenjenih noktiju, područje subungualne hiperkeratoze, kao i iscjedak sluzokože. Prema indikacijama, ispituje se sputum, tečnost za ispiranje i urin (kod pacijenata sa nekateterizovanom bešikom); urin iz pisoara i posuda ne može se prikupljati za istraživanje.
Krv (za kulturološki pregled, kao i ELISA, PCR), likvor i druge tjelesne tekućine (pleuralne, intraartikularne, intraperitonealne - uključujući one prikupljene aspiracijom ili drenažom) također su od dijagnostičke vrijednosti; u nekim slučajevima (ovisno o lokalnoj dijagnozi) važni su žuč, izmet, punktati potkožnih apscesa i iscjedak iz fistula (posebno kod dubokih mikoza). Čak i jednostavni dijagnostički testovi zahtijevaju striktno pridržavanje brojnih uvjeta.
Za dijagnosticiranje gljivičnih bolesti trenutno se koriste sljedeće metode:
- mikroskopija; zasniva se na detekciji patogena u ispitivanom materijalu, uklj. u ljudskim tkivima;
- kulturološki pregled praćen mikroskopskim pregledom gljivične kulture;
- histološki pregled (g.o. za duboke mikoze);
- imunološke i molekularne metode.
Mikroskopska dijagnostika
Mikroskopska dijagnostika postala je moguća pojavom posebne optičke, a kasnije i elektronsko mikroskopske tehnologije, koja je omogućila detaljno proučavanje ultrastrukture gljiva. U ovom slučaju od dijagnostičke važnosti je otkrivanje gljivičnih elemenata - tankih razgranatih niti koje formiraju micelij (micelij), zaobljena tijela (spore; oni su reproduktivni „organ“ gljiva).Mikroskopska dijagnostika uključuje proučavanje neobojenih (nativnih) i obojenih preparata. Ova metoda je, kako je navedeno, najčešća u dermatološkoj praksi zbog svoje komparativne jednostavnosti i niske cijene, ali, s druge strane, nije dovoljno osjetljiva i zahtijeva u nekim slučajevima ponovljena ispitivanja i potvrdu drugim metodama.
Tako se pri pregledu neobojenih preparata osim gljivičnih elemenata mogu otkriti epitelne stanice, krvna zrnca i različiti kontaminanti iz vanjskog okruženja, što otežava pronalaženje uzročnika mikoze i zahtijeva dodatnu „pripremu“ materijala. - tzv. “prosvjetljavanje” (maceracija), koncentracija, razrjeđivanje, itd.
Ipak, direktna mikroskopija nativnih preparata omogućava brzo dijagnosticiranje mikoze i određivanje na koje hranjive podloge (ako je potrebno) materijal treba inokulirati; postoji mišljenje da pozitivan rezultat može ostati jedina laboratorijska potvrda mikoze s negativnim odgovorom. u kulturi (A.Yu.Sergeev, Yu.V.Sergeev, 2003).
Među različitim opcijama za „čišćenje“ lijekova, najčešći je dodatak KOH ili NaOH ispitivanom materijalu (češće se koristi za otkrivanje gljivica u kožnim ljuskama, kosi, kao i brojnim uzročnicima dubokih mikoza u sputumu i biopsijski uzorci).
Za maceraciju usitnjenog i stavljenog na staklo koristi se 10-20% rastvor kaustične sode (ili kalijuma) - 1-3 kapi, 10-20 minuta; Preparat se lagano pritisne poklopnom čašom, a radi brže maceracije zagrijava se na vatri dok se ne pojavi para. Gledanje se vrši prvo pod malim uvećanjem, zatim pod velikim uvećanjem (suvi sistem).
Pravilno pripremljen preparat koji nije podvrgnut oštrim mehaničkim, termičkim i hemijskim uticajima daje sliku homogene mase koju čine epitelne ćelije, produkti ćelijskog propadanja gljivičnih elemenata – niti micelijuma i spora.
Promijenjena kosa se stavlja na staklo sa 10-30% alkalija i tretira na isti način, ali duže - od 20 minuta do 3-4 sata.Ako je sadržaj pigmenta u izobilju, preporučuje se prvo izbjeljivanje kosu sa 5% rastvorom vodikovog peroksida. Pridaju značaj otkrivanju gljivičnih elemenata, kao i njihovoj lokaciji u odnosu na kosu.
Priprema materijala od patološki promijenjenih noktiju (najbolje finog praha dobivenog struganjem iz dubine lezije) izvodi se na sličan način, ali uz korištenje 30% kaustične sode, obavezno pažljivo zagrijavanje na plamenu do laganih para i izlaganje za oko 1 sat (ponekad i do nekoliko sati). Preparati tretirani alkalijom ne smiju se čuvati duže od 1,5-2 sata zbog njihovog "kvarenja" (kristalizacija reagensa, smanjenje dijagnostičke pouzdanosti utvrđene mikroskopskom slikom).
Umjesto KOH ili NaOH možete koristiti: a) rastvor mješavine KOH sa 15% DMSO; b) mješavina fenola (2 dijela) sa hloralhidratom (2 dijela) i mliječnom kiselinom (1 dio); c) calcofluor white, koji ima afinitet za hijagin i celulozu; Za istraživanje je potreban fluorescentni mikroskop (uočava se plavi ili zeleni sjaj, što zavisi od filtera koji se koristi). Prilikom ispitivanja likvora (ako se sumnja na kriptokokozu) često se koristilo bojenje tintom.
Kulaga V.V., Romanenko I.M., Afonin S.L., Kulaga S.M.