Serološka dijagnoza, zasnovana na reakciji antigen-antitijelo, može se koristiti za određivanje oba i igra ulogu u određivanju etiologije virusne infekcije čak i kada su rezultati izolacije virusa negativni.
Uspjeh serološke dijagnoze ovisi o specifičnosti reakcije i usklađenosti s privremenim uvjetima za vađenje krvi neophodnih da tijelo sintetizira antitijela.
U većini slučajeva koriste se upareni krvni serumi, koji se uzimaju u intervalima od 2-3 sedmice. Pozitivnom reakcijom se smatra povećanje titra antitijela najmanje 4 puta. Poznato je da većina specifičnih antitijela pripada klasama IgG i IgM, koji se sintetiziraju u različito vrijeme tokom infektivnog procesa. Istovremeno, IgM antitijela su rana antitijela, a testovi koji se koriste za njihovo utvrđivanje služe za ranu dijagnozu (dovoljno je pregledati jedan serum). IgG antitijela se sintetišu kasnije i opstaju dugo vremena.
RN se koristi za tipizaciju virusa; za dijagnostiku specifičnu za grupu, na primjer, adenovirusne infekcije, reakcija fiksacije komplementa(RSK). Najčešći su reakcija inhibicije hemaglutinacije(RTGA), RSK, RIF, pasivne reakcije I reverzna pasivna hemaglutinacija(RPGA, ROPGA), razne verzije ELISA-e, koja je skoro univerzalno zamijenila RIA, koja je jednaka po osjetljivosti.
RTGA koristi se za dijagnosticiranje bolesti uzrokovanih hemaglutinirajućim virusima. Zasniva se na vezivanju dodanog standardnog virusa za pacijentov serum antitijelima. Indikator reakcije su crvena krvna zrnca koja su aglutinirana virusom (formiranje karakterističnog "kišobrana") u nedostatku specifičnih antitijela i talože se na dno, neaglutinirana, ako su prisutna.
RSK je jedna od tradicionalnih seroloških reakcija i koristi se za dijagnosticiranje mnogih virusnih infekcija. U reakciji učestvuju dva sistema: antitijela iz seruma pacijenta + standardni virus i crvena krvna zrnca ovaca + antitijela na njih, kao i titrirani komplement. Ako se antitijela i virus poklapaju, ovaj kompleks veže komplement i ne dolazi do lize crvenih krvnih stanica ovaca (pozitivna reakcija). Sa negativnim RSC, komplement potiče lizu eritrocita. Nedostatak metode je njena nedovoljno visoka osjetljivost i teškoća standardizacije reagensa.
Da bi se uzela u obzir značaj RSC, kao i RTGA, potrebno je titrirati uparene serume, odnosno uzeti na početku bolesti iu periodu rekonvalescencije.
RPGA– aglutinacija eritrocita (ili polistirenskih kuglica) senzibiliziranih virusnim antigenima u prisustvu antitijela. Bilo koji virus se može adsorbirati na eritrocitima, bez obzira na prisustvo ili odsustvo hemaglutinirajuće aktivnosti. Zbog prisustva nespecifičnih reakcija, serumi se testiraju u razrjeđenju od 1:10 ili više.
RNGA– aglutinacija crvenih krvnih zrnaca senzibiliziranih specifičnim antitijelima u prisustvu virusnih antigena. ROPHA je postala najrasprostranjenija u detekciji HBs antigena i kod pacijenata i kod davalaca krvi.
IF metod kao i ELISA, koji se koristi za određivanje antitijela u serumu. ELISA postaje sve važnija i rasprostranjenija u dijagnostičke svrhe. Virusni antigen se adsorbuje na čvrstu fazu (dno jažica polistirenskih tableta ili polistirenskih kuglica). Kada se dodaju odgovarajuća antitijela prisutna u serumu, ona se vezuju za sorbirane antigene. Prisustvo željenih antitijela se otkriva korištenjem anti-antitijela (na primjer, ljudskih) konjugiranih sa enzimom (peroksidazom). Dodavanje supstrata i reakcija supstrat-enzim daju boju. ELISA se također može koristiti za određivanje antigena. U ovom slučaju, antitijela se adsorbiraju na čvrstu fazu.
Monoklonska antitela. Veliki napredak u dijagnostici virusnih infekcija postignut je u poslednjoj deceniji, kada je razvojem istraživanja genetskog inženjeringa razvijen sistem za proizvodnju monoklonskih antitela. Tako je naglo povećana specifičnost i osjetljivost dijagnostičkih metoda za određivanje virusnih antigena. Uska specifičnost monoklona, koji predstavljaju mali dio virusnih proteina koji možda nisu prisutni u kliničkom materijalu, uspješno je prevladana upotrebom nekoliko monoklonskih antitijela na različite virusne determinante.
Bazira se na određivanju antivirusnih antitijela u krvi pacijenta u serološkim reakcijama pomoću specifičnih virusnih antigena - dijagnostikuma ili posebnih test sistema. Serološke reakcije na virusne infekcije izvode se u tečnom mediju (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), u gelu (RPG, RRG, RVIEF) ili na čvrstofaznom nosaču (npr. na zidovima bunar od polistirenske ploče sa jednom od komponenti imunog odgovora - antigenom ili antitijelom). Takve metode čvrste faze poznate su kao ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Često se, zbog prisustva prirodnih antivirusnih antitijela u krvi većine zdravih ljudi, serološka dijagnoza virusnih infekcija zasniva na studiji. upareni serumi, uzimati na početku i na vrhuncu bolesti ili u periodu rekonvalescencije radi utvrđivanja porasta titra antitijela. Povećanje titra antitijela od četiri puta ili više smatra se dijagnostički značajnim.
Povećanje osetljivosti seroloških metoda postiže se adsorpcijom antigena ili antitela na eritrocite (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), obeležavanjem enzimima (ELISA), radioaktivnim izotopima (RIA, RPG) ili fluorohromima (RIF). lize eritrocita (kao indikator) se takođe koristi.sistemi) tokom interakcije antigena i antitela u prisustvu komplementa (RSK, RRG).
Reakcija fiksacije komplementa (CFR) u obliku varijante fiksacije komplementa na hladnom (preko noći na temperaturi od +4 0 C) se često koristi u virologiji za retrospektivnu dijagnozu niza virusnih infekcija i za određivanje virus-specifičnih antigena u materijalima iz pacijenata.
Reakcija radijalne hemolize (RHR) u agaroznom gelu zasniva se na fenomenu hemolize eritrocita senzibiliziranih antigenom pod utjecajem virus-specifičnih antitijela u prisustvu komplementa i koristi se za serološku dijagnostiku infekcija gripe, ARVI, rubeole, zaušnjaka i togavirusa.
Za uspostavljanje reakcije, 0,1 ml nerazrijeđenog virusnog antigena se dodaje u eritrocite ovaca (0,3 ml 10% suspenzije) i smjesa se drži 10 minuta na sobnoj temperaturi. 0,3 ml senzibiliziranih eritrocita i 0,1 ml komplementa se dodaju u 1,2% agarozu na temperaturi od 42 0 C, smjesu se izlije na staklene pločice ili u jažice polistirenskih ploča, izrezuju se rupe u očvrslom agaroznom gelu pomoću izbušiti i napuniti ispitivanim supstancama kontrolni serumi. Staklo ili paneli se prekrivaju poklopcem i stavljaju u vlažnu komoru na 16-18 sati u termostatu. Reakcija se mjeri promjerom zone hemolize oko rupa ispunjenih serumom. U kontroli nema hemolize.
Većina virusnih infekcija razvija imunološki odgovor koji se koristi za dijagnozu. Stanični odgovori se obično procjenjuju u testovima na citotoksičnost limfocita protiv infektivnih agenasa ili ciljnih stanica koje su njima inficirane, ili se utvrđuje sposobnost limfocita da reagiraju na različite antigene i mitogene.
U praktičnim laboratorijama rijetko se utvrđuje ozbiljnost ćelijskih reakcija. Metode za identifikaciju antivirusnih AT postale su sve raširenije.
RN zasniva se na supresiji citopatogenog efekta nakon miješanja virusa sa specifičnim AT. Nepoznati virus se miješa sa poznatim komercijalnim antiserumima i, nakon odgovarajuće inkubacije, dodaje se u ćelijski monosloj. Odsustvo smrti ćelije ukazuje na neslaganje između infektivnog agensa i poznatih AT.
Inhibicija hemaglutinacije pomoću RTHA koristi se za identifikaciju virusa koji mogu aglutinirati različita crvena krvna zrnca. Da biste to učinili, pomiješajte medij kulture koji sadrži patogen sa poznatim komercijalnim antiserumom i dodajte ga u ćelijsku kulturu. Nakon inkubacije utvrđuje se sposobnost kulture na hemaglutinaciju i, u njenom odsustvu, zaključuje se da virus ne odgovara antiserumu. Inhibicija citopatskog efekta interferencijom virusa Reakcija inhibicije citopatskog efekta zbog interferencije virusa koristi se za identifikaciju patogena koji interferira sa poznatim citopatogenim virusom u kulturi osjetljivih stanica. Da bi se to postiglo, komercijalni serum se dodaje u medij kulture koji sadrži virus koji se proučava (na primjer, virus rubeole ako se sumnja), inkubira se i inficira druga kultura; nakon 1-2 dana u njega se unosi poznati citopatogeni virus (na primjer, bilo koji ECHO virus). Ako je prisutan citopatogeni učinak, zaključuje se da je prva kultura bila inficirana virusom koji odgovara korištenom AT.
Direktna imunofluorescencija.
Među ostalim testovima, najviše se koristi reakcija direktne imunofluorescencije (najbrža, najosjetljivija i ponovljiva). Na primjer, za identifikaciju CMV-a citopatogenim djelovanjem potrebno je najmanje 2-3 sedmice, a kod korištenja označenog monoklonskog AT identifikacija je moguća u roku od 24 sata.Posjedujući set takvih reagensa, mogu se dodati kulturama zaraženim virusom, inkubirati , isprati nevezani reagens i ispitati pomoću fluorescentne mikroskopije (omogućava vam da otkrijete prisustvo fluorescencije inficiranih ćelija).
Imunoelektronska mikroskopija (analogno prethodnoj metodi) omogućava vam da identifikujete različite tipove virusa identifikovanih elektronskim mikroskopom (na primjer, različite vrste herpes virusa), što se ne može učiniti na osnovu morfoloških karakteristika. Umjesto antiseruma, za identifikaciju se koriste AT označeni na različite načine, ali složenost i visoka cijena metode ograničavaju njenu upotrebu.
Detekcija antivirusnih antitijela (AT) u krvnom serumu. RTGA. RSK. REEF.
Imunosorpcijske metode za otkrivanje antivirusnih antitijela.
Jednostavniji i pristupačniji pristup je otkrivanje antivirusnih antitijela (AT) u serumu. Uzorke krvi treba uzeti dva puta: odmah nakon pojave kliničkih znakova i nakon 2-3 sedmice. Izuzetno je važno ispitati tačno dva uzorka seruma. Rezultati jedne studije ne mogu se smatrati konačnim zbog nemogućnosti povezivanja pojave AT sa ovim slučajem. Moguće je da ovi AT cirkuliraju nakon prethodne infekcije. U takvoj situaciji, uloga proučavanja seruma dobijenog u periodu rekonvalescencije teško se može precijeniti. Prisustvo bolesti tokom perioda uzimanja prvog uzorka ukazuje ne manje od četiri puta povećanje titra AT otkrivenog tokom proučavanja drugog uzorka.
Dole navedene metode ne prave razliku između antitela (AT) formiranih tokom bolesti i onih koja cirkulišu nakon oporavka (trajanje ovog perioda varira za različite infekcije). Budući da je za adekvatnu dijagnozu potrebno potvrditi značajan porast titara AT u dva uzorka, prvi uzorak se pregledava u akutnoj fazi, a drugi u periodu oporavka (nakon 2-3 sedmice). Dobiveni rezultati su retrospektivne prirode i pogodniji su za provođenje epidemioloških istraživanja. RTGA otkriva AT sintetiziran protiv hemaglutinina virusa (na primjer, virusa gripe).
Metoda omogućava lako otkrivanje takvih antitijela (AT) u serumu pacijenta. RSK je glavna metoda za serodijagnostiku virusnih infekcija (među dostupnim). Reakcija otkriva IgM i IgG koji fiksiraju komplement, ali ih ne razlikuje; Za optimizaciju dobijenih rezultata, insceniranje reakcije zahtijeva određene vještine osoblja.
REEF. Ako je moguće dobiti biopsiju inficiranog tkiva i dostupnost komercijalnih AT kompleta označenih fluoresceinom, dijagnoza se može potvrditi direktnom imunofluorescencijom.
Reakcija uključuje inkubaciju tkiva koje se proučava sa AT, njihovo naknadno uklanjanje i fluorescentnu mikroskopiju uzorka. Imunosorpcijske metode za otkrivanje antivirusnih antitijela Metode imunosorpcije (na primjer, ELISA i RIA) su informativnije jer otkrivaju IgM i IgG odvojeno, što omogućava da se izvuku određeni zaključci o dinamici infektivnog procesa ili stanju rekonvalescencije. Za otkrivanje AT, poznati antigen se adsorbira na čvrstu podlogu (na primjer, na stijenke epruveta, plastične mikroploče, Petrijeve zdjelice) i dodaju se različita razrjeđenja seruma pacijenta. Nakon odgovarajuće inkubacije, uklanja se nevezani AT, dodaje se antiserum na humani Ig obilježen enzimom, ponavlja se postupak inkubacije i ispiranja nevezanog AT i dodaje se hromogeni supstrat (osjetljiv na djelovanje enzima). Budući da je promjena boje proporcionalna sadržaju specifičnih AT, njihov titar je sasvim moguće odrediti spektrofotometrijski. U dijagnostici HIV infekcije najčešće korištena metoda je imunobloting.
Detekcija virusnih antigena (AG). ELISA. Trenutno su se već pojavili komercijalni kompleti za identifikaciju hipertenzije nekih patogena, što im omogućava da se identificiraju u roku od 5-10 minuta. Da bi se otkrio AG, poznati AT se sorbiraju na čvrstoj fazi i dodaje se serum koji sadrži AG; Nakon inkubacije, nevezani AG se dekantira, sistem se ispere i dodaje se označen AT, specifičan za sorbirani AT. Ponavlja se postupak inkubacije i pranja, dodaje se hromogeni supstrat, bilježi se pozitivan rezultat kada se promijeni boja sistema. Hibridizacija DNK je visoko specifična metoda koja omogućava identifikaciju virusnog genoma nakon njegove hibridizacije sa komplementarnim molekulima DNK. Enzimi i izotopi se koriste kao markeri.
Metoda određuje sposobnost virusne DNK da se hibridizira sa označenom komplementarnom DNK; specifičnost metode je direktno proporcionalna dužini komplementarnog lanca. Metoda in situ hibridizacije nukleinskih kiselina obećava. Za uspostavljanje reakcije, označena DNK se primjenjuje na biopsije tkiva (uključujući one fiksirane u formalinu ili ugrađene u parafinske blokove) i interakcija s komplementarnom DNK se snima. Metoda se koristi za otkrivanje herpes simplex virusa, humanog papiloma, Epstein-Barr, itd.
PCR. Metoda značajno povećava osjetljivost metode hibridizacije, povećavajući sadržaj virusne DNK u materijalu dobivenom od pacijenta, a također ubrzava vrijeme za dobivanje rezultata.
2. Serološki testovi koji se koriste za dijagnosticiranje virusnih infekcija.
Serološke metode, odnosno metode za proučavanje antitela i antigena pomoću reakcija antigen-antitelo koje se određuju u krvnom serumu i drugim tečnostima, kao i u tkivima tela. Detekcija antitela protiv antigena patogena u krvnom serumu pacijenta omogućava postavljanje dijagnoze bolesti. Serološke studije se takođe koriste za identifikaciju mikrobnih antigena, različitih biološki aktivnih supstanci, krvnih grupa, tkivnih i tumorskih antigena, imunoloških kompleksa, ćelijskih receptora, itd. Kada se mikrob izoluje od pacijenta, patogen se identifikuje proučavanjem njegovih antigenskih svojstava korišćenjem imunološki dijagnostički serumi, odnosno krvni serum hiperimuniziranih životinja koji sadrži specifična antitijela. To je takozvana serološka identifikacija mikroorganizama. Osobine interakcije antitijela s antigenima su osnova dijagnostičkih reakcija u laboratorijima. In vitro reakcija između antigena i antitijela sastoji se od specifične i nespecifične faze. U specifičnoj fazi dolazi do brzog specifičnog vezivanja aktivnog centra antitela za determinantu antigena. Zatim dolazi nespecifična faza – sporija, koja se manifestuje vidljivim fizičkim pojavama, na primjer stvaranjem ljuskica (fenomen aglutinacije) ili precipitata u vidu zamućenja. Ova faza zahteva prisustvo određenih uslova (elektroliti, optimalni pH sredine). Vezivanje determinante antigena (epitopa) za aktivni centar Fab fragmenta antitijela je zbog van der Waalsovih sila, vodoničnih veza i hidrofobne interakcije. Jačina i količina antigena vezanog antitijelima zavise od afiniteta, avidnosti antitijela i njihove valencije.
3. Patogeni malarije. malarija – antroponotska zarazna bolest uzrokovana nekoliko vrsta protozoa roda Plasmodium, koju prenose komarci (Anopheles), praćena groznicom, anemijom, povećanjem jetre i slezene. Uzročnici malarije pripadaju protozoama, tipu Apicomplexa, klasi Sporozoa i vrstama Pl. vivax, Pl.malariae, Pl.falciparum, Pl.ovale.
Epidemiologija. Izvor infekcije je zaražena osoba; Nosilac je ženka komarca iz roda Anopheles. Glavni mehanizam prijenosa je prenosiv, ubodom zaražene ženke komarca.
Liječenje i prevencija. Antimalarijski lijekovi imaju različite efekte na aseksualni i seksualni stadijum plazmodija. Glavni lijekovi protiv malarije uključuju kinin, hlorokin, kinin, primakin, kvinocid, bigumal, hloridin itd. Preventivne radnje usmjereni su na izvor uzročnika (liječenje oboljelih od malarije i prenosilaca) i uništavanje nositelja uzročnika - komaraca. Razvijaju se metode vakcinacije na bazi antigena dobijenih genetskim inženjeringom.
1. Klasifikacija antibiotika prema hemijskoj strukturi, mehanizmu, spektru i vrsti djelovanja.Prema hemiji str. 1. klasa - B-laktam - penicilin, cefalosporin. Klasa 2 - makrolidi - eritromicin, azitromicin. Klasa 3 - aminoglikozidi - streptomicin, kanamicin. Klasa 4 - tetraciklini - oksitetraciklin, doksiciklin. 5 ćelija - polipeptidi - polimiksin. 6 ćelija - polien-nistatin 7cl - ansamycin - rifampicin .
2. U zavisnosti od mehanizma delovanja, postoji pet grupa antibiotika: 1.gr antibiotici koji remete sintezu ćelijskog zida - β-laktami. 2.gr antibiotici koji remete molekularnu organizaciju i sintezu ćelijskih membrana - polimiksini, polieni 3.gr antibiotici koji remete sintezu proteina - aminoglikozidi, tetraciklini, makrolidi, hloramfenikol 4.gr antibiotici - inhibitori sinteze nukleinske kiseline poremećaju DNK sinteza rifampicin - sinteza RNK 5.gr antibiotici koji potiskuju sintezu purina i aminokiselina - sulfonamida.Po spektru djelovanja antibiotici se dijele u pet grupa u zavisnosti od toga na koje mikroorganizme djeluju. Svaka od ovih grupa uključuje dvije podgrupe: antibiotike širokog i uskog spektra. Antibakterijski antibiotici čine najveću grupu lijekova.
a) antibiotici širokog spektra djeluju na predstavnike sva tri odjela bakterija - aminoglikozide, tetracikline itd.
b) Antibiotici uskog spektra su efikasni protiv malog spektra bakterija - hagfish djeluju na Gracilicutae, vankomicin djeluje na Gram-pozitivne bakterije.
2g - lijekovi protiv tuberkuloze, protiv lepre, antisifilitici.
3. Antifungalni antibiotici.
a) Amfotericin B ima širok spektar delovanja, efikasan protiv kandidijaze, blastomikoze i aspergiloze; u isto vrijeme
b) antibiotik uskog spektra - nistatin, koji djeluje na gljivice roda Candida, je
4. Antiprotozoalni i antivirusni antibiotici uključuju mali broj lijekova.
5. Antitumorski antibiotici su lijekovi koji imaju citotoksično djelovanje. Većina ih se koristi za mnoge vrste tumora – mitomicin C. Učinak antibiotika na mikroorganizme povezan je sa njihovom sposobnošću da potisnu određene biohemijske reakcije koje se dešavaju u mikrobnoj ćeliji.
2. Teorije imuniteta.1.Teorija imuniteta Mečnikov – fagocitoza igra odlučujuću ulogu u antibakterijskom imunitetu. I. I. Mechnikov je prvi koji je upalu smatrao zaštitnim, a ne destruktivnim fenomenom. Naučnik je nazvao zaštitne ćelije koje djeluju na ovaj način "proždirući ćelije". Njegove mlade francuske kolege su predložile korištenje grčkih korijena istog značenja. I. I. Mechnikov je prihvatio ovu opciju i pojavio se izraz "fagocit". 2.Teorija imuniteta Ehrlich je jedna od prvih teorija stvaranja antitela, prema kojoj ćelije imaju receptore specifične za antigen koji se oslobađaju kao antitela pod uticajem antigena. Ehrlich je antimikrobne supstance u krvi nazvao "antitijela". P. Ehrlich je shvatio da i prije kontakta sa određenim mikrobom tijelo već ima antitijela u obliku koji je nazvao „bočnim lancima“ - to su limfocitni receptori za antigene. Zatim je Ehrlich to „primijenio“ na farmakologiju: u svojoj teoriji kemoterapije pretpostavio je postojanje receptora za ljekovite tvari u tijelu. 1908. P. Ehrlich je dobio Nobelovu nagradu za humoralnu teoriju imuniteta. 3.Bezredkijeva teorija imuniteta- teorija koja objašnjava odbranu organizma od brojnih zaraznih bolesti pojavom specifične lokalne imunosti ćelije na patogene. 4. Teorije nastave imunitet je opći naziv za teorije stvaranja antitijela, prema kojima vodeću ulogu u imunološkom odgovoru ima antigen koji direktno sudjeluje kao matrica u formiranju specifične konfiguracije antideterminante ili djeluje kao faktor koji se smjerno mijenja. biosinteza imunoglobulina plazma ćelijama.
3. Uzročnik botulizma. rod Clostridium vrsta Clostridium botulinum izaziva botulizam – intoksikaciju hranom koju karakteriše oštećenje centralnog nervnog sistema. Bolest nastaje kao rezultat konzumiranja hrane koja sadrži toksine C. Botulinum - gram-pozitivne šipke sa zaobljenim krajevima. Oblikovan je kao teniski reket. Ne formira kapsulu. Mobilni. Obavezni anaerobi. Na osnovu svojih antigenskih svojstava dijele se na 7 serovara. Botulinski egzotoksin je najmoćniji od svih bioloških otrova, koji ima neurotoksično djelovanje (smrtonosna doza za ljude je oko 0,3 mcg). Mikrobiološka dijagnostika. Detekcija i identifikacija botulinum toksina u ispitivanom materijalu primjenom reakcije reverzne indirektne hemaglutinacije (RONGA), reakcije neutralizacije toksina antitoksinom (antitoksičnim serumom) na laboratorijskim životinjama. Bakteriološka metoda za otkrivanje patogena u ispitivanom materijalu. Specifična prevencija. Botulinski toksoidi A, B, E uključeni su u seksanatoksin, koji se koristi prema indikacijama. Za hitnu pasivnu profilaksu moguća je upotreba anti-botulinum antitoksičnih seruma Tretman. Koriste se antitoksični antibotulinum heterologni serumi i homologni imunoglobulini.
Uzgoj. Na krvnom agaru formira male prozirne kolonije okružene zonom hemolize. Otpor. Spore C. botulinum imaju vrlo visoku otpornost na visoke temperature.
Epidemiologija. Iz tla bacil botulinuma ulazi u prehrambene proizvode, gdje se razmnožava i oslobađa egzotoksin. Put prenošenja infekcije je hrana. Najčešći faktor u prenošenju infekcije je konzervirana hrana (pečurke, povrće, meso, riba). Bolest se ne prenosi sa osobe na osobu. Patogeneza. Botulinum toksin ulazi u probavni trakt s hranom. Otporan na djelovanje probavnih enzima, toksin se apsorbira kroz crijevni zid u krv i uzrokuje dugotrajnu toksinemiju. Toksin se veže za nervne ćelije i blokira prijenos impulsa kroz neuromišićne sinapse. Kao rezultat, razvija se paraliza mišića larinksa, ždrijela i respiratornih mišića, što dovodi do otežanog gutanja i disanja, a uočavaju se promjene u organima vida. Klinička slika. Period inkubacije traje od 6-24 sata do 2-6 dana. Što je period inkubacije kraći, bolest je teža. Obično bolest počinje akutno, ali tjelesna temperatura ostaje normalna. Moguće su različite varijante botulizma - s prevladavanjem simptoma oštećenja probavnog trakta, oštećenja vida ili respiratorne funkcije. U prvom slučaju bolest počinje pojavom suvih usta, mučnine, povraćanja i proljeva. U drugom, prve manifestacije bolesti povezane su s oštećenjem vida (pacijent se žali na "maglu" pred očima i dvostruki vid). Kao posljedica paralize laringealnih mišića pojavljuje se promuklost, a zatim glas nestaje. Pacijenti mogu umrijeti od respiratorne paralize. Bolest se može zakomplikovati akutnom upalom pluća, toksičnim miokarditisom i sepsom. Stopa smrtnosti od botulizma je 15-30%. Imunitet. nije formirana. Antitijela koja se stvaraju tokom bolesti usmjerena su protiv specifičnog serovara.
1.Metode za određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike. 1) Metoda agar difuzije. Mikrob koji se proučava se inokulira na agar hranjivu podlogu, a zatim se dodaju antibiotici. Lijekovi se dodaju ili u posebne jažice u agaru, ili se diskovi sa antibioticima stavljaju na površinu inokulacije („metoda diska“). Rezultati se bilježe svaki drugi dan na osnovu prisustva ili odsustva mikrobnog rasta oko rupica (diskova). 2) Metode određivanja. minimalni nivo antibiotika, koji omogućava in vitro sprečavanje vidljivog rasta mikroba u hranljivoj podlozi ili potpunu sterilizaciju. A) Određivanje osjetljivosti bakterija na antibiotike metodom diska. Bakterijska kultura koja se proučava se sije na hranljivi agar ili AGV podlogu u Petrijevoj posudi B) AGV podloga: suha hranljiva riblja čorba, agar-agar, disupstituisani natrijum fosfat. C) Papirni diskovi koji sadrže određene doze različitih antibiotika stavljaju se na inokulisanu površinu pincetom na jednakoj udaljenosti jedan od drugog. Usjevi se inkubiraju na 37 °C do sljedećeg dana. Promjer zona inhibicije rasta proučavane bakterijske kulture koristi se za suđenje njene osjetljivosti na antibiotike.
D) Određivanje osetljivosti bakterija na antibiotike metodom serijskih razblaženja. odrediti minimalnu koncentraciju antibiotika koja inhibira rast test bakterijske kulture.
E) Evaluacija rezultata određivanja osjetljivosti mikroorganizama na antibiotike vrši se pomoću posebne gotove tablice, koja sadrži granične vrijednosti prečnika zona inhibicije rasta za rezistentne, srednje rezistentne i osjetljive sojeve, kao i MIC vrijednosti antibiotika za rezistentne i osjetljive sojeve. 3) Određivanje antibiotika u krvi, urinu i drugim tečnostima ljudskog organizma. Dva reda epruveta se stavljaju u stalak. U jednom od njih se pripremaju razblaženja standardnog antibiotika, u drugom se pripremaju razblaženja test tečnosti. Zatim se u svaku epruvetu dodaje suspenzija test bakterija pripremljena u Hiss mediju sa glukozom. Prilikom određivanja penicilina, tetraciklina i eritromicina u ispitivanoj tečnosti, kao test bakterija se koristi standardni soj S. aureus, a za određivanje streptomicina E. coli. Nakon inkubacije usjeva na 37 °C u trajanju od 18-20 sati, rezultati eksperimenta se bilježe po zamućenju podloge i njenom obojenju indikatorom zbog razgradnje glukoze od strane test bakterija. Koncentracija antibiotika se određuje množenjem najvećeg razblaženja test tečnosti, koja inhibira rast test bakterija, sa minimalnom koncentracijom referentnog antibiotika, koji inhibira rast istih test bakterija. Na primjer, ako je maksimalno razrjeđenje test tekućine koja inhibira rast test bakterija 1:1024, a minimalna koncentracija referentnog antibiotika koji inhibira rast iste test bakterije 0,313 μg/ml, tada je proizvod 1024 - 0,313 = 320 μg/ml je koncentracija antibiotika u 1 ml.
4) Određivanje sposobnosti S. aureus da proizvodi beta-laktamazu. U tikvicu sa 0,5 ml dnevne bujonske kulture standardnog soja stafilokoka osetljivog na penicilin, dodati 20 ml otopljenog i ohlađenog na 45°C hranljivog agara, promešati i sipati u Petrijevu posudu. Nakon što se agar stvrdne, disk koji sadrži penicilin stavlja se u centar ploče na površinu podloge. Kulture koje se proučavaju seju u petlji duž poluprečnika diska. Usjevi se inkubiraju na 37 °C do sljedećeg dana, nakon čega se bilježe rezultati ogleda. Sposobnost proučavane bakterije da proizvede beta-laktamazu procjenjuje se prisustvom rasta standardnog soja stafilokoka oko jedne ili druge test kulture (oko diska).
2. Poremećaji imunološkog sistema: primarne i sekundarne imunodeficijencije.Imunodeficijencije - to su poremećaji normalnog imunološkog statusa uzrokovani defektom u jednom ili više mehanizama imunološkog odgovora.Primarne, odnosno urođene imunodeficijencije.Poremećaji imunog sistema mogu uticati kako na glavne specifične karike u funkcionisanju imunog sistema tako i na faktore koji određuju nespecifičnu rezistenciju. Moguće su kombinovane i selektivne varijante imunoloških poremećaja. U zavisnosti od stepena i prirode poremećaja, razlikuju se humoralne, ćelijske i kombinovane imunodeficijencije.
Uzroci: duplikacija hromozoma, tačkaste mutacije, defekti enzima metabolizma nukleinskih kiselina, genetski determinisani poremećaji membrane, oštećenje genoma u embrionalnom periodu itd. Primarne imunodeficijencije se javljaju u ranim fazama postnatalnog perioda i nasleđuju se autosomno recesivno. Manifestacije– insuficijencija fagocitoze, sistem komplementa, humoralni imunitet (B-sistem), ćelijski imunitet (T-sistem). Sekundarne ili stečene imunodeficijencije Sekundarne imunodeficijencije, za razliku od primarnih, razvijaju se kod osoba s normalno funkcionirajućim imunološkim sistemom od rođenja. Nastaju pod uticajem okoline na fenotipskom nivou i uzrokovane su disfunkcijom imunog sistema kao posledica raznih bolesti ili štetnih efekata na organizam. Utječu na T- i B-imuni sistem i faktore nespecifične rezistencije, moguće su i njihove kombinacije. Sekundarne imunodeficijencije su mnogo češće od primarnih. Sekundarne imunodeficijencije podložne su imunokorekciji,
Sekundarne imunodeficijencije mogu biti:
nakon infekcija (posebno virusnih) i invazija (protozoa i helmintijaza);
za opekotine;
sa uremijom; za tumore;
s metaboličkim poremećajima i iscrpljenošću;
s disbiozom;
za teške ozljede, opsežne hirurške operacije, posebno one u opštoj anesteziji; pod zračenjem, izloženost hemikalijama;
prilikom starenja,
medicinski u vezi sa uzimanjem lekova.
Prema kliničkim struje razlikuju se: 1) kompenzirana, - povećana osjetljivost tijela na infektivne agense. 2) subkompenzirana - hroničnost infektivnih procesa.
3) dekompenzirane - generalizirane infekcije uzrokovane oportunističkim mikrobima (OPM) i malignim neoplazmama.
3. Uzročnik amebijaze. Taksonomija. Karakteristično. Mikrobiološka dijagnostika. Specifičan tretman. Amebijaza je zarazna bolest koju uzrokuje Entamoeba histolytica, praćena ulceroznim lezijama debelog crijeva; moguće stvaranje apscesa u različitim organima; javlja hronično. Protozoe, tip Sarcomastidophora, podtip Sarcodina.
Morfologija i uzgoj. Patogen postoji u dvije faze razvoja: vegetativnom i cističnom. Vegetativni stadijum ima nekoliko oblika (tkivni, krupni vegetativni, luminalni i precistični). Cista (stadij mirovanja) ima ovalni oblik i formira se od vegetativnih oblika u crijevu. Do infekcije dolazi kada ciste patogena uđu u crijevo, gdje se od njih formiraju crijevni vegetativni oblici.
Otpor. Izvan tijela, tkivni i luminalni oblici patogena brzo umiru (u roku od 30 minuta). Ciste su stabilne u okolini, zadržavaju se u izmetu i vodi na temperaturi od 20ºC mjesec dana. U hrani, povrću i voću, ciste traju nekoliko dana.
Mehanizam prenosa - fekalno-ne-oralno. Do infekcije dolazi kada se ciste unesu hranom, posebno povrćem i voćem, a rjeđe vodom, putem kućnih potrepština. Širenje cista olakšavaju muhe i žohari.
Patogeneza i klinička slika. Ciste koje ulaze u crijevo i oblici ameba koje formira lumen mogu živjeti u njemu bez izazivanja bolesti. Kada se otpor tijela smanji, amebe prodiru u crijevni zid i razmnožavaju se. Razvija se crijevna amebijaza. Ovaj proces olakšavaju neki predstavnici crijevne mikroflore. Gornji dio debelog crijeva, a ponekad i rektum su zahvaćeni stvaranjem ulkusa. Primjećuje se česta rijetka stolica. U stolici se nalaze gnojni elementi i sluz. Može doći do perforacije crijevnog zida uz razvoj gnojnog peritonitisa. Amebe sa krvotokom mogu ući u jetru, pluća i mozak - razvija se vancrevna amebijaza. Može se pojaviti amebijaza kože, koja se razvija kao rezultat sekundarnog procesa. Na koži perianalnog područja, perineuma i stražnjice nastaju erozije i blago bolni čirevi. Imunitet. Kod amebijaze imunitet je nestabilan. Liječenje i prevencija. U liječenju se koriste sljedeći lijekovi: djelovanje na amebe koje se nalaze u lumenu crijeva (derivati hidroksihinolina - kiniofon, enteroseptol, meksaform, intestopan, kao i jedinjenja arsena - aminarson, osarsol i dr.); djelovanje na tkivne oblike ameba (emetinski preparati); djeluju na luminalne oblike ameba i amebe smještene u crijevnom zidu (tetraciklini); djeluju na amebe na bilo kojoj lokalizaciji (derivati imidazola - metronidazol). Prevencija amebijaza je povezana s identifikacijom i liječenjem cističnih izlučivača i prenosilaca ameba.
Mikrobiološka dijagnostika. Glavna metoda je mikroskopski pregled stolice pacijenta, kao i sadržaja apscesa unutrašnjih organa. Razmazi se boje Lugolv rastvorom ili hematoksilinom da bi se identifikovale ciste i trofozoiti. Serološka metoda: RIGA, ELISA, RSK, itd. Najveći titar antitela detektuje se kod ekstraintestinalne amebijaze.
| " |