61. αντίδραση ανοσοφθορισμού. Μηχανισμός, εξαρτήματα, εφαρμογή. Άμεσες και έμμεσες μέθοδοι ρύθμισης.
Υπάρχουν τρεις κύριες ποικιλίες της μεθόδου: άμεση, έμμεση (Εικ. 13.10), με συμπλήρωμα. Η αντίδραση Koons είναι μια ταχεία διαγνωστική μέθοδος για την ανίχνευση μικροβιακών αντιγόνων ή την ανίχνευση αντισωμάτων.
Μέθοδος Direct RIF βασίζεται στο γεγονός ότι τα αντιγόνα ιστών ή τα μικρόβια που έχουν υποστεί αγωγή με ανοσοορούς με αντισώματα επισημασμένα με φθοριόχρωμα μπορούν να λάμπουν στις ακτίνες UV ενός φωταυγούς μικροσκοπίου.
Έμμεση μέθοδος RIF είναι η ταυτοποίηση του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος χρησιμοποιώντας ορό αντισφαιρίνης (αντισώματος) σημασμένο με φθορόχρωμα. Για να γίνει αυτό, τα επιχρίσματα από ένα εναιώρημα μικροβίων αντιμετωπίζονται με αντισώματα αντιμικροβιακού διαγνωστικού ορού κουνελιού. Στη συνέχεια, τα αντισώματα που δεν δεσμεύονται από μικροβιακά αντιγόνα ξεπλένονται και τα αντισώματα που παραμένουν στα μικρόβια ανιχνεύονται με επεξεργασία του επιχρίσματος με ορό αντισφαιρίνης (αντι-κουνελιού) επισημασμένο με φθοροχρωματικά. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένα σύνθετο μικρόβιο + αντιμικροβιακά αντισώματα κουνελιού + αντισώματα κατά κουνελιού που έχουν επισημανθεί με φθορόχρωμα. Αυτό το σύμπλεγμα παρατηρείται σε μικροσκόπιο φθορισμού, όπως στην άμεση μέθοδο.
Ως ετικέτα χρησιμοποιούνται φωτεινές βαφές φθοριοχρωμάτων (ισοθειοκυανική φλουορισκεΐνη κ.λπ.).
Υπάρχουν διάφορες τροποποιήσεις του RIF. Για ρητή διάγνωση μολυσματικών ασθενειών - για την ανίχνευση μικροβίων ή των αντιγόνων τους στο υλικό δοκιμής, χρησιμοποιείται RIF σύμφωνα με τον Koons.
Υπάρχουν δύο μέθοδοι RIF σύμφωνα με τον Koons: άμεση και έμμεση.
Άμεση στοιχεία RIF:
1) το υπό μελέτη υλικό (μια κίνηση του εντέρου που χωρίζεται από τον ρινοφάρυγγα κ.λπ.)
2) επισημασμένος ειδικός ανοσοορός που περιέχει AT-la στο επιθυμητό αντιγόνο.
3) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υποβάλλεται σε επεξεργασία με επισημασμένο αντιορό.
Εμφανίζεται μια αντίδραση AG-AT. Η φωταυγής μικροσκοπική εξέταση στην περιοχή που εντοπίζονται τα σύμπλοκα AG-AT αποκαλύπτει φθορισμό - φωταύγεια.
Έμμεσα στοιχεία RIF:
1) το υπό μελέτη υλικό.
2) ειδικός αντιορός?
3) ορός αντισφαιρίνης (AT-la έναντι ανοσοσφαιρίνης) επισημασμένος με φθορόχρωμα.
4) Ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υφίσταται πρώτα επεξεργασία με ανοσοορό προς το επιθυμητό αντιγόνο και στη συνέχεια με επισημασμένο ορό αντισφαιρίνης.
Φωτεινά σύμπλοκα AG-AT - επισημασμένα AT ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού.
Το πλεονέκτημα της έμμεσης μεθόδου είναι ότι δεν υπάρχει ανάγκη να παρασκευαστεί ένα ευρύ φάσμα φθοριζόντων ειδικών ορών και χρησιμοποιείται μόνο ένας ορός φθορισμού αντισφαιρίνης.
Απομονώνεται επίσης μια ποικιλία έμμεσων RIF 4 συστατικών, όταν εισάγεται επιπλέον συμπλήρωμα (ορός ινδικού χοιριδίου). Με μια θετική αντίδραση, σχηματίζεται ένα σύμπλοκο AG-AT - επισημαίνεται - AT-συμπλήρωμα.
Επί του παρόντος, οι ορολογικές εξετάσεις (SR) χρησιμοποιούνται ευρέως, στις οποίες εμπλέκονται επισημασμένα αντιγόνα ή αντισώματα. Αυτά περιλαμβάνουν ανοσοφθορισμό, ραδιοανοσοδοκιμασία, ενζυμική ανοσοδοκιμασία, ανοσοστύπωση, κυτταρομετρία ροής και ηλεκτρονική μικροσκοπία.
Ισχύουν:
1) για την οροδιάγνωση μολυσματικών ασθενειών, δηλ. για την ανίχνευση αντισωμάτων χρησιμοποιώντας ένα σύνολο γνωστών συζευγμένων (χημικά συνδυασμένων) αντιγόνων με διάφορες ετικέτες (ένζυμα, βαφές φθοριοχρωμάτων).
2) να προσδιοριστεί ο μικροοργανισμός ή ο ορός του χρησιμοποιώντας τυπικά επισημασμένα διαγνωστικά αντισώματα (ταχεία διάγνωση).
Οι διαγνωστικοί οροί παρασκευάζονται με ανοσοποίηση ζώων με το κατάλληλο αντιγόνο, στη συνέχεια απομονώνονται οι ανοσοσφαιρίνες και συζευγνύονται με φωτεινές βαφές (φθορόχρωμα), ένζυμα και ραδιοϊσότοπα.
Τα διαγνωστικά μονοκλωνικά αντισώματα λαμβάνονται χρησιμοποιώντας υβριδικά κύτταρα που σχηματίζονται από τη σύντηξη ενός ανοσοποιητικού Β-λεμφοκυττάρου με ένα κύτταρο μυελώματος. Τα υβριδώματα είναι ικανά να πολλαπλασιάζονται γρήγορα in vitro σε κυτταρική καλλιέργεια και να παράγουν ανοσοσφαιρίνη που είναι χαρακτηριστική του ληφθέντος Β-λεμφοκυττάρου.
Τα επισημασμένα SR δεν είναι κατώτερα από άλλα SR σε ειδικότητα και ξεπερνούν όλα τα SR ως προς την ευαισθησία τους.
αντίδραση ανοσοφθορισμού (RIF)
Ως ετικέτα χρησιμοποιούνται λαμπερές βαφές φθοριοχρωμάτων (ισοθειοκυανική φλουορεσκεΐνη κ.λπ.).
Υπάρχουν διάφορες τροποποιήσεις του RIF. Για express - διάγνωση μολυσματικών ασθενειών - για την ανίχνευση μικροβίων ή των αντιγόνων τους στο υλικό δοκιμής, χρησιμοποιείται το RIF σύμφωνα με τον Koons.
Υπάρχουν δύο μέθοδοι RIF σύμφωνα με τον Koons: άμεση και έμμεση.
Άμεση στοιχεία RIF:
1) το υπό μελέτη υλικό (κόπρανα, εκκένωση του ρινοφάρυγγα κ.λπ.)
2) επισημασμένος ειδικός ανοσοορός που περιέχει αντισώματα κατά του επιθυμητού αντιγόνου.
3) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υποβάλλεται σε επεξεργασία με επισημασμένο αντιορό.
Εμφανίζεται μια αντίδραση AG-AT. Η μικροσκοπική εξέταση με φωταύγεια στην περιοχή όπου εντοπίζονται τα σύμπλοκα AG-AT αποκαλύπτει τον φθορισμό της ετικέτας (Εικ. 34).
Συστατικά έμμεσο RIF, που προορίζεται για ρητή διάγνωση της γρίπης Α:
1) πλύσεις υλικού δοκιμής από το ρινοφάρυγγα ασθενούς με υποψία γρίπης.
2) ειδικός αντιορός με αντισώματα κατά του ιού της γρίπης Α.
3) ορός αντισφαιρίνης (ΑΤ έναντι ανοσοσφαιρίνης) επισημασμένος με φθορόχρωμα.
4) ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου.
Ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής υφίσταται πρώτα επεξεργασία με ανοσοορό προς το επιθυμητό αντιγόνο και στη συνέχεια με επισημασμένο ορό αντισφαιρίνης.
Ανοσολογικά σύμπλοκα AG-AT - επισημασμένα AT ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας μικροσκόπιο φθορισμού.
Το πλεονέκτημα της έμμεσης μεθόδου είναι ότι δεν υπάρχει ανάγκη να παρασκευαστεί ένα ευρύ φάσμα φθοριζόντων ειδικών ορών και χρησιμοποιείται μόνο ένας ορός φθορισμού αντισφαιρίνης.
Για ορολογική διάγνωση της γρίπης Α,δηλαδή για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του ιού της γρίπης Α στον ορό αίματος χρησιμοποιώντας έμμεσο RIFχρησιμοποιήστε το influenza diagnosticum (αντιγόνο του ιού της γρίπης Α). Η οροδιάγνωση των ιογενών λοιμώξεων είναι κυρίως αναδρομική και χρησιμοποιείται για την επιβεβαίωση της διάγνωσης και την επιδημιολογική ανάλυση.
Ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA): ανταγωνιστική μέθοδος (προσδιορισμός HBs-AG του ιού ηπατίτιδας Β) και έμμεση μέθοδος (ορολογική διάγνωση λοίμωξης HIV)
Ενζυμική ανοσοδοκιμασία (ELISA)
Ως ετικέτα χρησιμοποιούνται ένζυμα: υπεροξειδάση, αλκαλική φωσφατάση κ.λπ.
Ο δείκτης της αντίδρασης είναι η ικανότητα των ενζύμων να προκαλούν χρωματικές αντιδράσεις όταν εκτίθενται στο κατάλληλο υπόστρωμα. Για παράδειγμα, το υπόστρωμα για την υπεροξειδάση είναι ένα διάλυμα ορθοφαινυλοδιαμίνης (OPD) ή τετραμεθυλοβενζιδίνης (TMB).
Οι πιο ευρέως χρησιμοποιούμενες μέθοδοι ELISA στερεάς φάσης (Εικ. 35), έμμεσες και ανταγωνιστικές μέθοδοι (Εικ. 36).
Τα αποτελέσματα της ELISA μπορούν να αξιολογηθούν οπτικά και με μέτρηση της οπτικής πυκνότητας σε φασματοφωτόμετρο (αναλυτής ELISA).
Τα οφέλη του ELISA περιλαμβάνουν:
Απλότητα των μεθόδων αξιολόγησης απόκρισης.
Σταθερότητα συζυγών;
Εύκολα επιδεκτικό αυτοματισμού.
Οι ακόλουθοι τύποι ELISA δίνονται ως παραδείγματα:
Α) ανταγωνιστικού τύπου
Σχεδιασμένο για την ανίχνευση του επιφανειακού αντιγόνου του ιού της ηπατίτιδας Β (HBs Ag) στον ορό και το πλάσμα στη διάγνωση της ιογενούς ηπατίτιδας Β και τον προσδιορισμό της μεταφοράς του HBs Ag.
Συστατικά:
1) υλικό δοκιμής - ορός ή πλάσμα αίματος.
2) αντισώματα έναντι του HBs Ag που έχουν προσροφηθεί στην επιφάνεια ενός φρεατίου μικροπλάκας πολυστυρενίου.
3) συζευγμένα - μονοκλωνικά αντισώματα ποντικού στο HBs Ag επισημασμένο με υπεροξειδάση.
4) ορθοφαινυλενοδιαμίνη (OPD) - υπόστρωμα.
5) ρυθμιστικό διάλυμα φωσφορικού-αλατούχου;
6) οροί ελέγχου:
Θετικό (ορός με HBs Ag);
Αρνητικό (ορός χωρίς HBs Ag).
Πρόοδος:
2. Επώαση 1 ώρα στους 37°C.
3. Πλύσιμο φρεατίων.
4. Εισαγωγή του συζυγούς.
5. Επώαση 1 ώρα στους 37°C.
6. Πλύσιμο φρεατίων.
7. Εισαγωγή ΟΦΔ. Παρουσία HBs Ag, το διάλυμα στα φρεάτια κιτρινίζει.
8. Ο υπολογισμός του ELISA πραγματοποιείται με οπτική πυκνότητα χρησιμοποιώντας φωτόμετρο. Ο βαθμός οπτικής πυκνότητας θα είναι αντιστρόφως ανάλογος με τη συγκέντρωση των ερευνηθέντων HBs Ag.
Η αντίδραση εξελίσσεται σε τρεις φάσεις:
1. Το HBs Ag του μελετημένου ορού (πλάσμα) συνδέεται με ομόλογα αντισώματα που έχουν προσροφηθεί στην επιφάνεια του φρεατίου. Σχηματίζεται IR AG-AT. (HBs Ag - anti HBs AT).
2. Αντισώματα έναντι του HBs Ag επισημασμένα με υπεροξειδάση συνδέονται με τους εναπομείναντες ελεύθερους προσδιοριστές HBs Ag του συμπλόκου AG-AT. Σχηματίζεται ένα σύμπλεγμα επισημασμένου με AT-AG AT (anti HBs AT - HBs Ag - anti HBs AT σημασμένο με υπεροξειδάση).
3. Το OPD αλληλεπιδρά με την υπεροξειδάση του συμπλόκου AT-AG-AT και εμφανίζεται κίτρινη χρώση.
Β) έμμεσος τύπος
Είναι η κύρια δοκιμαστική αντίδραση για τη διάγνωση της λοίμωξης HIV.
Σκοπός: Ορολογική διάγνωση HIV λοίμωξης - ανίχνευση αντισωμάτων στα αντιγόνα HIV.
Συστατικά:
1) υλικό δοκιμής - ορός αίματος (AB έως AG-m HIV).
2) συνθετικά πεπτίδια που μιμούνται 2 αντιγόνα HIV: gp 120 και gp 41, προσροφημένα στην επιφάνεια ενός φρεατίου πολυστυρενίου.
3) ορός αντισφαιρίνης σημασμένος με υπεροξειδάση που λαμβάνεται με ανοσοποίηση κουνελιών με ανθρώπινες γλοβουλίνες (ΑΤ έως ΑΤ).
5) αλατούχο διάλυμα ρυθμισμένο με φωσφορικά.
6) οροί ελέγχου:
θετικός;
Αρνητικός.
Πρόοδος:
1. Εισαγωγή ορών ελέγχου και δοκιμής.
2. Επώαση 30 λεπτά στους 37°C.
3. Ξέπλυμα.
4. Εισαγωγή ορού αντισφαιρίνης σημασμένου με ένζυμα.
5. Επώαση 30 λεπτά στους 37°C.
6. Ξέπλυμα.
7. Εισαγωγή ΟΦΔ.
Η αντίδραση εξελίσσεται σε 3 φάσεις:
1. Τα αντισώματα έναντι του HIV του μελετημένου ορού συνδέονται με ομόλογα αντιγόνα (gp 120 και gp 41) και σχηματίζεται IR AG-AT (HIV AG - AT to HIV) στην επιφάνεια του ροφητή.
2. Σχηματισμός IC AG-AT-AT σημασμένου με υπεροξειδάση, αφού Τα αντισώματα του ορού που μελετήθηκε είναι αντιγόνα για τον ορό αντισφαιρίνης.
3. Το OPD αλληλεπιδρά με την υπεροξειδάση του συμπλόκου AG-AT-AT και εμφανίζεται ένας κίτρινος χρωματισμός του διαλύματος του φρεατίου. Ο βαθμός ενζυματικής δραστηριότητας είναι ευθέως ανάλογος με τη συγκέντρωση των αντισωμάτων που μελετήθηκαν.
Η μέθοδος ανοσοφθορισμού (RIF, αντίδραση ανοσοφθορισμού, αντίδραση Koons) είναι μια μέθοδος για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντιγόνων χρησιμοποιώντας αντισώματα συζευγμένα με φθορόχρωμα. Έχει υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα.
Χρησιμοποιείται για ρητή διάγνωση μολυσματικών ασθενειών (αναγνώριση του παθογόνου στο υλικό δοκιμής), καθώς και για τον προσδιορισμό αντισωμάτων και επιφανειακών υποδοχέων και δεικτών λευκοκυττάρων (ανοσοφαινοτυποποίηση) και άλλων κυττάρων.
Η ανίχνευση βακτηριακών και ιικών αντιγόνων σε μολυσματικά υλικά, ζωικούς ιστούς και κυτταρικές καλλιέργειες με τη χρήση φθοριζόντων αντισωμάτων (ορούς) χρησιμοποιείται ευρέως στη διαγνωστική πρακτική. Η παρασκευή φθοριζόντων ορών βασίζεται στην ικανότητα ορισμένων φθοριοχρωμάτων (για παράδειγμα, ισοθειοκυανικής φλουορεσκεΐνης) να συνάπτουν χημικό δεσμό με πρωτεΐνες ορού χωρίς να παραβιάζεται η ανοσολογική τους εξειδίκευση.
Υπάρχουν τρεις τύποι μεθόδων: άμεση, έμμεση, με συμπλήρωμα. Η μέθοδος άμεσης RIF βασίζεται στο γεγονός ότι τα αντιγόνα ιστών ή τα μικρόβια που έχουν υποστεί επεξεργασία με ανοσοορούς με αντισώματα επισημασμένα με φθοριόχρωμα μπορούν να λάμπουν στις ακτίνες UV ενός μικροσκοπίου φθορισμού. Τα βακτήρια σε ένα επίχρισμα, που έχουν υποστεί επεξεργασία με έναν τέτοιο φωταυγή ορό, λάμπουν κατά μήκος της περιφέρειας των κυττάρων με τη μορφή πράσινου περιγράμματος.
Η έμμεση μέθοδος RIF συνίσταται στην ταυτοποίηση του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος χρησιμοποιώντας ορό αντισφαιρίνης (αντισώματος) επισημασμένο με φθόριο. Για να γίνει αυτό, τα επιχρίσματα από ένα εναιώρημα μικροβίων αντιμετωπίζονται με αντισώματα αντιμικροβιακού διαγνωστικού ορού κουνελιού. Στη συνέχεια, τα αντισώματα που δεν δεσμεύονται από μικροβιακά αντιγόνα ξεπλένονται και τα αντισώματα που παραμένουν στα μικρόβια ανιχνεύονται με επεξεργασία του επιχρίσματος με ορό αντισφαιρίνης (αντι-κουνελιού) επισημασμένο με φθοροχρωματικά. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένα σύνθετο μικρόβιο + αντιμικροβιακά αντισώματα κουνελιού + αντισώματα κατά κουνελιού που έχουν επισημανθεί με φθορόχρωμα. Αυτό το σύμπλεγμα παρατηρείται σε μικροσκόπιο φθορισμού, όπως στην άμεση μέθοδο.
Μηχανισμός. Σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, παρασκευάζεται ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής, στερεώνεται σε φλόγα και υποβάλλεται σε επεξεργασία με άνοσο ορό κουνελιού που περιέχει αντισώματα κατά των παθογόνων αντιγόνων. Για να σχηματιστεί ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος, το παρασκεύασμα τοποθετείται σε έναν υγρό θάλαμο και επωάζεται στους 37 °C για 15 λεπτά, μετά από τα οποία πλένεται καλά με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου για να απομακρυνθούν τα αντισώματα που δεν είναι δεσμευμένα στο αντιγόνο. Στη συνέχεια, ένας ορός φθορίζουσας αντισφαιρίνης έναντι σφαιρινών κουνελιού εφαρμόζεται στο παρασκεύασμα, επωάζεται για 15 λεπτά στους 37 ° C και στη συνέχεια το παρασκεύασμα πλένεται καλά με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου. Ως αποτέλεσμα της δέσμευσης ορού φθορίζουσας αντισφαιρίνης με ειδικά αντισώματα στερεωμένα στο αντιγόνο, σχηματίζονται φωτεινά σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος, τα οποία ανιχνεύονται με μικροσκόπιο φθορισμού.
4. Στον αέρα της παιδικής κρεβατοκάμαρας του βρεφονηπιακού σταθμού βρέθηκαν 75 mt/m3 στρεπτόκοκκου, 12 mt/m3 σταφυλόκοκκου και 1 mt/m3 βακτηρίων φυματίωσης. Κάντε μια υγειονομική-βακτηριολογική εκτίμηση του αέρα και σκιαγραφήστε ένα σχέδιο για την υγιεινή του.
ΕΙΣΙΤΗΡΙΟ ΕΞΕΤΑΣΕΩΝ Αρ. _54
Ρετροϊοί. Η HIV λοίμωξη (AIDS) και τα παθογόνα της.
Ο ιός της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας προκαλεί μόλυνση από τον ιό HIV, με αποτέλεσμα την ανάπτυξη συνδρόμου επίκτητης ανοσολογικής ανεπάρκειας.
Ο αιτιολογικός παράγοντας της HIV λοίμωξης είναι ένας λεμφοτρόπος ιός που ανήκει στην οικογένεια Retroviridae του γένους Lentivirus.
Μορφολογικές ιδιότητες: Ιός που περιέχει RNA. Σωματίδιο ιού σφαιρικού σχήματος Το κέλυφος αποτελείται από ένα διπλό στρώμα λιπιδίων που διεισδύουν από γλυκοπρωτεΐνες. Το λιπιδικό περίβλημα προέρχεται από την πλασματική μεμβράνη του κυττάρου ξενιστή στο οποίο αναπαράγεται ο ιός. Το μόριο της γλυκοπρωτεΐνης αποτελείται από 2 υπομονάδες που βρίσκονται στην επιφάνεια του ιού και διαπερνούν το λιπιδικό περίβλημά του.
Ο πυρήνας του ιού έχει σχήμα κώνου και αποτελείται από πρωτεΐνες καψιδίου, έναν αριθμό πρωτεϊνών μήτρας και πρωτεΐνες πρωτεάσης. Το γονιδίωμα σχηματίζει δύο κλώνους RNA· για να πραγματοποιηθεί η διαδικασία αναπαραγωγής, ο HIV έχει αντίστροφη μεταγραφάση ή αναστροφάση.
Το γονιδίωμα του ιού αποτελείται από 3 κύρια δομικά γονίδια και 7 ρυθμιστικά και λειτουργικά γονίδια. Τα λειτουργικά γονίδια εκτελούν ρυθμιστικές λειτουργίες και διασφαλίζουν την εφαρμογή των διαδικασιών αναπαραγωγής και τη συμμετοχή του ιού στη μολυσματική διαδικασία.
Ο ιός επηρεάζει κυρίως τα Τ- και Β-λεμφοκύτταρα, ορισμένα κύτταρα της μονοκυτταρικής σειράς (μακροφάγα, λευκοκύτταρα), κύτταρα του νευρικού συστήματος.
Πολιτιστικές ιδιότητες: σε κυτταρική καλλιέργεια Τ-λεμφοκυττάρων και ανθρώπινων μονοκυττάρων (παρουσία IL-2).
Αντιγονική δομή: 2 τύποι ιού - HIV-1 και HIV-2 Ο HIV-1, έχει περισσότερους από 10 γονότυπους (υποτύπους): A, B, C, D, E, F ..., που διαφέρουν στη σύνθεση αμινοξέων του πρωτεΐνες.
Ο HIV-1 χωρίζεται σε 3 ομάδες: M, N, O. Τα περισσότερα στελέχη ανήκουν στην ομάδα M, στην οποία διακρίνονται 10 υποτύποι: A, B, C, D, F-l, F-2, G, H, I, Κ. Αντοχή : Ευαίσθητο σε φυσικούς και χημικούς παράγοντες, φθείρεται όταν θερμαίνεται. Ο ιός μπορεί να επιμείνει για μεγάλο χρονικό διάστημα σε αποξηραμένη κατάσταση, σε αποξηραμένο αίμα.
Παράγοντες παθογένειας, παθογένεση: Ο ιός προσκολλάται στο λεμφοκύτταρο, διεισδύει στο κύτταρο και αναπαράγεται στο λεμφοκύτταρο. Ως αποτέλεσμα της αναπαραγωγής του HIV σε ένα λεμφοκύτταρο, τα τελευταία καταστρέφονται ή χάνουν τις λειτουργικές τους ιδιότητες. Ως αποτέλεσμα της αναπαραγωγής του ιού σε διάφορα κύτταρα, συσσωρεύεται σε όργανα και ιστούς και βρίσκεται στο αίμα, τη λέμφο, το σάλιο, τα ούρα, τον ιδρώτα και τα κόπρανα.
Στη μόλυνση με HIV, ο αριθμός των Τ-4 λεμφοκυττάρων μειώνεται, η λειτουργία των Β-λεμφοκυττάρων είναι εξασθενημένη, η λειτουργία του φυσικού φονέα καταστέλλεται και η απόκριση στα αντιγόνα μειώνεται και η παραγωγή συμπληρώματος, λεμφοκινών και άλλων παραγόντων που ρυθμίζουν τις λειτουργίες του ανοσοποιητικού συστήματος (IL) είναι διαταραχθεί, με αποτέλεσμα δυσλειτουργία του ανοσοποιητικού συστήματος.
Κλινική: επηρεάζεται το αναπνευστικό σύστημα (πνευμονία, βρογχίτιδα). ΚΝΣ (αποστήματα, μηνιγγίτιδα); Εμφανίζονται γαστρεντερικές οδούς (διάρροια), κακοήθη νεοπλάσματα (όγκοι εσωτερικών οργάνων).
Η HIV λοίμωξη προχωρά σε διάφορα στάδια: 1) περίοδος επώασης, κατά μέσο όρο 2-4 εβδομάδες. 2) το στάδιο των πρωτογενών εκδηλώσεων, που χαρακτηρίζεται αρχικά από οξύ πυρετό, διάρροια. το στάδιο τελειώνει με μια ασυμπτωματική φάση και την επιμονή του ιού, την αποκατάσταση της ευημερίας, ωστόσο, ανιχνεύονται αντισώματα HIV στο αίμα, 3) το στάδιο των δευτερογενών ασθενειών, που εκδηλώνονται με βλάβη στο αναπνευστικό, νευρικό σύστημα. Η μόλυνση από τον ιό HIV τελειώνει με το τελευταίο, 4ο τερματικό στάδιο - AIDS.
Μικροβιολογική διάγνωση.
Οι ιολογικές και ορολογικές μελέτες περιλαμβάνουν μεθόδους για τον προσδιορισμό αντιγόνων και αντισωμάτων HIV. Για αυτό, χρησιμοποιούνται ELISA, IB και PCR. Οι οροί των ασθενών με HIV-1 και HIV-2 περιέχουν αντισώματα σε όλες τις ιικές πρωτεΐνες. Ωστόσο, για να επιβεβαιωθεί η διάγνωση, προσδιορίζονται τα αντισώματα στις πρωτεΐνες gp41, gpl20, gpl60, p24 στον HIV-1 και αντισώματα στις πρωτεΐνες gp36, gpl05, gpl40 στον HIV-2. Τα αντισώματα HIV εμφανίζονται 2-4 εβδομάδες μετά τη μόλυνση και είναι ανιχνεύσιμα σε όλα τα στάδια του HIV.
Μέθοδος ανίχνευσης του ιού στο αίμα, τα λεμφοκύτταρα. Ωστόσο, με οποιοδήποτε θετικό δείγμα, τίθεται μια αντίδραση ΙΒ για να επιβεβαιωθούν τα αποτελέσματα. Χρησιμοποιείται επίσης η PCR, η οποία μπορεί να ανιχνεύσει τη μόλυνση από τον ιό HIV στην περίοδο επώασης και στην πρώιμη κλινική περίοδο, αλλά η ευαισθησία της είναι ελαφρώς χαμηλότερη από αυτή της ELISA.
Οι κλινικές και ορολογικές διαγνώσεις επιβεβαιώνονται με ανοσολογικές μελέτες εάν υποδεικνύουν την παρουσία ανοσοανεπάρκειας στον εξεταζόμενο ασθενή.
Διαγνωστικό σύστημα δοκιμών ELISA για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του HIV - περιλαμβάνει ιικό αντιγόνο προσροφημένο σε φορέα, αντισώματα κατά του ανθρώπινου Ig. Χρησιμοποιείται για την οροδιάγνωση του AIDS.
Θεραπεία: χρήση αναστολέων ανάστροφης μεταγραφάσης που δρουν σε ενεργοποιημένα κύτταρα. Τα φάρμακα είναι παράγωγα θυμιδίνης - αζιδοθυμιδίνη και φωσφαζίδη.
Πρόληψη. Συγκεκριμένα - όχι.
Επίδραση φυσικών και χημικών παραγόντων στα μικρόβια. Η μετάλλαξη και η σημασία της για την πρακτική ιατρική. Παραδείγματα. Η αξία της οικολογίας.
Δράση χημικών και βιολογικών παραγόντων.
Δράση χημικών
Οι χημικές ουσίες μπορούν να αναστείλουν ή να αναστείλουν πλήρως την ανάπτυξη μικροοργανισμών. Εάν μια χημική ουσία αναστέλλει την ανάπτυξη βακτηρίων, αλλά μετά την απομάκρυνσή τους, η ανάπτυξή τους ξαναρχίζει.
Τα αντιμικροβιακά μέσα, λαμβάνοντας υπόψη τη χημική δομή και τον μηχανισμό της βακτηριοκτόνου δράσης τους στα βακτήρια, μπορούν να χωριστούν στις ακόλουθες ομάδες: οξειδωτικά μέσα, αλογόνα, μεταλλικές ενώσεις, οξέα και αλκάλια, επιφανειοδραστικά, αλκοόλες, βαφές, φαινόλη και παράγωγα φορμαλδεΰδης.
Οξειδωτικά. Αυτή η ομάδα περιλαμβάνει το υπεροξείδιο του υδρογόνου και το υπερμαγγανικό κάλιο.
Αλογόνα. Χλώριο, ιώδιο και τα παρασκευάσματά τους: χλωρίνη, χλωραμίνη Β, παντοσίδη, αλκοόλη διάλυμα ιωδίου 5%, ιωδινόλη, ιωδοφόρμιο.
Ενώσεις βαρέων μετάλλων (άλατα μολύβδου, χαλκού, ψευδαργύρου, αργύρου, υδραργύρου· οργανομεταλλικές ενώσεις αργύρου: προταργκόλη, κολαργκόλη). Αυτές οι ενώσεις είναι σε θέση να έχουν αντιμικροβιακές και ποικίλες τοπικές επιδράσεις στους ιστούς του μακροοργανισμού.
Οξέα και αλκάλια. Η βακτηριοκτόνος δράση των οξέων και των αλκαλίων βασίζεται στην αφυδάτωση των μικροοργανισμών, τις αλλαγές στο pH του θρεπτικού μέσου, την υδρόλυση κολλοειδών συστημάτων και το σχηματισμό όξινων ή αλκαλικών αλβουμινικών αλάτων.
Οι βαφές έχουν ιδιότητες να αναστέλλουν την ανάπτυξη βακτηρίων. Ενεργούν αργά αλλά πιο επιλεκτικά.
Η φορμαλδεΰδη είναι ένα άχρωμο αέριο. Στην πράξη, χρησιμοποιείται υδατικό διάλυμα φορμαλδεΰδης 40% (φορμαλίνη). Η φορμαλδεΰδη αέρια και διαλυμένη στο νερό έχει επιζήμια επίδραση στις φυτικές και σποριακές μορφές βακτηρίων.
Δράση βιολογικών παραγόντων
Η δράση των βιολογικών παραγόντων εκδηλώνεται κυρίως στον ανταγωνισμό των μικροβίων, όταν τα απόβλητα ορισμένων μικροβίων προκαλούν το θάνατο άλλων.
Αντιβιοτικά (από το ελληνικό anti - κατά, bios - life) - βιολογικά δραστικές ουσίες που σχηματίζονται κατά τη διάρκεια της ζωής μυκήτων, βακτηρίων, ζώων, φυτών και δημιουργούνται συνθετικά, ικανά να καταστέλλουν και να σκοτώνουν επιλεκτικά μικροοργανισμούς, μύκητες, ρικέτσιες, μεγάλους ιούς, πρωτόζωα και μεμονωμένα ελμινθικά.
3. Η αντίδραση της βιολογικής δράσης των βακτηριακών ενζύμων στους ρευματισμούς, διαγνωστική και πρακτική σημασία, ο προστατευτικός ρόλος των αντισωμάτων έναντι των ενζύμων στην επίκτητη ανοσία (προσδιορισμός αντιυαλουρονιδάσης και αντι Ο-στρεπτολυσίνης).
Οι ρευματισμοί είναι μια κοινή μολυσματική-αλλεργική νόσος που προσβάλλει τον συνδετικό ιστό, κυρίως το καρδιαγγειακό σύστημα, καθώς και τις αρθρώσεις, τα εσωτερικά όργανα και το κεντρικό νευρικό σύστημα. Πιστεύεται ότι η αιτία της ανάπτυξης των ρευματισμών είναι η ενεργοποίηση παθογόνων μικροοργανισμών, κυρίως του β-αιμολυτικού στρεπτόκοκκου της ομάδας Α. Είναι αυτός που παίζει τον κύριο ρόλο στην αιτιολογία και την παθογένεση της ρευματικής νόσου. Πρώτον, η ασθένεια αναπτύσσεται στο φόντο μιας στρεπτοκοκκικής λοίμωξης. Δεύτερον, μεγάλος αριθμός αντισωμάτων σε μικροοργανισμούς αυτής της ομάδας βρίσκεται στο αίμα των ασθενών. Τρίτον, η πρόληψη της νόσου πραγματοποιείται με επιτυχία με αντιβακτηριακά φάρμακα.
Στη ρευματοειδή αρθρίτιδα, οι αρθρικοί υμένες, για άγνωστους λόγους, εκκρίνουν μεγάλες ποσότητες του ενζύμου αφυδρογονάση της γλυκόζης-6-φωσφορικής, το οποίο επίσης διασπά τους δισουλφιδικούς δεσμούς στην κυτταρική μεμβράνη. Σε αυτή την περίπτωση, υπάρχει «διαρροή» πρωτεολυτικών ενζύμων από κυτταρικά λυσοσώματα, τα οποία προκαλούν βλάβες στα κοντινά οστά και τους χόνδρους. Το σώμα ανταποκρίνεται παράγοντας κυτοκίνες, οι οποίες περιλαμβάνουν επίσης παράγοντα νέκρωσης όγκου α TNF-α. Καταρράκτες αντιδράσεων στα κύτταρα, οι οποίες πυροδοτούνται από κυτοκίνες, επιδεινώνουν περαιτέρω τα συμπτώματα της νόσου. Η χρόνια ρευματοειδής φλεγμονή που σχετίζεται με τον TNF-α πολύ συχνά προκαλεί βλάβη του χόνδρου και των αρθρώσεων που οδηγεί σε σωματική αναπηρία.
Αυτή η μέθοδος χρησιμοποιεί το φαινόμενο της φωταύγειας.
Η ουσία του φαινομένου της φωταύγειας έγκειται στο γεγονός ότι όταν διάφοροι τύποι ενέργειας (φως, ηλεκτρική κ.λπ.) απορροφώνται από τα μόρια ορισμένων ουσιών, τα άτομά τους περνούν σε διεγερμένη κατάσταση και στη συνέχεια επιστρέφουν στην αρχική τους κατάσταση. , εκπέμπουν την απορροφούμενη ενέργεια με τη μορφή φωτεινής ακτινοβολίας.
Στο RIF, η φωταύγεια εκδηλώνεται με τη μορφή φθορισμού - αυτή είναι μια λάμψη που εμφανίζεται τη στιγμή της ακτινοβολίας με συναρπαστικό φως και σταματά αμέσως μετά το τέλος της.
Πολλές ουσίες και ζωντανοί μικροοργανισμοί έχουν τον δικό τους φθορισμό (τον λεγόμενο πρωτογενή), αλλά η έντασή του είναι πολύ χαμηλή. Ουσίες που έχουν έντονο πρωτογενή φθορισμό και χρησιμοποιούνται για να προσδώσουν ιδιότητες φθορισμού σε μη φθορίζουσες ουσίες ονομάζονται φθοροχρωματικά. Ένας τέτοιος επαγόμενος φθορισμός ονομάζεται δευτερεύων.
Για τη διέγερση του φθορισμού στη μικροσκοπία φθορισμού, χρησιμοποιείται συχνότερα το υπεριώδες ή μπλε-ιώδες τμήμα του φάσματος (μήκος κύματος 300-460 nm). Για τους σκοπούς αυτούς, τα εργαστήρια διαθέτουν μικροσκόπια φωταύγειας διαφόρων μοντέλων - ML-1-ML-4, "Lumam".
Στην ιολογική πρακτική, χρησιμοποιούνται δύο κύριες μέθοδοι μικροσκοπίας φθορισμού: η φθορίωση και τα φθορίζοντα αντισώματα (ή RIF).
Φθοριοχρωμοποίηση- αυτή είναι η επεξεργασία των παρασκευασμάτων με φθορόχρωμο προκειμένου να αυξηθεί η αντοχή και η αντίθεση της φωταύγειας τους. Μεγαλύτερο ενδιαφέρον παρουσιάζει το πορτοκαλί φθοριοχρωματικής ακριδίνης, το οποίο προκαλεί πολυχρωματικό φθορισμό των νουκλεϊκών οξέων. Έτσι, όταν τα παρασκευάσματα υποβάλλονται σε επεξεργασία με αυτό το φθορόχρωμο, το δεοξυριβονουκλεϊκό οξύ φθορίζει έντονα σε πράσινο χρώμα και το ριβονουκλεϊκό οξύ - ρουμπινί.
Η μέθοδος RIF συνίσταται στο γεγονός ότι τα αντισώματα που συνδέονται με ένα φθοριόχρωμα διατηρούν την ικανότητα να εισέρχονται σε μια συγκεκριμένη σχέση με ένα ομόλογο αντιγόνο. Το προκύπτον σύμπλεγμα αντιγόνου + αντισώματος, λόγω της παρουσίας φθοριοχρωμίου σε αυτό, ανιχνεύεται σε μικροσκόπιο φθορισμού με μια χαρακτηριστική λάμψη.
Για τη λήψη αντισωμάτων, χρησιμοποιούνται υπεράνοσοι οροί υψηλής ενεργότητας, από τους οποίους απομονώνονται αντισώματα και επισημαίνονται με φθορόχρωμο. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα φθοροχρώματα είναι η ισοθειοκυανική FITC-φθοροσκεΐνη (πράσινο φως) και η σουλφοχλωρική ροδαμίνη PCX (κόκκινο φως). Ένα αντίσωμα επισημασμένο με φθορόχρωμο ονομάζεται συζυγές.
Ο τρόπος παρασκευής και χρώσης των παρασκευασμάτων έχει ως εξής:
- ετοιμάστε επιχρίσματα, εκτυπώσεις από όργανα ή σε καλύμματα - μια μολυσμένη κυτταρική καλλιέργεια σε γυάλινες πλάκες. Μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν ιστοτομές.
- Τα παρασκευάσματα ξηραίνονται στον αέρα και στερεώνονται σε παγωμένη ακετόνη σε θερμοκρασία δωματίου ή στους μείον 15 °C (από 15 λεπτά έως 4-16 ώρες).
- χρωματίζονται με άμεση ή έμμεση μέθοδο. κρατήστε αρχεία σε μικροσκόπιο φθορισμού ανάλογα με την ένταση της λάμψης, που υπολογίζεται σε σταυρούς.
Παράλληλα, ετοιμάστε και χρωματίστε σκευάσματα από υγιές ζώο - μάρτυρας.
Υπάρχουν δύο κύριες μέθοδοι εφαρμογής αντισωμάτων φθορισμού: άμεση και έμμεση.
Άμεση μέθοδος (μονό βήμα). Ένα συζυγές (ορός φθορισμού στον ύποπτο ιό) εφαρμόζεται στο σταθεροποιημένο παρασκεύασμα, επωάζεται για 30 λεπτά σε θερμοκρασία 37 ° C σε έναν υγρό θάλαμο. Στη συνέχεια το φάρμακο πλένεται από το μη δεσμευμένο σύζευγμα με φυσιολογικό ορό (ρΗ 7,2 - 7,5), ξηραίνεται στον αέρα, εφαρμόζεται μη φθορίζον έλαιο και εξετάζεται υπό μικροσκόπιο.
Η άμεση μέθοδος επιτρέπει την ανίχνευση και ταυτοποίηση του αντιγόνου. Για να γίνει αυτό, πρέπει να έχετε έναν ορό φθορισμού για κάθε ιό.
Έμμεση μέθοδος (δύο σταδίων). Ένας μη επισημασμένος ορός που περιέχει αντισώματα για τον ύποπτο ιό εφαρμόζεται στο σταθεροποιημένο παρασκεύασμα, επωάζεται για 30 λεπτά στους 37 °C, τα μη δεσμευμένα αντισώματα ξεπλένονται. Εφαρμόζεται στο παρασκεύασμα ένας φθορίζων ορός κατά του είδους, που αντιστοιχεί στον τύπο του ζώου που παράγει ομόλογα αντιιικά αντισώματα, και επωάζεται για 30 λεπτά στους 37 °C. Στη συνέχεια, το φάρμακο πλένεται από μη δεσμευμένα επισημασμένα αντισώματα, ξηραίνεται στον αέρα, εφαρμόζεται μη φθορίζον έλαιο και εξετάζεται κάτω από ένα μικροσκόπιο φθορισμού.
Οι οροί κατά των ειδών λαμβάνονται με ανοσοποίηση ζώων με σφαιρίνες εκείνων των ειδών που χρησιμεύουν ως παραγωγοί αντι-ιικών αντισωμάτων. Έτσι, εάν ελήφθησαν αντιιικά αντισώματα σε κουνέλια, τότε χρησιμοποιείται ορός φθορισμού κατά του κουνελιού.
Η έμμεση μέθοδος επιτρέπει όχι μόνο την ανίχνευση και αναγνώριση του αντιγόνου, αλλά και τον εντοπισμό και τον προσδιορισμό του τίτλου του αντισώματος. Επιπλέον, αυτή η μέθοδος μπορεί να ανιχνεύσει αντιγόνα διαφόρων ιών με έναν μόνο επισημασμένο ορό, αφού βασίζεται στη χρήση ορών κατά των ειδών. Συχνότερα χρησιμοποιούνται οροί κατά κουνελιού, βοοειδών, κατά αλόγων και ορών κατά των σφαιρινών ινδικού χοιριδίου.
Έχουν αναπτυχθεί αρκετές τροποποιήσεις της έμμεσης μεθόδου. Η μέθοδος που χρησιμοποιεί συμπλήρωμα αξίζει τη μεγαλύτερη προσοχή. Η μέθοδος συνίσταται στην εφαρμογή αδρανοποιημένου μη φθορίζοντος ειδικού ορού και συμπληρώματος ινδικού χοιριδίου στο σταθερό παρασκεύασμα, διατήρησή του για 30 λεπτά στους 37 °C, πλύση του και ανίχνευση συμπλόκου αντιγόνου + αντισώματος + συμπληρώματος, με εφαρμογή φθορίζοντος αντισυμπληρωματικού ορού , διατηρώντας το για 30 λεπτά στους 37 °C, πλύθηκε, στέγνωσε στον αέρα και εξετάστηκε σε μικροσκόπιο φθορισμού.
Πλεονεκτήματα RIF: υψηλή ειδικότητα και ευαισθησία. ευκολία τεχνικής ρύθμισης. απαιτεί έναν ελάχιστο αριθμό εξαρτημάτων. Πρόκειται για μια εξπρές διαγνωστική μέθοδο, αφού μπορείτε να λάβετε απάντηση μέσα σε λίγες ώρες. Τα μειονεκτήματα περιλαμβάνουν την υποκειμενικότητα στην εκτίμηση της έντασης της φωταύγειας και, δυστυχώς, μερικές φορές οι οροί φθορισμού είναι κακής ποιότητας. Επί του παρόντος, το RIF χρησιμοποιείται ευρέως στη διάγνωση ιογενών ασθενειών των ζώων.
Εάν βρείτε κάποιο σφάλμα, επισημάνετε ένα κομμάτι κειμένου και κάντε κλικ Ctrl+Enter.
№ 35 Αντίδραση ανοσοφθορισμού. Μηχανισμός, εξαρτήματα, εφαρμογή.
Η μέθοδος ανοσοφθορισμού (RIF, αντίδραση ανοσοφθορισμού, αντίδραση Koons) είναι μια μέθοδος για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντιγόνων χρησιμοποιώντας αντισώματα συζευγμένα με φθορόχρωμα. Έχει υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα.
Χρησιμοποιείται για ρητή διάγνωση μολυσματικών ασθενειών (αναγνώριση του παθογόνου στο υλικό δοκιμής), καθώς και για τον προσδιορισμό αντισωμάτων και επιφανειακών υποδοχέων και δεικτών λευκοκυττάρων (ανοσοφαινοτυποποίηση) και άλλων κυττάρων.
Η ανίχνευση βακτηριακών και ιικών αντιγόνων σε μολυσματικά υλικά, ζωικούς ιστούς και κυτταρικές καλλιέργειες με τη χρήση φθοριζόντων αντισωμάτων (ορούς) χρησιμοποιείται ευρέως στη διαγνωστική πρακτική. Η παρασκευή φθοριζόντων ορών βασίζεται στην ικανότητα ορισμένων φθοριοχρωμάτων (για παράδειγμα, ισοθειοκυανικής φλουορεσκεΐνης) να συνάπτουν χημικό δεσμό με πρωτεΐνες ορού,χωρίς να παραβιάζεται η ανοσολογική τους ειδικότητα.
Υπάρχουν τρεις τύποι μεθόδων: άμεση, έμμεση, με συμπλήρωμα. Μέθοδος Direct RIFβασίζεται στο γεγονός ότι τα αντιγόνα ιστών ή τα μικρόβια που έχουν υποστεί αγωγή με ανοσοορούς με αντισώματα επισημασμένα με φθοριόχρωμα μπορούν να λάμπουν στις ακτίνες UV ενός μικροσκοπίου φθορισμού. Τα βακτήρια σε ένα επίχρισμα, που έχουν υποστεί επεξεργασία με έναν τέτοιο φωταυγή ορό, λάμπουν κατά μήκος της περιφέρειας των κυττάρων με τη μορφή πράσινου περιγράμματος.
Έμμεση μέθοδος RIFσυνίσταται στην ταυτοποίηση του συμπλέγματος αντιγόνου-αντισώματος χρησιμοποιώντας ορό αντισφαιρίνης (αντισώματος) επισημασμένο με φθορόχρωμο. Για να γίνει αυτό, τα επιχρίσματα από ένα εναιώρημα μικροβίων αντιμετωπίζονται με αντισώματα αντιμικροβιακού διαγνωστικού ορού κουνελιού. Στη συνέχεια, τα αντισώματα που δεν δεσμεύονται από μικροβιακά αντιγόνα ξεπλένονται και τα αντισώματα που παραμένουν στα μικρόβια ανιχνεύονται με επεξεργασία του επιχρίσματος με ορό αντισφαιρίνης (αντι-κουνελιού) επισημασμένο με φθοροχρωματικά. Ως αποτέλεσμα, σχηματίζεται ένα σύνθετο μικρόβιο + αντιμικροβιακά αντισώματα κουνελιού + αντισώματα κατά κουνελιού που έχουν επισημανθεί με φθορόχρωμα. Αυτό το σύμπλεγμα παρατηρείται σε μικροσκόπιο φθορισμού, όπως στην άμεση μέθοδο.
Μηχανισμός . Σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα, παρασκευάζεται ένα επίχρισμα από το υλικό δοκιμής, στερεώνεται σε φλόγα και υποβάλλεται σε επεξεργασία με άνοσο ορό κουνελιού που περιέχει αντισώματα κατά των παθογόνων αντιγόνων. Για να σχηματιστεί ένα σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος, το παρασκεύασμα τοποθετείται σε υγρό θάλαμο και επωάζεται στους 37 °C.για 15 λεπτά, στη συνέχεια πλύθηκε καλά με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου για να αφαιρεθούν τα αντισώματα που δεν είναι δεσμευμένα στο αντιγόνο. Στη συνέχεια, ένας ορός φθορίζουσας αντισφαιρίνης έναντι σφαιρινών κουνελιού εφαρμόζεται στο παρασκεύασμα, επωάζεται για 15 λεπτά στους 37 ° C και στη συνέχεια το παρασκεύασμα πλένεται καλά με ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου. Ως αποτέλεσμα της δέσμευσης ορού φθορίζουσας αντισφαιρίνης με ειδικά αντισώματα στερεωμένα στο αντιγόνο, σχηματίζονται φωτεινά σύμπλοκα αντιγόνου-αντισώματος, τα οποία ανιχνεύονται με μικροσκόπιο φθορισμού.