Ang aglutinasyon ay ang gluing at precipitation ng microbes o iba pang mga cell sa ilalim ng impluwensya ng mga antibodies sa pagkakaroon ng isang electrolyte (isotonic sodium chloride solution). Ang mga grupo ng nakadikit na bakterya (mga cell) ay tinatawag na agglutinate. Ang mga sumusunod na sangkap ay kinakailangan para sa reaksyon ng aglutinasyon:
1. Antibodies (agglutinins) na matatagpuan sa serum ng isang may sakit o immune na hayop.
2. Antigen - isang suspensyon ng nabubuhay o napatay na mga mikrobyo, pulang selula ng dugo o iba pang mga selula.
3. Isotonic (0.9%) solusyon ng sodium chloride.
Ang agglutination reaction para sa serodiagnosis ay ginagamit para sa typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction), brucellosis (Wright and Heddleson reaction), tularemia, atbp. Ang antibody ay ang suwero ng pasyente, at ang antigen ay isang kilalang mikrobyo. Kapag kinikilala ang mga microbes o iba pang mga cell, ang kanilang suspensyon ay ginagamit bilang isang antigen, at isang kilalang immune serum ay ginagamit bilang isang antibody. Ang reaksyong ito ay malawakang ginagamit upang masuri ang mga impeksyon sa bituka, whooping cough, atbp.
Mga pamamaraan para sa pagtatanghal ng RA
Tinatayang RA sa salamin
Nag-deploy ng RA
(paraan ng volume)
Reaksyon ng coagglutination
Nakabukang RA sa salamin (seroidentification)
Agglutination reaksyon sa salamin. Dalawang patak ng tiyak (na-adsorbed) na serum at isang patak ng isotonic sodium chloride solution ay inilalapat sa isang walang taba na glass slide. Ang mga non-adsorbed serum ay pre-diluted sa isang ratio na 1:5 - 1:100. Ang mga patak ay dapat ilapat sa baso upang may distansya sa pagitan nila. Ang kultura ay lubusang giniling sa salamin na may isang loop o pipette, at pagkatapos ay idinagdag sa isang patak ng isotonic sodium chloride solution at sa isa sa mga patak ng suwero, pagpapakilos sa bawat isa hanggang sa mabuo ang isang homogenous na suspensyon. Ang isang patak ng serum na walang kultura ay isang serum control.
Pansin! Hindi mo maaaring ilipat ang kultura mula sa suwero sa isang patak ng isotonic sodium chloride solution, na nagsisilbing antigen control. Ang reaksyon ay nagaganap sa temperatura ng silid sa loob ng 1-3 minuto. Kung ang kontrol ng serum ay nananatiling transparent, ang isang pare-parehong labo ay sinusunod sa kontrol ng antigen, at ang mga agglutinate na natuklap ay lilitaw sa drop kung saan ang kultura ay halo-halong serum laban sa background ng isang malinaw na likido, ang resulta ng reaksyon ay itinuturing na positibo.
 |
Diagnostic Physiological
suwero + solusyon sa kultura + kultura
Detalyadong reaksyon ng agglutination (paraan ng dami). Serial, kadalasang dalawang beses, ang mga dilution ng serum ay inihanda. Ang pamamaraan ay tinatawag na volumetric. Upang matukoy ang titer ng antibody sa serum ng dugo, kumuha ng 6 na tubo. Ibuhos ang 1 ml ng orihinal na serum dilution 1:50 sa unang test tube at magdagdag ng 1 ml ng saline solution sa lahat ng 6 na test tube gamit ang graduated pipette. Ang unang test tube ay magbubunga ng serum dilution na 1:100 na may dami na 2 ml. Ilipat ang 1 ml mula sa unang test tube patungo sa pangalawang test tube, kung saan ang dilution ay nagiging 1:200. Kaya gumawa ng serye ng mga serial dilution ng serum sa unang 5 test tubes (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Mula sa ikalimang test tube, ibuhos ang 1 ml sa disinfectant solution. Magdagdag ng 2 patak ng diagnosticum sa lahat ng 6 na tubo ng pagsubok. Ang ikaanim na tubo ay isang kontrol sa kultura, dahil naglalaman lamang ito ng solusyon sa asin at diagnosticum.
Ang ganitong kontrol ay kinakailangan upang ibukod ang kusang pagsasama-sama ng kultura. Ang mga tubo ay inalog at inilagay sa isang termostat sa temperatura na 37°C sa loob ng 2 oras, at pagkatapos ay iniwan para sa isang araw sa temperatura ng silid, pagkatapos nito ay naitala ang mga resulta ng reaksyon ng agglutination. Kapag nagsasagawa ng isang reaksyon ng agglutination sa sera ng mga bata sa mga unang buwan ng buhay, dahil sa functional inferiority ng pagbuo ng antibody, kinakailangan upang matukoy ang mas mababang mga titer ng antibody, na isinasaalang-alang kapag natunaw ang serum. Ang unang serum dilution ay 1:25. Sa unang test tube, ang pagbabanto ng 1:50 ay nakuha, pagkatapos ay 1:100, atbp.
Kung positibo ang resulta ng reaksyon, ang mga test tube ay nagpapakita ng mga naka-stuck na cell sa anyo ng mga butil o mga natuklap laban sa background ng isang malinaw na likido. Ang agglutinate ay unti-unting naninirahan sa ilalim sa anyo ng isang "payong", at ang likido sa itaas ng sediment ay nagiging malinaw. Ang kontrol ng antigen ay pantay na malabo.
Batay sa likas na katangian ng sediment, ang fine- at coarse-grained (flaky) agglutination ay nakikilala. Ang pinong butil na agglutination ay nakukuha kapag nagtatrabaho sa O-sera. Coarse-grained - kapag ang mga motile microbes ay nakikipag-ugnayan sa flagellar H-sera. Ito ay nangyayari nang mas mabilis kaysa sa pinong butil, at ang nagreresultang sediment ay napakaluwag at madaling masira.
Ang intensity ng reaksyon ay ipinahayag tulad ng sumusunod:
Ang lahat ng mga cell ay nanirahan, ang likido sa test tube ay ganap na transparent. Ang resulta ng reaksyon ay malinaw na positibo;
Mayroong mas kaunting sediment, ang likido ay hindi ganap na malinaw. Ang resulta ng reaksyon ay positibo;
Mayroong mas kaunting sediment, ang likido ay mas maulap. Ang resulta ng reaksyon ay nagdududa;
Mayroong bahagyang sediment sa ilalim ng test tube, ang likido ay maulap. Kaduda-dudang resulta ng reaksyon;
Walang sediment, ang likido ay pantay na maulap, tulad ng sa antigen control. Resulta ng negatibong reaksyon
Reaksyon ng aglutinasyon (mula sa lat. agglutinatio- gluing) - gluing ng corpuscles (bakterya, pulang selula ng dugo, atbp.) sa pamamagitan ng antibodies sa pagkakaroon ng electrolytes.
Reaksyon ng aglutinasyon nagpapakita ng sarili sa anyo ng mga natuklap o sediment na binubuo ng mga corpuscles (halimbawa, bakterya) na "nakadikit" ng mga antibodies (Larawan 7.37). Ang reaksyon ng agglutination ay ginagamit upang: matukoy ang pathogen na nakahiwalay sa pasyente; pagpapasiya ng mga antibodies sa serum ng dugo ng pasyente; pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo.
kanin. 7.37 a, b. Agglutination reaksyon saIgM-antibodies (a) atIgG-antibodies (b)
1. Pagpapasiya ng pathogen na nakahiwalay sa pasyente. Tinatayang agglutination reaction sa salamin (Fig. 7.38). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa isang patak ng agglutinating serum (1:20 dilution). Isang flocculent precipitate forms.
kanin. 7.38.
Isang malawak na reaksyon ng agglutination na may pathogen na nakahiwalay sa isang pasyente (Fig. 7.39). Ang isang suspensyon ng bakterya na nakahiwalay mula sa pasyente ay idinagdag sa mga dilution ng agglutinating serum.
kanin. 52
2. Pagpapasiya ng antibodies sa serum ng dugo ng pasyente
Detalyadong reaksyon ng agglutination sa serum ng dugo ng pasyente (Larawan 7.39). Ang Diagnosticum ay idinagdag sa mga dilution ng serum ng pasyente.
- Ang aglutinasyon sa O-diagnosticum (bacteria na pinatay ng init, nananatili ang O-antigen) ay nangyayari sa anyo ng pinong butil na agglutination.
- Ang aglutinasyon sa H-diagnosticum (bacteria na pinatay ng formaldehyde, pinapanatili ang flagellar H-antigen) ay malaki at nangyayari nang mas mabilis.
3. Agglutination reaction para sa pagtukoy ng mga grupo ng dugo Ang reaksyon ng agglutination upang matukoy ang mga pangkat ng dugo ay ginagamit upang maitatag ang sistema ng ABO (Talahanayan b) gamit ang pagsasama-sama ng mga erythrocytes na may immune serum antibodies laban sa mga antigen ng pangkat ng dugo na A (I), B (III). Ang kontrol ay: serum na hindi naglalaman ng mga antibodies, i.e. serum AB (IV) pangkat ng dugo; antigens na nakapaloob sa mga pulang selula ng dugo ng mga pangkat A (II), B (III). Ang negatibong kontrol ay hindi naglalaman ng mga antigen, ibig sabihin, ang pangkat O (I) erythrocytes ay ginagamit.
Talahanayan 7.6. Pagpapasiya ng mga pangkat ng dugo ng ABO
| Resulta ng reaksyon |
Grupo |
|
|
pag-aari |
||
|
sinaliksik |
||
|
pulang selula ng dugo na may |
suwero (plasma) |
|
|
pamantayan |
na may pamantayan |
|
|
mga serum | ||
Ang aglutinasyon ay ang pagdikit ng bakterya bilang resulta ng pakikipag-ugnayan ng mga tiyak na AT sa kanila. Upang maisagawa ang RA, tatlong sangkap ang kinakailangan: 1) AG (agglutinogen); 2) AT (agglutinin); 3) electrolyte solution (isotonic sodium chloride solution). Tanging mga corpuscular antigens (bacteria, red blood cell, antigen-loaded latex particles) ang nakikilahok sa agglutination reaction.
Agglutination reaksyon sa salamin. Ang isang patak ng diagnostic serum ay inilapat sa isang walang taba na glass slide na may pipette (serum dilution 1:10 - 1:20). Gamit ang isang bacteriological loop, ang isang purong kultura ng mikroorganismo sa ilalim ng pag-aaral ay kinuha mula sa ibabaw ng slanted agar, inilipat sa isang patak ng suwero at halo-halong. Ang resulta ng reaksyon ay isinasaalang-alang sa mata pagkatapos ng 3-5 minuto. Kung ang reaksyon ay positibo, ang hitsura ng mga natuklap (malaki o maliit) ay nabanggit sa isang patak ng serum, malinaw na nakikita sa isang madilim na background kapag ang slide ay inalog. Sa kaso ng isang negatibong reaksyon, ang likido ay nananatiling pantay na maulap.
Agglutination reaction sa mga test tube. Ang 1 ml ng physiological solution ay idinagdag sa isang hilera ng mga test tube. Ang isang pantay na dami ng serum ng dugo na sinusuri ay idinagdag sa unang tubo ng pagsubok. Ang mga serye ng dalawang beses na dilution ng serum ay inihanda (serum titration), pagkatapos ay 2 patak ng isang suspensyon ng hindi aktibo na bakterya (diagnosticum) ay idinagdag sa bawat test tube. Ang mga tubo ay inilalagay sa isang termostat sa 37 °C sa loob ng 2 oras. Ang reaksyon ay nagpapatuloy sa pagbuo ng mga maliliit na natuklap, na hindi nakikita ng mata, kaya ang mga resulta ay naitala sa ilalim ng bahagyang paglaki sa isang espesyal na aparato - isang agglutinoscope. Ang intensity ng agglutination ay isinasaalang-alang ayon sa "apat na plus" na sistema: kumpletong agglutination - 4+, bahagyang agglutination - 3+ o 2+, kaduda-dudang resulta - +. Ang huling dilution kung saan ang agglutination ng 2+ ay sinusunod ay kinuha bilang titer ng antibody sa test serum.
Ang isang agglutination reaction sa mga test tubes (isang malawak na agglutination reaction) ay isinasagawa upang matukoy ang titer ng antibodies sa mga causative agent ng typhoid fever at paratyphoid fever (Vidal reaction), brucellosis (Wright reaction), at typhus (Weigl reaction).
Ang aglutinasyon (mula sa Latin na agglutinatio - gluing) ay ang gluing (koneksyon) ng mga antigen-bearing corpuscular particle (buong mga cell, latex particle, atbp.) Na may mga molekula ng mga tiyak na antibodies sa pagkakaroon ng mga electrolytes, na nagtatapos sa pagbuo ng mga natuklap o sediment (agglutinate) na nakikita ng mata. Ang likas na katangian ng sediment ay depende sa likas na katangian ng antigen: ang flagellated bacteria ay gumagawa ng isang magaspang na flocculent sediment, ang flagellated at noncapsular na bacteria ay gumagawa ng isang pinong butil na sediment, at ang capsular bacteria ay gumagawa ng isang stringy sediment. Ang isang pagkakaiba ay ginawa sa pagitan ng direktang agglutination, kung saan ang sariling mga antigen ng isang bacterial o anumang iba pang cell, tulad ng mga erythrocytes, ay direktang lumahok sa pakikipag-ugnayan sa mga partikular na antibodies; at hindi direkta, o passive, kung saan ang mga bacterial cell o erythrocytes, o latex particle ay mga carrier na hindi sa kanilang sarili, ngunit ng mga dayuhang antigens (o antibodies) na na-sorbed sa kanila upang matukoy ang mga antibodies (o antigens) na partikular sa kanila. Ang reaksyon ng agglutination ay pangunahing nagsasangkot ng mga antibodies na kabilang sa mga klase ng IgG at IgM. Ito ay nangyayari sa dalawang yugto: una, ang isang tiyak na pakikipag-ugnayan sa pagitan ng aktibong sentro ng mga antibodies at ang antigen determinant ay nangyayari; ang yugtong ito ay maaaring mangyari sa kawalan ng mga electrolyte at hindi sinamahan ng mga nakikitang pagbabago sa sistema ng reaksyon. Para sa ikalawang yugto - ang pagbuo ng isang agglutinate - ang pagkakaroon ng mga electrolytes ay kinakailangan, na binabawasan ang mga de-koryenteng singil ng mga antigen + antibody complex at pinabilis ang proseso ng kanilang gluing. Ang bahaging ito ay nagtatapos sa pagbuo ng isang agglutinate.
Ang mga reaksyon ng aglutinasyon ay ginagawa alinman sa salamin o makinis na mga plato ng karton, o sa mga sterile na agglutination tube. Ang mga reaksyon ng aglutinasyon (direkta at pasibo) sa salamin ay karaniwang ginagamit bilang isang pinabilis na paraan para sa pag-detect ng mga partikular na antibodies sa serum ng pasyente (halimbawa, may brucellosis) o para sa serological na pagkakakilanlan ng pathogen. Sa huling kaso, ang well-purified (adsorbed) diagnostic sera na naglalaman lamang ng mga monoreceptor antibodies o isang set ng mga ito sa iba't ibang antigens ay karaniwang ginagamit. Ang walang alinlangan na bentahe ng reaksyon ng agglutination sa salamin ay ang pagiging simple ng pagpapatupad nito at ang katotohanan na ito ay tumatagal ng ilang minuto o kahit na mga segundo, dahil ang parehong mga bahagi ay ginagamit sa puro form. Gayunpaman, mayroon lamang itong qualitative value at hindi gaanong sensitibo kaysa sa isang test tube. Ang isang malawak na reaksyon ng agglutination sa mga test tube ay nagbibigay ng mas tumpak na mga resulta, dahil pinapayagan ka nitong matukoy ang dami ng nilalaman ng mga antibodies sa serum (itatag ang titer nito) at, kung kinakailangan, irehistro ang katotohanan ng pagtaas sa titer ng antibody, na may halaga ng diagnostic. . Upang i-set up ang reaksyon, isang serum na diluted sa isang tiyak na paraan na may 0.85% NaCl solution at isang pantay na dami (karaniwan ay 0.5 ml) ng isang suspensyon ng isang standard diagnosticum (o test culture) na naglalaman ng 1 bilyong bakterya sa 1 ml ay idinagdag sa agglutination tubes. Ang mga resulta ng reaksyon ng agglutination ay unang naitala pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng mga tubo sa 37 °C at sa wakas pagkatapos ng 20-24 na oras ayon sa dalawang pamantayan: ang presensya at laki ng namuo at ang antas ng transparency ng supernatant na likido. Ang pagtatasa ay isinasagawa ayon sa apat na krus na sistema. Ang reaksyon ay kinakailangang sinamahan ng serum at antigen control. Sa mga kaso kung saan ang isang detalyadong reaksyon ng agglutination sa isang test tube ay isinasagawa para sa serological identification ng pathogen, mayroon itong diagnostic value kung ang reaksyon ay tinasa bilang positibo kapag ang diagnostic serum ay natunaw sa hindi bababa sa kalahati ng titer nito.
Dapat itong isaalang-alang na kapag ang paghahalo ng mga solusyon ng homologous antigens at antibodies, ang mga nakikitang pagpapakita ng reaksyon ng agglutination ay hindi palaging sinusunod. Ang isang precipitate ay nabubuo lamang sa ilang mga pinakamainam na ratio ng parehong mga bahagi ng reaksyon. Sa labas ng mga limitasyong ito, na may malaking labis na antigen o antibodies, walang reaksyon na naobserbahan. Ang kababalaghang ito ay tinatawag na "prozone phenomenon". Ito ay sinusunod kapwa sa agglutination reaction at sa precipitation reaction. Ang hitsura ng isang prozone sa mga reaksyon ng immune ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng katotohanan na ang mga antigen na kasangkot sa kanila, bilang isang patakaran, ay polydeterminant, at ang mga molekula ng IgG antibody ay may dalawang aktibong sentro. Sa labis na mga antibodies, ang ibabaw ng bawat antigen particle ay natatakpan ng mga molekula ng antibody upang walang mga libreng determinant group na natitira, kaya ang pangalawa, hindi nakatali na aktibong sentro ng mga antibodies ay hindi maaaring makipag-ugnayan sa isa pang antigen particle at magbigkis sa isa't isa. Ang pagbuo ng isang nakikitang agglutinate o precipitate ay pinipigilan din kapag mayroong labis na antigen, kapag walang nananatiling isang libreng aktibong sentro ng mga antibodies, at samakatuwid ang mga antigen + antibody + antigen complex ay hindi na maaaring palakihin.
Mga opsyon para sa pinabilis na mga reaksyon ng agglutination. Passive hemagglutination reaction at mga variant nito
Ang klasikong agglutination reaction ay kinabibilangan ng paggamit ng corpuscular antigens. Gayunpaman, ang mga natutunaw na antigen ay maaari ding kasangkot. Upang gawin itong posible, ang mga naturang antigen ay na-adsorbed sa immunologically inert particle. Ang mga particle ng latex o bentonite ay maaaring gamitin bilang isang carrier, ngunit sa kasalukuyan ang mga erythrocyte ng hayop o tao ay kadalasang ginagamit, na pinapabuti ang kanilang mga katangian ng adsorbing sa pamamagitan ng paggamot sa kanila ng mga solusyon ng tannin, formalin o benzidine. Ang mga pulang selula ng dugo na nag-adsorb ng isang antigen sa kanilang mga sarili ay tinatawag na sensitized ng antigen na ito, at ang immune reaction kung saan sila lumahok ay tinatawag na isang indirect o passive hemagglutination reaction (IRHA, o RPHA), dahil ang mga pulang selula ng dugo ay lumalahok dito nang pasibo.
Ang RPGA ay inilalagay sa mga espesyal na polystyrene plate na may mga butas na may hemispherical na ilalim. Kapag ginagamit ito para sa serological diagnostics, ang dalawang-tiklop na dilution ng test serum ay inihanda sa mga balon na ito sa physiological solution, at pagkatapos ay isang suspensyon ng sensitized erythrocytes ay idinagdag dito bilang isang diagnostic agent. Ang mga resulta ay naitala pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng itlog sa 37 °C gamit ang four-cross system. Sa isang positibong reaksyon, ang mga pinagsama-samang pulang selula ng dugo ay tumira sa ilalim ng butas at pantay na tinatakpan ito sa anyo ng isang baligtad na payong. Kung ang reaksyon ay negatibo, ang mga pulang selula ng dugo ay naninirahan din, ang likido ay nagiging malinaw, at ang sediment ay mukhang isang maliit na "disc" sa gitna ng balon. Ang serum titer sa RPHA ay itinuturing na huling pagbabanto nito, na nagbibigay pa rin ng binibigkas na hemagglutination nang walang makabuluhang palatandaan ng pagkakaroon ng isang "disc".
Ang RPGA ay maaari ding gamitin bilang isang pinabilis na paraan ng bacteriological diagnostics upang direktang matukoy sa materyal ng pagsubok na hindi kilalang bacteria, virus, toxins, halimbawa, plague pathogens, staphylococcal enterotoxins, atbp. Ang pagtitiyak ay ginagamit bilang isang kilalang bahagi ng mga antibodies ng reaksyon - antibody erythrocyte diagnosticum. Kung ang materyal sa pagsubok ay naglalaman ng sapat na dami ng isang kilalang antigen, magiging positibo ang RPGA.
Ang mga opsyon para sa paggamit ng RPHA ay: antigen neutralization reaction (RNAg), antibody neutralization reaction (RNAb), passive hemagglutination inhibition reaction (PHA). Para sa mga reaksyong ito, ginagamit ang mga diagnostic ng antigen at antibody erythrocyte. Dalawang magkaparehong pagkontrol sa unidirectional na reaksyon ay maaaring gamitin nang sabay-sabay, halimbawa, RPHA na may antigen diagnosticum at RNAg na may antibody erythrocyte diagnosticum.
Ang antibody neutralization reaction (RNAb) ay binubuo ng paghahalo ng suspensyon na naglalaman ng ninanais na antigen sa isang partikular na immune serum na naglalaman ng mga kilalang antibodies sa naaangkop na mga volume at incubating sa 37 °C sa loob ng dalawang oras. Pagkatapos nito, idinagdag ang isang antigenic erythrocyte diagnosticum. Ang halo ay inalog at iniwan sa temperatura ng kuwarto. Ang mga resulta ay isinasaalang-alang pagkatapos ng 3-4 na oras at sa wakas pagkatapos ng 18-24 na oras. Kung ang materyal ng pagsubok ay naglalaman ng antigen, ito ay magbubuklod sa mga antibodies (neutralize ang mga ito), at samakatuwid ay hindi magaganap ang hemagglutination.
Ang antigen neutralization reaction (RNAg) ay isinasagawa gamit ang parehong prinsipyo. Sa kasong ito lamang ay nakita ang mga antibodies sa materyal ng pagsubok. Ang isang tiyak na antigen na idinagdag sa naturang materyal ng pagsubok ay magbubuklod sa mga antibodies na nakapaloob dito, ibig sabihin, ang neutralisasyon ng antigen ng mga antibodies ay magaganap, at samakatuwid ay hindi magaganap ang hemagglutination kapag nagdaragdag ng isang antibody erythrocyte diagnosticum.
Reaksyon ng coagglutination. Ito ay isa sa mga opsyon para sa isang passive, ibig sabihin, pinabilis na agglutination reaksyon sa salamin na pinapamagitan ng mga cell na nagdadala ng antibody. Ang reaksyong ito ay batay sa natatanging pag-aari ng Staphylococcus aureus, na naglalaman ng protina A sa cell wall nito, upang magbigkis sa mga Fc fragment ng IgG at IgM. Sa kasong ito, ang mga aktibong sentro ng antibodies ay mananatiling libre at maaaring makipag-ugnayan sa mga tiyak na determinant ng antigens. Ang isang patak ng isang 2% na suspensyon ng staphylococci, na na-sensitize ng naaangkop na mga antibodies, ay inilalapat sa isang glass slide, at isang patak ng isang suspensyon ng bakterya na pinag-aaralan ay idinagdag. Kung ang antigen ay tumutugma sa mga antibodies, ang isang malinaw na agglutination ng staphylococci na puno ng mga antibodies ay nangyayari sa loob ng 30-60 s.
Latex agglutination reaction (LAR). Ang carrier ng antibodies sa diagnostic system na ito ay maliliit na karaniwang latex particle. Ang reaksyon ay isinasagawa gamit ang micromethod sa mga balon sa salamin. Ang pangunahing kondisyon para sa matagumpay na pagtatanghal ng PAH ay mahigpit na pagsunod sa mga quantitative ratios ng mga bahagi ng system: 10 μl ng isang latex na paghahanda na sensitized na may mga antibodies ay idinagdag sa 50 μl ng test material. Ang pagiging tiyak ng PAH ay kinokontrol gamit ang tatlong control test na nilalaman sa mga commercial test system: isang kilalang positibong reaksyon, isang kilalang negatibong reaksyon, at kalidad na kontrol ng mga latex suspension gamit ang PAH-unsensitized (hindi nagdadala ng mga antibodies) na mga latex na may materyal na pansubok. Sa ating bansa, ang polystyrene monodisperse latex na may iba't ibang diameter ng particle (0.3; 0.66; 0.75; 0.8 μm) ay ginagamit bilang mga carrier ng mga tiyak na antibodies. Ginagamit ang LAG para sa mabilis na pagtuklas ng mga mikroorganismo o kanilang mga antigen sa materyal na pagsubok.
Immunomagnetic detection ng antigens. Ang isa sa mga opsyon para sa pinabilis na reaksyon ng agglutination sa salamin ay nauugnay sa paggamit ng mga supermagnetic polymer particle na pinahiran ng mga tiyak na antibodies. Ang isang naturang particle ay nagbubuklod ng hanggang sa 107-108 microbial cells, dahil sa kung saan ang sensitivity ng pamamaraang ito ay umabot sa 5 CFU/ml. Maaaring gamitin ang immunomagnetic detection ng mga microorganism kasama ng CPR.
Pinagsama-samang reaksyon ng hemagglutination (AHA). Binibigyang-daan kang mabilis na matukoy sa dugo ng mga pasyente ang parehong malayang nagpapalipat-lipat na mga antigen (antigenemia) at mga antigen na nauugnay sa mga antibodies - nagpapalipat-lipat na mga immune complex (CIC). Para sa RAHA, ginagamit ang mga pulang selula ng dugo na may naaangkop na antibodies. Ang pagdaragdag ng serum ng dugo ng pasyente, na naglalaman ng mga antigen, sa sensitized erythrocytes kung saan ang mga antibodies ay naayos, ay humahantong sa gluing (agglutination) ng mga erythrocytes at immune complex.
Pagsusuri ng Antiglobulin Coombs (reaksyon ng R. Coombs). Ang buong (divalent) na mga antibodies ay tinutukoy gamit ang direkta at passive na agglutination na mga reaksyon. Ang hindi kumpleto (monovalent, blocking) na mga antibodies ay hindi nakikita ng mga pamamaraang ito, dahil, kapag pinagsama nila ang antigen, hinaharangan nila ito, ngunit hindi maaaring maging sanhi ng pagsasama-sama ng antigen sa malalaking conglomerates. Ang hindi kumpletong (pagharang) na mga antibodies ay yaong kung saan isang aktibong sentro lamang ang gumagana; ang pangalawang aktibong sentro ay hindi gumagana sa hindi malamang dahilan. Upang makita ang mga hindi kumpletong antibodies, ginagamit ang isang espesyal na reaksyon ng Coombs (Larawan 72). Ang reaksyon ay kinabibilangan ng: serum ng pasyente, kung saan natutukoy ang mga hindi kumpletong antibodies, corpuscular antigen-diagnosticum, antiglobulin serum na naglalaman ng mga antibodies sa human globulin. Ang reaksyon ay nangyayari sa dalawang yugto:
Pakikipag-ugnayan ng antigen na may hindi kumpletong antibodies. Walang nakikitang mga pagpapakita. Ang unang yugto ay nakumpleto sa pamamagitan ng paghuhugas ng antigen mula sa natitirang suwero ng pasyente.
Pakikipag-ugnayan ng antiglobulin serum na nakuha bilang isang resulta ng pagbabakuna ng isang hayop na may globulin ng tao na may hindi kumpletong mga antibodies na na-adsorbed sa antigen. Dahil sa ang katunayan na ang mga antiglobulin antibodies ay bivalent, nagbubuklod sila ng dalawang monovalent antibodies ng magkahiwalay na mga complex ng antigen + hindi kumpletong antibody, na humahantong sa kanilang gluing at ang hitsura ng isang nakikitang namuo.
Talaan ng mga nilalaman ng paksang "Immunomodulators. Immunodiagnosis ng mga nakakahawang sakit.":Detalyadong reaksyon ng agglutination (RA). Upang matukoy ang AT sa serum ng dugo ng pasyente, a malawak na agglutination reaction (RA). Upang gawin ito, ang isang diagnosticum ay idinagdag sa isang serye ng mga dilutions ng serum ng dugo - isang suspensyon ng mga pinatay na microorganism o mga particle na may sorbed Ag. Ang maximum na pagbibigay ng pagbabanto aglutinasyon Ag ay tinatawag na serum titer.
Mga uri ng reaksyon ng agglutination (RA) para matukoy ang AT - isang blood-drop test para sa tularemia (na may diagnosticum na inilapat sa isang patak ng dugo at ang hitsura ng mga nakikitang mapuputing agglutinate) at ang Huddleson test para sa brucellosis (na may diagnosticum na nabahiran ng gentian violet na inilapat sa isang patak ng dugo suwero).
Tinatayang agglutination reaction (RA)
Upang matukoy ang mga nakahiwalay na microorganism, isang tinatayang RA ang inilalagay sa mga glass slide. Upang gawin ito, ang isang pathogen culture ay idinagdag sa isang patak ng karaniwang diagnostic antiserum (diluted 1:10, 1:20). Kung positibo ang resulta, ang isang detalyadong reaksyon ay isinasagawa sa pagtaas ng mga dilution ng antiserum.
Reaksyon itinuturing na positibo kung ang agglutination ay sinusunod sa mga dilution na malapit sa titer ng diagnostic serum.
OAS. Somatic O-Ags ay heat stable at kayang kumulo sa loob ng 2 oras. Kapag nakikipag-ugnayan sa AT, bumubuo sila ng pinong butil na mga pinagsama-samang.
N-Ag. N-Ag (flagellates) ay thermolabile at mabilis na bumababa sa 100 °C, pati na rin sa ilalim ng impluwensya ng ethanol. Sa mga reaksyon sa H-antiserum, pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng itlog, ang mga maluwag na malalaking natuklap ay nabuo (nabuo ng bakterya na dumidikit sa flagella).
Vi-Ar Ang bakterya ng typhoid ay medyo hindi matatag sa init (nakatiis sa temperatura na 60-62 °C sa loob ng 2 oras); Kapag incubated na may Vi antiserum, isang fine-grained agglutinate ay nabuo.
Direktang reaksyon ng hematglutination
Ang pinakasimple sa mga ito mga reaksyon - aglutinasyon pulang selula ng dugo, o hemagglutination, na ginagamit upang matukoy ang mga pangkat ng dugo sa ABO system. Para sa pagtukoy aglutinasyon(o kakulangan nito) gumamit ng karaniwang antisera na may mga anti-A at anti-B na agglutinin. Ang reaksyon ay tinatawag na direkta, dahil ang Ags na pinag-aaralan ay mga natural na bahagi ng mga pulang selula ng dugo.
Karaniwan sa direktang hemagglutination Ang viral hemagglutination ay may mga mekanismo. Maraming mga virus ang may kakayahang kusang pagsama-samahin ang mga erythrocyte ng mga ibon at mammal; ang kanilang pagdaragdag sa isang suspensyon ng mga erythrocytes ay nagiging sanhi ng pagbuo ng mga aggregate mula sa kanila.
Reaksyon ng aglutinasyon
Agglutination (lat. agglutinatio– gluing) – gluing (koneksyon) ng antigen-bearing corpuscular particle (buong mga cell, latex particle, atbp.) na may mga molekula ng mga tiyak na antibodies sa pagkakaroon ng mga electrolytes, na nagtatapos sa pagbuo ng mga natuklap o sediment (agglutinate) na nakikita ng hubad na mata. Ang likas na katangian ng sediment ay nakasalalay sa likas na katangian ng antigen: ang flagellated bacteria ay gumagawa ng isang magaspang na flocculent sediment, ang non-flagellar at noncapsular na bacteria ay gumagawa ng isang pinong butil na sediment, at ang capsular bacteria ay gumagawa ng isang stringy sediment. Ang isang pagkakaiba ay ginawa sa pagitan ng direktang agglutination, kung saan ang sariling mga antigen ng isang bacterial o anumang iba pang cell, tulad ng mga erythrocytes, ay direktang lumahok sa pakikipag-ugnayan sa mga partikular na antibodies; at hindi direkta, o passive, kung saan ang mga bacterial cell o erythrocytes, o latex particle ay mga carrier na hindi sa kanilang sarili, ngunit ng mga dayuhang antigens (o antibodies) na na-sorbed sa kanila upang matukoy ang mga antibodies (o antigens) na partikular sa kanila. Ang reaksyon ng agglutination ay pangunahing nagsasangkot ng mga antibodies na kabilang sa mga klase ng IgG at IgM. Ito ay nangyayari sa dalawang yugto: una, ang isang tiyak na pakikipag-ugnayan sa pagitan ng aktibong sentro ng mga antibodies at ang antigen determinant ay nangyayari; ang yugtong ito ay maaaring mangyari sa kawalan ng mga electrolyte at hindi sinamahan ng mga nakikitang pagbabago sa sistema ng reaksyon. Para sa ikalawang yugto - ang pagbuo ng isang agglutinate - ang pagkakaroon ng mga electrolytes ay kinakailangan, na binabawasan ang mga de-koryenteng singil ng mga antigen + antibody complex at pinabilis ang proseso ng kanilang gluing. Ang bahaging ito ay nagtatapos sa pagbuo ng isang agglutinate.
Ang mga reaksyon ng aglutinasyon ay ginagawa alinman sa salamin o makinis na mga plato ng karton, o sa mga sterile na agglutination tube. Ang mga reaksyon ng aglutinasyon (direkta at pasibo) sa salamin ay karaniwang ginagamit bilang isang pinabilis na paraan para sa pag-detect ng mga partikular na antibodies sa serum ng pasyente (halimbawa, may brucellosis) o para sa serological na pagkakakilanlan ng pathogen. Sa huling kaso, ang well-purified (adsorbed) diagnostic sera na naglalaman lamang ng mga monoreceptor antibodies o isang set ng mga ito sa iba't ibang antigens ay karaniwang ginagamit. Ang walang alinlangan na bentahe ng reaksyon ng agglutination sa salamin ay ang pagiging simple ng pagpapatupad nito at ang katotohanan na ito ay tumatagal ng ilang minuto o kahit na mga segundo, dahil ang parehong mga bahagi ay ginagamit sa puro form. Gayunpaman, mayroon lamang itong qualitative value at hindi gaanong sensitibo kaysa sa isang test tube. Ang isang malawak na reaksyon ng agglutination sa mga test tube ay nagbibigay ng mas tumpak na mga resulta, dahil pinapayagan ka nitong matukoy ang dami ng nilalaman ng mga antibodies sa serum (itatag ang titer nito) at, kung kinakailangan, irehistro ang katotohanan ng pagtaas sa titer ng antibody, na may halaga ng diagnostic. . Upang i-set up ang reaksyon, magdagdag ng serum na diluted sa isang tiyak na paraan na may 0.85% NaCl solution at isang pantay na dami (karaniwan ay 0.5 ml) ng isang suspensyon ng isang standard diagnosticum (o test culture), na naglalaman ng 1 bilyong bacteria sa 1 ml, sa agglutination mga tubo. Ang mga resulta ng reaksyon ng agglutination ay unang naitala pagkatapos ng 2 oras ng pagpapapisa ng mga tubo sa temperatura na 37 °C at sa wakas pagkatapos ng 20-24 na oras ayon sa dalawang pamantayan: ang presensya at laki ng precipitate at ang antas ng transparency ng supernatant na likido. Ang pagtatasa ay isinasagawa ayon sa apat na krus na sistema. Ang reaksyon ay kinakailangang sinamahan ng serum at antigen control. Sa mga kaso kung saan ang isang detalyadong reaksyon ng agglutination sa isang test tube ay isinasagawa para sa serological identification ng pathogen, mayroon itong diagnostic value kung ang reaksyon ay tinasa bilang positibo kapag ang diagnostic serum ay natunaw sa hindi bababa sa kalahati ng titer nito.
Dapat itong isaalang-alang na kapag ang paghahalo ng mga solusyon ng homologous antigens at antibodies, ang mga nakikitang pagpapakita ng reaksyon ng agglutination ay hindi palaging sinusunod. Ang isang precipitate ay nabubuo lamang sa ilang mga pinakamainam na ratio ng parehong mga bahagi ng reaksyon. Sa labas ng mga limitasyong ito, na may malaking labis na antigen o antibodies, walang reaksyon na naobserbahan. Ang kababalaghang ito ay tinatawag na "prozone phenomenon". Ito ay sinusunod kapwa sa agglutination reaction at sa precipitation reaction. Ang hitsura ng isang prozone sa mga reaksyon ng immune ay ipinaliwanag sa pamamagitan ng katotohanan na ang mga antigen na kasangkot sa kanila, bilang isang patakaran, ay polydeterminant, at ang mga molekula ng IgG antibody ay may dalawang aktibong sentro. Sa labis na mga antibodies, ang ibabaw ng bawat antigen particle ay natatakpan ng mga molekula ng antibody upang walang mga libreng determinant group na natitira, kaya ang pangalawa, hindi nakatali na aktibong sentro ng mga antibodies ay hindi maaaring makipag-ugnayan sa isa pang antigen particle at magbigkis sa isa't isa. Ang pagbuo ng isang nakikitang agglutinate o precipitate ay pinipigilan din kapag mayroong labis na antigen, kapag walang nananatiling isang libreng aktibong sentro ng mga antibodies, at samakatuwid ang mga antigen + antibody + antigen complex ay hindi na maaaring palakihin.