Mga pamamaraan ng serological para sa pagsusuri sa laboratoryo ng syphilis. Serology RSC immunology

Hindi tulad ng Trichomonas o gonococcus, hindi matukoy ang Treponema pallidum sa mga smear. Kung ang isang tao ay walang malinaw na mga palatandaan ng sakit, kung gayon ang pinakamahusay na biological na materyal para sa pagsusuri upang masuri ang syphilis ay dugo. Ang pagsusuri ng dugo para sa syphilis ay lubos na maaasahan kahit na ang pasyente ay may syphilides.

Huwag magtaka kung, sa panahon ng medikal na pagsusuri bago magtrabaho, operasyon, o sa panahon ng pagbubuntis, hihilingin kang sumailalim sa pagsusuri ng dugo para sa syphilis. Ito ay isang karaniwang pamamaraan na idinisenyo upang suriin ang populasyon. Sa ganitong paraan, nakikilala ang mga carrier ng impeksyon at mga pasyente sa mga unang yugto.

Maaaring naisin ng sinumang nakipagtalik nang hindi protektado o pinaghihinalaan ang isang kapareha bilang isang carrier na magsagawa ng mabilis na pagsusuri. Ngayon ay posible na gawin ang pagsubok sa iyong sarili sa bahay.

Ang isang pagsusuri sa dugo para sa syphilis ay partikular na kahalagahan sa proseso ng paggamot sa isang impeksiyon: batay sa mga resulta, ang pagiging epektibo ng napiling paraan ng therapy ay hinuhusgahan at ang mga konklusyon ay iginuhit tungkol sa pagbawi ng pasyente.

Ang isang referral para sa pagsusuri ay maaaring makuha hindi lamang mula sa isang venereologist-dermatologist, kundi pati na rin mula sa isang therapist, gynecologist o urologist. Ang pagsusuri ay ginagawa sa sarili mong inisyatiba sa pamamagitan ng pagbili ng isang rapid testing kit sa isang parmasya.

Paano maghanda para sa pamamaraan

Upang masuri ang dugo para sa syphilis, sa iba't ibang kaso, maaaring kunin ang capillary o venous blood. Ang mga rapid test sa bahay ay nagbibigay ng sagot sa isang patak ng dugo mula sa isang daliri. Sa kasong ito, walang espesyal na paghahanda ang kinakailangan. Pangkalahatang rekomendasyon: umiwas kaagad sa paninigarilyo bago kumuha ng sample, at mula sa alkohol sa loob ng 24 na oras.

Ang mga katulad na kinakailangan ay inilalagay kapag kumukuha ng venous blood. Para sa mga pasyente na may mga problema sa kaligtasan sa sakit, hindi rin inirerekomenda na makisali sa mabigat na pisikal na paggawa sa bisperas ng mga pagsusuri. Isang araw bago kumuha ng mga sample, mas mabuting kumain ng magagaan na pagkain at matulog ng mahimbing.

Ang venous blood donation ay isinasagawa sa umaga sa walang laman na tiyan.

Mga pamamaraan para sa paghahanap ng treponema o mga bakas nito

Ang mga pamamaraan ng laboratoryo para sa pag-diagnose ng syphilis sa pamamagitan ng dugo ay batay sa kakayahan ng katawan na magbigay ng immune response sa hitsura ng pathogen. Dahil ang plasma ng dugo o serum ay pinag-aralan, ang buong pangkat ng mga reaksyon ay tinatawag na serological.

Kasama sa serological diagnosis ng syphilis ang non-treponemal at treponemal antibody test. Ang una ay mas madalas na ginagamit para sa screening at pagtatasa ng pagiging epektibo ng paggamot, at ang huli para sa diagnosis.

Ang unang serodiagnosis ng syphilis ay isinagawa ni August Wasserman noong 1906. Hanggang ngayon, hindi ito nawala ang kaugnayan nito at tinawag bilang parangal sa developer - ang reaksyon ng Wasserman (RW, RW) o ang reaksyon ng pag-aayos ng pandagdag (RSK).

Ang pagsasanay sa laboratoryo ay nagbago nang malaki sa loob ng 100 taon, at ang mga antibodies ng IgM at IgG ay nakita na ngayon ng mga sumusunod na pamamaraan (Talahanayan 1).

Mga non-treponemal na reaksyon

Ang terminong "non-treponema" ay pinagsasama ang mga reaksyon na nagpapakita ng mga antibodies hindi sa pathogen, ngunit sa mga lipid ng nawasak na lamad ng treponema o mga host cell. Sa panahon ng reaksyon ng pag-ulan, ang reagent (cardiolipin antigen) ay nakikipag-ugnayan sa mga antibodies (kung mayroon man) at ang antigen-antibody complex ay namuo. Nabubuo ang mga puting natuklap sa test tube. Sinusuri ng technician ng laboratoryo ang resulta sa mata sa mga kaso ng RPR, MPR, RST at TRUST o sa ilalim ng mikroskopyo (VDRL, USR). Ang reaksyon ay isinasaalang-alang:

positibo kapag lumitaw ang malalaking flakes (4+, 3+);
mahinang positibo kapag lumitaw ang mga katamtamang laki ng mga natuklap (2+, 1+);
negatibo – walang mga natuklap (-).

Maaaring tumagal ng hanggang 1.5 buwan mula sa sandali ng impeksyon hanggang sa isang positibong reaksyon sa mga pagsusuring hindi treponemal. Ang matigas na chancroid ay nagpapakita ng syphilis bago ang pagsusuri sa pamamagitan ng 1-4 na linggo.

Ang titer ng bumabagsak na antibodies ay sinusukat sa panahon ng isang quantitative precipitation reaction. Upang gawin ito, ang plasma o suwero ay diluted ayon sa mga tagubilin. Ang pagsusuri na ito ay nagpapakilala sa pagiging epektibo ng paggamot. Kung bumaba ang titer, matagumpay ang pagbawi; kung hindi nagbabago ang sitwasyon, dapat baguhin ang mga gamot.

Kapag pinag-uusapan natin ang tungkol sa isang microreaction, ang ibig nating sabihin ay nangangailangan ng ilang patak ng materyal sa pagsubok. Ang ganitong mga pagsusulit ay napaka-maginhawa para sa pag-screen ng malalaking populasyon o gumaganap sa bahay. Ang mga test kit ay mura at dumating sa isang standardized form. Halimbawa, ang "Syphilis-AgKL-RMP" na ginawa ng EKOlab CJSC, "Profitest" mula sa New Vision Diagnostics, SD BIOLINE na ginawa ng Standard Diagnostics.

Ang kawalan ng mga reaksyon ng pag-ulan ay ang kanilang mababang katumpakan. Nakikita ng RPR ang pangunahing syphilis sa saklaw mula 70 hanggang 90%, pangalawa - 100%, at huli - 30-50%. Ang mga maling positibong resulta mula sa mga pagsusuring hindi ntreponemal ay bihira at nangyayari sa 3% ng mga kaso. Ang isang balakid sa pagkuha ng tumpak na mga resulta ay maaaring mga pagkakamali sa pagkolekta o pag-iimbak ng mga sample ng dugo o paglabag sa pagkakasunud-sunod ng pagsusuri.

Ang isang positibong reaksyon ng pag-ulan ay hindi gumagawa ng diagnosis ng syphilis. Upang makagawa ng desisyon, kinakailangan ang mga partikular na pagsubok sa treponemal.

Mga pagsubok sa treponemal

Ang mga antibodies na direkta sa treponema antigens ay maaaring makita sa dugo ng pasyente. Para sa layuning ito, ang mga tiyak na serodiagnostic na pamamaraan ay binuo. Ang ganitong mga pagsubok ay nailalarawan sa pamamagitan ng mataas na sensitivity.

reaksyon ni Wasserman

Ang pinakapamilyar at nasubok sa oras ay ang reaksyon ng Wasserman (WR) sa syphilis. Upang maisagawa ito, 5 ML ng dugo ay kinuha mula sa cubital vein, ang suwero ay nakuha mula sa sample, ang sarili nitong pandagdag ay hindi aktibo, at pagkatapos ay ang isang bahagi ay ginagamot sa treponemal antigen, at ang isa ay may cardiolipin.

Ang resulta ay tinasa ng rate ng hemolysis:

kumpleto o makabuluhang pagkaantala sa hemolysis – positibong reaksyon (4+, 3+);
bahagyang pagkaantala – mahinang positibo (2+);
maliit na pagkaantala - kaduda-dudang reaksyon (1+);
kumpletong hemolysis – negatibong resulta (-).

Ang mga positibong resulta ng husay ay sinusuri gamit ang isang quantitative na pamamaraan. Ang reagin titer ay itinuturing na pinakamataas na pagbabanto ng serum ng dugo hanggang sa isang kumpleto o makabuluhang pagkaantala sa hemolysis. Ang isang quantitative RT test ay inireseta upang suriin ang pagiging epektibo ng paggamot.

Makatuwiran na isagawa ang reaksyon ng Wasserman 2-3 linggo pagkatapos ng paglitaw ng chancre. Magpapakita ito ng pangalawang syphilis sa 100% ng mga kaso, ang tertiary syphilis sa 75%.

Passive hemagglutination reaction (RPHA)

Ang paghahanda ng pagsubok ay inihanda mula sa mga erythrocytes ng hayop sa pamamagitan ng sensitization sa Treponema pallidum antigen. Ang mga selula ay idinagdag sa serum ng dugo ng pasyente. Ang oras ng pagsubok ay 1 oras. Sa pagkakaroon ng mga antibodies, nangyayari ang isang reaksyon ng agglutination, at nakikita ng katulong sa laboratoryo ang mga tiyak na pattern sa microwells.

Transcript ng pagsubok:

singsing ng agglutinated cells – positibong resulta (4+, 3+, 2+);
maluwag na singsing - kaduda-dudang resulta (+/-, 1+);
ang tuldok sa gitna ay negatibong resulta (-).

Ang passive hemagglutination reaction ay nagbibigay ng mga positibong resulta katagal pagkatapos ng paggamot. Ang isang maling positibong tugon ay maaaring makuha sa mga kaso ng impeksyon na may ketong o mononucleosis. Ang quantitative RPGA ay isinasagawa sa pamamagitan ng diluting sample.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Ginagamit para sa maagang pagsusuri ng syphilis. Tinutukoy ang pagkakaroon ng IgM, IgA, IgG antibodies sa treponema gamit ang mga immunoglobulin ng tao na may label na isang enzyme at isang espesyal na reagent. Ang sagot ay tinutukoy ng pagbabago sa kulay ng mga sample: mas maraming antibodies, mas mayaman ang kulay ng pinaghalong.

Ang pamamaraan ay napaka-sensitibo at tiyak. Hindi ito nagbibigay ng maling positibong resulta kapag ang mga pasyente ay nahawahan ng iba pang mga impeksiyon. Ang mataas na sensitivity sa antibodies ay naglilimita sa paggamit ng ELISA upang subaybayan ang antas ng lunas.

Mga pagsusuri sa immunofluorescence (RIF)

Ang mga pagsusuri sa pangkat na ito ay ginagawang posible upang mabilis na matukoy ang impeksyon sa treponema bago ang hitsura ng chancre. Nagbibigay ng mga positibong resulta sa pagtatapos ng unang linggo mula sa sandali ng impeksyon. Ang pagiging sensitibo ay malapit sa 100%. Ang aktibong sangkap ng pagsubok ay fluorescein antibodies sa mga globulin ng tao. Sa pamamagitan ng pagsasama sa serum antibodies, lumilikha sila ng mga makinang na complex. Ang resulta ng pagsubok ay tinutukoy ng intensity ng glow:

dilaw-berde maliwanag na glow - 4+;
berde – 3+;
maputlang berde - 2+;
halos hindi kapansin-pansin na glow - 1+;
negatibo ang kulay ng background o anino.

Treponema pallidum immobilization reaction (TRE)

Ang pagsusulit ay ginagamit upang makita ang mga nakatagong anyo ng syphilis. Ito ay labor-intensive at teknikal na kumplikado. Ang pamamaraan ay batay sa kababalaghan ng immobilization ng mga nabubuhay na treponemes ng "antigen + antibody" complex. Ang mga bakterya para sa pagsubok ay nilinang sa mga kuneho. Ang lahat ng mga babasagin para sa pagsusuri ay dapat na sterile. Kinukuha ang dugo mula sa pasyente sa kondisyon na umiinom siya ng antibiotic hindi lalampas sa isang buwan bago ang araw ng pagsusuri. Ang mga treponema ay idinagdag sa suwero. Sa eyepiece ng isang mikroskopyo, ang isang laboratory assistant ay naghahanap ng hindi kumikilos na bakterya.

Pag-decode ng resulta:

kung ang immobilization ng treponemes ay higit sa 50% - resulta 4+;
31-50% – mahinang positibo 3+;
21-30% – nagdududa 2+;
hanggang sa 20% - negatibo.

Immunoblot (Western-blot)

Ang pinakamodernong paraan para sa pag-diagnose ng syphilis, pag-aalis ng mga maling positibong tugon mula sa iba pang mga partikular na pagsusuri. Sa klinikal na kasanayan ito ay ginagamit bilang isang confirmatory test. Ang serum ng dugo ng pasyente ay inilapat sa isang nitrocellulose membrane na pinahiran ng electrophoretically separated Treponema pallidum antigens. Kung ang IgG at IgM antibodies ay naroroon, ang mga guhit ay lilitaw sa pagsubok.

Ang mga resulta ng sistema ng pagsubok ay binibigyang kahulugan batay sa posisyon ng mga banda at ang kanilang intensity.

Ang pangwakas na pagsusuri ay ginawa na isinasaalang-alang ang mga pagsusuring hindi treponemal at treponemal.

Mga Pinagmulan:

Akovbyan V.A., Prokhorenkov V.I., Novikov A.I., Guzey T.N. // Syphilis: Ilustrasyon. manwal (Ed. V.I. Prokhorenkov). – M.: Medkniga, 2002. – P. 194-201.
Dmitriev G.A., Frigo N.V. // Syphilis. Differential clinical at laboratory diagnosis. – M.: Med. aklat, 2004. – pp. 26-45.
Loseva O.K., Lovenetsky A.N. Epidemiology, klinikal na larawan, diagnosis at paggamot ng syphilis: Isang gabay para sa mga doktor. – M., 2000.
Novikov A.I. et al. Western blot bilang confirmatory test sa laboratory diagnosis ng syphilis. - "Wedge." lab. Diagnostics", 2011, No. 8. – P. 4 -45.
Pankratov V.G., Pankratov O.V., Navrotsky A.L. atbp. // Recipe (apendise: Internasyonal na pang-agham at praktikal na kumperensya "Mga modernong diskarte sa diagnosis, paggamot at pag-iwas sa mga impeksiyon na nakukuha sa pakikipagtalik", Grodno, 2005). – P.165-169.
Pankratov V.G., Pankratov O.V., Krukovich A.A. at iba pa // Pangangalaga sa kalusugan. – 2006. – Bilang 6. – P. 35-39.
Rodionov A.N. // Syphilis: isang gabay para sa mga doktor. – St. Petersburg: Peter, 1997. – P. 226-245.
Jurado R.L. // STD. – 1997. – Bilang 3. – P. 3-10.
Schmidt B.L. // Unang Russian Congress of Dermatovenerologists: Abstracts. siyentipiko gumagana – St. Petersburg, 2003. – T. II. – P. 40-
Romanowski B., Sutherland R., Flick G.H. et al. //Ann. Intern. Med. –1991. – V. 114. – P. 1005-1009. Ano ang serological diagnosis ng syphilis

Ano ang ipinapakita ng isang serological blood test? Ang mga hakbang sa diagnostic ay ang pinakamahalagang yugto sa paggamot ng anumang sakit. Ang tagumpay ng paggamot ay nakasalalay hindi lamang sa mga iniresetang gamot, ngunit higit sa lahat sa kung paano tama ang pagsusuri ay ginawa.

Bilang karagdagan, pinapayagan ka ng diagnosis na maiwasan ang mga komplikasyon at magkakatulad na sakit. Gamit ang isang serological test ng dugo ng pasyente, ang pagkakaroon ng mga antibodies at antigens ay napansin. Ang pag-aaral ay nakakatulong upang makahanap ng maraming sakit, matukoy ang kanilang yugto at subaybayan ang pag-unlad ng paggamot.

Ano ang serology?

Ang serology ay ang sangay ng immunology na nag-aaral ng mga reaksyon ng antigens sa antibodies. Ang sangay ng gamot na ito ay tumatalakay sa pag-aaral ng plasma ng dugo at mga katangian ng immunological nito.

Ngayon, ang isang serological blood test para sa mga antibodies ay isang maaasahang paraan upang makita ang human immunodeficiency virus, hepatitis, brucellosis, STD at iba pang mga sakit na nagbabanta sa buhay. Alamin natin kung anong mga kaso ang inireseta.

Mga pahiwatig para sa paggamit

Ang isang serological na pagsusuri sa dugo ay kinakailangan upang matukoy ang sanhi ng ahente ng sakit kung mahirap gumawa ng diagnosis.

Upang maisagawa ang reaksyong ito, ang mga antigen ng mga pathogen ay ipinakilala sa plasma, at pagkatapos ay ang patuloy na proseso ay pinag-aralan ng isang katulong sa laboratoryo. O ginagawa nila ang kabaligtaran na reaksyon: ang mga antibodies ay iniksyon sa nahawaang dugo upang matukoy ang tiyak na pagkakakilanlan ng pathogen.

Saklaw ng aplikasyon

Ang pananaliksik na ito ay ginagamit sa iba't ibang sangay ng medisina. Tinutukoy ng reaksyong ito ang mga partikular na selula at antibodies na ginawa ng katawan upang labanan ang mga impeksiyon at mga virus.

Bilang karagdagan, ang uri ng dugo ng isang tao ay tinutukoy gamit ang serological na paraan.

Ang isang katulad na serological blood test ay ginagamit sa ginekolohiya upang masuri ang mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik. Ang pamamaraang ito ay ginagamit din para sa komprehensibong pagsusuri ng mga buntis na kababaihan (detection ng toxoplasmosis, HIV, syphilis, atbp.). Ang pagpasa sa pagsusulit na ito ay sapilitan kapag nagparehistro sa isang antenatal clinic.

Sa mga bata, ang isang serological reaksyon ay ginagamit upang kumpirmahin ang diagnosis ng tinatawag na "pagkabata" na mga sakit (chickenpox, tigdas, rubella, atbp.) Kung ang mga sintomas ay walang binibigkas na mga pagpapakita at imposibleng makilala ang sakit sa pamamagitan ng pagsusuri ng mga klinikal na indikasyon .

Pagtuklas ng mga sakit na nakukuha sa pakikipagtalik

Para sa mga venereologist, ang pagsubok na ito ay talagang hindi mapapalitan at nagbibigay-daan sa iyo na gumawa ng diagnosis nang napakatumpak.

Sa isang malabong klinikal na larawan, ang isang serological blood test para sa syphilis, giardiasis, ureaplasmosis, chlamydia, herpes at iba pang mga sakit ay maaaring mabilis na matukoy ang pagkakaroon ng mga antibodies.

Viral at nakakahawang sakit

Ang serological analysis ay aktibong ginagamit ng mga gastroenterologist, hepatologist at mga espesyalista sa nakakahawang sakit upang masuri ang viral hepatitis.

Ang pag-decipher ng isang serological blood test ay ginagawang posible upang matukoy ang yugto ng sakit at sagutin ang tanong kung gaano kinakailangan ang ospital sa sandaling ito. Paano maghanda ng maayos?

Paghahanda para sa pagsusulit

Ang mga pagsusuri sa serological na dugo ay ginagawa sa parehong pampubliko at komersyal na mga klinika. Ang kagustuhan ay dapat ibigay sa isang laboratoryo na may modernong kagamitan at mga kwalipikadong tauhan.

Ang mga biological sample para sa pagsusuri ay maaaring laway at dumi, ngunit sa karamihan ng mga kaso ay ginagamit ang venous blood ng pasyente. Ang dugo para sa isang serological test ay kinuha mula sa cubital vein sa isang laboratoryo. Bago kumuha ng pagsusulit, dapat kang kumunsulta sa iyong doktor tungkol sa paghahanda para sa pamamaraang ito.

Upang maghanda para sa isang serological test, kailangan mong sundin ang ilang simpleng mga patakaran.

Ang dugo ay ibinibigay sa isang kalmadong estado bago kumain, iyon ay, sa walang laman na tiyan. Bago ito, hindi ka dapat sumailalim sa iba pang mga pagsusuri, tulad ng x-ray, ultrasound, atbp.

Kinakailangang iwasan ang pag-inom ng antibacterial at ilang iba pang gamot ilang linggo bago mag-donate ng dugo. Ang ilang mga rekomendasyon sa kasong ito ay nakasalalay sa sakit kung saan ginagawa ang pagsusuri. Halimbawa, ang isang pagsubok para sa hepatitis ay nagsasangkot ng pag-aalis ng matatabang pagkain at alkohol 48 oras bago ang pamamaraan.

Reaksyon ng fluorescence

Kabilang sa mga uri ng serological reactions ay mayroong fluorescence reaction. Ang pamamaraan na ito ay gumagamit ng isang reagent na nagpapailaw ng mga antibodies sa serum ng dugo.

Ang pag-set up ng direktang serological reaction ay kinabibilangan ng pagmamarka ng mga partikular na antibodies na may fluorescent substance. Ang reaksyong ito ay ang pinakamabilis at isinasagawa sa isang yugto.

Ang isa pang opsyon para sa pagsasagawa ng naturang pagsusuri ay tinatawag na hindi direkta, o RNIF. Ito ay isinasagawa sa dalawang yugto. Sa unang hakbang, ang mga antibodies ay hindi nilagyan ng label na may mga fluorescent na tag, at sa pangalawa, ang mga antibodies na may naaangkop na label ay ginagamit upang makilala ang mga antigen at antibodies. Ang glow ay nangyayari lamang pagkatapos na nagbubuklod sa isang tiyak na antibody ay nangyayari.

Ano ang ipinapakita ng isang serological blood test? Ang resulta ng buong pamamaraan ay tinasa ng isang espesyal na aparato na sinusuri ang lakas ng radiation at ipinapakita ang hugis at sukat ng bagay na pinag-aaralan. Ang mga causative agent ng mga nakakahawang sakit ay napansin na may isang resulta na ang pagiging maaasahan ay 90-95%, depende sa uri at yugto ng patolohiya.

Naka-link na immunosorbent assay

Ang mga uri ng serological testing na ito ay gumagamit ng natatangi at matatag na reagents. Ang mga minarkahang sangkap ay tila dumidikit sa ninanais na mga antibodies. Bilang resulta, nakakakuha tayo ng isang husay o dami ng resulta.

Kung walang nakitang binibigkas na mga marker, ang resulta ay ituturing na negatibo. Kung ang pagkakaroon ng mga antibodies sa mga biological sample ay nakita sa panahon ng isang husay na pag-aaral, kung gayon ang resulta ng pagsubok ay itinuturing na positibo. Sa pamamagitan ng pagbibilang ng mga cell, ang pagsusuri ay nagbibigay ng mas tumpak na resulta.

Sa pamamagitan ng pagsusuri sa mga tagapagpahiwatig ng pagsusuri (halimbawa, ang kabuuan ng mga natukoy na selula), tinutukoy ng espesyalista kung ang sakit ay nasa paunang yugto, sa talamak na yugto, o kung lumala ang talamak na anyo ng patolohiya. Upang makagawa ng diagnosis, isinasaalang-alang ng doktor hindi lamang ang data ng isang serological na pag-aaral, kundi pati na rin ang klinikal na larawan ng sakit.

Mga tampok ng pagsubok na ito

Ang pagsasagawa ng pagsusuring ito ay hindi palaging makakapagbigay ng 100% kumpiyansa na ang isang partikular na sakit ay natukoy. Ito ay nangyayari na ang mga resulta ay maaaring hindi maliwanag at iba pang mga pamamaraan ay kinakailangan.

Halimbawa, sa panahon ng pagsusuri para sa brucellosis, ang serum ng dugo ay kinokontrol para sa pagpapanatili sa sarili nang walang antigen. Ito ay makabuluhang pinatataas ang pagiging maaasahan ng pagsubok. Ang pagsusuri para sa brucellosis ay maaaring maging positibo o negatibo, at maaari ring magdulot ng mga pagdududa.

Kung nakatanggap ka ng mga kaduda-dudang resulta na walang malinaw na interpretasyon, inirerekumenda na kumuha muli ng pagsusulit. Bilang karagdagan, ang brucellosis ay maaaring makita ng mga kultura ng dugo, utak ng buto at pagsusuri sa cerebrospinal fluid.

Mga kalamangan ng serological blood test

Ang mga pamamaraan ng diagnostic na gumagamit ng mga serological na reaksyon ay malawakang ginagamit sa modernong medikal na kasanayan. Ito ay kadalasang ginagawa kapag tinutukoy ang mga viral at nakakahawang pathologies.

Ang parehong mga pagsusuri ay ginagamit sa panahon ng geographic na screening at medikal na pagsusuri upang maiwasan ang epidemiological na pagkalat ng impeksyon.

Ang mga pakinabang ng pamamaraan ay kinabibilangan ng:

Mataas na antas ng kumpiyansa.
Mabilis na reaksyon at resulta. Ang mga resulta ng RSC ay malalaman sa loob ng 24 na oras. Sa isang espesyal na sitwasyon, sa isang setting ng ospital, ang pagsusuri ay magiging handa sa loob ng ilang oras.
Pagsubaybay sa pag-unlad ng sakit at ang pagiging epektibo ng therapy.
Mababang gastos at accessibility para sa mga pasyente.

Mga disadvantages ng pamamaraan

Gayunpaman, ang mga pag-aaral ng serological ay mayroon ding mga kakulangan.

Kabilang dito ang katotohanan na kapag nagsasagawa ng pagsusuri, ang panahon ng pagpapapisa ng itlog ng sakit ay dapat isaalang-alang upang makakuha ng mas maaasahang larawan.

Halimbawa, ang pagpapasiya ng herpes simplex type 1 o 2 ay posible lamang 14 na araw pagkatapos ng impeksiyon. Ang pagsusuri para sa pagkakaroon ng immunodeficiency virus ay isinasagawa 30 araw, 90 araw at anim na buwan pagkatapos makipag-ugnayan sa isang taong nahawahan.

Siyempre, ang pagiging maaasahan ng mga resulta ay maaari ding maimpluwensyahan ng kadahilanan ng tao: kapabayaan ang mga patakaran para sa paghahanda para sa sampling ng dugo o isang pagkakamali na ginawa ng katulong sa laboratoryo kapag isinasagawa ang reaksyon.

Ayon sa mga istatistika, ang isang maling resulta ay maaaring makuha sa 5% ng mga kaso. Ang isang nakaranasang doktor, kapag sinusuri ang isang pasyente, na pinag-aralan ang klinikal na larawan, sa karamihan ng mga kaso ay maaaring kalkulahin ang pagkakamaling nagawa.

Ano ang mga serological test, bakit isinasagawa ang mga ito, ano ang mga pangunahing pamamaraan ng serological diagnosis?

Ang mga serological na pag-aaral ay mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga antigen o antibodies sa biological na materyal ng mga pasyente, batay sa ilang mga immune reaction. Ang pagtuklas ng mga antibodies sa nakakahawang ahente o antigens sa biological na materyal ay ginagawang posible upang maitatag ang sanhi ng sakit.

walang 100% specificity at sensitivity sa pag-diagnose ng mga nakakahawang sakit. Samakatuwid, ang kanilang mga resulta ay dapat masuri na isinasaalang-alang ang klinikal na larawan ng sakit. Ipinapaliwanag nito ang pangangailangang gumamit ng ilang pagsusuri upang masuri ang impeksiyon, gayundin ang paggamit ng mga pamamaraan Western blot, na nagpapatunay sa mga resulta ng mga pamamaraan ng screening.

"Ang Immunoblotting (Western blot) ay talagang ang pangwakas na paraan ng pagpapatunay (pagkumpirma) sa hanay ng mga immunological na pag-aaral na nagpapahintulot sa amin na gumawa ng panghuling konklusyon sa laboratoryo. Ang pagsusulit na ito ay lalong mahalaga para sa pagkumpirma o pagpapabulaanan ng isang nakakahawang sakit (halimbawa, whooping cough, borreliosis, atbp.). Ang paraan ng Western blot ay kadalasang kinakailangan pagkatapos ng pagtuklas ng mga positibong IgG antibodies ng nakakahawang proseso, dahil Sa kumbinasyong ito na ang isang mas tamang interpretasyon ng laboratoryo ng mga resulta at karagdagang mga taktika sa paggamot para sa pasyente ay nangyayari. Upang magsagawa ng Western blot, ginagamit ang mga espesyal na nitrocellulose strips, kung saan inililipat ang mga protina gamit ang horizontal at pagkatapos ay vertical immunophoresis sa pagkakasunud-sunod ng pagtaas ng molekular na timbang. Ang mga antibodies mula sa serum ng pasyente ay nakikipag-ugnayan sa mga protina sa ilang bahagi ng strip, at pagkatapos ay isang reaksyon ay nagpapatuloy katulad ng isang enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA),"- nagpapaliwanag kandidato ng agham medikal, direktor ng medikal ng laboratoryo ng SYNEVO Ukraine, Oksana Vladislavovna Nebyltsova.

Biological na materyal na ginagamit para sa serological na pananaliksik

Serum ng dugo
laway
Dumi

Anong mga kondisyon ang ginagamit ng mga serological test upang masuri?

Ang layunin ng mga serological na pag-aaral ay upang maitaguyod ang pagiging epektibo ng paggamot pagkatapos na gumaling ang pasyente, gayundin upang makita ang pagbabalik ng sakit. Bilang karagdagan, ang mga serological na pamamaraan ay maaaring makakita ng mga sakit tulad ng:

Amoebiasis
Giardiasis
Opisthorchiasis
Trichinosis
Toxocariasis
Cysticercosis
Echinococcosis

Mga pangunahing pamamaraan na ginagamit sa serological diagnosis

Immunofluorescence reaction (RIF, paraan ng Koons)

Mga uri ng pamamaraan:

Direkta: ang mga microbes o tissue antigens o microbes ay ginagamot ng mga espesyal na serum na may mga antibodies, pati na rin ang mga may label na fluorochrome na kumikinang sa UV rays. Ang bakterya sa gayon ay kumikinang bilang isang berdeng hangganan sa paligid ng paligid ng cell. Naobserbahan sa ilalim ng isang fluorescent microscope.

Hindi direkta: ang mga pahid ay ginagamot ng antimicrobial rabbit serum antibodies. Ang mga antibodies na hindi nakagapos sa mga microbial antigens ay hinuhugasan. Sa ganitong paraan, ang mga antibodies na natitira sa mga mikrobyo ay nakita. Bilang resulta, nabuo ang isang complex ng microbe + anti-rabbit antibodies + anti-microbial rabbit antibodies, na may label na fluorochrome. Ang kumplikadong ito ay sinusunod sa ilalim ng isang fluorescent microscope.

Upang suriin ang mga resulta, mayroong isang apat na puntos na sukat, na kung saan ay nailalarawan sa intensity ng ibabaw ng dilaw-berdeng glow ng mga antigen cell:

Napakahinang cell glow

Malabong liwanag ng paligid ng cell

+++/++++ maliwanag na glow ng cell

Ang titer ng reaksyon ay itinuturing na pagbabanto ng serum na may resulta ng reaksyon +++ o ++++.

Indirect hemagglutination reaction (IHR)

Ang passive o indirect hemagglutination reaction ay ginagamit para sa diagnosis ng mga impeksyon sanhi ng protozoa, bacteria at rickettsia.

Ang pamamaraan ay binubuo ng ilang mga yugto. Una, ang mga pulang selula ng dugo ay ginagamot at "hugasan" ng isang isotonic na solusyon ng sodium chloride, pagkatapos, kung kinakailangan, na may isang solusyon ng tannin 1: 20,000, at pagkatapos ay sensitized na may natutunaw na antigens. Pagkatapos ng paggamot na may buffered isotonic sodium chloride solution, ang antigen ay handa nang gamitin. Ang serum ay diluted sa mga test tube na may isotonic sodium chloride solution, pagkatapos nito ay idinagdag ang isang erythrocyte diagnosticum sa bawat diluted serum.

Ang mga resulta ay tinasa ayon sa likas na katangian ng erythrocyte sediment:

Mababang intensidad

Katamtamang intensity

Matinding reaksyon

Biglang matinding reaksyon

Ang resulta ng isang reaksyon na may matinding reaksyon +++ o isang matinding matinding reaksyon ++++, kung saan ang mga pulang selula ng dugo ay sumasakop sa buong ilalim ng tubo, ay itinuturing na positibo.

Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA)

Ang pamamaraan ay may mataas na pagtitiyak at pagiging sensitibo, higit sa 90%. Ang pangunahing bentahe ay ang posibilidad pagtuklas ng impeksyon at pagsubaybay sa dynamics ng proseso, na ipinahiwatig ng antas ng mga antibodies.

Ang pagsusulit ay ginagamit upang masuri ang isang malawak na hanay ng mga impeksyon, kabilang ang:

impeksyon sa HIV
Viral hepatitis
Impeksyon ng cytomegalovirus
Impeksyon sa herpes
Impeksyon sa Toxoplasma

Mga bagong rekomendasyon para sa malusog na pagkain batay sa bagong pananaliksik

Ang antigen o antibody ay naayos sa mga solidong plato, pagkatapos, gamit ang isang label ng enzyme, ang mga antigen-antibody complex ay nakita.

Ang ELISA ay may isang bilang ng mga pakinabang sa iba pang mga serological na pamamaraan. Ang reaksyon ay ang pinakasensitibo, at ang mga pagsubok ay gumagamit ng mga unibersal na reagents. Mabilis ang pagsusuri at may kakayahang pag-aralan ang mga immunoglobulin ng iba't ibang klase. Sa kasalukuyan, ang ELISA ay isa sa mga pangunahing pamamaraan ng mga diagnostic sa laboratoryo.

Ang pagsusuri ng mga resulta ng ELISA ay awtomatikong isinasagawa gamit ang mga espesyal na aparato. Sa ilang mga kaso, pinapayagan din ang visual na pagtatala ng mga resulta ng reaksyon. Ang pagiging maaasahan ng serological diagnosis ay nakasalalay sa organisasyon ng kontrol sa laboratoryo, na binubuo ng ilang mga pamamaraan na idinisenyo upang masuri ang kalidad ng mga resulta.

Ang mga nakakahawang sakit ay nagpapasimula ng paggawa ng mga angkop na antibodies sa dugo ng isang taong may sakit. Ito ay kung paano gumagana ang immune defense ng katawan.

Ang pagtukoy sa pagkakaroon ng mga antibodies sa isang partikular na virus o bakterya ay ginagawang posible na malaman ang tungkol sa pagsisimula ng isang sakit bago lumitaw ang mga pangunahing sintomas nito. Ngayon, ang mga pagsusuri sa serological ay nagbibigay ng pinaka kumpletong larawan. Samakatuwid, sa artikulong ito ay pag-uusapan natin ang tungkol sa serological testing.

Ano ang mga serological test

Ang mga pamamaraan para sa pag-aaral ng mga biological na materyales ng mga tao at hayop na maaaring makakita ng mga antibodies o antigens sa kanila na ginagawa ng katawan bilang isang proteksiyon na reaksyon sa paglaban sa mga impeksyon ay tinatawag na serological studies. Ang ganitong mga pamamaraan ay ginagamit upang matukoy ang sanhi ng ahente ng impeksyon, pati na rin para sa layunin ng:

pagpapasiya ng pangkat ng dugo,
pag-aaral ng immunity sa pamamagitan ng pagtukoy sa antas ng humoral component nito,
pagpapasiya ng tissue antigens.

Kanino ito inireseta?

Bakit gagawin ito?

Ang pamamaraan ay pinahahalagahan ng mga espesyalista bilang isang paraan upang makagawa ng isang mataas na kalidad na diagnosis ng sakit.

Kung ang pasyente ay nasa yugto ng sakit, ang mga paulit-ulit na pag-aaral ay inirerekomenda na isagawa sa pagitan ng humigit-kumulang isang linggo upang masubaybayan ang pagiging epektibo ng paggamot na ginamit.
Ang mga serological na pagsusuri ay kadalasang ginagamit upang matukoy kung aling pathogen ang nagdulot ng sakit pagkatapos na maranasan ito ng pasyente.

Mga uri ng pamamaraan

Ang mga pamamaraan ng serological na pananaliksik ay batay sa iba't ibang mga reaksyon:

Reaksyon ng neutralisasyon umaasa sa pag-aari ng immune serum antibodies upang kumilos bilang isang neutralizing agent laban sa mga toxin o microorganism mismo, na pumipigil sa kanilang mga nakakapinsalang epekto.
Reaksyon ng aglutinasyon, na, naman, ay nahahati sa mga sumusunod na subtype:
- direktang reaksyon - ginagamit ang mga ito upang subukan ang serum ng dugo para sa pagkakaroon ng mga antibodies. Ang mga pinatay na mikrobyo ay idinagdag sa komposisyon na pinag-aaralan, at kung ang isang namuo ay lilitaw sa anyo ng mga natuklap, nangangahulugan ito na ang reaksyon sa ganitong uri ng mikrobyo ay positibo;
- ang hindi direktang reaksyon ng hemagglutination ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagpapasok sa mga serum ng dugo na erythrocytes kung saan ang mga antigen ay na-adsorbed; ang mga ahente na ito ay nakikipag-ugnayan sa parehong uri ng mga antigen na nasa serum ng dugo, na nagreresulta sa isang scalloped precipitate.
Reaksyon na may kasamang pandagdag ginagamit sa pagtuklas ng mga nakakahawang sakit. Ang pamamaraan ay ipinatupad sa pamamagitan ng pag-activate ng pandagdag at pagmamasid sa mga reaksyong nagaganap sa midyum na pinag-aaralan.
Reaksyon ng ulan ay isinasagawa sa pamamagitan ng pagpapatong ng isang antigen solution sa isang likidong daluyan - immune serum. Ang antigen na ginamit para sa pamamaraang ito ay natutunaw. Ang reaksyon ay ang antigen-antibody complex ay sumasailalim sa precipitation; ang nagresultang precipitate ay tinatawag na precipitate.
Reaksyon gamit ang mga may label na antigen at antibodies ay batay sa katotohanan na ang mga microbes o tissue antigens, na naproseso sa isang tiyak na paraan, ay nakakakuha ng kakayahang maglabas ng liwanag sa ilalim ng impluwensya ng ultraviolet rays. Ang pamamaraan ay ginagamit hindi lamang para sa pag-diagnose ng mga antigen, kundi pati na rin para sa pagtukoy ng mga nakapagpapagaling na sangkap, enzymes, at mga hormone.

Contraindications para sa

Dahil sa katotohanan na ang pamamaraan ay nagsasangkot ng pag-aaral ng biological na materyal ng pasyente, hindi ito maaaring magkaroon ng negatibong epekto sa mga tao. Samakatuwid, walang mga kontraindiksiyon para sa paggamit.

Ang pag-aaral ay ganap na ligtas.

Ilalarawan namin sa ibaba kung paano isinasagawa ang isang serological test.

Mga indikasyon para sa pagsubok

Ang pamamaraan ay ginagamit upang matukoy ang causative agent ng impeksiyon, kabilang ang para sa mga sumusunod na sakit:

impeksyon sa HIV,
toxoplasmosis,
mga nakakahawang sakit na nakukuha sa pamamagitan ng pakikipagtalik;
dipterya,
Availability ;
brucellosis,
impeksyon sa staphylococcal,
hepatitis.

Ang pamamaraan ay ginagamit din upang makilala ang mga sumusunod na sakit:

opisthorchiasis,
amoebiasis,
cysticercosis,
giardiasis,
pulmonya.

Paghahanda para sa pamamaraan

Walang mga espesyal na paghahanda ang kinakailangan para sa pamamaraan. Isang kundisyon ang dapat sundin: ang blood sampling ay ginagawa sa walang laman na tiyan.

Ang algorithm para sa sampling (pagkuha) ng dugo (materyal) para sa serological testing ay inilarawan sa ibaba.

Nagsasagawa ng pagsusuri

Ang dugo ay kinuha mula sa ulnar vein. Upang gumana ang pag-aaral, ang dugo ay iginuhit hindi gamit ang isang hiringgilya, ngunit sa pamamagitan ng grabidad. Ang isang karayom na walang hiringgilya ay ipinasok sa isang ugat at hanggang sa 5 ml ng dugo ay nakolekta sa isang test tube.

Sa panahon ng pamamaraan, ang pasyente ay nakakaranas ng bahagyang kakulangan sa ginhawa habang ang karayom ay ipinasok sa ugat. Ang mga susunod na hakbang ay hindi naman nakakabahala.

Ang interpretasyon ng mga resulta ng isang serological blood test ay inilarawan sa ibaba.

Pag-decode ng mga resulta

Ang mga resulta na nakuha ay dapat isaalang-alang kasabay ng klinikal na larawan ng sakit, sinusuri ang pinaghihinalaang diagnosis gamit ang ilang mga pagsubok. Ito ay dahil sa ang katunayan na ang mga pagsusuri ay tiyak at kung minsan ay walang ganap na sensitivity sa mga nakakahawang sakit.

Ang presyo para sa isang komprehensibong serological blood test ay inilarawan sa ibaba.

Average na gastos ng pamamaraan

Ang presyo ng pamamaraan ay depende sa uri ng pag-aaral. Binubuo ito ng halaga ng pagsusuri at ang halaga ng mga antibodies sa isang partikular na pathogen. Ang average na gastos ng pamamaraan ay nasa loob ng 700 rubles.

Ang mga serological na reaksyon ay inilarawan sa video sa ibaba:

SEROLOHIKAL NA PAG-AARAL(Latin serum serum + Greek logos doctrine) - mga pamamaraan ng immunology na nag-aaral ng mga partikular na katangian ng dugo ng tao o hayop upang makilala ang mga antigen o antibodies gamit ang mga serological na reaksyon.

Simula ng S. at. inilatag sa pagtatapos ng huling siglo, pagkatapos na maitatag na ang kumbinasyon ng isang antigen na may isang antibody (tingnan ang Antigen - reaksyon ng antibody) ay sinamahan ng isang bilang ng mga phenomena na naa-access sa visual na pagmamasid - agglutination (tingnan), pag-ulan (tingnan ang ) o lysis. Mayroon na ngayong posibilidad ng tiyak na pagkilala sa mga antigens (tingnan) o antibodies (tingnan), kung ang isa sa mga sangkap na ito ay kilala.

Noong 1897, iniulat ni F. Vidal na ang serum ng dugo ng mga pasyenteng may typhoid fever ay pumipili ng agglutinate ng typhoid bacteria at samakatuwid ang reaksyong ito (tingnan ang Vidal reaction) ay maaaring gamitin sa laboratoryo. diagnosis ng typhoid fever. Sa parehong taon, ipinakita na ang mga filtrate ng mga kultura ng salot, typhoid at cholera bacteria, kapag pinagsama sa kaukulang immune sera, ay bumubuo ng mga natuklap, o namuo.

Ang reaksyon ng pag-ulan ay naging angkop para sa pagtuklas ng anumang mga antigen ng protina. Noong 1900-1901 Nalaman ni K. Landsteiner na sa mga erythrocytes ng tao mayroong dalawang magkaibang antigens (A at B), at sa serum ng dugo mayroong dalawang agglutinins (a at P), na nag-ambag sa paggamit ng reaksyon ng hemagglutination upang matukoy ang mga grupo ng dugo (tingnan).

Ang agglutination test upang matukoy ang pangkat ng dugo at Rh factor ay ginagamit sa obstetric practice, para sa mga pagsasalin ng dugo at tissue transplantation. Ang mga antibodies laban sa Rh factor (tingnan) ay hindi kumpletong antibodies; hindi sila may kakayahang direktang reaksyon sa Rh-positive erythrocytes, samakatuwid, upang makita ang mga ito, ang reaksyon ng Coombs ay ginagamit (tingnan ang reaksyon ng Coombs), batay sa pagtuklas ng hindi kumpletong antibodies gamit ang antiglobulin sera. Ang pansubok na serum ng dugo ay idinagdag sa mga pulang selula ng dugo na kilalang partikular, na sinusundan ng antiglobulin serum laban sa IgG (hindi direktang reaksyon ng Coombs). Ang mga fab fragment ng hindi kumpletong antibodies ng serum ng dugo sa ilalim ng pag-aaral ay nakakabit sa mga erythrocytes, at ang mga anti-IgG antibodies ay nakakabit sa mga libreng Fc fragment ng mga antibodies na ito, at nangyayari ang agglutination ng mga erythrocytes. Upang masuri ang hemolytic anemia, ang direktang reaksyon ng Coombs ay ginagamit. Sa katawan ng mga naturang pasyente, ang mga pulang selula ng dugo ay pinagsama sa mga antibodies na umiikot sa dugo laban sa Rh factor. Upang makilala ang mga ito, ang mga anti-IgG antibodies ay idinagdag sa mga pulang selula ng dugo na kinuha mula sa pasyente. Ang hitsura ng red blood cell aglutination ay nagpapatunay sa diagnosis ng sakit.

Ang hemagglutination inhibition reaction - HRI (tingnan ang Hemagglutination) - ay batay sa phenomenon ng prevention (inhibition) ng immune serum ng hemagglutination ng erythrocytes ng mga virus. Ang phenomenon ng viral hemagglutination ay hindi serol. reaksyon at nangyayari bilang resulta ng kumbinasyon ng virus sa mga red blood cell receptors, gayunpaman, ang HAI ay isang serological reaction na ginagamit upang makita at ma-titrate ang mga antiviral antibodies. Ang RTGA ay ang pangunahing paraan para sa serodiagnosis ng trangkaso, tigdas, rubella, beke, tick-borne encephalitis at iba pang mga impeksyon sa viral, ang mga sanhi ng ahente na may mga katangian ng hemagglutinating.

Ang reaksyon ng passive, o hindi direktang, hemagglutination. Gumagamit ito ng mga pulang selula ng dugo o mga neutral na synthetic na materyales (halimbawa, mga latex particle), sa ibabaw kung saan ang mga antigens (bacterial, viral, tissue) o antibodies ay na-sorbed (tingnan ang Boyden reaction). Ang kanilang agglutination ay nangyayari sa pagdaragdag ng naaangkop na sera o antigens. Ang mga pulang selula ng dugo na na-sensitize sa mga antigen ay tinatawag na antigenic erythrocyte diagnosticum at ginagamit upang tuklasin at i-titrate ang mga antibodies. Ang mga pulang selula ng dugo na may mga antibodies ay tinatawag na immunoglobulin erythrocyte diagnosticums (tingnan) at ginagamit upang makita ang mga antigen:

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit upang masuri ang mga sakit na dulot ng bacteria (typhoid at paratyphoid fever, dysentery, brucellosis, plague, cholera, atbp.), protozoa (malaria) at mga virus (influenza, adenoviral infections, tick-borne encephalitis, Crimean hemorrhagic fever. , atbp.). Ang sensitivity ng passive hemagglutination reaction ay hindi mas mababa sa paraan ng virus isolation para sa arenoviral disease (tingnan), lalo na para sa lymphocytic choriomeningitis. Ang viral antigen ng lymphocytic choriomeningitis ay nakita sa mga carrier ng virus (house mice) sa isang passive hemagglutination reaction na may mga pagsususpinde ng mga na-extract na organo na natunaw ng libu-libong beses. Sa kaso ng salmonellosis, ang reaksyon ng passive hemagglutination ay nakakakita ng bakterya sa isang konsentrasyon ng hanggang sa ilang daang microbial body sa 1 g ng mga feces; ang dysentery bacteria sa mga produktong pagkain ay napansin kapag mayroong hindi bababa sa 500 microbial body sa 1 g ng materyal.

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit sa pagsusuri at pag-iwas sa viral hepatitis B. Sa Unyong Sobyet, para makita ang HBs antigen (tingnan ang Australian antigen) sa dugo ng mga pasyenteng may talamak na hepatitis B, isang diagnosticum ang ginawa, na chicken erythrocytes. sensitized na may kambing immunoglobulin laban sa HBs antigen. Ang isang patak ng diagnosticum ay pinagsama sa isang pantay na dami ng serum ng dugo mula sa mga taong sinusuri, at kung ang HBs antigen ay naroroon dito, nangyayari ang agglutination. Ang reaksyon ay may kakayahang kumuha ng hanggang 1.5 ng/ml ng HBs antigen. Upang makita ang mga antibodies ng HBs, ang mga pulang selula ng dugo na may HBs antigen na naka-adsorb sa mga ito, na nakahiwalay sa dugo ng mga pasyente, ay ginagamit. Ginagamit din ang passive hemagglutination reaction upang matukoy ang hypersensitivity ng pasyente sa mga gamot at hormone, halimbawa, penicillin o insulin. Sa kasong ito, ang mga pulang selula ng dugo ng pangkat ng dugo ng tao 0 ay na-sensitize sa isang gamot at pagkatapos ay ginagamit upang makita ang mga agglutinin dito sa serum ng dugo ng pasyente.

Ang passive hemagglutination reaction ay ginagamit upang makita ang gonadotropic hormone sa ihi upang maitatag ang pagbubuntis (tingnan ang Chorionic gonadotropin). Upang gawin ito, ang karaniwang serum para sa hormone na ito ay inilubog sa ihi na sinusuri. Sa kasunod na pagdaragdag ng mga pulang selula ng dugo na may hormone na nasorbed sa kanila, ang agglutination ay hindi nangyayari (positibong tugon), dahil ang hormone na nakapaloob sa ihi ay neutralisahin ang mga agglutinating antibodies.

Mga reaksyon batay sa kababalaghan ng pag-ulan

Ginagamit ang mga ito upang matukoy ang iba't ibang uri ng antigens at antibodies. Ang pinakasimpleng halimbawa ng qualitative reaction ay ang pagbuo ng opaque precipitation band sa hangganan ng layering ng antigen sa antibody sa isang test tube. Ang iba't ibang uri ng reaksyon ng pag-ulan sa semi-liquid agar o agarose gels ay malawakang ginagamit (double immunodiffusion method ayon sa Ouchterlohn, radial immunodiffusion method, immunoelectrophoresis), na parehong qualitative at quantitative sa kalikasan (tingnan ang Immunodiffusion, Immunoelectrophoresis).

Upang magsagawa ng double immunodiffusion, ang isang layer ng natunaw na gel ay ibinuhos sa isang glass plate at, pagkatapos ng hardening, ang mga balon na may diameter na 1.5-3 mm ay pinutol. Ang mga antigen ng pagsubok ay inilalagay sa mga balon na matatagpuan sa isang bilog, at ang immune serum na kilala na tiyak ay inilalagay sa gitnang balon. Nagkakalat patungo sa isa't isa, ang homologous na sera at mga antigen ay bumubuo ng isang namuo. Sa radial immunodiffusion (gamit ang Mancini method), ang immune serum ay idinagdag sa agar. Ang antigen na inilagay sa mga balon ay kumakalat sa pamamagitan ng agar, at bilang resulta ng pag-ulan na may immune serum, ang mga opaque na singsing ay nabuo sa paligid ng mga balon, ang panlabas na diameter nito ay proporsyonal sa konsentrasyon ng antigen. Ang isang pagbabago sa reaksyong ito ay ginagamit sa pagsusuri ng trangkaso upang makilala ang IgM at IgG antibodies (tingnan ang Immunoglobulins). Ang antigen ng trangkaso ay idinagdag sa agar, at ang serum ng dugo ay idinagdag sa mga balon. Ang mga plato ay ginagamot ng immune sera laban sa IgM o IgG antibodies, na tumutulong upang makita ang reaksyon ng kaukulang antibodies na may mga antigen. Ang pamamaraan ay nagbibigay-daan sa iyo upang sabay na matukoy ang mga titer ng antibody at ang kanilang pag-aari sa isang tiyak na klase ng mga immunoglobulin.

Ang isang uri ng immunoelectrophoresis ay radioimmunophoresis. Sa kasong ito, pagkatapos ng electrophoretic separation ng antigens, ang unang immune serum na may label na radioactive iodine laban sa mga antigens na tinutukoy ay ibinubuhos sa isang groove cut parallel sa paggalaw ng antigens sa gel, at pagkatapos ay ang immune serum laban sa IgG antibodies ay ibinubuhos, ang mga gilid kung saan namuo ang mga nagresultang complex ng antibody na may antigen. Ang lahat ng hindi nakatali na reagents ay nahuhugasan, at ang antigen-antibody complex ay nakita ng autoradiography (tingnan).

Mga reaksyong may kasamang pandagdag. Ang mga reaksyong kinasasangkutan ng complement (tingnan) ay batay sa kakayahan ng complement na subcomponent na Cl(Clq) at pagkatapos ay iba pang mga complement na bahagi upang ikabit sa mga immune complex.

Ang complement fixation reaction ay nagpapahintulot sa mga antigen o antibodies na ma-titrate ayon sa antas ng complement fixation ng antigen-antibody complex. Ang reaksyong ito ay binubuo ng dalawang yugto: ang interaksyon ng antigen sa test blood serum (test system) at ang interaksyon ng hemolytic serum sa mga red blood cell ng tupa (indicator system). Kung positibo ang reaksyon, ang complement fixation ay nangyayari sa test system, at pagkatapos ay kapag ang mga erythrocytes na sensitized na may antibodies ay idinagdag, ang hemolysis ay hindi sinusunod (tingnan ang Complement fixation reaction). Ang reaksyon ay malawakang ginagamit para sa serodiagnosis ng visceral syphilis (tingnan ang reaksyon ng Wasserman) at mga impeksyon sa viral (tingnan ang Virological studies).

Cytolysis. Ang mga antibodies laban sa mga istruktura ng cellular ay maaaring, sa pakikilahok ng pandagdag, matunaw ang mga selulang nagtataglay ng mga istrukturang ito. Ang lisis ng mga pulang selula ng dugo ay madaling masuri sa antas at intensity ng paglabas ng hemoglobin. Ang nuclear cell lysis ay tinasa sa pamamagitan ng pagkalkula ng porsyento ng mga patay na selula na hindi nabahiran ng methylene blue. Ang radioactive chromium ay madalas ding ginagamit, na dati ay chemically bonded sa mga cell. Ang bilang ng mga nasirang cell ay tinutukoy ng dami ng hindi nakatali na chromium na inilabas sa panahon ng cell lysis.

Ang reaksyon ng radial hemolysis ng erythrocytes ay maaaring mangyari sa gel. Ang isang suspensyon ng mga pulang selula ng dugo ng tupa ay inilalagay sa isang agarose gel, pagdaragdag ng pandagdag; Ang mga balon ay ginawa sa layer na nagyelo sa salamin at ang hemolytic serum ay idinagdag sa kanila. Ang isang hemolysis zone ay bubuo sa paligid ng mga balon bilang resulta ng radial diffusion ng mga antibodies. Ang radius ng hemolysis zone ay direktang proporsyonal sa titer ng serum. Kung nag-adsorb ka ng anumang antigen sa mga erythrocytes, halimbawa, ang glycoprotein hemagglutinin ng influenza virus, rubella o tick-borne encephalitis, maaari mong i-reproduce ang phenomenon ng hemolysis na may immune sera sa mga virus na ito. Ang reaksyon ng radial hemolysis sa isang gel ay natagpuan ang aplikasyon sa pagsusuri ng mga impeksyon sa viral dahil sa kadalian ng paggawa nito, kawalan ng pakiramdam sa mga serum inhibitor, at ang kakayahang mag-titrate ng serum ng dugo ayon sa diameter ng hemolysis zone nang hindi gumagamit ng mga serial dilution.

Immune adhesion. Ang mga pulang selula ng dugo, mga platelet at iba pang mga selula ng dugo ay may mga receptor para sa ikatlong bahagi ng complement (C3) sa kanilang ibabaw. Kung ang naaangkop na immune serum at complement ay idinagdag sa isang antigen (bacteria, virus, atbp.), isang antigen-antibody complex na pinahiran ng C3 component ng complement ay nabuo. Kapag hinaluan ng mga platelet, dahil sa C3 component ng complement, ang antigen-antibody complex ay titira sa mga cell at magiging sanhi ng kanilang agglutination (tingnan ang Immune adhesion). Ang reaksyong ito ay ginagamit upang matukoy ang mga antigen ng HLA system (tingnan ang Transplantation immunity) at sa pag-aaral ng isang bilang ng mga viral infection (tick-borne encephalitis, dengue fever), na sinamahan ng immunopathol. mga proseso at sirkulasyon sa dugo ng mga viral antigen kasama ng mga antibodies.

Ang reaksyon ng neutralisasyon ay batay sa kakayahan ng mga antibodies na i-neutralize ang ilang partikular na function ng macromolecular o natutunaw na antigens, halimbawa, aktibidad ng enzyme, bacterial toxins, at pathogenicity ng mga virus. Sa bacteriology, ang reaksyong ito ay ginagamit upang makita ang mga antistreptolysin, antistreptokinase at antistaphylolysin. Ang reaksyon ng neutralisasyon ng mga lason ay maaaring masuri ng biol. epekto, halimbawa, ang antitetanus at antibotulinum serum ay na-titrated (tingnan ang Toxin - antitoxin reaction). Ang pinaghalong lason at antiserum na ibinibigay sa mga hayop ay pumipigil sa kanilang kamatayan. Ang iba't ibang bersyon ng reaksyon ng neutralisasyon ay ginagamit sa virology. Sa pamamagitan ng paghahalo ng mga virus sa naaangkop na antiserum at pag-iniksyon ng halo na ito sa mga hayop o mga kultura ng cell, ang pathogenicity ng mga virus ay neutralisado.

Mga reaksyon gamit ang kemikal at pisikal na mga label

Ang immunofluorescence, na binuo ni A. N. Coons noong 1942, ay ginagamit para sa serol. mga reaksyon ng sera na may label na fluorochrome (tingnan ang Immunofluorescence). Ang serum na may label na fluorochrome ay bumubuo ng isang antigen-antibody complex na may antigen, na nagiging accessible sa pagmamasid sa ilalim ng mikroskopyo sa ultraviolet rays, na nagpapasigla sa fluorochrome. Ang direktang reaksyon ng immunofluorescence ay ginagamit upang pag-aralan ang mga cellular antigens, tuklasin ang virus sa mga nahawaang selula, at tuklasin ang bakterya at rickettsiae sa mga pahid. Kaya, upang masuri ang rabies, ang mga kopya ng mga piraso ng utak ng mga hayop na pinaghihinalaang nagdadala ng virus ay ginagamot ng luminescent na anti-rabies serum. Kung positibo ang resulta, ang mga bukol ng maliwanag na berdeng kulay ay sinusunod sa protoplasm ng mga selula ng nerbiyos. Ang mga express diagnostics ng influenza, parainfluenza at adenoviral infection ay batay sa pagtuklas ng mga viral antigen sa mga fingerprint cells mula sa nasal mucosa.

Ang mas malawak na ginagamit na pamamaraan ay hindi direktang immunofluorescence, na batay sa pagtuklas ng antigen-antibody complex gamit ang luminescent immune serum laban sa IgG antibodies at ginagamit upang makita hindi lamang ang mga antigen, kundi pati na rin ang titrate antibodies. Ang pamamaraan ay natagpuan ang aplikasyon sa serodiagnosis ng herpes, cytomegalips, at Lassa fever. Sa laboratoryo, ang isang stock ng paghahanda ng mga cell na naglalaman ng antigen, halimbawa, ang mga cell ng VERO na lumaki sa mga piraso ng manipis na salamin at nahawaan ng virus o mga fibroblast ng manok na naayos na may acetone ay dapat na naka-imbak sa -20°. Ang test blood serum ay naka-layer sa mga paghahanda, ang paghahanda ay inilalagay sa isang termostat sa f 37° upang bumuo ng mga immune complex, at pagkatapos, pagkatapos hugasan ang mga unbound reagents, ang mga complex na ito ay makikita na may label na luminescent serum laban sa mga globulin ng tao. Sa pamamagitan ng paggamit ng may label na immune sera laban sa IgM o IgG antibodies, posibleng makilala ang uri ng antibodies at matukoy ang maagang immune response sa pamamagitan ng pagkakaroon ng IgM antibodies.

Sa paraan ng enzyme-immunological, ginagamit ang mga antibodies na pinagsama sa mga enzyme, ch. arr. malunggay peroxidase o alkaline phosphatase. Upang makita ang kumbinasyon ng may label na serum na may antigen, isang substrate ang idinagdag na nabubulok ng enzyme na nakakabit sa serum, na gumagawa ng kulay dilaw-kayumanggi (peroxidase) o dilaw-berde (phosphatase). Ginagamit din ang mga enzyme na nabubulok hindi lamang chromogenic, kundi pati na rin ang mga lumogenic substrates. Sa kasong ito, na may positibong reaksyon, lumilitaw ang isang glow. Tulad ng immunofluorescence, ang enzymatic immunological na paraan ay ginagamit upang makita ang mga antigen sa mga cell o mag-titrate ng mga antibodies sa mga cell na naglalaman ng antigen.

Ang pinakasikat na uri ng paraan ng enzyme-immunological ay immunosorption. Sa isang solidong carrier, na maaaring selulusa, polyacrylamide, dextran at iba't ibang mga plastik, ang antigen ay nasisipsip. Kadalasan, ang ibabaw ng mga balon ng micropanel ay nagsisilbing carrier. Ang test blood serum ay idinaragdag sa mga balon na may sorbed antigen, pagkatapos ay ang enzyme-labeled antiserum at substrate. Ang mga positibong resulta ay isinasaalang-alang sa pamamagitan ng mga pagbabago sa kulay ng likidong daluyan. Upang makita ang mga antigen, ang mga antibodies ay inilalagay sa carrier, pagkatapos ay idinagdag ang materyal sa pagsubok sa mga balon at ang reaksyon ay isinasagawa gamit ang isang enzyme na may label na antimicrobial serum.

Ang radioimmunological method ay batay sa paggamit ng radioisotope labels ng antigens o antibodies. Ito ay orihinal na binuo bilang isang tiyak na paraan para sa pagsukat ng mga antas ng mga hormone na nagpapalipat-lipat sa dugo. Ang sistema ng pagsubok ay isang isotope-label na hormone (antigen) at antiserum dito. Kung ang isang materyal na naglalaman ng ninanais na hormone ay idinagdag sa naturang antiserum, ito ay magbibigkis sa bahagi ng mga antibodies; sa kasunod na pagdaragdag ng isang may label na titrated hormone, ang isang pinababang halaga nito ay magbubuklod sa mga antibodies kumpara sa kontrol. Ang resulta ay tinasa sa pamamagitan ng paghahambing ng mga kurba ng nakatali at hindi nakatali na radioactive tracer. Ang ganitong uri ng pamamaraan ay tinatawag na isang mapagkumpitensyang reaksyon. Mayroong iba pang mga pagbabago sa pamamaraang radioimmunological. Ang radioimmunological na pamamaraan ay ang pinaka-sensitibong paraan para sa pagtukoy ng mga antigen at antibodies, na ginagamit para sa pagpapasiya ng mga hormone, gamot at antibiotics, para sa pagsusuri ng bacterial, viral, rickettsial, protozoal na sakit, para sa pag-aaral ng mga protina ng dugo, tissue antigens.

Mga paghahambing na katangian at paggamit ng mga pamamaraan ng serological na pananaliksik sa medikal na kasanayan

Pamamaraan S. at. ay patuloy na pinapabuti upang mapataas ang sensitivity at versatility ng paggamit. Sa una ay serol. ang diagnosis ay batay sa pagtuklas ng mga antibodies. Sa pagdating ng kalagitnaan ng ika-20 siglo. Ang immunofluorescence at passive hemagglutination na mga reaksyon, na mas sensitibo, ay naging posible upang makita hindi lamang ang mga antibodies, kundi pati na rin ang antigen nang direkta sa materyal mula sa mga pasyente. Ang mga pamamaraan ng enzyme-immunological at radioimmunological, na 2-3 order ng magnitude na mas sensitibo kaysa sa immunofluorescence at passive hemagglutination, ay malapit sa mga biological na pamamaraan. pagtuklas ng bakterya at mga virus. Ang saklaw ng kanilang aplikasyon para sa pagtuklas ng parehong antigens at antibodies ay theoretically unlimited.

Impormasyon ng serodiagnosis. ang mga sakit ay batay sa paglitaw ng mga antibodies sa isang nakahiwalay o pinaghihinalaang pathogen, hindi alintana kung ang pathogen ay nakita sa talamak na yugto ng sakit. Ang mga pares ng serum ng dugo na kinuha sa simula ng sakit at 2-3 linggo mamaya ay sinusuri. mamaya. Ang pagtaas ng mga antibodies sa pangalawang serum ng dugo ng hindi bababa sa 4 na beses kumpara sa una ay makabuluhang diagnostic. Mahalaga rin kung aling klase ng mga immunoglobulin ang kinakatawan ng mga antibodies. Ang mga antibodies ng IgM ay napansin sa pagtatapos ng talamak na panahon ng sakit at sa maagang yugto ng paggaling. Lumilitaw ang mga antibodies ng IgG mamaya sa paggaling at umiikot nang mahabang panahon. Kung ang IgM antibodies sa rubella virus ay napansin sa isang babae sa unang tatlong buwan ng pagbubuntis, ito ay nagsisilbing batayan para sa pagwawakas ng pagbubuntis, dahil sa panahong ito ang fetus ay lalong sensitibo sa virus. Na may iba't ibang inf. sakit, ang pinaka-tiyak at maginhawang pamamaraan ay piling ginagamit.

S. at. malawakang ginagamit sa epidemiology. Ang sistematikong pagkolekta at pagsusuri ng mga sample ng dugo mula sa iba't ibang pangkat ng populasyon ay ginagawang posible na maunawaan ang mga kontak ng populasyon na may pinagmulan ng mga nakakahawang ahente. mga sakit. Ang pag-aaral sa antas ng collective immunity ay nagbibigay-daan sa amin na matukoy ang mga grupong may mataas na peligro at magplano ng mga aktibidad sa pagbabakuna, at pag-aralan ang heograpikong pagkalat ng mga impeksyon. S. at. ginawang posible ng iba't ibang pangkat ng edad ng populasyon, halimbawa, upang matukoy nang retrospektibo ang sirkulasyon ng iba't ibang variant ng influenza virus sa ilang partikular na yugto ng panahon.

S. at. ay may malaking kahalagahan sa pag-aaral ng mga namamana na sakit (tingnan) at mga sakit na autoimmune, na sinamahan ng paglitaw ng mga tissue-at organ-specific antibodies na sumisira sa kaukulang mga target na selula, pati na rin sa oncology para sa pagtuklas ng mga antigens ng tumor. Kaya, ang immunodiagnosis ng kanser sa atay ay batay sa pagpapasiya ng alpha-fetoprotein at iba pang embryonic antigens sa serum ng dugo ng mga pasyente gamit ang immunodiffusion method at radioimmunological method.

Makabuluhang siyentipikong pag-unlad sa pag-aaral ng pinong antigenic na istraktura ng cellular antigens, antigens ng bacteria at virus ay nakakamit sa pamamagitan ng paggamit ng serol. mga reaksyon ng monoclonal antibodies, na maaaring makuha sa mga indibidwal na determinant ng antigen.

Bibliograpiya: Mga pamamaraan ng pananaliksik sa immunology, ed. I. Lefkovits at B. Pernis, trans. mula sa English, M., 1981; Gabay sa immunology, ed. O. E. Vyazova at Sh. X. Khodzhaeva, M., 1973; Gabay sa Clinical Laboratory Diagnostics, ed. V.V. Menshikov, M., 1982; Immunology, ed. ni J.-F. Bach, N. Y., 1978.

S. Ya. Gaidamovich.