10.1. Семейство Neisseriaceae

К семейству Neisseriaceae относятся 4 рода: Neisseria, Moraxella (с подродами Moraxella и Branhamella), Acinetobacter и Kingella .

Род Neisseria включает 14 видов, из них для человека патогенны возбудители гонореи и менингокковых инфекций – N. gonorrhoeae и N. meningitidis . Среди остальных родов больше сапрофитов, хотя в последние годы появилось много случаев ангин, менингитов, отитов, конъюнктивитов, вызванных бактериями родов Moraxella и Acinetobacter.

Менингококки

Семейство Neisseriaceae , род Neisseria, вид Neisseria meningitidis .

Вызывают острое инфекционное антропонозное заболевание, протекающее в виде менингита, менингококкового сепсиса или назофарингита.

Морфология и свойства . Грамотрицательные парные кокки бобовидной формы, неподвижны, имеют капсулу и пили. Очень требовательны к условиям культивирования. Растут на средах с нативным белком (сывороточный, шоколадный или кровяной агары) и повышенной влажностью; среда должна быть свежей и подогретой. Оптимум температуры 37 0 С. Для культивирования необходимо наличие 5-10% углекислоты. На плотных средах образуют прозрачные, бесцветные колонии, возможна диссоциация на R- и S-формы. Разлагают до кислоты глюкозу и мальтозу, выделяют оксидазу, каталазу, дают положительную пробу с КОН, выделяют цитохромоксидазу.

Антигены: группоспецифические АГ – гликопротеиды; родовые АГ – белки, полисахариды – общие для всего рода нейссерий; видовые АГ белковой природы. По капсульным и полисахаридным антигенам все менингококки подразделены на серогруппы (А, В, С, D, Х, V, Z, 29Е, W135, Н, J, К, L), С и V вызывают спорадические заболевания. Наиболее вирулентными являются менингококки из группы А, В, С, Х, W135. По белковому антигену наружной мембраны клеточной стенки они подразделяются на серовары (1,2,3,4…20).

Факторы патогенности и вирулентности:

– эндотоксин – липополисахарид клеточной стенки, оказывает пирогенный и сенсибилизирующий эффект;

– капсула – защищает от фагоцитов и антител;

– пили, обеспечивающие адгезию возбудителя к эпителию слизистой оболочки носоглотки и мозговых оболочек;

– IgА-протеазы – разрушают секреторный Ig А в области шарнирной части, подавляют местный иммунитет;

– гиалуронидаза и нейраминидаза – факторы инвазии;

– факторы, обеспечивающие персистенцию в фагоцитах.

Менингококки малоустойчивы во внешней среде, чувствительны к дезинфицирующим средствам, к низким температурам.

Характеристика заболевания

Источник инфекции: больные и бактерионосители.

Путь передачи – воздушно-капельный, в меньшей степени контактный, входные ворота – носоглотка.

Патогенез . Менингококки адсорбируются на эпителии, вызывают вначале местный процесс в виде воспаления задней стенки глотки. В дальнейшем возбудитель проникает в кровь, частично гибнет под действием бактерицидных факторов крови, высвобождается эндотоксин, который наряду с другими факторами патогенности вызывает клинические проявления, возможен эндотоксический шок.

Клинические формы:

Менингит – гнойное поражение мягких мозговых оболочек. Характерно повышение температуры, головная боль, рвота, менингеальный синдром, поражение черепно-мозговых нервов. Летальность до 3%, особенно при молниеносных формах с выраженным эндотоксическим шоком. Все крупные вспышки были вызваны менингококками серогруппы А и С. После создания эффективных вакцин наибольшую роль играют менингококки серогруппы В, остальные менингококки вызывают спорадические заболевания.

Менингококцемия (сепсис) – лихорадка, озноб, головная боль, обильная сыпь за счет поражения сосудистой стенки поверхностных сосудов в виде «синеватых паучков», поражаются надпочечники, нарушается свертывающая система крови.

Менингококковый назофарингит сходен с обычным катаральным воспалением верхних дыхательных путей.

Возможно бессимптомное носительство менингококков.

Иммунитет после заболеваний стойкий, гуморальный. Элиминация возбудителя осуществляется комплементсвязывающими антителами за счет активации комплемента по классическому пути. У новорожденных пассивный естественный иммунитет от матери сохраняется до 3-5 месяцев.

Лабораторная диагностика

Материал зависит от формы инфекционного процесса. Исследуют ликвор, кровь, слизь из носоглотки при любой форме заболевания. Материал для исследования берут до начала лечения антибиотиками и предохраняют его от неблагоприятных факторов, особенно колебаний температуры. Ликвор в норме прозрачный и при пункции вытекает каплями, при менингите он мутный и вытекает струей под давлением.

Микроскопический метод . Готовят мазки из осадка ликвора, окрашивают по Граму и выявляют грамотрицательные парные кокки внутри фагоцитов и вне их.

Для выявления антигена в ликворе ставят реакцию преципитации, пассивной гемагглютинации с антительным эритроцитарным диагностикумом, а также РИФ.

Бактериологический метод . Делают посев на кровяной, сывороточный или шоколадный агар, инкубируют при температуре 37 0 С и доступе углекислоты в течение 24 часов, идентифицируют культуру по культуральным, морфологическим и биохимическим свойствам. Дополнительно в реакции агглютинации определяют серогруппу, а в реакции преципитации серовар.

Дифференцируют менингококки от других видов нейссерий – частых обитателей слизистых верхних дыхательных путей.

Серологический метод используют при стертых формах менингококковых инфекций. Выявляют антитела в РПГА или ИФА.

Профилактика : выявление и санация носителей, изоляция и лечение больных, дезинфекция помещений, где был больной до госпитализации.

По эпидпоказаниям вводят химическую вакцину из высокоочищенных полисахаридных фракций менингококков группы А, С, V, W135.

Лечение . Антибиотикотерапия (бета-лактамные антибиотики, рифампицин, левомицетин и др.) и витамины.

10.2. Гонококки

Семейство Neisseriaceae , род Neisseria , вид N.gonorrhoeae .

Neisseria gonorrhoeae вызывают тяжелое гнойно-воспалительное поражение урогенитального тракта – гонорею и бленнорею (гонококковый конъюнктивит новорожденных, которые инфицируются при прохождении через родовые пути больной матери). Возбудитель был открыт в 1879 г. немецким ученым А.Нейссером. С его именем связано название всего семейства – Neisseriaceae.

Морфология и свойства . Гонококки мелкие грамотрицательные парные кокки бобовидной формы, не имеют спор, жгутиков. У них есть капсула и пили, которые обеспечивают адсорбцию возбудителя на цилиндрическом эпителии урогенитального тракта. Авирулентные штаммы гонококков не имеют пилей.

Культуральные свойства . Гонококки очень прихотливы к питательным средам. Растут только на средах с человеческим белком (кровяной, сывороточный, асцитический агары), рН среды 7,2-7,4, оптимальная температура роста 37 0 С. На этих средах гонококки могут давать два вида колоний. Вирулентные особи, имеющие пили, образуют мелкие, блестящие, бесцветные колонии Р+ и Р++ (раньше их называли Т-1 и Т-2). Авирулентные культуры дают рост более крупных колоний, они обозначаются Р-. На жидких средах рост диффузный. Может образовываться пленка, которая постепенно оседает на дно. Длительность роста 24-48 часов. По типу дыхания гонококки являются аэробами, но для роста первых генераций необходимо наличие 5-10% углекислоты. На кровяном агаре не дают гемолиза.

Биохимические свойства . Выделяют каталазу, оксидазу, разлагают глюкозу до кислоты, не образуют аммиака, индола, сероводорода.

Антигены: детерминанты пилей (фимбриальные антигены) хорошо выражены у вирулентных особей гонококков; выделяют также липополисахаридный антиген.

Распространение . Гонококки очень неустойчивы к действию факторов окружающей среды. Разрушаются при температуре выше 40 0 С и резком охлаждении, чувствительны к нитрату серебра в разведении 1:10 000, к 1% раствору фенола, 0,05% раствору хлоргексидина, к антибиотикам.

Факторы вирулентности:

Вырабатывают IgА-протеазу, которая расщепляет секреторные IgА в их шарнирной части, следовательно, нарушается местный иммунитет;

Выражен незавершенный фагоцитоз;

Капсула оказывает антифагоцитарное действие;

Пили обеспечивают адгезию гонококков на ворсинках цилиндрического эпителия;

Липополисахарид и белки клеточной оболочки обладают сильными иммуногенными свойствами и токсичным действием (эндотоксин);

Поверхностные протеины I и II классов способствуют прикреплению гонококков к эпителиальным клеткам и ингибируют фагоцитоз;

Гонококки имеют плазмиды F, R, Col, которые обеспечивают изменчивость, устойчивость к многим антибиотикам и выработку бактериоцинов, обеспечивающих антагонизм.

Грамотрицательные кокки семейства Neisseria: менингококки, гонококки. Возбудители негонококковых урогенитальных инфекций, хламидии, уреаплазмы Кыргызская Государственная Медицинская Академия Кафедра микробиологии, вирусологии и иммунологии Д. м. н. , проф. Адамбеков Д. А. 1

ПЛАН: 1. Общая характеристика 2. Морфология 3. Культуральные свойства, биохимическая активность 4. Антигенная структура, классификация 5. Факторы патогенности 6. Устойчивость 7. Эпидемиология 8. Патогенез, клиника. 9. Иммунитет. 10. Микробиологическая диагностика. 2 11. Лечение и профилактика.

Нейссерии – грамотрицательные аэробные кокки, относятся к роду Neisseria menibgitisis (мениногококки), Neisseria gonorrhoae (гонококки), Neisseria flava, N. subflava, N. perflava, N. sicca, N. mucosa, N. flavescens. Обитают на слизистых оболочках человека и млекопитающих; 7 видов встречаются у человека, из них 5 видов являются представителями нормофлоры носоглотки и верхних дыхательных путей. 3

Морфология. Грамоотрицательные неспорообразующие кокки диаметром 0, 6 -1, 0 мкм, неподвижны. Отличаются склонностью к образованию пар и тетрад, связанной с делением клеток в двух плоскостях; обращенные друг к другу поверхности бывают утолщены. 4

5

Культуральные свойства. Аэробы, хемоорганотрофы. Температурный оптимум роста – 35 -37°С, патогенные виды могут расти в интервале температур 24 -41°С, а непатогенные способны к росту при температурах ниже 24°С. Оптимум р. Н 6 -8. патогенные виды прихотливы к условиям культивирования, не растут на обычных питательных средах; непатогенные виды менее прихотливы. 6

Антигенная структура. Все виды нейссерий имеют полисахаридный соматический О-АГ; штаммы, образующие капсулу, также имеют капсульный антиген. Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны. Патогенными для человека являются менингококки и гонококки. 7

Устойчивость в окружающей среде низкая, поэтому в культурах старше 1 -2 суток практически не содержится живых клеток. Клинический материал транспортируют в лабораторию в утепленных контейнерах при 30 -35°С. Чувствительны к действию обычно применяемых антисептиков и дезинефектантов. Высокочувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, стрептомицину. 8

Менингококки (Neisseria meningitidis)– вид грамотрицательных диплококков рода Neisseria; вызывают менингококковую инфекцию. Человек – единственный природный хозяин. Путь передачи – воздушно-капельный необходимо дифференцировать патогенные менингококки от других видов нейссерий (N. sicca и N. mycosa), являющихся комменсалами ротоглотки. 9

Менингококковая инфекция – это острое инфекционное заболевание, вызываемое Neisseria meningitidis, которое передается воздушнокапельным путем и характеризуется локальным поражением слизистой оболочки носоглотки с последующей генерализацией в виде менингококковой септицемии (менингококцемия) и воспаления мягких мозговых оболочек (менингококковый менингит) 10

11

Морфология Менингококки – грамотрицательные диплококки (до 1 мкм в диаметре), располагающиеся в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Неподвижны. Имеют пили, микрокапсулу; капсула непостоянна. Аэробы. Повышенная концентрация углекислого газа стимулирует рост менингококков. 12

Факторы Биологический эффект вирулентнос ти Эндотоксин Опосредует большинство клинических проявлений Пили (белок Прикрепление менингококков к пилин) клеткам человека, главным образом, к эпителию носоглотки оболочек мозга Капсула Антифагоциарная активность Ig. A-протеазы Расщепление молекулы Ig. A в шарнирной области, что защищает бактерии от действия 13 антител

Культуральные свойства. Строгий аэроб. Капнофил. Очень требователен к питательным средам и условиям культивирования. На простых питательных средах не растет, поэтому для его культивирования к основным средам добавляют нативные белки (сыворотка, кровь, яичный желток и др.). В качестве источников углерода и азота используют аминокислоты. 14

Температурный оптимум роста 37°С, рост наблюдается в пределах 30 -38°С. Повышенная концентрация СО 2 и влажность стимулируют рост менингококков. На сывороточном агаре образует круглые бесцветные нежные колонии маслянистой консистенции диаметром от 0, 5 до 1, 5 мм. В отлличие от условно-патогенных нейссерий не образует пигмента. 15

Биохимическая активность низкая. Разлагает глюкозу и мальтозу до кислоты, не разжижает желатин, не образует индол и сероводород, не восстанавливает нитраты. 16

Антигенная структура. Имеет несколько АГ: родовые, общие для рода нейссерий (белковые и полисахаридные, которым представлены-полимерами аминосахаров и сиаловых кислот); видовой (протеиновый); группоспецифические (гликопротеидный комплекс); типоспецифические (белки наружной мембраны). 17

Факторы патогенности. Основной фактор патогенности – капсула, защищающая менингококки от различных воздействий, в первую очередь от фагоцитоза АТ, образующиеся к полисахаридам капсулы, проявляют бактерицидные свойства. Токсические проявления менингококковой инфекции обусловлены высокотоскичным эндотоксином, который по летальности для лабораторных животных сравним с 18

Устойчивость в окружающей среде. Слабо устойчив к внешним воздействиям, в оптимальных условиях на плотных и жидких средах культура гибнет через 48 -72 ч, на полужидких средах сохраняется до месяца (рекомендуют сохранять на среде Дорсе, полужидком агаре и среде со сливками). Наиболее приемлемый способ концентрации культуры – лиофильное высушивание. 19

Эпидемиология. Экологической нишей для менингококка является слизистая оболочка носоглотки человека. Источник инфекции – больной человек или носитель. Различают три группы источников инфекции: больные генерализованными формами (около 1% от общего числа инфицированных лиц), больные назофарингитом (1020% от общего числа инфицированных лиц) и здоровые носители. 20

Патогенез. Менингококки внедряются в организм человека через слизистые оболочки носоглотки. Размножаясь, они формируют первичный очаг воспаления. По окончаниям обонятельного нерва воспалительный процесс может распространяться на оболочке мозга. 21

Клиника. Менингококковая инфекция клинически протекает в локализованной форме: менингококконосительство, острый назофарингит или в генерализованной форме: менингококцемия, менингит, менингоэнцефалит, эндокардит, артрит, полиартрит, иридоциклит, пневмония. 22

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах инфекции довольно стойкий, повторные случаи заболевания почти не наблюдаются, однако иммунитет носит гуморальный и группоспецифический характер. 23

Микробиологическая диагностика. Выбор материала для исследования обусловлен клинической формой болезни. Материалом для исследования служат носоглоточная слизь (от больных и носителей), ликвор, кровь, гной с мозговых оболочек, соскоб из элементов гемморагической сыпи на коже и др. 24

Для микробиологической диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы. Бактериоскопическое исследование ликвора и крови позволяет определить наличие возбудителя. При наличии гнойного ликвора готовят мазки без предварительной обработки; если ликвор прозрачный или мутный, его центрифугируют при 3500 об/мин в течение 5 мин. 25

Бактериологическое исследование проводят с целью выделения и идентификации чистой культуры менингококка. Бактериологическому исследованию подвергают носоглоточную слизь, кровь и ликвор. Посев материала для получения чистой культуры производят на плотные или полужидкие питательные среды, содержащие сыворотку, кровь или асцитическкую жидкость. 26

Серологический метод используют для обнаружения растворимых бактериальных АГ в ликворе и других видах исследуемого материала или АТ в сыворотке крови. Для обнаружения АГ применяют ИФА, РИА, иммуноэлекрофорез, реакцию коагглютинации. У больных менингококковой инфекцией АТ обнаруживаются с конца первой недели болезни, достигая максимума на 2 -3 -й неделе, а затем их титр снижается. 27

Лечение. Препарат выбора – бензилпенициллин, эффективны также полусинтетические пенициллины (ампициллин, оксациллин). Оптимально назначение антибиотиков в сочентании с диуретиками. При непереносимости пенициллинов назначают левомицетин или рифампицин. 28

Профилактика. Проводится комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции: больных необходимо выявлять, изолировать и лечить; носителей – выявлять и санировать. Проводится бактериологическое исследование в окружении больного с целью выявления здоровых носителей менингококков. Выявленные носители санируются антибиотиками. 29

Применяется менингококковая химическая полисахаридная вакцина серогрупп А, В, С. Перспективна поливалентная менингококковая вакцина с полисахаридами 30

Гонококковая инфекция – это острое или хроническое инфекционное заболевание человека, вызываемое Neisseria gonorrhoeae, которое предается половым путем и характеризуется гнойным воспалением слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз) бленнорея, других органов, интоксикацией. 31

32

Заболевания: уретрит, цервицит, сальпингит, проктит, бактериемия, артрит, конъюнктивит, фарингит. Источник инфекции – больной человек. Возбудитель передается половым путем, реже через предметы обихода. При бленнорее заражение новорожденного происходит через инфицированные родовые пути матери. 33

Морфология. Неподвижные аспорогенные грамотрицательные диплококки (средний размер клетки 1, 25 -1, 0 х0, 7÷ 0, 8 мкм), образующие капсулу. Полиморфны – встречаются более мелкие или более крупные клетки, а также палочковидные формы. Хорошо окрашиваются анилиновыми красителями (метиленовым синим, бриллиантовым зеленым и др.), цитоплазма имеет осмиефильные включения. 34

Культуральные свойства. Аэробы, хемоорганотрофы; для роста требуют свежеприготовленных влажных питательных сред с добавлением нативных белков крови; широко используют безасцитные среды (например, среда КДС-1 с гидролизатом казеина, дрожжевым аутолизатом и нативной сывороткой); оптимум р. Н 7, 2 -7, 4, температуры - 37°С. 35

Биохимическая активность крайне низкая. Разлагают только глюкозу с образованием кислоты, измененные формы иногда не ферментируют ни одного углевода, продуцируют каталазу и цитохромоксидазу. Протеолитическая активность отсутствует, аммиака, сероводорода и индола не образуют. 36

Антигенная структура сложная. Содержат соматический и капсульный антигены. ЛПС проявляют сильные иммуногенные свойства; основной пул антител, синтезируемых в организме составляют Ig к ЛПС, которые обладают бактерицидным действием. Основную антигенную нагрузку несут пили и поверхностные белки наружной мембраны. 37

Факторы патогенности. Капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны, протеазы. Все свежевыделенные культуры имеют капсулу, которая обладает антифагоцитарным действием (препятствует прямому контакту микробицидных субстанций с клеточной стенкой, маскирует её антигенные детерминанты). АТопсонины к АГ капсулы стимулируют фагоцитоз гонококков. 38

Факторы вирулентности Биологический эффект Пили (белок пилин) Прикрепление гонококков к эпителию влагалища фаллопиевых труб и полости рта Капсула Антифагоцитарная активность Белки наружной мембраны: Протеин I Способствует внутриклеточному выживанию бактерий, препятствуя слиянию лизосом с фагосомой нейтрофилов Протеин II Опосредует плотное прикрепление к эпителиальным клеткам и инвазию внутрь клеток Протеин III Защищает поверхностные антигены LOS Липоолигосахарид обладает свойствами эндотоксина Ig. A 1 -протеаза Разрушает Ig. A 1 -протеаза Бета-лактамаза Гидролизует бета-лактамное кольцо пенициллинов 39

Устойчивость в окружающей среде. Гонококки очень неустойчивы во внешней среде, что следует помнить при заборе и транспортировке исследуемого клинического материала. Чувствительны к действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов, особенно к солям тяжелых металлов. Высокочувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, стрептомицину. 40

Эпидемиология. Термин «гонорея» ввел Талон во II в. Н. э. , хотя заболевание известно очень давно; во всяком случае, в вавилонских, ассирийских и греческих мифах упоминается болезнь, являющаяся судя по описанию клинической картины гонореей. В настоящее время гонорею относят к наиболее распространенным инфекционным заболеваниям, передаваемым половым путем. 41

Патогенез. Входными воротами для возбудителя служит цилиндрический эпителий уретры, шейки матки конъюнктивы и прямой кишки. Взаимодействие гонококков с эпителиальными клетками опосредовано пилями, взаимодействующими с рецепторами эпителиальных клеток, что имеет решающее значение в развитии инфекции. 42

Клиника. Гонококковая инфекция проявляется в виде гнойного воспаления слизистой оболочки мочеполовых путей (гонорея), конъюнктивы глаз (бленнорея), других органов. Инкубационный период 2 -4 дня. 43

Заболевание характеризуется резью при мочеиспускании, выделению гноя из уретры. Заболевание имеет тенденцию к переходу в хроническую бессимптомную форму. Нелеченая гонорея является одной из основных причин бесплодия как у мужчин, так и у женщин. Нелеченая бленнорея ведет к слепоте. 44

Иммунитет по своему механизму – нестерильный, практически отсутствует после перенесенного заболевания, поэтому часто регистрируются повторные заболевания. 45

Микробиологическая диагностика. Материалом для исследования служит гнойное отделяемое из уретры, влагалища и шейки матки, из прямой кишки и глотки (Neisseria gonorrhoae часто обнаруживают при бессимптомном течении болезни в отделяемом из прямой кишки у женщин и мужчин-гомосексуалистов), с конъюнктивы глаза (при бленнорее), а также сыворотка крови. 46

Для диагностики применяют бактериоскопический, бактериологический и серологический методы. Бактериоскопическое исследование является основным методом диагностики острой гонореи и бленнореи. Готовят два мазка, один из которых окрашивают по Граму, а второй – метиленовым синим, и микроскопируют. 47

Бактериологическое исследование проводят в тех случаях, когда гонококки в мазках не обнаруживают или находят атипичные, измененные формы. Культуральный метод позволяет выявлять гонококки в 4, 5 -4, 0 раза чаще, чем бактериоскопический меод. 48

Серологический метод используют при хронической гонорее, при отсутствии у больного выделений. Проводят РСК по Борде-Жангу по стандартной схеме, которая бывает положительной с 3 -4 недели болезни. 49

Лечение. Характер терапии зависит от формы заболевания (острая или хроническая), топического диагноза, наличия осложнений и состояния организма. При острой и подострой гонорее обычно применяют препараты пенициллина. Другие антибиотики, как правило, применяют при непереносимости пенициллина. 50

Профилактика. Проводится комплекс мер, направленных на ликвидацию источника инфекции: больных необходимо выявлять и лечить. Особое внимание следует уделить активному выявлению больных гонореей среди пациентов урологических клиник, мужей и женщин, страдающих воспалительными заболеваниями неясной этиологии, в обязательном порядке обследовать всех членов семьи больного гонореей, декретированных групп населения (работники детских дошкольных учреждений и общепита) перед поступлением на работу в последующем 51 каждые три месяца.

УРОГЕНИТАЛЬНЫЕ ИНФЕКЦИИ Из возбудителей уретритов, передающихся половым путем, на первом месте стоят хламидии, затем микоплазмы, обусловливающие урогенитальный хламидиоз и уреаплазмоз. Клиническая картина этих заболеваний во многом напоминает течение гонококковой инфекции, но отличается от неё меньшей остротой воспаления, преобладанием вялых, малосимптомных форм, склонностью к затяжному течению и большей частотой 52 осложнений

УРОГЕНИТАЛЬНЫЙ ХЛАМИДИОЗ Возбудителем является Chlamidia trachomatis (серовары Д, F, У, H, I, J, K) во многом сходная с возбудителями трахомы 53

Морфология Хламидии мелкие, сферической формы грамотрицательные бактерии. Проникнув в мочеполовые органы, хламидии размножаются в эпителиальных клетках уретры, влагалища, шейки матки, прямой кишки, вызывая воспалительную реакцию. 54

55

56

Хламидии являются причиной внематочной беременности, ранних выкидышей, послеродовых инфекционных осложнений. Особую опасность хламидийная инфекция представляет для новорожденных. Чаще всего это конъюнктивы, фарингиты, уретриты и пневмонии 57

Неонатальные пневмонии могут иметь тяжелое течение и приводить к летальному исходу. Хламидийные инфекции мочеполовой системы являются одной из основных причин женского и мужского бесплодия 58

I. Бактериоскопический метод. В мазках отпечатках из пораженных органов или из соскобов цервикального канала, окрашенных по Романовскому-Гимзе обнаруживаюся в клетках цилиндрического эпителия хламидийные включения – элементарное ельце розового цвета или ретикулярные ельца голубовато-синего цвета. 60

II. Выделение хламидий из исследуемого материала производят заражением куриных эмбрионов в желточный мешок или культуры клеток. В пораженных клетках обнаруживают включения, которые выявляют иммунофлюоресцентным или иммуноферментным методами. III. Для выявления антител применяют РСК, РНГА, ИФА. 61

Лечение Хороший результат дают макролиды (эритромицин) и тетрациклины, комбинированные препараты, включающие тетрациклин и эритромицин (эрициклин) или комбинации эритромицина с рифампицином. Повышать защитные силы организма, неспецифическая иммунотерапия, биогенные симуляторы и витаминотерапия. 62

УРЕАПЛАЗМОЗ Возбудителем является микоплазмы – ureaplasma urealyticum. Вызывает уретриты, сальпингиты, кольпиты, преждевременные роды, выкидыши, мертворождения. Микоплазменные инфекции играют существенную роль в патологии беременности. 63

Отличительной особенностью микоплазм является отсутствие клеточной стенки, что обусловливает плеоморфность. Они могут быть округлые нитевидные. Небольшие размеры проходят через овоидные бактериальные фильтры, неподвижны, грамотрицательны. 64

Культуральные свойства Растут на питательных средах с добавлением сыворотки. Образуют характерные колонии, врастающие центральной частью в питательную среду. Вид колонии напоминает яичницуглазунью. 65

Лабораторная диагностика 1. Серологические методы: РСК, РНГА, ИФА, РИФ 2. Бактериологический метод Лечение Эритромицин и антибиотики тетрациклинового ряда 66

Бактериоскопия – самый распространённый гинекологический анализ. Женщины и девушки разного возраста при прохождении профосмотра обязательно подвергаются такой процедуре. У 50-60% из них в мазке на флору обнаруживаются кокки. У мужчин они встречаются гораздо реже. Это связано с особенностями строения женской половой системы. Также кокки могут быть выявлены в мазке у ребёнка.

Бактерии при определённых обстоятельствах способны спровоцировать серьёзные заболевания мочеполовых и других органов, поэтому целесообразно узнать, что они собой представляют, когда угрожают здоровью и как с ними бороться.

Что такое кокки

В человеческом организме присутствует множество разных микробов. Кокки – семейство одноклеточных, названное от слова coccus, что в переводе с латыни означает – «шаровидный», а с древнегреческого – «зерно». Как и другие бактерии, кокки обладают уникальной способностью к интенсивному размножению (примерно каждые полчаса). В благоприятных условиях одноклеточные делятся надвое, т.е. дробятся, из-за чего их ещё именуют «дробянками», а далее либо существуют по отдельности, либо объединяются в группы. Кокки неподвижны, не образуют споры и являются анаэробными (могут обитать в безвоздушной среде).

Нормальная микрофлора

Здоровая микрофлора женских половых органов состоит из лактобактерий – палочек Дедерлейна, бифидобактерий и незначительного (около 5%) количества кокков. За счёт этого обеспечивается нормальное течение таких процессов, как:

• обмен веществ;
• регуляция уровня кислотности;
• уничтожение болезнетворных микробов.

Само по себе присутствие кокков в мазке у женщин неопасно и естественно. Когда баланс микроорганизмов поддерживается на должном уровне, в кислой среде полезные лактобактерии размножаются и создают защиту от грибков (молочницы), кишечной палочки и других вредных микробов. Соответственно, мочеполовая система функционирует стабильно и полноценно.

О чём говорят кокки в мазке

При нарушении микроклимата картина меняется: содержание кокков увеличивается, а полезные бактерии гибнут, поэтому если количество кокков в мазке превышает норму, это говорит о проблемах со здоровьем.

Важно! Норма: рН (уровень кислотности) – до 5. Слабокислая среда (начало воспалительного процесса): рН – до 7. Повышенная щелочная среда (активно развивается инфекция или воспаление): рН – более 7,5.

Для определения конкретного заболевания необходимо установить, какая именно разновидность шаровидных бактерий присутствует в избытке, а также выяснить наличие грамотрицательных и грамположительных кокков в мазке. Эти термины появились благодаря датскому учёному Граму и его методу выявления устойчивых к медикаментам кокков. Дело в том, что многие бактерии имеют очень прочную оболочку, непроницаемую для большинства обычных антибиотиков (грамотрицательные). Но и те микроорганизмы, чья клеточная стенка разрушается под воздействием антибактериальных препаратов (грамположительные), тоже способны вызывать серьёзные патологии, поскольку в результате продуктов их распада происходит интоксикация организма. Только благодаря крепкому иммунитету и соблюдению всех правил лечения норма бактерий восстанавливается.

На вопрос: «Что значат кокки в мазке у женщины?» можно ответить так: дисбактериоз влагалища, снижение защитных функций лактобактерий и повышенная вероятность воспалительных процессов. Кокки в мазке у мужчин также указывают на нарушение работы мочеполовой системы.

Внимание! Такое состояние требует квалифицированной медицинской помощи. Народные методы, самостоятельный приём антибиотиков и других лекарств крайне нежелательны и могут лишь усугубить ситуацию.

Разновидности кокков

Выделяют несколько разновидностей бактерий, многие из которых являются условно-патогенными:

1. Диплококки (известно более 80 видов). Существуют парами, бывают грамотрицательными и грамположительными. К наиболее патогенному типу относится гонококк – возбудитель гонореи. Заболевание стоит на первом месте по распространённости в числе ИППП (инфекций, передающихся половым путём).
2. Стрептококки – микробы, соединённые в цепочку. Внешне кокки в мазке выглядят, как палочки, образованные из нескольких шароподобных клеток. На сегодняшний день открыто более 100 типов стрептококков (все грамположительные). Размножаясь в половых органах, они вызывают вагинит (воспаление влагалища), цистит (воспаление мочевого пузыря), цервицит (воспаление шейки матки), эндометрит (воспаление слизистой матки) и прочие патологии.
3. Стафилококки (грамположительные). Представляют собой скопления, похожие на грозди винограда. Насчитывается 27 видов возбудителей, наиболее опасный – золотистый стафилококк. Присутствие большого количества стафилококков во влагалище способствует активному размножению других болезнетворных микробов, например грибков кандида (молочница). На фоне этого нередко воспаляются слизистая и придатки матки.
4. Энтерококки (кокки овальной формы, располагающиеся цепочками или парами) – условно-патогенные представители кишечной микрофлоры, которые при недостаточности гигиены способны стремительно развиваться в мочеполовой системе.
5. Коккобациллы (промежуточная между бациллами и кокками форма). Гемофильная палочка, гарднерелла, хламидии обнаруживаются при наличии венерических заболеваний, бактериального вагиноза.
6. Гонококки. Имеют грамотрицательную структуру и овальную форму. При поражении мочеполового тракта вызывают воспалительную реакцию с последующим развитием цервицита и сальпингита.

Причины

Факторов, провоцирующих патологию, огромное множество. Основные причины кокков в мазке:

1. Неграмотное лечение. В том случае, если человек принимает антибактериальные препараты без назначения или не соблюдает дозировку, вероятность поражения патогенными микробами многократно повышается.
2. Пренебрежение личной гигиеной. Игнорирование элементарных правил, неправильное выполнение процедур увеличивают риск нарушения микрофлоры влагалища. Нужно помнить, что мыло – это щёлочь, и слишком глубокие подмывания негативно влияют на кислотно-щелочной баланс. Для женщин, девушек и девочек целесообразно использовать специальные средства для интимной гигиены. Также важно совершать манипуляции от влагалища к анальному отверстию, а не наоборот.
3. Ношение белья из плотных материалов или синтетики плохо сказывается на состоянии микроклимата половых органов.
4. Беспорядочная сексуальная жизнь. Незащищённый контакт с носителем патогенных микробов в 99 случаев из 100 приводит к заражению. Кроме того, если не иметь постоянного партнёра и при этом регулярно заниматься сексом, микрофлора будет неизбежно подвергаться воздействию «чужих» бактерий.
5. Спринцевание. Из-за частых спринцеваний полезная флора вымывается.
6. Гормональные сбои. Расстройства гормонального фона вызывают бактериальный дисбаланс.
7. Ослабленный иммунитет. Когда защитные функции организма снижаются, он не может противостоять опасным возбудителям.

Сопутствующие симптомы

Тревожные признаки, связанные с нарушением микрофлоры урогенитальной сферы, в 90% случаев сложно не заметить. У женщин выделения из влагалища приобретают специфический запах (кисломолочный или рыбный), становятся обильными.

Общие для мужчин и женщин симптомы кокков в мазке:

• неприятные ощущения при мочеиспускании и близости;
• зуд и жжение разной степени выраженности;
• отёчность гениталий;
• желтоватые, белые, гнойные, кровянистые выделения из половых органов.

Женщины часто жалуются на боли внизу живота, слабость, отсутствие аппетита. Это связано с тем, что в процессе жизнедеятельности патогенные клетки продуцируют токсические вещества. Также образуются очаги воспаления, из-за которых возникает ощутимый дискомфорт.

Осложнения

Если вовремя не обследоваться и не начать лечение, кокковые инфекции будут распространяться на соседние органы, слизистые и кожные покровы. Осложнения во многом зависят от разновидности клеток. Например, стрептококк провоцирует менингит, пневмонию, остеомиелит (поражение костных тканей). Стафилококк вызывает эндокард (воспаление внутренней оболочки сердца), пиодермию (гнойные воспалительные процессы под кожей), пневмонию, бронхит, заболевания верхних дыхательных путей (риниты, синуситы) и пищеварительного тракта. Кроме того, размножение патогенных бактерий во влагалище снижает выработку эстрогенов, что в результате становится причиной выкидышей и бесплодия.

Кокки в мазке при беременности осложняют процесс вынашивания ребёнка. Рост и развитие плода напрямую связаны с состоянием здоровья будущей матери, а воспалительный процесс может затрагивать не только прямую кишку и мочевыводящий канал, но и матку. Чтобы предотвратить опасность, следует планировать беременность заранее и при необходимости проводить терапию.

Наиболее распространённые последствия кокковых инфекций:

• эрозия шейки матки;
• эндометрит;
• пиелонефрит (поражение почек).

У мужчин при отсутствии адекватного лечения кокки приводят к простатиту (воспаление простаты), поражению яичек и семенных канальцев. Всё это грозит импотенцией и бесплодием.

Диагностика

Диагностика представляет собой лабораторное обследование. У женщин с задней стенки влагалища, мочеиспускательного канала и канала шейки матки делают забор мазка. Мужчинам в уретру вводят специальный зонд (если воспаление уже началось, манипуляции могут быть болезненными). Далее образец биоматериала отправляется в лабораторию, где его окрашивают (метод Грама) и исследуют под микроскопом. В некоторых случаях может потребоваться дополнительная диагностика: мазок из зёва и носовой полости (при подозрении на стафилококк), общие анализы крови и мочи.

Перед проведением процедуры важно придерживаться следующих правил:

• не мочиться за 2 часа;
• не употреблять острую пищу и алкоголь за 3-5 дней;
• не принимать лекарственные препараты за 3-5 дней;
• воздержаться от близости за 2 дня;
• не использовать вагинальные свечи, не спринцеваться за 2 дня.

Внимание! Анализ сдают перед менструацией или спустя 4-5 суток после её окончания.

Лечение

Если обнаружено аномальное количество кокков в мазке, лечение нужно проводить в соответствии со всеми врачебными предписаниями. Настоятельно рекомендуется не использовать антибиотики общего назначения. Как уже упоминалось, многие кокки устойчивы к таким медикаментам, поэтому терапия может оказаться не только безрезультатной, но и опасной. Под воздействием антибактериальных средств рост патогенных клеток начнёт увеличиваться, а численность полезных бактерий – снижаться.

Для того чтобы борьба с кокками была максимально эффективной, предварительно проводится тест на чувствительность. Антибиотикограмма – бакпосев влагалища на питательную среду позволяет определить уровень восприимчивости патогенных клеток к тем или иным препаратам.

Одним из наиболее действенных препаратов против кокковых инфекций считается «Метронидазол». Его основное преимущество – отсутствие противопоказаний к применению в период беременности и кормления грудью. Совместно с антибиотиками используют лекарства, содержащие лакто-, и бифидобактерии. Для восстановления нормальной микрофлоры применяются вагинальные свечи, мази и кремы, обладающие антисептическими свойствами. Одновременно могут быть назначены иммуномодулирующие средства. Спринцевания травяными отварами нужно выполнять строго с разрешения гинеколога.

Внимание! Параллельно проходить лечение должен и постоянный половой партнёр. В это время лучше воздержаться от секса и мастурбации, использования тампонов.

После завершения курса терапии мазок на флору делают повторно. При отсутствии положительного результата подбирается другая группа антибиотиков. В 70-80% случаев госпитализация не требуется, лечение проводится в домашних условиях или амбулаторно.

Профилактика

Предотвратить рост и размножение кокков в организме можно посредством соблюдения элементарных правил:

• не забывать о ежедневной интимной гигиене;
• отказаться от беспорядочных половых связей (или всегда пользоваться барьерными контрацептивами);
• укреплять иммунитет, сбалансировано питаться, не пренебрегать физическими нагрузками, гулять на свежем воздухе, пить поливитаминные комплексы;
• отдавать предпочтение нижнему белью из натуральных тканей.

Сегодня благодаря современным методам диагностики опасные заболевания можно выявить ещё на начальном этапе. Это упрощает ход лечения и улучшает прогноз. Каждой половозрелой женщине рекомендуется как минимум 1-2 раза в год посещать гинеколога и делать мазок на флору. Обязательно сдавать анализы при беременности и на стадии планирования зачатия.

Важно помнить, что проще поддерживать нормальную микрофлору, чем потом избавляться от бактерий и лечить болезни, спровоцированные кокками.

Методическое указание для студентов к практическому занятию № 25

Тема: Грамотрицательные кокки (менингококки и гонококки).

Цель: Освоение методов микробиологической диагностики заболеваний, вызванных менингококками и гонококками.

Модуль 2. Специальная, клиническая и экологическая микробиология.

Тема занятия 25. Микробиологическая диагностика заболеваний, вызванных менингококками и гонококками.

Актуальность темы. Отдел Gracilicutes , семейство Neisseriaceae , род нейссерий (Neisseria). Все виды семейства являются обитателями слизистых оболочек теплокровных. Общие признаки бактерий этой группы:

• способны расти в присутствии кислорода,
• представлены неподвижными диплококками и короткими палочками, отрицательно окрашивающимися по Грамму,
• спор не образуют.

Нейссерии – грамотрицательные аэробные кокки, включающие 8 видов, наиболее патогенные для человека виды нейссерий – Neisseria meni n gitidis (менингококки) и Neisseria gonorrhoeae (гонококки). 7 видов встречается у человека, из них 55 видов являются представителями нормофлоры носоглотки и верхних дыхательных путей.

Морфология. Грамотрицательные неспорообразующие кокки, неподвижны, образуют пары или тетрады. Некоторые виды имеют капсулу и микроворсинки.

Культуральные свойства. Аэробы, хемоорганотрофы. патогенные виды прихотливы к условиям культивирования, не растут на обычных питательных средах. Виды, обитающие в носоглотке, образуют желтый пигмент на плотных средах с добавлением куриного желтка.

Ферментативная активность низкая, особенно у патогенных видов.

Антигенная структура – все виды имеют полисахаридный соматический О-антиген; штаммы, образующие капсулу, также имеют капсульный антиген.

Факторы патогенности: капсула, пили, эндотоксин, поверхностные белки наружной мембраны.

Устойчивость в окружающей среде низкая, чувствительны к действию обычно применяемых антисептиков и дезинфектантов.

Менингококк. Neisseria menigitidis

Менингококковая инфекция — инфекционная болезнь, вызываемая Neisseria meningitidis, проявления которой варьируют от бессимптомного носительства до тяжелейших менингеальных форм. Возбудитель впервые подробно изучен в 1887 г. А.Ваксельбаумом.

Таксономия. Возбудитель относится к отделу Gracilicutes, семейству Neisseriaceae, роду Neisseria.

Морфология и тинкториальные свойства. Менингококки — мелкие диплококки. Характерно расположение их в виде пары кофейных зерен, обращенных вогнутыми поверхностями друг к другу. Менингококки неподвижны, спор не образуют, грамотрицательны, капсула непостоянна, имеют пили.

Культивирование. Аэробы культивируют на средах, содержащих нормальную сыворотку либо дефибринированную кровь барана или лошади, а также на селективной среде с ристомицином. Повышенная концентрация СО 2 стимулирует рост менингококков.

Антигенная структура . По капсульным антигенам менингококки делятся на основные серогруппы А, В, С, D и дополнительные. По антигенам клеточной стенки подразделяют менингококки на серовары (1, 2, 3 т.д.). Во время эпидемических вспышек обычно циркулируют менингококки группы А. Токсин менингококков представляет собой липополисахарид клеточной стенки. Его количество определяет тяжесть заболевания.

Резистентность . Менингококки малоустойчивы в окружающей среде, чувствительны к высушиванию и охлаждению. Чувствительны к пенициллинам, тетрациклинам, эритромицину, устойчивы к ристомицину и сульфамидам.

Патогенез и клиническая картина . Человек – единственный естественный хозяин менингококков. Носоглотка является входными воротами инфекции. Здесь бактерии могут длительно существовать, не вызывая воспаления (носительство), но иногла становятся причиной назофарингита. Из носоглотки они могут попадать в кровяное русло (менингококкемия) с развитием лихорадки и геморрагической сыпью. Наиболее частым осложнением менингококкемии является менингит или менингоэнцефалит (воспаление мозговых оболочек).

Иммунитет. Постинфекционный иммунитет при генерализованных формах болезни стойкий, напряженный.

Для лабораторной диагностики исследую кровь, спинномозговую жидкость, слизь с носоглоточных тампонов. При микроскопическом исследовании осадка центрифугированной спинномозговой жидкости и мазков из зева видны типичные нейссерии внутри нейтрофилов или внеклеточно. Посев материала производят сразу после взятия на кровяной агар (шоколадный агар), агар с ристомицином (или линкомицином), среду Мартена – агар с антибиотиками (ВКН – ванкомицин, колистин, нистатин). Инкубацию проводят в атмосфере, содержащей 5% углекислого газа.

Лечение. В качестве этиотропной терапии используют антибиотики: пенициллин, левомицетин, рифампицин.

Профилактика. Разработана менингококковая химическая полисахаридная вакцина, которая проходит апробацию.

Гонококк . Neisseria gonorrhoeae

Гонорея – инфекционное венерическое заболевание, вызываемое Neisseria gonorrhoeae , характеризующееся гнойным воспалением слизистых оболочек органов мочеполовой системы.

Возбудитель гонореи – гонококк, открытый А. Нейссером в 1879 г., относится к семейству Neisseriaceae , отделу Gracilicutes ; вызывает также острое гнойное воспаление слизистой оболочки глаза – бленнорею.

Морфология и культивирование . Гонококк – грамотрицательный диплококк бобовидной формы, неподвижен, спор не имеет, капсулы не образует . В гнойном отделяемом типичное расположение гонококков внутри лейкоцитов (незавершенный фагоцитоз).

Электронная микроскопия.

Характерная, используемая как важный критерий диагностики форма гонококка - диплококк (парный кокк), реже - тетракокк. Связана с особенностями деления гонококка. Диплококк сравнивают с кофейными зёрнами или почками, обращёнными вогнутыми сторонами друг к другу.

Гонококк – аэроб, выращивается на питательных средах, содержащих сыворотку, кровь или асцитическую жидкость. Оптимальные условия для культивирования – t =37 0 C и повышенная концентрация углекислого газа. Гонококк обладает слабой сахаролитической активностью.

Антигенная структура и факторы патогенности. Антигенная структура изучена мало. Фактором патогенности является токсическая субстанция клеточной стенки – липополисахарид.

Резистентность. Гонококк отличается высокой чувствительностью к высушиванию, дезинфицирующим средствам, температуре; чувствителен к бензилпенициллину, эритромицину, тетрациклину, доксициклину, цефалоспоринам, бесиптолу.

П атогенез . Чаще всего гонорейная инфекция проявляется воспалением слизистых оболочек, сопровождающееся гнойными или слизисто-гнойными выделениями из мочеиспускательного канала (уретры) у мужчин, из уретры и шейки матки у женщин. Вызванная нейссериями инфекция у женщин протекает более стёрто, несмотря на это, приводя к серьёзным осложнениям. Так, при обследовании бесплодных женщин не столь уж редко обнаруживается скрыто протекающая гонорейная инфекция.

Источником заражения чаще являются больные с хроническими, малосимптомными формами гонореи, которые не считают имеющиеся у них симптомы свидетельством венерического заболевания.

Микробиологическая диагностика. Основной метод диагностики – бактериоскопия препаратов гнойного отделемого, окрашенных по Грамму и метиленовым синим. При отсутствии результатов бактериоскопии используют бактериологический метод.

Характерные признаки гонореи при бактериоскопии ("в мазке"): внутриклеточно расположенные, грамотрицательные, диплококки, причём каждый из кокков имеет бобовидную форму.

Бактериоскопия весьма эффективна при острой гонорее, при качественной подготовке больного к исследованию, правильном взятии материала . В случае отрицательного результата показано повторное исследование в течение 3 последующих дней с использованием провокации. Из каждого очага для бактериоскопии берут мазки на два стекла: один для ориентировочного исследования после окраски метиленовым синим, другой - для окраски по Граму , что позволяет дифференцировать грамположительные и грамотрицательные микроорганизмы.

Культуральный метод ("посев" ) применяется при неоднократном получении отрицательного результата при бактериоскопическом исследовании при подозрении на гонорею, наличии в мазке подозрительных на гонококк микроорганизмов, установлении излеченности гонореи ("контроль излеченности"), подтверждение гонорейного процесса у детей и обследование больных трихомониазом после лечения .

В последнее время возрастает значение молекулярно-биологических методов для диагностики гонореи. Особенно ценен метод ПЦР для выявления хронической, стёртой, вялотекущей, лечёной гонореи, когда меняются свойства гонококка и, вызывая патологические процессы в организме, он тем не менее "отказывается" расти на питательных средах, и тем самым, "выдавать" себя. В последнее время ПЦР-диагностику стали использовать для идентификации штаммов микроорганизмов с генетической устойчивостью к антибиотикам (тетрациклину, эритромицину), что представляет серьёзную эпидемиологическую проблему. Официально разрешено применение метода ПЦР в выявлении гонококков , хламидий, микоплазм, уреаплазм и т.д.

Лечение – сочетают назначение антибактериальных препаратов (желательно, с учётом чувствительности гонококков к ним, что определяется по результатам "посева") и средств, стимулирующих иммунитет. Лечение беременных проводят в стационаре с учётом влияния антибиотиков на плод. При хронической гонорее вводят убитую гонококковую вакцину с целью иммунотерапии.

Профилактика . Специфическая профилактика отсутствует.

Конкретн ые цели:

Ознакомиться с биологическими свойствами и классификацией вида Neisseria menigitidis.

Изучит методы микробиологической диагностики менингококковых заболеваний и бактерионосительства.

Ознайомиться с биологическими свойствами вида Neisseria gonorrhoeae и их патогенностью для человека.

Описывать патогенез острой и хронической гонореи.

Выучить методы микробиологической диагностикик гонореи.

Ознакомиться с методами профилактики и специальной терапии гонореи и бленнореи.

Уметь:

Проводить дифференциацию менингококков и грамотрицательных диплококков носоглотки.

Забирать материал для исследования от больных с заболеваниями, вызванными менингококками и гонококками.

Выделять чистые культуры нейссерий.

Трактовать результаты микроскопического исследования нативных препаратов.

Трактовать результаты серологического исследования сыворотки больных на гонорею (РСК).

Теоретические вопросы:

Семейство Neisseriaceae . Род нессерий (Neisseria).

• Биологические свойства.
• Классификация.
• Э волюция патогенности.

Менингококки (Neisseria menigitidis).

• Биологические свойства, классификация.
• Патогенез и микробиологическая диагностика менингококковых заболеваний и бактерионосительства.
• Дифференциация менингококков и грамотрицательных диплококков носоглотки.

Гонококки (Neisseria gonorrhoeae).

• Биологические свойства.
• Патогенность для человека, изменчивость.
• острая и хроническая гонорея.
• И ммунитет. Микробиологическая диагностика гонореи.
• Профилактика и специальная терапия гонореи и бленнореи.

Практические задания, используемые на занятии:

Микроскопия микропрепаратов из чистых культур нейссерий, их анализ и зарисовывание в протокол.

Микроскопия демонстрационных микропрепаратов: мазок из уретры больного гонореей (окраска метиленовым синим), мазок из уретры больного гонореей (окраска по грамму), менингококк в спинно-мозговой жидкости (окраска по Грамму).

Зарисовывание демонстрационных микропрепаратов в протокол.

Оформление протокола .

Литература:

1. Пяткин К.Д., Кривошеин Ю.С. Микробиология с вирусологией и имму-нологией.– Киев: Высшая школа, 1992.- 431с.

2. Воробьев А.В., Быков А.С., Пашков Е.П., Рыбакова А.М. Микробиоло-гия.- М.: Медицина, 1998.- 336с.

3. Медицинская микробиология /Под редакцией В.П. Покровского.– М.: ГЕОТАР-МЕД, 2001.– 768с.

4. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммуноло-гия и вирусология /Учебник для медицинских ВУЗов, С-Пб.: «Специальная литература», 1998.- 592с.

5. Тимаков В.Д., Левашев В.С., Борисов Л.Б. Микробиология /Учебник.- 2-е изд., перераб. и доп.– М.: Медицина, 1983.- 512с.

6. Конспект лекции.

Дополнительная литература:

1. Титов М.В. Инфекционные болезни.- К., 1995.– 321с.

2. Шувалова Е.П. Инфекционные болезни.– М.: Медицина, 1990.- 559с.

3. БМЭ, Т. 1,2,7.

Краткие методические указания для работы на практическом занятии.

В начале занятия проводится проверка уровня подготовки студентов к занятию.

Самостоятельная работа состоит из изучения методов микробиологической диагностики менингококковой инфекции. Студенты изучают схему выделения чистой культуры менингококка и микроскопируют готовые зафиксированные мазки из чистой культуры менингококка.

Дальше студенты изучают схему выделения чистой культуры гонококка, знакомятся с правилами забора материала от больных гонореей для проведения прямой микроскопии исследуемого материала и микроскопируют готовые зафиксированные мазки гноя из уретры больных.

Потом студенты зарисовывают микропрепараты и дают необходимые пояснения.

В состав самостоятельной работы входит также микроскопия демонстрационных препаратов и их зарисовывание.

В конце занятия проводится оформление протокола, тестовый контроль и анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

Технологическая карта проведения практического занятия

№ п\п	Этапы	Время в мин.	Способы обучения	Оборудования	Место проведения
	Проверка и кор-рекция выходно-го уровня подго-товки к занятию	20 ’	Тестовые задания выходного уровня	Таблицы, атлас	Учебная комната
	Самостоятель-ная работа	35’	Граф логичной структуры	Иммерсионный мик-роскоп, краски, предметное стекло, бактериологические петли, посевы чистых культур бактерий.
	Самоконтроль и коррекция усвоенного материала	15’	Целевые обучающие программы
	Тестовый контроль	15’	Тесты
	Анализ резуль-татов работы	5 ’

Целевые учебные задания:

1. При бактериоскопическом исследовании слизи с задней стенки носоглотки выделены грамотрицательные кокки, напоминающие кофейные зерна и расположенные парами или тетрадами. Назовите возбудитель, который был изолирован бактериологом?

A. Acinetobacter calcoaceticum.

В. Staphylococcus aureus.

С. Neisseria gonorrhoeae.

D . Moraxella lacunata.

Е. Neisseria meningitidis.

1. При исследовании гнойных выделений с шейки матки выявлено в них грамнегативные диплококки, расположенные как в лейкоцитах, так и вне них. Назовите возбудителя гнойного воспаления шейки матки в этом случае.

А . Chlamidia trachomatis.

В . Neisseria gonorroeae.

С . Trichomonas vaginalis.

D. Haemophilus vaginalis.

Е. Toxoplasma gondii.

1. При бактериологическом исследовании материала от больного с подозрением на хроническую гонорею, роста микроорганизмов на специальных питательных средах не обнаружено. Какие методы диагностики следует применить, чтобы подтвердить или опровергнуть диагноз хронической гонореи?

Поставить РСК, аллергическую пробу с гонококковым аллергеном.

Определить титр антител в сыворотке крови больного, используя РПГА

Биологический метод

Иммунную электронную микроскопию

Повторить посев исследуемого материала на дифференциально-диагностические среды

1. Из гноя, взятого из уретры больного с подозрением на острую гонорею, приготовлен мазок и окрашен по Граму. При микроскопии его обнаружено большое количество кокков. Какие тинкториальные свойства увиденны х микроорганизмов и характер их расположения в препарате будут свидетельствовать в пользу предполагаемого диагноза?

А. Грамположительные кокки, расположенные внутри и вне лейкоцитов

В. Грамотрицательные диплококки, расположенные внутри и вне лейкоцитов

С. Грамположительные тетракокки, расположенные вне лейкоцитов

D . Грамотрицательные тетракокки

Е. Грамположительные кокки, расположенные в виде цепочек

1. На специальной питательной среде после посева гнойного выделения из уретры появились нежные голубые колонии. При микроскопии препаратов в них выявлены грамотрицательные бобовидные диплококки. Возбудителем какой болезни они являются?

А. Уреаплазмоза

В. Сифилиса

С. Хламидиоза

D . Гарднерелеза

Е. Гонореи

1. При посеве осадка спинномозговой жидкости, полученной у ребенка с диагнозом «эпидемический цереброспинальный менингит» на специальной среде выросли нежные колонии с голубоватым оттенком. Микроорганизмы, которые их образовали, были идентифицированы как нейссерии. Какой тест необходимо использовать для определения патогенности выделенных у этого больного нейссерий?

А. Реакция гемолиза

В. Лецитовителазная активность

С. Реакция плазмокоагуляции

D . Оксидазная реакция

Е. Реакция ферментации манита в анаэробных условиях

1. От больного ребенка цереброспинальным менингитом получили спинномозговую жидкость мутного характера, содержащую большое количество лейкоцитов. Какую из серологических реакций следует провести для экспресс-диагностики заболевания?

A . Реакцию преципитации

B . Реакцию агглютинации

C . Реакцию связывания комплемента

D . Р еакцию гемагглютинации

E . Реакцию нейтрализации

1. У больного ребенка с явлениями гнойного кератоконъюнктивита врач-офтальмолог заподозрил бленнорею (гонорейный конъюнктивит). Какими методами лабораторной диагностики следует воспользоваться для подтверждения диагноза?

A . Микроскопическим и бактериологическим

B . Серологическим и аллергическим

C . Биологическим и методом фагодиагностики

D . Биологическим и аллергическим

E . Микроскопическим и серологическим

1. Больному ребенку врач поставил диагноз «менингококковый назофарингит». Какой метод лабораторной диагностики наиболее рациональный для подтверждения диагноза?

A . Бактериологический

B . Биологический

C . Серологический

D . Микроскопический

E . Аллергический

1. У больного С., который лечится в кожно-венерологическом диспансере по поводу хронической гонореи, диагностировали острую гонорею. Какой вид инфекции развился у больного в этом случае?

A . Реинфекция

B . Суперинфекция

C . Вторичная инфекция

D . Персистирующая инфекция

E . И напарантная инфекция

1. В детском саду провели обследование детей и персонала в целях выявления менингококкового носительства. Подберите метод микробиологического исследования.

A . Бактериологический

B . Аллергический

C . Бактериоскопический

D . Биологический

E . Серологический

1. При бактериоскопии осадка спинномозговой жидкости больного с подозрением на менингит были выявлены грамотрицательные диплококки. Для подтверждения диагноза осадок спинномозговой жидкости посеяли на питательную среду. Какая среда из перечисленных была использована?

A . Сывороточный агар

B . МПА с линкомицином

C . Кровяной агар с пенициллином

D . Кровяной агар с линкомицином

E . МПА с ристомицином

Алгоритм лабораторной работы:

1. Проверка уровня подготовки студентов к занятию: решение исходных тестов.

2. Изучение методов микробиологической диагностики менингококковой инфекции – схемы выделения чистой культуры менингококка.

3. Микроскопия готовых зафиксированных мазков из чистой культуры менингококка.

4. Изучение схемы выделения чистой культуры гонококка.

5. Ознакомление с правилами забора материала от больных гонореей для проведения прямой микроскопии исследуемого материала.

6. Микроскопия готовых зафиксированных мазков гноя из уретры больного.

7. Зарисовывание микропрепаратов в протокол.

8. Анализ результатов самостоятельной работы каждого студента.

9. Оформление протокола.

Грамотрица́тельные бакте́рии - это бактерии, которые не окрашиваются кристаллическим фиолетовым при окрашивании по Граму. В отличие от грамположительных бактерий, которые сохранят фиолетовую окраску даже после промывания обесцвечивающим растворителем (спирт), грамотрицательные полностью обесцвечиваются. После промывания растворителем при окрашивании по Граму добавляется контрастный краситель (обычно сафранин), который окрашивает все грамотрицательные бактерии в красный или розовый цвет. Это происходит из-за наличия внешней мембраны, препятствующей проникновению красителя внутрь клетки. Сам по себе тест полезен при классификации бактерий и разделении их на две группы относительно строения их клеточной стенки. Из-за своей более мощной и непроницаемой клеточной стенки грамотрицательные бактерии более устойчивы к антителам, чем грамположительные. Обычно патогенность грамотрицательных бактерий связывают с определёнными компонентами их клеточных стенок, а именно, с липополисахаридным слоем (ЛПС или эндотоксический слой). В человеческом организме ЛПС вызывает иммунный ответ, который характеризуется синтезом цитокинов и активацией иммунной системы. Обычной реакцией на синтез цитокинов является воспаление, что также может привести к увеличению количества токсичных веществ в организме хозяина.

Грамположительные бактерии (обозначаются Грам (+)) - бактерии, которые, в отличие от грамотрицательныхбактерий, сохраняют окраску, не обесцвечиваются при промывке при использовании окраски микроорганизмов пометоду Грама.

Большинство Грам (+) бактерий имеют однослойную клеточную мембрану, без внешней мембраны, присущейграмотрицательным бактериям. Исключением является тип Deinococcus-Thermus.

Большая часть патогенных для человека микроорганизмов относится к грамположительным. Шесть родов грамположительных организмов являются типичными патогенами человека. Два из них, стрептококки и стафилококки, являются кокками (шарообразными бактериями). Остальные - палочковидные и делятся далее по возможности образовывать споры.

Неспорообразующие: Corynebacterium и Листерия; спорообразующие: Бациллы и Клостридии. Спорообразующие можно разделить на факультативных анаэробов Бациллы и облигатных анаэробов Клостридий.

Лабораторная диагностика инфекционных заболеваний проводится в трех основных направлениях:

1) поиски возбудителя заболевания в материале, взятом у больного (испражнения, моча, мокрота, кровь, гнойное отделяемое и др.);

2) обнаружение специфических антител в сыворотке крови - серологическая диагностика;

3) выявление повышенной чувствительности организма человека к возбудителям инфекционных заболеваний - аллергический метод.

Для выявления возбудителя инфекционного заболевания и его идентификации (определения вида возбудителя) используют три метода: микроскопический, микробиологический (бактериологический) и биологический.

Лечение

Адекватный подход к лечению инфекционных болезней построен на комплексном воздействии, которому подвергаются все составляющие инфекции. Большую роль играют терапевтические методы, объектом которых являются бактерии и вирусы, а также токсины, выделяемые ими. Кроме того, нужно позаботиться о нормализации обмена веществ, укреплении иммунной системы и восстановлении биологического равновесия с той средой, в которой живет пациент.

Антибиотики назначаются лечащим врачом, когда возбудитель инфекции слишком силен и есть опасность того, что возникнут серьезные осложнения и организм не справится самостоятельно. При этом следует понимать, что лечение не подразумевает исключительно прием антибиотиков. Комплексный подход к лечению инфекционных заболеваний дает наилучший результат. В частности, хороший эффект обеспечивает патогенетическая терапия, цель которой - ликвидация болезнетворных цепных реакций организме пациента. В связи с этим большое значение имеет нормализация тех функций систем и органов организма, которые оказались нарушены из-за инфекции. Это означает пересмотр рациона в сторону правильного питания, лечение сердечными препаратами, лечение препаратами, влияющими на нервную систему, прием достаточного количества витаминов и средств противовоспалительного характера.

Стафилококковая инфекция - это группа заболеваний, вызванных золотистыми стафилококками, которые могут проявляться как легкими формами (воспаление кожи), так и тяжелыми процессами (пневмония (воспаление легких), сепсис (воспалительный процесс во всех органах человека или « заражение крови»)).
Отличительной особенностью стафилококков является их способность вырабатывать токсины (вредные вещества, появляющиеся в результате жизнедеятельности вируса). Эти токсины оказывают сильнейшее воздействие на организм человека.

Менингококковая инфекция – это острое инфекционное заболевание, причиной которого является бактерия – Neisseria meningitidis . Тяжесть менингококковой инфекции колеблется от назофарингита до молниеносного сепсиса, приводящего к смерти за несколько часов. Немногие инфекции имеют столь катастрофичное течение.

Материал для исследований может забираться как от больных, так и от медперсонала, кроме того исследованию подлежат объекты окружающей среды: воздух, почва, смывы с окружающих предметов, лекарственные формы и т.д.

От людей забирается на исследование: отделяемое дыхательных путей, мокрота, слизь зева, носа, носоглотки; моча, испражнения, желчь, спиномозговая жидкость, кровь, гной (маститы, фурункулы, карбункулы, абсцессы, флегмоны и т.п.), отделяемое язв, свищей; отделяемое женских половых органов и др.

Следует помнить о соблюдении правил техники безопасности при заборе материала для исследований, поскольку он представляет опасность для здоровья медицинского персонала. Обязательно применение спецодежды и средств индивидуальной защиты, включая защитные очки, смотровые или хирургические перчатки и медицинские респираторы (при риске попадания контаминированных частиц и аэрозолей в дыхательные пути)

ТЕМА №8. Кишечная группа бактерий. Эшерихии. Шигеллы. Выделение чистой культуры энтеробактерий (1,2,3,4 день). Посев на холеру. Сальмонеллы. Особенности микробиологической диагностики в связи с патогенезом заболеваний. Принципы лечения, профилактика.

Общая характеристика. Семейство кишечных бактерий (Enterobacteriaceae) объединяет обширную группу грамотрицательных неспорообразующих палочек. Они широко распространены в природе, обитают в кишечнике человека и животных. Среди них встречаются сапрофиты, условно-патогенные бактерии и патогенные виды.

Согласно Международной классификации (1963), все семейство кишечных бактерий разделено на 13 родов, из которых наибольшее значение для человека имеют:

1) род Escherichia, включающий группу кишечной палочки;

2) род Salmonella, куда входят возбудители брюшного тифа, паратифов и пищевых токсйкоинфекций;

3) род Shigella- возбудители бактериальной дизентерии;

4) род Proteus, включающий группу протея;

5) род Klebsiella - группа капсульных бактерий, возбудителей инфекций дыхательных и мочевых путей.

Кишечная палочка имеют типичную для энтеробактерий форму и представлены короткими подвижными палочками с закруглёнными концами.

• На плотных средах бактерии образуют плоские выпуклые мутные S-колонии с ровными или слегка волнистыми краями (3-5 мм в диаметре) либо сухие плоские R-колонии с неровными краями.
• В жидких средах растут диффузно, вызывая помутнение среды и образование осадка (реже формируют поверхностную плёнку или пристеночное кольцо).
• На средах Хисса кишечная палочка может образовывать газ. На селективно-дифференциальных средах колонии принимают цвет, соответствующий окраске среды. На агаре Эндо лактоза-положительные эшерихии образуют фукс и ново-красные колонии с металлическим блеском, лактоза-отрицательные - бледно-розовые или бесцветные с тёмным центром. На среде Левина бактерии формируют тёмно-синие колонии с металлическим блеском, а лактоза-отрицательные - бесцветные, на среде Плоскирева - соответственно красные с жёлтым оттенком или бесцветные. На КА могут давать полный гемолиз.

Шигеллы относятся к роду Shigella. Являются возбудителями дизентерии. Род включает в себя четыре вида:

1) Sh. disenteriae; (внутри вида делятся на 12 сероваров; один из них – шигелла Григорьева-Шига);

2) Sh. flexneri; (делится на 6 сероваров);

3) Sh. boydii; (делится на 18 сероваров);

4) Sh. sonnei; (в антигенном отношении вид однороден, внутри вида выделяют ферментовары, фаговары, колециновары).

Шигеллы имеют вид палочек без жгутиков, с закругленными концами размером 2–3 на 0,5–0,7 мкм. Не образуют спор и капсул. Шигеллы плохоустойчивы к воздействию физических, химических и биологических факторов окружающей среды. В воде, почве, пищевых продуктах, на предметах, посуде, овощах, фруктах шигеллы живут в течение 5–14 дней. При температуре 60 °С шигеллы гибнут через 10–20 минут, при 100 °С - мгновенно. Прямой солнечный свет убивают шигелл в течение 30 минут. При отсутствии солнечного света, повышенной влажности и умеренной температуре шигеллы сохраняют жизнеспособность в почве до 3 месяцев. В желудочном соке шигеллы могут выживать лишь несколько минут. В пробах кала шигеллы погибают от действия кислой реакции среды и бактерий-антагонистов через 6–10 часов. В высушенном или замороженном кале шигеллы жизнеспособны в течение нескольких месяцев.

Шигеллы попадают в толстый кишечник. Прикрепляются к рецепторам мембран колоноцитов и проникают внутрь с помощью белка наружной мембраны. Гибель клеток приводит к образованию эрозий и язв, окруженных перифокальным воспалением.

Род сальмонеллы (лат. Salmonella) входит в семейство энтеробактерии(лат. Enterobacteriaceae), порядок энтеробактерии (лат. Enterobacteriales), класс гамма-протеобактерии (лат. γ proteobacteria), тип протеобактерии (лат. Proteobacteria), царство бактерии.

Подвид Salmonella enterica enterica включает следующие серогруппы:

A (наиболее известен серотип paratyphi A)

B (серотипы: typhimurium, agona, derby, heidelberg, paratyphi B и др.)

С (серотипы: bareilly, choleraesuis, infantis, virchow и др.)

D (серотипы: dublin, enteritidis, typhi и др.)

E (наиболее известен серотип anatum)

Сальмонеллы - палочкообразные с закругленными краями, грамотрицательные, не образующие споры и капсулы, в основном подвижные бактерии, имеющие диаметр от 0,7 до 1,5 мкм и длину от 2 до 5 мкм и распределенные по всей поверхности жгутиками.

Посев холеры проводят на жидкие среды обогащения, щелочной МПА, элективные и дифференциально-диагностические среды (например, TCBS-arap). Изучают рост на первой среде накопления и выполняют высев на щелочной агар и вторую среду накопления (что повышает высевае-мость возбудителя). Если на первом этапе при исследовании нативного материала ускоренными методами получают положительные результаты, пересев на вторую среду накопления не проводят. Подозрительные колонии пересевают для выделения чистых культур. Затем определяют морфологические, биохимические свойства и антигенную структуру холеры с помощью агглютинирующих О-, OR-, Инаба- и Огава-антисывороток. Важное диагностическое значение имеет типирование с помощью холерных диагностических бактериофагов. Все V. cholerae лизируются бактериофагом IV группы, а вибрионы биовара Эль-Тор - фагами группы V.