Количественное измерение дубильных веществ в корнях растений. Привет студент. Физические и химические свойства

Владельцы патента RU 2439568:

Изобретение относится к области фармакологии и может быть использовано для определения дубильных веществ в растительном сырье. Способ определения дубильных веществ в растительном сырье заключается в том, что навеску сырья экстрагируют водой при кипячении, охлаждают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание суммы всех дубильных веществ по определенной формуле, далее к аликвотной пробе фильтрата добавляют 1% раствор коллагена в 1% уксусной кислоте, взбалтывают, фильтруют, измеряют оптическую плотность фильтрата при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание осаждаемых дубильных веществ по определенной формуле. Способ позволяет повысить точность определения содержания дубильных веществ в растительном сырье и селективно определить осаждаемые и не осаждаемые дубильные вещества в растительном сырье.

Изобретение относится к химико-фармацевтической промышленности, области фармакогнозии и фармацевтической химии и может быть использовано для контроля качества растительного сырья, содержащего дубильные вещества.

Известен способ определения дубильных веществ в лекарственном растительном сырье (ЛРС) методом кулонометрии в пересчете на таннин (С.Г.Абдуллина и др. Кулонометрическое определение дубильных веществ в лекарственном растительном сырье. // Фармация. №4. - 2010. - С.13-15).

Недостатком данного способа является использование дополнительного оборудования (кулонометра), специфичного титранта (гипойодид калия), который по окислительным свойствам приближается к перманганату калия и не дает возможность дифференцировано определить высоко- и низкомолекулярные дубильные вещества.

Известен также способ определения содержания таннина и производных галловой кислоты в чае методом кондуктометрии (Патент №2127878. Способ раздельного определения таннина и катехинов (в пересчете на галловую кислоту) в чае. М.: 1999 г.).

Недостатком данного способа является применение токсичных органических растворителей (изобутиловый спирт), а также использование цветной реакции с Fe (III), продуктом которой является нестабильное по окраске во времени окрашенное соединение.

Известен также способ количественного определения дубильных веществ в пересчете на таннин в листьях скумпии и сумаха методом комплексонометрии после осаждения дубильных веществ солями цинка (ГОСТ 4564-79. Лист скумпии. Технические условия; ГОСТ 4565-79. Лист сумаха. Технические условия).

Недостатком данного способа является длительность проведения анализа и трудность определения точки эквивалентности.

Известен также способ количественного определения дубильных веществ спектрофотометрическим методом после реакции с реактивом Фолина-Чокальтеу в пересчете на галловую кислоту (Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03. - М. - 2004 г. - с.94-95).

Недостатком данного метода является невозможность раздельного определения низко- и высокомолекулярных дубильных веществ.

Наиболее близким к предлагаемому является способ, заключающийся в том, что дубильные вещества определяют методом спектрофотометрии в пересчете на галловую кислоту (Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище. Руководство. Р 4.1.1672-03. - М. - 2004 г. - С.120).

Недостатком данного способа является многократное разведение испытуемого образца, в результате которого концентрация дубильных веществ в растворе плохо определима. Также в этом способе раствором сравнения служит буферный раствор, что затрудняет проведение анализа. Кроме того, данный способ не дает возможность раздельно определить содержание низкомолекулярных и высокомолекулярных дубильных веществ.

Задачей изобретения является повышение точности определения дубильных веществ и возможность раздельного определение осаждаемых и не осаждаемых дубильных веществ в растительном сырье.

Поставленная задача решается тем, что навеску сырья экстрагируют водой при кипячении, охлаждают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание суммы всех дубильных веществ по формуле

50 - объем колбы, мл,

W - влажность сырья, %,

к аликвотной пробе фильтрата добавляют 1% раствор коллагена в 1% уксусной кислоте, взбалтывают, фильтруют, измеряют оптическую плотность фильтрата при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание осаждаемых дубильных веществ по формуле

D 1 - оптическая плотность раствора 1,

D 2 - оптическая плотность раствора 2,

m нав - масса навески сырья, г,

V a - объем аликвотной пробы, мл,

250 - общий объем извлечения, мл,

50 - объем колбы, мл,

508 - удельный показатель поглощения галловой кислоты (оптическая плотность 1% раствора галловой кислоты 1 мг/мл),

W - влажность сырья, %.

Практически способ осуществляется следующим образом. Около 2,0 (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят 30 мин с обратным холодильником при периодическом помешивании. Охлаждают до комнатной температуры, доводят водой до 250 мл, процеживают через вату так, чтобы частицы сырья не попали в водное извлечение. Первые 50 мл фильтрата отбрасывают.

1-4 мл водного извлечения помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 1). Измеряют оптическую плотность раствора 1 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду.

30 мл водного извлечения помещают в мерную емкость вместимостью 50 мл, добавляют 2-10 мл реактива осаждения, взбалтывают 30-60 мин, отстаивают, фильтруют. 1-4 мл полученного фильтрата переносят в колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 2). Измеряют оптическую плотность раствора 2 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду.

Изобретение иллюстрируется следующими примерами.

Пример 1. Для анализа взято растительное сырье - кора дуба.

Около 2,0 (точная навеска) измельченного сырья коры дуба, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят 30 мин с обратным холодильником при периодическом помешивании. Охлаждают до комнатной температуры, доводят водой до 250 мл, процеживают через вату так, чтобы частицы сырья не попали в водное извлечение. Первые 50 мл фильтрата отбрасывают.

2 мл водного извлечения из коры дуба помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 1). Измеряют оптическую плотность раствора 1 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду. D 1 для коры дуба равно 0,595.

30 мл водного извлечения помещают в мерную емкость вместимостью 50 мл, добавляют 2 мл реактива осаждения, взбалтывают 30 мин, отстаивают, фильтруют. 2 мл полученного фильтрата переносят в колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 2). Измеряют оптическую плотность раствора 2 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду. D 2 для коры дуба равно 0,276.

Пример 2. Для анализа взято растительное сырье корневища змеевика.

Около 2,0 (точная навеска) измельченного сырья корневища змеевика, просеянного сквозь сито с диаметром отверстий 3 мм, помещают в колбу вместимостью 500 мл, заливают 250 мл нагретой до кипения воды и кипятят 30 мин с обратным холодильником при периодическом помешивании. Охлаждают до комнатной температуры, доводят водой до 250 мл, процеживают через вату так, чтобы частицы сырья не попали в водное извлечение. Первые 50 мл фильтрата отбрасывают.

1 мл водного извлечения из корневища змеевика помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 1). Измеряют оптическую плотность раствора 1 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду.

30 мл водного извлечения помещают в мерную емкость вместимостью 50 мл, добавляют 7 мл реактива осаждения, взбалтывают 60 мин, отстаивают, фильтруют. 1 мл полученного фильтрата переносят в колбу вместимостью 50 мл, доводят водой до метки (раствор 2). Измеряют оптическую плотность раствора 2 при длине волны 277 нм. В качестве сравнения используют воду.

Предлагаемый способ позволяет повысить точность определения содержания дубильных веществ в растительном сырье и селективно определить осаждаемые и не осаждаемые дубильные вещества в растительном сырье.

Способ определения дубильных веществ в растительном сырье в пересчете на галловую кислоту, заключающийся в том, что навеску сырья экстрагируют водой при кипячении, охлаждают, фильтруют, измеряют оптическую плотность аликвотной пробы при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание суммы всех дубильных веществ по формуле:

где x a - содержание суммы дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту, %;

50 - объем колбы, мл;
508 - удельный показатель поглощения галловой кислоты (оптическая плотность 1% раствора галловой кислоты 1 мг/мл);
W - влажность сырья, %,
к аликвотной пробе фильтрата добавляют 1%-ный раствор коллагена в 1%-ной уксусной кислоте, взбалтывают, фильтруют, измеряют оптическую плотность фильтрата при длине волны 277 нм и рассчитывают содержание осаждаемых дубильных веществ по формуле:

где X - содержание осаждаемых дубильных веществ в пересчете на галловую кислоту, %;
D 1 - оптическая плотность раствора 1;
D 2 - оптическая плотность раствора 2;
m нав - масса навески сырья, г;
V a - объем аликвотной пробы, мл;
250 - общий объем извлечения, мл;
50 - объем колбы, мл;
508 - удельный показатель поглощения галловой кислоты (оптическая плотность 1%-ного раствора галловой кислоты 1 мг/мл);
W - влажность сырья, %.

Похожие патенты:

Изобретение относится к медицине, а именно к психоневрологии, и описывает способ прогнозирования восстановления неврологических функций у больных в остром периоде ишемического инсульта путем проведения клинических и биохимических исследований общей концентрации альбумина (ОКА) в сыворотке крови в г/л, где дополнительно на 5-7 день заболевания определяют эффективную концентрацию альбумина (ЭКА), рассчитывают резерв связывания альбумина (РСА) и при величине этого показателя менее единицы прогнозируют отрицательный результат восстановления неврологических функций у больных в остром периоде ишемического инсульта.

Изобретение относится к медицине, к биологическим исследованиям в онкологии, и может быть использовано для определения развития злокачественного процесса при опухолях головного мозга после оперативного лечения.

Изобретение относится к области медицины, конкретно к онкологии, и описывает способ оценки эффективности неоадъювантной химиотерапии рака мочевого пузыря путем исследования пациента, при котором производят регистрацию максимальной интенсивности аутофлюоресценции опухолевых тканей в зеленой области спектра на этапе первичной диагностики и через 1 месяц после проведения предоперационной химиотерапии и при увеличении у пациента значений максимальной интенсивности аутофлюоресценции опухолевой ткани на 15% от исходных и более эффективность лечения оценивают как частичную регрессию опухолевого процесса, при отсутствии изменений показателей интенсивности аутофлюоресценции опухолевой ткани от исходных определяют стабилизацию процесса, при уменьшении показателей интенсивности аутофлюоресценции опухолевой ткани на 15% и более от исходных отмечают прогрессирование опухолевого процесса.

Выделение из ЛРС . Дубильные вещества – это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру и очень лабильных, поэтому выделение и анализ отдельных компонентов дубильных веществ представляет большие трудности. Для получения суммы дубильных веществ ЛРС экстрагируют горячей водой, охлаждают, а затем экстракт обрабатывают последовательно:

Петролейным эфиром (очистка от хлорофилла, терпеноидов, липидов);

Диэтиловым эфиром, извлекающий катехины, оксикоричные кислоты и др фенолы

Этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксикоричной кислоты и др. Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракциями 2 и 3 (диэтилового эфира и этилацетата) разделяют на индивидуальные компоненты с помлщью различных видов хроматографии. Используют:

а) адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы,

б) распределительную хроматографию на колонках селикагеля;

в) ионообменную хроматографию;

г) гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др.

Идентификация индивидуальных дубильных веществ основана на сравнении Rf в хроматографических методах (на бумаге, в тонком слое сорбента), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления (для гидролизуемых дубильных веществ).

Количественное определение дубильных веществ . можно разделить на гравиметрические, титриметрические и физико-химические.

Гравиметрические методы основаны на количественном осаждении дубильных веществ солями тяжелых металлов, желатиной или адсорбцией гольевым порошком. Весовой единый метод (ВЕМ) широко применяется в кожевенной промышленности. Метод основан на способности дубильных веществ образовывать прочные соединения с коллагеном кожи. Для этого полученное водное извлечение из ЛРС делят на две равные части. Одну часть выпаривают, высушивают и взвешивают. Вторую часть обрабатывают кожным (гольевым) порошком, фильтруют. Фильтрат выпаривают, высушивают и взвешивают. По разности сухих остатков 1 и 2 части (т.е. контроля и опыта) определяют содержание в растворе дубильных веществ.

Титриметрический метод , включенный в ГФ-ХI, именуемый как метод Левенталя-Нейбауэра, основан на окислении фенолных ОН-групп перманганатом калия (КMnO 4) в присутствии индигосульфокислоты, являющейся регулятором и индикатором реакции. После полного окисления дубильных веществ начинает окисляться индигосульфокислота до изатина, в результате чего окраска раствора из синей переходит в золотисто-желтую. Другой титриметрический метод определения дубильных веществ – метод осаждения таннина сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Б в присутствии ксиленового оранжевого используется для определения таннина в листьях сумаха дубильного и скумпии кожевенной.

Физико-химические методы определения дубильных веществ :

1) колориметрические – ДВ дают окрашенные соединения с фос-молиб или фос-вольфрам к-ми в присутствие Na 2 CO 3 или с реактивом Фолина-Дениса (на фенолы).

2) хромато-спектрофотометрические и нефелометрические методы, которые используют, главным образом, в научных исследованиях.

Распространение в растительном мире, условия образования и роль растениях . Низкое содержание дубильных веществ отмечено у злаков. У двудольных некоторые семейства, – например, розоцветные, гречишные, бобовые, ивовые, сумаховые, буковые, вересковые, – насчитывают многие роды и виды, где содержание таннидов доходит до 20-30% и более. Наивысшее содержание дубильных веществ найдено в патологических образованиях – галлах (до 60-80%). Древесные формы богаче дубильными веществами, чем травянистые. Дубильные вещества неравномерно распределены по органам и тканям растений. Они накапливаются, главным образом, в коре и древесине деревьев и кустарников, а также в подземных частях травянистых многолетников; зеленые части растений значительно беднее дубильными веществами.

Дубильные вещества аккумулируются в вакуолях, а при старении клеток адсорбируются на клеточных стенках. Чаще всего в растениях встречается смесь гидролизуемых и конденсированных дубильных веществ с преобладанием соединений той или иной группы.

С возрастом растений количество дубильных веществ в них уменьшается. Растущие на солнце растения накапливают больше дубильных веществ, чем растущие в тени. В тропических растениях образуется значительно больше дубильных веществ, чем в растениях умеренных широт.

Био-медицинское действие и применение дубильных веществ . Дубильные вещества и содержащие их ЛР применяют в основном в качестве вяжущих, противовоспалительных и кровоостанавливающих средств .

А. Преимущественно гидролизуемые:

RhizomataBistortae – корневища Змеевика .

Горец змеиный (змеиный корень , змеевик ) (Polygonumbistorta ) – сем. Гречишные, Polygonaceae

Химический состав ЛРС : 15-25% дубильных веществ, преимущественно гидрлизуемых, галловую, эллаговую, аскорбиновую, фенолкарбоновые и органические кислоты, флавоноиды (кверцетин)

Основное действие ЛРС : вяжущее, антисептическое.

Характер применения . Настой и отвар применяется как вяжущее, кровоостанавливающее, антивоспалительное при небольших кровотеченях в ЖКТ, остром и хроническом воспалениях желудка, пищевых отравлениях, дерматозах, ожогах, воспалении полости рта, влагалища, геморрое.

FoliaCotinuscoggygriae – листья Скумпии кожевенной .

Скумпия кожевенная (Cotinuscoggygria ) – сем. Сумаховые, Anacardiaceae – ветвистый кустарник

Химический состав ЛРС . 0,2% эфирного масла (преобладает мирцен), ~25% таннина, флавоноиды.

Основное действие ЛРС : вяжущее, дезинфицирующее.

Характер применения . используются для промышленного получения таннина и его препаратов, а также препарата Флакумин , представляющего собой сумму флавоноловых агликонов из листьев скумпии и обладает желчегонным действием.

FoliaRhuscoriariariae – листья Сумаха дубильного .

Сумах дубильный (Rhuscoriariariae ) – сем. Сумаховые, Anacardiaceae – кустарник

Химический состав ЛРС . дубильные вещества (25%, преобладает таннин), флавоноиды (2,5% − производные кверцитина, мирицетина, кемпферола), галловую и эллаговую кислоты.

Основное действие ЛРС : вяжущее, дезинфицирующее.

Характер применения . используются для промышленного получения таннина и его препаратов, используемых при лечении воспалительных процессов рото-носовой полости с помощью полосканий 2% водным или водно-глицериновым раствором, язв, ран и ожогов с помощью смазывания 3-10% растворами и мазями.

Rhizomata Bergeniaecrassifoliae – корневища Бадана толстолистного.

Бадан толстолистный (Bergeniacrassifolia ) – сем. Камнеломковые, Saxifragaceae – многолетнее травянистое растение

Химический состав ЛРС : дубильные вещества (~27%, из них танин – 8-10%), галловая кислота, арбутин (до 22%), свободный гидрохинон (2-4%), кумарины, смолы, витамин С, сахар,

Характер применения . Настой и отвар из корней и корневищ бадана применяют в гинекологии, стоматологии для остановки кровотечений и как антивоспалительное, антисептическое, для лечения гастритов и язв желудка и 12-перстной кишки, в народной медицине – для лечения туберкулеза легких.

RhizomataetradicesSanguisorbae – корневища и корни Кровохлебки .

Кровохлебка лекарственная (Sangusorbaofficinalis ) – сем. Розоцветные, Rosaceae – многолетнее травянистое растение

Химический состав ЛР : дубильные вещества, преимущественно гидролизуемые (12-20%), эллаговая, галловая кислоты, флавоноиды, антоцианы, катехины, сапонины.

Основное действие ЛРС : вяжущее, кровоостанавливающее.

Характер применения . Корневища и корни кровохлебки применяют в виде отвара и жидкого экстракта как вяжущее средство при желудочно-кишечных заболеваниях, энтероколите, поносе; как кровоостанавливающее при маточных и геморроидальных кровотечениях, кровохаркании.

FructusAlni – соплодия (шишки) Ольхи .

FoliaAlniincanae – листья Ольхи серой.

FoliaAlniglutinosa – листья Ольхи черной.

Ольха черная (клейкая ) (Alnusglutinosa ), о. серая (Alnusincana ) – сем. Березовые, Betulaceae – деревья или крупные кустарники.

Химический состав ЛРС : соплодия ольхи содержат дубильные вещества, галловая кислота (до 4%), флавоноиды. В листьях о. серой и о. черной содержатся флавоноиды.

Основное действие ЛРС : вяжущее, дезинфицирующее, антивоспалительное.

Характер применения . Отвар и настой применяют внутрь при острых и хронических энтеритах, колитах, дезинтерии; наружно – для полоскания горла, полости рта.

Б. Преимущественно конденсированные:

CorticesQuerqus –кора дуба.

Дуб обыкновенный (Querqusrobur ) – сем. Буковые, Fagaceae – мощное дерево

Химический состав ЛРС : дубильные вещества (10-20%, гидролизуемые и конденсированные), галловая, эллаговая кислоты, флавоноиды

Основное действие ЛРС : вяжущее, антибактериальное.

Характер применения . в виде отвара и настоя как наружное вяжущее и противововоспалительное средство для лечения стоматитов, гингивитов, воспалений ротовой полости, женских половых органов, ожогов кожи, потливости.

RhizomataTormentillae – корневища лапчатки прямостоячей .

Лапчатка прямостоячая – Potentillaerecta – сем. Розоцветные,Rosaceae – многолетнее травянистое растение

Химический состав ЛРС . дубильные вещества (15-30%: преобладают конденсированные таннины), антоцианы, катехины.

Основное действие ЛРС

Характер применения . Отвар и настой применяют внутрь как вяжущее и противовоспалительное средство при воспалительных состояниях рта и гортани, расстройствах ЖКТ, наружно при экземе.

Fructus Vaccinium mirtilli – плодычерники.

Cormi Vaccinii mytilli – побегичерники.

Черникаобыкновенная (Vaccinium myrtillus L.) –Вересковые, Ericaceae – мелкий кустарничек

Химический состав ЛРС . дубильные вещества (18-20%), в том числе конденсированные (5-12%), флавоноиды (гиперин, рутин), антоцианы.

Основное действие ЛРС : вяжущее, противовоспалительное.

Характер применения . чаще в виде настоя, отвара, киселя в связи с бродильными и гнилостными процессами в кишечнике, колитах. Показано, что плоды черники улучшают кровоснабжение глаз, стабилизируют структуру сетчатки, улучшают ночное зрение.

FructusPadi – плоды черемухи .

Черемуха обыкновенная (Padusavium ), ч. азиатская (P. asiatica ) – сем. Розоцветные,Rosaceae – дерево до 10 м высотой

Химический состав ЛРС : дубильные вещества (15%: преимущественно конденсированные), фенолкарбоновые и органические кислоты, витамин С, сахара, гликозиды терпеноидов

Основное действие ЛРС : вяжущее, дезинфицирующее.

Характер применения . Отвар и настой применяют как вяжущее средство и дезинфицирующее ЖКТ: при дизентерие, поносах. Плоды черемухи − компонет желудочных сборов.

15681 2018-09-22

Что такое дубильные вещества?

Дубильные вещества - это природные высокомолекулярные фенольные соединения, широко распространенные в мире растений. Если говорить более простыми словами, то это такие вещества, которые придают разным плодам вяжущий и терпковатый вкус. В зависимости от того, какова их концентрация в определенном растении, у него будет более или менее выраженная терпкость. Терн, хурма, груша, - припоминаете характерный вкус этих и ягод? Все дело именно в наличии дубильных веществ.

Какими же свойствами обладают дубильные вещества? Можно сказать большими. Фенольные соединения оказывают влияние на органическую среду и устраняют влияние микроорганизмов. Дубильные вещества растений характеризуются особым вяжущим вкусом и подразделяются на органические и минеральные. Органические бывают растительного и животного происхождения.

Какие растения содержат больше всего дубильных веществ?

Корневища змеевика
Корневища лапчатки
Корневища и корни кровохлебки
Плоды
Плоды черемухи
Соплодия ольхи
Корневища бадана
Лист скумпии
Лист сумаха
Черный
Кизил
Хурма
Черная

Доказанной эффективностью обладают дубильные вещества в чае . Их гораздо больше в чайных листьях, чем даже во фруктах. Кстати, в зеленом чае его концентрация достигает 10-30%, в черном - 5-17% . Известно, что благодаря наличию напиток работает как и активное дезинфицирующее средство, а также помогает нейтрализовать в организме радиоактивный стронций .

Танины также содержатся в натуральном , которые и придают ему горький вкус и терпковатое послевкусие. Немало дубильных веществ в красном вине, которые дают организму и . Есть они и в коньяке, благодаря которым улучшается усвоение витамина С.

Влияние дубильных веществ на организм человека

Дубильные вещества влияние на организм человека оказывают довольно заметное. В первую очередь, отмечается их вяжущее свойство. Оно проявляется в самых разных областях. Танины при правильном употреблении благополучно достигают и помогают справиться с его расстройствами, , диареей.

Дубильные вещества при взаимодействии с белками, вызывают их частичное свертывание, и создают водонепроницаемую защитную альбуминатную пленку (дубление), на чем основано их бактерицидное и противовоспалительное действие на слизистых оболочках и раневых поверхностях.

Польза для пищеварения

Дубильные вещества положительно влияют на работу желудочно-кишечного тракта в целом. В частности, они подавляют деятельность болезнетворных микроорганизмов, способствуют выведению вредных отложений, помогают наилучшему усвоению полезных соединений.

Активные вещества танины способствуют и общему очищению организма. Они выводят из него самые разные типы токсинов и шлаков. Эти соединения способны помочь даже при радиационном облучении.

Кровоостанавливающие свойства

Особо выделяется и кровоостанавливающее свойство дубильных веществ. Оно активно используется в самых разных случаях. Танины помогают остановить как внешние, так и внутренние . Поэтому их применяют при обильных , геморрое, кровоточивости десен и повреждениях кожных покровов - порезах и других ранах.

Противовоспалительное действие

Обладают дубильные вещества и противовоспалительными свойствами. Они защищают ткани от инфекций, уничтожают болезнетворные , останавливают воспалительный процесс. Таким образом, их широко используют в медицине при лечении самых разных недугов. Особенно эффективны танины против воспалений в ротовой полости и горле, поскольку в данном случае происходит непосредственное воздействие путем . Когда требуется лечение кишечных или желудочных заболеваний, необходимо пить лекарственные отвары натощак и между приемами пищи, чтобы активные соединения беспрепятственно достигли того или иного органа. Конечно, дубильные вещества эффективно справляются и с воспалительными процессами на коже. В частности, они способствуют устранению угревой сыпи и некоторых дерматологических заболеваний. В этих случаях применяются специальные мази и лосьоны с танинами.

Кроме того, дубильные вещества имеют следующие полезные свойства:

Устраняют .
Делают кровеносные более эластичными.
, в составе которых имеются дубильные вещества, используются при заболеваниях носа и глаз (в виде капель) .
Продукты питания с данными веществами благоприятно действуют в профилактике отложения солей тяжелых металлов, при поносе, радиоактивном поражении.
Их применяют для полоскания ротовой полости и горла при таких болезненных воспалительных заболеваниях как стоматит, , и пр.
За счет того, что дубильные вещества способны эффективно обеззараживать и блокировать влияние патогенной микрофлоры, растворы с этими веществами применяют в качестве компрессов при ссадинах, порезах, .
Если развилось организма, сопровождаемое серьезной , они помогут связать и вывести вредные вещества. С алкалоидами и солями тяжелых металлов танины создают нерастворимые соединения, благодаря чему те перестают оказывать негативное воздействие . Дубильные вещества - эффективное противоядие при отравлении , такое сырье при температуре 50-60°С. и хранить в сухом помещении в плотной упаковке, желательно в целом виде, так как в измельченном состоянии сырье подвергается быстрому окислению вследствие увеличения поверхности соприкосновения с воздуха.
Заключение

Дубильные вещества играют важную роль в формировании крепкого здоровья. Они содержатся в некоторых продуктах, которые часто присутствуют практически на каждом столе. Чтобы извлечь из них только пользу, помните о том, что все хорошо в меру. Используя же танины в лечебных целях, соблюдайте правила приема лекарств и следите за своим самочувствием.

Дубильные вещества - сложные высокомолекулярные природные растительные фенольные соединения, способные осаждать белки и алкалоиды и дубить невыделанную шкуру животных, превращая ее в прочный, неподдающийся гниению продукт - кожу.

Термин «дубильные вещества» был введен французским ученым П. Сегеном в 1796 г.

Таннины, или танниды, - синоним термина «дубильные вещества». Он происходит от латино-кельтского обозначения дуба - «тан» - и широко распространен в научной литературе.

Способность этих веществ «дубить» белки шкур животных, делать их непроницаемыми для воды и устойчивыми к микробному гниению основана на их свойстве взаимодействовать с коллагеном, приводящим к образованию стойких полимерных структур. Дубление - сложный физико-химический процесс, связанный с возникновением водородных, ковалентных и электровалентных связей между молекулами коллагена и фенольными группами дубильных веществ.

Дубящими свойствами обладают только многоядерные фенолы, содержащие более одной ОН-группы. Это крупные фенольные молекулы с молекулярной массой от 300 до 500 и иногда до 20 000. Фенолы одноядерные и не содержащие многочисленных ОН-групп лишь адсорбируются на белках, но не могут образовать перекрестные связи между собой и белковыми группами, «сшивать» мономерные белковые группы. Они в той или иной степени инактивируют ферментные белки, но не вызывают фенол-белковых сцепок в коллагене - основном белковом компоненте шкур. Поэтому низкомолекулярные фенолы имеют лишь вяжущий вкус, их еще называют пищевыми (чайными) таннинами.

Классификация

Первая попытка классификации дубильных веществ была предпринята шведским химиком И. Берцелиусом, который разделил эти вещества на две группы по их способности давать с солями Fe (III) черные соединения зеленоватого или синеватого оттенка. Впоследствии эта простая классификация дубильных веществ легла в основу более точной научной классификации, предложенной К. Фрейденбер-
гом. Он стал делить дубильные вещества в зависимости от их способности гидролизоваться под действием кислот (или ферментов) на две группы:

1) гидролизуемые дубильные вещества:

Галлотаннины;

Эллаготаннины;

Депсиды, или несахарные эфиры карбоновых кислот;

2) негидролизуемые (конденсированные) дубильные вещества, или флоба- фены, которые подразделяют на производные:

Катехинов (флаван-3-олов);

Лейкоантоцианидинов (флаван-3,4-диолов);

Гидростильбенов.

Гидролизуемые дубильные вещества. Галлотаннины - сложные эфиры гексоз (обычно D-глюкозы) и галловой кислоты. В глюкозе имеется пять ОН-групп, благодаря которым могут образовываться моно-, ди-, три-, тетра-, пента- и полигаллоильные эфиры. Представителем группы полигаллоильных эфиров является китайский таннин, который получают из листьев и образующихся на них наростов (галлов) сумаха полукрылатого (Rhus semialata Murr.). Представителем многогаллоильных эфиров является P-D-глюкогаллин, выделенный из корня ревеня и листьев эвкалипта.

Эллаготаннины - эфиры D-глюкозы и гексадифеноловой, хебуловой и других кислот, образующихся вместе c эллаговой кислотой. Эллаготаннины найдены в коре плодов граната, кожуре грецкого ореха, коре дуба, соплодиях ольхи. В растениях присутствует обычно не эллаговая, а гексагидроксидифеновая кислота.

При кислотном гидролизе дубильных веществ эта кислота превращается в дилак- тон - эллаговую кислоту.

Депсиды представляют собой эфиры галловой кислоты с хинной, хлорогено- вой, кофейной, гидроксикоричной кислотами, атакже флаванами. Эфиры галловой кислоты и катехинов находятся в листьях чая. Из листьев зеленого чая выделен теогаллин.

Теогаллин (депсид)

Преимущественно гидролизуемые дубильные вещества содержат такие ЛР, как скумпия кожевенная, сумах дубильный, горец змеиный, бадан толстолистный, кровохлебка лекарственная, ольха черная и о. серая.

Преимущественно конденсированные дубильные вещества содержат дуб обыкновенный, лапчатка прямостоячая, черника обыкновенная, черемуха обыкновенная.

Негидролизуемые дубильные вещества. Представляют собой олигомеры и полимеры катехинов, лейкоантоцианидинов и гидроксистильбенов, где звенья связаны друг с другом прочными углерод-углеродными связями в положениях С2-С6, С2-С8, С4-С8, С5-С2. Кроме того, они никогда не содержат остатков сахара.

При образовании конденсированных дубильных веществ разрывается пира- новое кольцо катехина (лейкоантоцианидина) и С2-атом соединяется С-С-свя- зью с С6-атомом другой молекулы катехина (лейкоантоцианидина). Конденсированные дубильные вещества не распадаются под действием кислот; наоборот, они имеют тенденцию из олигомеров превращаться в более длинные полимеры (полимеризация в кислоте) с образованием аморфных, часто окрашенных в красный цвет соединений - флобафенов. Образование конденсированных дубильных веществ происходит в живом растении в процессе биосинтеза и после его смерти - при технологической обработке древесины.

Образование конденсированных дубильных веществ из мономеров

Физико-химические свойства

По физико-химическим свойствам дубильные вещества представляют собой аморфные соединения желтоватого или бурого цвета.

Природные дубильные вещества имеют среднюю молекулярную массу 500-5000, но отдельные соединения - до 20 000. При нагревании до 180-200 °С дубильные вещества (не плавясь) обугливаются, выделяя пирогаллол или пирокатехин. Растворяются во многих органических растворителях (ацетон, этанол, этилацетат, пиридин), но не в хлороформе, петролейном эфире, бензоле. Также хорошо растворимы в воде, лучше горячей. При растворении в воде дают коллоидные растворы слабокислой реакции. С солями тяжелых металлов образуют окрашенные комплексы. Осаждаются растворами аминокислот, белков, алкалоидов. Многие дубильные вещества - оптически активные соединения. Обладают вяжущим вкусом. Легко окисляются на воздухе, приобретая красно-бурую окраску, иногда темно-коричневую. Присутствие гидроксидов щелочных металлов сильно ускоряет процесс окисления дубильных веществ. Гидролизуемые дубильные вещества под действием кислот или ферментов распадаются на органические кислоты и глюкозу.

Выделение из ЛРС

Дубильные вещества - это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру, очень лабильных, поэтому выделение и анализ отдельных компонентов дубильных веществ представляет большие трудности. Для получения суммы дубильных веществ ЛРС экстрагируют горячей водой, охлаждают, а затем экстракт обрабатывают последовательно:

1) петролейным эфиром или бензолом (для очистки от хлорофилла, терпе- ноидов, липидов);

2) диэтиловым эфиром, который извлекает катехины, оксикоричные кислоты и другие фенольные соединения;

3) этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксико- ричной кислоты и др.

Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракциями 2 и 3 (диэтилового эфира и этилацетата) разделяют на индивидуальные компоненты с помощью различных видов хроматографии. Используют:

Адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевый порошок);

Распределительную хроматографию на колонках силикагеля;

Ионообменную хроматографию;

Гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др.

Качественное выделение дубильных веществ

Качественные реакции определения дубильных веществ можно разделить на две группы:

1) общие (осаждения) - для обнаружения присутствия дубильных веществ;

2) групповые (цветные) - для установления принадлежности дубильных веществ к определенной группе.

Прежде всего для проведения качественных реакций готовят водное извлечение дубильных веществ из ЛРС.

Дубильные вещества обнаруживают, используя следующие реакции:

Соединяя с 1 % раствором желатина в 10 % растворе NaCl. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина. Реакция специфична;

Осаждая солями алкалоидов (например, сульфатом хинина). Образуется белый осадок;

Соединяя с 5 % раствором дихромата калия (К2Сг2О7). Образуется коричневый осадок или муть. Эта же реакция используется и как гистохимическая для обнаружения локализации дубильных веществ в ЛРС;

Соединяя с раствором основного ацетата свинца: образуется белый осадок;

Соединяя с ванилином (в присутствии 70 % серной или концентрированной хлористо-водородной кислоты) дубильные вещества, содержащие мономеры катехинового типа, развивают красное окрашивание.

Классификацию дубильных веществ проводят с помощью следующих реакций:

С 1 % раствором железоаммонийных квасцов (или другими источниками ионов Fe3+): гидролизуемые дубильные вещества дают черно-синее окрашивание, а конденсированные - черно-зеленое;

С 10 % раствором среднего ацетата свинца в 10 % уксусной кислоте: гидролизуемые дубильные вещества выпадают в белый хлопьевидный осадок, а конденсированные остаются в растворе и их можно также затем определить (например, по зеленовато-черному окрашиванию с Fe3+);

Со смесью из 40 % раствора формальдегида и концентрированной HCl: конденсированные дубильные вещества выпадают в осадок, а гидролизуемые остаются в водном растворе (что можно установить по синевато-черному окрашиванию в дополнительном тесте с Fe3+);

С кристалликами NaNO2 и раствором 0,1 М HCl: при наличии в экстракте ЛРС дубильных веществ появляется коричневое окрашивание;

С раствором HCl и добавлении 1 % раствора (или кристалликов) ванилина гидролизуемые дубильные вещества, состоящие из мономеров катехинов, при нагревании дают ярко-красное окрашивание. Гидролизуемые дубильные вещества, состоящие из мономеров лейкоантоцианидинов, можно обнаружить, нагревая извлечение с раствором HCl: появляется красное окрашивание (за счет образования анто- цианидинов, дающих красное окрашивание в кислых значениях рН);

При добавлении бромной воды и нагревании конденсированные дубильные вещества в экстракте из ЛРС выпадают в осадок.

При хроматографическом определении дубильных веществ этанольный экстракт из ЛРС наносят на стартовую линию хроматографической пластинки «Си- луфол», помещают в хроматографическую камеру (с соответствующими растворителями, указанными в НД), а после проведения разделения пластинку просматривают в УФ-свете и отмечают, что некоторые производные катехинов имеют голубую флуоресценцию, которая усиливается при обработке хроматограмм 1 % раствором ванилина в концентрированной HCl. После выдерживания хроматограмм в парах HCl с последующим нагреванием в сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 2 мин дубильные вещества лейкоантоцианидинового типа переходят в антоцианидины розового или красно-фиолетового цвета.

Количественное определение дубильных веществ

Методы количественного определения дубильных веществ в ЛРС можно разделить на гравиметрические, титриметрические и физико-химические.

Гравиметрические методы основаны на количественном осаждении дубильных веществ солями тяжелых металлов, желатиной или адсорбцией гольевым порошком. Методы осаждения дубильных веществ ацетатом меди или желатиной потеряли свое значение.

Однако весовой единый метод (ВЕМ) применяется в кожевенной промышленности. Метод основан на способности дубильных веществ давать прочные соединения с коллагеном кожи. Для этого полученное водное извлечение из ЛРС делят на две равные части. Одну часть выпаривают, высушивают и взвешивают; вторую обрабатывают гольевым (кожным) порошком, фильтруют. Фильтрат выпаривают, высушивают и взвешивают. По разности сухих остатков 1-й и 2-й частей (т. е. контроля и опыта) определяют содержание дубильных веществ в растворе.

Титриметрическийметод, включенный в ГФ РБ (вып. 2, с. 348), именуемый методом Левенталя - Нейбауэра, основан на окислении фенольных ОН-групп перманганатом калия ^MnO4) в присутствии индигосульфокислоты, являющейся регулятором и индикатором реакции. После полного окисления дубильных веществ начинает окисляться индигосульфокислота до изатина, в результате чего окраска раствора из синей переходит в золотисто-желтую.

Другой титриметрический метод определения дубильных веществ - метод осаждения таннина сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Б в присутствии ксиленового оранжевого (используется, в частности, для определения таннина в листьях сумаха дубильного и скумпии кожевенной).

Физико-химические методы определения дубильных веществ:

Колориметрические - связаны со способностью дубильных веществ давать окрашенные соединения с фосфорно-молибденовой или фосфорно-вольфрамовой кислотами в присутствии Na2CO3 или с реактивом Фолина - Дениса (на фенолы). ГФ РБ (т. 1; 2.8.14) предлагает фотоколометрическое определение экстрагированных из ЛРС в водный раствор дубильных веществ с раствором фосфорно-молибденового реагента в присутствии натрия карбоната при длине волны 760 нм;

Хромато-спектрофотометрические и нефелометрические методы, которые используют главным образом в научных исследованиях.

Распространение в растительном мире, условия образования и роль в растениях

Дубильные вещества широко распространены в растительном мире. Они встречаются в грибах, водорослях, папоротниках, хвощах, мхах, плаунах, у высших растений (покрыто- и голосеменных). Многие хвойные накапливают достаточно большое количество дубильных веществ. Максимальное их накопление обнаружено у отдельных представителей двудольных растений, тогда как у однодольных оно отмечено лишь у некоторых семейств. Низкое содержание дубильных веществ у злаков. У двудольных некоторые семейства (например, Розоцветные, Гречишные, Бобовые, Ивовые, Сумаховые, Буковые, Вересковые) насчитывают многие роды и виды, где содержание таннидов доходит до 20-30 % и более. Наивысшее содержание дубильных веществ выявлено в патологических образованиях - галлах (до 60-80 %). Древесные формы богаче дубильными веществами, чем травянистые. Дубильные вещества неравномерно распределены по органам и тканям растений. Они накапливаются главным образом в коре и древесине деревьев и кустарников, а также в подземных частях травянистых многолетников; зеленые части растений значительно беднее дубильными веществами. В частности, дубильные вещества накапливаются:

В подземных органах (лапчатка прямостоячая, кровохлебка лекарственная, бадан толстолистный);

Коре (дуб обыкновенный);

Траве (виды зверобоя);

Плодах (черника обыкновенная, черемуха обыкновенная, ольха клейкая и

о. серая);

Листьях (сумах дубильный, скумпия кожевенная).

Содержание дубильных веществ в растениях изменяется в зависимости от периода вегетации и возраста растений. Их накопление одновременно сопровождается резким увеличением массы корневых систем. С возрастом растений количество дубильных веществ в них уменьшается. Период вегетации влияет не только на количественный, но и на качественный состав дубильных веществ.

Растущие на солнце растения накапливают больше дубильных веществ, чем растущие в тени (так, в тропических растениях их образуется значительно больше, чем в растениях умеренных широт). На содержание дубильных веществ в растениях влияет также высота над уровнем моря, время года - особенно в областях с резко выраженной сезонностью климата. Содержание дубильных веществ зависит как от климатических, почвенных, так и от генетических (наследственных) факторов растения.

Установлено, что большинство дубильных веществ в листьях находится в клетках паренхимы, окружающих жилку, т. е. дубильные вещества образуются в листьях и оттуда проходят в клетки флоэмы проводящих пучков, по которым разносятся по всему растению. Обладая бактерицидными свойствами (благодаря своей фенольной природе), они препятствуют гниению древесины и являются веществами, защищающими растения от вредителей и возбудителей заболеваний. Дубильные вещества также участвуют в процессах метаболизма растений. Они откладываются как запасные продукты, которые могут использоваться затем при весеннем пробуждении и нарастании вегетативных органов.

Биомедицинское действие и применение

Дубильные вещества и содержащие их ЛР применяют в основном в качестве вяжущих, противовоспалительных и кровоостанавливающих средств.

Растворы таннидов связываются с белками кожи, образуя непроницаемую для воды пленку. На этом основано их медицинское применение в виде вяжущих средств, так как образующаяся на слизистых оболочках пленка препятствует дальнейшему воспалению, а нанесенные на рану, они свертывают кровь и поэтому действуют как местные кровоостанавливающие средства. Свойство образования пленки на языке обусловливает характерный вяжущий вкус дубильных веществ.

Как вяжущие средства;

Кровоостанавливающие средства;

Противовоспалительные средства;

Антимикробные средства;

а также в качестве:

P-витаминных и антисклеротических средств (гидролизуемые и конденсированные дубильные вещества);

Антиоксидантов и гипооксантов (конденсированные дубильные вещества);

Противоопухолевых средств (конденсированные дубильные вещества);

Противоядия при отравлении гликозидами, алкалоидами и солями тяжелых металлов (дубильные вещества).

Показано, что большие дозы дубильных веществ оказывают противоопухолевое действие, средние - радиосенсибилизирующее, малые - противолучевое.

Широкое применение дубильные вещества находят также в кожевенной, коньячной и пищевой промышленности.

Заготовка ЛРС, содержащего дубильные вещества

Заготовку проводят в период максимального содержания дубильных веществ. Сушат быстро при температуре 50-60 °С, так как продолжительное хранение свежего сырья ведет к гидролитическому расщеплению гидролизуемых и конденсированных дубильных веществ под влиянием ферментов. Высушенное ЛРС хранят цельным в сухом помещении в упакованном виде. При хранении измельченного ЛРС повышается скорость окисления дубильных веществ, изменяется цвет.

ДВ - это смесь различных полифенолов, имеющих сложную структуру, и очень лабильных, поэтому выделение и анализ индивидуальных компонентов представляет собой большие трудности.

Для получения суммы ДВ (схема 13) ЛРС экстрагируют горячей водой, а затем охлаждают. Водный экстракт обрабатывают последовательно:

1. Петролейным эфиром (или бензолом) - для очистки от хлорофилла, терпеноидов и липидов.

2. Диэтиловым эфиром, который извлекает катехины, оксикоричные кислоты и др. фенольные соединения.

3. Этилацетатом, в который переходят лейкоантоцианидины, эфиры оксикоричных кислот и др.

Оставшееся водное извлечение с дубильными веществами и другими фенольными соединениями и фракции диэтилового эфира и этилацетата разделяют на индивидуальные компоненты с помощью различных видов хроматографии. Используют

 адсорбционную хроматографию на колонках целлюлозы, полиамида (иногда вместо полиамида используют гольевой порошок);

 распределительную хроматографию на колонках силикагеля;

 ионообменную;

 гель-фильтрацию на колонках сефадекса и др.

Идентификация индивидуальных компонентов ДВ основана на хроматографических методах (хроматография на бумаге и тонкослойная), спектральных исследованиях, качественных реакциях и изучении продуктов расщепления.

Схема 13

Качественный анализ

Качественные реакции можно подразделить на 2 группы:

I. Общие реакции осаждения - для обнаружения ДВ.

II. Групповые - для установления принадлежности ДВ к определенной группе.

Для проведения качественных реакций готовят водное извлечение из ЛРС.

I. Для обнаружения дубильных веществ проводят реакции:

1) с 1% раствором желатина в 10% растворе натрия хлорида. Появляется муть, исчезающая при добавлении избытка желатина. Реакция специфична ;

2) осаждение ДВ солями алкалоидов (сульфат хинина). Образуется белый осадок;

3) с 5% раствором бихромата калия. Образуется коричневый осадок или муть. (Это и гистохимическая реакция обнаружения локализации ДВ в сырье);

4) с раствором основного ацетата свинца. Образуется белый осадок.

II. Определение групповой принадлежности ДВ :

1) с 1% раствором железоаммониевых квасцов гидролизуемые ДВ дают черно-синее окрашивание, а конденсированные - черно-зеленое;

2) 10% раствор среднего ацетата свинца в уксуснокислом растворе (10%) осаждает гидролизуемые ДВ, конденсированные остаются в растворе, которые с железоаммониевыми квасцами дают черно-зеленое окрашивание;

3) при нагревании извлечения с бромной водой конденсированные ДВ выпадают в осадок;

4) смесь 40% раствора формальдегида и концентрированной хлористоводородной кислоты осаждает конденсированные ДВ, а гидролизуемые остаются в растворе.

Реакция на катехины : с 1% раствором ванилина в концентрированной хлористоводородной кислоте образуется ярко-красное окрашивание.

Лейкоантоцианидины можно обнаружить, нагревая извлечение с раствором хлористоводородной кислоты - появляется красное окрашивание за счет образования антоцианов.

Количественный анализ

Все методы количественного определения ДВ в ЛРС можно разделить на гравиметрические, объемные и физико-химические.

1. Гравиметрические методы :

1) Ранее использовали осаждение ДВ желатином или ацетатом меди. В настоящее время эти методики потеряли свое значение.

2) В кожевенной промышленности применяется весовой единый метод (ВЕМ). Метод основан на свойстве ДВ давать необратимые соединения с коллагеном кожи.

Получают водное извлечение из ЛРС, делят его на 2 равные части. Одну часть упаривают, высушивают и взвешивают (Р). Вторую часть обрабатывают кожным (гольевым) порошком, фильтруют. Фильтрат упаривают досуха, высушивают и взвешивают (Р 1). По разности сухих остатков в контроле (Р) и в опыте (Р 1) определяют содержание ДВ.

2. Объемные методы :

1) В ГФ ХI (вып. 1, с. 286) принят оксидиметрический метод определения ДВ (схема 14).

Схема 14

Схема количественного определения ДВ в ЛРС

Подготовка ЛРС (измельчение, просеивание, взятие навески)

Экстракция ДВ водой при нагревании

Фильтрация

На выброс -

охлаждение отработанное сырье

Окислительно-восстановительное титрование

Часть фильтрата, разбавленного водой,

титруют раствором перманганата калия

в присутствии индигосульфокислоты

Расчет результатов

Метод основан на окислении фенольных ОН-групп перманганатом калия в присутствии индигосульфокислоты, которая является регулятором и индикатором реакции. После полного окисления ДВ перманганатом калия начинает окисляться индигосульфокислота до изатина, в результате чего окраска из синей переходит в золотисто-желтую.

ИНДИГОСУЛЬФОКИСЛОТА ИЗАТИН

(синий цвет) (золотисто-желтый)

Методика имеет ряд недостатков - кроме ДВ, происходит окисление других соединений. Несмотря на различную структуру ДВ в сырье, пересчет их содержания ведется на танин.

2) Для количественного определения танина в листьях сумаха и скумпии включен метод осаждения ДВ сульфатом цинка с последующим комплексонометрическим титрованием трилоном Б в присутствии ксиленового оранжевого.

3. Физико-химические методы :

1) Колориметрические методы связаны со способностью ДВ давать окрашенные соединения с фосфорно-молибденовой или фосфорно-вольфрамовой кислотами в присутствии карбоната натрия или с реактивом Фолина - Дениса и др.

2) Хромато-спектрофотометрические методы .