Дополнительные методы исследования крови определение гематокрита ретикулоцитов. Подсчет ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями. Они требуют отдельной окраски

Ретикулоциты – молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер. Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие в их цитоплазме зернисто-нитчатой субстанции (ретикулума), представляющей агрегированные рибосомы и митохондрии.

1.) Подсчет количества ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями.

Данный метод является на практике наиболее используемым методом в связи с тем, что он простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, соответственно может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории.

Принцип метода основан на выявлении зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками (насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте / раствор азура I /раствор азура II) с дальнейшим подсчетом их в мазке крови. Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке. Подсчет осуществляют с помощью микроскопа: приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом; в мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

2.) Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии.

Данный метод отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества, однако он возможен только при наличии люминесцентного микроскопа и специальных красителей, в связи с чем доступен лишь немногим лабораториям.

Принцип подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии основан на использовании способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обработки крови акридиновым оранжевым. Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 часов). Смесь перемешивают в течение 2 минут, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. При этом жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла.

Микроскопируют с помощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты имеют темно-зеленые очертания и не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом, благодаря чему ретикулоциты легко подсчитать. В крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не наблюдается.

3.) Автоматический подсчет количества ретикулоцитов с помощью гематологического анализатора.

В современных гематологических анализаторах технология подсчета форменных элементов крови основана на кондуктометрическом методе, предложенном H. Wallace и Joseph R. Culter в 1947 г. Принцип метода заключается в подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два изолированных друг от друга электрода. Каждое прохождение клетки через апертуру сопровождается появлением электрического импульса, который регистрируется электронным датчиком. Разделение клеток по категориям (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, осадок) осуществляется прибором на основании анализа амплитуды полученных импульсов.Чтобы определить концентрацию клеток, достаточно пропустить определенный объем пробы через канал и подсчитать количество импульсов, которые при этом генерируются.

Следует обратить внимание на то, что помимо классического параметра ретикулоцитов - относительное (%) содержание ретикулоцитов (RET%, percent of reticulocytes), определяемого с помощью 1 и 2 методов лабораторной диагностики, в связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов (3 метод) стало возможным получать (например, с помощью запатентованного флюоресцентного красителя для анализатора Sysmex -XT- 2000i) дополнительные информативные ретикулоцитарные параметры:
ретикулоциты с низким содержанием РНК, наиболее зрелые (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракция ретикулоцитов с низкой флуоресценцией);
ретикулоциты со средним содержанием РНК (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов со средней флуоресценцией);
ретикулоциты с высоким содержанием РНК (HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов с высокой флуоресценцией);
незрелая фракция ретикулоцитов (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Дифференцировка ретикулоцитов, основанная на степени зрелости и, соответственно, содержании нуклеиновых кислот, является отражением гемопоэтической активности костного мозга.

Методика (анализатор Sysmex -XT- 2000i). В проточной кювете клетки пересекают луч полупроводникового лазера, при этом происходит рассеивание луча под большим и малым углами и возбуждение флюоресцентного красителя. Это позволяет определять различные стадии зрелости ретикулоцитов по содержанию РНК в клетках и интенсивности их свечения. Автоматизированный подсчет ретикулоцитов отличается высокой точностью (подсчитывается более 30 000 эритроцитов) и воспроизводимостью (коэффициент вариации составляет около 6%). Данная технология обеспечивает точный подсчет ретикулоцитов даже при их предельно низких концентрациях.

Выявление зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при окраске бриллиант-крезиловым синим без предварительной фиксации.

Реактивы:

1 % раствор бриллиант-крезилового синего: 50 мг краски растворяют в 5 мл физиологического раствора и добавляют 20 мг цитрата натрия (раствор хранят в посуде из темного стекла, годен в течение нескольких дней).

Методика:

На предметное стекло с лункой наносят 2 капли 1 % раствора краски бриллиантового крезилового синего и 1 каплю крови. Осторожно перемешивают стеклянной палочкой и смесь помещают во влажную камеру (чашку Петри, в которую по краям вкладывают слегка смоченные валики марли или ваты) на 30 минут при комнатной температуре. Затем делают мазки и высушивают.

Подсчет ретикулоцитов:

В мазках эритроциты окрашиваются в желтовато-зеленый цвет, а зернисто-сетчатая субстанция в ретикулоцитах - в синий и фиолетовый цвет.

Мазки микроскопируют с иммерсионным объективом. Подсчет ретикулоцитов производят на 1000 эритроцитов (большая точность получается при подсчете 2000-3000 эритроцитов).

Увеличение числа ретикулоцитов наблюдается при:

стимуляции эритропоэза (кровопотеря, гемолиз, ретикулоцитарный криз при успешном лечении В12-дефицитной анемии, острый недостаток кислорода).

Уменьшение числа ретикулоцитов наблюдается при:

угнетении эритропоэза (апластические и гипопластические анемии, нелеченные В12-дефицитные анемии, метастазы рака в кости),

заболеваниях почек, эндокринных заболеваниях.

Увеличение ретикулоцитов их в периферической крови (ретикулоцитоз) отмечается: при гемолитических анемиях (число ретикулоцитов может доходить до 60% и более (особенно сильно увеличиваясь при гемолитических кризах); при острых кровопотерях (на 3 – 5 сутки после кровопотери возникает ретикулоцитарный криз), в том числе, увеличение ретикулоцитов позволяет заподозрить скрытое кровотечение (например, у больных язвенной болезнью желудочно-кишечного тракта, брюшным тифом); при малярии; при полицитемии; при лечении железом железодефицитных анемий (через несколько дней (3 - 10) после начала антианемического лечения пернициозной анемии); при остром недостатке кислорода; при метастазах опухолей в костный мозг. Следует помнить, что в случае усиленного разрушения эритроцитов доля ретикулоцитов может превышать 50% вследствие искусственного завышения числа ретикулоцитов (как уже было отмечено ранее, доля ретикулоцитов рассчитывается в % от всех эритроцитов). В таких случаях ля оценки тяжести анемий используют «ретикулярный индекс», который рассчитывают по формуле: (% ретикулоцитов х гематокрит) / 45 х 1,85, где 45 – нормальный гематокрит, 1,85- количество суток, необходимых для поступления новых ретикулоцитов в кровь. Если индекс

МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА КОЛИЧЕСТВА РЕТИКУЛОЦИТОВ

(1) Подсчет количества ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями. Данный метод является на практике наиболее используемым методом в связи с тем, что он простой, достаточно дешевый и не требует специального дорогостоящего оборудования, соответственно может применяться в любой клинико-диагностической лаборатории. Принцип метода основан на выявлении зернисто-сетчатой субстанции ретикулоцитов при суправитальной окраске щелочными красками (насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте / раствор азура I /раствор азура II) с дальнейшим подсчетом их в мазке крови. Окраску ретикулоцитов проводят либо на стекле, либо в пробирке. Подсчет осуществляют с помощью микроскопа: приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом; в мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I). (2) Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии. Данный метод отличается простотой и требует немного времени, более точен по сравнению с обычным методом, так как при люминесцентной микроскопии обнаруживаются мельчайшие зерна сетчато-нитчатого вещества, однако он возможен только при наличии люминесцентного микроскопа и специальных красителей, в связи с чем доступен лишь немногим лабораториям. Принцип подсчета количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии основан на использовании способности субстанции ретикулоцитов флюоресцировать после обработки крови акридиновым оранжевым. Кровь смешивают с акридиновым оранжевым в пробирке или смесителе в соотношении 1 часть крови и 10 частей краски (смесь можно хранить не более 5 часов). Смесь перемешивают в течение 2 минут, каплю смеси наносят на предметное стекло и накрывают покровным стеклом. При этом жидкость не должна выходить за пределы покровного стекла. Микроскопируют с помощью светофильтра ЖС-17. В препарате эритроциты имеют темно-зеленые очертания и не флюоресцируют, а в ретикулоцитах зернисто-сетчатая субстанция светится ярко-красным цветом, благодаря чему ретикулоциты легко подсчитать. В крови, стабилизированной гепарином или цитратом натрия, флюоресценции ретикулоцитов не наблюдается. (3) Автоматический подсчет количества ретикулоцитов с помощью гематологического анализатора. В современных гематологических анализаторах технология подсчета форменных элементов крови основана на кондуктометрическом методе, предложенном H. Wallace и Joseph R. Culter в 1947 г. Принцип метода заключается в подсчете числа и определении характера импульсов, возникающих при прохождении клетки через отверстие малого диаметра (апертуру), по обе стороны которого расположены два изолированных друг от друга электрода. Каждое прохождение клетки через апертуру сопровождается появлением электрического импульса, который регистрируется электронным датчиком. Разделение клеток по категориям (эритроциты, лейкоциты, тромбоциты, осадок) осуществляется прибором на основании анализа амплитуды полученных импульсов.Чтобы определить концентрацию клеток, достаточно пропустить определенный объем пробы через канал и подсчитать количество импульсов, которые при этом генерируются. Следует обратить внимание на то, что помимо классического параметра ретикулоцитов - относительное (%) содержание ретикулоцитов (RET%, percent of reticulocytes), определяемого с помощью 1 и 2 методов лабораторной диагностики, в связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов (3 метод) стало возможным получать (например, с помощью запатентованного флюоресцентного красителя для анализатора Sysmex -XT- 2000i) дополнительные информативные ретикулоцитарные параметры: ретикулоциты с низким содержанием РНК, наиболее зрелые (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракция ретикулоцитов с низкой флуоресценцией); ретикулоциты со средним содержанием РНК (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов со средней флуоресценцией); ретикулоциты с высоким содержанием РНК (HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов с высокой флуоресценцией); незрелая фракция ретикулоцитов (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction). Дифференцировка ретикулоцитов, основанная на степени зрелости и, соответственно, содержании нуклеиновых кислот, является отражением гемопоэтической активности костного мозга. Методика (анализатор Sysmex -XT- 2000i). В проточной кювете клетки пересекают луч полупроводникового лазера, при этом происходит рассеивание луча под большим и малым углами и возбуждение флюоресцентного красителя. Это позволяет определять различные стадии зрелости ретикулоцитов по содержанию РНК в клетках и интенсивности их свечения. Автоматизированный подсчет ретикулоцитов отличается высокой точностью (подсчитывается более 30 000 эритроцитов) и воспроизводимостью (коэффициент вариации составляет около 6%). Данная технология обеспечивает точный подсчет ретикулоцитов даже при их предельно низких концентрациях.

Ретикулоцитопении и ретикулоцитозы, причины развития, диагностическое значение их выявления.

studfiles.net

Ретикулоциты (reticulocytus)

Ретикулоциты - это молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер.

Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие зернисто-сетчатой субстанции, которая проявляется при суправитальной окраске, т. е. без предварительной фиксации клеток.

Электронно-микроскопически показано, что зернисто-сетчатые структуры представляют собой остатки эндоплазматической сети, рибосом и митохондрий, содержащие РНК. В ретикулоцитах в незначительной степени осуществляется синтез белка (глобина), гема, пуринов, пиримидиннуклеотидов, фосфатидов, липидов, однако РНК в них не синтезируется. В течение 2 дней ретикулоцит остается в кровеносном русле, после чего по мере уменьшения РНК становится зрелым эритроцитом.

В мазках, окрашенных обычными гематологическими методами, ретикулоциты серовато-розового цвета - полихроматофильны, т.е. окрашены разными красителями.

В настоящее время используется унифицированный метод подсчета количества ретикулоцитов после окраски их

бриллиантовым крезиловым синим,
азуром I или
азуром II непосредственно на стекле или в пробирке.

1. Принцип метода

Выявление зернисто-сетчатой субстанции эритроцитов при окраске щелочными красками с дальнейшим подсчетом их в мазке крови.

2. Реактивы:

а) насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать этанол 96% в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса): 1,2 г краски на 100 мл спирта;

б) раствор азура I: азур I - 1 г, аммония оксалат - 0,4 г, натрия хлорид - 0,8 г, этиловый спирт 96% - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2–3 дня в тер- мостат при 37 °С и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать;

в) раствор азура II: азур II - 1 г, натрия цитрат - 5 г, натрия хлорид - 0,4 г, дистиллированная вода - 45 мл. Раствор оставляют в термостате при 37 °С на 2 сут, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15–20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

3. Окраска

Окраска на стекле:

хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски, стеклографом. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте;
на приготовленные подобным образом стекла наносят каплю крови, делают тонкий мазок и сейчас же помещают стекло во влажную камеру. Для этого используют чашку Петри с крышкой, в которую по краям вкладывают слегка смоченные валики марли или ваты;
во влажной камере мазки выдерживают 3–5 мин, а затем высушивают на воздухе. Зернисто-сетчатая субстанция ретикулоцитов окрашивается в фиолетово-синий цвет, четко выделяясь на зеленовато-голубоватом фоне эритроцитов.

Окраска в пробирке:

метод 1: перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски 1. В краску добавляют 40 мкл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки;
метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раствора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20– 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки;
метод 3: в пробирку помещают 0,3–0,5 мл раствора краски 2 и 5–6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1–1½ ч (лучше окрашиваются ретикулоциты при экспозиции 1½ ч –3 ч). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

4. Подсчет ретикулоцитов

В мазках эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция - в синий или синевато-фиолетовый цвет.

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом;
необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. При равномерных тонких мазках, в которых эритроциты расположены в один ряд, подбирают такое поле зрения, в котором имеется, например, 50 эритроцитов, и затем просчитывают 20 таких полей зрения;
практически для большей точности пользуются специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров. При отсутствии готового окуляра его можно легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр ×7, вкладывают в него кусок бумаги с вырезанным небольшим квадратиком и завинчивают. Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 1000 или на 100 эритроцитов.

НОРМА: 0,5–1,2 % (30–70 × 109/л)

Повышение количества ретикулоцитов наблюдается при:

кровопотерях (особенно острой);
гемолитических анемиях, особенно в период криза (до 20–30 %);
на фоне лечения мегалобластной анемии витамином В12 (ретику- лоцитарный криз - подъем числа ретикулоцитов на 4–8-й день лечения).

Понижение количества ретикулоцитов характерно для:

апластических и гипопластических анемий;
нелеченной мегалобластной анемии;
лучевой болезни;
приема цитостатических препаратов.

Жив ли Христос? Воскрес ли Христос из мертвых? Исследователи изучают факты

dyagnoz.ru

Ретикулоциты норма и подсчет их количества

Клетки крови ретикулоциты, норма которых различается в связи с множеством факторов, являются несформированными формами эритроцитов, а обнаружить их можно в составе костного мозга и периферической крови. Как правило, ретикулоциты в крови созревают за три-пять дней, а затем данные клетки превращаются в уже зрелые эритроциты. Причем количество несформированных эритроцитов у новорожденных младенцев существенно больше, чем у взрослых людей.

Выявление ретикулоцитов:

Выявляя ретикулоциты, норма которых определяется при помощи специальной таблицы, нужно учитывать их отличия от зрелых эритроцитов. В данной разновидности клеток крови либо содержится цельное ядро, либо его остатки наблюдаются в составе зернисто-нитчатой субстанции. Чтобы выявить количество таких клеток, необходимо изучить окраску мазка крови в лабораторных условиях. Для этого применяется синий бриллиантовый раствор, который наносится на обезжиренное и предварительно вымытое стекло, и уже затем делается мазок.

Когда выявляются ретикулоциты, норма которых различна, сразу после мазка используемое стекло следует поместить в чашку Петри – специальную влажную камеру, затем выдержать пять минут, тщательно высушить на свежем воздухе, а потом – микроскопировать. Причем субстанция зернисто-нитчатого типа внутри ретикулоцита обычно окрашивается в фиолетово-синий оттенок, а фон эритроцитов выделяется благодаря голубовато-зеленому оттенку.

Если применяется метод Гель-Мейера, окраску несозревших клеток крови можно разглядеть гораздо лучше, но для этого требуется пробирка Видаля. В данном сосуде пара капель крови смешивается с бриллиантовым раствором и хлоридом натрия, потом пробирка закрывается крышкой, а сам мазок выполняется уже через час.

Подсчет ретикулоцитов:

Рассчитывая количество несозревших клеток крови, нужно взять за основу 1000 эритроцитов, а затем рассмотреть ретикулоциты, норма которых обычно варьируется на уровне 0,2%-1,2% от количества взрослых эритроцитов. В среднем, у большинства людей число несозревших эритроцитов обычно составляет 0,7% от общего числа полностью созревших клеток крови. Если количество ретикулоцитов выше предельно допустимой нормы на 10% и больше, у человека возникает ретикулоцитоз – заболевание, сопровождающееся регулярными острыми кровотечениями и гемолитическими анемиями.

Подсчитывая ретикулоциты (норма у детей обычно высокая), стоит смотреть, чтобы их число не превысило предельные значения, характерные для взрослых. Нормативы зависят и от пола, поскольку у женщин 2,07% незрелых эритроцитов еще считается допустимым параметром, а у мужчин данный показатель не должен превышать 1,92%.

В случаях, когда уровень ретикулоцитов существенно повышен, это свидетельствует о наличии таких нарушений в организме, как малярия и талассемия, полицитемия и гипоксия, анемия, всевозможные гемолитические синдромы, но такие показатели возможны и при лечении цианкобаламином. Если уровень незрелых эритроцитов понижен, у человека может наблюдаться апластическая и гипопластическая анемия, всевозможные заболевания почек и микседема, а также распространение на кости метастазов опухолей.

Чтобы диагностировать тяжесть анемии, необходим расчет «ретикулоцитарного индекса», который рассчитывается как соотношение процента ретикулоцитов и нормальных значений гематокрита, помноженных на число суток, необходимых для поступления несозревших клеток в периферическую кровь. Если полученный индекс не превышает двойки, показатель свидетельствует о гипопролиферативном компоненте анемии, в а случае превышения двойки – показывает вероятность повышенного образования эритроцитов.

fb.ru

Исследование крови. Анализ крови

Определение концентрации гемоглобина

Среди методов определения гемоглобина наиболее широкое распространение получили методы, основанные на колориметрии, т. е. определении интенсивности окраски.Наиболее простым из них является определение гемоглобина при помощи визуальной колориметрии в гемометре Сали, который представляет собой деревянный штатив с центральной градуированной пробиркой, по бокам которой расположены запаянные стеклянные трубочки с цветным стандартом (солянокислый гематин в глицерине).В центральную пробирку предварительно наливают 0,1% раствор соляной кислоты до метки, соответствующей 2 или 3 г%, затем осторожно вносят (точно!) 0,02 мл крови, взятой из пальца специальной пипеткой, приложенной к гемометру. Поверхностным слоем кислоты промывают пипетку и, перемешав стеклянной палочкой кровь и кислоту, оставляют на 5 мин для образования солянокислого гематина. Затем добавляя дистиллированную воду и постоянно перемешивая палочкой, добиваются полного совпадения цвета жидкости в центральной пробирке со стандартами. Концентрация гемоглобина соответствует отметке уровня раствора по нижнему мениску. Концентрацию гемоглобина можно выражать или в г% гемоглобина или в условных единицах. 16,67 г гемоглобина принято за 100 единиц.

Концентрация гемоглобина в крови у женщин бывает от 11,7 до 15,8 г°/о или от 117 до 158 г/л,-у мужчин - от 13,3 до 18 г% или от 133 до 180 г/л.

Взятие крови для подсчета форменных элементов

Для подсчета форменных элементов кровь разводят в смесителях (меланжерах) или пробирках, что последнее время получило более широкое применение.Для подсчета эритроцитов кровь разводят в 200 раз 3% раствором хлорида натрия; если для взятия крови мы пользуемся пипеткой от гемометра, объем которой 0,02 мл, то мы должны брать 4 мл раствора хлорида натрия.Для подсчета лейкоцитов кровь разводят в 20 раз, следовательно берут 0,02 мл крови и 0,38 мл 3% подкрашенного раствора метиленовой синькой уксусной кислоты, которая необходима, чтобы вызвать разрушение эритроцитов.Взятие крови должно производиться с большой точностью, так как при таких небольших объемах попадание пузырька воздуха или остатка крови на внешней стороне пипетки ведет к увеличению ошибки определения.Перед заполнением камеры необходимо протереть в камере шлифованное стекло так, чтобы появились радужные кольца.Перед заполнением камеры разведенную кровь тщательно перемешивают, так как клетки оседают на стенки пробирки или ампулы смесителя, после этого каплю крови вносят под притертое шлифованное стекло камеры и оставляют на 1 мин в покое для оседания клеток.

Подсчет форменных элементов производят при малом увеличении микроскопа (объектив 8Х, окуляр 15Х или 10Х) в затемненном поле зрения.

Эритроциты считают в 5 больших квадратах (16x5 = 80 малых квадратов), расположенных в разных участках камеры, можно брать квадраты, расположенные по диагонали.Счету подлежат эритроциты, лежащие внутри квадрата, и те, которые находятся на верхней и левой его сторонах; эритроциты, лежащие на нижней и правой сторонах, не считают, так как они относятся уже к другим квадратам.

Подсчитав число эритроцитов (А) в 5 больших квадратах, находят среднее арифметическое число эритроцитов в одном малом квадрате A/80, т. е. в 1/4000 мкл. Поэтому, чтобы найти число эритроцитов в 1 мкл, мы должны умножить полученное от деления число на 4000 и на 200 (разведение) .

Таким образом, мы получаем следующую формулу:

X=A*4000*200/80,

где X - число эритроцитов в 1 мкл, а А - число эритроцитов в 5 больших квадратах.Если мы считали эритроциты в 5 больших квадратах и разводили кровь в 200 раз, то общий множитель для числа А будет 10 000.

Нормальное содержание эритроцитов в крови женщин 4-5*106, мужчин - 4,5-5,5*106.

Лейкоциты считают в 100 больших квадратах, не разделенных на малые, что соответствует 1600 малым. Таким образом, число лейкоцитов, найденное в 100 квадратах, делят на 1600, умножают на 4000 и на 20 (разведение). В данном случае для получения результата достаточно число сосчитанных лейкоцитов умножить на 50. Нормальное содержание лейкоцитов в крови 5*103 - 8*103 в 1 мкл.

Цветовой показатель крови. Цветовым показателем крови называют число, которое показывает, каково в среднем насыщение гемоглобином отдельного эритроцита данной крови по сравнению с насыщением отдельного эритроцита нормальной крови.За нормальное содержание гемоглобина принимают 100 единиц, а нормальное количество эритроцитов равно 5 000 000.Величина цветового показателя здоровых людей колеблется от 0,9 до 1,1.Изучение мазка периферической крови. В мазках крови изучают морфологию эритроцитов и считают лейкоцитарную формулу, т. е. процентное соотношение между различными видами лейкоцитов.Для того чтобы исследование было успешным, приготовление, фиксация и окраска мазков крови должны проводиться с большой тщательностью.Для приготовления мазка поверхностью чистого, обезжиренного стекла на расстоянии 0,5 см от края предметного стекла прикасаются к капле крови у места прокола на пальце, а затем шлифованное покровное стекло помещают под углом 45° к предметному и подводят первое к капле крови так, чтобы она растекалась по заднему краю покровного стекла и легким движением, без резкого нажима делают мазок. Мазок должен кончаться на предметном стекле «метелочкой». Мазок высушивают на воздухе, при высыхании хороший, тонкий мазок имеет желтую окраску.

Простым, остро отточенным карандашом по середине мазка надписывают фамилию больного и дату исследования, после этого мазки фиксируют в метиловом спирте не менее 5 мин и красят по методу Романовского-Гимзы.

Краска состоит из смеси кислого (эозина) и основного (Азур II) красителей. Такой метод окраски дает возможность дифференцировать клетки. Первым этапом работы с мазком является оценка морфологии эритроцитов. Для этого выбирают тонкое место, где клетки лежат отдельно, а не в виде монетных столбиков. Нормальные эритроциты - безъядерные, окрашенные в розовый цвет клетки, округлые, приблизительно одинакового диаметра - 7,5 мкм, эритроциты имеют форму двояковогнутого диска, поэтому в мазке имеют просветление в центре и более интенсивно окрашенную периферию.

{module директ4}

Приготовление толстой капли

Для исследования крови на плазмодии малярии делают толстую каплю. Кровь берут обычным способом из мякоти пальца. К капле крови, выступившей из места укола, прикасаются поверхностью предметного стекла. Нанесенные отдельно 2-3 капли размазывают углом другого стекла. Сухой мазок заливают (без фиксирования) краской Романовского на 30-40 мин, потом окрашенную каплю осторожно ополаскивают водой и просушивают препарат в вертикальном положении.

Примерные данные анализа

Повышенное количество эритроцитов и гемоглобина в крови может быть при заболевании красных элементов крови - эритремии, тогда число эритроцитов достигает до 9-106 и больше.Увеличенное содержание эритроцитов в крови может возникнуть вторично, т. е. тогда, когда нет заболевания красного листка кроветворения, а количество эритроцитов повышается в результате болезни других органов и систем (при декомпенсированном диффузном пневмосклерозе, эмфиземе легких, некоторых видах врожденных пороков сердца, склерозе сосудов системы легочной артерии, пороках правого сердца, недостаточности кровообращения III степени и др.). Этот симптом называется эритроцитозом.

Морфологически измененные эритроциты появляются при гиперхромной (мегалобластической) анемии. При этом в крови находят крупные эритроциты с большим содержанием гемоглобина (макроциты), эмбриональные эритроциты (мегалобласты), которые обычно в периферической крови не встречаются. Морфология эритроцитов изменяется также и при гипохромной анемии: появляются малые эритроциты (микроциты), измененные по своей форме (пойкилоциты) и эритроциты с малым содержанием гемоглобина (гипохромные эритроциты).

Подсчет лейкоцитарной формулы

При подсчете лейкоцитарной формулы необходимо определение структурных особенностей цитоплазмы и ядер клеток. Принадлежность клетки к той или иной группе определяется на основании совокупности всех признаков цитоплазмы и ядра.При подсчете формулы надо придерживаться одного и того же способа передвижения стекла под микроскопом. Чаще всего применяется способ микроскопирования в 4 местах мазка. Известно, что лейкоциты распределяются в мазке неравномерно: лимфоцитов по краям меньше, чем в середине, а моноцитов в конце мазка больше, чем в начале. Поэтому при подсчете лейкоцитарной формулы лучше всего передвигаться по ломаной линии, просчитывая все встречающиеся клетки.Подсчет 200 клеток - практический минимум для обычных клинических исследований.Лейкоциты периферической крови в зависимости от наличия или отсутствия зернистости в цитоплазме делятся на гранулоциты (нейтрофильные, эозинофильные, базофильные) и агранулоциты (моноциты и лимфоциты).

Нейтрофилы. Размер клеток 10-12 мкм. Цитоплазма клеток бледно-розового цвета с мелкой, обильной, фиолетового цвета зернистостью. В норме в крови встречаются палочкоядерные (2-4%) и сегментоядерные (60-65%) нейтрофилы.

Эозинофилы. По величине клетки такие же, как нейтрофилы, иногда немного крупнее, цитоплазма заполнена крупными гранулами желтовато-красного цвета, ядро обычно имеет два сегмента одинаковой величины. Эозинофилов в норме 2-4%.Базофилы. По размеру это самый маленький гранулоцит. Ядро неправильной, многолопастной формы, занимает почти всю клетку, бледно-розовая цитоплазма содержит крупные темно-фиолетовые гранулы. Гранулы базофилов растворяются в воде, и иногда в результате смывания при окраске препарата на месте гранул остаются не смытые бесцветные ячейки. В норме базофилов 0,1%.Лимфоциты. Размер клеток колеблется от 7 до 10 мкм. Ядро компактной структуры, округлое или бобовидное. Цитоплазма клеток нежно-голубая с зоной просветления вокруг ядра (перинуклеарной), иногда в цитоплазме встречаются отдельные азурофильные зерна красно-фиолетового цвета. В периферической крови в норме 20-35% лимфоцитов.Моноциты. Размер клеток колеблется от 12 до 20 мкм. Ядро чаще подковообразной, иногда неправильной формы. Цитоплазма более обширна чем у лимфоцитов, пепельно-голубого цвета с мелкой, нежной, красноватой зернистостью.Моноцитов в норме 6-8%.

Повышенное содержание в крови лейкоцитов называется - лейкоцитозом, а пониженное - лейкопенией.

Окраска и подсчет ретикулоцитов

Ретикулоциты представляют собой молодые эритроциты с тонкой синей сетчаткой или зернистостью в цитоплазме. Эти клетки характеризуют активность красного кроветворения.Для выявления подсчета ретикулоцитов пользуются методом суправитальной (прижизненной) окраски. На предметных стеклах делаются мазки краски бриллианткрезилблау в абсолютном спирте, а затем на покрытом краской стекле делают обычным образом мазок крови и помещают его на 3-5 минут во влажную камеру, после чего сушат и микроскопируют с иммерсионным объективом. В норме на 1000 эритроцитов встречается 8-10 ретикулоцитов, число их принято выражать в процентах (0,8-1%) или в промиллях (8-10%о) по отношению к эритроцитам.Ретикулоциты - клетки, которые характеризуют повышенную выработку эритроцитов в костном мозге.

Они в большом проценте появляются в периферической крови при гипохромной анемии («злокачественной анемии»), при гемолитической анемии и др. заболеваниях. Пониженное содержание ретикулоцитов и полное их исчезновение в периферической крови наблюдаются при обострении гиперхромной анемии.

Для предупреждения агрегации (склеивания) кровяных пластинок прокол кожи делают через каплю 14% раствора сернокислой магнезии, нанесенной на палец. Кровь смешивают с магнезией и готовят тонкие мазки на предметных стеклах, которые затем фиксируют и окрашивают по Романовскому в течение 2-х часов.Определяют количество кровяных пластинок на 1000 эритроцитов, а зная число эритроцитов в 1 мкл, подсчитывают число тромбоцитов в 1 мкл крови. В норме тромбоцитов содержится от 250 000 до 400 000.

Определение СОЭ

Скорость оседания эритроцитов определяется в крови, смешанной в соотношении 4:1с лимоннокислым натрием.Реакция ставится в аппарате Панченкова. Капилляр Панченкова промывают цитратом натрия, затем набирают цитрат до метки 50, где стоит буква Р (реактив) и выдувают его в видалевскую пробирку. Этим же капилляром берут кровь дважды до метки К (кровь) и смешивают ее с цитратом. Смешанной с цитратом кровью заполняют этот же капилляр до деления 0 и ставят вертикально в штатив на час. Через час отмечают в миллиметрах величину столбика плазмы, образовавшегося над осевшими эритроцитами, что и является мерой скорости оседания эритроцитов.В норме СОЭ у мужчин равна 10 мм/ч, у женщин-14 мм/ч.

Скорость оседания эритроцитов повышается при воспалительных, острых и хронических заболеваниях, при злокачественных опухолях и других заболеваниях.

Проба на совместимость резус-фактора

В пробирку без цитрата берут 2-3 мл крови реципиента, после свертывания крови сгусток обводят стеклянной палочкой и кровь центрифугируют. Две капли сыворотки из этой пробирки наносят на чашку Петри, добавляют к ней полкапли крови донора, перемешивают и чашку помещают в водяную баню (42-45°). Через 10 мин чашку вынимают и просматривают на свету при легком покачивании. Появление агглютинации укажет на недопустимость переливания данной крови.

… определение числа ретикулоцитов является важным показателем функции костного мозга .

Ретикулоциты - это молодые формы эритроцитов, образовавшиеся из нормобластов после потери ими ядра (безъядерные, незрелые эритроциты), созревание которых происходит в течение 24-48 ч после выхода в периферическую кровь из костного мозга, и отражающие регенеративную способность костного мозга (т.е. эритропоэтическую активность костного мозга).

МОРФОЛОГИЯ И КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ РЕТИКУЛОЦИТОВ

Ретикулоциты обычно крупнее, чем зрелые эритроциты. Цитоплазма ретикулоцитов содержит базофильную сеточку (ретикулум) в виде мелких зерен, отдельных нитей, клубочков и т.п., которая представляет собой агрегированные рибосомы и митохондрии.

По степени зрелости различают 5 видов ретикулоцитов :
(1) ретикулоциты, имеющие ядро (эритронормобласты), причем зернистость у них располагается в виде плотного венчика вокруг ядра;
(2) ретикулоциты, имеющие зернисто-сетчатую субстанцию в виде клубка или глыбки;
(3) ретикулоциты, имеющие зернистость в виде густой сети;
(4) ретикулоцитов, имеющие зернисто-сетчатую субстанцию в виде отдельных нитей;
(5) ретикулоциты, содержащие отдельные зернышки.

Запомните : в норме, по Г. А. Алексееву, почти 80% ретикулоцитов относится к IV – V группам.

В норме в периферической крови содержится 0,2 – 1% ретикулоцитов («%» - содержание ретикулоцитов от общего числа эритроцитов). Данный показатель отражает возможность выхода ретикулоцитов в периферическую кровь и их дальнейшее превращение в зрелые эритроциты (созревание), как вариант нормы, уже в периферической крови (в течение нескольких часов). (! ) При нормальном эритропоэзе большинство эритроцитов проходит стадию ретикулоцитов в костном мозге.

Увеличение ретикулоцитов их в периферической крови (ретикулоцитоз) отмечается :
при гемолитических анемиях (число ретикулоцитов может доходить до 60% и более (особенно сильно увеличиваясь при гемолитических кризах);
при острых кровопотерях (на 3 – 5 сутки после кровопотери возникает ретикулоцитарный криз), в том числе, увеличение ретикулоцитов позволяет заподозрить скрытое кровотечение (например, у больных язвенной болезнью желудочно-кишечного тракта, брюшным тифом);
при малярии;
при полицитемии;
при лечении железом железодефицитных анемий (через несколько дней (3 - 10) после начала антианемического лечения пернициозной анемии);
при остром недостатке кислорода;
при метастазах опухолей в костный мозг.

Следует помнить , что в случае усиленного разрушения эритроцитов доля ретикулоцитов может превышать 50% вследствие искусственного завышения числа ретикулоцитов (как уже было отмечено ранее, доля ретикулоцитов рассчитывается в % от всех эритроцитов). В таких случаях ля оценки тяжести анемий используют «ретикулярный индекс», который рассчитывают по формуле: (% ретикулоцитов х гематокрит) / 45 х 1,85, где 45 – нормальный гематокрит, 1,85- количество суток, необходимых для поступления новых ретикулоцитов в кровь. Если индекс < 2 – говорит о гипопролиферативном компоненте анемии, если > 2-3, то происходит увеличение образования эритроцитов.

Истинный ретикулоцитоз : увеличение количества ретикулоцитов в периферической крови с одновременным увеличением количества ретикулоцитов в костном мозге.

Ложный ретикулоцитоз : отсутствие повышенного количества ретикулоцитов в костном мозге при повышении их количества в периферической крови (что говорит об усилении вымывания ретикулоцитов из костного мозга в периферическую кровь).

Фактором, приводящим к увеличению значения %-ого содержания ретикулоцитов могут быть прием следующих препаратов: кортикотропин, противомалярийные лекарственные средства, жаропонижающие препараты, фуразолидона (у маленьких детей), леводопы.

Запомните : ретикулоцитоз, без соответствующей эритронормобластической реакции костного мозга, наблюдается при раздражении отдельных участков его раковыми метастазами или воспалительными очагами.

Снижение количества или отсутствие ретикулоцитов (ретикулоцитопения) наблюдается :
при арегенераторных апластических и гипопластических анемиях;
при анемиях, вызванных недостаточностью содержания железа, витамина B12, фолиевой кислоты (микроцитарно-гипохромные и мегалобластные анемии);
при талассемии;
при сидеробластной анемии;
при метастазах рака в кость;
при лучевой болезни и лучевой терапии;
при лечении цитостатиками;
при аутоиммунных заболеваниях системы кроветворения;
при заболеваниях почек;
при алкоголизме;
при рецидиве анемии Аддисона-Бирмера;
при микседеме.

Факторы, искажающие результат лабораторного исследования %-ого содержания ретикулоцитов :
неправильный выбор антикоагулянта или недостаточное перемешивание крови с антикоагулянтом;
длительное сдавливание руки жгутом;
прием сульфаниламидов (возможны как заниженные, так и завышенные результаты);
переливание крови незадолго до исследования;
гемолиз пробы крови.

Показания к назначению анализа на ретикулоциты :
оценка активности эритропоэза при состояниях, сопровождающихся гемолизом или кровопотерей;
ценка способности костного мозга к регенерации после цитотоксической терапии и трансплантации костного мозга;
ценка восстановления синтеза эритропоэтина после трансплантации почки;
допинговый контроль у спортсменов (прием эритропоэтина);
диагностика неэффективного гемопоэза или снижения продукции эритроцитов;
дифференциальная диагностика анемий;
детекция нарушения регенераторной способности костного мозга при дефиците железа, витаминов B12, B6, фолатов, меди и мониторинга соответствующей терапии;
оценка реакции на терапию эритропоэтином, эритросупрессорами.

МЕТОДЫ ПОДСЧЕТА КОЛИЧЕСТВА РЕТИКУЛОЦИТОВ

(1) Подсчет количества ретикулоцитов в мазке после окраски их специальными красителями .

Подсчет осуществляют с помощью микроскопа: приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом; в мазке ретикулоциты и эритроциты окрашены в желтовато-зеленоватый цвет, зернисто-нитчатая субстанция в ретикулоцитах – в синий (при окраске азуром II и бриллиантовым крезиловым синим) или синевато-фиолетовый цвет (при окраске азуром I).

(2) Подсчет количества ретикулоцитов при помощи люминесцентной микроскопии .

(3) Автоматический подсчет количества ретикулоцитов с помощью гематологического анализатора .

Следует обратить внимание на то, что помимо классического параметра ретикулоцитов - относительное (%) содержание ретикулоцитов (RET%, percent of reticulocytes), определяемого с помощью 1 и 2 методов лабораторной диагностики, в связи с появлением высокотехнологичных гематологических анализаторов (3 метод) стало возможным получать (например, с помощью запатентованного флюоресцентного красителя для анализатора Sysmex -XT- 2000i) дополнительные информативные ретикулоцитарные параметры:
ретикулоциты с низким содержанием РНК , наиболее зрелые (LFR%, low fluorescence reticulocyte fractions, фракция ретикулоцитов с низкой флуоресценцией);
ретикулоциты со средним содержанием РНК (MFR%, medium fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов со средней флуоресценцией);
ретикулоциты с высоким содержанием РНК (HFR%, high fluorescence reticulocyte fractions) - фракция ретикулоцитов с высокой флуоресценцией);
незрелая фракция ретикулоцитов (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Ретикулоциты - показатель количества клеток, предшественников эритроцитов, образующихся в костном мозге. Ретикулоциты - молодые эритроциты отражают регенеративную способность костного мозга. Подсчет ретикулоцитов используют для оценки интенсивности кроветворения. Исследование проводят при: уменьшении количества эритроцитов, подозрении на гемолиз, оценке эритропоэза, при лечении анемий препаратами железа и витамином В 12 , эритропоэтином.

Ретикулоциты - это безъядерные, незрелые эритроциты, созревание которых происходит в течение 24-48 ч после выхода в периферическую кровь из костного мозга. Количество образовавшихся ретикулоцитов отражает эритропоэтическую активность костного мозга. Иными словами, содержание ретикулоцитов отражает скорость образования эритроцитов и служит показателем ответа костного мозга на анемизацию.

Помимо общепринятых параметров ретикулоцитов - абсолютного и относительного (%) содержание ретикулоцитов, появление новых гематологических анализаторов (окраска специальными красителями для нуклеиновых кислот) дало возможность получать дополнительные ретикулоцитарные параметры:

Ретикулоциты с низким содержанием РНК, наиболее зрелые (LFR%, фракция ретикулоцитов с низкой флуоресценцией);
ретикулоциты со средним содержанием РНК (MFR%, фракция ретикулоцитов со средней флуоресценцией);
ретикулоциты с высоким содержанием РНК (HFR%, фракция ретикулоцитов с высокой флуоресценцией);
незрелая фракция ретикулоцитов (IRF%, Immature Reticulocyte Fraction).

Ретикулоциты - это молодые эритроциты, образующиеся после потери нормобластами ядер.

Характерной особенностью ретикулоцитов является наличие зернисто-сетчатой субстанции, которая проявляется при суправитальной окраске, т. е. без предварительной фиксации клеток.

Электронно-микроскопически показано , что зернисто-сетчатые структуры представляют собой остатки эндоплазматической сети, рибосом и митохондрий, содержащие РНК. В ретикулоцитах в незначительной степени осуществляется синтез белка (глобина), гема, пуринов, пиримидиннуклеотидов, фосфатидов, липидов, однако РНК в них не синтезируется. В течение 2 дней ретикулоцит остается в кровеносном русле, после чего по мере уменьшения РНК становится зрелым эритроцитом.

Методы подсчета ретикулоцитов

В настоящее время используется унифицированный метод подсчета количества ретикулоцитов после окраски их

бриллиантовым крезиловым синим,
азуром I или
азуром II непосредственно на стекле или в пробирке.

1. Принцип метода

2. Реактивы:

а) насыщенный раствор бриллиантового крезилового синего в абсолютном спирте (для приготовления абсолютного спирта надо выдержать этанол 96% в нескольких сменах прокаленного порошка медного купороса): 1,2 г краски на 100 мл спирта;

б) раствор азура I : азур I - 1 г, аммония оксалат - 0,4 г, натрия хлорид - 0,8 г, этиловый спирт 96% - 10 мл, дистиллированная вода - 90 мл. Раствор краски в закрытом флаконе помещают на 2–3 дня в тер- мостат при 37 °С и периодически энергично взбалтывают. Затем охлаждают до комнатной температуры и фильтруют через бумажный фильтр. Раствор сохраняют в посуде из темного стекла. При появлении осадка краску следует снова профильтровать;

в) раствор азура II : азур II - 1 г, натрия цитрат - 5 г, натрия хлорид - 0,4 г, дистиллированная вода - 45 мл. Раствор оставляют в термостате при 37 °С на 2 сут, периодически помешивая. Для ускорения растворения краску можно прогреть на слабом огне в течение 15–20 мин, не доводя до кипения. Охлаждают до комнатной температуры и фильтруют. Хранят в посуде из темного стекла.

3. Окраска

Окраска на стекле:

хорошо вымытое и обезжиренное предметное стекло подогревают над пламенем горелки. Стеклянной палочкой наносят на стекло каплю одного из красителей и готовят мазок из краски шлифованным стеклом. Маркируют сторону стекла, на которую нанесен мазок краски, стеклографом. В таком виде стекла можно заготовить впрок и хранить в сухом темном месте;
на приготовленные подобным образом стекла наносят каплю крови, делают тонкий мазок и сейчас же помещают стекло во влажную камеру. Для этого используют чашку Петри с крышкой, в которую по краям вкладывают слегка смоченные валики марли или ваты;
во влажной камере мазки выдерживают 3–5 мин, а затем высушивают на воздухе. Зернисто-сетчатая субстанция ретикулоцитов окрашивается в фиолетово-синий цвет, четко выделяясь на зеленовато-голубоватом фоне эритроцитов.

Окраска в пробирке:

метод 1: перед употреблением готовят в пробирке рабочий раствор бриллиантового крезилового синего из расчета на каплю 1% раствора оксалата калия 4 капли раствора краски 1. В краску добавляют 40 мкл крови (две пипетки до метки 0,02). Смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки;
метод 2: в пробирку помещают 0,05 мл раствора краски 3 и 0,2 мл крови. Смесь тщательно перемешивают и оставляют на 20– 30 мин. Перемешивают и готовят тонкие мазки;
метод 3: в пробирку помещают 0,3–0,5 мл раствора краски 2 и 5–6 капель крови пипеткой от аппарата Панченкова. Пробирку закрывают резиновой пробкой, смесь тщательно, но осторожно перемешивают и оставляют на 1–1½ ч (лучше окрашиваются ретикулоциты при экспозиции 1½ ч –3 ч). Перемешивают и готовят тонкие мазки.

4. Подсчет ретикулоцитов

Приготовленные одним из указанных выше способов мазки микроскопируют с иммерсионным объективом;
необходимо подсчитать не менее 1000 эритроцитов и отметить среди них количество эритроцитов, содержащих зернисто-нитчатую субстанцию. При равномерных тонких мазках, в которых эритроциты расположены в один ряд, подбирают такое поле зрения, в котором имеется, например, 50 эритроцитов, и затем просчитывают 20 таких полей зрения;
практически для большей точности пользуются специальным окуляром, в котором можно уменьшить поле зрения до требуемых размеров. При отсутствии готового окуляра его можно легко приготовить, для чего отвинчивают окуляр ×7, вкладывают в него кусок бумаги с вырезанным небольшим квадратиком и завинчивают. Количество подсчитанных ретикулоцитов выражают на 1000 или на 100 эритроцитов.

Количественное содержание ретикулоцитов

НОРМА: 0,5–1,2 % (30–70 × 10 9 /л)

Повышение количества ретикулоцитов наблюдается при:

кровопотерях (особенно острой);
гемолитических анемиях, особенно в период криза (до 20–30 %);
на фоне лечения мегалобластной анемии витамином В12 (ретику- лоцитарный криз - подъем числа ретикулоцитов на 4–8-й день лечения).

Понижение количества ретикулоцитов характерно для:

апластических и гипопластических анемий;
нелеченной мегалобластной анемии;
лучевой болезни;
приема цитостатических препаратов.