Где сделать мазок отпечаток кожи на стекле. Получение и обработка материала для цитологического исследования. Красители основной природы

Наши преимущества:

  • Недорого прием врача от 900 рублей
  • Срочно анализы в день обращения от 20 минут до 1 дня
  • Близко 5 минут от метро Варшавская и Чистые пруды
  • Удобно работаем каждый день с 9 до 21 каждый день (включая праздники)
  • Анонимно!

Все привыкли, что при обследовании мужчины у венеролога и уролога на инфекции, передающиеся половым путем, берут мазок из уретры и анализ крови на ИППП. Но бывает, что ведущую роль в диагностике играют и другие способы забора материала для исследования.

К таким методам относится мазок-отпечаток с головки и кожи крайней плоти полового члена мужчины.

Воспалительный процесс не всегда имеется в мочеиспускательном канале, и инфекция соответственно попадает и размножается не только в нем. При различных видах бактериальных и грибковых баланопоститов, генитальном герпесе, сифилисе, фимозе, папилломо-вирусной инфекции патологический процесс мы наблюдаем именно на коже полового члена и его головке.

Соответственно, закономернее будет взять мазки и соскобы непосредственно с очага поражения, а потом уже исследовать кровь и уретру.

Техника забора материала при анализе мазка-отпечатка достаточно проста. Существует 4 вида диагностики, при которой применяется этот метод:

  1. Чистое предметное стекло просто прикладывается к воспаленному участку на коже члена. И при помощи небольшого скользящего движения происходит нанесение поверхностных слоев эпителия с имеющимися в нем возбудителями ИППП на стекло. Далее препарат высушивается, красится и микроскопируется. Так можно определить количество лейкоцитов, слизи, эпителия, грибов и бактерий с головки полового члена. Причем делается этот мазок-отпечаток достаточно быстро. Через полчаса ответ готов.
  2. При помощи урогенитального зонда с поверхности головки, крайней плоти, с каких-то высыпаний и язвочек делается соскоб более глубоких слоев эпителия и помещается в пробирку эпендорф для проведения ПЦР анализа. Так определяют герпесы, сифилис, ВПЧ, кандиду, гарднереллу и других возбудителей венерических заболеваний кожи головки и крайней плоти полового члена мужчины.
  3. Если же ватной стерильной палочкой снять налет или слизь с головки и поместить материал в транспортную или питательную среду, то можно провести посев на флору и чувствительность к антибиотикам той микрофлоры, которая вызвала воспаление кожи члена.
  4. При наличии долго незаживающих язвочек, эрозий, пятен и подозрении на злокачественный процесс берется соскоб на атипичные клетки - цитологическое исследование.

Анализ мазка-отпечатка, наверное, самый безболезненный метод исследования мужской половой системы. Поэтому нет причин затягивать с обращением к врачу урологу и венерологу для сдачи этого анализа при появлении каких-то пятен и других патологических высыпаний на коже головки и крайней плоти полового члена.

Стоимость этого вида мазка - 900 рублей. Работает экспресс-лаборатория ежедневно. По результатам анализа Вас обязательно проконсультирует специалист по мужским болезням и ИППП.

Приготовление окрашенного препарата состоит из следующих этапов:

1) приготовление мазков;

2) высушивание мазка;

3) фиксация мазка;

    окраска мазка.

Для приготовления препарата, на обезжиренное предметное стекло, наносят каплю воды или физиологического раствора, в которую петлей вносят исследуемый материал и распределяют тонким равномерным слоем по стеклу на площади приблизительно 1 см 2 . Если исследуемый материал находится в жидкой среде, то его непосредственно наносят петлей на предметное стекло и готовят мазок. Мазки высушивают на воздухе или в струе теплого воздуха над пламенем спиртовки, не давая капле закипать.

Для фиксации мазка предметное стекло (мазком вверх) медленно проводят 3-4 раза через пламя спиртовки. Микроорганизмы при фиксации погибают, плотно прикрепляются к поверхности стекла и не смываются при дальнейшей обработке. Более длительное нагревание может вызвать деформацию клеточных структур.

При фиксации с помощью химических веществ используют хромовые соединения, формалин, осмиевую кислоту, ацетон. Один из распространенных приемов фиксации - обработка препарата метиловым или этиловым спиртом, или смесью Никифорова (равные объемы этилового спирта и эфира). При этом препарат погружают на 5-20 мин. в фиксирующую жидкость.

Методы окраски мазков и красители, используемые в микробиологии.

Существуют простые и сложные методы окраски . При простой окраске используют какой-либо один из красителей, например, фуксин водный (1-2 мин.), метиленовый синий (3-5 мин.). При окрашивании мазка препарат помещают на препаратодержатель. На мазок наносят несколько капель красителя. После истечения времени окрашивания препарат промывают водой, фильтровальной бумагой удаляют излишки воды, высушивают на воздухе и микроскопируют.

При сложной окраске последовательно наносятся на препарат определенные красители, различающиеся по химическому составу и цвету. Это позволяет выявить определенные структуры клеток и дифференцировать одни виды микроорганизмов от других. Таковы методы окраски по Грамму, по Цилю-Нильсену, окраска спор по методу Ожешки.

Красители, у которых при диссоциации выделяются водородные ионы, придающие красителю кислый характер, называются кислыми. Они окрашивают (в виде аниона) вещества основной природы. Красители, у которых при диссоциации выделяются гидроксильные ионы, - основными.

В микробиологической практике кислые и основные красители используются в виде солей, так как они способны вступать в реакцию с кислотами и основаниями. Основные красители чаще применяются в виде солей соляной, реже уксусной и серной кислот; кислые красители – в виде натриевых или калийных солей.

Красители основной природы

Красные Фиолетовые

нейтральный красный генциан фиолетовый

пиронин кристаллический фиолетовый

сафранин метиловый фиолетовый

фуксин метиловый зеленый

гематоксилин малахитовый зеленый

Синие Коричневые

Виктория везивин

метиленовый синий хризоидин.

Зеленые Черный

янус зеленый индулин

Красители кислой природы

Красные и розовые Черные Желтые

кислый фуксин нигрозин конго

эритрозин пикриновая кислота

флюоресцин

Интенсивность окрашивающей способности красителя завистит от рН среды: основные красители окрашивают объект тем интенсивнее, чем более щелочная среда, кислые – чем более кислая.

Красители можно разделить на: позитивные и негативные. Позитивные красители окрашивают непосредственно клетки микроорганизмов. Они окрашивают клетки при комнатной температуре в течение 30-60 секунд. Негативные красители окрашивают пространство, окружающее клетки микроорганизмов. В результате клетки выглядят силуэтами на фоне красителя.

Простой метод окраски

На приготовленный и фиксированный мазок нанести несколько капель водного раствора фуксина. Окрашивать 1-2 мин. Смыть краску водой, промокнуть препарат фильтровальной бумагой, досушить на воздухе и микроскопировать.

Окраска по методу Грама.

    На фиксированный мазок нанести карболово – спиртовый раствор генцианового фиолетового через полоску фильтровальной бумаги. Через 1 –2 мин бумагу снять, а краситель слить.

    Нанести раствор Люголя на 1 –2 мин.

    Обесцветить этиловым спиртом в течение 30 –60с до прекращения отхождения фиолетовых структур красителя.

    Промыть водой.

5. Докрасить водным раствором фуксина в течение 1- 2 мин., промыть водой, высушить фильторовальной бумагой и на воздухе, и микроскопировать.

Грамположительные бактерии окрашиваются в темно – фиолетовый цвет, грамотрицательные - в красный.

Отношение бактерий к окраске по Граму определяется их способностью удерживать образовавшиеся в процессе окраски комплекс генцианового фиолетового с йодом. Это зависит от различий в химическом составе и проницаемости клеточной стенки грамположительных и грамотрицательных бактерий пептидогликан многослоен, с ним связаны тейхоевые кислоты.

У грамотрицательных бактерий пептидогликан однослоен, имеется наружная мембрана, в состав которой входят фосфолипиды, липопротеиды, белки и сложный мепополисахарид (ЛПС). Всю наружную мембрану пронизывают белки – порины, обеспечивающие диффузию различных соединений. Таким образом, у граммположительных бактерий создаются оптимальные условия для прочной фиксации красителя и резистентности к обесцвечиванию спиртом.

К грамположительным бактериям относятся старилококки, стрептококки, коринебактерии дифтерии, микобактерии туберкулеза и др., к грамотрицательным – гонококки, менингококки, кишечная палочка и др. Некоторые виды бактерии могут окрашиваться по Грамму вариабельно, в зависимости от возраста, особенностей культивирования и других факторов, воздействующих на структуру клеточной стенки. Поэтому для окраски нужно брать всегда молодые, 1- суточные культуры.

Основная ошибка, допускаемая при окраске по Грамму, состоит в “переобесцвечивании” мазка этиловым спиртом. Грамположительные бактерии при этом могут утрачивать первоначальную окраску генциановым фиолетовым и приобретать красный цвет (характерный для грамотрицательных бактерий) в результате последующей докраски мазка фуксином грамотрицательные бактерии в свою очередь могут сохранять сине–фиолетовый цвет генцианового фиолетового. Для правильной окраски следует строго соблюдать технику обесцвечивания.

На чистое обезжиренное предметное стекло наносят каплю стерильной воды, которая должна равномерно растекаться, не разбиваясь на капельки. Не следует при этом наносить на стекло очень крупные капли воды. В каплю вносят немного исследуемого материала и тщательно его перемешивают, равномерно распределяя тонким слоем. При изготовлении мазков из жидких питательных сред взятый петлей материал не разбавляется водой. Мазки из сред, содержащих сахар, готовятся с добавлением к капле исследуемой жидкости небольшой капельки стерильного обрата или яичного белка.
Приготовленные мазки высушивают обычно при комнатной температуре. Для ускорения высыхания препараты можно подогреть, держа при помощи пинцета Корнэ предметное стекло с мазками, находящимися на их верхней стороне, в теплом воздухе высоко над пламенем горелки (рис. 41).


Осторожное высушивание препятствует быстрому и грубому осаждению белков протоплазмы бактерий и сохраняет этим самым их структуру. Правильно высушенные препараты хорошо фиксируются. Фиксация обеспечивает лучшее прилипание мазка к стеклу и делает его более восприимчивым к окраске. Самым распространенным и пригодным почти во всех случаях является способ фиксации мазков жаром. Для этого стекло с препаратом мазком вверх проводят трижды через пламя спиртовой или газовой горелки. Температура нагретого стекла должна быть такой, чтобы при соприкосновении его с кожей тыльной стороны руки ощущался бы легкий ожог. Не следует перегревать стекло, так как это портит мазок и сильно изменяет структуру бактерий. Фиксация жаром применяется при изучении отношения бактерий к окраске по Граму, выявления кислотоустойчивости и содержания липоидов. Для исследования внутренней структуры бактерий этот метод совершенно непригоден. В таких случаях для фиксации используют различные химические вещества. Наиболее употребляемыми являются следующие приемы фиксации:
- 95%-ным этиловым спиртом в течение 10–20 мин, если спирт более слабый, то время фиксации удлиняется; смесью равных объемов этилового спирта и эфира (жидкость Никифорова); на препарат наносят несколько капель смеси и дают им испариться;
- смесью этилового спирта и формалина (формалина 5 мл, спирта 95 мл) – 5–10 мин;
- безводным метиловым спиртом в течение 2–3 мин; спирт сливают, а препарат высушивают;
- парами формалина или уксусной кислоты – 5–10 мин; парами 1–2%-ного раствора осмиевой кислоты; препарат помещают на подставку в закрытую склянку с осмиевой кислотой и выдерживают 3–5 мин;
- жидкостью Карнуа (96°-ного этилового спирта – 60 мл, хлороформа – 30 мл, ледяной уксусной кислоты – 10 мл) – 15 мин;
- ацетоном в течение 5 мин;
- 10%-ным раствором азотнокислого серебра – 10 мин;
- 1%-ным раствором сулемы в течение 10–15 мин, после чего препарат промывают раствором поваренной соли и водой;
- жидкостью Буэна такого состава: насыщенного водного раствора пикриновой кислоты – 75 мл, формалина неразбавленного – 25 мл и ледяной уксусной кислоты – 5 мл.
Приготовление отпечатков
В связи с возросшим интересом в последние годы к изучению тонкого строения бактерий были разработаны разнообразные и эффективные способы фиксации бактерий, нанесенные на стекло в виде отпечатков. В таком препарате-отпечатке сохраняется более или менее точно взаимное расположение клеток в бактериальном газоне. Метод отпечатков заключается в том, что из агара в чашке Петри с засеянными на нем бактериями вырезают блок и переносят на предметное стекло. Затем берут обезжиренное предметное стекло и прикладывают его к поверхности блока, засеянного бактериями, получая таким образом первый отпечаток. Отпечатки делают до тех пор, пока не истощится слой бактерий на блоке, располагая их слева направо, начиная от левой короткой грани стекла. Затем дают отпечаткам подсохнуть и помещают стекло в жидкость Карнуа для фиксации. Хорошие результаты дает также фиксация осмиевой кислоты. В литературе описаны и другие методы фиксации отпечатков.

Для того, чтобы определить, в каком состоянии находится пациент, от какой болезни он страдает, врач часто может применить использование мазка-отпечатка. Данный метод широко распространен в самых разных сферах медицины. Дерматологи, гинекологи, урологи, онкологи - все они с разной периодичностью прибегают к нему. Исследование мазка позволяет оперативно определить патологию и назначить грамотный курс лечения.

Мазок-отпечаток - это медицинский препарат, он готовится к использованию через прижатие тканей к предметному стеклу. Надежно зафиксированный и окрашенный отпечаток исследуется под микроскопом.

Мазок-отпечаток применяется для решения самых разных задач. Чаще всего его используют для:

Не существует одного общего способа взятия мазков. Метод, используемый врачом, будет отличаться в зависимости от проблемы пациента и цели, которая будет поставлена перед исследованием.

Для мазка может использоваться биологический материал из разных частей тела. Если речь идет о диагностике рака груди, то отдаляемое для отпечатков будет взято врачом из сосков пациента. При обнаружении инфекции для мазка будет взят гной из той части тела, которая и пострадала при воспалении. Наиболее часто используются для мазка выделения из полостных органов.

Проблемная зона может находиться не только на поверхности кожи, но и под ней. Если врач столкнется с подобной ситуацией, для получения отпечатков ему придется вскрыть кожный покров. Для взятия мазка из труднодоступных мест используются специальные приспособления - тампоны, щеточки. Отделяемое остается на них, а затем бережно распределяется по предметному стеклу.

Мазок-отпечаток с язвы на половых органах

Урологам, венерологам и гинекологам чаще всего приходится брать отпечатки с половых органов своих пациентов. Обычно судить о характере инфекции можно, сделав соскоб из уретры или мочеипускательного канала. Если больной страдает от не самой серьезной болезни, этого может быть достаточно. Однако далеко не всегда инфекция поражает уретру.

Венерические заболевание, то есть заболевания, приобретенные половым путем, в первую очередь, поражают не уретру, а слизистую оболочку. Это характерно как для сифилиса и генитального герпеса, так и для ряда аналогичных болезней. У больного, испытывающего венерические проблемы, на слизистой в промежности образуются язвы, и мазок-отпечаток берется прямо с этой пораженной области.

Для того, чтобы исследовать мазок, взятый с язвы, специалисты применяют темнопольную микроскопию. В некоторых случаях она не сможет с абсолютной точностью определить болезнь. Однако если в результате исследования отпечатков будут обнаружены трепонемы, врач, не сомневаясь, диагностирует у больного сифилис.

Также темнопольная микроскопия позволяет отличить язвы, возникающие при герпесе, от любых других заболеваний.

Мазок-отпечаток головки пениса

В качестве объекта для мазка у мужчины часто используется головка его полового члена. Поводом для этого может послужить баланопостит, при котором воспаляется сама головка или покрывающая ее крайняя плоть.

Мазок, взятый с головки, позволяет определить целый ряд проблем. Он может обнаружить кокки, кишечную палочку, грибковую инфекцию и ряд других заболеваний.

Если баланопостит, по подозрению врача, имеет герпетическое происхождение, мазок-отпечаток будет взят не только с головки, но и с появившихся на коже везикул. Если в везикулах будут обнаружены клетки Тцанка, значит, пациент страдает от генитального герпеса. Полученный биологический материал окрашивается при исследовании. Данная процедура возможна лишь при возникновении везикул.

Мазок-отпечаток для цитологического исследования

Цитологическое исследование отпечатков проводится онкологами, чтобы обнаружить в полученном после мазков биологическом материале атипичные клетки, свидетельствующие о том, что больной страдает раком. В этом случае мазок-отпечаток берется с опухоли, которая может располагаться не только на половых органах, но и на других участках кожи.

При цитологическом исследовании оценке подвергается весь клеточный состав: измеряются размеры ядер, клеток.

Методика позволяет диагностировать не только рак, но и другие процессы, не имеющие отношения к онкологии.

Подготовка к взятию мазка-отпечатка

Пациент не может прийти в больницу и тут же пройти эту процедуру. Она требует длительной подготовки. Если у больного подозревается инфекция, перед взятием мазка ему не стоит принимать антисептики и антибиотики, так как они способы исказить клиническую картину и даже замаскировать инфекцию.

Больному не стоит мыть место, из которого будет взят мазок. Если же это необходимо в силу гигиенических причин, промыть место можно обычной проточной водой без использования мыла и других чистящих средств.

Взятию мазка могут препятствовать налеты, везикулы и прочие образования, появившиеся на коже. В таком случае перед началом процедуры они будут удалены.

Как изучают мазок-отпечаток?

Для исследования взятого мазка необходим микроскоп. Предметное стекло, на которое помещается биологический материал, должно быть абсолютно чистым и сухим.

Препарат может быть зафиксирован различными методами. Обычно для фиксации используются жар, 95%-ный этиловый, метиловый или сулемовый спирт, пары уксусной кислоты. Выбранный метод зависит от лаборатории, в которой будет проводиться исследование. Сегодня для фиксации активно применяются специально выведенные препараты, являющие собой смесь ряда химических веществ.

Фиксатор имеет определяющее значение для эффективности всей процедуры. Если специалистом будет использован недостаточно качественный раствор, он окажет пагубное воздействие на структуру клеток в мазке и, вероятно, даст ложноотрицательный результат. По итогам анализа больному будет сообщено, что он абсолютно здоров, но на самом деле это не так. Лишь качественный раствор для фиксации способен сохранить верное расположение всех клеток мазка и выявить среди них бактериальные образования.

Зафиксированный материал подвергается окрашиванию, которое бывает ориентировочным и дифференциальным.

• Библиотека • Дерматология • Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований

Мазки-отпечатки - это метод цитологического исследования, применяемый с диагностической целью. Особенно ценным этот метод может оказаться при диагностике пузырчатки, злокачественных новообразований.

Мазки-отпечатки берут со дна эрозий, язв или свежих пузырей после удаления покрышки. При наличии фибринозного налета или корок на поверхности язв и эрозий, последние удаляют тампоном, смоченным стерильным физиологическим раствором или дистиллированной водой.

На очищенную эрозивно-язвенную поверхность легко прижимают кусочек стерильной резинки, на котором остаются клеточные элементы, в том числе дегенерирующие, эпителиальные и аконтолитические клетки. Материал на кусочке резинки переносят на обезжиренное предметное стекло (по 4-6 отпечатков на каждые 3-4 стекла), фиксируют метиловым спиртом и высушивают при комнатной температуре. Окраска производится по методу Романовского-Гимзы. Препарат исследуется под микроскопом - сначала с малым увеличением, а затем под иммерсией.

Ред. проф. В.С. Маята

«Что такое мазок, взятие мазков-отпечатков для исследований» – раздел