Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης (RA). Κατά προσέγγιση αντίδραση συγκόλλησης (RA). Απευθείας αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης. Αντίδραση συγκόλλησης (ra) Ποια είναι η βάση της δράσης της αντίδρασης συγκόλλησης

Η συγκόλληση είναι η συγκόλληση και η καθίζηση μικροβίων ή άλλων κυττάρων υπό τη δράση αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολύτη (ισότονο διάλυμα χλωριούχου νατρίου).Ομάδες κολλωδών βακτηρίων (κύτταρα) ονομάζονται συγκολλητικά. Τα ακόλουθα συστατικά απαιτούνται για την αντίδραση συγκόλλησης:

1. Αντισώματα (συγκολλητίνες) που βρίσκονται στον ορό ενός άρρωστου ή άνοσου ζώου.

2. Αντιγόνο - ένα εναιώρημα ζωντανών ή νεκρών μικροβίων, ερυθροκυττάρων ή άλλων κυττάρων.

3. Ισοτονικό (0,9%) διάλυμα χλωριούχου νατρίου.

Η αντίδραση συγκόλλησης για την οροδιάγνωση χρησιμοποιείται για τον τυφοειδή πυρετό και τον παρατυφοειδή πυρετό (αντίδραση Vidal), για βρουκέλλωση (αντίδραση Wright και Huddleson), τουλαραιμία κ.λπ. Σε αυτή την περίπτωση, ο ορός του ασθενούς είναι το αντίσωμα και το γνωστό μικρόβιο είναι το αντιγόνο. Όταν εντοπίζονται μικρόβια ή άλλα κύτταρα, το εναιώρημα τους χρησιμεύει ως αντιγόνο και ένας γνωστός ανοσοποιητικός ορός χρησιμεύει ως αντίσωμα. Αυτή η αντίδραση χρησιμοποιείται ευρέως για τη διάγνωση εντερικών λοιμώξεων, κοκκύτη κ.λπ.

Μέθοδοι σταδιοποίησης RA

Κατά προσέγγιση RA σε γυαλί

Αναπτύχθηκε RA

(ογκομετρική μέθοδος)

Αντίδραση πήξης

Διευρυμένη ΡΑ σε γυαλί (οροαναγνώριση)

Αντίδραση συγκόλλησης σε γυαλί.Δύο σταγόνες ειδικού (προσροφημένου) ορού και μια σταγόνα ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου εφαρμόζονται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα χωρίς λίπος. Οι μη προσροφημένοι οροί προ-αραιώνονται σε αναλογία 1:5 - 1:100. Σταγόνες σε γυαλί πρέπει να εφαρμόζονται έτσι ώστε να υπάρχει απόσταση μεταξύ τους. Η καλλιέργεια τρίβεται επιμελώς με βρόγχο ή σιφώνιο σε ένα ποτήρι, και στη συνέχεια προστίθεται σε μια σταγόνα ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου και μία από τις σταγόνες ορού, αναδεύοντας την καθεμία μέχρι να σχηματιστεί ένα ομοιογενές εναιώρημα. Η σταγόνα ορού χωρίς καλλιέργεια είναι ο έλεγχος ορού.

Προσοχή!Η καλλιέργεια ορού δεν πρέπει να μεταφερθεί σε μια σταγόνα ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου, που είναι έλεγχος αντιγόνου. Η αντίδραση συνεχίζεται σε θερμοκρασία δωματίου για 1-3 λεπτά. Εάν ο μάρτυρας ορού παραμένει διαφανής, παρατηρείται ομοιόμορφη θολότητα στον έλεγχο αντιγόνου και εμφανίζονται νιφάδες συγκολλητικού στο φόντο ενός διαυγούς υγρού στη σταγόνα όπου η καλλιέργεια αναμιγνύεται με ορό, το αποτέλεσμα της αντίδρασης θεωρείται θετικό.

Διαγνωστική Φυσιολογική

ορός + διάλυμα καλλιέργειας + καλλιέργεια

Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης (ογκομετρική μέθοδος).Οι αραιώσεις ορού παρασκευάζονται σε διαδοχικές, τις περισσότερες φορές διπλές, αραιώσεις. Η μέθοδος ονομάζεται μαζική. Για να προσδιορίσετε τον τίτλο αντισωμάτων στον ορό αίματος, πάρτε 6 δοκιμαστικούς σωλήνες. Ρίξτε 1 ml από την αρχική αραίωση του ορού 1:50 στο πρώτο σωληνάριο και προσθέστε 1 ml φυσιολογικού ορού και στα 6 σωληνάρια με μια βαθμονομημένη πιπέτα. Στον πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα, θα ληφθεί αραίωση 1:100 ορού με όγκο 2 ml. Από τον πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα, μεταφέρετε 1 ml στον δεύτερο δοκιμαστικό σωλήνα, όπου η αραίωση γίνεται 1:200. Κάντε λοιπόν μια σειρά από σειριακές αραιώσεις ορού στους 5 πρώτους δοκιμαστικούς σωλήνες (1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1600). Ρίξτε 1 ml από τον πέμπτο σωλήνα στο απολυμαντικό διάλυμα. Προσθέστε 2 σταγόνες diagnosticum και στα 6 σωληνάρια. Το έκτο σωληνάριο είναι μάρτυρας καλλιέργειας, καθώς περιέχει μόνο αλατούχο διάλυμα και διαγνωστικό.

Αυτός ο έλεγχος είναι απαραίτητος για τον αποκλεισμό της αυθόρμητης συγκόλλησης καλλιέργειας. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες ανακινούνται και τοποθετούνται σε θερμοστάτη σε θερμοκρασία 37°C για 2 ώρες, και στη συνέχεια αφήνονται για μια ημέρα σε θερμοκρασία δωματίου, μετά την οποία καταγράφονται τα αποτελέσματα της αντίδρασης συγκόλλησης. Κατά τη δημιουργία μιας αντίδρασης συγκόλλησης με τους ορούς των παιδιών των πρώτων μηνών της ζωής, λόγω της λειτουργικής κατωτερότητας του σχηματισμού αντισωμάτων, είναι απαραίτητο να εντοπιστούν χαμηλότεροι τίτλοι αντισωμάτων, ο οποίος λαμβάνεται υπόψη κατά την αραίωση του ορού. Η αρχική αραίωση του ορού λαμβάνει 1:25. Στον πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα, λαμβάνεται μια αραίωση 1:50, στη συνέχεια 1:100, και ούτω καθεξής.

Με ένα θετικό αποτέλεσμα της αντίδρασης, κολλώδη κύτταρα με τη μορφή κόκκων ή νιφάδων είναι ορατά στους δοκιμαστικούς σωλήνες με φόντο ένα διαυγές υγρό.Το συγκολλητικό υλικό κατακάθεται σταδιακά στον πυθμένα με τη μορφή "ομπρέλας" και το υγρό πάνω από το ίζημα γίνεται διαυγές. Ο έλεγχος αντιγόνου είναι ομοιόμορφα θολός.

Από τη φύση του ιζήματος διακρίνεται η λεπτόκοκκη και η χονδρόκοκκη (όπως νιφάδα) συγκόλληση. Λεπτόκοκκη συγκόλληση επιτυγχάνεται όταν εργάζεστε με O-sera. Χονδρόκοκκο - κατά την αλληλεπίδραση κινητών μικροβίων με μαστιγωτούς ορούς Η. Έρχεται πιο γρήγορα από το λεπτόκοκκο, το ίζημα που προκύπτει είναι πολύ χαλαρό και σπάει εύκολα.

Η ένταση της αντίδρασης εκφράζεται ως εξής:

Όλα τα κύτταρα κατακάθονται, το υγρό στον δοκιμαστικό σωλήνα είναι εντελώς διαφανές. Το αποτέλεσμα της αντίδρασης είναι έντονα θετικό.

Το ίζημα είναι μικρότερο, δεν υπάρχει πλήρης διαφώτιση του υγρού. Το αποτέλεσμα της αντίδρασης είναι θετικό.

Το ίζημα είναι ακόμη λιγότερο, το υγρό είναι πιο θολό. Το αποτέλεσμα της αντίδρασης είναι αμφίβολο.

στο κάτω μέρος του σωλήνα υπάρχει ένα ασήμαντο ίζημα, το υγρό είναι θολό. Αμφίβολο αποτέλεσμα της αντίδρασης.

Δεν υπάρχει ίζημα, το υγρό είναι ομοιόμορφα θολό, όπως στον έλεγχο αντιγόνου. Αρνητικό αποτέλεσμα αντίδρασης

Αντίδραση συγκόλλησης (από λατ. συγκόλληση- δεσμός) - δεσμός σωματιδίων (βακτήρια, ερυθροκύτταρα κ.λπ.) με αντισώματα παρουσία ηλεκτρολυτών.

Αντίδραση συγκόλλησηςεκδηλώνεται με τη μορφή νιφάδων ή ιζημάτων, που αποτελούνται από σωματίδια (για παράδειγμα, βακτήρια), «κολλημένα μεταξύ τους» από αντισώματα (Εικ. 7.37). Η αντίδραση συγκόλλησης χρησιμοποιείται για: τον προσδιορισμό του παθογόνου που απομονώθηκε από τον ασθενή. προσδιορισμός αντισωμάτων στον ορό αίματος του ασθενούς. προσδιορισμός ομάδων αίματος.

Ρύζι. 7,37 α, β. Αντίδραση συγκόλλησης μεIgM-αντισώματα (α) καιIgG-αντισώματα (β)

1. Προσδιορισμός του παθογόνου που απομονώθηκε από τον ασθενή Κατά προσέγγιση αντίδραση συγκόλλησης σε γυαλί (Εικ. 7.38). Ένα εναιώρημα βακτηρίων που απομονώθηκε από τον ασθενή προστίθεται σε μια σταγόνα ορού συγκόλλησης (αραίωση 1:20). Σχηματίζεται ένα ξεφλουδισμένο ίζημα.

Ρύζι. 7.38.

Μια εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης με ένα παθογόνο που απομονώθηκε από έναν ασθενή (Εικ. 7.39). Ένα εναιώρημα βακτηρίων που απομονώθηκε από τον ασθενή προστίθεται στις αραιώσεις του συγκολλητικού ορού.

Ρύζι. 52

2. Προσδιορισμός αντισωμάτων στον ορό αίματος του ασθενούς
Μια εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης με τον ορό αίματος του ασθενούς (Εικ. 7.39). Το Diagnosticum προστίθεται σε αραιώσεις του ορού του ασθενούς.
- Η συγκόλληση με O-diagnosticum (βακτήρια που σκοτώνονται με θέρμανση, διατηρώντας το 0-αντιγόνο) λαμβάνει χώρα με τη μορφή λεπτόκοκκης συγκόλλησης.
- Η συγκόλληση με H-diagnosticum (βακτήρια που σκοτώνονται από φορμαλίνη, που διατηρούν το αντιγόνο Η των μαστιγίων) είναι χονδρόκοκκη και προχωρά πιο γρήγορα.
3. Τεστ συγκόλλησης για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματοςΗ αντίδραση συγκόλλησης για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος χρησιμοποιείται για την εγκαθίδρυση του συστήματος ΑΒΟ (Πίνακας β) με συγκόλληση ερυθροκυττάρων με άνοσα αντισώματα ορού έναντι αντιγόνων των ομάδων αίματος Α (Ι), Β (III). Οι έλεγχοι είναι: ορός που δεν περιέχει αντισώματα, π.χ. ομάδες αίματος ορού ΑΒ (IV). αντιγόνα που περιέχονται στα ερυθροκύτταρα των ομάδων Α (II), Β (III). Ο αρνητικός έλεγχος δεν περιέχει αντιγόνα, δηλ. χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα της ομάδας Ο (Ι).

Πίνακας 7.6. Προσδιορισμός ομάδων αίματος ABO

Αποτελέσματα αντίδρασης		ομάδα
		που ανήκουν
		ερευνήθηκε αίμα
ερυθροκύτταρα με	ορός (πλάσμα)
πρότυπο	με στάνταρ
ορός

Η συγκόλληση ονομάζεται συγκόλληση των βακτηρίων ως αποτέλεσμα της αλληλεπίδρασης με αυτά ειδικού ΑΤ. Η ΡΑ απαιτεί τρία συστατικά: 1) AG (συγκολλητογόνο). 2) ΑΤ (συγκολλητίνη); 3) διάλυμα ηλεκτρολύτη (ισοτονικό διάλυμα χλωριούχου νατρίου). Μόνο σωματιδιακά αντιγόνα (βακτήρια, ερυθροκύτταρα, σωματίδια λατέξ φορτωμένα με αντιγόνο) συμμετέχουν στην αντίδραση συγκόλλησης.

Αντίδραση συγκόλλησης σε γυαλί. Μια σταγόνα διαγνωστικού ορού (αραίωση ορού 1:10 - 1:20) εφαρμόζεται σε μια γυάλινη αντικειμενοφόρο πλάκα χωρίς λίπος με μια πιπέτα. Λαμβάνεται καθαρή καλλιέργεια του υπό μελέτη μικροοργανισμού από την επιφάνεια του κεκλιμένου άγαρ με βακτηριολογική θηλιά, μεταφέρεται σε μια σταγόνα ορού και αναμειγνύεται. Το αποτέλεσμα της αντίδρασης λαμβάνεται υπόψη με γυμνό μάτι μετά από 3-5 λεπτά. Με μια θετική αντίδραση σε μια σταγόνα ορού, σημειώνεται η εμφάνιση νιφάδων (μεγάλων ή μικρών) που είναι σαφώς ορατές σε σκούρο φόντο όταν ανακινείται η γυάλινη πλάκα. Σε περίπτωση αρνητικής αντίδρασης, το υγρό παραμένει ομοιόμορφα θολό.

Αντίδραση συγκόλλησης σε δοκιμαστικούς σωλήνες. Προσθέστε 1 ml φυσιολογικού ορού σε έναν αριθμό δοκιμαστικών σωλήνων. Προσθέστε ίσο όγκο του εξεταζόμενου ορού αίματος στον πρώτο δοκιμαστικό σωλήνα. Παρασκευάζονται διαδοχικές διπλές αραιώσεις ορού (τιτλοδότηση ορού), μετά τις οποίες προστίθενται 2 σταγόνες από ένα εναιώρημα αδρανοποιημένων βακτηρίων (diagnosticum) σε κάθε δοκιμαστικό σωλήνα. Οι σωλήνες τοποθετούνται για 2 ώρες σε θερμοστάτη στους 37°C. Η αντίδραση προχωρά με το σχηματισμό μικρών νιφάδων, αόρατες με γυμνό μάτι, επομένως, τα αποτελέσματα καταγράφονται υπό ελαφρά αύξηση σε μια ειδική συσκευή - ένα συγκολλητοσκόπιο. Η ένταση της συγκόλλησης λαμβάνεται υπόψη σύμφωνα με το σύστημα "τεσσάρων συν": πλήρης συγκόλληση - 4+, μερική συγκόλληση - 3+ ή 2+, αμφίβολο αποτέλεσμα - +. Η τελευταία αραίωση στην οποία παρατηρείται συγκόλληση στο 2+ λαμβάνεται ως τίτλος αντισωμάτων στον ορό δοκιμής.

Η αντίδραση συγκόλλησης σε δοκιμαστικούς σωλήνες (αντίδραση εκτεταμένης συγκόλλησης) διεξάγεται για τον προσδιορισμό του τίτλου των αντισωμάτων σε παθογόνα του τυφοειδούς πυρετού και του παρατυφοειδούς πυρετού (αντίδραση Vidal), της βρουκέλλωσης (αντίδραση Wright), του τύφου (αντίδραση Weigl).

Συγκόλληση (από το λατινικό agglutinatio - bonding) - σύνδεση (σύνδεση) αντιγονοφόρων σωματιδίων σωματιδίων (ολόκληρα κύτταρα, σωματίδια λατέξ κ.λπ.) με συγκεκριμένα μόρια αντισώματος παρουσία ηλεκτρολυτών, η οποία τελειώνει με το σχηματισμό νιφάδων ή ιζήματος (συγκόλληση ) ορατή με γυμνό μάτι. Η φύση του ιζήματος εξαρτάται από τη φύση του αντιγόνου: τα μαστιγιακά βακτήρια δίνουν ένα ίζημα μεγάλης νιφάδας, μαστιγωτό και χωρίς κάψουλες - λεπτόκοκκο, καψικό - χορδές. Διάκριση της άμεσης συγκόλλησης, στην οποία η αλληλεπίδραση με συγκεκριμένα αντισώματα εμπλέκει άμεσα τα δικά του αντιγόνα ενός βακτηριακού ή οποιουδήποτε άλλου κυττάρου, όπως τα ερυθροκύτταρα. και έμμεσα, ή παθητικά, στα οποία τα βακτηριακά κύτταρα ή τα ερυθροκύτταρα ή τα σωματίδια λατέξ δεν είναι φορείς όχι δικά τους, αλλά ξένων αντιγόνων (ή αντισωμάτων) προσροφημένων πάνω τους για την ανίχνευση αντισωμάτων (ή αντιγόνων) ειδικά γι' αυτά. Η αντίδραση συγκόλλησης περιλαμβάνει κυρίως αντισώματα που ανήκουν στις κατηγορίες IgG και IgM. Προχωρά σε δύο φάσεις: πρώτον, υπάρχει μια ειδική αλληλεπίδραση του ενεργού κέντρου των αντισωμάτων με τον καθοριστή αντιγόνου, αυτό το στάδιο μπορεί να συμβεί απουσία ηλεκτρολυτών και δεν συνοδεύεται από ορατές αλλαγές στο σύστημα αντίδρασης. Το δεύτερο στάδιο - ο σχηματισμός συγκόλλησης - απαιτεί την παρουσία ηλεκτρολυτών που μειώνουν το ηλεκτρικό φορτίο των συμπλεγμάτων αντιγόνου + αντισωμάτων και επιταχύνουν τη διαδικασία κόλλησής τους. Αυτή η φάση τελειώνει με το σχηματισμό συγκολλητικού.

Οι αντιδράσεις συγκόλλησης τοποθετούνται είτε σε γυάλινα ή σε λείες χάρτινες πλάκες, είτε σε αποστειρωμένους σωλήνες συγκόλλησης. Οι αντιδράσεις συγκόλλησης (άμεσες και παθητικές) στο γυαλί χρησιμοποιούνται συνήθως ως επιταχυνόμενη μέθοδος για την ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων στον ορό του ασθενούς (για παράδειγμα, στη βρουκέλλωση) ή για την ορολογική ταυτοποίηση του παθογόνου. Στην τελευταία περίπτωση, χρησιμοποιούνται συνήθως καλά καθαρισμένοι (προσροφημένοι) διαγνωστικοί οροί, που περιέχουν μόνο αντισώματα μονοϋποδοχέα ή το σύνολο τους σε διάφορα αντιγόνα. Το αναμφισβήτητο πλεονέκτημα της αντίδρασης συγκόλλησης στο γυαλί είναι η απλότητα της σύνθεσής του και το γεγονός ότι διαρκεί αρκετά λεπτά ή και δευτερόλεπτα, αφού και τα δύο συστατικά χρησιμοποιούνται σε αυτό σε συμπυκνωμένη μορφή. Ωστόσο, έχει μόνο ποιοτική αξία και είναι λιγότερο ευαίσθητο από τον δοκιμαστικό σωλήνα. Μια εκτεταμένη δοκιμή συγκόλλησης σε δοκιμαστικούς σωλήνες δίνει πιο ακριβή αποτελέσματα, επειδή σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την ποσοτική περιεκτικότητα αντισωμάτων στον ορό (ορίστε τον τίτλο του) και, εάν είναι απαραίτητο, να καταγράψετε το γεγονός της αύξησης του τίτλου αντισωμάτων, που είναι διαγνωστικό αξία. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, ορός αραιωμένος με διάλυμα NaCl 0,85% με ορισμένο τρόπο και ίσο όγκο (συνήθως 0,5 ml) εναιωρήματος τυπικού διαγνωστικού (ή δοκιμαστικής καλλιέργειας) που περιέχει 1 δισεκατομμύριο βακτήρια σε 1 ml εισάγονται σε συγκόλληση. σωλήνες. Ο υπολογισμός των αποτελεσμάτων της αντίδρασης συγκόλλησης πραγματοποιείται προκαταρκτικά μετά από 2 ώρες επώασης των σωλήνων στους 37 ° C και τελικά μετά από 20-24 ώρες σύμφωνα με δύο κριτήρια: την παρουσία και το μέγεθος του ιζήματος και τον βαθμό διαφάνειας του υπερκείμενο. Η αξιολόγηση πραγματοποιείται σύμφωνα με το σύστημα τεσσάρων σταυρών. Η αντίδραση συνοδεύεται απαραίτητα από τον έλεγχο ορού και αντιγόνου. Στις περιπτώσεις που χρησιμοποιείται λεπτομερής δοκιμή συγκόλλησης σε δοκιμαστικό σωλήνα για ορολογική ταυτοποίηση του παθογόνου, έχει διαγνωστική αξία εάν η αντίδραση αξιολογηθεί ως θετική όταν ο διαγνωστικός ορός αραιωθεί με τουλάχιστον το ήμισυ του τίτλου του.

Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι κατά την ανάμιξη διαλυμάτων ομόλογων αντιγόνων και αντισωμάτων, δεν παρατηρούνται πάντα ορατές εκδηλώσεις της αντίδρασης συγκόλλησης. Ένα ίζημα σχηματίζεται μόνο σε ορισμένες βέλτιστες αναλογίες και των δύο συστατικών της αντίδρασης. Εκτός αυτών των ορίων, με σημαντική περίσσεια αντιγόνου ή αντισωμάτων, δεν παρατηρείται καμία αντίδραση. Αυτό το φαινόμενο ονομάζεται «φαινόμενο προζώνης». Παρατηρείται τόσο στην αντίδραση συγκόλλησης όσο και στην αντίδραση καθίζησης. Η εμφάνιση της προζόνης στις ανοσολογικές αντιδράσεις εξηγείται από το γεγονός ότι τα αντιγόνα που εμπλέκονται σε αυτές είναι συνήθως πολυκαθοριστικά και τα μόρια αντισώματος IgG έχουν δύο ενεργά κέντρα. Με περίσσεια αντισωμάτων, η επιφάνεια κάθε σωματιδίου αντιγόνου καλύπτεται με μόρια αντισώματος έτσι ώστε να μην παραμένουν ελεύθερες καθοριστικές ομάδες, έτσι το δεύτερο, αδέσμευτο ενεργό κέντρο αντισωμάτων δεν μπορεί να αλληλεπιδράσει με άλλο αντιγονικό σωματίδιο και να τα δεσμεύσει μεταξύ τους. Ο σχηματισμός ενός ορατού συγκολλητικού ή ιζήματος καταστέλλεται επίσης όταν υπάρχει περίσσεια αντιγόνου, όταν δεν υπάρχει ούτε μία ελεύθερη ενεργή θέση αντισωμάτων και επομένως τα σύμπλοκα αντιγόνου + αντισώματος + αντιγόνου δεν μπορούν πλέον να μεγεθυνθούν.

Επιλογές για αντιδράσεις επιταχυνόμενης συγκόλλησης. Παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης και οι παραλλαγές της

Η κλασική αντίδραση συγκόλλησης περιλαμβάνει τη χρήση σωματιδιακών αντιγόνων. Ωστόσο, μπορεί επίσης να εμπλέκονται διαλυτά αντιγόνα. Για να καταστεί αυτό δυνατό, τέτοια αντιγόνα προσροφούνται σε ανοσολογικά αδρανή σωματίδια. Ως φορέας, μπορούν να χρησιμοποιηθούν σωματίδια λατέξ ή μπεντονίτη, ωστόσο, επί του παρόντος, χρησιμοποιούνται συχνότερα ερυθροκύτταρα ζώων ή ανθρώπων, βελτιώνοντας τις απορροφητικές τους ιδιότητες με επεξεργασία με διαλύματα τανίνης, φορμαλίνης ή βενζιδίνης. Τα ερυθροκύτταρα που προσροφούν ένα αντιγόνο πάνω τους ονομάζονται ευαισθητοποιημένα από αυτό το αντιγόνο και η ανοσολογική αντίδραση στην οποία συμμετέχουν είναι μια έμμεση ή παθητική αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (RNHA ή RPHA), αφού τα ερυθροκύτταρα συμμετέχουν παθητικά σε αυτήν.

Το RPGA τοποθετείται σε ειδικές πλάκες πολυστυρενίου με οπές με ημισφαιρικό πυθμένα. Όταν χρησιμοποιείται για ορολογική διάγνωση, σε αυτές τις οπές παρασκευάζονται διπλές αραιώσεις σε φυσιολογικό διάλυμα του δοκιμαστικού ορού και στη συνέχεια προστίθεται σε αυτό ένα εναιώρημα ευαισθητοποιημένων ερυθροκυττάρων ως διαγνωστικός παράγοντας. Τα αποτελέσματα καταγράφονται μετά από 2 ώρες επώασης στους 37 °C σύμφωνα με το σύστημα four-cross. Με θετική αντίδραση, τα συγκολλημένα ερυθροκύτταρα εγκαθίστανται στον πυθμένα της οπής και την καλύπτουν ομοιόμορφα με τη μορφή ανεστραμμένης ομπρέλας. Με μια αρνητική αντίδραση, τα ερυθροκύτταρα καθιζάνουν επίσης, το υγρό γίνεται διαφανές, το ίζημα μοιάζει με ένα μικρό "δίσκο" στο κέντρο της οπής. Ο τίτλος ορού στο RPHA θεωρείται η τελευταία του αραίωση, η οποία εξακολουθεί να δίνει έντονη αιμοσυγκόλληση χωρίς σημαντικά σημάδια παρουσίας «δίσκου».

Το RPHA μπορεί επίσης να χρησιμοποιηθεί ως ταχεία μέθοδος βακτηριολογικής διάγνωσης για την ανίχνευση άγνωστων βακτηρίων, ιών, τοξινών, όπως παθογόνων πανώλης, σταφυλοκοκκικών εντεροτοξινών κ.λπ., απευθείας στο υλικό δοκιμής. Εάν το υλικό δοκιμής περιέχει επαρκή ποσότητα γνωστού αντιγόνου, το TPHA θα είναι θετικό.

Οι επιλογές για τη χρήση του RPGA είναι: αντίδραση εξουδετέρωσης αντιγόνου (RNAg), αντίδραση εξουδετέρωσης αντισωμάτων (RNAt), αντίδραση αναστολής παθητικής αιμοσυγκόλλησης (RPHA). Για αυτές τις αντιδράσεις χρησιμοποιούνται αντιγονικά και αντισώματα ερυθροκυτταρικά διαγνωστικά. Μπορούν να χρησιμοποιηθούν ταυτόχρονα δύο αλληλοελεγχόμενες μονοκατευθυντικές αντιδράσεις, για παράδειγμα, το RPHA με ένα αντιγονικό διαγνωστικό και το RNAg με ένα διαγνωστικό αντίσωμα ερυθροκυττάρων.

Η αντίδραση εξουδετέρωσης αντισωμάτων (RNAt) συνίσταται στο γεγονός ότι ένα εναιώρημα που περιέχει το επιθυμητό αντιγόνο αναμειγνύεται με έναν ειδικό ανοσοορό που περιέχει γνωστά αντισώματα σε κατάλληλους όγκους και επωάζεται στους 37 °C για δύο ώρες. Μετά από αυτό, προστίθεται ένα αντιγονικό ερυθροκυτταρικό διαγνωστικό. Το μείγμα ανακινείται και αφήνεται σε θερμοκρασία δωματίου. Τα αποτελέσματα λαμβάνονται υπόψη μετά από 3-4 ώρες και τελικά - μετά από 18-24 ώρες.Εάν υπάρχει αντιγόνο στο υλικό δοκιμής, θα δεσμεύσει τα αντισώματα (τα εξουδετερώσει) και επομένως δεν θα συμβεί αιμοσυγκόλληση.

Σύμφωνα με την ίδια αρχή, πραγματοποιείται μια αντίδραση εξουδετέρωσης αντιγόνου (RNAg). Μόνο σε αυτή την περίπτωση, ανιχνεύονται αντισώματα στο υλικό δοκιμής. Ένα ειδικό αντιγόνο που προστίθεται σε ένα τέτοιο υλικό δοκιμής θα συνδεθεί με τα αντισώματα που περιέχονται σε αυτό, δηλ. το αντιγόνο θα εξουδετερωθεί από τα αντισώματα, και επομένως η αιμοσυγκόλληση δεν θα συμβεί όταν προστεθεί το αντίσωμα ερυθροκυτταρικό diagnosticum.

Αντίδραση πήξης. Είναι μία από τις επιλογές για μια παθητική, δηλαδή, επιταχυνόμενη αντίδραση συγκόλλησης με αντισώματα με τη μεσολάβηση κυττάρων σε γυαλί. Αυτή η αντίδραση βασίζεται στη μοναδική ιδιότητα του Staphylococcus aureus, ο οποίος έχει πρωτεΐνη Α στο κυτταρικό του τοίχωμα, να δεσμεύεται σε θραύσματα Fc των IgG και IgM. Ταυτόχρονα, τα ενεργά κέντρα των αντισωμάτων παραμένουν ελεύθερα και μπορούν να αλληλεπιδράσουν με συγκεκριμένους καθοριστικούς παράγοντες αντιγόνων. Μια σταγόνα ενός εναιωρήματος 2% σταφυλόκοκκων που έχουν ευαισθητοποιηθεί με τα αντίστοιχα αντισώματα εφαρμόζεται σε μια γυάλινη πλάκα και μια σταγόνα από ένα εναιώρημα των μελετηθέντων βακτηρίων προστίθεται. Όταν το αντιγόνο αντιστοιχεί στα αντισώματα, μετά από 30-60 δευτερόλεπτα, εμφανίζεται μια σαφής συγκόλληση σταφυλόκοκκων φορτωμένων με αντισώματα.

Αντίδραση συγκόλλησης λατέξ (LAH). Ο φορέας των αντισωμάτων σε αυτό το διαγνωστικό σύστημα είναι μικρά τυπικά σωματίδια λατέξ. Η αντίδραση πραγματοποιείται με τη μικρομέθοδο σε φρεάτια σε γυαλί. Η βασική προϋπόθεση για την επιτυχή ρύθμιση της ΠΑΥ είναι η αυστηρή τήρηση των ποσοτικών αναλογιών των συστατικών του συστήματος: 10 μl παρασκευάσματος λατέξ ευαισθητοποιημένου με αντισώματα προστίθενται σε 50 μl του υλικού δοκιμής. Η εξειδίκευση της PAH ελέγχεται χρησιμοποιώντας τρεις δοκιμές ελέγχου που περιέχονται σε εμπορικά συστήματα δοκιμών: μια γνωστή θετική αντίδραση, μια γνωστή αρνητική αντίδραση και έλεγχος ποιότητας του εναιωρήματος λατέξ για λάτεξ που δεν έχουν ευαισθητοποιηθεί σε PAH (που δεν φέρουν αντισώματα) με τη δοκιμή υλικό. Στη χώρα μας, ως φορείς ειδικών αντισωμάτων χρησιμοποιούνται μονοδιεσπαρμένα λατέξ πολυστυρολίου με διαφορετικές διαμέτρους σωματιδίων (0,3; 0,66; 0,75; 0,8 μm). Η PAH χρησιμοποιείται για την ταχεία ανίχνευση μικροοργανισμών ή των αντιγόνων τους στο υλικό δοκιμής.

Ανοσομαγνητική ανίχνευση αντιγόνων. Μία από τις επιλογές για μια επιταχυνόμενη αντίδραση συγκόλλησης στο γυαλί σχετίζεται με τη χρήση υπερμαγνητικών πολυμερών σωματιδίων επικαλυμμένων με συγκεκριμένα αντισώματα. Ένα τέτοιο σωματίδιο δεσμεύει έως και 107-108 κύτταρα μικροοργανισμών, λόγω των οποίων η ευαισθησία αυτής της μεθόδου φτάνει τα 5 CFU/ml. Η ανοσομαγνητική ανίχνευση μικροοργανισμών μπορεί να χρησιμοποιηθεί σε συνδυασμό με ΚΑΡΠΑ.

Αντίδραση συσσωματώματος-αιμοσυγκόλλησης (RAGA). Σας επιτρέπει να ανιχνεύετε γρήγορα στο αίμα των ασθενών τόσο αντιγόνα που κυκλοφορούν ελεύθερα (αντιγοναιμία) όσο και αντιγόνα που σχετίζονται με αντισώματα - κυκλοφορούντα ανοσοσυμπλέγματα (CIC). Για το RAGA χρησιμοποιούνται ερυθροκύτταρα ευαισθητοποιημένα με τα κατάλληλα αντισώματα. Η προσθήκη του ορού αίματος του ασθενούς, που περιέχει αντιγόνα, σε ευαισθητοποιημένα ερυθροκύτταρα, πάνω στα οποία στερεώνονται αντισώματα, οδηγεί σε κόλληση (συγκόλληση) ερυθροκυττάρων και ανοσοσυμπλεγμάτων.

Αντισφαιρίνη Coombs test (αντίδραση R. Coombs). Με τη βοήθεια αντιδράσεων άμεσης και παθητικής συγκόλλησης προσδιορίζονται πλήρη (δισθενή) αντισώματα. Τα ελλιπή (μονοσθενή, ανασταλτικά) αντισώματα δεν ανιχνεύονται με αυτές τις μεθόδους, καθώς, όταν συνδυάζονται με το αντιγόνο, το μπλοκάρουν, αλλά δεν μπορούν να προκαλέσουν τη συσσώρευση του αντιγόνου σε μεγάλα συσσωματώματα. Ατελή (ανασταλτικά) αντισώματα είναι εκείνα στα οποία λειτουργεί μόνο ένα ενεργό κέντρο. το δεύτερο ενεργό κέντρο δεν λειτουργεί για άγνωστο λόγο. Για τον εντοπισμό ατελών αντισωμάτων, χρησιμοποιείται μια ειδική αντίδραση Coombs (Εικ. 72). Τα ακόλουθα εμπλέκονται στην αντίδραση: ορός ασθενούς, στον οποίο προσδιορίζονται ελλιπή αντισώματα, σωματιδιακό αντιγόνο-διαγνωστικό, ορός αντισφαιρίνης που περιέχει αντισώματα κατά της ανθρώπινης σφαιρίνης. Η αντίδραση εξελίσσεται σε δύο στάδια:

Αλληλεπίδραση αντιγόνου με ατελή αντισώματα. Δεν υπάρχουν ορατές εκδηλώσεις. Το πρώτο στάδιο ολοκληρώνεται με πλύση του αντιγόνου από τα υπολείμματα του ορού του ασθενούς.

Αλληλεπίδραση ορού αντισφαιρίνης, που λαμβάνεται ως αποτέλεσμα ανοσοποίησης ζώου με ανθρώπινη σφαιρίνη, με ατελή αντισώματα προσροφημένα στο αντιγόνο. Λόγω του γεγονότος ότι τα αντισώματα κατά της σφαιρίνης είναι δισθενή, δεσμεύουν δύο μονοσθενή αντισώματα ξεχωριστών συμπλεγμάτων αντιγόνου + ατελές αντίσωμα, γεγονός που οδηγεί στη συγκόλλησή τους μεταξύ τους και στην εμφάνιση ενός ορατού ιζήματος.

Πίνακας περιεχομένων του θέματος "Ανοσοτροποποιητές. Ανοσοδιαγνωστικά Λοιμωδών Νοσημάτων.":

Εκτεταμένη αντίδραση συγκόλλησης (RA). Για να προσδιορίσετε την ΑΤ στον ορό αίματος του ασθενούς, βάλτε αντίδραση εκτεταμένης συγκόλλησης (RA). Για να γίνει αυτό, ένα διαγνωστικό προστίθεται σε μια σειρά από αραιώσεις ορού αίματος - ένα εναιώρημα σκοτωμένων μικροοργανισμών ή σωματιδίων με προσροφημένο Ag. Η μέγιστη αραίωση που δίνει συγκόλληση Ag, που ονομάζεται τίτλος ορού αίματος.

Ποικιλίες αντίδρασης συγκόλλησης (RA) για την ανίχνευση AT - μια δοκιμή σταγόνας αίματος για τουλαραιμία (με την εφαρμογή διαγνωστικού σε μια σταγόνα αίματος και την εμφάνιση ορατών λευκωπών συσσωματωμάτων) και την αντίδραση Huddleson για βρουκέλλωση (με ένα διαγνωστικό βαμμένο με βιολετί γεντιανής που εφαρμόζεται σε μια σταγόνα ορού αίματος).

Κατά προσέγγιση αντίδραση συγκόλλησης (RA)

Για την αναγνώριση των απομονωμένων μικροοργανισμών, τοποθετείται κατά προσέγγιση RA σε γυάλινες πλάκες. Για να γίνει αυτό, μια καλλιέργεια του παθογόνου προστίθεται σε μια σταγόνα τυπικού διαγνωστικού αντιορού (σε αραίωση 1:10, 1:20). Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό, βάζουν λεπτομερή αντίδραση με αυξανόμενες αραιώσεις αντιορού.

αντίδρασηθεωρείται θετικό εάν παρατηρηθεί συγκόλληση σε αραιώσεις κοντά στον τίτλο του διαγνωστικού ορού.

ΟΑΣ. Σωματικός Ο-Αγείναι θερμικά σταθερά και αντέχουν στο βρασμό για 2 ώρες Όταν αλληλεπιδρούν με το ΑΤ σχηματίζουν λεπτόκοκκα αδρανή.

Αλογάκι. N-Ag (μαστιγωτό)θερμοευαίσθητο και γρήγορα καταστρέφεται στους 100 °C, καθώς και υπό τη δράση της αιθανόλης. Σε αντιδράσεις με αντιορό Η, μετά από 2 ώρες επώασης, σχηματίζονται χαλαρές μεγάλες νιφάδες (που σχηματίζονται από βακτήρια που κολλάνε μεταξύ τους με μαστίγια).

Vi ArΤα βακτήρια του τύφου είναι σχετικά θερμοσταθερά (αντέχουν σε θερμοκρασία 60-62 ° C για 2 ώρες). όταν επωάζεται με Vi-αντιορό, σχηματίζεται λεπτόκοκκο συγκολλητικό.

Απευθείας αντιδράσεις αιμοσυγκόλλησης

Το πιο απλό από αυτά αντιδράσεις - συγκόλλησηερυθροκύτταρα ή αιμοσυγκόλληση, που χρησιμοποιούνται για τον προσδιορισμό των ομάδων αίματος στο σύστημα ΑΒ0. Για τον καθορισμό συγκόλληση(ή απουσία του) χρησιμοποιούνται τυπικοί αντιοροί με αντι-Α και αντι-Β συγκολλητίνες. Η αντίδραση ονομάζεται άμεση, καθώς τα αντιγόνα που μελετήθηκαν είναι φυσικά συστατικά των ερυθροκυττάρων.

Μοιρασμένο με άμεση αιμοσυγκόλλησημηχανισμοί έχει ιογενή αιμοσυγκόλληση. Πολλοί ιοί είναι ικανοί να συγκολλούν αυθόρμητα ερυθροκύτταρα πτηνών και θηλαστικών και η προσθήκη τους σε ένα εναιώρημα ερυθροκυττάρων προκαλεί το σχηματισμό συσσωματωμάτων από αυτά.

Αντίδραση συγκόλλησης

Συγκόλληση (λάτ. συγκόλληση- κόλληση) - κόλληση (σύνδεση) σωματιδίων που φέρουν αντιγόνο (ολόκληρα κύτταρα, σωματίδια λατέξ κ.λπ.) με μόρια ειδικών αντισωμάτων παρουσία ηλεκτρολυτών, η οποία τελειώνει με το σχηματισμό νιφάδων ή ιζήματος (συγκόλλησης) ορατές στο γυμνό μάτι. Η φύση του ιζήματος εξαρτάται από τη φύση του αντιγόνου: τα μαστιγιακά βακτήρια δίνουν ένα ίζημα μεγάλης νιφάδας, μαστιγωτό και χωρίς κάψουλες - λεπτόκοκκο, καψικό - χορδές. Διάκριση της άμεσης συγκόλλησης, στην οποία η αλληλεπίδραση με συγκεκριμένα αντισώματα εμπλέκει άμεσα τα δικά του αντιγόνα ενός βακτηριακού ή οποιουδήποτε άλλου κυττάρου, όπως τα ερυθροκύτταρα. και έμμεσα, ή παθητικά, στα οποία τα βακτηριακά κύτταρα ή τα ερυθροκύτταρα ή τα σωματίδια λατέξ δεν είναι φορείς όχι δικά τους, αλλά ξένων αντιγόνων (ή αντισωμάτων) προσροφημένων πάνω τους για την ανίχνευση αντισωμάτων (ή αντιγόνων) ειδικά γι' αυτά. Η αντίδραση συγκόλλησης περιλαμβάνει κυρίως αντισώματα που ανήκουν στις κατηγορίες IgG και IgM. Προχωρά σε δύο φάσεις: πρώτον, υπάρχει μια ειδική αλληλεπίδραση του ενεργού κέντρου των αντισωμάτων με τον καθοριστή αντιγόνου, αυτό το στάδιο μπορεί να συμβεί απουσία ηλεκτρολυτών και δεν συνοδεύεται από ορατές αλλαγές στο σύστημα αντίδρασης. Το δεύτερο στάδιο, ο σχηματισμός συγκόλλησης, απαιτεί την παρουσία ηλεκτρολυτών που μειώνουν το ηλεκτρικό φορτίο των συμπλεγμάτων αντιγόνου + αντισωμάτων και επιταχύνουν τη διαδικασία της κόλλησής τους. Αυτή η φάση τελειώνει με το σχηματισμό συγκολλητικού.

Οι αντιδράσεις συγκόλλησης τοποθετούνται είτε σε γυάλινα ή σε λείες χάρτινες πλάκες, είτε σε αποστειρωμένους σωλήνες συγκόλλησης. Οι αντιδράσεις συγκόλλησης (άμεσες και παθητικές) στο γυαλί χρησιμοποιούνται συνήθως ως επιταχυνόμενη μέθοδος για την ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων στον ορό του ασθενούς (για παράδειγμα, στη βρουκέλλωση) ή για την ορολογική ταυτοποίηση του παθογόνου. Στην τελευταία περίπτωση, χρησιμοποιούνται συνήθως καλά καθαρισμένοι (προσροφημένοι) διαγνωστικοί οροί, που περιέχουν μόνο αντισώματα μονοϋποδοχέα ή το σύνολο τους σε διάφορα αντιγόνα. Το αναμφισβήτητο πλεονέκτημα της αντίδρασης συγκόλλησης στο γυαλί είναι η απλότητα της σύνθεσής του και το γεγονός ότι διαρκεί αρκετά λεπτά ή και δευτερόλεπτα, αφού και τα δύο συστατικά χρησιμοποιούνται σε αυτό σε συμπυκνωμένη μορφή. Ωστόσο, έχει μόνο ποιοτική αξία και είναι λιγότερο ευαίσθητο από τον δοκιμαστικό σωλήνα. Μια εκτεταμένη δοκιμή συγκόλλησης σε δοκιμαστικούς σωλήνες δίνει πιο ακριβή αποτελέσματα, επειδή σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την ποσοτική περιεκτικότητα αντισωμάτων στον ορό (ορίστε τον τίτλο του) και, εάν είναι απαραίτητο, να καταγράψετε το γεγονός της αύξησης του τίτλου αντισωμάτων, που είναι διαγνωστικό αξία. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, ορός αραιωμένος με διάλυμα NaCl 0,85% με ορισμένο τρόπο και ίσο όγκο (συνήθως 0,5 ml) εναιωρήματος τυπικού διαγνωστικού (ή δοκιμαστικής καλλιέργειας) που περιέχει 1 δισεκατομμύριο βακτήρια σε 1 ml εισάγονται σε συγκόλληση. σωλήνες. Ο υπολογισμός των αποτελεσμάτων της αντίδρασης συγκόλλησης πραγματοποιείται προκαταρκτικά μετά από 2 ώρες επώασης των σωλήνων σε θερμοκρασία 37 ° C και τελικά μετά από 20-24 ώρες σύμφωνα με δύο κριτήρια: την παρουσία και το μέγεθος του ιζήματος και τον βαθμό διαφάνεια του υπερκειμένου. Η αξιολόγηση πραγματοποιείται σύμφωνα με το σύστημα τεσσάρων σταυρών. Η αντίδραση συνοδεύεται απαραίτητα από τον έλεγχο ορού και αντιγόνου. Στις περιπτώσεις που χρησιμοποιείται λεπτομερής δοκιμή συγκόλλησης σε δοκιμαστικό σωλήνα για ορολογική ταυτοποίηση του παθογόνου, έχει διαγνωστική αξία εάν η αντίδραση αξιολογηθεί ως θετική όταν ο διαγνωστικός ορός αραιωθεί με τουλάχιστον το ήμισυ του τίτλου του.