Ορολογικές μέθοδοι για τη διάγνωση ιογενών λοιμώξεων. Αναστολή της αιμοσυγκόλλησης. Αναστολή του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος από ιική παρεμβολή. Άμεσος ανοσοφθορισμός. Ανοσοηλεκτρονική μικροσκοπία. Ορολογικές εξετάσεις που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση του HIV

Οι περισσότερες ιογενείς λοιμώξεις αναπτύσσουν ανοσοαποκρίσεις που χρησιμοποιούνται για τη διάγνωση. Οι κυτταρικές αποκρίσεις αξιολογούνται συνήθως σε δοκιμές για την κυτταροτοξικότητα των λεμφοκυττάρων έναντι μολυσματικών παραγόντων ή κυττάρων-στόχων που έχουν μολυνθεί από αυτούς ή προσδιορίζεται η ικανότητα των λεμφοκυττάρων να ανταποκρίνονται σε διάφορα αντιγόνα και μιτογόνα.

Σε πρακτικά εργαστήρια, η σοβαρότητα των κυτταρικών αντιδράσεων σπάνια προσδιορίζεται. Οι μέθοδοι για τον προσδιορισμό των αντιιικών AT έχουν γίνει πιο διαδεδομένες.

RN βασίζεται στην καταστολή της κυτταροπαθογόνου δράσης μετά την ανάμειξη του ιού με ειδική ΑΤ. Ο άγνωστος ιός αναμιγνύεται με γνωστούς εμπορικούς αντιορούς και, μετά από κατάλληλη επώαση, προστίθεται στη μονοστιβάδα του κυττάρου. Η απουσία κυτταρικού θανάτου υποδηλώνει διαφορά μεταξύ του μολυσματικού παράγοντα και των γνωστών ΑΤ.

Αναστολή της αιμοσυγκόλλησης από RTHA χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό ιών που μπορούν να συγκολλήσουν διάφορα ερυθρά αιμοσφαίρια. Για να γίνει αυτό, αναμίξτε το μέσο καλλιέργειας που περιέχει το παθογόνο με έναν γνωστό εμπορικό αντιορό και προσθέστε τον στην κυτταρική καλλιέργεια. Μετά την επώαση, προσδιορίζεται η ικανότητα της καλλιέργειας σε αιμοσυγκόλληση και, ελλείψει αυτής, εξάγεται το συμπέρασμα ότι ο ιός δεν ταιριάζει με τον αντιορό. Αναστολή του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος από παρεμβολή ιού Η αντίδραση αναστολής του κυτταροπαθητικού αποτελέσματος λόγω παρεμβολής ιού χρησιμοποιείται για τον εντοπισμό ενός παθογόνου που παρεμβαίνει σε έναν γνωστό κυτταροπαθογόνο ιό σε μια καλλιέργεια ευαίσθητων κυττάρων. Για να γίνει αυτό, ορός του εμπορίου προστίθεται στο μέσο καλλιέργειας που περιέχει τον ιό που μελετάται (για παράδειγμα, στον ιό της ερυθράς εάν υπάρχει υποψία), επωάζεται και μολύνεται μια δεύτερη καλλιέργεια. μετά από 1-2 ημέρες, ένας γνωστός κυτταροπαθογόνος ιός (για παράδειγμα, οποιοσδήποτε ιός ECHO) εισάγεται σε αυτόν. Εάν υπάρχει κυτταροπαθογόνο αποτέλεσμα, συνάγεται το συμπέρασμα ότι η πρώτη καλλιέργεια είχε μολυνθεί με έναν ιό που αντιστοιχεί στο ΑΤ που χρησιμοποιήθηκε.

Άμεσος ανοσοφθορισμός.

Μεταξύ άλλων δοκιμών, η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη είναι η αντίδραση άμεσου ανοσοφθορισμού (η ταχύτερη, πιο ευαίσθητη και αναπαραγώγιμη). Για παράδειγμα, η αναγνώριση του CMV με κυτταροπαθογόνο δράση απαιτεί τουλάχιστον 2-3 εβδομάδες και όταν χρησιμοποιείται επισημασμένο μονοκλωνικό AT, η ταυτοποίηση είναι δυνατή εντός 24 ωρών. Έχοντας ένα σύνολο τέτοιων αντιδραστηρίων, μπορούν να προστεθούν σε καλλιέργειες μολυσμένες με τον ιό, επωασμένες , ξεπλύθηκε το μη δεσμευμένο αντιδραστήριο και εξετάστηκε με μικροσκοπία φθορισμού (σας επιτρέπει να ανιχνεύσετε την παρουσία φθορισμού σε μολυσμένα κύτταρα).

Ανοσοηλεκτρονική μικροσκοπία (ανάλογα με την προηγούμενη μέθοδο) σας επιτρέπει να προσδιορίσετε διαφορετικούς τύπους ιών που προσδιορίζονται με ηλεκτρονική μικροσκοπία (για παράδειγμα, διαφορετικοί τύποι ιών έρπητα), κάτι που δεν μπορεί να γίνει με βάση μορφολογικά χαρακτηριστικά. Αντί για αντιορούς, τα ΑΤ που έχουν επισημανθεί με διαφορετικούς τρόπους χρησιμοποιούνται για ταυτοποίηση, αλλά η πολυπλοκότητα και το υψηλό κόστος της μεθόδου περιορίζουν τη χρήση της.

Ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων (ΑΤ) στον ορό αίματος. RTGA. RSK. ΥΦΑΛΟΣ.

Μέθοδοι ανοσοπροσρόφησης για την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων.

Μια απλούστερη και πιο προσιτή προσέγγιση είναι η ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων (ΑΤ) στον ορό. Τα δείγματα αίματος πρέπει να συλλέγονται δύο φορές: αμέσως μετά την έναρξη των κλινικών συμπτωμάτων και μετά από 2~3 εβδομάδες. Είναι εξαιρετικά σημαντικό να εξεταστούν ακριβώς δύο δείγματα ορού. Τα αποτελέσματα μιας μόνο μελέτης δεν μπορούν να θεωρηθούν οριστικά λόγω της αδυναμίας σύνδεσης της εμφάνισης ΑΤ με την παρούσα περίπτωση. Είναι πιθανό αυτά τα ΑΤ να κυκλοφορούν μετά από προηγούμενη μόλυνση. Σε μια τέτοια κατάσταση, ο ρόλος της μελέτης ορού που λαμβάνεται κατά την περίοδο της ανάρρωσης δύσκολα μπορεί να υπερεκτιμηθεί. Η παρουσία της νόσου κατά την περίοδο συλλογής του πρώτου δείγματος υποδεικνύεται από μια τουλάχιστον τετραπλάσια αύξηση του τίτλου ΑΤ που ανιχνεύθηκε κατά τη μελέτη του δεύτερου δείγματος.

Οι μέθοδοι που αναφέρονται παρακάτω δεν επιτρέπουν τη διαφοροποίηση των αντισωμάτων (ΑΤ) που σχηματίζονται κατά τη διάρκεια της ασθένειας και κυκλοφορούν μετά την ανάρρωση (η διάρκεια αυτής της περιόδου ποικίλλει για διαφορετικές λοιμώξεις). Δεδομένου ότι για επαρκή διάγνωση είναι απαραίτητο να επιβεβαιωθεί μια αξιόπιστη αύξηση των τίτλων ΑΤ σε δύο δείγματα, το πρώτο δείγμα εξετάζεται στην οξεία φάση και το δεύτερο κατά την περίοδο ανάρρωσης (μετά από 2-3 εβδομάδες). Τα αποτελέσματα που λαμβάνονται είναι αναδρομικού χαρακτήρα και είναι πιο κατάλληλα για τη διεξαγωγή επιδημιολογικών ερευνών. Το RTGA ανιχνεύει ΑΤ που συντίθεται έναντι αιμοσυγκολλητινών ιών (για παράδειγμα, του ιού της γρίπης).

Η μέθοδος καθιστά δυνατή την εύκολη ανίχνευση τέτοιων αντισωμάτων (AT) στον ορό του ασθενούς. Η RSK είναι η κύρια μέθοδος για την οροδιάγνωση των ιογενών λοιμώξεων (μεταξύ των διαθέσιμων). Η αντίδραση ανιχνεύει IgM και IgG στερέωσης συμπληρώματος, αλλά δεν τα διαφοροποιεί. Για τη βελτιστοποίηση των αποτελεσμάτων που λαμβάνονται, η σταδιοποίηση της αντίδρασης απαιτεί ορισμένες δεξιότητες προσωπικού.

ΥΦΑΛΟΣ. Εάν είναι δυνατή η λήψη βιοψίας μολυσμένου ιστού και η διαθεσιμότητα εμπορικών κιτ ΑΤ σημασμένων με φλουορεσκεΐνη, η διάγνωση μπορεί να επιβεβαιωθεί με άμεσο ανοσοφθορισμό.

Η αντίδραση περιλαμβάνει την επώαση του υπό μελέτη ιστού με ΑΤ, την επακόλουθη αφαίρεσή τους και τη μικροσκοπία φθορισμού του δείγματος. Μέθοδοι ανοσοπροσρόφησης για την ανίχνευση αντιιικών αντισωμάτων Οι μέθοδοι ανοσοπροσρόφησης (για παράδειγμα, ELISA και RIA) είναι πιο ενημερωτικές επειδή ανιχνεύουν IgM και IgG ξεχωριστά, γεγονός που επιτρέπει σε κάποιον να συναγάγει ορισμένα συμπεράσματα σχετικά με τη δυναμική της μολυσματικής διαδικασίας ή την κατάσταση της ανάρρωσης. Για την ανίχνευση της ΑΤ, ένα γνωστό αντιγόνο προσροφάται σε ένα στερεό υπόστρωμα (για παράδειγμα, στα τοιχώματα των δοκιμαστικών σωλήνων, πλαστικές μικροπλάκες, τρυβλία Petri) και προστίθενται διάφορες αραιώσεις του ορού του ασθενούς. Μετά την κατάλληλη επώαση, αφαιρείται η μη δεσμευμένη ΑΤ, προστίθεται αντιορός στην ανθρώπινη Ig επισημασμένη με ένα ένζυμο, η διαδικασία επώασης και πλύσης της μη συνδεδεμένης ΑΤ επαναλαμβάνεται και προστίθεται κάποιο χρωμογόνο υπόστρωμα (ευαίσθητο στη δράση του ενζύμου). Δεδομένου ότι η αλλαγή χρώματος είναι ανάλογη με το περιεχόμενο συγκεκριμένου ΑΤ, είναι πολύ πιθανό να προσδιοριστεί ο τίτλος τους φασματοφωτομετρικά. Στη διάγνωση της HIV λοίμωξης, η πιο ευρέως χρησιμοποιούμενη μέθοδος είναι η ανοσοστύπωση.

Ανίχνευση ιικών αντιγόνων (AGs). ELISA. Επί του παρόντος, έχουν ήδη εμφανιστεί εμπορικά κιτ για τον εντοπισμό της υπέρτασης ορισμένων παθογόνων, επιτρέποντάς τους να αναγνωρίζονται μέσα σε 5-10 λεπτά. Για την ανίχνευση AG, τα γνωστά ΑΤ απορροφώνται στη στερεά φάση και προστίθεται ορός που περιέχει AG. Μετά την επώαση, το μη δεσμευμένο AG μεταγγίζεται, το σύστημα πλένεται και προστίθεται σήμανση ΑΤ, ειδικό για ροφημένο ΑΤ. Η διαδικασία επώασης και πλύσης επαναλαμβάνεται, προστίθεται χρωμογόνο υπόστρωμα, καταγράφεται θετικό αποτέλεσμα όταν αλλάξει το χρώμα του συστήματος. Ο υβριδισμός του DNA είναι μια εξαιρετικά ειδική μέθοδος που επιτρέπει την ταυτοποίηση του ιικού γονιδιώματος μετά τον υβριδισμό του με συμπληρωματικά μόρια DNA. Ως δείκτες χρησιμοποιούνται ένζυμα και ισότοπα.

Η μέθοδος προσδιορίζει την ικανότητα του ιικού DNA να υβριδοποιείται με επισημασμένο συμπληρωματικό DNA. η ειδικότητα της μεθόδου είναι ευθέως ανάλογη με το μήκος της συμπληρωματικής αλυσίδας. Η μέθοδος του in situ υβριδισμού νουκλεϊκών οξέων είναι πολλά υποσχόμενη. Για τη ρύθμιση της αντίδρασης, επισημασμένο DNA εφαρμόζεται σε βιοψίες ιστού (συμπεριλαμβανομένων εκείνων που είναι σταθεροποιημένες σε φορμαλίνη ή ενσωματωμένες σε μπλοκ παραφίνης) και καταγράφεται η αλληλεπίδραση με το συμπληρωματικό DNA. Η μέθοδος χρησιμοποιείται για την ανίχνευση ιών απλού έρπητα, ανθρώπινων θηλωμάτων, Epstein-Barr κ.λπ.

PCR. Η μέθοδος αυξάνει σημαντικά την ευαισθησία της μεθόδου υβριδισμού, αυξάνοντας την περιεκτικότητα σε ιικό DNA στο υλικό που λαμβάνεται από τον ασθενή και επίσης επιταχύνει το χρόνο λήψης αποτελεσμάτων.

Ανίχνευση στον ορόΗ παρουσία αντισωμάτων έναντι των παθογόνων αντιγόνων επιτρέπει τη διάγνωση της νόσου. Χρησιμοποιούνται επίσης ορολογικές μελέτες για τον εντοπισμό μικροβιακών αντιγόνων, διαφόρων βιολογικά ενεργών ουσιών, ομάδων αίματος, αντιγόνων ιστών και όγκων, ανοσοσυμπλεγμάτων, κυτταρικών υποδοχέων κ.λπ.

Όταν ένα μικρόβιο απομονώνεταιΤο παθογόνο αναγνωρίζεται από τον ασθενή μελετώντας τις αντιγονικές του ιδιότητες χρησιμοποιώντας ανοσοδιαγνωστικούς ορούς, δηλαδή ορούς αίματος υπερανοσοποιημένων ζώων που περιέχουν ειδικά αντισώματα. Αυτό είναι το λεγόμενο ορολογική ταυτοποίησημικροοργανισμών.

Χρησιμοποιείται ευρέως στη μικροβιολογία και την ανοσολογίααντιδράσεις συγκόλλησης, κατακρήμνιση, εξουδετέρωση, αντιδράσεις που περιλαμβάνουν συμπλήρωμα, χρησιμοποιώντας επισημασμένα αντισώματα και αντιγόνα (ραδιοανοσολογική, ενζυμική ανοσοδοκιμασία, μέθοδοι ανοσοφθορισμού). Οι αντιδράσεις που αναφέρονται διαφέρουν ως προς το καταχωρημένο αποτέλεσμα και την τεχνική παραγωγής, ωστόσο, όλες βασίζονται στην αντίδραση αλληλεπίδρασης ενός αντιγόνου με ένα αντίσωμα και χρησιμοποιούνται για την ανίχνευση τόσο αντισωμάτων όσο και αντιγόνων. Οι ανοσολογικές αντιδράσεις χαρακτηρίζονται από υψηλή ευαισθησία και ειδικότητα.

Χαρακτηριστικά της αλληλεπίδρασης αντισωμάτων με αντιγόνααποτελούν τη βάση των διαγνωστικών αντιδράσεων στα εργαστήρια. Αντίδραση in vitroμεταξύ αντιγόνου και αντισώματος αποτελείται από μια ειδική και μη ειδική φάση. ΣΕ συγκεκριμένη φάσηλαμβάνει χώρα ταχεία ειδική δέσμευση του ενεργού κέντρου του αντισώματος στον καθοριστή αντιγόνου. Μετά έρχεται μη ειδική φάση -πιο αργή, η οποία εκδηλώνεται με ορατά φυσικά φαινόμενα, για παράδειγμα σχηματισμό κροκίδων (φαινόμενο συγκόλλησης) ή ίζημα με τη μορφή θολότητας. Αυτή η φάση απαιτεί την παρουσία ορισμένων συνθηκών (ηλεκτρολύτες, βέλτιστο pH του περιβάλλοντος).

Η δέσμευση του καθοριστή αντιγόνου (επίτοπος) στο ενεργό κέντρο του θραύσματος Fab των αντισωμάτων οφείλεται σε δυνάμεις van der Waals, δεσμούς υδρογόνου και υδρόφοβη αλληλεπίδραση. Η ισχύς και η ποσότητα του αντιγόνου που δεσμεύεται από τα αντισώματα εξαρτώνται από τη συγγένεια, την απληστία των αντισωμάτων και το σθένος τους.

Στην ερώτηση σχετικά με τα express διαγνωστικά:

1. Μπορεί να διαγνωστεί μια καλλιέργεια που απομονώνεται στην καθαρή της μορφή.
2. Σε ειδικά εξοπλισμένα εργαστήρια (πρέπει να υπάρχει άδεια)
3. Τήρηση αυστηρών κανόνων όπως: απομονωμένος χώρος, απαιτούμενες ειδικές προστατευτικές στολές, υποχρεωτική πλήρης υγειονομική επεξεργασία του δωματίου μετά την εργασία με το παθογόνο, υγειονομική περίθαλψη ερευνητών μετά την ολοκλήρωση της εργασίας.

Μέθοδοι διάγνωσης ειδικών.
1. Βακτηριολογία - συνδυασμένα πολυτροπικά θρεπτικά μέσα για γρήγορη μελέτη μορφών, βαφής, βιοχημικών. ιδιότητες. Χρήση ενζυμικής ταινίας ένδειξης, ηλεκτροφυσική μέθοδος, μέθοδος χάρτινων δίσκων εμποτισμένων σε διάφορες ουσίες (γλυκόζη, λακτόζη κ.λπ.)
2. Διαγνωστικά φάγων.
3. Οροδιάγνωση - Μέθοδος Mancini, καθίζηση σε γέλη κατά Ascoli, RA, RPGA.
4. Βακτηριοσκόπηση - άμεση και έμμεση RIF.

Εξπρές διαγνωστικές μέθοδοι για:
Χολέρα - M.Z. Ermolyeva, σταθμός ακινητοποίησης με διαγνωστικό ορό χολέρας, RIF.
Tularemia - RA σε γυαλί, RPGA
Chume - τυποποίηση φάγου, μέθοδος χάρτινου δίσκου υδατάνθρακα, RPGA.
Έλκος κόλπων - Μέθοδος Ascoli, RIF, RPGA.

Μοτίβο ανάπτυξης: υπάρχουν τρία από αυτά: διάχυτα (προαιρετικά αναερόβια), κάτω (υποχρεωτικά αναερόβια) και επιφάνεια (υποχρεωτικά αερόβια.)

Απομόνωση καθαρής καλλιέργειας αναερόβιων βακτηρίων

Στην εργαστηριακή πρακτική, θα πρέπει συχνά να εργαστείτε με αναερόβιους μικροοργανισμούς. Είναι πιο απαιτητικά σε θρεπτικά μέσα από τα αερόβια, απαιτούν συχνότερα ειδικά πρόσθετα ανάπτυξης, απαιτούν τη διακοπή της πρόσβασης σε οξυγόνο κατά την καλλιέργειά τους και η διάρκεια ανάπτυξής τους είναι μεγαλύτερη. Επομένως, η εργασία με αυτά είναι πιο περίπλοκη και απαιτεί σημαντική προσοχή από βακτηριολόγους και τεχνικούς εργαστηρίου.

Είναι σημαντικό να προστατεύεται το υλικό που περιέχει αναερόβια παθογόνα από τις τοξικές επιδράσεις του ατμοσφαιρικού οξυγόνου. Επομένως, συνιστάται η λήψη υλικού από εστίες πυώδους μόλυνσης κατά τη διάρκεια της παρακέντησης με χρήση σύριγγας· ο χρόνος μεταξύ της λήψης του υλικού και του εμβολιασμού του σε θρεπτικό μέσο πρέπει να είναι όσο το δυνατόν μικρότερος.

Δεδομένου ότι χρησιμοποιούνται ειδικά θρεπτικά μέσα για την καλλιέργεια αναερόβιων βακτηρίων, τα οποία δεν πρέπει να περιέχουν οξυγόνο και έχουν χαμηλό δυναμικό οξειδοαναγωγής (-20 -150 mV), προστίθενται δείκτες στη σύνθεσή τους - ρεσαζουρίνη, μπλε του μεθυλενίου κ.λπ., που αντιδρούν σε μια αλλαγή σε αυτό το δυναμικό. Καθώς μεγαλώνει, οι άχρωμες μορφές των δεικτών αποκαθίστανται και αλλάζουν το χρώμα τους: η ρεσαζουρίνη μετατρέπει το μεσαίο ροζ και το μπλε του μεθυλενίου το μεσαίο μπλε. Τέτοιες αλλαγές υποδηλώνουν την αδυναμία χρήσης μέσων για την καλλιέργεια αναερόβιων μικροβίων.

Η εισαγωγή τουλάχιστον 0,05% άγαρ στο μέσο συμβάλλει στη μείωση του δυναμικού οξειδοαναγωγής, το οποίο, αυξάνοντας το ιξώδες του, βοηθά στη μείωση της παροχής οξυγόνου. Αυτό, με τη σειρά του, επιτυγχάνεται επίσης με τη χρήση φρέσκων (το αργότερο δύο ώρες μετά την παραγωγή) και μειωμένων θρεπτικών μέσων.

Θα πρέπει να ληφθεί υπόψη ότι λόγω των ιδιαιτεροτήτων του ζυμωτικού τύπου μεταβολισμού των αναερόβιων βακτηρίων απαιτούν περιβάλλοντα πλουσιότερα σε θρεπτικά συστατικά και βιταμίνες. Τα πιο συχνά χρησιμοποιούμενα είναι εγχύματα καρδιάς-εγκεφάλου και συκωτιού, εκχυλίσματα σόγιας και ζύμης, υδρολυτική πέψη καζεΐνης, πεπτόνη, τρυπτόνη. Είναι υποχρεωτική η προσθήκη αυξητικών παραγόντων όπως Tween-80, αιμίνη, μεναδιόνη, πλήρες ή αιμολυμένο αίμα.

Η απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας αερόβιων μικροοργανισμών αποτελείται από διάφορα στάδια.
Την πρώτη ημέρα (στάδιο 1 της μελέτης), το παθολογικό υλικό εισάγεται σε αποστειρωμένο δοχείο (δοκιμαστικός σωλήνας, φιάλη, φιάλη). Μελετάται για την εμφάνιση, τη συνοχή, το χρώμα, την οσμή και άλλα χαρακτηριστικά του, παρασκευάζεται επίχρισμα, βάφεται και εξετάζεται σε μικροσκόπιο. Σε ορισμένες περιπτώσεις (οξεία γονόρροια, πανώλη), σε αυτό το στάδιο είναι δυνατό να γίνει προηγούμενη διάγνωση και επιπλέον να επιλέξετε τα μέσα στα οποία θα εμβολιαστεί το υλικό. Η κατάληψη πραγματοποιείται με βακτηριολογικό βρόχο (που χρησιμοποιείται πιο συχνά), χρησιμοποιώντας σπάτουλα με τη μέθοδο Drigalsky και μπατονέτα από βαμβάκι-γάζα. Τα κύπελλα κλείνονται, αναποδογυρίζονται, υπογράφονται με ειδικό μολύβι και τοποθετούνται σε θερμοστάτη στη βέλτιστη θερμοκρασία (37 ° C) για 18-48 χρόνια. Ο σκοπός αυτού του σταδίου είναι να ληφθούν απομονωμένες αποικίες μικροοργανισμών.
Ωστόσο, μερικές φορές, για να συσσωρευτεί υλικό, σπέρνεται σε υγρά θρεπτικά μέσα.

Παρασκευάζονται επιχρίσματα από ύποπτες αποικίες, που χρωματίζονται με τη μέθοδο Gram για τη μελέτη των μορφολογικών και χρωματικών ιδιοτήτων των παθογόνων και εξετάζονται κινητά βακτήρια σε μια «κρεμασμένη» ή «θρυμματισμένη» σταγόνα. Αυτά τα σημάδια έχουν εξαιρετικά μεγάλη διαγνωστική αξία όταν χαρακτηρίζονται ορισμένοι τύποι μικροοργανισμών.
Τα υπολείμματα των υπό μελέτη αποικιών αφαιρούνται προσεκτικά από την επιφάνεια του μέσου χωρίς να αγγίξουν άλλα και εμβολιάζονται σε κεκλιμένες πλευρές άγαρ ή σε τομείς ενός τρυβλίου Petri με θρεπτικό μέσο για να ληφθεί μια καθαρή καλλιέργεια. Οι δοκιμαστικοί σωλήνες ή τα πιάτα με καλλιέργειες τοποθετούνται σε θερμοστάτη στη βέλτιστη θερμοκρασία για 18-24 ώρες.

Τα βακτήρια μπορούν επίσης να αναπτυχθούν διαφορετικά σε υγρά θρεπτικά μέσα, αν και τα χαρακτηριστικά των εκδηλώσεων ανάπτυξης είναι φτωχότερα από ότι στα στερεά μέσα.

Τα βακτήρια είναι ικανά να προκαλέσουν διάχυτη θολότητα του μέσου, το χρώμα του μπορεί να μην αλλάξει ή να αποκτήσει το χρώμα μιας χρωστικής. Αυτό το μοτίβο ανάπτυξης παρατηρείται συχνότερα στους περισσότερους προαιρετικούς αναερόβιους μικροοργανισμούς.

Μερικές φορές σχηματίζεται ένα ίζημα στον πυθμένα του δοκιμαστικού σωλήνα. Μπορεί να είναι εύθρυπτο, ομοιογενές, παχύρρευστο, βλεννώδες κ.λπ. Το μέσο από πάνω του μπορεί να παραμείνει διαφανές ή να γίνει θολό. Εάν τα μικρόβια δεν σχηματίζουν χρωστική ουσία, το ίζημα έχει μπλε-μπλε ή κιτρινωπό χρώμα. Κατά κανόνα, τα αναερόβια βακτήρια αναπτύσσονται με παρόμοιο τρόπο.

Η βρεγματική ανάπτυξη εκδηλώνεται με το σχηματισμό νιφάδων και κόκκων που συνδέονται στα εσωτερικά τοιχώματα του δοκιμαστικού σωλήνα. Το μέσο παραμένει διαφανές.

Τα αερόβια βακτήρια τείνουν να αναπτύσσονται επιφανειακά. Μια λεπτή, άχρωμη ή μπλε μεμβράνη σχηματίζεται συχνά με τη μορφή μιας ελάχιστα αισθητής επίστρωσης στην επιφάνεια, η οποία εξαφανίζεται όταν το μέσο ανακινείται ή ανακινείται. Η μεμβράνη μπορεί να είναι υγρή, παχιά, να έχει κολλώδη, γλοιώδη υφή και να κολλάει στη θηλιά, τραβώντας πίσω της. Ωστόσο, υπάρχει επίσης ένα πυκνό, ξηρό, εύθραυστο φιλμ, το χρώμα του οποίου εξαρτάται από τη χρωστική ουσία που παράγουν οι μικροοργανισμοί.

Εάν είναι απαραίτητο, γίνεται ένα επίχρισμα, χρωματίζεται, εξετάζεται στο μικροσκόπιο και οι μικροοργανισμοί εμβολιάζονται με βρόχο στην επιφάνεια ενός στερεού θρεπτικού μέσου για να ληφθούν απομονωμένες αποικίες.

Την τρίτη ημέρα (στάδιο 3 της μελέτης), μελετάται το πρότυπο ανάπτυξης μιας καθαρής καλλιέργειας μικροοργανισμών και πραγματοποιείται η ταυτοποίησή του.

Αρχικά, δίνουν προσοχή στα χαρακτηριστικά της ανάπτυξης μικροοργανισμών στο μέσο και κάνουν ένα επίχρισμα, βάφοντάς το με τη μέθοδο Gram, προκειμένου να ελέγξουν την καθαρότητα της καλλιέργειας. Εάν παρατηρηθούν βακτήρια ίδιου τύπου μορφολογίας, μεγέθους και ιδιοτήτων βαφής (ικανότητα βαφής) στο μικροσκόπιο, συμπεραίνεται ότι η καλλιέργεια είναι καθαρή. Σε ορισμένες περιπτώσεις, με βάση την εμφάνιση και τα χαρακτηριστικά της ανάπτυξής τους, μπορεί κανείς να βγάλει ένα συμπέρασμα σχετικά με τον τύπο των παθογόνων που απομονώνονται. Ο προσδιορισμός του είδους των βακτηρίων με βάση τα μορφολογικά χαρακτηριστικά τους ονομάζεται μορφολογική ταυτοποίηση. Ο προσδιορισμός του τύπου του παθογόνου με βάση τα πολιτισμικά του χαρακτηριστικά ονομάζεται πολιτισμική ταυτοποίηση.

Ωστόσο, αυτές οι μελέτες δεν επαρκούν για να βγάλουμε ένα τελικό συμπέρασμα σχετικά με τον τύπο των μικροβίων που απομονώνονται. Επομένως, μελετώνται οι βιοχημικές ιδιότητες των βακτηρίων. Είναι αρκετά διαφορετικοί.

Τις περισσότερες φορές, μελετώνται σακχαρολυτικές, πρωτεολυτικές, πεπτολυτικές, αιμολυτικές ιδιότητες, ο σχηματισμός ενζύμων αποκαρβοξυλάσης, οξειδάσης, καταλάσης, πλασμακοαγουλάσης, DNase, ινωδολυσίνης, η αναγωγή νιτρικών σε νιτρώδη και παρόμοια. Για το σκοπό αυτό, υπάρχουν ειδικά θρεπτικά μέσα που ενοφθαλμίζονται με μικροοργανισμούς (διαφοροποιημένη σειρά Hiss, MPB, πηγμένο ορό γάλακτος, γάλα κ.λπ.).

Ο προσδιορισμός του τύπου του παθογόνου με βάση τις βιοχημικές του ιδιότητες ονομάζεται βιοχημική ταυτοποίηση.

ΜΕΘΟΔΟΙ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ
ΚΑΙ ΑΠΟΜΟΝΩΣΗ ΑΓΝΗΣ ΚΑΛΛΙΕΡΓΕΙΑΣ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ

Για επιτυχή καλλιέργεια, εκτός από τα σωστά επιλεγμένα μέσα και τους σωστά σπαρμένους σπόρους, απαιτούνται βέλτιστες συνθήκες: θερμοκρασία, υγρασία, αερισμός (παροχή αέρα). Η καλλιέργεια αναερόβιων είναι πιο δύσκολη από τα αερόβια· χρησιμοποιούνται διάφορες μέθοδοι για την απομάκρυνση του αέρα από το θρεπτικό μέσο.
Η απομόνωση μεμονωμένων τύπων βακτηρίων (καθαρή καλλιέργεια) από το υλικό δοκιμής, το οποίο συνήθως περιέχει μείγμα διαφόρων μικροοργανισμών, είναι ένα από τα στάδια κάθε βακτηριολογικής μελέτης. Μια καθαρή καλλιέργεια μικροβίων λαμβάνεται από μια απομονωμένη μικροβιακή αποικία.
Κατά την απομόνωση μιας καθαρής καλλιέργειας από το αίμα (αιμοκαλλιέργεια), αυτή πρώτα «αναπτύσσεται» σε υγρό μέσο: 10-15 ml στείρα ληφθέντος αίματος εμβολιάζονται σε 100-150 ml υγρού μέσου. Η αναλογία του εμβολιασμένου αίματος προς το θρεπτικό μέσο 1:10 δεν είναι τυχαία - έτσι επιτυγχάνεται η αραίωση του αίματος (το μη αραιωμένο αίμα έχει επιζήμια επίδραση στους μικροοργανισμούς).
Στάδια απομόνωσης καθαρής καλλιέργειας βακτηρίων
Στάδιο Ι (εγγενές υλικό)
Μικροσκόπηση (κατά προσέγγιση ιδέα της μικροχλωρίδας).
Σπορά σε στερεά θρεπτικά μέσα (λήψη αποικιών).
Στάδιο II (απομονωμένες αποικίες)
Μελέτη αποικιών (πολιτιστικές ιδιότητες βακτηρίων).
Μικροσκοπική εξέταση μικροβίων σε λεκιασμένο επίχρισμα
(μορφολογικές ιδιότητες βακτηρίων).
Σπορά σε κλίση θρεπτικού άγαρ για να απομονωθεί μια καθαρή καλλιέργεια.
Στάδιο III (καθαρή καλλιέργεια)
Προσδιορισμός πολιτισμικών, μορφολογικών, βιοχημικών
και άλλες ιδιότητες για την αναγνώριση βακτηριακών καλλιεργειών
ΑΝΑΓΝΩΡΙΣΗ ΒΑΚΤΗΡΙΩΝ

Η αναγνώριση απομονωμένων βακτηριακών καλλιεργειών πραγματοποιείται με τη μελέτη της μορφολογίας των βακτηρίων, των πολιτισμικών, βιοχημικών και άλλων χαρακτηριστικών τους που είναι εγγενή σε κάθε είδος.

Σχετική πληροφορία.

Αντιγόνα– Γενετικά ξένες ουσίες που, όταν εισάγονται στο σώμα του ζώου ή του ανθρώπου, προκαλούν ειδική ανοσολογική απόκριση - σύνθεση αντισωμάτων, σχηματισμός ευαισθητοποιημένων Τ-λεμφοκυττάρων, ανοσολογική μνήμη ή ανοχή. Οι ξένες ουσίες αναφέρονται σε χημικές δομές που δεν υπάρχουν στο σώμα. Ξένοι για το ανθρώπινο σώμα είναι ιοί, μικροοργανισμοί, καθώς και κύτταρα, ιστοί, όργανα ζώων και άλλων ανθρώπων. Τα αντιγόνα έχουν αρκετούς υποδοχείς για την επικοινωνία με τα αντισώματα και είναι σε θέση να αντιδρούν μαζί τους τόσο στο σώμα του ζώου ή του ανθρώπου (in vivo) όσο και έξω από το σώμα - in vitro (in vitro).

Αντισώματα- πρωτεΐνες υψηλού μοριακού βάρους του κλάσματος σφαιρίνης του ορού αίματος. Τα αντισώματα συντίθενται υπό την επίδραση ενός αντιγόνου και είναι σε θέση να αντιδράσουν (συνδυάζονται) ειδικά με το αντίστοιχο αντιγόνο. Όλα τα αντισώματα έχουν τη χαρακτηριστική δομή των ανοσοσφαιρινών. διαφέρουν ως προς τις ανοσολογικές, βιολογικές και φυσικές ιδιότητες. και χωρίζονται σε 5 κατηγορίες - IgG, IgA, IgM, IgD και IgE.

Ορολογικές αντιδράσεις

Στην εργαστηριακή πρακτική χρησιμοποιούν ορολογικές αντιδράσεις- εργαστηριακές αντιδράσεις μεταξύ αντιγόνων και αντισωμάτων που οδηγούν σε ανιχνεύσιμες αλλαγές στο υπό μελέτη σύστημα. Αυτές οι αντιδράσεις ονομάζονται ορολογικές, αφού πραγματοποιούνται με χρήση ορού (ορού) που περιέχει αντισώματα.

Οι ορολογικές εξετάσεις που πραγματοποιούνται για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων και αντιγόνων παθογόνων σε μολυσματικές ασθένειες είναι πιο προσιτές εργαστηριακές διαγνωστικές μέθοδοι από τη βακτηριολογική ανίχνευση του παθογόνου. Σε ορισμένες περιπτώσεις, οι ορολογικές εξετάσεις παραμένουν η μόνη μέθοδος για τη διάγνωση μολυσματικών ασθενειών.

Ορισμένες μέθοδοι για τον προσδιορισμό των αντισωμάτων που χρησιμοποιούνται στην εργαστηριακή πρακτική

Όλες οι ορολογικές αντιδράσεις βασίζονται στην αλληλεπίδραση αντιγόνου και αντισώματος με το σχηματισμό ανοσοσυμπλεγμάτων, τα οποία μπορούν να ανιχνευθούν σε δοκιμές in vitro (δηλαδή «in vitro» - έξω από ζωντανό οργανισμό). Οι αντιδράσεις αντιγόνου-αντισώματος σε ένα σύστημα in vitro μπορεί να συνοδεύονται από την εμφάνιση πολλών φαινομένων - συγκόλληση, καθίζηση, λύση και άλλα. Οι εξωτερικές εκδηλώσεις της αντίδρασης εξαρτώνται από τις φυσικοχημικές ιδιότητες του αντιγόνου (μέγεθος σωματιδίων, φυσική κατάσταση), την κατηγορία και τον τύπο των αντισωμάτων, καθώς και από τις πειραματικές συνθήκες (μέση σύσταση, συγκέντρωση άλατος, pH, θερμοκρασία).

1. Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος

Συμπλήρωμαείναι ένα σύστημα πρωτεϊνών του πλάσματος του αίματος, το οποίο περιλαμβάνει 9 συστατικά που υποδεικνύονται με το γράμμα C (C1, C2, C3,... C9), παράγοντα Β, παράγοντα D και έναν αριθμό ρυθμιστικών πρωτεϊνών. Μερικά από αυτά τα συστατικά αποτελούνται από 2 - 3 πρωτεΐνες, για παράδειγμα το C1 είναι ένα σύμπλεγμα τριών πρωτεϊνών. Αυτές οι πρωτεΐνες κυκλοφορούν στην κυκλοφορία του αίματος και υπάρχουν στις κυτταρικές μεμβράνες. Το συμπλήρωμα είναι το πιο σημαντικό σύστημα τόσο της έμφυτης όσο και της επίκτητης ανοσίας. Αυτό το σύστημα έχει σχεδιαστεί για να προστατεύει τον οργανισμό από τη δράση ξένων παραγόντων και συμμετέχει στην υλοποίηση της ανοσολογικής απόκρισης του οργανισμού. Το συμπλήρωμα ανακαλύφθηκε στα τέλη του 19ου αιώνα από τον Βέλγο επιστήμονα J. Bordet.

Αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (CFR)– ορολογική αντίδραση που χρησιμοποιείται για τον ποσοτικό προσδιορισμό αντισωμάτων και αντιγόνων που δεσμεύουν το συμπλήρωμα. Περιγράφηκε για πρώτη φορά από τους Bordet και Gengou το 1901. Το RSC βασίζεται στο γεγονός ότι το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος είναι ικανό να απορροφά συμπλήρωμα, το οποίο προστίθεται στο μίγμα της αντίδρασης. Όταν τα αντιγόνα και τα αντισώματα αντιστοιχούν μεταξύ τους, σχηματίζουν ένα ανοσοποιητικό σύμπλεγμα στο οποίο προσκολλάται το συμπλήρωμα. Ένα συγκεκριμένο ανοσοσύμπλεγμα προσροφά συμπλήρωμα που προστίθεται στο σύστημα, δηλ. Το συμπλήρωμα δεσμεύεται από το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος. Όσο περισσότερα αντισώματα, τόσο περισσότερο συμπλήρωμα στερεώνεται. Εάν το σύμπλεγμα αντιγόνου-αντισώματος δεν σχηματιστεί, τότε το συμπλήρωμα παραμένει ελεύθερο.

Η πολυπλοκότητα του RSC είναι ότι η αντίδραση σχηματισμού του συμπλόκου αντιγόνου-αντισώματος-συμπληρώματος είναι αόρατη. Για την αναγνώριση των συστατικών της αντίδρασης, χρησιμοποιείται ένα πρόσθετο σύστημα αιμολυτικού δείκτη. Χρησιμοποιώντας την αντίδραση αιμόλυσης, πραγματοποιείται ποσοτικός προσδιορισμός του υπολείμματος του συμπληρώματος μετά το τέλος της αντίδρασης του αντιγόνου με τον αντιορό.

Η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (CFR) χρησιμοποιείται για την ανίχνευση αντισωμάτων σε ένα συγκεκριμένο αντιγόνο ή για τον προσδιορισμό του τύπου του αντιγόνου χρησιμοποιώντας ένα γνωστό αντίσωμα. Αυτή η πολύπλοκη ορολογική αντίδραση περιλαμβάνει δύο συστήματα και συμπλήρωμα. Το πρώτο σύστημα είναι βακτηριολογικό (βασικό), αποτελείται από ένα αντιγόνο και ένα αντίσωμα. Το δεύτερο σύστημα είναι αιμολυτικό (δείκτης). Περιλαμβάνει ερυθρά αιμοσφαίρια προβάτου (αντιγόνο) και τον αντίστοιχο αιμολυτικό ορό (αντίσωμα).

Το RSC χορηγείται σε δύο στάδια: πρώτα, το αντιγόνο συνδυάζεται με τον δοκιμαστικό ορό αίματος, στον οποίο αναζητούνται τα αντισώματα και στη συνέχεια προστίθεται συμπλήρωμα. Εάν το αντιγόνο και το αντίσωμα ταιριάζουν μεταξύ τους, σχηματίζεται ένα ανοσοσύμπλεγμα που δεσμεύει το συμπλήρωμα. Σε περίπτωση απουσίας αντισωμάτων στον ορό, το ανοσοποιητικό σύμπλεγμα δεν σχηματίζεται και το συμπλήρωμα παραμένει ελεύθερο. Δεδομένου ότι η διαδικασία της προσρόφησης του συμπληρώματος από το σύμπλεγμα είναι οπτικά αόρατη, προστίθεται ένα σύστημα αίμης για την αναγνώριση αυτής της διαδικασίας.

Λόγω της υψηλής ευαισθησίας του, η αντίδραση στερέωσης συμπληρώματος (CFR) χρησιμοποιείται τόσο για την ορολογική διάγνωση βακτηριακών και ιογενών λοιμώξεων, αλλεργικών καταστάσεων, όσο και για την ταυτοποίηση αντιγόνων (απομονωμένη βακτηριακή καλλιέργεια).

Αντίδραση καθίζησης (RP)(από το λατινικό praecipitatio - κατακρήμνιση, πτώση) βασίζεται στην κατακρήμνιση ενός συγκεκριμένου ανοσοσυμπλέγματος που αποτελείται από ένα διαλυτό αντιγόνο και ένα συγκεκριμένο αντίσωμα παρουσία ηλεκτρολύτη. Ως αποτέλεσμα της αντίδρασης, σχηματίζεται ένας θολός δακτύλιος ή χαλαρό ίζημα - ένα ίζημα. Μια αντίδραση καθίζησης συμβαίνει μεταξύ ενός υδατοδιαλυτού αντιγόνου και ενός αντισώματος, με αποτέλεσμα μεγάλα σύμπλοκα που καθιζάνουν

3. Αντίδραση κροκίδωσης

Αντίδραση κροκίδωσης (σύμφωνα με τον Ramon)(από το λατινικό floccus - νιφάδες μαλλί, κροκίδες - τεμάχια, νιφάδες· κροκίδωση - σχηματισμός χαλαρών κροκιδωδών συσσωματωμάτων (κροκιδώσεις) από μικρά σωματίδια της διασκορπισμένης φάσης) - εμφάνιση ωχρότητας ή κροκιδωτής μάζας (ανοσοκαθίζηση) σε δοκιμαστικό σωλήνα κατά τη διάρκεια της αντίδραση τοξίνη - αντιτοξίνη ή τοξοειδές - αντιτοξίνη. Χρησιμοποιείται για τον προσδιορισμό της δραστηριότητας αντιτοξικού ορού ή τοξοειδούς.

Η αντίδραση κροκίδωσης βασίζεται στην ανίχνευση «αρχικής» κροκίδωσης - θολότητας κατά τον σχηματισμό συμπλόκου εξωτοξίνης (ανατοξίνης) + αντιτοξίνης σε βέλτιστες ποσοτικές αναλογίες συστατικών.

4. Αντίδραση συγκόλλησης

Συγκόλληση(από το λατινικό agglutinatio - κόλληση) είναι μια αντίδραση αλληλεπίδρασης μεταξύ ενός αντιγόνου και ενός συγκεκριμένου αντισώματος, η οποία εκδηλώνεται με τη μορφή κόλλησης. Σε αυτή την περίπτωση, τα αντιγόνα με τη μορφή σωματιδίων-σωμάτιων (μικροβιακά κύτταρα, ερυθρά αιμοσφαίρια κ.λπ.) κολλώνται μεταξύ τους με αντισώματα και κατακρημνίζονται (συγκολλούνται) με τη μορφή νιφάδων. Τα συσσωματώματα είναι συνήθως ορατά με γυμνό μάτι. Για να συμβεί η αντίδραση, είναι απαραίτητη η παρουσία ηλεκτρολυτών (για παράδειγμα, ισοτονικού διαλύματος χλωριούχου νατρίου), οι οποίοι επιταχύνουν τη διαδικασία συγκόλλησης.

Χρησιμοποιώντας την αντίδραση συγκόλλησης (RA), ανιχνεύονται reactio agglutinationis (αγγλική δοκιμή συγκόλλησης), αντισώματα ή σωματιδιακά αντιγόνα. Ανάλογα με τον τύπο του ανοσοδιαγνωστικού που χρησιμοποιείται, διακρίνονται οι αντιδράσεις μικροβιακής συγκόλλησης, αιμοσυγκόλλησης, λατεξοσυγκόλλησης, πήξης κ.λπ.

5. Ονομασία αντισωμάτων που εμπλέκονται στις αντιδράσεις καθίζησης

Τα αντισώματα που εμπλέκονται στις αντιδράσεις καθίζησης ονομάζονται παραδοσιακά από την αλληλεπίδρασή τους με το αντιγόνο:

συγκολλητίνες - προκαλούν κόλληση του σωματικού αντιγόνου - συγκολλητογόνο και καθίζηση του συμπλέγματος αντιγόνου - αντισώματος (συγκολλητίνη).

ιζήματα - σχηματίζουν ένα ίζημα με ένα διαλυτό αντιγόνο - ιζηματογόνο.

Οι βακτηριολυσίνες (προκαλούν τη λύση των βακτηρίων) και οι αιμολυσίνες (προκαλούν τη λύση των ερυθρών αιμοσφαιρίων) συμμετέχουν στις αντιδράσεις λύσης.

Ανοσολογικές αντιδράσειςχρησιμοποιείται σε διαγνωστικές και ανοσολογικές μελέτες σε ασθενείς και υγιείς ανθρώπους. Για το σκοπό αυτό χρησιμοποιούν ορολογικές μεθόδους , δηλαδή, μέθοδοι για τη μελέτη αντισωμάτων και αντιγόνων χρησιμοποιώντας αντιδράσεις αντιγόνου-αντισώματος που προσδιορίζονται στον ορό του αίματος και άλλα υγρά, καθώς και στους ιστούς του σώματος.

Ανοσοανεπάρκειες, πρωτοπαθείς και ιδιαίτερα δευτεροπαθείς, είναι ευρέως διαδεδομένα μεταξύ των ανθρώπων. Είναι η αιτία πολλών ασθενειών και παθολογικών καταστάσεων, και ως εκ τούτου απαιτούν πρόληψη και θεραπεία με τη βοήθεια ανοσοτροπικών φαρμάκων.

34. Αδρανοποιημένα (ιδιαίτερα) εμβόλια. Παραλαβή. Εφαρμογή. Πλεονεκτήματα. Ελαττώματα.

Αδρανοποιημένα (θανατωμένα, σωματιδιακά ή μοριακά) εμβόλια– παρασκευάσματα που ως ενεργό συστατικό περιλαμβάνουν καλλιέργειες παθογόνων ιών ή βακτηρίων που θανατώνονται με χημική ή φυσική μέθοδο (κυτταρικά, ιοσωμάτια) ή σύμπλοκα αντιγόνων που εξάγονται από παθογόνα μικρόβια που περιέχουν προστατευτικά αντιγόνα (υποκυτταρικά, υποβιοτικά εμβόλια).

Για την απομόνωση αντιγονικών συμπλεγμάτων (γλυκοπρωτεΐνες, LPS, πρωτεΐνες) από βακτήρια και ιούς, χρησιμοποιούνται τριχλωροξικό οξύ, φαινόλη, ένζυμα και ισοηλεκτρική κατακρήμνιση.

Λαμβάνονται από την ανάπτυξη παθογόνων βακτηρίων και ιών σε τεχνητά θρεπτικά μέσα, την αδρανοποίησή τους, την απομόνωση αντιγονικών συμπλεγμάτων, τον καθαρισμό τους και την κατασκευή τους με τη μορφή υγρού ή λυόφιλου παρασκευάσματος.

Το πλεονέκτημα αυτού του τύπου εμβολίου είναι η σχετική ευκολία παραγωγής του (δεν απαιτείται μακροχρόνια μελέτη και απομόνωση στελεχών). Τα μειονεκτήματα περιλαμβάνουν τη χαμηλή ανοσογονικότητα, την ανάγκη για τρεις φορές χρήση και την υψηλή αντιδραστικότητα των επίσημων εμβολίων. Επίσης, σε σύγκριση με τα ζωντανά εμβόλια, η ανοσία που παράγουν δεν διαρκεί πολύ.

Επί του παρόντος χρησιμοποιούνται τα ακόλουθα σκοτωμένα εμβόλια: τυφοειδής, εμπλουτισμένος με αντιγόνο Vi. εμβόλιο χολέρας, εμβόλιο κοκκύτη.

Οι μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης ιογενών λοιμώξεων χωρίζονται σε πολλές μεγάλες ομάδες.

- Άμεσες μέθοδοι, που συνίστανται στην ταυτοποίηση του ίδιου του ιού ή των αντισωμάτων σε αυτόν απευθείας σε βιολογικό υλικό.

- Οι έμμεσες μέθοδοι περιλαμβάνουν την τεχνητή παραγωγή του ιού σε σημαντικές ποσότητες και την περαιτέρω ανάλυσή του.

Οι πιο σχετικές διαγνωστικές μέθοδοι στην καθημερινή πρακτική περιλαμβάνουν:

Ορολογικές διαγνωστικές μέθοδοι - ανίχνευση ορισμένων αντισωμάτων ή αντιγόνων στον ορό αίματος του ασθενούς ως αποτέλεσμα της αντίδρασης αντιγόνου-αντισώματος (AG-AT). Δηλαδή, κατά την αναζήτηση ενός συγκεκριμένου αντιγόνου σε έναν ασθενή, χρησιμοποιείται το αντίστοιχο τεχνητά συντιθέμενο αντίσωμα και, κατά συνέπεια, αντίστροφα, κατά την αναγνώριση αντισωμάτων, χρησιμοποιούνται συντιθέμενα αντιγόνα.

αντίδραση ανοσοφθορισμού (RIF)

Βασίζεται στη χρήση αντισωμάτων επισημασμένων με βαφή. Εάν υπάρχει ιικό αντιγόνο, δεσμεύεται με επισημασμένα αντισώματα και παρατηρείται ένα συγκεκριμένο χρώμα στο μικροσκόπιο, το οποίο υποδηλώνει θετικό αποτέλεσμα. Με αυτή τη μέθοδο, δυστυχώς, μια ποσοτική ερμηνεία του αποτελέσματος είναι αδύνατη, αλλά μόνο ποιοτική.

Η δυνατότητα ποσοτικού προσδιορισμού παρέχεται με ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA). Είναι παρόμοιο με το RIF, ωστόσο, δεν χρησιμοποιούνται βαφές ως δείκτες, αλλά ένζυμα που μετατρέπουν άχρωμα υποστρώματα σε έγχρωμα προϊόντα, γεγονός που καθιστά δυνατό τον ποσοτικό προσδιορισμό του περιεχομένου τόσο των αντιγόνων όσο και των αντισωμάτων.

- Τα μη δεσμευμένα αντισώματα και αντιγόνα ξεπλένονται.

- Προστίθεται ένα άχρωμο υπόστρωμα και στα φρεάτια με το αντιγόνο που ανιχνεύουμε, θα προκύψει χρωματισμός, επειδή θα υπάρχει ένα ένζυμο που σχετίζεται με το αντιγόνο, μετά το οποίο αξιολογείται η ένταση της φωταύγειας του έγχρωμου προϊόντος χρησιμοποιώντας μια ειδική συσκευή.

Τα αντισώματα ανιχνεύονται με παρόμοιο τρόπο.

Έμμεση (παθητική) αντίδραση αιμοσυγκόλλησης (IPHA).

Η μέθοδος βασίζεται στην ικανότητα των ιών να δεσμεύουν τα ερυθρά αιμοσφαίρια. Κανονικά, τα ερυθρά αιμοσφαίρια πέφτουν στο κάτω μέρος της πλάκας, σχηματίζοντας ένα λεγόμενο κουμπί. Ωστόσο, εάν υπάρχει ιός στο υπό μελέτη βιολογικό υλικό, θα δεσμεύσει τα ερυθρά αιμοσφαίρια σε μια λεγόμενη ομπρέλα που δεν θα πέσει στον πάτο του πηγαδιού.

Εάν το καθήκον είναι ο εντοπισμός αντισωμάτων, τότε αυτό μπορεί να γίνει χρησιμοποιώντας αντίδραση αναστολής αιμοσυγκόλλησης (HAI).Διάφορα δείγματα ενσταλάσσονται στο φρεάτιο με τον ιό και τα ερυθρά αιμοσφαίρια. Εάν υπάρχουν αντισώματα, θα δεσμεύσουν τον ιό και τα ερυθρά αιμοσφαίρια θα πέσουν στο κάτω μέρος για να σχηματίσουν ένα «κουμπί».

Τώρα ας σταθούμε σε μεθόδους για την άμεση διάγνωση των νουκλεϊκών οξέων των υπό μελέτη ιών, καιΠρώτα απ 'όλα, σχετικά με την PCR (αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης) .

Η ουσία αυτής της μεθόδου είναι να ανιχνεύσει ένα συγκεκριμένο θραύσμα DNA ή RNA ενός ιού αντιγράφοντας το πολλές φορές υπό τεχνητές συνθήκες. Η PCR μπορεί να πραγματοποιηθεί μόνο με DNA, δηλαδή για τους ιούς RNA είναι πρώτα απαραίτητο να πραγματοποιηθεί μια αντίδραση αντίστροφης μεταγραφής.

Η PCR πραγματοποιείται απευθείας σε μια ειδική συσκευή που ονομάζεται θερμικός κυκλοποιητής ή θερμικός κυκλοποιητής, ο οποίος διατηρεί την απαιτούμενη θερμοκρασία. Το μείγμα PCR αποτελείται από προστιθέμενο DNA, το οποίο περιέχει το θραύσμα που μας ενδιαφέρει, εκκινητές (ένα σύντομο θραύσμα νουκλεϊκού οξέος, συμπληρωματικό στο DNA στόχο, χρησιμεύει ως εκκινητής για τη σύνθεση της συμπληρωματικής αλυσίδας), πολυμεράση DNA και νουκλεοτίδια.

Στάδια κύκλου PCR:

- Η μετουσίωση είναι το πρώτο στάδιο. Η θερμοκρασία ανεβαίνει στους 95 βαθμούς, οι αλυσίδες DNA αποκλίνουν μεταξύ τους.

- Ανόπτηση ασταριών. Η θερμοκρασία μειώνεται στους 50-60 βαθμούς. Τα αστάρια βρίσκουν μια συμπληρωματική περιοχή της αλυσίδας και δεσμεύονται σε αυτήν.

- Σύνθεση. Η θερμοκρασία αυξάνεται και πάλι στους 72, αυτή είναι η θερμοκρασία λειτουργίας για την DNA πολυμεράση, η οποία, ξεκινώντας από τους εκκινητές, χτίζει θυγατρικές αλυσίδες.

Ο κύκλος επαναλαμβάνεται πολλές φορές. Μετά από 40 κύκλους, ένα μόριο DNA παράγει 10*12 μοίρες αντιγράφων αντιγράφων του επιθυμητού θραύσματος.

Κατά την εκτέλεση PCR σε πραγματικό χρόνο, τα συντιθέμενα αντίγραφα ενός θραύσματος DNA επισημαίνονται με μια χρωστική ουσία. Η συσκευή καταγράφει την ένταση της λάμψης και δημιουργεί γραφήματα της συσσώρευσης του επιθυμητού θραύσματος καθώς προχωρά η αντίδραση.

Οι σύγχρονες μέθοδοι εργαστηριακής διάγνωσης με υψηλή αξιοπιστία καθιστούν δυνατό τον εντοπισμό της παρουσίας ενός παθογόνου ιού στο σώμα, συχνά πολύ πριν από την εμφάνιση των πρώτων συμπτωμάτων της νόσου.