Η διάγνωση της HIV λοίμωξης περιλαμβάνει δύο στάδια: τον προσδιορισμό του πραγματικού γεγονότος της μόλυνσης από τον HIV και τον προσδιορισμό του σταδίου της νόσου. Τον καθορισμό του σταδίου ακολουθεί αναπόσπαστα η αποσαφήνιση της φύσης της πορείας της νόσου, και στη συνέχεια η διαμόρφωση της πρόγνωσης σε αυτόν τον ασθενή, καθώς και η επιλογή της θεραπευτικής τακτικής.
Όπως γνωρίζετε, η διάγνωση οποιασδήποτε μολυσματικής νόσου βασίζεται σε σύγκριση επιδημιολογικών, κλινικών και εργαστηριακών δεδομένων και η υπερβολή της αξίας μιας από τις ομάδες αυτών των δεδομένων μπορεί να οδηγήσει σε διαγνωστικά σφάλματα.
Επιδημιολογικά κριτήρια για τη μόλυνση από τον ιό HIV .
Το πρώτο βήμα για τη διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV είναι η συλλογή ενός επιδημιολογικού ιστορικού και άλλων επιδημιολογικών δεδομένων για τον ασθενή που εξετάζεται. Η έλλειψη επιδημιολογικών δεδομένων μπορεί να περιπλέξει σημαντικά τη διάγνωση της HIV λοίμωξης και να εμποδίσει την εφαρμογή αντιεπιδημικών μέτρων.
Τα επιδημιολογικά κριτήρια μπορεί μερικές φορές να είναι καθοριστικά για τη διάγνωση της HIV λοίμωξης, αλλά μπορεί επίσης να είναι δευτερεύουσας σημασίας. Το κριτήριο για την υψηλή πιθανότητα μόλυνσης είναι η ανίχνευση στο εξεταζόμενο άτομο τέτοιων παραγόντων κινδύνου για μόλυνση όπως η μετάγγιση αίματος δότη που ελήφθη από ένα άτομο που έχει μολυνθεί με HIV, η γέννηση ενός μολυσμένου με HIV παιδιού από την εξεταζόμενη γυναίκα. Υπάρχει μεγάλη πιθανότητα μόλυνσης εάν το άτομο έχει γεννηθεί από μητέρα μολυσμένη με HIV, έχει σεξουαλική επαφή με άτομο που έχει μολυνθεί από τον ιό HIV ή μοιράζεται παρεντερική χρήση ναρκωτικών με άτομο μολυσμένο με HIV. Ορισμένος κίνδυνος μόλυνσης ανιχνεύεται κατά τη διάρκεια αξιόπιστων παρεντερικών παρεμβάσεων, οι οποίες πραγματοποιούνται με όργανα που είναι πιθανό να έχουν μολυνθεί με HIV (δηλαδή σε νοσοκομειακές και παρόμοιες εστίες HIV λοίμωξης με παρεντερική μετάδοση του HIV).
Ένας αξιοσημείωτος κίνδυνος μόλυνσης μπορεί να συζητηθεί σε περιπτώσεις όπου το υποκείμενο αναφέρει σεξουαλική επαφή ή παρεντερική χρήση ναρκωτικών σε περιοχές όπου ο HIV είναι σημαντικά διαδεδομένος μεταξύ της ομάδας πληθυσμού στην οποία ανήκει το άτομο.
Ταυτόχρονα, η σεξουαλική επαφή και η χρήση ναρκωτικών σε περιοχές με χαμηλό επιπολασμό μόλυνσης από τον ιό HIV δεν αποκλείει την πιθανότητα μόλυνσης από τον ιό HIV.
Η απουσία αξιόπιστων παραγόντων κινδύνου για τη μόλυνση από τον ιό HIV μπορεί να θέσει υπό αμφισβήτηση τα εργαστηριακά δεδομένα. Σε τέτοιες περιπτώσεις, συνιστάται η επανάληψη των εργαστηριακών εξετάσεων.
Κλινικά κριτήρια για τη μόλυνση από τον ιό HIV.
Η έγκαιρη διάγνωση της HIV λοίμωξης διασφαλίζει την έγκαιρη θεραπεία του ασθενούς και την εφαρμογή προληπτικών μέτρων κατά την έξαρση, αποτρέποντας την ακούσια μετάδοση του ιού από ένα μολυσμένο άτομο σε ένα υγιές άτομο. Τέλος, η έγκαιρη διάγνωση επιτρέπει την έγκαιρη ιατρική εξέταση, την ψυχολογική βοήθεια και την κοινωνική αποκατάσταση. Οι πρώτες επιτυχίες στη θεραπεία των ασθενών καθιστούν δυνατή, με την έγκαιρη διάγνωση, τη σημαντική παράταση της ζωής των ασθενών, ακόμη και την ελπίδα για θεραπεία.
Η δυσκολία έγκαιρης διάγνωσης με βάση την κλινική εικόνα έγκειται στη μη εξειδίκευση και τον πολυμορφισμό των συμπτωμάτων στο στάδιο ΙΙ, για να μην αναφέρουμε την απουσία κλινικών σημείων στο στάδιο Ι. Ωστόσο, σε όλες τις περιπτώσεις υπάρχει κόπωση χωρίς κίνητρα, παρουσία νυχτερινών εφιδρώσεων, πονοκεφάλους, ειδικά σε φόντο βραχυπρόθεσμου πυρετού ( 3-10 ημέρες) με θερμοκρασία 38-38,50 C, που συνοδεύονται από αμυγδαλίτιδα, παρατεταμένο διάρροιο σύνδρομο, απώλεια βάρους σε σύντομο χρονικό διάστημα, είναι απαραίτητο πρώτα απ 'όλα να αποκλειστεί ο HIV μόλυνση. Η διάγνωση κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου βοηθείται από τον εντοπισμό διαφόρων δερματικών εξανθημάτων (κηλίδες, βλατίδες, ροζόλα, φλύκταινες) ή φουρκουλίωση κατά τη διάρκεια μιας αντικειμενικής εξέτασης. Η παρουσία λεμφαδενοπάθειας, ακόμη και σε περιπτώσεις μεγέθυνσης μιας ομάδας λεμφαδένων, και ακόμη περισσότερο σε περίπτωση γενικευμένης λεμφαδενοπάθειας, με μεγαλύτερο βαθμό πιθανότητας καθιστά δυνατή την κλινική υποψία μόλυνσης από HIV. Η νόσος χαρακτηρίζεται ιδιαίτερα από διεύρυνση των οπίσθιων τραχηλικών, υπογνάθιων, υπερ- και υποκλείδιων, μασχαλιαίων και ωλένιων λεμφαδένων. Κατά κανόνα, αυξάνουν σε μέγεθος σε διάμετρο 2-5 cm, είναι ανώδυνα, έχουν πυκνή ελαστική σύσταση και περιστασιακά συγχωνεύονται σε συγκρότημα. Είναι πολύ χαρακτηριστικό για τη λοίμωξη από τον ιό HIV να αυξάνει περισσότερους από έναν κόμβους, περισσότερες από μία ομάδες (με εξαίρεση τη βουβωνική), που διαρκεί περισσότερο από 3 μήνες.
Συχνά στην πρώιμη φάση της νόσου, η παρουσία ψυχονευρολογικών συμπτωμάτων: άγχος, κατάθλιψη, ασταθές βάδισμα, μειωμένη οπτική οξύτητα, σπασμοί με σημάδια βλάβης στην ψυχοσυναισθηματική σφαίρα (εξασθένηση μνήμης, λήθη, ακατάλληλη συμπεριφορά, θαμπάδα των συναισθημάτων). Στα πιο χαρακτηριστικά γνωρίσματα Τα πρώιμα στάδια της μόλυνσης από τον HIV περιλαμβάνουν:
1. Λιγότερο από 10% απώλεια βάρους.
2. Αλλαγές στο δέρμα και τους βλεννογόνους (σμηγματορροϊκή δερματίτιδα, θυλακίτιδα, κνησμός, ψωρίαση, μυκητιασικές λοιμώξεις των νυχιών, υποτροπιάζοντα στοματικά έλκη, νεκρωτική ουλίτιδα).
3 . Έρπης ζωστήρας σε άτομα ηλικίας κάτω των 50 ετών.
4. Υποτροπιάζουσες λοιμώξεις της ανώτερης αναπνευστικής οδού.
ΣΕ ενδιάμεσο στάδιοασθένειες που χαρακτηρίζονται από μια κλινική εκτεταμένης υπερλοίμωξης, που σχηματίζεται ως αποτέλεσμα ανοσοανεπάρκειας, είναι πιο χαρακτηριστικές:
1 . Προοδευτική απώλεια βάρους πάνω από 10%.
2 . Διάρροια άγνωστης προέλευσης, που διαρκεί πάνω από 1 μήνα.
3 . Στοματική καντιντίαση;
4 . Λευκοπλακία;
5. Πνευμονική φυματίωση;
6. Περιφερική νευροπάθεια;
7. Εντοπισμένες μορφές σαρκώματος Kaposi.
8. Διάδοση του έρπητα ζωστήρα;
9. Σοβαρή, υποτροπιάζουσα βακτηριακή λοίμωξη (πνευμονία, ιγμορίτιδα, πυομυοσίτιδα).
Για τελικό στάδιο, που επιτρέπει τη διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV ή, σε κάθε περίπτωση, τη διεξαγωγή διαφορικής διάγνωσης, περιλαμβάνουν:
1. Πνευμονία από πνευμονοκύστη;
2 . Τοξοπλάσμωση;
3. Κρυπτόκοκκωση;
4. CMV λοίμωξη;
5. Απλός έρπης;
6. Προοδευτική πολυεστιακή λευκοεγκεφαλοπάθεια;
7. Ιστοπλάσμωση;
8. Καντιδική οισοφαγίτιδα;
9. MAC μόλυνση;
10. Σηψαιμία σαλμονέλας;
11. Εξωπνευμονική φυματίωση;
12. Λέμφωμα, σάρκωμα Kaposi.
13. Καχεξία;
14. Εγκεφαλοπάθεια HIV.
Το 1988, ο ΠΟΥ πρότεινε για σκοπούς κλινικής διάγνωσης να πραγματοποιηθεί βαθμολογία συμπτωμάτωνδιαθέσιμο σε ασθενή με υποψία HIV λοίμωξης:
Επίμονη γενικευμένη λεμφαδενοπάθεια 0
Αλλαγές στο δέρμα και στους βλεννογόνους 1
Απώλεια βάρους 1
Σοβαρή κόπωση 1
Απλός έρπης 2
Διάρροια που διαρκεί περισσότερο από 1 μήνα. 4
Πυρετός που διαρκεί περισσότερο από 1 μήνα. 4
Απώλεια βάρους πάνω από 10% 4
Πνευμονική φυματίωση 5
Υποτροπιάζουσα βακτηριακή λοίμωξη 5
Στοματική λευκοπλακία 5
Στοματίτιδα, στοματική τσίχλα 5
Εντοπισμένο σάρκωμα Kaposi 8
Καχεξία 12
Σε αυτή την περίπτωση, το άθροισμα των πόντων από το 0 έως το 3 εκτιμάται καθώς η πιθανότητα μόλυνσης από τον ιό HIV είναι πολύ χαμηλή, 4 -11 μονάδες - η ασθένεια είναι πιθανή και 12 και πάνω - πολύ πιθανή.
Γενικά, η κλινική διάγνωση της HIV λοίμωξης είναι, πρώτα απ' όλα, η διάγνωση του φάσματος της παθολογίας που σχετίζεται με το AIDS σε έναν ασθενή με δευτερογενή ανοσοανεπάρκεια. Δεδομένου ότι οι ενδεικτικές ασθένειες HIV περιλαμβάνουν 23 νοσολογικές μορφές, μια συνδρομική προσέγγιση στη διάγνωση είναι η πλέον κατάλληλη. Ο ασθενής έχει σχεδόν πάντα ένα σύνδρομο γενικής δηλητηρίασης (αδυναμία χωρίς κίνητρα, λήθαργο, κόπωση) που αναπτύσσεται σε φόντο παρατεταμένου χαμηλού πυρετού ή πυρετού άγνωστης προέλευσης, συχνά τη νύχτα και το πρωί, που συνοδεύεται από άφθονο ιδρώτα. Το σύνδρομο της γενικευμένης περιφερικής λεμφαδενοπάθειας χωρίς κίνητρα είναι σταθερό, σε ποσοστό 20% συνοδευόμενο από ηπατοσπληνομεγαλία ποικίλης βαρύτητας. Ένα από τα κύρια σύνδρομα της νόσου είναι το σύνδρομο της βρογχοπνευμονικής παθολογίας, αν και οι βαθιές βλάβες του πνευμονικού ιστού με τη μορφή πνευμονίας Pneumocystis αναπτύσσονται σε προχωρημένες περιπτώσεις της νόσου, επειδή η πνευμοκύστη αναπτύσσεται σε φόντο βαθιάς ανοσοανεπάρκειας. Αλλά με διάρκεια μεγαλύτερη από 1 μήνα, το σύνδρομο της διάρροιας χωρίς κίνητρα ταξινομείται ως πρώιμης έναρξης και χαρακτηρίζεται από αντίσταση στη φαρμακευτική θεραπεία. Ένα από τα σύνδρομα της HIV λοίμωξης είναι η κυματοειδής αρθραλγία άγνωστης αιτιολογίας. Οι πιο χαρακτηριστικές εκδηλώσεις της νόσου περιλαμβάνουν το σύνδρομο των βλαβών του δέρματος και των βλεννογόνων, που εκδηλώνεται με μη ειδικό κηλιδοβλατιδωτό εξάνθημα, ανθεκτικό στα στεροειδή έκζεμα και σταφυλοκοκκικό κηρίο. Οι δερματολογικές εκδηλώσεις περιλαμβάνουν επίσης υποτροπιάζουσες μυκητίαση (μυκητίαση, καντιντίαση, βακτηριακή (θυλακίτιδα, φουρκουλίτιδα, ιδραδενίτιδα), ιογενείς (έρπης) βλάβες του δέρματος και των βλεννογόνων. Τέλος, η HIV λοίμωξη χαρακτηρίζεται επίσης από νεοπλάσματα, κυρίως με τη μορφή σαρκώματος Kaposi και λέμφωμα, καθώς και ορισμένοι άλλοι τύποι όγκων.
Η παρουσία τουλάχιστον δύο κλινικών και δύο κλινικών εργαστηριακών συμπτωμάτων (λευκολυφωνουτροπενία, υπογαμμασφαιριναιμία) από τα παραπάνω συμπτώματα σε έναν ασθενή επιτρέπει σε κάποιον να διαγνώσει τη λοίμωξη HIV με υψηλό βαθμό εμπιστοσύνης. Αλλά ταυτόχρονα, εάν δύο από τα πολύ κοινά σύνδρομα που εντοπίζονται σε ασθενείς, όπως ο πυρετός και η λεμφαδενοπάθεια, επιμένουν για ένα μήνα ή περισσότερο, η επίμονη διάρροια χωρίς κίνητρα, η μείωση του σωματικού βάρους άνω του 10% ή οι έντονες νυχτερινές εφιδρώσεις δίνουν να οδηγήσουν στη διάγνωση και σε ενδελεχή εργαστηριακή εξέταση.
ΣΕ στάδιο 2αΗ ασθένεια μπορεί να υποπτευθεί μόνο το σύμπτωμα της επίμονης γενικευμένης λεμφαδενοπάθειας σε ασθενή σε κίνδυνο ή παρουσία επιδημιολογικού ιστορικού.
ΣΕ στάδιο 2βΗ (πρώιμη ή ήπια) σωματική ευεξία και η φυσιολογική δραστηριότητα εξακολουθούν να διατηρούνται. Οι βλάβες του δέρματος και των βλεννογόνων δεν είναι σοβαρές, οι υποτροπιάζουσες λοιμώξεις του αναπνευστικού δεν είναι γενικευμένες, η απώλεια βάρους δεν υπερβαίνει το 10%.
Σύμφωνα με τις συστάσεις του ΠΟΥ, η αξιόπιστη κλινική διάγνωση της λοίμωξης HIV σε ενήλικες και παιδιά είναι δυνατή με την παρουσία μιας από τις 12 ασθένειες-δείκτες του AIDS: 1) καντιντίαση του οισοφάγου, της τραχείας, των βρόγχων και των πνευμόνων. 2) εξωπνευμονική κρυπτόκοκκωση. 3) κρυπτοσποριδίωση με διάρροια για περισσότερο από ένα μήνα. 4) λοίμωξη από κυτταρομεγαλοϊό οποιουδήποτε οργάνου (με εξαίρεση και επιπλέον του ήπατος, του σπλήνα και των λεμφαδένων σε ασθενή ηλικίας άνω του 1 μήνα). 5) λοίμωξη που προκαλείται από τον ιό του απλού έρπητα, επίμονη για περισσότερο από 1 μήνα σε ασθενή άνω του 1 μήνα. 6) Σάρκωμα Kaposi σε ασθενή ηλικίας κάτω των 60 ετών. 7) Εγκεφαλικό λέμφωμα σε ασθενή κάτω των 60 ετών. 8) λεμφοκυτταρική διάμεση πνευμονία σε παιδί κάτω των 13 ετών, 9) διάχυτη λοίμωξη που προκαλείται από βακτήρια του Micobacterium avium intracellulare ή της ομάδας M. Kansassii. 10) πνευμονία από πνευμονοκύστη. 11) προοδευτική πολυεστιακή λευκοεγκεφαλοπάθεια. 12) τοξοπλάσμωση του κεντρικού νευρικού συστήματος σε ασθενείς μεγαλύτερους από 1 μήνα. Η παρουσία μιας από αυτές τις ασθένειες καθιστά δυνατή τη διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV απουσία ορολογικής ενζυμικής ανοσοπροσροφητικής δοκιμασίας (ELISA) αίματος ή ακόμη και παρουσία οροαρνητικού αποτελέσματος.
Όχι λιγότερο περίπλοκη είναι η διαφοροποίηση των φάσεων της νόσου, δηλ. σταδιοποίηση σύμφωνα με κλινικά κριτήρια. Σύμφωνα με ειδικούς από το CDC (ΗΠΑ), το πιο αντικειμενικό κριτήριο είναι ο αριθμός των Τ-βοηθών κυττάρων και όχι οι κλινικές εκδηλώσεις, καθώς πολλές από αυτές τις καταστάσεις εμφανίζονται συχνά σε άτομα που δεν έχουν μολυνθεί από τον ιό HIV. Το 1991, το Κέντρο καθόρισε ότι η διάγνωση του AIDS μπορεί να γίνει εάν: α) το μολυσμένο άτομο έχει μία από τις 23 καταστάσεις που σχετίζονται με το AIDS ή β) είναι μολυσμένο με HIV και έχει λιγότερα από 200 κύτταρα CD4+/mm.
Εργαστηριακά κριτήρια για τη μόλυνση από τον ιό HIV.
Ο έλεγχος για HIV λοίμωξη υπόκειται κυρίως σε:
2 . Άτομα με κλινική εικόνα της καραντιδικής οισοφαγίτιδας, της βρογχικής και της πνευμονικής καντιντίαση, διαδόθηκαν ή εξοργιστικά κοκκιδομυκομία, πνευμοκυστική πνευμονία, εξωπνευμονική κρυπτοκοκκωση, κρυπτοσκοριδάτωση με διαρροή για περισσότερο από το 1 μήνα, κυτταρόγαλο σε εσωτερικό οραγκάν. 6 μηνών, αμφιβληστροειδίτιδα από κυτταρομεγαλοϊό με απώλεια όρασης, ερπητική λοίμωξη με πολυεστιακά έλκη που διαρκούν πάνω από 1 μήνα, βρογχίτιδα, πνευμονία ή οισοφαγίτιδα, υποτροπιάζων έρπης ζωστήρα, διάχυτη ή εξωπνευμονική ιστοπλάσμωση, πνευμονική ή εξωπνευμονική φυματίωση με υπερδιασπορία του τελευταίου μήνα, ευρεία δισπορία εξωπνευμονικές λοιμώξεις MAC, προοδευτική πολυεστιακή λευκοεγκεφαλοπάθεια, εγκεφαλική τοξοπλάσμωση, σηψαιμία σαλμονέλας, σάρκωμα Kaposi, λέμφωμα, λεμφοειδής διάμεση πνευμονία (σε παιδιά)
Επί του παρόντος, για την εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξης χρησιμοποιούνται διάφορες μέθοδοι ανίχνευσης HIV, αντιγόνων HIV και γενετικού υλικού, καθώς και μέθοδοι ανίχνευσης αντισωμάτων κατά του HIV. Όλες αυτές οι μέθοδοι έχουν ποικίλη αποτελεσματικότητα, απαιτούν διαφορετικό εξοπλισμό και διαφορετικά επίπεδα εκπαίδευσης προσωπικού. Τα αποτελέσματα αυτών των μελετών απαιτούν κατάλληλη ερμηνεία.
... η διάγνωση οποιασδήποτε μολυσματικής νόσου βασίζεται σε σύγκριση επιδημιολογικών, κλινικών και εργαστηριακών δεδομένων και η υπερβολή της σημασίας μιας από τις ομάδες αυτών των δεδομένων μπορεί να οδηγήσει σε διαγνωστικά σφάλματα.
Η διάγνωση της HIV λοίμωξης περιλαμβάνει δύο στάδια:
Εγώσκηνή - διαπιστώνοντας το πραγματικό γεγονός της μόλυνσης από τον ιό HIV
;
IIσκηνή - τον προσδιορισμό του σταδίου της νόσου
.
ΔΕΣΜΙΩΣΗ ΤΟΥ ΓΕΓΟΝΟΣ ΤΗΣ ΛΟΙΜΩΞΗΣ HIV
Η διαπίστωση του πραγματικού γεγονότος της μόλυνσης από τον ιό HIV (δηλαδή η ταυτοποίηση ατόμων που έχουν μολυνθεί από τον ιό HIV), με τη σειρά του, περιλαμβάνει επίσης δύο στάδια:
Στάδιο Ι- συνδεδεμένη ανοσοπροσροφητική δοκιμασία(ELISA): η μέθοδος ELISA είναι μια μέθοδος διαλογής (επιλογής) - η επιλογή πιθανώς μολυσμένων ατόμων, δηλαδή στόχος της είναι ο εντοπισμός ύποπτων ατόμων και η εξάλειψη υγιών ατόμων. Τα αντισώματα κατά του HIV ανιχνεύονται χρησιμοποιώντας άλλα αντισώματα στα επιθυμητά αντισώματα (αντισώματα έναντι άλλων αντισωμάτων). Αυτά τα «βοηθητικά» αντισώματα επισημαίνονται με ένα ένζυμο. Όλες οι εξετάσεις προσυμπτωματικού ελέγχου πρέπει να είναι ιδιαίτερα ευαίσθητες ώστε να μην χάνετε ασθενή. Εξαιτίας αυτού, η ειδικότητά τους δεν είναι πολύ υψηλή, δηλαδή η ELISA μπορεί να δώσει θετική απάντηση («πιθανώς άρρωστος») σε μη μολυσμένα άτομα (για παράδειγμα, σε ασθενείς με αυτοάνοσα νοσήματα: ρευματισμοί, συστηματικός ερυθηματώδης λύκος κ.λπ.). Η συχνότητα των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων κατά τη χρήση διαφόρων συστημάτων δοκιμών κυμαίνεται από 0,02 έως 0,5%. Εάν η εξέταση ELISA ενός ατόμου δώσει θετικό αποτέλεσμα, τότε απαιτείται περαιτέρω εξέταση για να επιβεβαιωθεί το γεγονός της μόλυνσης από τον ιό HIV. Κατά τη διεξαγωγή ELISA στο 3-5% των περιπτώσεων, είναι πιθανά ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα - εάν η μόλυνση έχει συμβεί σχετικά πρόσφατα και το επίπεδο των αντισωμάτων είναι ακόμα πολύ χαμηλό ή στο τελικό στάδιο της νόσου, που χαρακτηρίζεται από σοβαρή βλάβη στο ανοσοποιητικό σύστημα με βαθιά έκπτωση της διαδικασίας σχηματισμού αντισωμάτων. Επομένως, παρουσία δεδομένων που υποδεικνύουν επαφή με άτομα μολυσμένα με HIV, επαναλαμβανόμενες μελέτες πραγματοποιούνται συνήθως μετά από 2 έως 3 μήνες.
ΙΙ στάδιο - ανοσοστύπωμα(τροποποιημένο Western Blot, western blot): είναι μια πιο σύνθετη μέθοδος και χρησιμεύει για την επιβεβαίωση του γεγονότος της μόλυνσης. Αυτή η μέθοδος δεν ανιχνεύει πολύπλοκα αντισώματα κατά του HIV, αλλά αντισώματα στις μεμονωμένες δομικές πρωτεΐνες του (p24, gp120, gp41, κ.λπ.). Τα αποτελέσματα της ανοσοστύπωσης θεωρούνται θετικά εάν ανιχνευθούν αντισώματα σε τουλάχιστον τρεις πρωτεΐνες, η μία από τις οποίες κωδικοποιείται από τα γονίδια env, η άλλη από τα γονίδια gag και η τρίτη από τα γονίδια pol. Εάν ανιχνευθούν αντισώματα σε μία ή δύο πρωτεΐνες, το αποτέλεσμα θεωρείται αμφίβολο και απαιτεί επιβεβαίωση. Στα περισσότερα εργαστήρια, η διάγνωση της HIV λοίμωξης τίθεται εάν εντοπιστούν ταυτόχρονα αντισώματα στις πρωτεΐνες p24, p31, gp4l και gpl20/gp160. Η ουσία της μεθόδου: ο ιός καταστρέφεται σε συστατικά (αντιγόνα), τα οποία αποτελούνται από ιονισμένα υπολείμματα αμινοξέων και επομένως όλα τα συστατικά έχουν μια αυγή που διαφέρει μεταξύ τους. Στη συνέχεια, χρησιμοποιώντας ηλεκτροφόρηση (ηλεκτρικό ρεύμα), τα αντιγόνα κατανέμονται στην επιφάνεια της ταινίας - εάν υπάρχουν αντισώματα κατά του HIV στον ορό δοκιμής, θα αλληλεπιδράσουν με όλες τις ομάδες αντιγόνων και αυτό μπορεί να ανιχνευθεί.
Θα πρέπει να το θυμόμαστεότι τα αντισώματα κατά του HIV εμφανίζονται στο 90-95% των μολυσμένων ατόμων εντός 3 μηνών μετά τη μόλυνση, στο 5-9% των μολυσμένων ατόμων τα αντισώματα για τον HIV εμφανίζονται μετά από 6 μήνες και στο 0,5-1% των μολυσμένων ατόμων τα αντισώματα στον HIV εμφανίζονται μεταγενέστερες προθεσμίες. Κατά το στάδιο του AIDS, ο αριθμός των αντισωμάτων μπορεί να μειωθεί μέχρι να εξαφανιστούν εντελώς.
Στην ανοσολογία, υπάρχει κάτι τέτοιο όπως "ορολογικό παράθυρο" - την περίοδο από τη μόλυνση μέχρι την εμφάνιση τέτοιας ποσότητας αντισωμάτων που μπορεί να ανιχνευθεί. Για τον HIV, αυτή η περίοδος διαρκεί συνήθως από 2 έως 12 εβδομάδες, σε σπάνιες περιπτώσεις μεγαλύτερη. Κατά τη διάρκεια του «ορολογικού παραθύρου», σύμφωνα με τις εξετάσεις, ένα άτομο είναι υγιές, αλλά στην πραγματικότητα έχει μολυνθεί από τον ιό HIV. Έχει διαπιστωθεί ότι το DNA του HIV μπορεί να παραμείνει στο ανθρώπινο γονιδίωμα για τουλάχιστον τρία χρόνια χωρίς σημάδια δραστηριότητας και δεν εμφανίζονται αντισώματα έναντι του HIV (δείκτες HIV λοίμωξης).
Κατά τη διάρκεια αυτής της περιόδου («ορολογικό παράθυρο») είναι δυνατός ο εντοπισμός ενός ατόμου που έχει προσβληθεί από τον ιό HIV και ακόμη και 1-2 εβδομάδες μετά τη μόλυνση χρησιμοποιώντας αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης(PCR).Αυτή είναι μια εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδος - θεωρητικά, μπορεί να ανιχνευθεί 1 DNA ανά 10 ml μέσου. Η ουσία της μεθόδου είναι η εξής: χρησιμοποιώντας την αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, λαμβάνονται πολλά αντίγραφα ενός νουκλεϊκού οξέος (ένας ιός είναι ένα νουκλεϊκό οξύ - DNA ή RNA - σε ένα πρωτεϊνικό κέλυφος), τα οποία στη συνέχεια αναγνωρίζονται χρησιμοποιώντας επισημασμένα ένζυμα ή ισότοπα , καθώς και από τη χαρακτηριστική τους δομή. Η PCR είναι μια δαπανηρή διαγνωστική μέθοδος, επομένως δεν χρησιμοποιείται για προσυμπτωματικό έλεγχο ή τακτικά.
ΠΡΟΣΔΙΟΡΙΣΜΟΣ ΣΤΑΔΙΟΥ ΤΗΣ ΝΟΣΟΥ
Στην καρδιά του AIDS βρίσκεται, πρώτα απ 'όλα, η καταστροφή των Τ-λεμφοκυττάρων-βοηθών, που χαρακτηρίζονται από μονοκλωνικά αντισώματα - συστάδες διαφοροποίησης - όπως το CD4. Από αυτή την άποψη, η διάγνωση και η παρακολούθηση της εξέλιξης της νόσου είναι αδύνατη χωρίς την παρακολούθηση του υποπληθυσμού των βοηθητικών κυττάρων Τ, η οποία πραγματοποιείται πιο εύκολα με τη χρήση διαλογέα κυττάρων λέιζερ.
Για ήπια λοίμωξη HIVΟ αριθμός των Τ-λεμφοκυττάρων είναι ένας εξαιρετικά μεταβλητός δείκτης. Σε γενικές γραμμές, μείωση του αριθμού των κυττάρων CD4 (απόλυτη και σχετική) διαπιστώνεται σε άτομα των οποίων η HIV λοίμωξη εμφανίστηκε τουλάχιστον πριν από ένα χρόνο. Από την άλλη πλευρά, στα πρώιμα στάδια της μόλυνσης υπάρχει συχνά απότομα αυξημένος αριθμός κατασταλτικών Τ κυττάρων (CD8) τόσο στο περιφερικό αίμα όσο και σε διευρυμένους λεμφαδένες.
Με σοβαρό AIDSΗ συντριπτική πλειοψηφία των ασθενών έχει μειωμένο συνολικό αριθμό Τ-λεμφοκυττάρων (λιγότερο από 1000 ανά 1 μl αίματος, συμπεριλαμβανομένων των λεμφοκυττάρων CD4 - λιγότερο από 22 ανά 1 μl, ενώ η απόλυτη τιμή της περιεκτικότητας σε CD8 παραμένει εντός του φυσιολογικού εύρους). Αντίστοιχα, η αναλογία CD4/CD8 μειώνεται απότομα. Η απόκριση των Τ-λεμφοκυττάρων in vitro σε τυπικά αντιγόνα και μιτογόνα μειώνεται σε αυστηρή συμφωνία με τον σχετικά μειωμένο αριθμό CD4.
Για προχωρημένο AIDSχαρακτηρίζεται από γενική λεμφοπενία, ουδετεροπενία, θρομβοπενία (αντίστοιχα, μείωση του αριθμού λεμφοκυττάρων, ουδετερόφιλων και αιμοπεταλίων), αναιμία. Αυτές οι αλλαγές μπορεί να είναι αποτέλεσμα της κεντρικής αναστολής της αιμοποίησης λόγω της ήττας των αιμοποιητικών οργάνων από τον ιό, καθώς και της αυτοάνοσης καταστροφής των κυτταρικών υποπληθυσμών στην περιφέρεια. Επιπλέον, το AIDS χαρακτηρίζεται από μέτρια αύξηση της ποσότητας των γ-σφαιρινών με κυρίαρχη αύξηση της περιεκτικότητας σε IgG. Οι ασθενείς με σοβαρά συμπτώματα AIDS έχουν συχνά αυξημένα επίπεδα IgA. Σε ορισμένα στάδια της νόσου, το επίπεδο δεικτών AIDS όπως η 1-μικροσφαιρίνη, η σταθερή σε οξύ ιντερφερόνη, η 1-θυμοσίνη αυξάνεται σημαντικά. Το ίδιο συμβαίνει και με την έκκριση ελεύθερης νεοπτερίνης, μεταβολίτη των μακροφάγων. Δεν είναι ακόμη δυνατό να εκτιμηθεί η σχετική σημασία καθενός από τις αναφερόμενες δοκιμές, ο αριθμός των οποίων αυξάνεται συνεχώς. Επομένως, θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη σε αλληλεπίδραση με δείκτες HIV λοίμωξης, τόσο ανοσοϊολογικούς όσο και κυτταρολογικούς. Μια κλινική εξέταση αίματος χαρακτηρίζεται από λευκοπενία, λεμφοπενία (αντίστοιχα, μείωση του αριθμού των λευκοκυττάρων και των λεμφοκυττάρων).
Στάδιο 1 - " στάδιο επώασης»
- δεν έχουν ακόμη ανιχνευθεί αντισώματα κατά του HIV. η διάγνωση της HIV λοίμωξης σε αυτό το στάδιο γίνεται με βάση επιδημιολογικά δεδομένα και πρέπει να επιβεβαιωθεί εργαστηριακά με την ανίχνευση του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας, των αντιγόνων του, των νουκλεϊκών οξέων HIV στον ορό του αίματος του ασθενούς.
Στάδιο 2 - " στάδιο των πρωτογενών εκδηλώσεων»
- σε αυτήν την περίοδο υπάρχει ήδη παραγωγή αντισωμάτων:;
Στάδιο 2Α - " ασυμπτωματικός»
- Η μόλυνση από τον ιό HIV εκδηλώνεται μόνο με την παραγωγή αντισωμάτων.
Στάδιο 2Β - " οξεία λοίμωξη HIV χωρίς δευτερογενή νοσήματα»
- στο αίμα των ασθενών, λεμφοκύτταρα ευρείας πλάσματος - μπορούν να ανιχνευθούν «μονοπύρηνα κύτταρα» και συχνά παρατηρείται παροδική μείωση του επιπέδου των CD4-λεμφοκυττάρων (οξεία κλινική λοίμωξη παρατηρείται στο 50-90% των μολυσμένων ατόμων στην πρώτη 3 μήνες μετά τη μόλυνση· η έναρξη της περιόδου οξείας μόλυνσης, κατά κανόνα, προηγείται της ορομετατροπής, δηλαδή της εμφάνισης αντισωμάτων στον HIV).
Στάδιο 2Β - " οξεία λοίμωξη HIV με δευτερογενή νοσήματα»
- στο πλαίσιο της μείωσης του επιπέδου των λεμφοκυττάρων CD4 και της προκύπτουσας ανοσοανεπάρκειας, εμφανίζονται δευτερογενείς ασθένειες διαφόρων αιτιολογιών (στηθάγχη, βακτηριακή πνευμονία και Pneumocystis, καντιντίαση, ερπητική λοίμωξη κ.λπ.)
Στάδιο 3 - " λανθάνων»
- ως απόκριση στην εξέλιξη της ανοσοανεπάρκειας, εμφανίζεται μια τροποποίηση της ανοσοαπόκρισης με τη μορφή υπερβολικής αναπαραγωγής των κυττάρων CD4, ακολουθούμενη από σταδιακή μείωση του επιπέδου των λεμφοκυττάρων CD4, κατά μέσο όρο με ρυθμό 0,05-0,07x109/l ανά έτος; αντισώματα κατά του HIV ανιχνεύονται στο αίμα.
Στάδιο 4 - " στάδιο δευτερογενών ασθενειών»
- εξάντληση των λεμφοκυττάρων του πληθυσμού CD4, η συγκέντρωση των αντισωμάτων στον ιό μειώνεται σημαντικά (ανάλογα με τη σοβαρότητα των δευτερογενών ασθενειών, διακρίνονται τα στάδια 4A, 4B, 4B).
Στάδιο 5 - " τερματικό στάδιο»
- τυπικά μείωση του αριθμού των κυττάρων CD4 κάτω από 0,05x109/l. η συγκέντρωση των αντισωμάτων στον ιό μειώνεται σημαντικά ή μπορεί να μην ανιχνευθούν αντισώματα.
Η διάγνωση του HIV είναι ένα από τα πρωταρχικά καθήκοντα που αντιμετωπίζουν οι εργαζόμενοι της δερματοφλεβιολογικής κλινικής, καθώς και το προσωπικό της κλινικής.
Η ασθένεια χαρακτηρίζεται από τους γιατρούς ως πολύ ύπουλη. Χαρακτηρίζεται από χρόνια πορεία και δεν μπορεί να αντιμετωπιστεί πλήρως. Είναι σημαντικό να το ανιχνεύσετε έγκαιρα για να λάβετε τον έλεγχο και να αποτρέψετε την ανεξέλεγκτη εξάπλωση. Ποια είναι τα χαρακτηριστικά του ιού της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας και πώς μπορεί κανείς να μολυνθεί από αυτόν, ενδιαφέρονται συχνά οι ασθενείς.
Ποιες είναι οι μέθοδοι για τη διάγνωση της νόσου και ποια σημάδια υποδηλώνουν μόλυνση;
Σήμερα μπορείτε να ακούσετε παντού για το πόσο επικίνδυνη είναι η μόλυνση από τον ιό HIV. Ωστόσο, λίγοι άνθρωποι εξηγούν ποιος είναι αυτός ο κίνδυνος. Ως αποτέλεσμα, οι ασθενείς έχουν ένα ελλιπές σύνολο πληροφοριών και, ως εκ τούτου, δεν παίρνουν την απειλή στα σοβαρά. Αλλά ο HIV είναι εξαιρετικά επικίνδυνος. Κατατάσσεται ως μια αργά εξελισσόμενη ιογενής νόσος που τείνει να είναι χρόνια. Το ανοσοποιητικό σύστημα επηρεάζεται κυρίως από αυτή την παθολογία.
Οι γιατροί εφιστούν την προσοχή των ασθενών στο γεγονός ότι ο θάνατος δεν επέρχεται από τον ίδιο τον ιό της ανοσοανεπάρκειας.
Ένα άτομο πεθαίνει από ταυτόχρονες λοιμώξεις, από τις οποίες το σώμα δεν είναι πλέον σε θέση να παρέχει πλήρη προστασία. Επίσης, οι καρκινικοί όγκοι γίνονται αιτία θανάτου, με τους οποίους η μειωμένη ανοσία αδυνατεί να αντιμετωπίσει.
Στην πραγματικότητα, ο μηχανισμός με τον οποίο η μόλυνση από τον ιό HIV επηρεάζει το ανοσοποιητικό σύστημα είναι αρκετά περίπλοκος. Όπως σημειώνουν οι γιατροί, οι ασθενείς δεν χρειάζεται να το καταλάβουν διεξοδικά. Αρκεί να γνωρίζουμε ότι η ασθένεια μπορεί να μειώσει το επίπεδο ανοσίας σε κρίσιμα επίπεδα. Ως αποτέλεσμα, το σώμα δεν θα είναι σε θέση να προστατευτεί από διάφορες εξωτερικές επιρροές, οι οποίες θα οδηγήσουν στο θάνατο αργά ή γρήγορα.
Πώς εμφανίζεται η μόλυνση;
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι η μόλυνση από τον ιό HIV σήμερα περιβάλλεται από μεγάλο αριθμό διαφορετικών μύθων.
Οι ασθενείς είναι πολύ ανεπαρκώς ενημερωμένοι για το πότε μπορούν να μολυνθούν και πότε δεν κινδυνεύει η υγεία τους.
Το πρώτο πράγμα που πρέπει να θυμάστε είναι ότι ο HIV είναι πολύ ασταθής στο περιβάλλον. Αυτό σημαίνει ότι ο παθογόνος μικροοργανισμός είναι σε θέση να ζήσει πλήρως και για μεγάλο χρονικό διάστημα μόνο στο ανθρώπινο σώμα. Δεν αντέχει θερμότητα πάνω από 50 βαθμούς (πεθαίνει ακαριαία). Δεν είναι επίσης σε θέση να αντέξει τις διαδικασίες ξήρανσης. Δεν περιέχουν όλα τα σωματικά υγρά αρκετό ιό για να εμφανιστεί μόλυνση.
Ο μεγαλύτερος κίνδυνος ενέχει:
- αίμα;
- προ-cum?
- σπέρμα;
- έκκριση από τον γυναικείο κόλπο.
- λέμφος;
- μητρικό γάλα.
Εάν κάποιο από αυτά τα υγρά έρθει σε επαφή με βλεννογόνους στους οποίους υπάρχουν μικροτραύματα, ή με δέρμα που έχει επηρεαστεί από τραυματισμούς, εμφανίζεται μόλυνση.
Είναι επίσης δυνατό εάν το ξένο υγρό εισέλθει απευθείας στην κυκλοφορία του αίματος. Το σάλιο και τα δάκρυα, σε αντίθεση με τη δημοφιλή πεποίθηση, δεν αποτελούν απειλή. Λόγω των χαρακτηριστικών του ιού και του χαμηλού ποσοστού επιβίωσής του, μεταδίδεται με διάφορους τρόπους:
- σεξουαλική οδός δηλ. με απροστάτευτη σεξουαλική επαφή, η οποία συνεπάγεται αναπόφευκτα την επαφή βιολογικών υγρών και βλεννογόνων του σώματος που είναι ευαίσθητα στο παθογόνο.
- παρεντερική οδός δηλ. μετάδοση του ιού με αίμα κατά τη μετάγγισή του ή λόγω της χρήσης μη αποστειρωμένων οργάνων για ιατρικούς σκοπούς·
- κάθετη διαδρομή δηλ. από τη μητέρα στο παιδί (σήμερα, εάν μια γυναίκα κάνει αντιρετροϊκή θεραπεία και αρνηθεί να θηλάσει, η πιθανότητα μόλυνσης του παιδιού κατά τον τοκετό ελαχιστοποιείται).
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι εάν απαιτείται μικροτραύμα ή ανοιχτά τραύματα για μόλυνση μέσω του δέρματος, τότε αυτό δεν είναι απαραίτητη προϋπόθεση για μόλυνση μέσω του βλεννογόνου. Η διαφορά εξηγείται από το γεγονός ότι οι βλεννογόνοι και το δέρμα του ανθρώπινου σώματος έχουν εντελώς διαφορετική δομή. Αυτή η διαφορά πρέπει να ληφθεί υπόψη.
Ποια είναι τα σημάδια για υποψία HIV;
Πολλοί ασθενείς ενδιαφέρονται για το ερώτημα ποια σημεία μπορούν συνήθως να χρησιμοποιηθούν για να υποψιαστούν τη μόλυνση με τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας.
- μια αδικαιολόγητη αύξηση της συστηματικής θερμοκρασίας, η οποία δεν μπορεί να εξηγηθεί από καμία άλλη λοίμωξη και η οποία επιμένει για μεγάλο χρονικό διάστημα, παρά τα μέτρα που έχουν ληφθεί για θεραπεία.
- μια ισχυρή αύξηση του μεγέθους των λεμφαδένων (οι κόμβοι στην περιοχή της βουβωνικής χώρας επηρεάζονται κυρίως, αλλά η εμπλοκή τους σε όλο το σώμα είναι δυνατή).
- σοβαρή απώλεια σωματικού βάρους, η οποία δεν μπορεί να εξηγηθεί από δίαιτες, στρες, ορμονικές ανισορροπίες και άλλους λόγους.
- παράπονα για διαταραχές των κοπράνων που στοιχειώνουν τον ασθενή για μεγάλο χρονικό διάστημα και δεν είναι δυνατό να βρεθεί ο λόγος για τον οποίο εμφανίστηκαν.
- μια έντονη τάση για οποιεσδήποτε μολυσματικές ασθένειες να μετατραπούν σε χρόνιες μορφές και η φύση του παθογόνου δεν είναι ιδιαίτερα σημαντική· τόσο οι βακτηριακές όσο και οι ιογενείς παθολογίες γίνονται χρόνιες.
- Αναπτύσσονται ασθένειες που προκαλούνται από ευκαιριακή μικροχλωρίδα, οι οποίες δεν αποτελούν απειλή για ένα άτομο του οποίου η ανοσία λειτουργεί πλήρως (για παράδειγμα, μυκοπλάσμωση, ουρεαπλάσμωση, καντιντίαση κ.λπ.).
Η κλινική HIV είναι πολύ μη ειδική, όπως σημειώνουν οι γιατροί. Εξαιτίας αυτού, υπάρχουν συχνά δυσκολίες στη διάγνωση. Πολλοί ασθενείς αγνοούν εντελώς τα ανησυχητικά συμπτώματα, προτιμώντας να μην αναζητήσουν ιατρική βοήθεια. Ακόμα κι αν η ασθένεια επηρεάζει σε μεγάλο βαθμό τη συνολική τους ευημερία.
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι η μόλυνση από τον ιό HIV μπορεί να μην γίνει καθόλου αισθητή για μεγάλο χρονικό διάστημα. Και όταν εμφανιστούν τα πρώτα σημάδια, ένα άτομο μπορεί να μην τα συσχετίσει καν με την πιθανότητα μόλυνσης και να προσπαθήσει να λάβει θεραπεία στο σπίτι.
Διαγνωστικές μέθοδοι
Η εργαστηριακή διάγνωση του HIV έχει αναπτυχθεί εδώ και πολύ καιρό και χρησιμοποιείται με επιτυχία για τη διάγνωση αυτής της επικίνδυνης ασθένειας.
Η ασθένεια δεν μπορεί να αναγνωριστεί μόνο από τα συμπτώματα. Ως εκ τούτου, η επιβεβαίωση της διάγνωσης με βάση τις εργαστηριακές τεχνικές παίζει συχνά καθοριστικό ρόλο.
Υπάρχουν διάφορες μέθοδοι για τη διάγνωση του HIV. Στη Ρωσία, πρώτα απ 'όλα, προτιμάται η ανοσοστύπωση, καθώς και οι αντιδράσεις ELISA. Αυτές οι μέθοδοι χρησιμοποιούνται συχνά ως μέθοδοι προσυμπτωματικού ελέγχου, για παράδειγμα, κατά τον έλεγχο του ιατρικού προσωπικού.
Συστήματα ELISA
Οι ασθενείς συχνά ρωτούν τους γιατρούς τους ποια μέθοδο να ξεκινήσουν μια διαγνωστική έρευνα εάν υποψιάζονται μόλυνση με τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας.
Οποιοσδήποτε αρμόδιος γιατρός θα πει ότι πρέπει να προτιμάται η ενζυμική ανοσοδοκιμασία. Αυτή η τεχνική είναι το πρώτο διαγνωστικό στάδιο στη Ρωσία.
Η αρχή λειτουργίας του ELISA είναι απλή. Στο εργαστήριο, οι γιατροί δημιούργησαν ειδικές πρωτεΐνες. Είναι σε θέση να ανιχνεύουν και να αλληλεπιδρούν με αντισώματα που παράγονται από το σώμα ως απόκριση στην επαφή με τον HIV. Στη συνέχεια, ένα ειδικό ένζυμο δείκτη προστίθεται στο σύστημα, το οποίο αλλάζει το χρώμα του. Στο τελικό στάδιο, το υλικό υποβάλλεται σε επεξεργασία χρησιμοποιώντας μια ειδική συσκευή και ο γιατρός λαμβάνει το τελικό αποτέλεσμα.
Το ELISA είναι πολύ δημοφιλές.
Πρώτα απ 'όλα, λόγω του γεγονότος ότι τα αποτελέσματα μπορούν να ληφθούν ακόμη και αν δεν έχουν περάσει περισσότερες από μερικές εβδομάδες από την εισαγωγή του παθογόνου στο σώμα.
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι η ενζυμική ανοσοδοκιμασία δεν ανιχνεύει τον ίδιο τον ιό στο αίμα, αλλά τα αντισώματα σε αυτόν.
Πολλοί άνθρωποι μπορεί να αρχίσουν να τα παράγουν αργότερα από δύο εβδομάδες, γεγονός που μπορεί να προκαλέσει παραπλανητικά αποτελέσματα. Υπάρχουν πολλές γενιές δοκιμών ELISA.
Τα πιο σύγχρονα και άκρως ακριβή είναι αυτά που ανήκουν στην 3η και 4η γενιά. Οι γιατροί σημειώνουν ότι είναι καλύτερο, εάν υπάρχει επιλογή, να προτιμώνται τα ευρωπαϊκά αντιδραστήρια, αφού η ακρίβειά τους φτάνει το 99%. Ο χρόνος που απαιτείται για τη λήψη των αποτελεσμάτων ELISA κυμαίνεται από 2 έως 10 ημέρες κατά μέσο όρο.
Γιατί το ELISA μπορεί να είναι ψευδές
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι οι ενζυμικές ανοσοδοκιμασίες μπορούν να παράγουν τόσο ψευδώς θετικά όσο και ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα. Αν και ο κίνδυνος μιας τέτοιας εξέλιξης γεγονότων είναι εξαιρετικά μικρός.
Ο ασθενής μπορεί να λάβει ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα εάν η εξέταση έγινε πολύ νωρίς και τα αντισώματα δεν είχαν ακόμη προλάβει να σχηματιστούν στο σώμα.
Για να αποκλειστεί μια τέτοια αντίδραση, συνιστάται στους ασθενείς να ελέγχονται πολλές φορές σε διαφορετικά διαστήματα.
Ένα ψευδώς θετικό τεστ εμφανίζεται σε ορισμένες ασθένειες. Για παράδειγμα, ασθενείς με:
- αλκοολική ηπατίτιδα?
- μυέλωμα σε μεγάλους αριθμούς.
- ορισμένα αυτοάνοσα νοσήματα?
- γυναίκες κατά την εγκυμοσύνη κ.λπ.
Σε τέτοιες ασθένειες, το ανθρώπινο αίμα αναπληρώνεται με αντισώματα. Μπορεί στη δομή να μοιάζουν με αντισώματα HIV, γεγονός που προκαλεί σύγχυση στα αντιδραστήρια, προκαλώντας αντίδραση. Φυσικά, τα τελευταία χρόνια, τα συστήματα δοκιμών γίνονται όλο και πιο ευαίσθητα. Ωστόσο, το πρόβλημα των ψευδών αποτελεσμάτων δεν έχει ακόμη επιλυθεί πλήρως.
Ανοσοκηλίδωση
Στις σύγχρονες συνθήκες, είναι αδύνατο να γίνει θετική διάγνωση του HIV με βάση μόνο την ELISA. Είναι απαραίτητη η επιβεβαίωση των ληφθέντων αποτελεσμάτων, η οποία πραγματοποιείται με τη χρήση αντίδρασης ανοσοστύπωσης (immunoblotting, IB).
Για την εκτέλεση IS, ειδικές ταινίες μέτρησης πρέπει να είναι διαθέσιμες στο εργαστήριο. Είναι επικαλυμμένα με ιικές πρωτεΐνες. Πριν από την ανάλυση, το αίμα του ασθενούς που λαμβάνεται από φλέβα παρασκευάζεται με ειδικό τρόπο.
Το βιολογικό υλικό που προκύπτει προστίθεται σε ένα πήκτωμα, στο οποίο οι πρωτεΐνες διαχωρίζονται με βάση το βάρος τους. Στη συνέχεια, μια προπαρασκευασμένη λωρίδα χαμηλώνεται στην προκύπτουσα μάζα.
Η λωρίδα γίνεται υγρή (συμβαίνει κηλίδωση) και ανιχνεύονται λωρίδες πάνω της εάν το υλικό περιέχει πρωτεΐνες HIV. Εάν απουσιάζουν οι πρωτεΐνες, η διαβροχή δεν αλλάζει την εμφάνιση της ταινίας.
Υπάρχουν διάφορες ερμηνείες της ανοσοστύπωσης. Ωστόσο, ανεξάρτητα από το πώς ένα συγκεκριμένο νοσοκομείο ή εργαστήριο πραγματοποιεί την αποκωδικοποίηση, η πιθανότητα σωστής διάγνωσης είναι 99,9%.
Μπορεί η ανοσοστύπωση να δώσει λανθασμένα αποτελέσματα, αναρωτιούνται συχνά οι ασθενείς; Ναι, αυτό είναι δυνατό, για παράδειγμα, εάν η ασθενής έχει φυματίωση, είναι έγκυος ή πάσχει από καρκίνο.
PCR για να βοηθήσει
Η PCR είναι μια άλλη μέθοδος που μπορεί να διαγνώσει τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας στο αίμα και σε άλλα βιολογικά υγρά, όπου η συγκέντρωσή του είναι αρκετά υψηλή.
Όπως σημειώνουν οι γιατροί, η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης μπορεί να δώσει θετικό αποτέλεσμα 10 ημέρες μετά την πρώτη επαφή του σώματος με τη μόλυνση.
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι η PCR σε ορισμένες περιπτώσεις δίνει ψευδώς θετικά αποτελέσματα. Αυτό εξηγείται από το γεγονός ότι η μέθοδος έχει πολύ υψηλή ευαισθησία.
Ως αποτέλεσμα, συχνά αντιδρά σε παρόμοια αντισώματα, υποδεικνύοντας εντελώς διαφορετικές παθολογικές διεργασίες στο σώμα του ασθενούς.
Παρά την υψηλή ευαισθησία και τη χαμηλή πιθανότητα λήψης ψευδών αποτελεσμάτων, η PCR δεν χρησιμοποιείται ευρέως. Αυτό εξηγείται από διάφορους παράγοντες. Πρώτον, για να πραγματοποιηθεί η αλυσιδωτή αντίδραση πολυμεράσης, απαιτείται ειδικός εξοπλισμός, η τιμή του οποίου είναι αρκετά υψηλή. Δεύτερον, το προσωπικό που εργάζεται με τον εξοπλισμό πρέπει να είναι υψηλά καταρτισμένο, γεγονός που μπορεί επίσης να προκαλέσει δυσκολίες. Αυτά τα χαρακτηριστικά μαζί καθιστούν την PCR μια δαπανηρή διαγνωστική μέθοδο και, ως αποτέλεσμα, μη προσβάσιμη σε όλους.
Παρά το γεγονός ότι η PCR δεν είναι μέθοδος προσυμπτωματικού ελέγχου, χρησιμοποιείται, για παράδειγμα, για να εξετάσει ένα νεογνό για μόλυνση από τον ιό της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας.
Εξπρές διαγνωστικά συστήματα
Οι γιατροί και οι επιστήμονες έχουν καταβάλει μεγάλη προσπάθεια για την ανάπτυξη γρήγορων τεστ για την αξιολόγηση της μόλυνσης από τον ιό HIV. Όπως σημειώνουν οι γιατροί, όταν χρησιμοποιείτε αυτά τα συστήματα, είναι δυνατό να λάβετε αποτελέσματα εντός 15 λεπτών μετά την εκτέλεση της δοκιμής.
Οι ταχείες εξετάσεις για HIV βασίζονται στην αρχή της ανοσοχρωματογραφίας. Το σύστημα περιλαμβάνει συνήθως μια λωρίδα εμποτισμένη με ειδικά αντιδραστήρια.
Το καθήκον του ασθενούς είναι να εφαρμόζει αίμα, σπέρμα ή οποιοδήποτε άλλο βιολογικό υγρό που μπορεί να περιέχει αντισώματα στον ιό.
Εάν εντοπιστούν, θα εμφανιστούν δύο έγχρωμες λωρίδες στην ταινία, η μία από τις οποίες είναι ελέγχου και η άλλη διαγνωστική. Εάν δεν εντοπιστούν, τότε θα ανιχνευθεί μόνο η ζώνη ελέγχου.
Είναι σημαντικό να κατανοήσουμε ότι οι ταχείες εξετάσεις δεν παρέχουν 100% εγγύηση ότι ένα άτομο δεν έχει μολυνθεί ή, αντίθετα, έχει μολυνθεί από λοίμωξη HIV. Σε κάθε περίπτωση, τα αποτελέσματα που λαμβάνονται με τη βοήθειά τους πρέπει να επιβεβαιώνονται στο εργαστήριο με τη χρήση ανοσοστύπωσης.
Τα συστήματα εξπρές τεστ είναι βολικά για ασθενείς που θέλουν να καθησυχάσουν τον εαυτό τους στο σπίτι. Ωστόσο, όπως σημειώνουν οι γιατροί, ακόμα κι αν με τη βοήθειά τους ένα άτομο έλαβε αρνητικό αποτέλεσμα, εάν υποψιάζεστε αρνητικές αλλαγές στο σώμα, θα πρέπει να συμβουλευτείτε έναν γιατρό.
Με ποιον γιατρό πρέπει να επικοινωνήσω εάν υποψιάζομαι λοίμωξη;
Πολλοί ασθενείς αναρωτιούνται με ποιον γιατρό πρέπει να επικοινωνήσουν εάν υποψιάζονται μόλυνση από τον ιό HIV. Πρώτα απ 'όλα, συνιστάται η επίσκεψη σε αφροδισιολόγο. Είναι αυτός ο ιατρός που ειδικεύεται σε ασθένειες που μπορούν να μεταδοθούν από άτομο σε άτομο μέσω της σεξουαλικής επαφής.
Ένας αφροδισιολόγος θα είναι σε θέση να πραγματοποιήσει μια κατάλληλη εξέταση, να συλλέξει το ιστορικό και να αποφασίσει ποιες εξετάσεις χρειάζεται ο ασθενής για να κάνει ακριβή διάγνωση. Κατά την κρίση του, μπορεί επίσης να παραπέμψει τον ασθενή σε νοσοκομείο μολυσματικών ασθενειών. Ειδικά αν εξακολουθεί να υποψιάζεται ότι έχει HIV.
Ο ιός της ανθρώπινης ανοσοανεπάρκειας είναι μια κοινή ασθένεια. Κάθε άτομο που είναι σεξουαλικά ενεργό μπορεί να το αντιμετωπίσει.
Η γνώση της κατανομής και της διάγνωσης αυτής της ασθένειας στη σύγχρονη πραγματικότητα είναι ζωτικής σημασίας εάν ο ασθενής θέλει να διατηρήσει την υγεία και τη μακροζωία του. Μόνο μια έγκαιρη επίσκεψη στο γιατρό θα σας επιτρέψει να ελέγξετε τη μόλυνση και να προστατευθείτε από αυτήν!
Η διάγνωση της λοίμωξης HIV πραγματοποιείται για να τεθεί η τελική διάγνωση. Εάν ο ασθενής είναι σίγουρος για μόλυνση, δεν πρέπει να κάνετε αυτοθεραπεία: θα πρέπει να συμβουλευτείτε έναν ειδικό.
Κάτω από το πρόσχημα του AIDS μπορεί να κρύβονται πολλές ασθένειες που μπορούν να θεραπευτούν με το να πάτε σε γιατρό. Τα τεστ λοίμωξης είναι η πιο κοινή και έγκαιρη διαγνωστική μέθοδος.
Ο προσδιορισμός του βαθμού μόλυνσης συνεχίζεται στο εργαστήριο με εξέταση αίματος με ELISA ή PCR.
Σε σχέση με την επιδείνωση των επιδημιολογικών δεικτών για τη μόλυνση από τον ιό HIV, η έγκαιρη αναγνώριση της νόσου έχει αποκτήσει μεγάλη σημασία. Ο γιατρός διενεργεί διαφορική διάγνωση της λοίμωξης HIV, συλλέγει επιδημιολογικές πληροφορίες σχετικά με τη νόσο.
Κατά τη διαδικασία μελέτης των μεθόδων μόλυνσης, ο ειδικός διεξάγει τέτοιες μελέτες όπως:
- μελέτη του μηχανισμού ανάπτυξης της λοίμωξης HIV.
- διάγνωση συναφών παθήσεων.
Οι μέθοδοι διάγνωσης της λοίμωξης HIV στοχεύουν στον εντοπισμό αντισωμάτων στο ELISA και όταν επιβεβαιωθεί η διάγνωση, ο ειδικός εκτελεί επεξηγηματική εργασία με τον ασθενή σχετικά με τη συμμόρφωσή του με τους κανόνες προκειμένου να αποφευχθεί η εξάπλωση της νόσου.
Το τεστ AIDS συνταγογραφείται για παιδιά που γεννιούνται από μολυσμένες μητέρες μετά από αντιρετροϊκή θεραπεία. Τα τεστ προσυμπτωματικού ελέγχου ανιχνεύουν αντισώματα κατά του HIV 1 και 2.
Η ανοσοκηλίδα είναι επιβεβαιωτικής φύσης και ανιχνεύει αντισώματα στις πρωτεΐνες μόλυνσης από τον HIV.
Η έγκαιρη διάγνωση της ανοσοανεπάρκειας επιτρέπει στον ασθενή να αλλάξει γρήγορα τον τρόπο ζωής του, να ξεκινήσει θεραπεία και να λάβει ψυχολογική βοήθεια. Τα χαρακτηριστικά παράπονα του ασθενούς πάντα βοηθούν τον γιατρό να υποπτεύεται AIDS και στέλνει το αίμα του ασθενούς για εξέταση στο εργαστήριο.
Ταχεία τεστ 4ης γενιάς για AIDS
Η εργαστηριακή διάγνωση της λοίμωξης HIV, που πραγματοποιείται με τεστ 4ης γενιάς, σας επιτρέπει να προσδιορίσετε την ασθένεια στην οξεία φάση της νόσου. Η δοκιμασία Determine HIV-1/2 Ag/Ab Combo είναι εξαιρετικά ευαίσθητη σε αντιγόνα και αντισώματα στον ορό αίματος του ασθενούς. Η ειδικότητα της μελέτης είναι 99,19% για τη γραμμή Ab και 99,64% για τη γραμμή Ag, και η θετική προγνωστική αξία προσδιορίζεται εντός 55%.
Η ευαισθησία της δοκιμασίας προσδιορίζεται με τον προσδιορισμό προηγουμένως γνωστών αποτελεσμάτων. Κατά τη λήψη θετικών δεδομένων, η πιθανότητα λανθασμένων αριθμών φτάνει το 45%.
Μια δοκιμή στοματικού επιχρίσματος πραγματοποιείται στο σπίτι. Η εξέταση είναι άνετη, απλή και ανώδυνη για τον ασθενή. Η δοκιμαστική ταινία ImmunoChrom-½-Express χρησιμοποιείται για ανάλυση και παρέχει σταθερό αποτέλεσμα εάν ο ασθενής ακολουθεί τις οδηγίες που συνοδεύουν το φάρμακο. Εάν βρεθούν δύο ίδιες μωβ λωρίδες που βρίσκονται στην περιοχή δοκιμής και στην περιοχή ελέγχου, η δοκιμή θεωρείται θετική. Η παρουσία μιας λωρίδας ερμηνεύεται ως αρνητικό αποτέλεσμα δοκιμής.
Ο χρόνος που αφιερώνεται στη μελέτη κυμαίνεται από 15 έως 30 λεπτά.
Διάγνωση της νόσου κατά την περίοδο επώασης
Η βλάβη στο ανοσοποιητικό σύστημα συμβαίνει όταν ο ιός εισέλθει στο σώμα του ασθενούς. Η περίοδος επώασης ποικίλλει εντός 3 μηνών.
Μετά από ανεπιθύμητη και επικίνδυνη επαφή με έναν σύντροφο, είναι απαραίτητο να κάνετε μια εξέταση PCR και, με βάση τα αποτελέσματα που ελήφθησαν, να εξαγάγετε ένα συμπέρασμα σχετικά με την παρουσία λοίμωξης HIV στον οργανισμό. Η μέγιστη περίοδος έναρξης της διάγνωσης της ανοσοανεπάρκειας είναι 8-9 μήνες και σε εξαιρετικές περιπτώσεις επεκτείνεται στα 2 χρόνια.
Για την τελική διάγνωση της νόσου, η μελέτη πραγματοποιείται κατά τη διάρκεια του έτους. κάθε 3 μήνες ο ασθενής δίνει αίμα για τον HIV. Η άμεση επαφή με έναν ειδικό μετά από επικίνδυνη επαφή μειώνει την πιθανότητα μόλυνσης κατά 90%.
Για την εργαστηριακή διάγνωση της πρώιμης περιόδου της νόσου χρησιμοποιείται η μέθοδος αντίδρασης πολυμεράσης, η οποία προσδιορίζει τα νουκλεϊκά οξέα. Τα αποτελέσματα της ανάλυσης αποκρυπτογραφούνται μέσα σε λίγες ώρες, διατηρώντας παράλληλα πλήρη ανωνυμία.
Το δημιουργικό τεστ MP-HIV ½ για HIV/AIDS πραγματοποιείται στο σπίτι, 4 εβδομάδες μετά την επικίνδυνη επαφή. Οι κασέτες δοκιμών ανιχνεύουν αντισώματα στον ιό HIV Νο. 1 και 2.
Εξπρές διαγνωστικές μέθοδοι για το AIDS στα παιδιά
Τα μωρά που γεννιούνται από μολυσμένες μητέρες ελέγχονται για τον ιό του AIDS. Οι ορολογικές μέθοδοι για την αναγνώριση της νόσου δεν επιβεβαιώνονται πάντα σε παιδιά ηλικίας 5-18 μηνών, αλλά το αποτέλεσμα έχει μια επακόλουθη θετική τιμή στην ανοσοκηλίδα.
Η πολύ ευαίσθητη μέθοδος PCR σάς επιτρέπει να προσδιορίσετε την παρουσία του ιού του AIDS στο σώμα ενός παιδιού.
Το DNA του παθογόνου βρίσκεται σε ένα παιδί τον πρώτο μήνα της ζωής του. Το σύστημα ανίχνευσης προϊού ανοσοανεπάρκειας έχει σχεδιαστεί για να προσδιορίζει τη συγκέντρωση RNA του παθογόνου.
Το πλήρες αίμα ή τα αποξηραμένα σημεία του είναι κατάλληλα για ανάλυση. Το δείγμα τοποθετείται σε δοκιμαστικό σωλήνα με συντηρητικό EDTA σε αναλογία 1:20. Αποθηκεύστε το υλικό σε θερμοκρασία 2-8 °C για δύο ημέρες, αποφεύγοντας το πάγωμα του αίματος.
Τα αποξηραμένα δείγματα αίματος λαμβάνονται με την εφαρμογή ολόκληρου του υγρού σε ειδικό χαρτί. Το διαγνωστικό υλικό αποθηκεύεται σε θερμοκρασία όχι μεγαλύτερη από 8 °C. Η περίοδος χρήσης των καρτών δεν υπερβαίνει τους 8 μήνες.
Η εξέταση του νεογέννητου και η λήψη αναλύσεων γίνονται στις ακόλουθες ώρες: 2 ημέρες μετά τη γέννηση, σε ηλικία δύο μηνών, μετά από 3-6 μήνες. Η ανίχνευση του γονιδίου του προϊού HIV λίγες ώρες μετά τη γέννηση υποδηλώνει μόλυνση του εμβρύου κατά την προγεννητική περίοδο. Η μόλυνση μπορεί να συμβεί κατά τη διάρκεια του τοκετού ή κατά τη διάρκεια του θηλασμού ενός μωρού.
Τα δεδομένα που επιβεβαιώνουν την παρουσία ιικού DNA σε δύο δείγματα ελέγχου υποδεικνύουν την ανάπτυξη λοίμωξης HIV στο μωρό.
Η παρατήρηση του ιατρείου ακυρώνεται μετά τη λήψη αρνητικών εξετάσεων PCR 4 μήνες μετά τη γέννηση του παιδιού.
Λάθη κατά την έρευνα
Ένα ψευδώς θετικό τεστ για την παρουσία του ιού της ανοσοανεπάρκειας στο αίμα του ασθενούς για πολλούς λόγους διαστρεβλώνει την ακρίβεια του προσδιορισμού της νόσου. Τα σφάλματα περιμένουν τον ασθενή κατά την εκτέλεση της εξέτασης στο σπίτι.
Ένα ψευδές αποτέλεσμα εμφανίζεται όταν η ασθενής έχει καταστάσεις όπως διασταυρούμενη αντίδραση, εγκυμοσύνη, αιμοδότες, μόλυνση από τον ιό της γρίπης, νόσο του αναπνευστικού συστήματος, αυτοάνοσα νοσήματα, καρκίνο, σκλήρυνση.
Οι αλλεργίες συμβάλλουν στην παραγωγή αντιγόνων που είναι ξένα στο σώμα του ασθενούς. Αναγνωρίζονται από το σύστημα δοκιμών και παράγουν ψευδές αποτέλεσμα. Οι μυκητιασικές και ιογενείς λοιμώξεις συμβάλλουν στον εσφαλμένο προσδιορισμό της παρουσίας του ιού του AIDS.
Η λοίμωξη πρέπει να αντιμετωπιστεί και στη συνέχεια να ελεγχθεί για AIDS. Για να ληφθεί ένα υψηλής ποιότητας αποτέλεσμα της μελέτης, ο ασθενής είναι υποχρεωμένος να ενημερώσει τον γιατρό για τις συνακόλουθες παθήσεις και τη θεραπεία που διεξάγεται.
Διάγνωση με ELISA
Το γενικό φάσμα των αντισωμάτων που ανιχνεύονται με την ενζυμική ανοσοδοκιμασία εμφανίζεται στο 95% των ατόμων που έχουν μολυνθεί από τον ιό του AIDS. Ένα θετικό διπλό αποτέλεσμα στην ELISA απαιτεί την παρουσία ενός δεύτερου σταδίου επιβεβαίωσης - μιας δοκιμής ανοσοστύπωσης. Συνίσταται στη μελέτη των αντισωμάτων και της σχέσης τους με τις επιμέρους πρωτεϊνικές δομές του παθογόνου. Το τεστ ELISA έχει δύο αντιδράσεις: ενζυματική και ανοσολογική. Η ανάλυση βασίζεται στην αλληλεπίδραση αντισωμάτων και αντιγόνων.
Τα αντισώματα, το ανοσοσύμπλεγμα και η ενζυμική δραστηριότητα προσδιορίζονται διαδοχικά. Ο ειδικός αποκρυπτογραφεί τα δεδομένα της ανάλυσης. Οι αρνητικοί δείκτες υποδεικνύουν την απουσία μόλυνσης από τον ιό HIV στον ασθενή.
Σε περίπτωση απουσίας αντισωμάτων και πρόσφατης μόλυνσης, ο γιατρός καθορίζει ένα ψευδώς αρνητικό αποτέλεσμα.
Εάν τα δείγματα υλικού για τη μελέτη του ιού αποθηκεύονται απρόσεκτα, οι δείκτες που λαμβάνονται μπορεί να είναι ψευδείς.
Το τεστ που γίνεται μετά τον εμβολιασμό του ασθενούς δίνει θετικό αποτέλεσμα και δεν μπορεί να είναι αξιόπιστο.
Θα πρέπει να προετοιμάσετε σωστά την αραίωση των ορών, να καθαρίσετε τα χρησιμοποιημένα πιάτα και να αγοράσετε μια βαφή υψηλής ποιότητας.
Ένα θετικό αποτέλεσμα ανοσοβολισμού εκδηλώνεται με συνδυασμό ζωνών GP 41 και GP 120 και αντιγόνου. Ένα αρνητικό αποτέλεσμα υποδεικνύεται από την απουσία ζωνών.
Κατά τη διαμόρφωση ενός διαγνωστικού συμπεράσματος, λαμβάνονται υπόψη τα αποτελέσματα των δοκιμών, οι δείκτες εξέτασης του ασθενούς στο νοσοκομείο και η επιδημιολογική έρευνα του ασθενούς.
Κλινική και εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξηςέχει τρεις κατευθύνσεις:
- Διαπίστωση του γεγονότος της HIV λοίμωξης, διάγνωση της HIV λοίμωξης.
- Προσδιορισμός του σταδίου της κλινικής πορείας της νόσου και εντοπισμός δευτερογενών νοσημάτων.
- Πρόβλεψη εξέλιξης της κλινικής πορείας της νόσου, εργαστηριακή παρακολούθηση της αποτελεσματικότητας της θεραπείας και των παρενεργειών των αντιρετροϊκών φαρμάκων.
1. Καθιέρωση HIV λοίμωξης, διάγνωση HIV λοίμωξης
Για τον προσδιορισμό της HIV λοίμωξης, χρησιμοποιούνται οι ακόλουθοι ειδικοί δείκτες: αντισώματα κατά του HIV, αντιγόνα HIV, HIV RNA και DNA προϊού. Τα αντισώματα κατά του HIV προσδιορίζονται με ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) ή ανοσοστύπωμα, που είναι ουσιαστικά ένας τύπος ELISA. Τα αντιγόνα HIV (πρωτεΐνες) προσδιορίζονται με ELISA. Χρησιμοποιώντας τις μεθόδους μοριακής γενετικής αλυσιδωτής αντίδρασης πολυμεράσης (PNR) και bDNA, το HIV RNA και το DNA προϊού μπορούν να προσδιοριστούν. Η πρόσθετη χρήση της μεθόδου υβριδισμού νουκλεϊκών οξέων με ειδικούς ανιχνευτές DNA καθιστά δυνατή την επαλήθευση της ειδικότητας των αλληλουχιών DNA που λαμβάνονται κατά τη διάρκεια της PCR. Η ευαισθησία της PCR είναι η ανίχνευση ιικών γονιδίων σε ένα στα πέντε χιλιάδες κύτταρα.
Κατά τη διάρκεια της πρωτοπαθούς μόλυνσης, παρατηρείται η ακόλουθη δυναμική των δεικτών HIV στο αίμα των μολυσμένων ατόμων. Τον πρώτο μήνα, ως αποτέλεσμα της ενεργοποίησης της αναδιπλασιαστικής διαδικασίας, εμφανίζεται μια απότομη αύξηση του ιικού φορτίου (περιεκτικότητα σε HIV RNA στο πλάσμα) και στη συνέχεια, λόγω της διάδοσης του ιού και της μαζικής μόλυνσης των κυττάρων-στόχων στο αίμα και λεμφαδένες, καθίσταται δυνατός ο προσδιορισμός του προϊικού DNA. Πρωταρχικής διαγνωστικής αξίας είναι το γεγονός της ταυτοποίησης του DNA του προϊού που είναι ενσωματωμένο στο γονιδίωμα του κυττάρου στόχου.
Το ιικό φορτίο αντανακλά την ένταση της διαδικασίας αντιγραφής σε μολυσμένα κύτταρα. Κατά την περίοδο της πρωτογενούς μόλυνσης, το επίπεδο του ιικού φορτίου είναι διαφορετικό όταν μολύνεται με διαφορετικούς υποτύπους HIV, αλλά η δυναμική των αλλαγών του είναι περίπου η ίδια. Έτσι, όταν μολυνθεί με τον υποτύπο Β, για παράδειγμα, εάν τον πρώτο μήνα μετά τη μόλυνση το ιικό φορτίο είναι 700 αντίγραφα/ml, τότε τον 2ο μήνα υπάρχει μείωση στα 600, στον 3ο - στα 100, στον 4ο - έως 50 αντίγραφα/ml. Αυτή η δυναμική παρατηρείται στο πλαίσιο της αύξησης του επιπέδου των ειδικών αντισωμάτων κατά του HIV στο αίμα. Η περιεκτικότητα σε προϊικό DNA στα μονοπύρηνα κύτταρα του αίματος ασθενών με HIV λοίμωξη χαρακτηρίζεται από σχετική σταθερότητα κατά τους πρώτους 6 μήνες με μικρές διακυμάνσεις σε ορισμένους υποτύπους. Έτσι, τα φορτία RNA και DNA δεν είναι πανομοιότυπα.
Κατά το στάδιο της επώασης, για κάποιο χρονικό διάστημα, δεν σχηματίζονται ειδικά αντισώματα κατά του HIV σε ποσότητες επαρκείς για να προσδιοριστούν με τις υπάρχουσες εργαστηριακές μεθόδους. Πριν από την καταγραφή των αντισωμάτων, μέσα σε πολύ σύντομο χρονικό διάστημα, παρατηρείται η εμφάνιση στο αίμα της πρωτεΐνης Nef, η οποία καταστέλλει τη διαδικασία αντιγραφής, και της δομικής πρωτεΐνης p24. Το αντιγόνο p24 μπορεί να ανιχνευθεί στο αίμα με ενζυμική ανοσοδοκιμασία ήδη 1-2 εβδομάδες μετά τη μόλυνση και μπορεί να ανιχνευθεί μέχρι την 8η εβδομάδα, τότε η περιεκτικότητά του μειώνεται απότομα. Περαιτέρω στην κλινική πορεία της HIV λοίμωξης, παρατηρείται μια δεύτερη αύξηση στο επίπεδο της πρωτεΐνης p24 στο αίμα. Πέφτει κατά το σχηματισμό του AIDS. Η εξαφάνιση των ελεύθερων (μη δεσμευμένων από αντισώματα) πρωτεϊνών του πυρήνα p24 στο αίμα και η εμφάνιση ειδικών αντισωμάτων στις πρωτεΐνες HIV σηματοδοτούν την έναρξη της ορομετατροπής (Εικ. 9.6).
Η ιαιμία και η αντιγοναιμία προκαλούν το σχηματισμό ειδικών αντισωμάτων της κατηγορίας IgM (anti-p24, anti-gp41, anti-gp120, anti-gp160). Τα ελεύθερα αντισώματα των κατηγοριών IgM και IgG στην πρωτεΐνη p24 μπορούν να εμφανιστούν ξεκινώντας από τη 2η εβδομάδα, η περιεκτικότητά τους αυξάνεται μέσα σε 2-4 εβδομάδες, φτάνοντας σε ένα ορισμένο επίπεδο στο οποίο παραμένει για μήνες (IgM) και χρόνια (IgG) (Εικ. 9.7).
Η εμφάνιση πλήρους ορομετατροπής, όταν ένα υψηλό επίπεδο ειδικών αντισωμάτων IgG στις δομικές πρωτεΐνες HIV p24, gp41, gp120, gp160 καταγράφεται στο περιφερικό αίμα, διευκολύνει σημαντικά τη διάγνωση της HIV λοίμωξης. Τα αντισώματα κατά του HIV εμφανίζονται στο 90-95% των μολυσμένων ατόμων εντός 3 μηνών μετά τη μόλυνση, στο 5-9% - στην περίοδο από 3 έως 6 μήνες από τη στιγμή της μόλυνσης και στο 0,5-1% - σε μεταγενέστερη ημερομηνία.
Παρά το γεγονός ότι τα αντισώματα κατά του HIV εμφανίζονται τελευταία, ο κύριος εργαστηριακός διαγνωστικός δείκτης μέχρι σήμερα είναι η ανίχνευση ειδικών αντισωμάτων με χρήση ELISA και ανοσοστύπωσης.
Τα δεδομένα παρουσιάζονται στον πίνακα 9.2 [προβολή] και 9.3 [προβολή] , καταδεικνύουν ξεκάθαρα την υψηλή ευαισθησία των σύγχρονων ενζυμικών ανοσοπροσροφητικών συστημάτων δοκιμών για την ανίχνευση αντισωμάτων κατά του HIV, η οποία υπερβαίνει την ευαισθησία της ανοσοστύπωσης. Σε ορισμένες περιπτώσεις, όταν λαμβάνετε ένα αρχικό θετικό αποτέλεσμα στην ELISA, μπορεί να επιβεβαιωθεί σε ανοσοστύπωμα μόνο μετά από 2-3 εβδομάδες.
| Πίνακας 9.3. Παράδειγμα παρακολούθησης ορομετατροπής (σύμφωνα με τον N. Fleury, 2000) | |||||
| Η στιγμή του ορισμού | αντιγόνο ρ24, pg/ml | Αντισώματα στις πρωτεΐνες HIV | |||
| ELISA, OP arr/OP cr** | Ανοσοκηλίδωση | ||||
| HIV DUO | Gen-screen | Στολή | |||
| Ασθενής 1 | |||||
| Πρωταρχικός | 17 | 1,24 | λιγότερο από 1 | λιγότερο από 1 | * |
| Σε 4 μέρες | 67 | 1,36 | 1,85 | λιγότερο από 1 | - |
| Σε 7 μέρες | * | 2,33 | 6,84 | λιγότερο από 1 | - |
| Σε 2 μέρες | * | 6,77 | 15,0 | 4,8 | gp160 |
| Ασθενής 2 | |||||
| Πρωταρχικός | 400 | 13 | λιγότερο από 1 | λιγότερο από 1 | - |
| Σε 5 μέρες | 450 | 18 | 2,11 | λιγότερο από 1 | - |
| Μετά από 10 ημέρες | * | 33 | 12,19 | 2,9 | gp160 |
| Σημείωση: * - ο προσδιορισμός δεν πραγματοποιήθηκε ** - ο λόγος της οπτικής πυκνότητας του δείγματος ορού δοκιμής προς την κρίσιμη (κατώφλι) τιμή οπτικής πυκνότητας |
|||||
Κατά την εξέταση ασθενών με HIV λοίμωξη (HIV-infected) χρησιμοποιώντας συστήματα δοκιμών ανοσοστύπωσης κορυφαίων εταιρειών στον κόσμο, αντισώματα έναντι των gp160 και p24/25 ανιχνεύονται σε όλες τις περιπτώσεις· αντισώματα έναντι άλλων πρωτεϊνών ανιχνεύονται στο 38,8-93,3% των περιπτώσεων (Πίνακας 9.4 [προβολή] ).
Δυσκολίες στην αναγνώριση αντισωμάτων σε ασθενείς με HIV λοίμωξη μπορεί να προκύψουν σε περιόδους μαζικής ιαιμίας και αντιγοναιμίας, όταν τα υπάρχοντα ειδικά αντισώματα στο αίμα συνδέονται με ιικά σωματίδια και η διαδικασία αντιγραφής προηγείται της παραγωγής νέων αντιιικών αντισωμάτων. Αυτή η κατάσταση μπορεί να έρθει και να παρέλθει κατά τη διάρκεια της μολυσματικής διαδικασίας.
Σε ασθενείς με αρχικά εξασθενημένο ανοσοποιητικό σύστημα, η ιαιμία και η αντιγοναιμία εμφανίζονται νωρίτερα και παραμένουν σε υψηλά επίπεδα μέχρι την έκβαση της νόσου. Αυτοί οι ασθενείς έχουν χαμηλό επίπεδο ελεύθερων αντισωμάτων κατά του HIV, για δύο λόγους - ανεπαρκή παραγωγή αντισωμάτων από λεμφοκύτταρα Β και δέσμευση αντισωμάτων σε ιοσωμάτια και διαλυτές πρωτεΐνες του HIV, επομένως, για τον προσδιορισμό της λοίμωξης, εξετάζονται συστήματα με αυξημένη ευαισθησία ή τροποποιήσεις του Οι μέθοδοι ανάλυσης που περιλαμβάνουν το στάδιο της απελευθέρωσης αντισωμάτων απαιτούνται από ανοσοσυμπλέγματα.
Τις περισσότερες φορές, μια μείωση της περιεκτικότητας σε αντισώματα έναντι του HIV για αυτούς τους λόγους συμβαίνει στο τελικό στάδιο, όταν τα αντισώματα κατά του HIV στον ορό μπορεί να μην ανιχνευθούν χρησιμοποιώντας μεθόδους ανοσοπροσροφητικής ανάλυσης συνδεδεμένων με ένζυμα ή τη μέθοδο ανοσοστύπωσης (Western blot). Εκτός από την εμφάνιση ειδικών αντισωμάτων κατά του HIV, η ανοσολογική απόκριση τους πρώτους 4 μήνες χαρακτηρίζεται από μείωση της περιεκτικότητας σε κύτταρα CD4+ στο αίμα του μολυσμένου ατόμου και αύξηση των κυττάρων CD8+. Περαιτέρω, το περιεχόμενο των κυττάρων που φέρουν υποδοχείς CD4 και CD8 σταθεροποιείται και παραμένει αμετάβλητο για κάποιο χρονικό διάστημα. Η αύξηση της περιεκτικότητας σε λεμφοκύτταρα CD8 είναι μια προστατευτική αντίδραση, γιατί Η κυτταροεξαρτώμενη κυτταροτοξικότητα διεξάγεται από λεμφοκύτταρα CD8+, τα οποία στοχεύουν στην καταστροφή των μολυσμένων με HPV κυττάρων. Αρχικά, τα κυτταροτοξικά λεμφοκύτταρα (CTL) ανταποκρίνονται στη ρυθμιστική πρωτεΐνη Nef του ιού, η οποία παίζει σημαντικό ρόλο στη μείωση του ιικού φορτίου (RNA) στο πλάσμα ενός ατόμου που έχει μολυνθεί με HIV τους πρώτους μήνες. Στη συνέχεια, μια απόκριση CTL σχηματίζεται σε άλλους, συμπεριλαμβανομένου. δομικές πρωτεΐνες του HIV, με αποτέλεσμα, 12 μήνες μετά τη μόλυνση, η κυτταροτοξική δράση να αυξάνεται σημαντικά.
Εργαστηριακά διαγνωστικά σχήματα για HIV λοίμωξη
Λαμβάνοντας υπόψη την παραπάνω δυναμική συγκεκριμένων δεικτών HIV λοίμωξης, στην πράξη είναι σκόπιμο να τηρούνται τα ακόλουθα εργαστηριακά διαγνωστικά σχήματα σε ενήλικες (Εικ. 9.8-9.10).
Τα διαγράμματα αντικατοπτρίζουν τα τρία κύρια στάδια της πρωτογενούς εργαστηριακής διάγνωσης της HIV λοίμωξης:
- Προβολή.
- Αναφορικός.
- Ειδικός.
Η ανάγκη για πολλά στάδια εργαστηριακής διάγνωσης οφείλεται κυρίως σε οικονομικούς λόγους. Έτσι, για παράδειγμα, το κόστος διεξαγωγής μιας μελέτης εμπειρογνωμόνων με χρήση ανοσοστύπωσης με χρήση εγχώριων συστημάτων δοκιμών είναι έως και 40 δολάρια ΗΠΑ, ο έλεγχος (με ELISA) είναι περίπου 0,2, δηλαδή η αναλογία είναι 1:200.
Στο πρώτο στάδιο (Εικ. 9.8), τα αντισώματα κατά του HIV προσδιορίζονται στα άτομα χρησιμοποιώντας ένα ενζυμικό ανοσοπροσροφητικό δοκιμαστικό σύστημα σχεδιασμένο να ανιχνεύει αντισώματα και στους δύο τύπους ιού - HIV-1 και HIV-2.
Οι κατασκευαστές στα προτεινόμενα συστήματα δοκιμών χρησιμοποιούν ιϊκό λύμα, ανασυνδυασμένες πρωτεΐνες και συνθετικά πεπτίδια ως αντιγονική βάση. Καθένας από τους αναφερόμενους φορείς των αντιγονικών καθοριστικών παραγόντων HIV έχει τα δικά του πλεονεκτήματα και μειονεκτήματα. Επομένως, όταν επιλέγετε συστήματα δοκιμής περίπου ίσου κόστους, θα πρέπει να προτιμώνται κιτ με την υψηλότερη ευαισθησία (κατά προτίμηση 100%). Μεταξύ των συστημάτων δοκιμής του ίδιου κόστους και ευαισθησίας, είναι σκόπιμο να επικεντρωθείτε σε αυτά με τη μέγιστη εξειδίκευση.
Τα πρώτα συστήματα δοκιμών για εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξης δημιουργήθηκαν με βάση το προϊόν λύσης του ιού. Στη δεκαετία του '80, τέτοια συστήματα δοκιμών χαρακτηρίζονταν από ευαισθησία μικρότερη από 100% και χαμηλή ειδικότητα, που εκδηλώνεται από μεγάλο αριθμό (έως 60%) ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων.
Όταν ένα ιοσωμάτιο σχηματίζεται σε μια καλλιέργεια λεμφοκυττάρων, το περίβλημά του δημιουργείται από την εξωτερική μεμβράνη και επομένως περιέχει αντιγόνα του κύριου συμπλέγματος ιστοσυμβατότητας των κατηγοριών I και II. Αυτή η περίσταση προκαλεί ψευδώς θετικές αντιδράσεις εάν υπάρχουν αντισώματα έναντι αλλοαντιγόνων ιστοσυμβατότητας στο αίμα των ασθενών.
Αργότερα, για τη λήψη του ιού, προτάθηκε η χρήση μιας καλλιέργειας μακροφάγων, στην οποία τα ιικά σωματίδια σχηματίζονται κυρίως ενδοκυτταρικά με εκβλάστηση όχι από την εξωτερική μεμβράνη του κυττάρου, αλλά από τις μεμβράνες του ενδοπλασματικού δικτύου. Αυτή η τεχνολογία έχει μειώσει τον αριθμό των ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων.
Συστήματα δοκιμών ανοσοπροσροφητικών συνδεδεμένων με ένζυμα που χρησιμοποιούν έναν συνδυασμό καθαρισμένου ιικού λύματος με συνθετικά πεπτίδια, τα οποία είναι τα πιο σημαντικά για το αντιγόνο μέρη των πρωτεϊνών του ιού, ή των ανασυνδυασμένων πρωτεϊνών, αναγνωρίζονται ως ένα από τα καλύτερα όσον αφορά τα πιο σημαντικά χαρακτηριστικά - ευαισθησία και ειδικότητα.
Η ευαισθησία του συστήματος δοκιμής εξαρτάται επίσης από τα χαρακτηριστικά άλλων εξαρτημάτων των κιτ. Έτσι, τα δοκιμαστικά συστήματα που χρησιμοποιούν συζεύγματα που αναγνωρίζουν αντισώματα όχι μόνο της κατηγορίας IgG, αλλά και των IgM και IgA, καθιστούν δυνατό τον εντοπισμό μιας προγενέστερης φάσης ορομετατροπής. Φαίνεται πολλά υποσχόμενη η χρήση συστημάτων δοκιμών που μπορούν να ανιχνεύσουν ταυτόχρονα τόσο τα αντιιικά αντισώματα όσο και το αντιγόνο p24, γεγονός που καθιστά την εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξης ακόμη πιο νωρίς.
Το αρχικό θετικό αποτέλεσμα πρέπει να επανελεγχθεί με επανέλεγχο του δείγματος στο ίδιο σύστημα δοκιμής, αλλά κατά προτίμηση σε διαφορετική σειρά και από διαφορετικό εργαστηριακό βοηθό. Εάν μια επαναλαμβανόμενη δοκιμή καταλήξει σε αρνητικό αποτέλεσμα, η δοκιμή εκτελείται για τρίτη φορά.
Αφού επιβεβαιώσετε ένα θετικό αποτέλεσμα, συνιστάται να κάνετε μια δεύτερη αιμοληψία και να το ελέγξετε για αντισώματα στον HIV ως πρωταρχικό. Οι επαναλαμβανόμενες συλλογές αίματος βοηθούν στην αποφυγή σφαλμάτων που προκαλούνται από ανακριβή σήμανση σωλήνων και έντυπα παραπομπής.
Ο ορός αίματος που είναι οροθετικός στο στάδιο της διαλογής αποστέλλεται για μελέτες αναφοράς, οι οποίες εκτελούνται με χρήση δύο ή τριών εξαιρετικά εξειδικευμένων συστημάτων δοκιμών ELISA. Στην περίπτωση δύο θετικών αποτελεσμάτων, πραγματοποιείται μελέτη εμπειρογνωμόνων με τη χρήση ανοσοστύπωσης.
Η χρήση ανοσοπροσροφητικών συστημάτων δοκιμών συνδεδεμένων με ένζυμα σε διαγνωστικά αναφοράς, τα οποία μπορούν να χρησιμοποιηθούν για τη διαφοροποίηση συγκεκριμένων αντισωμάτων έναντι του HIV-1 και του HIV-2, διευκολύνει την περαιτέρω εργασία και σας επιτρέπει να εξετάσετε ένα θετικό δείγμα στο στάδιο των ειδικών αμέσως χρησιμοποιώντας την κατάλληλη ανοσοστύπωση (HIV-1 ή HIV-2) .
Η εργαστηριακή γνωμάτευση εμπειρογνώμονα για τη μόλυνση από τον ιό HIV γίνεται μόνο με βάση ένα θετικό αποτέλεσμα ανοσοστύπωσης (Western blot). Κατά τη διεξαγωγή διαγνωστικών εμπειρογνωμόνων, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθεί η ονοματολογία των γονιδίων και των γονιδιακών προϊόντων του HIV που προτάθηκε το 1990 από μια ομάδα εμπειρογνωμόνων της ΠΟΥ (Πίνακας 9.5 [προβολή] ).
Η ειδικότητα των ζωνών στην ανοσοκηλίδα θα πρέπει να αξιολογηθεί πολύ προσεκτικά και διεξοδικά, χρησιμοποιώντας τα αποτελέσματα των μελετών ορών ελέγχου (θετικού και αρνητικού), που διεξάγονται παράλληλα με τη μελέτη πειραματικών δειγμάτων, και ένα δείγμα της ανοσοκηλίδας με την ονομασία των πρωτεϊνών HIV (που επισυνάπτεται από τον κατασκευαστή στο σύστημα δοκιμής). Η ερμηνεία των λαμβανόμενων αποτελεσμάτων θα πρέπει να πραγματοποιείται σύμφωνα με τις οδηγίες που επισυνάπτονται στο σύστημα δοκιμής. Κατά κανόνα, το κριτήριο για τη θετικότητα είναι η υποχρεωτική παρουσία αντισωμάτων σε δύο πρωτεΐνες (πρόδρομες, εξωτερικές ή διαμεμβρανικές) που κωδικοποιούνται από το γονίδιο env και η πιθανή παρουσία αντισωμάτων στα προϊόντα δύο άλλων δομικών γονιδίων του HIV - gag και pol. (Πίνακας 9.6 [προβολή] ).
| Πίνακας 9.6. Κριτήρια για την ερμηνεία των αποτελεσμάτων ανοσοστύπωσης για HIV-1 και HIV-2 (WHO, 1990) | |||
| Αποτέλεσμα | HIV-1 | HIV-2 | |
| Θετικός | +/- ρίγες pol +/- ρίγες φίμωσης | 2 ζώνες env (πρόδρομος, εξωτερικός gp ή διαμεμβρανικός gp) +/- ρίγες pol +/- ρίγες φίμωσης |
|
| Αρνητικός | Απουσία ειδικών ζωνών για τον HIV-1 | Δεν υπάρχουν συγκεκριμένες ζώνες για τον HIV-2 | |
| Αβέβαιος | Άλλα προφίλ που δεν θεωρούνται θετικά ή αρνητικά | ||
Εάν ληφθεί ένα αμφισβητούμενο αποτέλεσμα, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθεί ο κατάλογος των συστάσεων για την τελική αποσαφήνιση των αποτελεσμάτων της ανοσοστύπωσης (Πίνακας 9.7 [προβολή] ).
| Πίνακας 9.7. Συστάσεις για οριστική αποσαφήνιση των απροσδιόριστων αποτελεσμάτων ανοσοστύπωσης (WHO, 1990) | |
| Παρουσία ζωνών που αντιστοιχούν σε πρωτεΐνες HIV | Ερμηνεία του αποτελέσματος, περαιτέρω ενέργειες |
| HIV-1 | |
| Μόνο p17 | |
| Μόνο p24 και gp160 | Αυτό το ασυνήθιστο μοτίβο μπορεί να συμβεί νωρίς στην ορομετατροπή. Το δείγμα πρέπει να επανεξεταστεί αμέσως. Εάν ληφθεί το ίδιο προφίλ, είναι απαραίτητο να ληφθεί ένα δεύτερο δείγμα 2 εβδομάδες μετά τη λήψη του 1ου δείγματος για δοκιμή ανοσοστύπωσης |
| Άλλα προφίλ | Αυτά τα προφίλ (gag και/ή pol χωρίς env) μπορεί να υποδεικνύουν ορομετατροπή ή μη ειδικές αντιδράσεις |
| HIV-2 | |
| Μόνο p16 | Μπορεί να ταξινομηθεί ως αρνητικό, δεν απαιτεί πρόσθετους ορισμούς |
| I env band με ή χωρίς gag/pol | Το ίδιο δείγμα θα πρέπει να επανεξεταστεί χρησιμοποιώντας διαφορετική παρτίδα αντιδραστηρίων. |
| Μόνο p24 ή gp140 | Αυτό το ασυνήθιστο προφίλ μπορεί να εμφανιστεί νωρίς στην ορομετατροπή. Το δείγμα πρέπει να επανεξεταστεί αμέσως. Εάν ληφθεί το ίδιο προφίλ, 2 εβδομάδες μετά τη λήψη του 1ου δείγματος, είναι απαραίτητο να ληφθεί ένα δεύτερο δείγμα για δοκιμή ανοσοστύπωσης |
| Άλλα προφίλ | Αυτά τα προφίλ (gag και/ή pol χωρίς env) μπορεί να υποδεικνύουν ορομετατροπή ή μη ειδικές αντιδράσεις. |
Σύμφωνα με τις συστάσεις του Ρωσικού Επιστημονικού και Μεθοδολογικού Κέντρου για την Πρόληψη και τον Έλεγχο του AIDS, θετικό αποτέλεσμα θεωρείται η παρουσία αντισωμάτων σε τουλάχιστον μία από τις πρωτεΐνες gp41, gp120, gp160 σε συνδυασμό με αντισώματα έναντι άλλων ειδικών HIV -1 πρωτεΐνες ή χωρίς αυτές. Αυτές οι συστάσεις γίνονται με βάση την εμπειρία με ορούς από παιδιά από νοσοκομειακά κρούσματα, στα οποία συχνά ανιχνεύονταν αντισώματα σε μία μόνο από τις πρωτεΐνες του φακέλου του ιού.
Η πλειονότητα των ασθενών που αρχικά εξετάστηκαν και ήταν οροθετικοί στην ELISA ανήκε στη φάση της επίμονης γενικευμένης λεμφαδενοπάθειας (PGL) ή στην ασυμπτωματική φάση. Επομένως, σε μια ανοσοκηλίδα (μια λωρίδα νιτροκυτταρίνης στην οποία ακινητοποιούνται οι πρωτεΐνες HIV), κατά κανόνα προσδιορίζεται ο ακόλουθος συνδυασμός αντισωμάτων κατά του HIV-1: αντισώματα στις πρωτεΐνες φακέλου gp160, gp120 και gp41, που κωδικοποιούνται από το γονίδιο env, σε συνδυασμό με αντισώματα στις πρωτεΐνες του πυρήνα ρ24 (πρωτεϊνικό νουκλεοκαψίδιο που κωδικοποιείται από το γονίδιο gag) και ρ31/34 (ενδονουκλεάση που κωδικοποιείται από το γονίδιο pol).
Θετικές αντιδράσεις με πρωτεΐνες gag και/ή pol μόνες μπορεί να εμφανιστούν κατά τη διάρκεια της πρώιμης ορομετατροπής και μπορεί επίσης να υποδεικνύουν μόλυνση από HIV-2 ή μη ειδική αντίδραση.
Εάν επιτευχθεί ένα αμφισβητούμενο αποτέλεσμα, είναι δυνατό να χρησιμοποιηθούν διάφορες μεθοδολογικές τεχνικές για να διευκρινιστεί το γεγονός της μόλυνσης από τον ιό HIV.
Ανάλογα με τις τεχνικές δυνατότητες (διαθεσιμότητα διαγνωστικών κιτ και αντιδραστηρίων, διαθεσιμότητα ειδικού εξοπλισμού και εκπαίδευση προσωπικού) του ειδικού εργαστηρίου, πραγματοποιούνται πρόσθετες διαγνωστικές μελέτες (Εικ. 9.10).
Σε ορισμένες περιπτώσεις, συνιστάται η χρήση μεθόδων μοριακής γενετικής για τον προσδιορισμό των γενετικών αλληλουχιών του HIV σε αναρρόφηση ορού, λεμφοκυττάρων αίματος ή λεμφαδένων. Η ειδικότητα των αλληλουχιών DNA που λαμβάνονται ως αποτέλεσμα της PCR μπορεί να ελεγχθεί με υβριδισμό νουκλεϊκών οξέων με ειδικούς ανιχνευτές DNA.
Οι μέθοδοι ραδιοανοσοκαθίζησης (RIP) και έμμεσου ανοσοφθορισμού (IFI) μπορούν επίσης να χρησιμοποιηθούν για την οριστική επαλήθευση ορών με αμφίβολα αποτελέσματα ανοσοστύπωσης.
Η ανίχνευση του HIV RNA στο πλάσμα του αίματος με ποιοτική ή ποσοτική μέθοδο δεν είναι σημαντική για τη διάγνωση της HIV λοίμωξης. Αυτό το αποτέλεσμα θα πρέπει να επιβεβαιωθεί με τυπικές μεθόδους, όπως η ανοσοστύπωση, 2-4 μήνες μετά τη λήψη της αρχικής αμφισβητήσιμης ή αρνητικής απάντησης.
Η απομόνωση του HIV σε κυτταροκαλλιέργεια είναι η απόλυτη αλήθεια. Ωστόσο, η μέθοδος είναι πολύπλοκη, δαπανηρή και εκτελείται μόνο σε ειδικά εξοπλισμένα ερευνητικά εργαστήρια.
Η περιεκτικότητα των κυττάρων CD4+ στο αίμα είναι ένας μη ειδικός δείκτης, ωστόσο, σε αμφιλεγόμενες περιπτώσεις (ELISA «+», ανοσοκηλίδωση «-», παρουσία κλινικών σημείων μόλυνσης από HIV/AIDS) μπορεί να χρησιμοποιηθεί ως κατευθυντήρια γραμμή για τη δημιουργία απόφαση εμπειρογνώμονα. Εάν το εργαστήριο έχει τη δυνατότητα να εκτελεί μόνο ανοσοστύπωμα, τότε θα πρέπει να τηρείτε τις συστάσεις που αναφέρονται στον πίνακα. 9.7 και στο Σχ. 9.9.
Άτομα των οποίων η εξέταση ορού εμπειρογνωμόνων έδωσε αμφισβητήσιμα (απροσδιόριστα) αποτελέσματα, με εξαίρεση τις περιπτώσεις ανίχνευσης αντισωμάτων μόνο έναντι του p17 (HIV-1) ή του p16 (HIV-2), θα πρέπει να επανεξεταστούν εντός 6 μηνών (μετά από 3 μήνες). . Στην περίπτωση αληθινής λοίμωξης HIV, μετά από 3-6 μήνες, παρατηρείται «θετική» δυναμική στο φάσμα των αντισωμάτων - επιπλέον σχηματισμός αντισωμάτων σε άλλες ιικές πρωτεΐνες. Μια ψευδής αντίδραση χαρακτηρίζεται από την παραμονή ενός αμφίβολου σχεδίου ανοσοστύπωσης για μεγάλο χρονικό διάστημα ή την εξαφάνιση ύποπτων ζωνών. Εάν, μετά την καθορισμένη περίοδο, τα αποτελέσματα της επαναλαμβανόμενης ανοσοστύπωσης είναι αρνητικά ή παραμένουν αμφίβολα, τότε ελλείψει παραγόντων κινδύνου, κλινικών συμπτωμάτων ή άλλων παραγόντων που σχετίζονται με τη λοίμωξη HIV, το άτομο μπορεί να θεωρηθεί οροαρνητικό για αντισώματα κατά του HIV-1 και του HIV -2.
Εσφαλμένα θετικά αποτελέσματα λόγω της παρουσίας στο αίμα των ασθενών αντισωμάτων έναντι της ιστοσυμβατότητας αλλοαντιγόνων που αποτελούν μέρος του φακέλου του HIV εμφανίζονται σε ανοσοκηλίδες με τη μορφή ζωνών στο επίπεδο των gp41 και gp31. Οι λόγοι για άλλες μη ειδικές αντιδράσεις (για παράδειγμα, στην p24, η οποία απαντάται συχνά σε άτομα με αυτοάνοσες διεργασίες) δεν έχουν ακόμη διευκρινιστεί.
Οι βελτιώσεις στην τεχνολογία παραγωγής συστημάτων δοκιμών ανοσοπροσροφητικών συνδεδεμένων με ένζυμα κατέστησαν δυνατή την επίτευξη υψηλής ευαισθησίας - έως και 99,99%, ενώ η ευαισθησία της μεθόδου ανοσοστύπωσης είναι 97%. Επομένως, ένα αρνητικό αποτέλεσμα στην ανοσοστύπωση με θετικά αποτελέσματα στην ELISA μπορεί να υποδηλώνει μια αρχική περίοδο ορομετατροπής, που χαρακτηρίζεται από χαμηλό επίπεδο ειδικών αντισωμάτων. Επομένως, είναι απαραίτητο να επαναληφθεί η μελέτη μετά από 1,5-2 μήνες, δηλαδή το χρονικό διάστημα που απαιτείται για την ολοκλήρωση της ορομετατροπής και την επίτευξη συγκέντρωσης ειδικών αντισωμάτων στο αίμα επαρκή για ανίχνευση με ανοσοστύπωση.
Ένα θετικό αποτέλεσμα (αποτελέσματα) μιας μελέτης στο στάδιο αναφοράς ή μόνο του προσυμπτωματικού ελέγχου της εργαστηριακής διάγνωσης της HIV λοίμωξης, δηλαδή ένα θετικό αποτέλεσμα σε οποιοδήποτε ενζυμικό ανοσοπροσροφητικό σύστημα δοκιμών, που τελικά δεν επιβεβαιώνεται από ειδικές μεθόδους, ερμηνεύεται ως η παρουσία αντισωμάτων διασταυρούμενης αντίδρασης στο αίμα του υπό εξέταση ατόμου. Η διασταυρούμενη αντίδραση αναφέρεται στη δέσμευση αντισωμάτων σε μη ειδικές θέσεις σε πρωτεΐνες ή πεπτίδια HIV που χρησιμοποιούνται ως αντιγονική βάση στο σύστημα δοκιμής στο οποίο ελήφθη θετικό αποτέλεσμα.
Ελλείψει ανοσοανεπάρκειας και κλινικών σημείων μόλυνσης από τον ιό HIV, τέτοια άτομα θεωρούνται οροαρνητικά για τα αντισώματα HIV και θα πρέπει να αφαιρεθούν από το μητρώο.
Η τελική διάγνωση της HIV λοίμωξης καθιερώνεται μόνο με βάση όλα τα κλινικά, επιδημιολογικά και εργαστηριακά δεδομένα. Μόνο ο θεράπων ιατρός έχει το δικαίωμα να ενημερώσει τον ασθενή για τη διάγνωση της HIV λοίμωξης.
Η κύρια μέθοδος επιβεβαιωτικής (ειδικής) εργαστηριακής διάγνωσης της HIV λοίμωξης είναι η ανοσοστύπωση. Ωστόσο, δεδομένης της χαμηλότερης ευαισθησίας του σε σύγκριση με το ELISA, ορισμένοι ερευνητές έχουν προτείνει τη χρήση ενός συνδυασμού πολλών συστημάτων δοκιμών για τον οριστικό προσδιορισμό της παρουσίας ειδικών αντισωμάτων κατά του HIV. Για παράδειγμα, οι G. van der Groen et al. πρότεινε μια εναλλακτική μέθοδο αντί της ανοσοστύπωσης για τον έλεγχο των θετικών αποτελεσμάτων του σταδίου προσυμπτωματικού ελέγχου της εργαστηριακής διάγνωσης της HIV λοίμωξης. Περιλαμβάνει τη μελέτη του υλικού παράλληλα σε τρία συστήματα δοκιμών, τα οποία βασίζονται σε διαφορετικές μεθόδους για την ανίχνευση συγκεκριμένων αντισωμάτων κατά του HIV (πολλές επιλογές ELISA, αντίδραση συγκόλλησης) χρησιμοποιώντας αντιγόνα διαφορετικής φύσης. Οι συγγραφείς μπόρεσαν να επιλέξουν τέτοιους συνδυασμούς συστημάτων δοκιμών, η χρήση των οποίων παρέχει 100% ευαισθησία και ειδικότητα σε σύγκριση με τα αποτελέσματα που λαμβάνονται στην ανοσοστύπωση.
Το φθηνό αυτής της μεθόδου διάγνωσης από ειδικούς είναι ένα αναμφισβήτητο πλεονέκτημα, ωστόσο, η έλλειψη πληροφοριών σχετικά με το ποιες συγκεκριμένες ιικές πρωτεΐνες έχουν αντισώματα στο αίμα του ασθενούς δεν επιτρέπει την αξιολόγηση της ειδικότητας της αντίδρασης σε κάθε μεμονωμένη περίπτωση, καθώς και την παρακολούθηση αλλαγών στην το φάσμα των αντισωμάτων στο πρώιμο στάδιο της ορομετατροπής.
Η εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξης σε παιδιά που γεννιούνται από μητέρες μολυσμένες με HIV έχει τα δικά της χαρακτηριστικά. Από τη στιγμή της γέννησης, τα μητρικά αντισώματα κατά του HIV μπορούν να κυκλοφορούν στο αίμα τέτοιων παιδιών για μεγάλο χρονικό διάστημα (έως 15 μήνες). Μόνο ανοσοσφαιρίνες της κατηγορίας IgG διεισδύουν στον φραγμό του πλακούντα, επομένως η αναγνώριση των ειδικών για τον HPV ανοσοσφαιρινών των κατηγοριών IgM και IgA σε ένα παιδί επιτρέπει την επιβεβαίωση της μόλυνσης, αλλά ένα αρνητικό αποτέλεσμα δεν μπορεί να υποδηλώνει την απουσία HIV.
Σε παιδιά ηλικίας κάτω του 1 μηνός, δεν υπάρχει ακόμη αναπαραγωγή του HPV και η μόνη μέθοδος επαλήθευσης είναι η PCR. Ο προσδιορισμός του αντιγόνου p24 σε παιδιά άνω του 1 μήνα είναι επίσης μια επιβεβαιωτική μέθοδος.
Η απουσία αντισωμάτων κατά του HIV στα νεογνά δεν σημαίνει ότι ο ιός δεν έχει διεισδύσει στον φραγμό του πλακούντα. Σε κάθε περίπτωση, τα παιδιά μητέρων που έχουν προσβληθεί από τον ιό HIV υπόκεινται σε εργαστηριακή διαγνωστική εξέταση και παρακολούθηση για 36 μήνες από τη γέννηση.
Τα αποτελέσματα των εργαστηριακών εξετάσεων για δείκτες HIV λοίμωξης απαιτούν προσεκτική ερμηνεία και θα πρέπει να λαμβάνονται υπόψη μόνο σε συνδυασμό με δεδομένα από επιδημιολογικές και κλινικές εξετάσεις. Από την άλλη πλευρά, πρέπει να σημειωθεί ότι παρά την υψηλή ευαισθησία των σύγχρονων μεθόδων, τα αρνητικά ερευνητικά αποτελέσματα δεν μπορούν να αποκλείσουν εντελώς την παρουσία HIV λοίμωξης. Επομένως, ένα αρνητικό αποτέλεσμα μιας μελέτης, για παράδειγμα, με ανοσοστύπωση, μπορεί να διαμορφωθεί μόνο ως η απουσία ειδικών αντισωμάτων κατά του HIV-1 και του HIV-2.
Διάγνωση HIV λοίμωξης σε οροαρνητικούς ασθενείς
Η ποιότητα των συστημάτων δοκιμών που χρησιμοποιούνται στην εργαστηριακή διάγνωση της HIV λοίμωξης βελτιώνεται κάθε χρόνο και η ευαισθησία τους αυξάνεται. Ωστόσο, η υψηλή μεταβλητότητα του HIV μπορεί να οδηγήσει στην εμφάνιση νέων τύπων, αντισώματα έναντι των οποίων μπορεί να μην αναγνωρίζονται από τα υπάρχοντα συστήματα δοκιμών. Επιπλέον, υπάρχουν γνωστές περιπτώσεις άτυπης χυμικής απόκρισης του ανοσοποιητικού συστήματος του ξενιστή στον ιό. Έτσι, ο L. Montagnier το 1996 ανέφερε δύο ασθενείς με AIDS στους οποίους δεν είχαν ανιχνευθεί συγκεκριμένα αντισώματα στο αίμα τους τα προηγούμενα αρκετά χρόνια· η διάγνωση έγινε με βάση κλινικά δεδομένα και επιβεβαιώθηκε στο εργαστήριο μόνο με την απομόνωση του HPV-1. σε κυτταρική καλλιέργεια. Σε τέτοιες περιπτώσεις, είναι απαραίτητο να χρησιμοποιηθούν οι συστάσεις του ΠΟΥ, σύμφωνα με τις οποίες η κλινική διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV σε ενήλικες και παιδιά είναι δυνατή με την παρουσία μιας από τις 12 ασθένειες που καθορίζουν το AIDS:
- καντιντίαση του οισοφάγου, της τραχείας, των βρόγχων, των πνευμόνων.
- εξωπνευμονική κρυπτόκοκκωση;
- κρυπτοσποριδίωση με διάρροια για περισσότερο από ένα μήνα.
- Λοίμωξη από κυτταρομεγαλοϊό οποιουδήποτε οργάνου (με εξαίρεση και επιπλέον του ήπατος, του σπλήνα και των λεμφαδένων σε ασθενή ηλικίας άνω του 1 μήνα):
- λοίμωξη που προκαλείται από τον ιό του απλού έρπητα, επίμονη για περισσότερο από 1 μήνα σε ασθενή ηλικίας άνω του 1 μήνα.
- εγκεφαλικό λέμφωμα σε ασθενή ηλικίας κάτω των 60 ετών.
- λεμφοκυτταρική διάμεση πνευμονία σε παιδί κάτω των 13 ετών.
- διάχυτη μόλυνση που προκαλείται από βακτήρια της ομάδας Micobacterium avium intracellulare ή M. Kansassii.
- Πνευμονία από πνευμονοκύστη;
- προοδευτική πολυεστιακή λευκοεγκεφαλοπάθεια.
- τοξοπλάσμωση του κεντρικού νευρικού συστήματος σε ασθενείς ηλικίας άνω του 1 μήνα.
Η παρουσία μιας από αυτές τις ασθένειες καθιστά δυνατή τη διάγνωση της λοίμωξης από τον ιό HIV απουσία εργαστηριακής εξέτασης αίματος για την παρουσία αντισωμάτων κατά του HIV ή ακόμη και εάν ληφθεί οροαρνητικό αποτέλεσμα.
Πηγή: Ιατρικά εργαστηριακά διαγνωστικά, προγράμματα και αλγόριθμοι. Εκδ. καθ. Karpishchenko A.I., Αγία Πετρούπολη, Intermedica, 2001