Для диагностики микозов могут быть использованы микроскопические, микологические (культуральные), аллергические, серологические, биологические и гистологические методы исследования. В зависимости от патогенеза материалом для исследования могут быть гной, мокрота, пораженные волосы, ногти, чешуйки кожи, пунктаты костного мозга, лимфатических узлов, внутренних органов, кровь, желчь, испражнения, биоптаты тканей и т. п.
Микроскопическое исследование включает микроскопию на-тивных (неокрашенных) и окрашенных мазков. Для приготовления нативных препаратов волосы, соскобы кожи, ногтей просветляют в 10.30 % растворах КОН или NaOH. Обработанный щелочью материал помещают на предметное стекло в каплю глицерина, накрывают покровным стеклом и микроскопируют (можно использовать фазово-контрастную микроскопию), что дает возможность изучить строение гриба, расположение спор, но окончательное заключение о видовой принадлежности гриба можно сделать только после культуральных исследований.
Для окраски мазков чаще всего используют методы Грама, Циля.Нильсена, Романовского-Гимзы. Для окраски дерматофитов применяют также методы Сабуро, Адамсона и др.
Культуральное (микологическое) исследование проводят для выделения чистой культуры гриба и ее идентификации. Используют плотные и жидкие питательные среды (Сабуро, сусло-агар, Чапека и др.). Инкубация в термостате (22.28ºС) длительная (3.4 нед). Чистую культуру гриба идентифицируют по совокупности признаков: форме колоний, их цвету, консистенции, микроскопической картине (характер мицелия, расположение спор, конидиеносцев) и другим признакам.Серологические реакции для диагностики грибковых заболеваний проводят с грибковыми антигенами по общепринятым методикам, как и для диагностики других инфекционных заболеваний (РА, РП, РСК, РНГА, РИФ и др.).
Аллергические пробы можно проводить по общепринятым методикам внутрикожным введением соответствующих аллергенов (полисахаридные и белковые фракции из клеток или клеточных оболочек, взвесь клеток убитых грибов, фильтраты культур). Для выявления ГНТ можно использовать тест дегрануляции тканевых и сывороточных базофилов, а для выявления ГЗТ – реакции торможения миграции фагоцитов, бластной трансформации лимфоцитов.
Биологическое исследование проводят на лабораторных моделях (мыши, крысы, морские свинки, кролики, собаки, кошки). Биологическую модель микоза используют для выявления патогенности возбудителя, выделения чистой культуры, изучения новых антимикотиков. Гистологическое исследование дает возможность обнаружить гриб в тканях, изучить его морфологию и особенности патологического процесса, вызванного им в организме.
Содержание
Выявить поражение и определить возбудителя при поражении грибка на первых этапах крайне сложно. Диагностирование осложнено тем, что патология сразу никак не проявляется или имеет разнообразную симптоматику. Для определения возбудителя берут биоматериал с того участка, который поразила патогенная микрофлора: мокроту, часть кожи, зараженный ноготь, кровь, биопсию лимфоузлов или внутренних органов.
Что такое грибковые заболевания
Как выглядит
Причиной обращения к дерматологу становятся, как правило, первые патологические проявления болезни. Клинические признаки будут отличаться в зависимости от места заражения, возбудителя грибкового заболевания. Выделяют следующие типы патогенных микроорганизмов:
- грибок Кандида (Candida) – вызывает кандидозные инфекции;
- Трихофитии (Trichophyton) – провоцирует инфекционные патологии ногтей, кожи, слизистых оболочек;
- Криптококкоз – атакует внутренние органы, легкие;
- Аспергиллез – грибковое заболевание, вызванное снижением иммунитета.
При диагностике может быть определена одна из 2 групп инфекции по локализации:
Проникает патогенная микрофлора через ранки на поверхности эпидермиса, микротравмы, причиной заболевания может стать любая царапина, которая спровоцирует микоз гладкой кожи. Не справляется организм с атакой возбудителя при снижении защитных функций. При диагностике часто определяют заражение родом трихофитон или Кандида. Последние вызывают такие заболевания:
- молочница;
- кандидоз у мужчин;
- кандидоз ротовой полости.
Существует более нескольких десятков возбудителей, их делят по методу поражения тканей. При диагностике могут выявить следующие виды грибковых микроорганизмов:
- глубокие системные микозы провоцирует Histoplasma capsulatum;
- субкутанные подкожные микозы вызывает Sportrichum schenckii;
- эпидермомикозы развиваются из-за Epidermophyton floccosum;
- отрубевидный лишай, поверхностный микоз - Malassezia furfur;
- оппортунистические грибковые заболевания - Candida albicans.
Классификация микозов
Общее название всех болезней этого типа скрывает под собой разные виды поражения организма человека грибами. При диагностике врачи разделяют заболевания кожи на 4 группы:
- Кератомикозы. Местом локализации становится роговой слой эпидермиса, в других слоях кожи воспалительные явления отсутствуют (пьедра, разноцветный лишай, парша, споротрихоз). Вызывают эту разновидность патологии следующие грибы: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
- Дерматомикозы. Характеризуются выраженным воспалительным процессом, локализуются на коже, волосистой части головы, на ногтях (фаус, трихофития, эпидермофития, микроспория). Провоцируют патологии следующие штаммы грибов: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
- Кандидамикозы. Затрагивает этот вид грибков слизистые оболочки, кожу и ее придатки. Часто объектом атаки грибков рода Кандида становятся внутренние органы.
- Глубокие микозы. Провоцируют тяжелые заражения всех слоев кожи, внутренних органов, слизистых оболочек, костей, мышц (мукороз, пенициллиоз, аспергиллез).
Выделяют отдельно псевдомикозы (актиномикоз, эритразма), которые не являются заболеваниями грибкового типа, но по симптомам схожи с истинными микозами. В этих случаях обязательно нужна дифференциальная диагностика. Диагностика в таких случаях очень важна, потому что помогает определить тип грибкового поражения или исключить его. От этого зависит назначения схемы лечения, ее длительность и эффективность.
Дерматомикозы
Грибки-дерматофиты глубокого проникаются в кожу, провоцируют дерматомикозы, к примеру, следующие известные патологии:
- микроспория;
- трихофития;
- эпидермофития;
- руброфития;
- фавус.
Относят этот вид патологии к разным болезням, которые создают рубцовые изменения, деформацию кистей рук, ногтей стоп, изменение структуры и выпадение волос. Поражают возбудители верхние, глубокие слои кожи, что приводит к появлению фурункулоподобных узлов, пустулезных высыпаний, обширных очагов воспаления. Для развития благоприятным условием становится нарушение гигиены стоп. Сначала грибок растет на коже ног, в межпальцевых промежутках, затем переходит на ногти.
Кандидозы
Патогенные микроорганизмы поражают глубокие и поверхностные слои кожи, распространяются на ногти, волосы, внутренние органы. Вызывают болезни грибы рода Кандида, болезни относятся к группе кандидамикозов. Выделяют следующие типы этих недугов:
- генерализованные;
- поверхностные;
- висцеральные.
Относятся грибы Candida к условно-патогенным. Дрожжеподобные возбудители можно обнаружить при диагностике в кишечнике, ротовой полости и у здорового человека. Сдерживает распространение патогенных микроорганизмов сильный иммунитет, а при его ослаблении начинается активное размножение кандид, что приводит к поражению кожного покрова туловища, ступней, головы, кистей. Клинические изменения отмечаются при всех типах кандидамикозов. Лечение зависит от тяжести течения, вида поражения.
Глубокий микоз
Это вид заболеваний, которые затрагивают глубокие слои кожи, внутренние органы. Болезни развиваются при сильном снижении защитных сил организма, изменении гормонального фона, нарушении обмена веществ. Относят следующие патологии к глубоким микозам:
- кокцидиоидоз;
- хромомикоз;
- риноспоридиоз;
- гистоплазмоз;
- споротрихоз;
- бластомикоз;
- мукороз;
- цефалоспориоз;
- мицетома;
- кладоспориоз;
- мадурская стопа;
- аспергиллез.
Кератомикоз
Это группа патологий, которые локализуются только на кутикулах волос, роговом, поверхностном слое кожи. Характерным признаком кератомикоза становится отсутствие воспалительных явлений. Возбудителями болезни являются плесневелые, дрожжеподобные грибы, дерматофиты (около 70 видов патогенов). Провоцируют они следующие заболевания:
- шимбери;
- белый лишай;
- черный лишай;
- черепицеобразный микоз;
- тропический белый и желтый лишай;
- узловатая трихоспория;
- пьедра;
- разноцветный (отрубевидный) лишай.
Как диагностировать грибок
Далее начинается визуальный осмотр, который помогает определить масштабность поражения, какие участки поверглись воздействию грибков. Врач должен обратить внимание на наличие иммунодефицитного состояния пациента. Для определения типа возбудителя необходимо сделать забор материала, который отправляют на лабораторное исследование. Опытный врач может при первичном осмотре поставить диагноз, но для составления схемы терапии нужно все равно провести изучение биоматериала. Для диагностики грибковых заболеваний применяют следующие методы:
- микроскопия – исследование под микроскопом биоматериала, распространенный и простой метод диагностики;
- исследование под лампой Вуда – специальный спектр ультрафиолетового освещения (люминесценция) помогает заметить грибковые поражения;
- бактериологический посев – точный способ диагностики, но проведение его занимает 2-3 недели, пока не вырастет колония на питательной среде;
- ПЦР-диагностика – самый точный способ определения вида патогенной микрофлоры, но для точного диагноза может потребоваться проведение нескольких анализов, что требует траты денег.
Лабораторные методы
Только своевременный точно поставленный диагноз поможет назначить эффективную схему терапии и сократить длительность курса. Лабораторная диагностика грибковых заболеваний является самым эффективным методом для определения типа возбудителя. Для выявления используют такие варианты исследования:
- бактериологический посев;
- гистологический анализ;
- ПЦР-диагностирование;
- иммунологическое исследование;
- микробиологические исследования;
- культкуральное исследование.
Дифференциальная диагностика микозов
Постановку точного диагноза затрудняет то, что при разных видах микоза появляются различные симптомы. В таких случаях используют дифференциальный метод диагностики, сравнивают с другими дерматологическими патологиями микоз. Часто признаки микоза путают с псориазом, но при соскабливании чешуек грибковая патология не будет кровоточить. Схожая симптоматика наблюдается и с парапсориазом.
Врач должен исключить вероятность развития нуммулярной экземы. Это особый вид патологии, который можно выявить только при лабораторной диагностике. Часто признаки грибка принимают за полиморфный фотодерматоз, который может развиваться только у взрослого человека и никогда не встречается у ребенка. Лабораторная и дифференциальная диагностика обязательна для постановки точного диагноза, назначения грамотного лечения.
Микробиологическая диагностика микозов
Это самый простой и распространенный метод выявления микоза на коже и в крови. Для точного диагноза необходимо собрать материал для исследования. При поражении волосистой части головы нужно при помощи пинцета собрать пораженные волосы, а с кожи сделать соскоб поврежденного участка. Лабораторные исследования при грибковых заболеваниях по микробиологическому методу проводятся при помещении биоматериала в раствор гидроксида калия 30%, потом на предметное стекло.
Анализ поможет вывить, где расположен грибок (снаружи или внутри кожи, волоса), его размеры. Если забор материала провести неверно, то анализ может дать ошибочный результат. Используют для диагностики следующие методы микробиологической диагностики:
- микроскопия с нативными и неокрашенными препаратами;
- микроскопия с окрашенными препаратами.
Методы исследования
При диагностике специалист должен учитывать структуру мицелия (строение гиф, их септированность, цвет), особенности строения спор, кондиев, учитывается их цвет, форма и размер, строение клеточной стенки и т.д. Для исследования готовят нативные, окрашенные препараты. Последние требуют обработки материала разными способами:
- PAS-окрашивание. Окраска такого типа помогает определить в стенках микроорганизмов нейтральные полисахариды. К ним относится глюкан-маннановый комплекс, который находится в клеточной стенке многих эумицетов. Он и провоцирует процесс окрашивания.
- PAS-реакция. Используется для диагностики грибковой инфекции тканевой формы. В лаборатории применяют для этого исследования разные модификации, к примеру, окраска по Гридли или реакция Бауэра.
- Метод Грама. Окраска этим способом помогает выявить наличие сопутствующих микрорганизмов.
- Окраска по Циль-Нильсону. Помогает определить кислотоустойчивые микроорганизмы. Если биоматериал жидкий, то готовят специальный неокрашенный мазок в просветляющих жидкостях для микроскопии: в равных пропорциях смешивают глицерин и спирт.
Культуральное исследование на грибы
Помещают посев биоматериала на питательную среду (выращивание), чтобы выделить чистую культуру при комнатной температуре. Диморфные грибы в таких условиях образуют мицелий, при росте до 37 градусов начинают формироваться дрожжеподобные клетки. Среда Сабуро применяется для дерматофитов и грибов Candida, для плесневелых (гифальных) необходима среда Чапека. Часто добавляют в состав антибиотик. Глубокие микозы могут определить только в клинико-лабораторных центрах из-за высокой контагиозности.
Люминесцентная диагностика грибковых заболеваний
Для определения пораженных участков кожи патогенной микрофлорой рода Микроспорум используют ультрафиолетовую лампу. Это вариант экспресс-диагностики, которая применяется при необходимости подтвердить наличие кожной инфекции, симптомы лишайных заболеваний. Ультрафиолетовое излучение не является главным способом определения грибка, это вспомогательный метод, поэтому выполнять его не обязательно.
Для осмотра больного используют лампу Вуда, они испускает УФ излучения, под их действием продукты жизнедеятельности грибка светятся ярким светом. Цвет зависит от того, какой вид возбудителя поразил пациента:
- зеленоватый – лишай волосистой части головы;
- голубой – красная волчанка на губах;
- желтоватый – плоские лишайные образования.
Иммунологический ферментный анализ крови на грибок
Для обнаружения микозов, поразивших кожные покровы, внутренние органы (гистоплазмоз, кокцидиоидоз) используют иммунологический ферментный анализ крови на грибковые заболевания. Часто используют эту методику в случае, если взять биопсию тканей для изучения по определенным причинам не получается. Основывается методика на поиск титра антител к конкретному типу грибкового заболевания.
Для этих целей используют определение IgG к аспергиллезу, кандидозу. Точность анализа составляет около 80%, в редких случаях можно получить ложноположительный результат при отсутствии глубоких микозов. Случается это при наличии у больного грибка слизистой оболочки рта или запущенной формы молочницы. Для ИФА требуется забор венозной крови, берут его утром рано или, спустя 4 часа после последнего приема пищи. Другой подготовки для проведения анализа не требуется.
Ответ на анализ будет через несколько суток после забора биоматериала. Редко длительность ожидания превышает 5 дней. Влияет на скорость проведения исследования качество оборудования в лаборатории, если есть причины провести дополнительное изучение образцов крови. Пациенту выдают по завершении процедуры заключение, где будет указано одно из значений:
- при подтверждении наличия грибка будет написано «положительный результат»;
- при отсутствии полной уверенности, что был обнаружен грибок в крови, пишут «сомнительный результат»;
- при отсутствии патогенной микрофлоры в образце биоматериала пишут «отрицательный результат»;
- при наличии хорошего оборудования при исследовании крови могут определить концентрацию клеток микоза и указать показатель в заключение.
ПЦР-диагностика грибковых заболеваний
Самым точным и достоверным способом диагностики грибка и других инфекционных заболеваний является полиразмерная цепная реакция. Обладает метод диагностики следующими преимуществами:
- низкая стоимость анализа;
- высокая точность;
- исследование биоматериала проводится быстро;
- для анализа можно собрать любой образец тканей (частичку кожи, слизистой, соскоб с подошвы стоп, пальцев рук, поверхности ногтей, волосы, кровь).
Главный недостаток этого исследования – узкая направленность. Чтобы диагностировать микоз, нужно точно знать, где он поразил организм человека. ПЦР определяет тип возбудителя, концентрацию в организме больного. Результаты будут известны через сутки, в некоторых случаях (при отсутствии неблагоприятных условий), ответы приходят в день сдачи (через 5-6 часов). Скорость выполнения исследования зависит от правильности забора образца, опытности медперсонала, загруженности работой лаборатории.
Как определить грибок в домашних условиях
При умении распознать симптоматику микозных патологий и применении домашних методов диагностирования, можно определить вид патогена. Пациент должен правильно оценить течение болезни, можно на первых этапах грибковое заболевание спутать с псориазом или лишаем. Чтобы этого избежать, нужно знать основные признаки микоза, которые отличают его от других недугов. Симптомы поражения грибком:
- ногти становятся желтого цвета, начинают слоиться;
- изменение формы ногтевой пластины;
- нет периодов ремиссии и обострения, начинается полное отслоение пластины, что не происходит при кожных патологиях и псориазе;
- место поражения имеет неприятный запах, болит при прикосновенно, появляется зуд, шелушение, могут образовываться бляшки на поверхности кожи;
- поражает грибок, как правило, межпальцевые промежутки на одной или обеих ногах, затем недуг распространяется на ноготь и остальную ступню.
Диагностика грибка ногтей на ногах с помощью перманганата калия
Если вы заметили, что ногти на руках, ногах начали видоизменяться, появился неприятный запах, то можно прямо дома проверить наличие или отсутствие инфекции. Вам понадобится для проведения анализа марганец, теплая вода и емкость. Процедура проводится следующим образом:
- при наличии признаков кожного заболевания нанести тонким слоем йод на этот участок;
- подождите 2 минуты;
- если проблема есть, то очаги поражения примут насыщенный окрас;
- здоровые участки кожи выделять не будут.
Сколько стоит диагностика грибковых заболеваний в клиниках Москвы
| Название | Вид исследования | Цена, рублей |
| Микроскопическое исследование проб ногтей | ||
| Микроскопия и посев (кожа/ногти) | ||
| Посев на дрожжеподобные грибы | ||
| Мед. центр «Академия здоровья» | Микроскопическое исследование соскоб ногтей | |
| Микроскопическое исследование соскоб кожи | ||
| Микроскопическое исследование волос | ||
| Соскоб, анализ на вирусные инфекции. | ||
| «Медлайн Сервис» | Анализ крови на Candida (ДНК) |
Видео
Внимание! Информация, представленная в статье, носит ознакомительный характер. Материалы статьи не призывают к самостоятельному лечению. Только квалифицированный врач может поставить диагноз и дать рекомендации по лечению, исходя из индивидуальных особенностей конкретного пациента.
Нашли в тексте ошибку? Выделите её, нажмите Ctrl + Enter и мы всё исправим!Чешуйки или волосы кладут на предметное стекло (стекло должно быть обезжирено) и заливают одной-двумя-тремя каплями 30% раствора едкого кали или едкого натра и накрывают покровным стеклом. В течение 2-3 минут при легком подогревании на пламени спиртовой горелки на препарат слегка надавливают покровным стеклом до образования
серого облачка при исследовании чешуек. Волосы не должны быть разрушены, они при таком нагревании только набухают. При микроскопическом исследовании (увеличение в 100-200 раз) при затемненной диафрагме обнаруживаются грибковые элементы - споры или нити мицелия. Необходимым условием успешности микроскопического исследования является тщательность добывания чешуек и волос, которые должны забираться с пораженных очагов специальным пинцетом (ресничный пинцет). Необходимо обращать внимание не только на хорошо видимые волосы, корки и чешуйки, но и на мало заметные остатки волос (так называемые пеньки) и черные точки, которые извлекаются скальпелем или гистологической иглой. Никогда не следует довольствоваться указанием больного на места поражения, необходимо самому врачу внимательно осмотреть всю волосистую часть головы.
В волосе, пораженном трихофитией, споры грибка располагаются цепочкой. При микроспории споры гораздо мельче, чем при стригущем лишае, в цепочки не складываются и располагаются снаружи волоса. Внутри волоса проходят тяжи из септированного мицелия. Волос как бы одет в чехол ив спор. При парше наблюдаются полиморфные споры, грубые разнообразные нити и обычно пузыри воздуха (рис. 48).
При этом грибки не поражают весь волос сплошь, а остаются непораженные участки.
Для получения материала с гладкой кожи делают соскоб чешуек с. периферических участков поражения острой ложечкой или скальпелем. Соскоб с ногтей удобнее производить острым медицинским ножичком (скальпелем), снимая небольшие, но глубокие срезы с внутренней поверхности ногтевой пластинки или же соскабливая отрубевидный порошок с роговых пластинок ногтя.
Исходный материал кипятят в пробирке со щелочью и потом оставляют стоять в этой пробирке часов на 12-20.
После этого содержимое центрифугируется и осадок исследуется под микроскопом (метод Н. А. Черногубова).
Грибки хорошо выращиваются на искусственных питательных средах, содержащих углеводы и вещества белковой природы. Особенно распространена так называемая оригинальная среда Сабуро, пивное сусло, агар и овощи.
Микроскопия – это один из основных методов в лабораторной диагностике микозов. Проводить это исследование необходимо с того дня, когда на питательной среде появляются первые колонии. Перед микроскопическим исследованием необходимо знать является гриб дрожжевым или плесневым – по внешнему виду колоний, результатам проростковой пробы.
При микроскопии плесневых грибов учитывают структуру мицеллия (т.е. особенности строения гиф, их цвет, септированность; особенности строения конидиев и спор, включая размер, форму, цвет конидиев; строение их клеточной стенки, септированность и т.д.)
Для проведения микроскопии готовят нативные и окрашенные препараты. Для приготовления окрашенных препаратов материал обрабатывают различными способами:
1. Окраска PAS -методом. Использование РAS-метода позволяет выявить нейтральные полисахариды в стенках микроорганизмов. Нейтральные полисахариды – это глюкан-маннановый комплекс, находящийся в клеточной стенке большинства эумицетов, за счет него и происходит окрашивание.
PAS -реакции – один из методов микроскопической диагностики тканевых форм грибковой инфекции. В практических лабораториях для микроскопической диагностики используются различные модификации этого метода: окисление хромовой кислоты – реакция Бауэра; окраска по Гридли.
2. Окраска по методу Грама (модификация по Грам-Вайгерту) для выявления сопутствующих микроорганизмов.
3. Окраска по Циль-Нильсону для выявления кислотоустойчивых микроорганизмов. Если исследуемый материал жидкий , то из него готовят неокрашенный мазок для микроскопии в просветляющих жидкостях: смесь спирта с глицерином в соотношении 1:1.
Следующий этап это микологическое исследование – выделение и идентификация грибов. Рассмотрим особенности этого этапа в зависимости от исследуемого материала.
Микологическое исследование
Культуральное исследование. Культуральное исследование основано на выделение возбудителя из исследуемого материала. Сроки культивирования различны для разных видов грибов (от 2-4 дней до 4 недель), при подозрении на диморфные грибы культуру выделяют до 8 недель. Основными средами для культивирования в микологической лаборатории является среда Сабуро: декстрозный агар Сабуро (плотная среда), бульон Сабуро (жидкая среда). Для подавления роста бактериальной флоры в среду Сабуро добавляют антибиотики (хлорамфеникол, гентамицин, реже стрептомицин, пенициллин). Для подавления роста сапрофитных грибов в среду добавляют циклогексимид, хлорамфеникол. Существуют готовые среды с циклогексимидом (Mycobiotic Mycosel ).
Оптимальным режимом культивирования для большинства патогенных грибов является 30 0 С, 20-25 0 С, реже 37 0 С – при подозрении на диморфные грибы. Длительность инкубации для большинства грибов составляет до 6 недель; если по прошествию этого времени роста не наблюдается, то дают отрицательный ответ. В случае подозрения на диморфный микоз при отсутствии роста в течение 6 недель, культуру выдерживают 8 недель и только после этого дают отрицательный результат.
При культуральном исследовании диагностически значимым являются:
Выделение плесневого или дрожжевого гриба, при исследовании стерильного в норме материала;
Выделение диморфного гриба.
Алгоритм микологического исследования
1. Определение грибковой этиологии возбудителя (микроскопия).
2. Определяют дрожжевой гриб или плесневый:
Микроскопия клинического материала (наличия мицеллия);
Характер колоний на питательной среде, скорость роста (дрожжевые грибы растут 48 часов, плесневые грибы растут медленно).
3. Окончательную идентификацию гриба до уровня вида (внутривидовая) проводят с использованием биохимических тестов и иммунологических методов. При исследовании биохимических свойств изучают способность выделенной культуры к ассимиляции (ауксанограмма) и ферментации (зигограмма). Возможно использование автоматизированных систем идентификации (тест-системы для идентификации грибов).
Критерии этиологической значимости выделения условно-патогенных грибов
1.Если в нативном препарате видны только бластоспоры (сапрофитная вегетация) то это расценивается как носительство.
3.Если бластоспоры единичные и преобладает псевдомицелий, то это признак глубоких органных поражений.
4.Активное почкование бластоспор – свидетельство острого процесса.
5.Количественную оценку результатов – выделение гриба из разведений
10 -фекалии, моча;
10 – мокрота.
6.Повторность высеваемости одного и тогоже вида гриба
7. Наличие антител к выделенному штамму.
Микологическое исследование отделяемого слизистых
1. Подготовка материала. После забора материала со слизистых тампон помещают в 2 мл жидкой среды Сабуро или сусло-агара, или МПБ, разлитого в стерильные пробирки. Их тщательно встряхивают в течение 5 минут, стараясь не замочить пробку. Из полученной взвеси готовят ряд разведений 1:10 и 1:100 и т.д.
Из каждого разведения высевают по 0,1мл на 2 чашки сусло-агара, агара Сабуро или МПА. Посевы на плотных средах и пробирку с жидкой средой с тампоном для обогащения инкубируют при +37 0 С в течение 48 часов:
После пройденного времени посевы просматривают и подсчитывают число колоний и ориентировочно определяют количество дрожжевых колоний. Их количество умножают на 20 и на разведение, из которого сделан высев;
Если на чашках с посевом, сделанным из разведений роста нет, то делают повторный посев из среды обогащения в чашку с сусло-агаром.
Микологическое исследование крови
1. Подготовка материала. После забора крови ее разводят 1:10, для того, чтобы бактерицидные свойства крови не ингибировали рост грибов.
2. Культуральное исследование.
5-10мл крови засевают в 50-100 мл жидкой среды Сабуро с 2% глюкозой. При температуре 37 0 С их инкубируют в течение недели;
Через 5 дней делают контрольный высев. Для этого стерильной пипеткой забирают осадок 3-4 капли из пипетки засевают на сусло-агар и растирают стерильной бактериологической петлей;
Засеянные чашки в течение 2-5 дней держат в термостате при 37 0 С;
Если обнаружен рост, то выдают предварительный ответ о фунгемии, а дальнейшую идентификацию гриба проводят в ходе исследования.
Микологическое исследование биоптатов
1.Для забора материала используют метод отпечатков.
2. Культуральное исследование:
Делают отпечаток исследуемым кусочком ткани на поверхность плотной питательной среды Сабуро;
Этот же кусочек ткани помещают в 50мл жидкой питательной среды (сусло или Сабуро);
Посевы инкубируют при 37 0 С в течение 5 дней.
4402 0
К сожалению, и в настоящее время можно констатировать, что диагностика грибковых заболеваний нередко бывает несвоевременной (зоны поредения волос, шелушение часто принимаются за «перхоть», «сухость»). При этом субьективные ощущения (зуд, боль и др.) в очагах поражения зачастую не бывают, и больные в силу этого долгое время не обращаются на прием к специалисту.
Изменения ногтей (уродливые, крошатся, истонченные) расцениваются как «ониходистрофии» после ушиба, отморожений и др. В то же время (даже изолированные поражения, в т.ч.ногтей) могут вести к формированию аллергической перестройки организма, влиять на кровеносные и лимфатические сосуды и др. Больные при этом неопределенно долго остаются источником распространения грибковой инфекции. В связи со сказанным неизменно актуальной является своевременная лабораторная диагностика микозов, проведение возможно раннего лечения.
Разнообразие клинических вариантов грибковых заболеваний, преимущественно встречающихся у человека, а также особенности микробиологии, морфоструктуры, иммунологических и иных параметров различных видов(и родов) грибов обусловило наличие значительного количества методов диагностики микозов; следует отметить, что имеющиеся методы непрерывно совершенствуются и (сравнительно недавно) имеют своеобразный уклон в сторону иммунологических и молекулярно-генетических тестов.
С другой стороны, культуральные исследования и до сих пор «находятся в разряде стандартов, близких к золотым» и применяются для подтверждения сомнительных результатов иных исследований; существует мнение, что сочетание культурального и молекулярно-генетического методов при «сомнительных» в диагностическом плане формах микозов (особенно диссеминированных, на фоне иммуносупрессии любого генеза, с поражением внутренних органов и др.) является одним из наиболее достоверных способов регистрации микотической природы процесса.
Не следует, однако, пренебрегать «старыми» методиками, в частности бактериоскопией (особенно припервичном обследовании), тем более, что в повседневной практике микроскопическая «верификация» микоза во многих дерматологических учреждениях применяется наиболее широко в сравнении с иными тестами.
С учетом значительного роста количества аллергических проявлений на коже (а иногда и висцеральных) — при длительном, хроническом, периодически обостряющемся течении микоза (кожи, ногтей и др.) целесообразна постановка аллергологических тестов, позволяющих выявить степень сенсибилизации организма, в т.ч, при сочетанной грибково-бактериальной инфекции; данный факт может повлиять на специфику лечения у конкретного больного — например, определить рациональное назначение антимикотиков и десенсибилизирующих средств и др.
Традиционно, предположительный диагноз грибкового заболевания ставится на основании клинических проявлений и подтверждается лабораторными исследованиями.
В данном разделе книги мы кратко приводим базовые методы регистрации микозов (независимо от их локализации), учитывая «тип исследования и взятый материал». Следует отметить, что полиморфизм клинических проявлений микозов (в т.ч. с аллергическим компонентом) обусловливает разнообразие патологического материала, подлежащего исследованию. При этом успех поиска элементов гриба зависит от правильного взятия его.
Так, периферическая зона эритемато-сквамозных, часто фигурных высыпаний более богата мицелием, спорами гриба; на волосистых участках поражения берутся скрюченные, белесоватые, обесцвеченные, тусклые волосы или их обломки — «пеньки» (забор волос целесообразно контролировать с помощью лампы Вуда). Определенных навыков требует забор материала (с помощью иглы) из т.н. «черных точек» — темных роговых конусов в устьях фолликулов.
В повседневной практике обычно исследуются чешуйки кожи(собираются путем соскоба, мазка, с использованием липкой ленты), соскоб измененных ногтей, зона подногтевого гиперкератоза, а также отделяемое слизистых оболочек. По показаниям исследуют мокроту, лаважную жидкость, мочу (у пациентов с некатетеризированным мочевым пузырем); моча из мочеприемников, подкладных суден не может быть взята для исследования.
Диагностическое значение имеет также кровь (для культурального исследования, а также ИФА, ПЦР), ликвор и иные биожидкости организма (плевральная, внутрисуставная, внутрибрюшинная — в т.ч. собранные методом аспирации или дренирования); в отдельных случаях (в зависимости от топического диагноза) имеют значение желчь, фекалии, пунктаты подкожных абсцессов, отделяемое свищей (особенно при глубоких микозах). Даже несложные диагностические тесты требуют точного соблюдения ряда условий.
Для диагностики грибковых заболеваний в настоящее время применяются методы:
- микроскопия; основана на обнаружении возбудителя в исследуемом материале, в т.ч. в тканях человека;
- культуральное исследование с последующим микроскопическим изучением культуры гриба;
- гистологическое исследование (г.о. при глубоких микозах);
- иммунные и молекулярные методы.
Микроскопическая диагностика
Микроскопическая диагностика — стала возможна с периода появления специальной оптической, а в дальнейшем электронно-микроскопической техники, позволившей детально изучить ульттраструктуру грибов. При этом диагностическое значение имеет обнаружение элементов гриба - тонких ветвящихся нитей, образующих грибницу (мицелий), округлых телец (споры; являются репродуктивным «органом» грибов).Микроскопическая диагностика предполагает изучение неокрашенных (нативных) и окрашенных препаратов. Данный метод, как отмечалось, более всего распространен в дерматологической практике ввиду сравнительной несложности и дешевизны, но, с другой стороны, бывает недостаточно чувствительным, требует в части Случаев повторных анализов, подтверждения иными методиками.
Так, при исследовании неокрашенных препаратов помимо элементов гриба, можно обнаружить эпителиоциты, клетки крови,различные загрязнения из внешней среды, что затрудняет поиск возбудителя микоза, требует дополнительной «подготовки» материала — т.н. «просветления» его (мацерации), концентрирования, разведения и т.п.
Все же прямая микроскопия нативных препаратов позволяет достаточно быстро поставить диагноз микоза, определить, на какие питательные среды (при необходимости) следует засевать материал, существует мнение, что положительный результат ее может оставаться единственным лабораторным подтверждением микоза при отрицательном ответе в культуре (А.Ю.Сергеев, Ю.В.Сергеев, 2003).
Среди различных вариантов «просветления» препаратов наиболее распространенным является добавление к исследуемому материалу КОН или NаОН (чаще используется для обнаружения грибов в чешуйках кожи, волосах, а также ряда возбудителей глубоких микозов в мокроте, биоптатах).
Для мацерации измельченных и помещенных на предметное стекло чешуек проводится 10-20% раствором едкого натра (или калия) — 1-3 капли, в течение 10-20 мин; препарат слегка придавливают покровным стеклом, для более скорой мацерации — подогревают на пламени до появления паров. Просмотр ведут сначала под малым увеличением, затем — под большим (сухая система).
Правильно приготовленный препарат, не подвергшийся грубым механическим, термическим и химическим воздействиям, представляет картину гомогенной массы, состоящей из эпителиоцитов, продуктов клеточного распада элементов гриба — нитей мицелия и спор.
Измененные волосы помещают на предметное стекло с 10-30% щелочью и обрабатывают тем же способом, но более длительно - от 20 мин до 3-4 ч. При обильном содержании пигмента рекомендуют предварительно обесцветить волосы 5% раствором перекиси водорода. Придают значение обнаружению элементов гриба, а также расположению их по отношению к волосу.
Подготовка материала из патологически измененных ногтей (лучше тонкий порошок, полученный соскобом из глубины очага) проводится аналогично, но с использованием 30% едкого натра, обязательным осторожным подогреванием на пламени до легких паров и экспозицией около 1ч (иногда до нескольких часов). Обработанные щелочью препараты не следует хранить более 1,5-2ч ввиду их «порчи» (кристаллизация реагента, снижение диагностической достоверности определяемой микроскопической картиной).
Вместо КОН или №ОН можно использовать: а)раствор смесь КОН с 15% ДМСО; б) смесь фенола (2 части) с хлоралгидратом (2 части) и молочной кислотой (1 часть); в) калькофлюоровый белый, имеющий сродства к хиги-ну и целлюлозе; для исследования необходим люминесцентный микроскоп (наблюдается голубое или зеленое свечение, что зависит от применяющегося фильтра). При исследовании ликвора (при подозрении на криптококкоз) часто использовалась окраска с тушью.
Кулага В.В., Романенко И.М., Афонин С.Л., Кулага С.М.