Цитохимические методы преследуют отождествление химических и ферментных веществ в клетках, используя для этого цветные реакции. Цитохимические препараты сохраняют клеточную структуру, что допускает выявление клеток и внутриклеточную локализацию исследувмого составного. Вот почему в гематологии отдается предпочтение не биохимическим, трудоемким, разрушающим клеточную структуру о относящимся к весьма разнородной клеточной популяции, а цитохимическим способам.
Цитохимия доказала, что среди морфологически одинаковых клеток имеются существенные химические и ферментативные различия.
Гликоген (реакция ШИК) (PAS) - метод Гочкисс - Мак Минус
Принцип ШИК-реакции . Полисахариды выявляются путем реакции, окисляющей спиртные группы, которые преобразуются в альдегидные группы, и отождествления последних путем цветной реакции реагентом Шифф.
Реагенты для ШИК-реакции : 1. Закрепляющий смесь спирт-формалин: 9 частей абсолютного этилового спирта +1 часть 40% формалина; сохранять при температуре +4°.
2. Периодння кислота, 1% водный раствор. Раствор бесцветный. Хранить в бутылке из коричневого стекла, в темноте, при лабораторной температуре. Пожелтевший раствор неприменим.
3. Реагент Шиффа. Развести 1 г основного фуксина в 200 мл дистилированной воды при температуре кипения. Болтать 5 минут, охладить до температуры 50°, профильтровать и добавить 20 мл нормальной соляной кислоты. Охладить до 25°, добавить 2 г метабисульфита натрия или калия, которые полностью обеспечивают раствор. Раствор должен простоять сутки в условиях темноты и холода (+4°). Затем добавить 2 г активированного угля, поболтать 1 мин. и профильтровать.
Полученный фильтрат прозрачный и бесцветный. Допускается слегка желтоватый оттенок; если раствор розовеет, становится неприменимым. Хранить при температуре +4° в герметически закрытой бутылке из коричневого стекла.
4. Зеленый светлый -1% водный раствор.
5. Диастаз: неразжиженная слюна человека или 0,1% раствора амилолитического-диастатического фермента в физиологическом солевом растворе.
Техника проведения ШИК-реакции
1) 10-тиминутное закрепление мазков смесью спирт-формалин; промывание дистилированной водой;
2) окисление 1% раствором периодной кислоты, 10 мин.; промывание дистилированной водой;
3) окраска реагентом Шиффа в накрытой посуде, в условиях темноты и холода, в течение 2 часов; промывание проточной водой;
4) контрастная окраска 1% зеленым-светлым в течение 1 минуты; промывание проточной водой.
Контрольный закрепленный мазок подвергается инкубации диастазом, 60 мин. в условиях комнатной температуры для выборочного удаления гликогена. После промывания дистилированной водой подвергается обработке по обычному методу.
Оценка результатов ШИК-реакции
Гликоген , окрашенным в багряно красный- цвет, представляется в виде зерен или рассеянный. Для контроля реакции используются зрелые гранулоциты мазка. Помимо гликогена ШИК положительную реакцию дают и другие вещества углеводной природы, такие как, муцин, мукопротеины, цереброзиды, фибрин. Дифференциация гликогена от этих составных осуществляется путем предварительной обработки диастазом, после чего гликоген более не окрашивается.
В гранулоцитах гликоген находится в рассеянном виде уже на стадии промиелоцита и начинает увеличиваться по мере созревания. В нормальных условиях лимфоциты отрицательны или в 20% из них могут находиться несколько мелких зерен гликогена. Моноциты отрицательные либо имеют тонкую зернистость.
Интенсивность окраски определяется полуколичественно. В реакция ШИК отражается в виде гликогенного показателя, или среднего показателя реакции (Астальди). Нормальный показатель гликогена колеблется в пределах от 0,10 до 0,30. Обычно лишь у патологических лимфоцитов наблюдается степень нагрузки более 3.
Значилось метода ШИК-реакции
:
а) При постановке дифференциального диагноза отдельных цитологических видов острой лейкемии:
- Миелобласты и промиелоуиты ШИК-отрицательные или приобретают слабую диффузную окраску. Тела Ауера дают положительную реакцию, которая ослабевает после переваривания со слюной.
- Лимфобласты при острой лейкемии и лимфосаркоме дают резкую ШИК-положительную реакцию в виде зерен или крупных блоков гликогена.
- Эритробласты при эритремии и острой эритролейкемии дают резко положительную рассеянную или зернистую реакцию, в противоположность нормальным эритробластам, которые ШИК-отрицательные;
- Моноцитоидные б ласты непостоянно слабо положительные, с тонкой зернистостью.
б) В целях постановки диагноза и наблюдения за эффективностью лечения при хронической лимфатической лейкемии: завышенный показатель гликогена указывает на тяжелую форму заболевания и тяжкий прогноз.
Рост гликогена
в патологических лимфоцитах не характерное для лейкемии явление, оно объясняется ростом метаболической активности при любом виде лимфоидной пролиферации.
в) Для дифференциации клеток Гоше от иных макрофагов с накоплением.
Шика реакция Шика реакция
внутрикожная проба с дифтерийным токсином, применяемая для установления противодифтерийного иммунитета. Для постановки Ш.р. внутрь кожи ладонной поверхности предплечья туберкулиновым шприцем вводят 0,2 мл стандартного дифтерийного токсина, содержащего 1/64 ДЛМ для морской свинки. Результат учитывают через 72 - 96 ч. У людей, не имеющих Ат против токсина или имеющих их мало, на месте введения образуются краснота и инфильтрат (положительная реакция); у людей, в с-ке к-рых содержатся антитоксические Ат в концентрации 1 /30 АЕ и больше, инфильтрат не развивается или он меньше 1 см (отрицательная реакция). Результаты Ш.р. используют для оценки коллективного иммунитета и проведения профилактических прививок. В настоящее время с этой целью применяют РПГА с эритроцитарным диагностикумом.
(Источник: «Словарь терминов микробиологии»)
Смотреть что такое "Шика реакция" в других словарях:
ШИКА РЕАКЦИЯ - (Schick) предложена в 1913 г. для определения степени восприимчивости к дифтерии. Ш. р. выполняется путем строго внутрикожного введения дифтерийного токсина в объеме 0,2 см3, заключающих 1/40 Dim (см. Дифтерия). Токсин вводится в кожу левой руки; …
- (В. Schick, 1877 1967, амер. педиатр) кожная проба с дифтерийным токсином для оценки уровня антитоксического иммунитета, обусловливающего невосприимчивость человека к дифтерии … Большой медицинский словарь
Кожная проба, применяемая для оценки восприимчивости человека к дифтерии; одна из аллергических диагностических проб (См. Аллергические диагностические пробы). Предложена в 1913 австрийским педиатром Б. Шиком (В. Schick). Проводится путём … Большая советская энциклопедия
ШИКА РЕАКЦИЯ - (предложена австрийским педиатром B. Schick, 1877–1967) – кожная проба, применяемая для оценки восприимчивости человека к дифтерии; основана на оценке выраженности местной реакции (покраснение, отек), развивающейся через 3–4 суток после… … Энциклопедический словарь по психологии и педагогике
реакция Шика - Внутрикожная проба с дифтерийным токсином. [Англо русский глоссарий основных терминов по вакцинологии и иммунизации. Всемирная организация здравоохранения, 2009 г.] Тематики вакцинология, иммунизация EN Schick testSchick control … Справочник технического переводчика
Тест для определения восприимчивости человека к дифтерии. Небольшое количество дифтерийного токсина вводится под кожу пациента; покраснение и припухлость места введения свидетельствуют об отсутствии у человека иммунитета к дифтерии, поэтому в… … Медицинские термины
РЕАКЦИЯ ШИКА - (Schick test) тест для определения восприимчивости человека к дифтерии. Небольшое количество дифтерийного токсина вводится под кожу пациента; покраснение и припухлость места введения свидетельствуют об отсутствии у человека иммунитета к дифтерии … Толковый словарь по медицине
- (РН) лабораторный тест, в к ром Ат иммунной с ки нейтрализуют, обезвреживают, тормозят биол. активность (летальную, инфекц., токсическую, ферментативную и др.) микроорганизмов, их токсинов и ферментов. РН применяют: 1) для качественного и… … Словарь микробиологии
ДИНА РЕАКЦИЯ - (Dick), названа по имени супругов Дик, предложивших ее для опре деления восприимчивости к скарлатине. Эти американские исследователи считают возбудителем скарлатины особый вид гемолитического стрептококка, к рый, локализуясь первично на слизистой … Большая медицинская энциклопедия
ВНУТРИКОЖНАЯ РЕАКЦИЯ - ВНУТРИКОЖНАЯ РЕАКЦИЯ, или и н тракутанная (от лат. intra внутри и cutis кожа), наряду с кожной, подкожной и конъюнктивальной, применяется со след. целью: 1) для обнаружения аллергического состояния, т. е. повышенной чувствительности к… … Большая медицинская энциклопедия
Книги
- Большая медицинская энциклопедия в 35 томах. Том 35. Шика реакция - Ящур , Н.А. Семашко. Большая Медицинская Энциклопедия ставит перед собой задачу быть не только научным справочником по всем вопросам медицины и смежных областей, но и дать читателю сведения, при помощи которых он…
Аллергены и токсины
Диагностические препараты
Иммуноглобулин противококлюшный антитоксический человека (Россия)
Сыворотка противодифтерийная лошадиная очищенная концентрированная жидкая (Россия)
Сыворотки и иммуноглобулины
Вакцина туберкулезная БЦЖ-М сухая (для щадящей первичной иммунизации, Россия)
Вакцина туберкулезная (БЦЖ) сухая для внутрикожного введения (Россия)
Акт-Хиб (Hib-вак, Южная Корея)
Коклюшная моновакцина (Россия)
Содержит коклюшные бактерии, консервант – мертиолят. Используют только по эпидпоказаниям вочагах коклюшной инфекции.
Содержит в 1 дозе 10 мкг полисахарида Haemophilus influenzae тип b, конъюгированного со столбнячным анатоксином, консервант – трометамол. Применяют для вакцинации детей с 2 месяцев по эпидпоказаниям.
Mycobacterium bovis BCG-1. Вакцинный штамм получен путем длительного (в течение 13 лет) выращивания туберкулезных микобактерий бычьего вида в неблагоприятных условиях на картофельно-глицериновой среде с добавлением желчи. Применяют для специфической профилактики туберкулеза. Вакцинацию проводят в на 5-7 день жизни, когда организм свободен от микобактериальной инфекции. Ревакцинации подлежат все здоровые дети, подростки и взрослые до 30 лет, отрицательно реагирующие на туберкулин. Механизм иммунитета при туберкулезе полностью не раскрыт. В клинической практике основным критерием напряженности вакцинального иммунитета служит переход отрицательной кожной реакции на туберкулин в положительную.
Содержит лиофильно высушенные в 1,2%-ном растворе натрия глютамината живые бактерии вакцинного штамма Mycobacterium bovis BCG-1. Применяют для щадящей специфической профилактики туберкулеза (первичная вакцинация) у новорожденных в районах с неблагополучной ситуацией по туберкулезу.
Содержит антитела против экзотоксина дифтерийных палочек. Антитоксическую активность выражают в международных единицах (10000 и 20000 МЕ/мл). Применяют для лечения больных дифтерией. Кроме лечебных целей, противодифтерийную сыворотку используют для определения токсигенности культур дифтерийной палочки в реакции гелевой преципитации.
Содержит иммунологически активную фракцию плазмы крови доноров с антителами к экзотоксину коклюшного микроба (не менее 750 ЕД антитоксических противококлюшных антител). Применяют для лечения коклюша.
Содержит очищенный дифтерийный токсин в 0,2 мл препарата 1/40 DLM токсина для морской свинки. Применяют для внутрикожных проб с целью иммунодиагностики. У лиц в месте введения развивается воспалительная реакция. Если в крови содержится более 0,03 ME антитоксина, проба отрицательна. Ранее пробу Шика использовали часто для выявления лиц, восприимчивых к дифтерии. В настоящее время из-за возможности осложнений ее применение ограничено строгими эпидемическими показаниями.
ШИКА РЕАКЦИЯ (Schick) предложена в 1913 г. для определения степени восприимчивости к дифтерии. Ш. р. выполняется путем строго внутрикожного введения дифтерийного токсина в объеме 0,2 см 3 , заключающих 1 / 40 Dim (см. Дифтерия). Токсин вводится в кожу левой руки; в кожу правой руки вводится для контроля такое же количество токсина, прогретого при 100° в течение 10 мин. Результаты впрыскивания отмечаются через 24 и 96 часов, при этом могут наблюдаться следующие явления: 1. При полном отсутствии реактивных явлений на месте впрыскивания «контрольного» (гретого) токсина на месте впрыскивания активного токсина появляются краснота и инфильтрат, сопровождающиеся ощущением легкого жжения и зуда. Явления эти развиваются в первые сутки, достигают максимума на четвертые сутки, затем исчезают, оставляя на некоторое время пигментацию кожи. По величине красноты и инфильтрата можно судить о степени реакции, которая обозначается так: + («сомнительная» реакция-при неясно выраженном инфильтрате и легкой красноте), + (при красноте в диаметре не более 1,5 см), + + (если краснота имеет диаметр от 1,5 до 3 см) и + + + (если краснота больше 3 см); этот тип реакции называется «положительной» Ш. р. 2. При отсутствии каких-либо реактивных явлений на месте впрыскивания как гретого, так и активного токсина говорят об «отрицательной» Щ. р. 3. Если реактивные явления отмечаются на обеих руках в одинаковой степени, то такое явление обозначается как «ложная» Ш. р. Степень ложной (с гретым токсином) реакции отмечается (подобно положительной) одним, двумя, тремя знаками. Реакция на гретый токсин имеет нек-рые качественные отличия от реакции на активный токсин: быстрое появление и исчезновение (обычно в течение 36-48 час.) и преобладание эксудативных явлений над инфильтративными. 4. Если реактивные явления отмечаются на обеих руках, но степень их разная, то говорят о «комбинированной» Ш. р.-при преобладании явлений на стороне активного токсина, и об «извращенной» Ш. р.-при преобладании явлений на стороне гретого токсина. Общепринятые представления о сути Ш. р. сводятся к следующему: если в крови испытуемого субъекта не имеется антитоксина или он содержится в количестве, меньшем, чем "/зо -А-Е в 1,0 сыворотки, то впрыскиваемый вну- трикожно токсин вызывает реактивные явления, обозначаемые как «положительная» Ш. р. Если же в крови испытуемого субъекта имеется достаточное количество антитоксина (по Шику 1 / 30 , по Берингу 1 / хоо и больше АЕ в 1,0 сыворотки), то последний производит нейтрализацию введенного токсина, и получается «отрицательная» Ш. р. Эти положения подтверждаются следующим наблюдением: если чувствительному к дифтерийному токсину субъекту ввести нейтральную смесь «токсин-антитоксин», то как правило при этом никакой реакции на месте инъекции этой смеси не наблюдается. Кроме того был проделан целый ряд одновременных прямых определений количества антитоксина в крови по способу Ремера параллельно с Ш. р. (Шик, Рамон, Вексель и др.). Эти опыты в большинстве случаев обнаруживают отмеченную зависимость результата Ш. р. от количества антитоксина в крови. Наблюдаемые иногда несоответствия между этими явлениями не могут поколебать общего правила, т. к. бывают они достаточно редко: Иенсен (Jensen) напр. отметил наличие отрицательных Ш. р. при ничтожном содержании антитоксина « I /i 00 AE в 1,0 сыворотки) в 9% случаев. При оценке результатов Ш. р. необходимо учесть, что в раннем грудном возрасте нередко наблюдается отрицательная Ш. р. при отсутствии антитоксина в крови. Это объясняется присущей раннему детскому возрасту анергией кожи. Что касается т. н. ложной Ш. р. и ее вариантов (комбинированная, извращенная Ш. р.), т. е. реакции кожи на гретый токсин, то она объясняется чувствительностью организма к термостабильным продуктам метаболизма дифтерийной палочки и веществам питательного бульона. Эта чувствительность аллергического характера. Как показал Зигль (Siegl), она слагается из двух компонентов-специфического и неспецифического по отношению к дифтерии. Наблюдения Целлера (Zoller) показали полную идентичность ложной реакции с внутри-кожной реакцией на анатоксин (0,2 анатоксина, разведенного в отношении 1: 100)-это так называемая реакция Целлера. В зависимости от результата реакций на токсин и на анатоксин Целлер делит всех людей на 4 группы (см. табл.). Процесс иммунизации против дифтерии Целлер представляет себе следующим образом: чувствительные к дифтерии лица (I группа с Характеристика группы Реакция | Реакция Целлера Шлка f 1 Чувствительные к II f длфтерчи III 1 Иммунные к двф- IV / терии + + + 1 Стадий +) аллергии положительной Ш. р.) при встрече с дифтерийной палочкой (б-нь или носительство) или при искусственной иммунизации сенсибилизируются по отношению к микробу и его продуктам. Кожа их дает реакцию аллергии; но т. к. при этом еще не выработалось достаточного количества антитоксина, то кожа реагирует и на активный токсин (II группа с ложной или комбинированной Ш. р.). В дальнейшем количество антитоксина в крови увеличивается настолько, что реакция на активный токсин делается отрицательной, но аллергия еще остается (III группа с извращенной Ш. р.); наконец последняя исчезает, и наступает прочный иммунитет, характерный для лиц IV группы (с отрицательной Ш. р.). Значение Ш. р. как иммуно-реакции определяется господствующими взглядами на природу иммунитета при дифтерии. По современным представлениям в основе последнего лежит наличие достаточного количества антитоксина в крови. Эти представления, как известно, определяют современную практику иммунизационной профилактики дифтерии (смеси токсин-антитоксин, анатоксин). С этой точки зрения Ш. р., удобно заменяющая громоздкое прямое определение антитоксин в крови по способу Ре-мера, может считаться идеальным способом выяснения состояния иммунитета, resp. чувствительности, человека к дифтерии. Вопрос о минимальном количестве антитоксина в крови, потребном для осуществления прочного иммунитета к дифтерии, является спорным; во всяком случае необходимо отметить сравнительную редкость заболевания дифтерией лиц, имеющих отрицательную Ш. р.; кроме того можно указать и на прямое экспериментальное подтверждение этого вопроса: Гетри, Маршаль и Мосс (Gu-tnrie, Marshall и Moss) заразили путем смазывания зева вирулентной культурой дифтерии восемь добровольцев, из к-рых четыре имели положительную Ш. р., а четыре отрицательную. В результате 4 лица первой группы проделали типичное заболевание, из 4 человек с отрицательной Ш. р. у 3 было отмечено временное носительство дифтерийной палочки без каких-либо признаков заболевания. Эпидемиологическому значению Ш. р. посвящено громадное количество работ. Из них явствует, что ГЛ. р. представляет надежный метод определения степени иммунной прослойки коллектива по отношению к дифтерии. Оказалось, что если распределить положительные Ш. р. по возрастам, то получается кривая (Zin-gher) возрастной чувствительности к дифтерии, довольно точно совпадающая с возрастным распределением заболеваемости дифтерией. Относительно высокий иммунитет детей раннего грудного возраста (до полгода) может быть объяснен пассивной передачей иммун-тел через молоко матери. Что касается падения чувствительности к дифтерии с возрастом (начиная с одного года), сопровождаемого накоплением антитоксина в крови, то одни авторы (Fried-berger и др.) считают это явление выражением «физиологического серогенеза», т. е. что накопление антитоксина идет в порядке физиологическом, сопровождая таким of. разом созревание человеческого организма, а другие авторы (Цингер, Дедли, Рамон и др.) считают, что люди накапливают антитоксин в крови в результате явной, а чаще «немой инфекции> дифтерией (см. рисунок). Эпидемиологическая ценность Ш. р. состоит и в том, что ею удобно пользоваться для отбора лиц, подлежащих (в случае положительного результата) активной иммунизации против дифтерии. Обычно она применяется у детей"-~-» $лиц, имеющих антитоксин в крови (по Грееру)
°--«> %лиц о положит, реакцией. Шика (по Парку и Цкнгеру) столбики - заболевагмость дифтерией Распределение по возрасту: лиц, имеющих антитоксин в крови (в %); лиц с положительной реакцией Шика (в %); заболеваемости дифтерией (°/ооо каждого возраста). в возрасте свыше 5 лет, имея в виду относительную редкость отрицательней Ш. р. в возрасте до 5 лет. Наконец III. р. применяется и в качестве объективного контроля эффективности предохранительных прививок против дифтерии. Эта эффективность доказывается переходом положительной (до прививки) Ш. р. в отрицательную после вакцинации (обычно через 6 недель после последней прививки). Техника производства Ш. р.: 1. Для того, чтобы приготовить необходимое разведение токсина в нужном объеме, исходят из Dim токсина. Допустим Dim токсина = 0,0032. Чтобы приготовить токсин, содержащий I / 4l) Dim в 0,2 объема, поступают так: берут lOODlm, в данном случае = 0,32, и добавляют физиологического раствора до 10,0, т. е. 9,68. Берут 1,0 этого разведения (т. е. 10 Dim) и прибавляют к 79,0 физиол. раствора. Тогда в 80,0 второго разведения имеется 10.Dim; в 1 см 3 следовательно-V» Dim, а в 0,2-Vio Dim. При каждом разведении необходимо брать свежую сухую пипетку, промывая ее не менее 10 раз. При этом необходима особенная четкость отмеривания и точность пипеток (половину приготовленного т. о. разведения токсина переливают в отдельную колбу и ставят в кипящую водяную баню на 10 мин.; т. о. получают гретый токсин для «контроля»). В виду того, что токсин, разведенный физиол. раствором, быстро теряет свою активность, удобнее для разведения брать т. и. боратно-буферный раствор (см. Дика реакция), в котором разведенный токсин сохраняет свою силу в течение несколь-I ких месяцев. 2. Впрыскивание производится строго внутрикожно, всего удобнее при помощи туберкулинового шприца с платиновой очень тонкой иглой (№ 18, 19). Игла должна иметь короткую бородку. Бородку при инъекции надо держать кнаружи. Введение токсина совершается медленно с известным напряжением, характерным для внутрикожного введения жидкости, и в результате на месте укола образуется хорошо отграниченный пузырек (Quaddel), имеющий вдавления на месте волосяных мешочков. 3. Впрыскивание активного токсина производят в кожу предплечья левой руки, гретый токсин вводится в кожу предплечья правой руки. При массовой постановке III. р. рекомендуется производить двум врачам одновременно - один вводит активный, другой гретый токсин. 4. Отсчет Ш. р. производится два раза: через 24 часа для учета ложных реакций и через 96 часов, когда истинная Ш. р. достигает кульминационного пункта. Лит.: Здродовский П., Современные проблемы специфической профилактикч дифтерии, Арх. биол. наук, т. XXXV, сер. А, вып. 2, 1934; Doull J., Factors Influencing selective distribution tn diphtheria, Journ. ol prevent, med., v. IV, 1930; Frost W., Infection, immunity and disease in epidemiology of diphtheria, Ibid., v. II, 1928; Meerseman, Fries et Renard, La diphte-rie chez les suiets a reaction de Schick negative, Compt. rend, de la soc. de biol., v. CXII, 1933; Park W., Toxin-antitoxin immunization against diphtheria, Journ. Amer. med. Ass., v. LXXIX, p. 1584, 1922; Rosl ing E., Die Schickreaktion und Ihre Bedeutung, Seuchen-bekamp-fung, B. VІI, 1930; Schick В., Die Diphtherietoxin- Hautreaktion des Menschen als Vorprobe des prophylak-tisohen Diphlherieheilseruminielition, M"inch. med. Wo-chenschr., 1913, № 47; S iegl J., Zur Frage der Entste-hung der Pseudoreaktion bei der Diphtherietoxinreaktion nach Schick, Arch. f. Kinderheilk., B. XCVІII, 1932; Z i n g he r A., The Schick test, Journ. of Amer. med. Ass., v. LXXVІII, 1922; Zoeller C, L"intradermo-reaction al"anatoxine diphterique ou anatoxf-reaction, Compt. rend. de la Soc. de biol., v. XCI, 1924. См. также лит. к ст. Скарлатина. Г. Орлов.