Mikozes diagnosticēšanai var izmantot mikroskopiskās, mikoloģiskās (kultūras), alerģiskās, seroloģiskās, bioloģiskās un histoloģiskās izpētes metodes. Atkarībā no patoģenēzes izpētes materiāls var būt strutas, krēpas, skarti mati, nagi, ādas pārslas, kaulu smadzeņu, limfmezglu, iekšējo orgānu punkcijas, asinis, žults, fekālijas, audu biopsijas u.c.
Mikroskopiskā izmeklēšana ietver dabisko (nekrāsoto) un iekrāsoto uztriepes mikroskopiju. Lai pagatavotu dabiskos preparātus, matus, ādas skrāpējumus un nagus dzidrina 10,30% KOH vai NaOH šķīdumos. Ar sārmu apstrādāto materiālu novieto uz stikla priekšmetstikliņa glicerīna pilē, pārklāj ar segstikliņu un mikroskopē (var izmantot fāzu kontrasta mikroskopu), kas dod iespēju izpētīt sēnītes struktūru un sporu atrašanās vietu. , taču galīgo secinājumu par sēnes sugu var izdarīt tikai pēc kultūras pētījumiem.
Uztriepes krāsošanai visbiežāk izmanto Grama, Zīla, Nīlsena un Romanovska-Giemsa metodes. Dermatofītu krāsošanai tiek izmantotas arī Sabouraud, Adamson un citas metodes.
Lai izolētu un identificētu sēnītes tīrkultūru, tiek veikta kultūras (mikoloģiskā) izpēte. Izmantojiet cieto un šķidro barotni (Sabouraud, misas agars, Čapek utt.). Inkubācija termostatā (22,28ºС) ir ilga (3,4 nedēļas). Sēnīšu tīrkultūru nosaka īpašību kopums: koloniju forma, to krāsa, konsistence, mikroskopiskais attēls (micēlija raksturs, sporu atrašanās vieta, konidiofori) un citas diagnozes pazīmes sēnīšu slimību noteikšana tiek veikta ar sēnīšu antigēniem pēc vispārpieņemtām metodēm, kā arī citu infekcijas slimību (RA, RP, RSK, RNGA, RIF uc) diagnostikai.
Alerģijas testus var veikt saskaņā ar vispārpieņemtām metodēm, intradermāli ievadot atbilstošus alergēnus (polisaharīdu un olbaltumvielu frakcijas no šūnām vai šūnu membrānām, nogalināto sēnīšu šūnu suspensiju, kultūras filtrātus). Lai identificētu GNT, var izmantot audu un seruma bazofilu degranulācijas testu, savukārt GNT noteikšanai var izmantot fagocītu migrācijas inhibīcijas un limfocītu blastu transformācijas reakciju.
Bioloģiskie pētījumi tiek veikti ar laboratorijas modeļiem (pelēm, žurkām, jūrascūciņām, trušiem, suņiem, kaķiem). Mikozes bioloģisko modeli izmanto, lai identificētu patogēna patogenitāti, izolētu tīrkultūru un pētītu jaunus pretsēnīšu līdzekļus. Histoloģiskā izmeklēšana ļauj atklāt sēnīti audos, izpētīt tās morfoloģiju un tās izraisītā patoloģiskā procesa īpatnības organismā.
Saturs
Kad sēnīte ir inficēta pirmajos posmos, ir ārkārtīgi grūti noteikt bojājumu un noteikt patogēnu. Diagnozi sarežģī fakts, ka patoloģija uzreiz neizpaužas vai tai ir dažādi simptomi. Lai noteiktu patogēnu, tiek ņemts biomateriāls no patogēnās mikrofloras skartās vietas: krēpas, ādas daļa, inficēts nags, asinis, limfmezglu vai iekšējo orgānu biopsija.
Kas ir sēnīšu slimības
Kā tas izskatās
Iemesls sazināties ar dermatologu, kā likums, ir pirmās slimības patoloģiskās izpausmes. Klīniskās pazīmes atšķiras atkarībā no infekcijas vietas un sēnīšu slimības izraisītāja. Izšķir šādus patogēno mikroorganismu veidus:
- Candida sēnīte – izraisa kandidozes infekcijas;
- Trichophyton (Trichophyton) - provocē nagu, ādas, gļotādu infekcijas patoloģijas;
- Kriptokokoze - uzbrūk iekšējiem orgāniem, plaušām;
- Aspergiloze ir sēnīšu slimība, ko izraisa samazināta imunitāte.
Diagnozes laikā pēc lokalizācijas var noteikt vienu no 2 infekciju grupām:
Patogēnā mikroflora iekļūst caur brūcēm uz epidermas virsmas, slimības cēlonis var būt jebkura skramba, kas provocē gludas ādas mikozi. Organisms nevar tikt galā ar patogēna uzbrukumu, kad tā aizsargfunkcijas ir samazinātas. Diagnozes laikā bieži tiek noteikta infekcija ar Trichophyton vai Candida ģints. Pēdējie izraisa šādas slimības:
- piena sēnīte;
- kandidoze vīriešiem;
- mutes dobuma kandidoze.
Ir vairāk nekā vairāki desmiti patogēnu, tie tiek sadalīti pēc audu bojājuma metodes. Diagnozes laikā var identificēt šādus sēnīšu mikroorganismu veidus:
- dziļas sistēmiskas mikozes provocē Histoplasma capsulatum;
- zemādas zemādas mikozes izraisa Sportrichum schenckii;
- epidermomikoze attīstās Epidermophyton floccosum dēļ;
- pityriasis versicolor, virspusēja mikoze - Malassezia furfur;
- oportūnistiskās sēnīšu slimības - Candida albicans.
Mikozes klasifikācija
Visu šāda veida slimību vispārīgais nosaukums slēpj dažāda veida sēnīšu bojājumus cilvēka ķermenim. Nosakot diagnozi, ārsti iedala ādas slimības 4 grupās:
- Keratomikoze. Lokalizācijas vieta kļūst par epidermas stratum corneum, citos ādas slāņos nav iekaisuma parādību (piedra, pityriasis versicolor, krevele, sporotrichosis). Šāda veida patoloģiju izraisa šādas sēnītes: Sporotrichium, Trichosporon, Piedraia, Exophiala, Pityrosporum.
- Dermatomikozes. Tiem raksturīgs izteikts iekaisuma process, kas lokalizēts uz ādas, galvas ādas un nagiem (fauss, trihofitoze, epidermofitoze, mikrosporija). Patoloģijas provocē šādi sēņu celmi: Epidermophyton, Microsporum, Trichophyton.
- Kandidoze. Šāda veida sēnītes ietekmē gļotādas, ādu un tās piedēkļus. Candida ģints sēnīšu uzbrukumi bieži vien ir iekšējie orgāni.
- Dziļās mikozes. Tie provocē smagas visu ādas slāņu, iekšējo orgānu, gļotādu, kaulu, muskuļu infekcijas (mukoroze, peniciloze, aspergiloze).
Ir atsevišķas pseidomikozes (aktinomikoze, eritrasma), kas nav sēnīšu slimības, taču to simptomi ir līdzīgi īstām mikozēm. Šādos gadījumos ir nepieciešama diferenciāldiagnoze. Diagnoze šādos gadījumos ir ļoti svarīga, jo tā palīdz noteikt sēnīšu infekcijas veidu vai to izslēgt. No tā ir atkarīgs ārstēšanas režīma mērķis, ilgums un efektivitāte.
Dermatomikozes
Dermatofītu sēnītes iekļūst dziļi ādā un provocē dermatomikozi, piemēram, šādas zināmas patoloģijas:
- mikrosporija;
- trichophytosis;
- atlēta pēda;
- rubrofītija;
- favus.
Šāda veida patoloģijas tiek klasificētas kā dažādas slimības, kas rada rētas, roku, kāju nagu deformāciju, struktūras izmaiņas un matu izkrišanu. Patogēni ietekmē augšējos, dziļos ādas slāņus, kas izraisa furunkulisku mezglu, pustulozu izsitumu un plašu iekaisuma perēkļu parādīšanos. Labvēlīgs nosacījums attīstībai ir slikta pēdu higiēna. Pirmkārt, sēne aug uz pēdu ādas, starp pirkstiem, pēc tam izplatās uz nagiem.
Kandidoze
Patogēnie mikroorganismi ietekmē dziļos un virsējos ādas slāņus, izplatoties uz nagiem, matiem un iekšējiem orgāniem. Slimības izraisa Candida ģints sēnītes, kas pieder pie kandidozes grupas. Izšķir šādus šo slimību veidus:
- vispārināts;
- virspusējs;
- viscerāls.
Candida sēnītes tiek klasificētas kā oportūnistiskas. Raugam līdzīgus patogēnus diagnostikas laikā var konstatēt zarnās, mutes dobumā un veselam cilvēkam. Spēcīga imunitāte kavē patogēno mikroorganismu izplatīšanos, un, tai pavājinot, sākas aktīva Candida vairošanās, kas izraisa rumpja, pēdu, galvas un roku ādas bojājumus. Klīniskās izmaiņas tiek novērotas visu veidu kandidozes gadījumā. Ārstēšana ir atkarīga no slimības smaguma pakāpes un bojājuma veida.
Dziļa mikoze
Tas ir slimības veids, kas ietekmē dziļos ādas slāņus un iekšējos orgānus. Slimības attīstās ar spēcīgu organisma aizsargspējas samazināšanos, hormonālā līmeņa izmaiņām, vielmaiņas traucējumiem. Šādas patoloģijas tiek klasificētas kā dziļas mikozes:
- kokcidioidoze;
- hromomikoze;
- rinosporidioze;
- histoplazmoze;
- sporotrihoze;
- blastomikoze;
- mukoroze;
- cefalosporioze;
- micetoma;
- kladosporioze;
- Madura pēda;
- aspergiloze.
Keratomikoze
Šī ir patoloģiju grupa, kas lokalizējas tikai uz matu kutikulām, stratum corneum un ādas virskārtas. Raksturīga keratomikozes pazīme ir iekaisuma parādību trūkums. Slimības izraisītāji ir sapelējuši, raugam līdzīgās sēnītes, dermatofīti (apmēram 70 patogēnu veidi). Tie izraisa šādas slimības:
- šimberi;
- pityriasis alba;
- ķērpju melns;
- imbrikāta mikoze;
- tropu baltais un dzeltenais ķērpis;
- mezglainā trihosporija;
- piedra;
- pityriasis versicolor (pityriasis versicolor).
Kā diagnosticēt sēnīti
Pēc tam sākas vizuāla pārbaude, kas palīdz noteikt bojājuma apmēru un to, kuras vietas ir skārušas sēnītes. Ārstam jāpievērš uzmanība pacienta imūndeficīta stāvokļa klātbūtnei. Lai noteiktu patogēna veidu, ir nepieciešams savākt materiālu, kas tiek nosūtīts laboratorijas pārbaudei. Pieredzējis ārsts sākotnējās pārbaudes laikā var noteikt diagnozi, taču, lai sastādītu ārstēšanas shēmu, jums joprojām ir jāizpēta biomateriāls. Sēnīšu slimību diagnosticēšanai izmanto šādas metodes:
- mikroskopija - biomateriāla pārbaude mikroskopā, izplatīta un vienkārša diagnostikas metode;
- apskate Vuds lampā - īpašs ultravioletā apgaismojuma spektrs (luminiscence) palīdz pamanīt sēnīšu bojājumus;
- bakterioloģiskā kultūra ir precīza diagnostikas metode, bet paiet 2-3 nedēļas, līdz uz barotnes izaug kolonija;
- PCR diagnostika ir visprecīzākais veids, kā noteikt patogēnās mikrofloras veidu, taču precīzai diagnozei var būt nepieciešami vairāki izmeklējumi, kas prasa tērēt naudu.
Laboratorijas metodes
Tikai savlaicīga, precīza diagnoze palīdzēs noteikt efektīvu ārstēšanas shēmu un samazināt kursa ilgumu. Sēnīšu slimību laboratoriskā diagnostika ir visefektīvākā metode patogēna veida noteikšanai. Identifikācijai tiek izmantotas šādas izpētes iespējas:
- bakterioloģiskā kultūra;
- histoloģiskā analīze;
- PCR diagnostika;
- imunoloģiskie pētījumi;
- Mikrobioloģiskie pētījumi;
- kultūras pētniecība.
Mikozes diferenciāldiagnoze
Precīzu diagnozi ir grūti noteikt, jo dažādi mikozes veidi izraisa dažādus simptomus. Šādos gadījumos tiek izmantota diferenciāldiagnostikas metode un mikoze tiek salīdzināta ar citām dermatoloģiskām patoloģijām. Bieži mikozes pazīmes jauc ar psoriāzi, bet, nokasot zvīņas, sēnīšu patoloģija neasiņos. Līdzīgi simptomi tiek novēroti ar parapsoriāzi.
Ārstam jāizslēdz iespēja attīstīties nummulārai ekzēmai. Tas ir īpašs patoloģijas veids, ko var noteikt tikai ar laboratorijas diagnostiku. Bieži sēnītes pazīmes tiek sajauktas ar polimorfu fotodermatozi, kas var attīstīties tikai pieaugušam cilvēkam un nekad nenotiek bērnam. Lai veiktu precīzu diagnozi un noteiktu kompetentu ārstēšanu, nepieciešama laboratorijas un diferenciāldiagnostika.
Mikožu mikrobioloģiskā diagnostika
Šī ir vienkāršākā un visizplatītākā metode mikozes noteikšanai uz ādas un asinīs. Precīzai diagnozei ir nepieciešams savākt materiālus pētījumiem. Ja tiek ietekmēta galvas āda, ar pinceti jāsavāc skartie mati un jānokasa bojātā vieta no ādas. Sēnīšu slimību laboratoriskie pētījumi ar mikrobioloģisko metodi tiek veikti, ievietojot biomateriālu 30% kālija hidroksīda šķīdumā, pēc tam uz stikla priekšmetstikliņa.
Analīze palīdzēs noteikt sēnītes atrašanās vietu (ārpus vai iekšpusē, matiem, matiem) un tās lielumu. Ja materiāls tiek savākts nepareizi, analīze var dot kļūdainu rezultātu. Diagnozei tiek izmantotas šādas mikrobioloģiskās diagnostikas metodes:
- mikroskopija ar dabīgiem un nekrāsotiem preparātiem;
- mikroskopija ar krāsotiem preparātiem.
Pētījuma metodes
Nosakot diagnozi, speciālistam jāņem vērā micēlija uzbūve (hifu uzbūve, to starpsienas, krāsa), sporu, kondiju uzbūves īpatnības, to krāsa, forma un izmērs, šūnas sieniņas uzbūve u.c. tiek ņemti vērā. Pētījumam tiek sagatavoti vietējie, krāsaini preparāti. Pēdējiem ir nepieciešama materiāla apstrāde dažādos veidos:
- PAS krāsošana. Šāda veida krāsošana palīdz identificēt neitrālos polisaharīdus mikroorganismu sieniņās. Tie ietver glikāna-mannāna kompleksu, kas atrodas daudzu eumicītu šūnu sieniņās. Tas provocē krāsošanas procesu.
- PAS reakcija. Lieto, lai diagnosticētu audu formas sēnīšu infekciju. Laboratorijā šim pētījumam tiek izmantotas dažādas modifikācijas, piemēram, Gridlija krāsošana vai Bauera reakcija.
- Grama metode. Krāsošana šādā veidā palīdz noteikt pavadošo mikroorganismu klātbūtni.
- Ziehl-Nielson krāsošana. Palīdz identificēt skābju izturīgos mikroorganismus. Ja biomateriāls ir šķidrs, tad mikroskopijai sagatavojiet īpašu nekrāsotu uztriepi tīrīšanas šķidrumos: glicerīnu un spirtu sajauc vienādās proporcijās.
Kultūras tests sēņu noteikšanai
Biomateriālu novieto uz barotnes (kultivācija), lai istabas temperatūrā izolētu tīrkultūru. Dimorfās sēnes šādos apstākļos veido micēliju, augot līdz 37 grādiem, sāk veidoties raugam līdzīgas šūnas. Sabouraud barotni izmanto dermatofītiem un Candida sēnītēm, kas paredzētas pelējuma (hifālas) sēnēm, ir nepieciešama Czapek barotne. Bieži vien sastāvam pievieno antibiotiku. Dziļās mikozes var noteikt tikai klīniskās laboratorijas centros to augstās lipīguma dēļ.
Sēnīšu slimību luminiscences diagnostika
Lai identificētu skartās ādas vietas ar Microsporum ģints patogēno mikrofloru, tiek izmantota ultravioletā lampa. Šī ir ekspresdiagnostikas iespēja, ko izmanto, ja nepieciešams apstiprināt ādas infekcijas esamību vai ķērpju slimību simptomus. Ultravioletais starojums nav galvenais sēnīšu noteikšanas veids, tā ir palīgmetode, tāpēc nav nepieciešama.
Pacienta apskatei tiek izmantota Vuda lampa, kas izstaro UV starojumu, to ietekmē spilgtā gaismā spīd sēnīšu atkritumi. Krāsa ir atkarīga no tā, kāda veida patogēns skāra pacientu:
- zaļgani – skalpa ķērpis;
- zils – sarkanā vilkēde uz lūpām;
- dzeltenīgi – plakani ķērpju veidojumi.
Imunoloģiskā enzīmu asins analīze sēnīšu noteikšanai
Lai atklātu mikozes, kas skārušas ādu un iekšējos orgānus (histoplazmoze, kokcidioidoze), tiek izmantota imunoloģiskā enzīmu asins analīze sēnīšu slimībām. Šo metodi bieži izmanto, ja noteiktu iemeslu dēļ nav iespējams veikt audu biopsiju izpētei. Metode ir balstīta uz noteikta veida sēnīšu slimības antivielu titra meklēšanu.
Šiem nolūkiem tiek izmantota IgG noteikšana aspergilozes un kandidozes gadījumā. Analīzes precizitāte ir aptuveni 80%, retos gadījumos jūs varat iegūt viltus pozitīvu rezultātu, ja nav dziļu mikozi. Tas notiek, ja pacientam ir sēnīte mutes gļotādā vai progresējoša piena sēnīte. ELISA ir nepieciešams venozo asiņu paraugs, kas ņemts agri no rīta vai 4 stundas pēc pēdējās ēdienreizes. Cita sagatavošanās analīzei nav nepieciešama.
Atbilde uz analīzi būs dažas dienas pēc biomateriāla savākšanas. Reti gaidīšanas laiks pārsniedz 5 dienas. Laboratorijas aprīkojuma kvalitāte ietekmē pētījuma ātrumu, ja ir iemesls veikt papildu asins paraugu izpēti. Pēc procedūras pabeigšanas pacientam tiek sniegts slēdziens, kurā būs norādīta viena no šādām vērtībām:
- ja tiek apstiprināta sēnītes klātbūtne, tiks rakstīts “pozitīvs rezultāts”;
- ja nav pilnīgas pārliecības, ka asinīs ir konstatēta sēne, viņi raksta “apšaubāms rezultāts”;
- ja biomateriāla paraugā nav patogēnas mikrofloras, raksta “negatīvs rezultāts”;
- Ja jums ir labs aprīkojums, asins analīzes var noteikt mikozes šūnu koncentrāciju un norādīt indikatoru secinājumā.
Sēnīšu slimību PCR diagnostika
Visprecīzākais un uzticamākais veids, kā diagnosticēt sēnītes un citas infekcijas slimības, ir polimēra ķēdes reakcija. Diagnostikas metodei ir šādas priekšrocības:
- zemas analīzes izmaksas;
- augsta precizitāte;
- ātri tiek veikta biomateriāla izpēte;
- Analīzei var paņemt jebkuru audu paraugu (ādas gabalu, gļotādu, skrāpējumu no pēdu zolēm, pirkstiem, nagu virsmām, matiem, asinis).
Galvenais šī pētījuma ierobežojums ir tā šaurais fokuss. Lai diagnosticētu mikozi, jums precīzi jāzina, kur tā ir ietekmējusi cilvēka ķermeni. PCR nosaka patogēna veidu un tā koncentrāciju pacienta organismā. Rezultāti būs zināmi dienas laikā, atsevišķos gadījumos (ja nav nelabvēlīgu apstākļu), atbildes tiek saņemtas piegādes dienā (5-6 stundu laikā). Pētījuma ātrums ir atkarīgs no paraugu ņemšanas pareizības, medicīnas personāla pieredzes, laboratorijas noslodzes.
Kā atpazīt sēnīti mājās
Ar spēju atpazīt mikotisko patoloģiju simptomus un izmantojot mājas diagnostikas metodes, ir iespējams noteikt patogēna veidu. Pacientam ir pareizi jānovērtē slimības gaita sākuma stadijā, sēnīšu slimību var sajaukt ar psoriāzi vai ķērpjiem. Lai no tā izvairītos, jums jāzina galvenās mikozes pazīmes, kas to atšķir no citām slimībām. Sēnīšu infekcijas simptomi:
- nagi kļūst dzelteni un sāk lobīties;
- nagu plāksnes formas maiņa;
- nav remisijas un saasināšanās periodu, sākas pilnīga plāksnes atdalīšanās, kas nenotiek ar ādas patoloģijām un psoriāzi;
- skartajā zonā ir nepatīkama smaka, pieskaroties sāp, nieze, lobīšanās, uz ādas virsmas var veidoties aplikumi;
- Sēne parasti skar atstarpes starp pirkstiem uz vienas vai abām pēdām, pēc tam slimība izplatās uz naga un pārējās pēdas.
Kāju nagu sēnīšu diagnostika, izmantojot kālija permanganātu
Ja pamanāt, ka jūsu roku un kāju nagi ir sākuši mainīties vai ir parādījusies nepatīkama smaka, varat pārbaudīt infekcijas esamību vai neesamību tieši mājās. Jums būs nepieciešams mangāns, silts ūdens un trauks analīzei. Procedūra tiek veikta šādi:
- ja ir ādas slimības pazīmes, uzklājiet šo vietu ar plānu joda kārtu;
- pagaidiet 2 minūtes;
- ja ir problēma, tad bojājumi iegūst bagātīgu krāsu;
- veselīgas ādas vietas netiks izceltas.
Cik maksā sēnīšu slimību diagnostika Maskavas klīnikās?
| Vārds | Studiju veids | Cena, rubļi |
| Nagu paraugu mikroskopiskā izmeklēšana | ||
| Mikroskopija un kultūra (āda/nagi) | ||
| Sēja raugam līdzīgām sēnēm | ||
| Mīļā. Veselības akadēmijas centrs | Nagu skrāpējumu mikroskopiskā izmeklēšana | |
| Ādas skrāpējumu mikroskopiskā izmeklēšana | ||
| Matu mikroskopiskā izmeklēšana | ||
| Skrāpēšana, vīrusu infekciju analīze. | ||
| "Medline Service" | Candida asins analīzes (DNS) |
Video
Uzmanību! Rakstā sniegtā informācija ir paredzēta tikai informatīviem nolūkiem. Rakstā minētie materiāli neveicina pašapstrādi. Tikai kvalificēts ārsts var veikt diagnozi un sniegt ārstēšanas ieteikumus, pamatojoties uz konkrēta pacienta individuālajām īpašībām.
Vai tekstā atradāt kļūdu? Izvēlieties to, nospiediet Ctrl + Enter un mēs visu izlabosim!Svarus vai matus novieto uz stikla priekšmetstikliņa (stikls ir jāattauko) un piepilda ar vienu, diviem vai trim pilieniem 30% kaustiskā kālija vai kaustiskās sodas šķīduma un pārklāj ar pārklājumu. 2-3 minūtes, nedaudz karsējot uz spirta degļa liesmas, viegli piespiediet preparātu ar vāku, līdz
pelēks mākonis, pētot zvīņas. Matus nevajadzētu iznīcināt, tie tikai uzbriest ar šādu sildīšanu. Mikroskopiskā izmeklēšana (palielinājums 100-200 reizes) ar aptumšotu diafragmu atklāj sēnīšu elementus - sporas vai micēlija pavedienus. Nepieciešams nosacījums, lai mikroskopiskā izmeklēšana būtu veiksmīga, ir zvīņu un matiņu iegūšanas pamatīgums, kas ar speciālām pincetēm (skropstu pinceti) jāņem no skartajām vietām. Jāpievērš uzmanība ne tikai labi redzamiem matiem, garozām un zvīņām, bet arī tikko pamanāmām matu paliekām (tā saucamajiem celmiem) un melnajiem punktiem, kas tiek noņemti ar skalpeli vai histoloģisku adatu. Jums nekad nevajadzētu apmierināties ar pacienta norādīšanu uz skartajām vietām, pašam ārstam rūpīgi jāpārbauda visa galvas āda.
Trihofitozes skartajos matos sēnīšu sporas ir sakārtotas ķēdē. Ar mikrosporiju sporas ir daudz mazākas nekā ar cirpējēdes, neveido ķēdes un atrodas apmatojuma ārpusē. Matos atrodas starpsienas micēlija auklas. Mati it kā ietērpti aizsegā un strīdā. Ar kraupi novēro polimorfas sporas, rupjus, daudzveidīgus pavedienus un parasti gaisa burbuļus (48. att.).
Šajā gadījumā sēnītes pilnībā neietekmē visu matu, bet neskartās vietas paliek.
Lai iegūtu materiālu no gludas ādas, zvīņas tiek nokasītas. bojājuma perifērās zonas ar asu karoti vai skalpeli. Ērtāk ir skrāpēt nagus ar asu medicīnisko nazi (skalpeli), noņemot nelielus, bet dziļus posmus no nagu plāksnes iekšējās virsmas vai nokasot pityriāzes pulveri no nagu ragveida plāksnēm.
Izejmateriālu vāra mēģenē ar sārmu un pēc tam atstāj šajā mēģenē nostāvēties 12-20 stundas.
Pēc tam saturu centrifugē un nogulsnes pārbauda mikroskopā (N.A. Černogubova metode).
Sēnes labi aug uz mākslīgām barotnēm, kas satur ogļhidrātus un olbaltumvielas. Īpaši izplatīta ir tā sauktā oriģinālā Sabouraud barotne, alus misa, agars un dārzeņi.
mikroskopija -šī ir viena no galvenajām metodēm mikozes laboratoriskajā diagnostikā. Šis pētījums jāveic no dienas, kad barības barotnē parādās pirmās kolonijas. Pirms mikroskopiskās izmeklēšanas ir jāzina, vai sēne ir raugs vai pelējums - pēc koloniju izskata, dīgtspējas pārbaudes rezultātiem.
Mikroskopējot pelējuma sēnītes, tiek ņemta vērā micēlija uzbūve (t.i., hifu uzbūves īpatnības, to krāsa, starpsiena; konidiju un sporu uzbūves īpatnības, tai skaitā konidiju izmērs, forma, krāsa; to šūnu sienas uzbūve , starpsiena utt.)
Sagatavojieties mikroskopijai dzimtā Un krāsotas narkotikas. Ēdienu gatavošanai krāsotas zāļu materiāls tiek apstrādāts dažādos veidos:
1. KrāsošanaPAS- metode. PAS metodes izmantošana ļauj identificēt neitrālos polisaharīdus mikroorganismu sieniņās. Neitrālie polisaharīdi ir glikāna-mannāna komplekss, kas atrodams vairuma eumicītu šūnu sieniņās, kā rezultātā notiek krāsošana.
PAS-reakcijas– viena no sēnīšu infekcijas audu formu mikroskopiskās diagnostikas metodēm. Praktiskajās laboratorijās mikroskopiskai diagnostikai tiek izmantotas dažādas šīs metodes modifikācijas: hromskābes oksidēšana - Bauera reakcija; Gridley krāsošana.
2. Grama krāsošana (modificēta ar Gram-Weigert), lai identificētu saistītos mikroorganismus.
3. Ziehl-Nielson krāsošana, lai identificētu skābju izturīgus mikroorganismus. Ja materiāls tiek testēts šķidrums, tad no tā tiek sagatavota nekrāsota uztriepe mikroskopijai dzidrināšanas šķidrumos: spirta un glicerīna maisījums attiecībā 1:1.
Nākamais posms ir mikoloģiskā izpēte– sēņu izolēšana un identificēšana. Apskatīsim šī posma iezīmes atkarībā no pētāmā materiāla.
Mikoloģiskā izpēte
Kultūras pētījumi. Kultūras izpēte balstās uz patogēna izolēšanu no pētāmā materiāla. Audzēšanas periodi dažādiem sēņu veidiem atšķiras (no 2-4 dienām līdz 4 nedēļām, ja ir aizdomas par dimorfām sēnēm, kultūru izolē līdz 8 nedēļām). Galvenās barotnes audzēšanai mikoloģiskā laboratorijā ir Sabouraud barotne: Sabouraud's dekstrozes agars (cietā barotne), Sabouraud buljons (šķidra barotne). Lai nomāktu baktēriju floras augšanu, Sabouraud barotnei pievieno antibiotikas (hloramfenikolu, gentamicīnu un retāk streptomicīnu, penicilīnu). Lai nomāktu saprofītu sēnīšu augšanu, barotnei pievieno cikloheksimīdu un hloramfenikolu. Ir gatavi barotnes ar cikloheksimīdu ( Mikobiotika Mycosel).
Optimālais audzēšanas režīms lielākajai daļai patogēno sēņu ir 30 0 C, 20-25 0 C, retāk 37 0 C - ja ir aizdomas par dimorfām sēnēm. Vairumam sēņu inkubācijas laiks ir līdz 6 nedēļām; ja pēc šī laika nav novērojama izaugsme, tad tiek sniegta noraidoša atbilde. Ja ir aizdomas par dimorfo mikozi un nav augšanas 6 nedēļas, kultūru glabā 8 nedēļas un tikai pēc tam dod negatīvu rezultātu.
Par kultūras pārbaudi diagnostiski nozīmīga ir:
Pelējuma vai rauga izolēšana parasti sterila materiāla pārbaudes laikā;
Dimorfas sēnītes izolēšana.
Mikoloģiskās izpētes algoritms
1. Patogēna sēnīšu etioloģijas noteikšana (mikroskopija).
2. Nosakiet raugu vai pelējumu:
Klīniskā materiāla mikroskopija (micēlija klātbūtne);
Koloniju raksturs uz barotnes, augšanas ātrums (raugs aug 48 stundas, pelējums aug lēni).
3. Sēnes galīgo identificēšanu sugas līmenī (intraspecific) veic, izmantojot bioķīmiskos testus un imunoloģiskās metodes. Pētot bioķīmiskās īpašības, tiek pētīta izolētās kultūras asimilācijas (auksanogramma) un fermentācijas (zigogramma) spēja. Ir iespējams izmantot automatizētās identifikācijas sistēmas (testu sistēmas sēņu identificēšanai).
Oportūnistisko sēņu izolācijas etioloģiskās nozīmes kritēriji
1. Ja vietējā preparātā (saprofītiskā veģetācija) ir redzamas tikai blastosporas, tad to uzskata par karieti.
3. Ja blastosporas ir atsevišķas un dominē pseidomicēlija, tad tas liecina par dziļiem orgānu bojājumiem.
4. Aktīva blastosporu veidošanās liecina par akūtu procesu.
5. Rezultātu kvantitatīvs novērtējums - sēnītes izolēšana no atšķaidījumiem
10 - fekālijas, urīns;
10 – krēpas.
6. Viena veida sēņu atkārtota sēšana
7. Antivielu klātbūtne pret izolēto celmu.
Gļotādu izdalījumu mikoloģiskā izmeklēšana
1. Materiāla sagatavošana. Pēc materiāla savākšanas no gļotādām tamponu ievieto 2 ml šķidrā Sabouraud barotnē vai misas agarā, jeb MPB, kas ielej sterilās mēģenēs. Rūpīgi sakratiet tos 5 minūtes, uzmanieties, lai korķis nesamērcētu. No iegūtās suspensijas sagatavo virkni atšķaidījumu 1:10 un 1:100 utt.
No katra atšķaidījuma 0,1 ml iesēj uz 2 glāzēm misas agara, Sabouraud agara vai MPA. Inokulācijas uz cietas barotnes un mēģenē ar šķidru barotni ar tamponu bagātināšanai inkubē +37 0 C 48 stundas:
Pēc tam, kad pagājis laiks, sējumus pārbauda un saskaita koloniju skaitu un aptuveni nosaka rauga koloniju skaitu. To skaits tiek reizināts ar 20 un atšķaidījumu, no kura tiek veikta sēšana;
Ja plāksnēs ar inokulāciju, kas izgatavota no atšķaidījumiem, nav augšanas, tad atkārtoti inokulē no bagātināšanas barotnes uz plāksni ar misas agaru.
Mikoloģiskā asins analīze
1. Materiāla sagatavošana. Pēc asins savākšanas to atšķaida attiecībā 1:10, lai asiņu baktericīdās īpašības neaizkavētu sēnīšu augšanu.
2. Kultūras eksāmens.
5-10 ml asiņu inokulē 50-100 ml šķidrā Sabouraud barotnē ar 2% glikozi. 37 0 C temperatūrā tos inkubē nedēļu;
Pēc 5 dienām veic kontrolsēju. Lai to izdarītu, noņemiet nogulsnes ar sterilu pipeti. 3-4 pilienus no pipetes uzsēj uz misas agara un samaļ ar sterilu bakterioloģisko cilpu;
Sēklu krūzes tiek turētas termostatā 37 0 C temperatūrā 2-5 dienas;
Ja tiek konstatēta augšana, tiek sniegta iepriekšēja atbilde par fungēmiju, un pētījuma laikā tiek veikta turpmāka sēnītes identificēšana.
Biopsijas paraugu mikoloģiskā izmeklēšana
1. Lai savāktu materiālu, izmantojiet pirkstu nospiedumu metodi.
2. Kultūras eksāmens:
Izveidojiet nospiedumu ar izmeklējamo audu gabalu uz Sabouraud blīvās barības vides virsmas;
To pašu audu gabalu ievieto 50 ml šķidrā barotnē (misa vai Sabouraud);
Kultūru inkubē 37 0 C temperatūrā 5 dienas.
4402 0
Diemžēl arī mūsdienās var konstatēt, ka sēnīšu slimību diagnoze bieži tiek veikta nelaikā (izpludinātas matu vietas, zvīņošanās nereti tiek sajauktas ar “blaugznām”, “sausumu”). Tajā pašā laikā subjektīvas sajūtas (nieze, sāpes u.c.) bojājumiem bieži nerodas, un pacienti šī iemesla dēļ ilgstoši nemeklē vizīti pie speciālista.
Izmaiņas nagos (neglīts, drūpošs, retināts) tiek uzskatītas par “onihodistrofiju” pēc ziluma, apsaldējuma u.c. Tajā pašā laikā (pat atsevišķi bojājumi, ieskaitot nagus) var izraisīt alerģisku izmaiņu veidošanos organismā, kas ietekmē asinsrites un limfātiskās sistēmas asinsvadi uc Pacienti uz nenoteiktu laiku paliek sēnīšu infekcijas avots. Saistībā ar iepriekš minēto vienmēr aktuāla ir savlaicīga mikozes laboratoriskā diagnostika un iespējama savlaicīga ārstēšana.
Sēnīšu slimību klīnisko variantu daudzveidība, kas galvenokārt sastopama cilvēkiem, kā arī dažādu sēņu sugu (un ģinšu) mikrobioloģijas, morfostruktūras, imunoloģiskie un citi parametri ir noteikuši ievērojama skaita metožu pieejamību mikozes diagnosticēšanai. ; Jāatzīmē, ka pieejamās metodes tiek pastāvīgi pilnveidotas un (salīdzinoši nesen) tām ir savdabīga novirze pret imunoloģiskiem un molekulāri ģenētiskiem testiem.
No otras puses, kultūras pētījumi joprojām ir “tuvi zelta standartiem” un tiek izmantoti citu pētījumu apšaubāmu rezultātu apstiprināšanai; Pastāv uzskats, ka kultūru un molekulāro ģenētisko metožu kombinācija diagnostiski “apšaubāmām” mikozes formām (īpaši izplatītām, uz jebkuras izcelsmes imūnsupresijas fona, ar iekšējo orgānu bojājumiem utt.) ir viena no uzticamākajām. veidi, kā reģistrēt procesa mikotisko raksturu.
Tomēr nevajadzētu atstāt novārtā “vecās” metodes, it īpaši bakterioskopiju (īpaši sākotnējās izmeklēšanas laikā), jo īpaši tāpēc, ka ikdienas praksē mikozes mikroskopiskā “verifikācija” daudzās dermatoloģijas iestādēs tiek izmantota visplašāk salīdzinājumā ar citiem testiem.
Ņemot vērā ievērojamo alerģisko izpausmju skaita pieaugumu uz ādas (un dažkārt arī viscerālo) - ilgstošas, hroniskas, periodiski saasinātas mikozes gaitas gadījumā (āda, nagi u.c.), vēlams veikt alergoloģisko. testi, lai noteiktu ķermeņa sensibilizācijas pakāpi, t.sk. kombinēto sēnīšu-baktēriju infekciju; šis fakts var ietekmēt konkrēta pacienta ārstēšanas specifiku - piemēram, noteikt racionālu pretsēnīšu un desensibilizējošu līdzekļu izrakstīšanu utt.
Tradicionāli iespējamā sēnīšu slimības diagnoze tiek veikta, pamatojoties uz klīniskajām izpausmēm, un to apstiprina laboratorijas testi.
Šajā grāmatas sadaļā mēs īsumā sniedzam pamata metodes mikozes reģistrēšanai (neatkarīgi no to atrašanās vietas), ņemot vērā “pētījuma veidu un ņemto materiālu”. Jāņem vērā, ka mikozes (arī ar alerģisku komponentu) klīnisko izpausmju polimorfisms nosaka izmeklējamā patoloģiskā materiāla daudzveidību. Tajā pašā laikā sēņu elementu meklēšanas panākumi ir atkarīgi no tā pareizas izvēles.
Tādējādi eritematozo, bieži figurētu izsitumu perifērā zona ir bagātāka ar micēliju, sēnīšu sporām; uz bojājuma matainajām vietām tiek ņemti krokaini, bālgani, balināti, nespodri mati vai to fragmenti - “celmi” (matiņu savākšanu vēlams kontrolēt ar Wood’s lampu). Nepieciešamas noteiktas prasmes, lai savāktu materiālu (izmantojot adatu) no t.s. “Melni punkti” - tumši ragaini konusi pie folikulu mutēm.
Ikdienas praksē parasti tiek izmeklētas ādas pārslas (savāktas nokasot, smērējot, izmantojot līmlenti), nokasot nokrāsotus nagus, subungālās hiperkeratozes zonu, kā arī izdalījumi no gļotādas. Saskaņā ar indikācijām tiek izmeklētas krēpas, skalošanas šķidrums un urīns (pacientiem ar nekateterizētu urīnpūsli); urīnu no pisuāriem un gultām nevar savākt izpētei.
Asinīm (kultūras izmeklēšanai, kā arī ELISA, PCR), cerebrospinālajam šķidrumam un citiem ķermeņa šķidrumiem (pleiras, intraartikulāriem, intraperitoneāliem – arī tiem, kas savākti ar aspirāciju vai drenāžu) ir arī diagnostiska vērtība; atsevišķos gadījumos (atkarībā no lokālās diagnozes) svarīga ir žults, izkārnījumi, zemādas abscesu punktos un izdalījumi no fistulām (īpaši ar dziļām mikozēm). Pat vienkāršiem diagnostikas testiem ir stingri jāievēro vairāki nosacījumi.
Pašlaik sēnīšu slimību diagnosticēšanai izmanto šādas metodes:
- mikroskopija; ir balstīta uz patogēna noteikšanu testa materiālā, t.sk. cilvēka audos;
- kultūras pārbaude, kam seko sēnīšu kultūras mikroskopiskā izmeklēšana;
- histoloģiskā izmeklēšana (g.o. dziļām mikozēm);
- imūnās un molekulārās metodes.
Mikroskopiskā diagnostika
Mikroskopiskā diagnostika kļuva iespējama, parādoties īpašai optiskai, vēlāk arī elektronu mikroskopiskai tehnoloģijai, kas ļāva detalizēti izpētīt sēnīšu ultrastruktūru. Šajā gadījumā diagnostiska nozīme ir sēnīšu elementu noteikšanai - tievi zarojoši pavedieni, kas veido micēliju (micēliju), noapaļoti ķermeņi (sporas; tie ir sēņu reproduktīvais “orgāns”).Mikroskopiskā diagnostika ietver nekrāsotu (native) un krāsotu preparātu izpēti. Šī metode, kā minēts, ir visizplatītākā dermatoloģijas praksē tās salīdzinošās vienkāršības un zemo izmaksu dēļ, taču, no otras puses, tā nav pietiekami jutīga un dažos gadījumos prasa atkārtotas pārbaudes un apstiprinājumu ar citām metodēm.
Tādējādi, pētot nekrāsotus preparātus, papildus sēnīšu elementiem var konstatēt epitēlija šūnas, asins šūnas un dažādus piesārņotājus no ārējās vides, kas apgrūtina mikozes izraisītāja atrašanu un prasa papildu materiāla “sagatavošanu”. - tā sauktais. tā “apgaismošana” (macerācija), koncentrēšana, atšķaidīšana utt.
Neskatoties uz to, vietējo preparātu tiešā mikroskopija ļauj ātri diagnosticēt mikozi un noteikt, uz kurām barotnēm (ja nepieciešams) materiāls ir jāpotē, pastāv viedoklis, ka pozitīvs rezultāts var palikt vienīgais laboratoriskais apstiprinājums mikozei ar negatīvu atbildi kultūrā (A.Ju.Sergejevs, Ju.V.Sergejevs, 2003).
Starp dažādām zāļu “attīrīšanas” iespējām visizplatītākā ir KOH vai NaOH pievienošana testa materiālam (biežāk izmanto, lai noteiktu sēnītes ādas zvīņos, matos, kā arī vairākus dziļo mikozes patogēnus krēpās un biopsijas paraugi).
Sasmalcinātas un uz stikla priekšmetstikliņa novietotas macerācijas izmanto 10-20% kaustiskās sodas (vai kālija) šķīdumu - 1-3 pilienus, 10-20 minūtes; Preparātu viegli nospiež ar vāku, lai ātrāk macerētu, karsē uz liesmas, līdz parādās tvaiki. Skatīšana vispirms tiek veikta ar mazu palielinājumu, pēc tam ar lielu palielinājumu (sausā sistēma).
Pareizi sagatavots preparāts, kas nav pakļauts skarbām mehāniskām, termiskām un ķīmiskām ietekmēm, rada viendabīgu masu, kas sastāv no epitēlija šūnām, sēnīšu elementu šūnu sabrukšanas produktiem - micēlija pavedieniem un sporām.
Nomainītos matus novieto uz stikla priekšmetstikliņa ar 10-30% sārmu un apstrādā tāpat, bet ilgāk - no 20 minūtēm līdz 3-4 stundām, ja pigmenta saturs ir bagātīgs, ieteicams vispirms balināt matus ar 5% ūdeņraža peroksīda šķīdumu. Viņi piešķir nozīmi sēnīšu elementu noteikšanai, kā arī to atrašanās vietai attiecībā pret matiem.
Materiāla sagatavošana no patoloģiski izmainītiem nagiem (vēlams smalks pulveris, kas iegūts, nokasot no bojājuma dziļumiem) tiek veikta līdzīgi, bet izmantojot 30% kaustiskās sodas, obligāti rūpīgi karsējot uz liesmas viegliem tvaikiem un pakļaušanu apmēram 1 stunda (dažreiz līdz vairākām stundām). Preparātus, kas apstrādāti ar sārmu, nedrīkst uzglabāt ilgāk par 1,5-2 stundām to “bojāšanās” dēļ (reaģenta kristalizācija, diagnostikas ticamības samazināšanās, ko nosaka mikroskopiskais attēls).
KOH vai NaOH vietā var izmantot: a) KOH maisījuma šķīdumu ar 15% DMSO; b) fenola (2 daļas) maisījums ar hlorhidrātu (2 daļas) un pienskābi (1 daļa); c) kalkofluorbalts, kam ir afinitāte pret hiagīnu un celulozi; Pētījumiem nepieciešams fluorescējošais mikroskops (novēro zilu vai zaļu mirdzumu, kas atkarīgs no izmantotā filtra). Pārbaudot cerebrospinālo šķidrumu (ja ir aizdomas par kriptokokozi), bieži tika izmantota tintes krāsošana.
Kulaga V.V., Romaņenko I.M., Afonins S.L., Kulaga S.M.