Seroloģisko diagnozi, pamatojoties uz antigēna-antivielu reakciju, var izmantot, lai noteiktu abus, un tai ir nozīme vīrusu infekcijas etioloģijas noteikšanā pat tad, ja vīrusa izolācijas rezultāti ir negatīvi.
Seroloģiskās diagnostikas panākumi ir atkarīgi no reakcijas specifikas un atbilstības pagaidu nosacījumiem asins ņemšanai, kas nepieciešami organismam antivielu sintezēšanai.
Vairumā gadījumu tiek izmantoti sapāroti asins serumi, kas tiek ņemti ik pēc 2–3 nedēļām. Par pozitīvu reakciju uzskata antivielu titra palielināšanos vismaz 4 reizes. Ir zināms, ka lielākā daļa specifisko antivielu pieder IgG un IgM klasēm, kuras tiek sintezētas dažādos infekcijas procesa laikos. Tajā pašā laikā IgM antivielas ir agrīnas antivielas, un to noteikšanai izmantotie testi tiek izmantoti agrīnai diagnostikai (pietiek ar viena seruma izmeklēšanu). IgG antivielas tiek sintezētas vēlāk un saglabājas ilgu laiku.
RN izmanto vīrusu tipizēšanai grupai specifiskai diagnostikai, piemēram, adenovīrusu infekcijai; komplementa fiksācijas reakcija(RSK). Visizplatītākie ir hemaglutinācijas inhibīcijas reakcija(RTGA), RSK, RIF, pasīvās reakcijas Un reversā pasīvā hemaglutinācija(RPGA, ROPGA), dažādas ELISA versijas, kas gandrīz vispār ir aizstājušas RIA, kas ir līdzvērtīga jutībai.
RTGA izmanto, lai diagnosticētu slimības, ko izraisa hemaglutinējošie vīrusi. Tā pamatā ir pievienotā standarta vīrusa saistīšanās ar pacienta serumu ar antivielu palīdzību. Reakcijas indikators ir sarkanās asins šūnas, kuras aglutinē vīruss (izveidojas raksturīgs “lietussargs”), ja nav specifisku antivielu, un, ja tādas ir, nosēžas apakšā, neaglutinēti.
RSK ir viena no tradicionālajām seroloģiskajām reakcijām un tiek izmantota daudzu vīrusu infekciju diagnosticēšanai. Reakcijā piedalās divas sistēmas: antivielas no pacienta seruma + standarta vīruss un aitas sarkanās asins šūnas + antivielas pret tām, kā arī titrētais komplements. Ja antivielas un vīruss sakrīt, šis komplekss saista komplementu un nenotiek aitu sarkano asins šūnu līze (pozitīva reakcija). Ar negatīvu RSC komplements veicina eritrocītu līzi. Metodes trūkums ir tās nepietiekami augstā jutība un reaģentu standartizācijas grūtības.
Lai ņemtu vērā RSC, kā arī RTGA nozīmi, ir nepieciešams titrēt sapārotos serumus, tas ir, ņemt slimības sākumā un atveseļošanās periodā.
RPGA– ar vīrusa antigēniem sensibilizētu eritrocītu (vai polistirola lodīšu) aglutinācija antivielu klātbūtnē. Uz eritrocītiem var adsorbēties jebkuri vīrusi neatkarīgi no hemaglutinējošās aktivitātes esamības vai neesamības. Nespecifisku reakciju klātbūtnes dēļ serumus pārbauda atšķaidījumā 1:10 vai vairāk.
RNGA– ar specifiskām antivielām sensibilizētu sarkano asins šūnu aglutinācija vīrusu antigēnu klātbūtnē. ROPHA ir kļuvusi visizplatītākā HBs antigēna noteikšanā gan pacientiem, gan asins donoriem.
JA metode, kā arī ELISA, ko izmanto, lai noteiktu antivielas serumā. ELISA kļūst arvien svarīgāka un plaši izplatīta diagnostikas nolūkos. Vīrusa antigēns tiek adsorbēts uz cietās fāzes (polistirola tablešu vai polistirola lodīšu iedobes apakšā). Kad tiek pievienotas atbilstošās serumā esošās antivielas, tās saistās ar sorbētajiem antigēniem. Vēlamo antivielu klātbūtne tiek noteikta, izmantojot antivielas (piemēram, cilvēka), kas konjugētas ar fermentu (peroksidāzi). Substrāta pievienošana un substrāta-enzīma reakcija dod krāsu. ELISA var izmantot arī antigēnu noteikšanai. Šajā gadījumā antivielas tiek adsorbētas uz cietās fāzes.
Monoklonālās antivielas. Liels progress vīrusu infekciju diagnostikā ir sasniegts pēdējā desmitgadē, kad, attīstoties gēnu inženierijas pētījumiem, tika izstrādāta sistēma monoklonālo antivielu ražošanai. Tādējādi strauji palielinājās vīrusu antigēnu noteikšanas diagnostikas metožu specifika un jutīgums. Monoklonu šaurā specifika, kas pārstāv nelielu vīrusu proteīnu daļu, kas var nebūt klīniskajā materiālā, ir veiksmīgi pārvarēta, izmantojot vairākas monoklonālas antivielas pret dažādiem vīrusu determinantiem.
Tas ir balstīts uz pretvīrusu antivielu noteikšanu pacienta asinīs seroloģiskās reakcijās, izmantojot specifiskus vīrusu antigēnus - diagnostikas vai īpašas testēšanas sistēmas. Seroloģiskās reakcijas vīrusu infekcijām tiek veiktas šķidrā vidē (RSK, RTGA, RNGA, RONGA, RTONGA, RIA), gēlā (RPG, RRG, RVIEF) vai uz cietas fāzes nesēja (piemēram, uz sienām). polistirola plāksnes iedobi ar vienu no imūnās atbildes komponentiem – antigēnu vai antivielu). Šādas cietfāzes metodes ir pazīstamas kā ELISA, IEM, RGadsTO, RIF, RGads, RTGads.
Bieži vien, ņemot vērā dabisko pretvīrusu antivielu klātbūtni vairumā veselīgu cilvēku asinīs, vīrusu infekciju seroloģiskā diagnoze balstās uz pētījumu. sapāroti serumi, kas tiek ņemti slimības sākumā un laikā vai atveseļošanās periodā, lai noteiktu antivielu titra pieaugumu. Antivielu titra palielināšanās četras vai vairāk reizes tiek uzskatīta par diagnostiski nozīmīgu.
Seroloģisko metožu jutīguma palielināšana tiek panākta ar antigēnu vai antivielu adsorbciju uz eritrocītiem (RNGA, RONGA, RTONGA, RGadsTO, RRG), marķēšanu ar enzīmiem (ELISA), radioaktīvajiem izotopiem (RIA, RPG) vai fluorohromiem (RIF). eritrocītu sabrukšanas (kā indikators) sistēmas) antigēnu un antivielu mijiedarbības laikā komplementa klātbūtnē (RSK, RRG).
Komplementa fiksācijas reakcija (CFR) komplementa fiksācijas varianta veidā aukstumā (pa nakti +4 0 C temperatūrā) bieži izmanto virusoloģijā vairāku vīrusu infekciju retrospektīvai diagnostikai un vīrusam specifisko antigēnu noteikšanai materiālos no plkst. pacientiem.
Radiālās hemolīzes reakcija (RHR) agarozes gēlā ir balstīts uz eritrocītu hemolīzes fenomenu, ko sensibilizē ar antigēnu vīrusam specifisku antivielu ietekmē komplementa klātbūtnē, un to izmanto gripas, ARVI, masaliņu, cūciņu un togavīrusa infekciju seroloģiskai diagnostikai.
Lai izveidotu reakciju, aitas eritrocītiem pievieno 0,1 ml neatšķaidīta vīrusa antigēna (0,3 ml 10% suspensijas) un maisījumu 10 minūtes patur istabas temperatūrā. 1,2% agarozei 42 0 C temperatūrā pievieno 0,3 ml sensibilizētu eritrocītu un 0,1 ml komplementa, maisījumu lej uz stikla priekšmetstikliņiem vai polistirola plākšņu iedobēs, sacietējušajā agarozes gēlā izgriež caurumus, izmantojot perforē un piepilda ar testa vielām. Stiklu vai paneļus pārklāj ar vāku un ievieto mitrā kamerā uz 16-18 stundām termostatā. Reakciju ņem vērā hemolīzes zonas diametrs ap caurumiem, kas piepildīti ar serumu. Kontrolē hemolīzes nav.
Lielākajai daļai vīrusu infekciju attīstās imūnās atbildes reakcijas, ko izmanto diagnozei. Šūnu atbildes reakcijas parasti novērtē limfocītu citotoksicitātes testos pret infekcijas izraisītājiem vai ar tiem inficētām mērķa šūnām, vai arī nosaka limfocītu spēju reaģēt uz dažādiem antigēniem un mitogēniem.
Praktiskajās laboratorijās šūnu reakciju smagums tiek noteikts reti. Pretvīrusu AT noteikšanas metodes ir kļuvušas plaši izplatītas.
RN pamatā ir citopatogēnas iedarbības nomākšana pēc vīrusa sajaukšanas ar specifisku AT. Nezināmo vīrusu sajauc ar zināmiem komerciāliem antiserumiem un pēc atbilstošas inkubācijas pievieno šūnu monoslānim. Šūnu nāves neesamība norāda uz neatbilstību starp infekcijas izraisītāju un zināmajiem AT.
RTHA hemaglutinācijas inhibīcija izmanto, lai identificētu vīrusus, kas var aglutinēt dažādas sarkanās asins šūnas. Lai to izdarītu, sajauciet patogēnu saturošo barotni ar zināmu komerciālu antiserumu un pievienojiet to šūnu kultūrai. Pēc inkubācijas tiek noteikta kultūras hemaglutinācijas spēja un, ja tās nav, tiek izdarīts secinājums, ka vīruss neatbilst antiserumam. Citopātiskās iedarbības inhibīcija ar vīrusu iejaukšanos Citopātiskās iedarbības inhibīcijas reakciju vīrusa iejaukšanās dēļ izmanto, lai identificētu patogēnu, kas traucē zināmu citopatogēnu vīrusu jutīgu šūnu kultūrā. Lai to izdarītu, barotnei, kas satur pētāmo vīrusu, pievieno komerciālu serumu (piemēram, masaliņu vīrusam, ja ir aizdomas par to), inkubē un inficē otru kultūru; pēc 1-2 dienām tajā tiek ievadīts zināms citopatogēns vīruss (piemēram, jebkurš ECHO vīruss). Ja ir citopatogēns efekts, tiek secināts, ka pirmā kultūra bija inficēta ar vīrusu, kas atbilst izmantotajai AT.
Tiešā imunofluorescence.
Starp citiem testiem visplašāk tiek izmantota tiešā imunofluorescences reakcija (visātrākā, jutīgākā un reproducējamākā). Piemēram, CMV identificēšanai pēc citopatogēnas iedarbības ir nepieciešamas vismaz 2-3 nedēļas, un, izmantojot marķēto monoklonālo AT, identifikācija ir iespējama 24 stundu laikā, ja ir šādu reaģentu komplekts, tos var pievienot ar vīrusu inficētām kultūrām, inkubēt. , nomazgāts nesaistītais reaģents un pārbaudīts ar fluorescences mikroskopiju (ļauj noteikt inficēto šūnu fluorescences klātbūtni).
Imūnelektronu mikroskopija (analogs iepriekšējai metodei) ļauj identificēt dažāda veida vīrusus, kas identificēti ar elektronu mikroskopiju (piemēram, dažāda veida herpes vīrusiem), ko nevar izdarīt, pamatojoties uz morfoloģiskām pazīmēm. Antiserumu vietā identifikācijai tiek izmantoti dažādi marķēti AT, taču metodes sarežģītība un augstās izmaksas ierobežo tās izmantošanu.
Pretvīrusu antivielu (AT) noteikšana asins serumā. RTGA. RSK. RĪF.
Imunosorbcijas metodes pretvīrusu antivielu noteikšanai.
Vienkāršāka un pieejamāka pieeja ir noteikt pretvīrusu antivielas (AT) serumā. Asins paraugi jāņem divas reizes: tūlīt pēc klīnisko pazīmju parādīšanās un pēc 2-3 nedēļām. Ir ārkārtīgi svarīgi pārbaudīt tieši divus seruma paraugus. Viena pētījuma rezultātus nevar uzskatīt par pārliecinošiem, jo nav iespējams saistīt AT rašanos ar šo gadījumu. Iespējams, ka šie AT cirkulē pēc iepriekšējas infekcijas. Šādā situācijā atveseļošanās periodā iegūtā seruma izpētes lomu diez vai var pārvērtēt. Par slimības klātbūtni pirmā parauga savākšanas periodā liecina ne mazāk kā četrkārtīgs otrā parauga izpētē konstatētais AT titra pieaugums.
Tālāk uzskaitītās metodes neļauj diferencēt antivielas (AT), kas veidojas slimības laikā un cirkulē pēc atveseļošanās (šī perioda ilgums dažādām infekcijām ir atšķirīgs). Tā kā adekvātai diagnozei nepieciešams apstiprināt ievērojamu AT titru pieaugumu divos paraugos, pirmais paraugs tiek izmeklēts akūtā fāzē, bet otrais atveseļošanās periodā (pēc 2-3 nedēļām). Iegūtie rezultāti ir retrospektīvi un ir piemērotāki epidemioloģisko apsekojumu veikšanai. RTGA nosaka AT, kas sintezēts pret vīrusu hemaglutinīniem (piemēram, gripas vīrusu).
Šī metode ļauj viegli noteikt šādas antivielas (AT) pacienta serumā. RSK ir galvenā vīrusu infekciju serodiagnostikas metode (starp pieejamajām). Reakcija nosaka komplementu fiksējošo IgM un IgG, bet nediferencē tos; Lai optimizētu iegūtos rezultātus, reakcijas inscenēšana prasa noteiktas personāla prasmes.
RĪF. Ja ir iespējams iegūt inficēto audu biopsiju un ir pieejami komerciāli ar fluoresceīnu iezīmēti AT komplekti, diagnozi var apstiprināt ar tiešu imunofluorescenci.
Reakcija ietver pētāmo audu inkubāciju ar AT, to turpmāko noņemšanu un parauga fluorescences mikroskopiju. Imunosorbcijas metodes pretvīrusu antivielu noteikšanai Imunosorbcijas metodes (piemēram, ELISA un RIA) ir informatīvākas, jo tās nosaka atsevišķi IgM un IgG, kas ļauj izdarīt noteiktus secinājumus par infekcijas procesa dinamiku vai atveseļošanās stāvokli. Lai noteiktu AT, uz cieta substrāta (piemēram, uz mēģeņu sieniņām, plastmasas mikroplatēm, Petri trauciņiem) tiek adsorbēts zināms antigēns un pievienoti dažādi pacienta seruma atšķaidījumi. Pēc atbilstošas inkubācijas tiek noņemts nesaistītais AT, pievienots antiserums pret cilvēka Ig, kas iezīmēts ar fermentu, tiek atkārtota nesaistītā AT inkubācijas un mazgāšanas procedūra, kā arī tiek pievienots hromogēns substrāts (jutīgs pret fermenta darbību). Tā kā krāsu maiņa ir proporcionāla konkrētā AT saturam, to titru ir pilnīgi iespējams noteikt spektrofotometriski. HIV infekcijas diagnostikā visplašāk izmantotā metode ir imūnblotēšana.
Vīrusu antigēnu (AG) noteikšana. ELISA. Šobrīd jau ir parādījušies komerciāli komplekti dažu patogēnu hipertensijas identificēšanai, kas ļauj tos identificēt 5-10 minūšu laikā. Lai noteiktu AG, zināmos AT sorbē uz cietās fāzes un pievieno serumu, kas satur AG; Pēc inkubācijas nesaistīto AG dekantē, sistēmu mazgā un pievieno sorbētajai AT raksturīgo AT. Inkubācijas un mazgāšanas procedūru atkārto, pievieno hromogēnu substrātu, pozitīvs rezultāts tiek fiksēts, mainoties sistēmas krāsai. DNS hibridizācija ir ļoti specifiska metode, kas ļauj identificēt vīrusa genomu pēc tā hibridizācijas ar komplementārām DNS molekulām. Fermenti un izotopi tiek izmantoti kā marķieri.
Metode nosaka vīrusa DNS spēju hibridizēties ar iezīmētu komplementāru DNS; metodes specifika ir tieši proporcionāla komplementārās ķēdes garumam. Nukleīnskābju hibridizācijas in situ metode ir daudzsološa. Lai izveidotu reakciju, marķētā DNS tiek uzklāta audu biopsijām (tostarp tām, kas fiksētas formalīnā vai iegultas parafīna blokos), un tiek reģistrēta mijiedarbība ar komplementāru DNS. Metode tiek izmantota, lai noteiktu herpes simplex vīrusus, cilvēka papilomas, Epšteina-Barra u.c.
PCR. Metode būtiski palielina hibridizācijas metodes jutību, palielinot vīrusa DNS saturu no pacienta iegūtajā materiālā, kā arī paātrina rezultātu iegūšanas laiku.
2. Seroloģiskie testi, ko izmanto vīrusu infekciju diagnosticēšanai.
Seroloģiskās metodes, t.i. metodes antivielu un antigēnu izpētei, izmantojot antigēnu-antivielu reakcijas, kas noteiktas asins serumā un citos šķidrumos, kā arī ķermeņa audos. Antivielu noteikšana pret patogēnu antigēniem pacienta asins serumā ļauj noteikt slimības diagnozi. Seroloģiskie pētījumi tiek izmantoti arī, lai identificētu mikrobu antigēnus, dažādas bioloģiski aktīvas vielas, asins grupas, audu un audzēju antigēnus, imūnkompleksus, šūnu receptorus u.c. Izdalot mikrobu no pacienta, patogēns tiek identificēts, pētot tā antigēnās īpašības, izmantojot imūndiagnostikas serumi, t.i., hiperimunizētu dzīvnieku asins serums, kas satur specifiskas antivielas. Šī ir tā sauktā mikroorganismu seroloģiskā identifikācija. Antivielu un antigēnu mijiedarbības pazīmes ir laboratorijas diagnostikas reakciju pamatā. In vitro reakcija starp antigēnu un antivielu sastāv no specifiskas un nespecifiskas fāzes. Specifiskajā fāzē notiek ātra antivielas aktīvā centra specifiska saistīšanās ar antigēna determinantu. Tad nāk nespecifiska fāze – lēnāka, kas izpaužas ar redzamām fizikālām parādībām, piemēram, pārslu veidošanās (aglutinācijas parādība) vai nogulsnes duļķainības veidā. Šajā fāzē ir nepieciešami noteikti apstākļi (elektrolīti, optimāls vides pH). Antigēna determinanta (epitopa) saistīšanās ar antivielu Fab fragmenta aktīvo centru ir saistīta ar van der Vālsa spēkiem, ūdeņraža saitēm un hidrofobu mijiedarbību. Antivielu piesaistītā antigēna stiprums un daudzums ir atkarīgs no antivielu afinitātes, aviditātes un to valences.
3. Malārijas patogēni. Malārija - antroponotiska infekcijas slimība, ko izraisa vairākas Plasmodium ģints vienšūņu sugas, ko pārnēsā odi (Anopheles), ko pavada drudzis, anēmija, palielinātas aknas un liesa. Malārijas izraisītāji pieder vienšūņu, Apicomplexa, Sporozoa klases un Pl sugām. vivax, Pl.malariae, Pl.falciparum, Pl.ovale.
Epidemioloģija. Infekcijas avots ir inficēta persona; Pārnēsātājs ir Anopheles ģints moskītu mātīte. Galvenais pārnešanas mehānisms ir pārnēsājams caur inficētas odu mātītes kodumu.
Ārstēšana un profilakse. Pretmalārijas zālēm ir atšķirīga ietekme uz plazmodija aseksuālo un seksuālo stadiju. Galvenās pretmalārijas zāles ir hinīns, hlorokvīns, hinīns, primaquine, hinocīds, bigumāls, hloridīns utt. Preventīvās darbības ir vērsti uz patogēna avotu (malārijas slimnieku un nesēju ārstēšana) un patogēna nesēju - odu - iznīcināšanu. Vakcinācijas metodes tiek izstrādātas, pamatojoties uz antigēniem, kas iegūti gēnu inženierijas ceļā.
1. Antibiotiku klasifikācija pēc ķīmiskās struktūras, mehānisma, spektra un iedarbības veida.Saskaņā ar ķīmiju str. 1. klase - B-laktāms - penicilīns, cefalosporīns. 2. klase - makrolīdi - eritromicīns, azitromicīns. 3. klase - aminoglikozīdi - streptomicīns, kanamicīns. 4. klase - tetraciklīni - oksitetraciklīns, doksiciklīns. 5 šūnas - polipeptīdi - polimiksīns. 6 šūnas - poliēn-nistatīns 7cl - ansamicīns - rifampicīns .
2. Atkarībā no darbības mehānisma ir piecas antibiotiku grupas: 1.gr antibiotikas, kas traucē šūnu sieniņu sintēzi - β-laktāmi. 2.gr antibiotikas, kas izjauc šūnu membrānu molekulāro organizāciju un sintēzi - polimiksīni, poliēni 3.gr antibiotikas, kas traucē olbaltumvielu sintēzi - aminoglikozīdi, tetraciklīni, makrolīdi, hloramfenikols 4.gr antibiotikas - nukleīnskābju sintēzes inhibitori - quin sintēze , rifampicīns - RNS sintēze 5.gr antibiotikas, kas nomāc purīnu un aminoskābju sintēzi - sulfonamīdi pēc darbības spektra tiek iedalītas piecās grupās atkarībā no tā, kādus mikroorganismus tās ietekmē. Katrā no šīm grupām ir divas apakšgrupas: plaša un šaura spektra antibiotikas 1g. Antibakteriālās antibiotikas veido lielāko zāļu grupu.
a) plaša spektra antibiotikas ietekmē visu trīs baktēriju departamentu pārstāvjus - aminoglikozīdus, tetraciklīnus utt.
b) Šaura spektra antibiotikas ir efektīvas pret nelielu baktēriju loku – zīlītes iedarbojas uz Gracilicutae, vankomicīns ietekmē grampozitīvās baktērijas.
2g - prettuberkulozes, pretlepras, pretsifilīta līdzekļi.
3. Pretsēnīšu antibiotikas.
a) Amfotericīnam B ir plašs darbības spektrs, efektīvs pret kandidozi, blastomikozi un aspergilozi; tajā pašā laikā
b) šaura spektra antibiotika - nistatīns, kas iedarbojas uz Candida ģints sēnēm
4. Antiprotozoālās un pretvīrusu antibiotikas ietver nelielu skaitu zāļu.
5. Pretaudzēju antibiotikas ir zāles, kurām ir citotoksiska iedarbība. Lielāko daļu no tiem lieto daudzu veidu audzējiem - mitomicīns C. Antibiotiku ietekme uz mikroorganismiem ir saistīta ar to spēju nomākt noteiktas bioķīmiskās reakcijas, kas notiek mikrobu šūnā.
2. Imunitātes teorijas.1. Imunitātes teorija Mechnikov – fagocitozei ir izšķiroša loma antibakteriālajā imunitātē. I.I. Mechnikov bija pirmais, kurš uzskatīja iekaisumu par aizsargājošu, nevis destruktīvu parādību. Zinātnieks aizsargājošās šūnas, kas darbojas šādā veidā, nosauca par "arī šūnām". Viņa jaunie franču kolēģi ieteica izmantot tādas pašas nozīmes grieķu saknes. I.I. Mechnikov pieņēma šo iespēju, un parādījās termins "fagocīts". 2. Imunitātes teorijaĒrlihs ir viena no pirmajām antivielu veidošanās teorijām, saskaņā ar kuru šūnās ir antigēnu specifiski receptori, kas antigēna ietekmē izdalās kā antivielas. Ērlihs asinīs esošās pretmikrobu vielas sauca par "antivielām". P. Ērlihs saprata, ka jau pirms saskares ar konkrētu mikrobu organismā jau ir antivielas tādā formā, ko viņš nosauca par “sānu ķēdēm” – tie ir limfocītu receptori antigēniem. Tad Ērlihs to “pielietoja” farmakoloģijā: savā ķīmijterapijas teorijā viņš pieņēma, ka organismā jau pastāv ārstniecisko vielu receptori. 1908. gadā P. Ērliham tika piešķirta Nobela prēmija par imunitātes humorālo teoriju. 3.Bezredki imunitātes teorija- teorija, kas izskaidro organisma aizsardzību pret vairākām infekcijas slimībām ar specifiskas lokālas šūnu imunitātes rašanos pret patogēniem. 4. Mācību teorijas imunitāte ir vispārējs nosaukums antivielu veidošanās teorijām, saskaņā ar kurām vadošā loma imūnās atbildes reakcijā tiek piešķirta antigēnam, kas tieši piedalās kā matrica noteiktas antideterminanta konfigurācijas veidošanā vai darbojas kā faktors, kas maina virzienu. imūnglobulīnu biosintēze plazmas šūnās.
3. Botulisma izraisītājs.ģints Clostridium sugas Clostridium botulinum izraisa botulismu – pārtikas intoksikāciju, kam raksturīgi centrālās nervu sistēmas bojājumi. Slimība rodas, ēdot C. Botulīna toksīnus saturošus pārtikas produktus – grampozitīvus stieņus ar noapaļotiem galiem. Tā ir veidota kā tenisa rakete. Neveido kapsulu. Mobilais. Obligātie anaerobi. Pamatojoties uz to antigēnajām īpašībām, tos iedala 7 serovaros. Botulīna eksotoksīns ir visspēcīgākais no visām bioloģiskajām indēm, kam ir neirotoksiska iedarbība (nāvējošā deva cilvēkiem ir aptuveni 0,3 mikrogrami). Mikrobioloģiskā diagnostika. Botulīna toksīna noteikšana un identificēšana testa materiālā, izmantojot reverso netiešo hemaglutinācijas reakciju (RONGA), toksīnu neitralizācijas reakciju ar antitoksīnu (antitoksisku serumu) laboratorijas dzīvniekiem. Bakterioloģiskā metode patogēnu noteikšanai pētāmajā materiālā. Specifiska profilakse. Botulīna toksoīdi A, B, E ir iekļauti sekstanatoksīnā, lieto atbilstoši indikācijām. Ārkārtas pasīvajai profilaksei ir iespējams izmantot pretbotulīna antitoksiskus serumus Ārstēšana. Tiek izmantoti antitoksiski antibotulīna heterologie serumi un homologie imūnglobulīni.
Audzēšana. Uz asins agara tas veido nelielas caurspīdīgas kolonijas, kuras ieskauj hemolīzes zona. Pretestība. C. botulinum sporām ir ļoti augsta izturība pret augstām temperatūrām.
Epidemioloģija. No augsnes botulīna bacilis nonāk pārtikas produktos, kur vairojas un izdala eksotoksīnu. Infekcijas pārnešanas ceļš ir pārtika. Visizplatītākais infekcijas pārnešanas faktors ir konservi (sēnes, dārzeņi, gaļa, zivis). Slimība netiek pārnesta no cilvēka uz cilvēku. Patoģenēze. Botulīna toksīns iekļūst gremošanas traktā ar pārtiku. Izturīgs pret gremošanas enzīmu darbību, toksīns uzsūcas caur zarnu sieniņām asinīs un izraisa ilgstošu toksinēmiju. Toksīns saistās ar nervu šūnām un bloķē impulsu pārnešanu caur neiromuskulārām sinapsēm. Tā rezultātā attīstās balsenes, rīkles un elpošanas muskuļu paralīze, kas izraisa rīšanas un elpošanas traucējumus, tiek novērotas izmaiņas redzes orgānos. Klīniskā aina. Inkubācijas periods ilgst no 6-24 stundām līdz 2-6 dienām. Jo īsāks inkubācijas periods, jo smagāka ir slimība. Parasti slimība sākas akūti, bet ķermeņa temperatūra paliek normāla. Iespējami dažādi botulisma varianti - ar pārsvaru gremošanas trakta bojājumu simptomiem, redzes traucējumiem vai elpošanas funkciju. Pirmajā gadījumā slimība sākas ar sausu muti, sliktu dūšu, vemšanu un caureju. Otrajā gadījumā pirmās slimības izpausmes ir saistītas ar redzes traucējumiem (pacients sūdzas par “miglu” acu priekšā un redzes dubultošanos). Balsenes muskuļu paralīzes rezultātā parādās aizsmakums, pēc tam pazūd balss. Pacienti var mirt no elpošanas paralīzes. Slimību var sarežģīt akūta pneimonija, toksisks miokardīts un sepsi. Botulisma mirstība ir 15-30%. Imunitāte. nav izveidojies. Antivielas, kas tiek ražotas slimības gaitā, ir vērstas pret konkrētu serovaru.
1.Metodes baktēriju jutības noteikšanai pret antibiotikām. 1) Agara difūzijas metode. Pētāmais mikrobs tiek inokulēts uz agara barotnes, un pēc tam pievieno antibiotikas. Zāles pievieno vai nu īpašās agara iedobēs, vai arī uz inokulācijas virsmas novieto diskus ar antibiotikām (“disku metode”). Rezultāti tiek reģistrēti katru otro dienu, pamatojoties uz mikrobu augšanas esamību vai neesamību ap caurumiem (diskiem). 2) Noteikšanas metodes. minimālais antibiotiku līmenis, kas ļauj in vitro novērst redzamu mikrobu augšanu uzturvielu barotnē vai pilnībā sterilizēt to. A) Baktēriju jutības noteikšana pret antibiotikām, izmantojot diska metodi. Pētāmā baktēriju kultūra tiek sēta uz barotnes agara vai AGV barotnes Petri trauciņā. B) AGV barotne: sauss uzturvielu zivju buljons, agars-agars, aizvietots nātrija fosfāts. C) Uz inokulētās virsmas ar pinceti vienādos attālumos vienu no otras novieto papīra diskus, kuros ir noteiktas dažādu antibiotiku devas. Kultūru inkubē 37 °C temperatūrā līdz nākamajai dienai. Pētītās baktēriju kultūras augšanas kavēšanas zonu diametrs tiek izmantots, lai spriestu par tās jutību pret antibiotikām.
D) Baktēriju jutības noteikšana pret antibiotikām ar sērijveida atšķaidījumu metodi. nosaka minimālo antibiotikas koncentrāciju, kas kavē testa baktēriju kultūras augšanu.
E) Mikroorganismu jutības pret antibiotikām noteikšanas rezultātu novērtējums tiek veikts, izmantojot speciālu gatavu tabulu, kurā ir augšanas kavēšanas zonu diametru robežvērtības rezistentiem, vidēji izturīgiem un jutīgiem celmiem, kā arī antibiotiku MIC vērtības rezistentiem un jutīgiem celmiem. 3) Antibiotiku noteikšana asinīs, urīnā un citos cilvēka ķermeņa šķidrumos. Divas mēģeņu rindas ievieto plauktā. Vienā no tiem sagatavo standarta antibiotikas atšķaidījumus, otrā - testa šķidruma atšķaidījumus. Pēc tam katrai mēģenei pievieno testa baktēriju suspensiju, kas sagatavota Hiss barotnē ar glikozi. Nosakot penicilīnu, tetraciklīnus un eritromicīnu testa šķidrumā, kā testa baktērijas izmanto standarta S. aureus celmu, bet, nosakot streptomicīnu, izmanto E. coli. Pēc kultūraugu inkubācijas 18-20 stundas 37 °C temperatūrā eksperimenta rezultātus atzīmē barotnes duļķainība un tās krāsojums ar indikatoru, ko izraisa glikozes sadalīšanās testa baktērijās. Antibiotikas koncentrāciju nosaka, reizinot testa šķidruma augstāko atšķaidījumu, kas kavē testa baktēriju augšanu, ar minimālo atsauces antibiotikas koncentrāciju, kas kavē to pašu testa baktēriju augšanu. Piemēram, ja testa šķidruma maksimālais atšķaidījums, kas inhibē testa baktēriju augšanu, ir 1:1024, un atsauces antibiotikas minimālā koncentrācija, kas kavē tās pašas testa baktērijas augšanu, ir 0,313 μg/ml, tad produkts 1024 - 0,313 = 320 μg/ml ir antibiotikas koncentrācija 1 ml.
4) S. aureus spējas producēt beta-laktamāzi noteikšana. Kolbā ar 0,5 ml standarta pret penicilīnu jutīga stafilokoku celma ikdienas buljona kultūras pievieno 20 ml izkausēta un līdz 45 °C atdzesēta uzturvielu agara, samaisa un ielej Petri trauciņā. Pēc tam, kad agars ir sacietējis, plāksnes centrā uz barotnes virsmas ievieto disku, kas satur penicilīnu. Pētāmās kultūras sēj cilpā gar diska rādiusiem. Kultūraugus inkubē 37 °C temperatūrā līdz nākamajai dienai, pēc tam atzīmē eksperimenta rezultātus. Pētīto baktēriju spēju ražot beta-laktamāzi vērtē pēc standarta stafilokoku celma augšanas klātbūtnes ap vienu vai otru testa kultūru (ap disku).
2. Imūnās sistēmas traucējumi: primārie un sekundārie imūndeficīti.Imūndeficīti - tie ir normāla imūnā stāvokļa traucējumi, ko izraisa viena vai vairāku imūnās atbildes mehānismu defekts. Imūnsistēmas traucējumi var ietekmēt gan galvenās imūnsistēmas funkcionēšanas saites kas nosaka nespecifisko rezistenci. Ir iespējami kombinēti un selektīvi imūnsistēmas traucējumu varianti. Atkarībā no traucējumu līmeņa un rakstura izšķir humorālos, šūnu un kombinētos imūndeficītus.
Cēloņi: hromosomu dublēšanās, punktveida mutācijas, nukleīnskābju metabolisma enzīmu defekti, ģenētiski noteikti membrānas traucējumi, genoma bojājumi embrionālajā periodā uc Primārie imūndeficīti parādās pēcdzemdību perioda sākumposmā un tiek mantoti autosomāli recesīvā veidā. Manifestācijas– fagocitozes, komplementa sistēmas, humorālās imunitātes (B-sistēma), šūnu imunitātes (T-sistēmas) nepietiekamība. Sekundāri vai iegūti imūndeficīti Sekundārie imūndeficīti, atšķirībā no primārajiem, attīstās indivīdiem ar normāli funkcionējošu imūnsistēmu no dzimšanas brīža. Tie veidojas apkārtējās vides ietekmē fenotipiskā līmenī un rodas imūnsistēmas disfunkcijas rezultātā dažādu slimību vai nelabvēlīgas ietekmes uz organismu rezultātā. Ir iespējamas arī T un B imūnsistēmas un nespecifiskie rezistences faktori. Sekundārie imūndeficīti ir daudz biežāk nekā primārie. Sekundārie imūndeficīti ir pakļauti imūnkorekcijai,
Sekundārie imūndeficīti var būt:
pēc infekcijām (īpaši vīrusu) un invāzijām (protozoāli un helmintiāzes);
par apdeguma slimību;
ar urēmiju; audzējiem;
ar vielmaiņas traucējumiem un izsīkumu;
ar disbiozi;
smagiem ievainojumiem, apjomīgām ķirurģiskām operācijām, īpaši tām, kas veiktas vispārējā anestēzijā; apstarošana, ķīmisko vielu iedarbība;
kad noveco,
zāles, kas saistītas ar zāļu lietošanu.
Saskaņā ar klīnisko strāvu izšķir: 1) kompensētu, - paaugstinātu organisma uzņēmību pret infekcijas izraisītājiem. 2) subkompensēts - infekcijas procesu hroniskums.
3) dekompensētas - ģeneralizētas infekcijas, ko izraisa oportūnistiskie mikrobi (OPM) un ļaundabīgi audzēji.
3. Amebiāzes izraisītājs. Taksonomija. Raksturīgs. Mikrobioloģiskā diagnostika. Specifiska ārstēšana. Amebiāze ir Entamoeba histolytica izraisīta infekcijas slimība, ko pavada čūlaini resnās zarnas bojājumi; iespējama abscesu veidošanās dažādos orgānos; notiek hroniski. Vienšūņi, cilts Sarcomastidophora, apakšcilts Sarcodina.
Morfoloģija un audzēšana. Patogēns pastāv divos attīstības posmos: veģetatīvā un cistiskā. Veģetatīvajai stadijai ir vairākas formas (audi, liela veģetatīvā, luminālā un precistiskā). Cista (atpūtas stadija) ir ovāla forma un veidojas no veģetatīvām formām zarnās. Infekcija notiek, patogēnu cistām nokļūstot zarnās, kur no tām veidojas zarnu veģetatīvās formas.
Pretestība. Ārpus ķermeņa patogēna audu un luminālās formas ātri mirst (30 minūšu laikā). Cistas vidē ir stabilas, mēnesi saglabājas izkārnījumos un ūdenī 20ºC temperatūrā. Pārtikā, dārzeņos un augļos cistas saglabājas vairākas dienas.
Transmisijas mehānisms - fekālijas-bez mutes. Infekcija notiek, ja cistas tiek ievadītas ar pārtiku, īpaši dārzeņiem un augļiem, retāk ar ūdeni, izmantojot sadzīves priekšmetus. Cistu izplatību veicina mušas un tarakāni.
Patoģenēze un klīniskā aina. Cistas, kas nonāk zarnā, un lūmena veidotās amēbas var tajā dzīvot, neizraisot slimības. Kad organisma pretestība samazinās, amēbas iekļūst zarnu sieniņās un vairojas. Attīstās zarnu amebiāze. Šo procesu veicina daži zarnu mikrofloras pārstāvji. Ar čūlu veidošanos tiek ietekmēta resnās zarnas augšdaļa un dažreiz arī taisnās zarnas. Tiek atzīmēti biežai vaļīgi izkārnījumi. Izkārnījumos ir atrodami strutojoši elementi un gļotas. Attīstoties strutainam peritonītam, var rasties zarnu sieniņu perforācija. Amēbas ar asinsriti var iekļūt aknās, plaušās un smadzenēs – attīstās ekstraintestināla amēbiāze. Var rasties ādas amebiāze, kas attīstās sekundāra procesa rezultātā. Uz perianālās zonas, starpenes un sēžamvietas ādas veidojas erozija un viegli sāpīgas čūlas. Imunitāte. Ar amebiāzi imunitāte ir nestabila. Ārstēšana un profilakse. Ārstēšanā izmanto šādas zāles: iedarbojoties uz amēbām, kas atrodas zarnu lūmenā (hidroksihinolīna atvasinājumi - kviniofons, enteroseptols, meksaforms, intestopāns, kā arī arsēna savienojumi - aminarsons, osarsols u.c.); iedarbojas uz amēbu audu formām (emetīna preparātiem); iedarbojoties uz amēbu un amēbu luminālajām formām, kas atrodas zarnu sieniņās (tetraciklīni); iedarbojoties uz amēbām jebkurā lokalizācijā (imidazola atvasinājumi - metronidazols). Profilakse amebiāze ir saistīta ar cistu izvadītāju un amēbu nesēju identificēšanu un ārstēšanu.
Mikrobioloģiskā diagnostika. Galvenā metode ir pacienta izkārnījumu, kā arī iekšējo orgānu abscesu satura mikroskopiskā izmeklēšana. Uztriepes tiek iekrāsotas ar Lugolv šķīdumu vai hematoksilīnu, lai identificētu cistas un trofozoītus. Seroloģiskā metode: RĪGA, ELISA, RSK uc Augstākais antivielu titrs tiek noteikts ar ekstraintestinālu amebiāzi.
| " |