Budući da FISH test može otkriti genetske abnormalnosti koje uzrokuju rak, to je efikasna metoda za dijagnosticiranje nekih vrsta raka. Test se također koristi za potvrdu dijagnoze i pruža dodatne informacije o mogućem ishodu bolesti i preporučljivosti primjene kemoterapije.
Na primjer, kod pacijenata s rakom dojke, FISH testiranje tkiva uzetog iz biopsije pomaže u određivanju prisutnosti kopija HER2 gena u stanicama.
Ćelije sa kopijama HER2 gena imaju više HER2 receptora, koji primaju signale koji stimulišu rast ćelija raka u dojci. Stoga je za pacijente sa kopijama HER2 gena preporučljivo koristiti Herceptin (trastuzumab), sredstvo koje inhibira sposobnost HER2 receptora da primaju signale.
Zbog visoke cijene i relativne nedostupnosti FISH testa, češće se koristi drugi test za otkrivanje raka dojke, imunohistohotomija (IHC).
U medicinskim krugovima postoji debata o visokoj efikasnosti FISH testa u poređenju sa standardnim testovima. Međutim, zahvaljujući tehnološkom napretku, FISH test postaje sve jeftiniji i dostupniji u različitim kliničkim okruženjima.
Kako funkcioniše FISH test?
Prilikom izvođenja FISH testa na uzorku tkiva pacijenta, koriste se fluorescentne oznake koje se vezuju samo za određene regije hromozoma. Zatim se pomoću fluorescentnog mikroskopa određuju regije hromozoma za koje su vezane fluorescentne sonde i prisutnost mogućih abnormalnosti koje provociraju razvoj raka.
Sljedeće abnormalnosti se mogu naći u ćelijama raka:
- translokacija - prijenos dijela hromozoma na novu poziciju na istom ili drugom hromozomu;
- inverzija - okretanje dijela hromozoma za 180 stepeni uz održavanje veze sa samim hromozomom;
- delecija - gubitak dijela hromozoma;
- duplikacija je udvostručenje dijela hromozoma, što dovodi do viška kopija gena u ćeliji.
Translokacije pomažu u dijagnosticiranju nekih vrsta leukemije, limfoma i sarkoma. Prisustvo duplikacije u ćelijama raka dojke pomaže doktoru da odabere optimalni tretman.
Prednost FISH testa u odnosu na standardne citogenetske testove (koji ispituju genetski sastav ćelija) je u tome što može otkriti čak i najmanje genetske promjene koje se ne mogu vidjeti konvencionalnim mikroskopom.
Još jedna važna razlika FISH testa je sposobnost da se provede na stanicama koje se još nisu počele aktivno razvijati. Ostali testovi se rade na ćelijama tek nakon što su dvije sedmice uzgajane u laboratoriji, tako da cijeli proces može potrajati i do tri sedmice, s tim da se rezultati FISH testa znaju za nekoliko dana.
Primjeri FISH testa za dijagnozu raka
Iako se FISH test najčešće koristi za analizu genetskih abnormalnosti kod raka dojke, on također može pružiti važne informacije o drugim vrstama raka.
Na primjer, kada se dijagnosticira rak mokraćne bešike, FISH test ćelija urina daje preciznije rezultate od testova za atipične ćelije. Osim toga, omogućava vam da otkrijete recidiv raka mokraćne bešike 3-6 mjeseci ranije.
FISH test također pomaže u otkrivanju hromozomskih abnormalnosti kod leukemije, uključujući ćelije koje ukazuju na agresivni oblik kronične limfocitne leukemije (CLL). Pacijenti s agresivnim oblicima CLL mogu zahtijevati hitno liječenje, dok manje agresivni oblici mogu zahtijevati opservaciju.
Kontroverza FISH testa
Ne slažu se svi stručnjaci da je FISH test najprecizniji test za dijagnosticiranje karcinoma osjetljivih na Herceptin.
Naučnici sa Instituta Mayo u Irskoj su 2010. izvijestili da je jeftiniji IHC test bio gotovo jednako efikasan kao i FISH test za određivanje osjetljivosti na herceptin.
Drugi stručnjaci su kritizirali FISH test zbog neuspjeha u otkrivanju malih mutacija, kao što su mala brisanja, umetanja i tačkastih mutacija, te zbog ignorisanja nekih inverzija.
Poboljšanje FISH testa
Uprkos činjenici da FISH test tehnologija još ne dozvoljava analizu svih hromozomskih regiona, ona se stalno razvija u tom pravcu.
Na primjer, 2007. godine kanadski naučnici su najavili razvoj čipa veličine mikroskopskog stakalca koji bi omogućio da se FISH testiranje provede pomoću uređaja koji stane u dlan.
Ovaj poboljšani test, nazvan FISH test na čipu, pružit će rezultate u roku od jednog dana i koštat će manje od ostalih testova.
Određivanje statusa tumora HER-2 pomoću FISH- proučavanje predispozicije za razvoj tumora i odabir pravovremenog adekvatnog liječenja raka dojke (BC) ili raka želuca (GC).
HER-2 (HER-2/neu)- receptor humanog epidermalnog faktora rasta-2 je protein koji može uticati na rast ćelija raka. Stvara ga poseban gen koji se zove HER-2/neu gen. HER-2 je receptor za određeni faktor rasta koji se zove ljudski epidermalni faktor rasta koji se prirodno javlja kod ljudi. Kada se ljudski epidermalni faktor rasta veže za HER-2 receptore na stanicama raka dojke, on može stimulirati te stanice da rastu i dijele se. U zdravom tkivu, HER-2 prenosi signale koji reguliraju proliferaciju i preživljavanje stanica, ali prekomjerna ekspresija HER-2 može uzrokovati malignu transformaciju stanica.
Prekomjerna ekspresija HER-2 kod nekih podtipova raka dojke dovodi do povećane proliferacije i angiogeneze, disregulacije apoptoze (genetski programirano samouništenje stanica). Pokazalo se da je kod raka dojke prekomjerna ekspresija ovog receptora u tumorskom tkivu povezana sa agresivnijim tokom bolesti, povećanim metastatskim potencijalom tumora i nepovoljnijom prognozom. Otkriće veze između prekomjerne ekspresije HER-2 i nepovoljne prognoze za rak dojke dovelo je do traženja pristupa liječenju koji imaju za cilj specifično blokiranje HER-2/neu onkogena (ciljana anti-HER2 terapija).
Rak dojke (BC)- maligni tumor žljezdanog tkiva mliječne žlijezde. Rak dojke zauzima prvo mjesto među svim malignim bolestima kod žena.
U zavisnosti od prisustva bioloških markera tumora - ekspresije hormonskih receptora (estrogen i/ili progesteron), razlikuju se ekspresija HER-2 - hormonski receptor-pozitivni, HER-2-pozitivni i trostruko negativni karcinom dojke.
HER-2/neu-pozitivne (HER-2+) vrste karcinoma dojke karakteriše visoka ekspresija HER-2/neu proteina.
HER=2/neu-negativni (HER-2-) tipovi karcinoma dojke karakteriziraju niska ekspresija ili odsustvo HER-2/neu proteina.
Smatra se da jedna od pet žena sa rakom dojke ima HER-2 pozitivan tumor. Većina karcinoma dojke je hormonski zavisna: estrogeni i progesteron imaju stimulativni efekat (proliferativni i neoplastični) na njih. Kod HER-2-pozitivnog karcinoma dojke, postoji višak HER-2 receptora na površini tumorskih ćelija. Ovaj fenomen se naziva “pozitivan HER-2 status” i dijagnosticira se kod 15-20% žena koje boluju od raka dojke.
HER-2- receptor za humani epidermalni faktor rasta tip 2, koji je normalno prisutan u tkivima, učestvujući u regulaciji diobe i diferencijacije ćelija. Njegov višak na površini tumorskih ćelija (prekomerna ekspresija) određuje brzi nekontrolisani rast tumora, visok rizik od metastaza i nisku efikasnost nekih vrsta lečenja. HER-2-pozitivni karcinom dojke posebno je agresivan oblik ove bolesti, pa je precizno određivanje HER-2 statusa ključno za odabir taktike liječenja.
Rak želuca (GC)- maligni tumor koji potiče iz epitela sluznice želuca.
GC zauzima 4. mjesto u strukturi incidencije raka i 2. mjesto u strukturi mortaliteta od raka u svijetu. Incidencija raka želuca kod muškaraca je 2 puta veća nego kod žena. Rusija je jedna od regija sa visokom učestalošću raka želuca i smrtnošću od ove bolesti. Dijagnoza GC u ranim fazama je teška zbog dugog asimptomatskog toka bolesti. GC se često otkriva u kasnim fazama, kada petogodišnja stopa preživljavanja ne prelazi 5-10%, a kemoterapija ostaje jedina metoda liječenja.
Glavna metoda liječenja raka želuca je operacija. Međutim, kod većine pacijenata, u trenutku postavljanja dijagnoze, utvrđuje se raširen tumorski proces, koji onemogućava radikalnu operaciju i zahtijeva sistemsku terapiju lijekovima. Hemoterapija statistički značajno povećava ukupno preživljavanje pacijenata sa metastatskim karcinomom, poboljšavajući njihov kvalitet života.
Onkogen HER-2 (erbB-2) je prvobitno identifikovan u tumorima dojke. Amplifikacija i prekomjerna ekspresija ovog gena je relativno specifičan događaj za karcinome dojke i praktično se ne javlja kod tumora drugih lokacija. Čini se da je rak želuca jedan od rijetkih izuzetaka: aktivacija HER-2 se uočava u otprilike 10-15% malignih neoplazmi ovog organa i korelira s agresivnim tokom bolesti.
Prekomjerna ekspresija HER-2 je faktor loše prognoze. Prema različitim studijama, amplifikacija HER-2 gena kod pacijenata sa karcinomom korelira sa niskim ukupnim stopama preživljavanja.
Za procjenu HER-2 statusa kod raka i raka dojke koristi se FISH metoda.
RIBA- istraživanje vam omogućava da odredite kvalitativne i kvantitativne promjene u kromosomima za dijagnozu malignih bolesti krvi i solidnih tumora.
Danas se FISH studije široko koriste u cijelom svijetu.
FISH metoda (fluorescentna in situ hibridizacija) je studija o broju HER-2/neu gena unutar ćelija raka.
Indikacije:
- karcinom dojke - u svrhu prognoze i odabira terapije;
- karcinom želuca - u svrhu prognoze i odabira terapije.
Određuje ljekar koji prisustvuje.
Potreban je histološki protokol i imunohistohemijski protokol, IHC staklo.
Interpretacija rezultata
Rezultati FISH testa izraženi su na sljedeći način:
1. Pozitivan (povećan sadržaj, postoji amplifikacija gena HER-2):
- HER-2 pozitivan rak dojke;
- HER-2 negativan rak dojke.
U svim slučajevima, bez izuzetka, formiranje i rast su povezani sa aktivnošću gena tipa HER2. On je taj koji je odgovoran za to koliko će proteina biti dodijeljeno ženskom tijelu za razvoj tkiva dojke. Kada prve zdrave ćelije degenerišu u maligne, genski receptori dobijaju informaciju da je potrebna dodatna podela ćelijskog materijala.
Gen pokreće program za rast dodatnog tkiva unutar dojke, iako će u stvarnosti ovaj ćelijski materijal koristiti tumor za svoj rast i razvoj. Dakle, karcinom, u suštini, obmanjuje tijelo i tjera ga da hrani rak na račun vlastitih resursa.
Zadatak analize ribe na rak dojke je upravo da se identifikuje kvar HER2 gena i preduzme odgovarajuće mere reagovanja u smislu propisivanja adekvatnog medicinskog tretmana.
Ako na vrijeme ne uradite riblji test na rak dojke, čak i ako se tokom liječenja koriste određeni lijekovi, to može dovesti do toga da se tumor nastavi agresivno razvijati i zahvatati sve više tkiva dojke. To su takozvane posljedice pogrešno propisane terapije zbog nedostatka objektivnih podataka o funkcionisanju HER2 gena.
Tokom analize ribe, doktor u krv pacijenta ubrizgava posebne supstance koje sadrže elemente za bojenje koji mogu vizualizovati sliku hromozomskih abnormalnosti. Tako je doktor u mogućnosti da jasno vidi i naknadno prouči genetske abnormalnosti u genomu žene koje su dovele do razvoja raka dojke.
Ako se potvrde abnormalnosti u genu HER2, tada se propisuje odgovarajući tretman. Ako nije, onda doktor, koristeći druge testove, utvrđuje drugačiji razlog za razvoj raka dojke.
Još jedna važna prednost analize ribe je da u roku od nekoliko dana pacijent dobije sveobuhvatan izvještaj o genetskoj predispoziciji za razvoj određene bolesti raka. Uz pomoć ovog medicinskog testiranja moguće je istovremeno dijagnosticirati patologiju ne samo mliječne žlijezde, već i svih organa trbušne šupljine.
Informativan video
Kratak odgovor: Metoda fluorescentne in situ hibridizacije (FISH) uključuje korištenje jedinstvenih DNK nukleotidnih sekvenci kao sonde za traženje željenih DNK sekvenci u materijalu dobivenom od pacijenta. Metoda se zasniva na komplementarnom vezivanju DNK sonde za DNK metafaznih hromozoma ili interfaznih ćelija. DNK sonda i DNK koja se testira se denaturiraju i formira se jednolančana DNK. DNK sonda se dodaje u preparat hromozoma i inkubira određeno vreme. Prisustvo ili odsustvo sonde označene fluorohromom u DNK nakon hibridizacije utvrđuje se ispitivanjem hromozoma pomoću fluorescentne mikroskopije.
Detaljan odgovor:
Metoda fluorescentne hibridizacije in situ omogućava vam da identifikujete pojedinačne hromozome ili njihove pojedinačne delove na preparatima metafaznih hromozoma ili interfaznih jezgara na osnovu komplementarne interakcije DNK sonde konjugirane sa fluorescentnom oznakom i željenog dela na hromozomu. Za vizualizaciju spojeva peptida i nukleinske kiseline na hromozomu koriste se PNA sonde na bazi proteinskog proizvoda.
Metoda se zasniva na komplementarnom vezivanju DNK sonde za DNK metafaznih hromozoma ili interfaznih stanica i uključuje sljedeće korake:
1. Denaturacija dvolančana probna DNK i ciljna DNK do jednolančane DNK pod uticajem visoke temperature ili hemijskih agenasa.
2. Hibridizacija DNK sonda sa ciljnom DNK prema principu komplementarnosti za formiranje dvolančane hibridne molekule
3. Pranje nakon hibridizacije za uklanjanje nehibridizovane DNK sonde
4. Analiza hibridizacijskim signalima sa fluorescentnim mikroskopom
Prednosti FISH molekularne genetičke dijagnostičke metode uključuju brzu analizu velikog broja ćelija, visoku osjetljivost i specifičnost, te mogućnost proučavanja nekulturnih i nedijelećih ćelija.
Nedostaci Metoda leži u nemogućnosti dobivanja informacija o fizičkom stanju DNK ili hromozomskog dijela koji se proučava.
FISH se koristi u prenatalnoj molekularnoj genetičkoj dijagnostici i za karakterizaciju tumora; u pedijatrijskoj praksi se u pravilu koristi za identifikaciju submikroskopskih delecija povezanih sa specifičnim razvojnim nedostacima. Sindromi bazirani na mikrodelecijama ranije su smatrani bolestima nepoznate etiologije, budući da se hromozomske delecije i preraspodjele koje uzrokuju razvoj ovih bolesti obično ne vizualiziraju tradicionalnim metodama hromozomske analize. Takve male delecije u specifičnim regijama hromozoma mogu se otkriti sa velikom preciznošću pomoću FISH-a. Bolesti uzrokovane submikroskopskim brisanjem uključuju Prader-Willi, Angelman, Williams, Miller-Dieker, Smith-Magenis sindrom i velokardiofacijalni sindrom. FISH olakšava dijagnozu ovih sindroma u atipičnim slučajevima, posebno u djetinjstvu, kada još uvijek nema mnogo dijagnostički značajnih znakova bolesti. Upotreba ove metode molekularne genetičke dijagnoze preporučljiva je i u adolescenciji i odrasloj dobi, kada se mijenjaju tipični klinički znaci bolesti karakteristični za djetinjstvo.
121. DNK sonde. Njihova upotreba u određivanju nasljednih bolesti.
Kratka recenzija
DNK sonda jeste kratki fragment DNK konjugiran sa fluoresceinom, enzimom ili radioaktivnim izotopom, koji se koristi za hibridizaciju sa komplementarnom regijom ciljne DNK molekule.
Glavni dio
DNK dijagnostički sistemi
Informacije o čitavom nizu svojstava organizma sadržane su u njegovom genetskom materijalu. Dakle, patogenost bakterija određena je prisustvom specifičnog gena ili skupa gena, a nasljedna genetska bolest nastaje kao posljedica oštećenja određenog gena. Segment DNK koji određuje ovu biološku osobinu ima strogo definiranu sekvencu nukleotida i može poslužiti kao dijagnostički marker.
Osnova mnogih brzih i pouzdanih dijagnostičkih metoda je hibridizacija nukleinskih kiselina – uparivanje dva komplementarna segmenta različitih molekula DNK. Procedura je općenito sljedeća.
1. Fiksacija jednolančane DNK mete na membranskom filteru.
2. Primena obeležene jednolančane DNK sonde, koja se, pod određenim uslovima (temperatura i jonska snaga), uparuje sa ciljnom DNK.
3. Operite filter da biste uklonili višak nevezane označene DNK sonde.
4. Detekcija hibridnih molekula sonde/cilja.
U dijagnostičkim testovima zasnovanim na hibridizaciji nukleinske kiseline ključne su tri komponente: DNK sonda, ciljna DNK i metoda za detekciju hibridizacionog signala. Sistem detekcije mora biti vrlo specifičan i visoko osjetljiv.
*Fluorescein (dioksifluoran, uranin A) je organsko jedinjenje, fluorescentna boja. U analitičkoj hemiji, fluorescein se koristi kao luminiscentni acid-bazni indikator. U biohemiji i molekularnoj biologiji derivati fluorescein izotiocijanata koriste se kao biološke boje za određivanje antigena i antitijela.
* Detekcija je otkrivanje, identifikacija, pronalaženje nečega.
*konjugacija=konjugacija
*Ako se mješavina DNK, na primjer, ljudske i mišje, otopi i žari u jednoj "epruveti", tada će se neki dijelovi mišjeg DNK lanaca ponovo ujediniti s komplementarnim dijelovima lanaca ljudske DNK i formirati hibride. Broj takvih mjesta ovisi o stepenu srodnosti vrsta. Što su vrste bliže jedna drugoj, to je više područja komplementarnosti DNK lanca. Ovaj fenomen se zove DNK-DNK hibridizacija.
122. Metode i uslovi za korišćenje direktne DNK dijagnostike.
Kratka recenzija:
Direktnim metodama otkrivaju se nepravilnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK (mutacije i njihovi tipovi). Direktne metode karakteriziraju preciznost koja dostiže gotovo 100%.
Svrha direktne dijagnoze je identifikacija mutantnih alela (abnormalnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK, mutacije i njihovi tipovi).
Nedostatak metode direktne DNK dijagnostike je potreba da se zna tačna lokacija gena i spektar njegovih mutacija. Direktne DNK dijagnostičke metode indicirane su za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza (najčešća mutacija delF508), Huntingtonova koreja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja - CTG ponavljanja) itd.
Potpuni odgovor:
Direktnim metodama otkrivaju se nepravilnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK (mutacije i njihovi tipovi). Direktne metode karakteriziraju preciznost koja dostiže gotovo 100%. Međutim, u praksi se ove metode mogu koristiti pod određenim uslovima:
1) poznata citogenetska lokalizacija gena odgovornog za nastanak nasljedne bolesti,
2) gen bolesti mora biti kloniran i njegova nukleotidna sekvenca mora biti poznata.
Svrha direktne dijagnoze je identifikacija mutantnih alela (abnormalnosti u primarnoj sekvenci nukleotida DNK, mutacije i njihovi tipovi). Visoka tačnost direktne DNK dijagnostičke metode u većini slučajeva ne zahtijeva analizu DNK svih članova porodice, jer identifikacija mutacije u odgovarajućem genu omogućava da se dijagnoza potvrdi sa gotovo 100% tačnosti i odredi genotip svih članova porodice. bolesnog djeteta, uključujući heterozigotne nosioce.
Nedostatak metode direktne DNK dijagnostike je potreba da se zna tačna lokacija gena i spektar njegovih mutacija.
Direktne DNK dijagnostičke metode indicirane su za bolesti kao što su fenilketonurija (mutacija R408W), cistična fibroza (najčešća mutacija delF508), Huntingtonova koreja (ekspanzija trinukleotidnih ponavljanja - CTG ponavljanja) itd.
Međutim, do danas geni mnogih bolesti nisu mapirani, njihova egzon-intronska organizacija je nepoznata, a mnoge nasljedne bolesti karakterizira naglašena genetska heterogenost, što ne dozvoljava potpunu primjenu direktnih DNK dijagnostičkih metoda. Stoga, sadržaj informacija direktne DNK dijagnostičke metode uvelike varira. Tako, kada se dijagnostikuje Huntingtonova horeja, ahondroplazija, ona iznosi 100%, za fenilketonuriju, cističnu fibrozu, adrenogenitalni sindrom - od 70 do 80%, a za Wilson-Konovalovovu bolest i Duchenne/Becker miopatiju - 45-60%. U tom smislu koriste se indirektne metode molekularne genetske dijagnoze nasljednih bolesti.
FISH - tehnika fluorescentne in situ hibridizacije razvijena je sredinom 1980-ih i koristi se za otkrivanje prisustva ili odsustva specifičnih sekvenci DNK na hromozomima, kao i alfa satelitske DNK locirane na centromeri hromozoma 6, CEP6(6p11. 1-q11. 1).
To je dalo značajan pomak u dijagnostici onkoloških bolesti melanocitnog porijekla zbog otkrića tumorskih antigena. Na malignoj pozadini utvrđuje se mutacija u tri antigena: CDK2NA (9p21), CDK4 (12q14) i CMM1(1p). S tim u vezi, mogućnost objektivne diferencijalne dijagnoze, zasnovane na utvrđivanju genetskih karakteristika melanocitnih tumora kože, od velikog je značaja u ranoj dijagnostici melanoma i njegovih prekursora.U jezgru sa normalnim skupom proučavanih gena i hromozomom 6. , dva gena RREB1 su uočena, obojena crvenom bojom, dva gena MYB, obojena žutom bojom, dva CCND1 gena zelenom, a dvije centromere hromozoma 6 plavom bojom. Fluorescentni testovi se koriste u dijagnostičke svrhe.
Procjena rezultata reakcije: izbrojava se broj crvenih, žutih, zelenih i plavih signala u 30 jezgara svakog uzorka, identificiraju se četiri parametra različitih varijanti genetskih poremećaja, u kojima uzorak genetski odgovara melanomu. Na primjer, uzorak je konzistentan s melanomom ako je prosječan broj CCND1 gena po jezgru ≥2,5. Broj kopija drugih gena se procjenjuje po istom principu. Lijek se smatra FISH pozitivnim ako je ispunjen barem jedan od četiri uslova. Uzorci u kojima su sva četiri parametra ispod graničnih vrijednosti smatraju se FISH negativnim.
Određivanje specifičnih sekvenci DNK na hromozomima vrši se na rezovima biopsija ili hirurškog materijala. U praktičnoj implementaciji, FISH reakcija izgleda ovako: proučavani materijal, koji sadrži DNK u jezgri melanocita, obrađuje se kako bi se djelimično uništio njegov molekul kako bi se razbila dvolančana struktura i time olakšao pristup željenom području melanocita. gen. Uzorci se klasificiraju prema tome gdje su vezani za molekul DNK. Materijal za FISH reakciju u kliničkoj praksi su rezovi parafinskog tkiva, razmazi i otisci.
FISH reakcija vam omogućava da otkrijete promjene koje su se dogodile u molekuli DNK kao rezultat povećanja broja kopija gena, gubitka gena, promjena u broju kromosoma i kvalitativnih promjena - pomicanja genskih lokusa oba u istom hromozoma i između dva hromozoma.
Za obradu podataka dobivenih korištenjem FISH reakcije i proučavanje odnosa između broja kopija gena tri studijske grupe, koristi se Spearmanov koeficijent korelacije.
Melanom je karakteriziran povećanjem broja kopija u odnosu na nevus i displastični nevus.
Jednostavan nevus, u poređenju sa displastičnim nevusom, ima manje abnormalnosti u broju kopija (tj. normalniji broj kopija).
Za konstruiranje pravila odlučivanja koja omogućavaju predviđanje pripada li uzorak jednoj ili drugoj klasi (diferencijalna dijagnoza jednostavnih i displastičnih nevusa), koristi se matematički aparat „drveta odlučivanja“. Ovaj pristup se dobro pokazao u praksi, a rezultati korištenja ove metode (za razliku od mnogih drugih metoda, kao što su neuronske mreže) mogu se jasno protumačiti za konstruiranje pravila odlučivanja za razlikovanje jednostavnih, displastičnih nevusa i melanoma. Početni podaci u svim slučajevima bili su brojevi kopija četiri gena.
Zadatak konstruiranja pravila odlučivanja za diferencijalnu dijagnozu podijeljen je u nekoliko faza. U prvoj fazi se razlikuju melanom i nevus, bez uzimanja u obzir vrste nevusa. U sljedećoj fazi, konstruira se pravilo odluke za razdvajanje jednostavnih i displastičnih nevusa. Konačno, u posljednjoj fazi, moguće je konstruirati "stablo odluke" za određivanje stepena displazije displastičnog nevusa.
Ova podjela zadatka razvrstavanja nevusa u podzadatke omogućava postizanje visoke tačnosti predviđanja u svakoj fazi. Ulazni podaci za konstruisanje „drveta odluke“ su podaci o broju kopija četiri gena za pacijente sa dijagnozom melanoma i pacijente sa dijagnozom nemelanoma (pacijenti sa različitim tipovima nevusa – jednostavnim i displastičnim). Za svakog pacijenta postoje podaci o broju kopija gena za 30 ćelija.
Dakle, podjela problema predviđanja dijagnoze u nekoliko faza omogućava konstruiranje vrlo preciznih pravila odlučivanja ne samo za razlikovanje melanoma i nevusa, već i za određivanje tipa nevusa i predviđanje stupnja displazije za displastični nevus. Konstruirana „stabla odlučivanja“ vizualni su način predviđanja dijagnoze na osnovu informacija o broju kopija gena i mogu se lako koristiti u kliničkoj praksi za razlikovanje benignih, predmalignih i malignih melanocitnih neoplazmi kože. Predložena dodatna metoda diferencijalne dijagnoze posebno je važna kod ekscizije gigantskih kongenitalnih pigmentiranih nevusa i displastičnih nevusa kod pedijatrijskih pacijenata, budući da se visok postotak dijagnostičkih pogrešaka uočava kada takvi pacijenti posjećuju medicinske ustanove. Rezultati primjene opisane metode su visoko učinkoviti, preporučljivo je koristiti je u dijagnostici pigmentiranih tumora kože, posebno kod pacijenata sa FAMM sindromom.